專利名稱：一種供口服用紫杉烷pH敏感納米粒組合物的制備及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于藥物制劑領域，涉及一種供口服用紫杉烷PH敏感納米粒組合物的制 備及其應用。
背景技術：
紫杉醇又名紫杉烷，是一種從紅豆衫科紅豆屬(Taxus)植物的樹皮中分離的二 萜類化合物。70年代初，紫杉醇被證明有抗腫瘤活性，其抗癌機制獨特，主要是誘導和促進 微管蛋白聚合、裝配，穩(wěn)定微管，從而抑制腫瘤細胞生長。1992年12月29日，美國FDA首次 批準紫杉烷用于治療其他化療藥物治療失敗的轉(zhuǎn)移性卵巢癌，后又批準用于鉬類藥物難治 的轉(zhuǎn)移性乳腺癌，對晚期、轉(zhuǎn)移性卵巢癌、乳腺癌、肺癌有顯著療效。但是，由于紫杉醇屬于 生物藥劑學分類II類化合物(低溶解性和低滲透性)，其口服生物利用度極低，因此目前上 市的紫杉烷制劑是以聚氧乙烯蓖麻油和無水乙醇(1 LV/V)為溶媒的注射液。大量研究 表明，聚氧乙烯蓖麻油會導致以呼吸困難、面部充血、皮疹、胸痛、心動過速、低血壓、血管腫 脹和廣泛性蕁麻疹為特征臨床急性過敏反應。因此臨床上在使用紫杉醇注射液前往往需要 使用大劑量的皮質(zhì)激素和H1、H2受體阻滯劑，順應性極差。盡管如此，仍然有41-44%的患 者在使用紫杉醇注射液后產(chǎn)生輕度過敏反應(面部充血、皮疹)，另有1.5-3%的病人的過 敏反應則可能危及生命。多烯紫杉醇的臨床應用情況與紫杉醇相似。我們的專利涉及的口服pH敏感紫杉烷納米粒，解決了紫杉烷的口服生物利用度 差的問題，并且研究證明具有胃腸道癌癥的靶向作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供了一種性質(zhì)穩(wěn)定且可工業(yè)化生產(chǎn)的口服pH敏感紫杉烷納米 粒；第二個目的是提供一種口服pH敏感紫杉烷納米粒的制備方法；第三個目的是提供口服 PH敏感紫杉烷納米粒在治療全身系統(tǒng)腫瘤和胃腸道局部腫瘤的應用。本發(fā)明的技術方案概述如下一種口服pH敏感性紫杉烷納米粒組合物，其特征在于，由所述組合物包括紫杉烷 類藥物，PH敏感性載體材料和表面活性劑。其中紫杉烷類藥物所占重量百分比為5-20%， PH敏感性載體材料所占重量百分比為60-90%，表面活性劑所占重量百分比為5-20%。本發(fā)明所述的口服紫杉烷pH敏感納米粒組合物，通過以下制備方法獲得1)處方量的紫杉烷、載體材料和油溶性表面活性劑溶解于一定量可以與水混溶的 溶劑(如乙醇、乙腈、丙酮、甲醇、四氫呋喃等)或它們之間及與水的混合溶媒中制備有機 相；將水溶性表面活性劑溶解于水中。2)在特定的溫度下，迅速將有機相注入到水相中，揮發(fā)有機溶劑，既可得口服pH 敏感紫杉烷納米粒膠體溶液。3) 口服pH敏感紫杉烷納米粒膠體溶液可以直接服用，也可以通過冷凍干燥、流化床噴霧干燥等方式制備納米粒粉末，然后制成片劑，膠囊劑等可以供口服使用的劑型。本發(fā)明所述的載體材料選自丙烯酸樹脂類材料，羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸脂(HPMCP，兩種型號HP50和HP55)和醋酸羥丙甲纖維素琥珀酸酯(HPMCAP)等材料，丙烯酸樹 脂類材料包括 Eudragit E100，Eudragit L100-55，Eudragit LlOO 和 Eudragit SlOO 及國產(chǎn)輔
料丙烯酸樹脂I，丙烯酸樹脂II，丙烯酸樹脂III，丙烯酸樹脂IV等丙烯酸樹脂材料；羥丙基 甲基纖維素鄰苯二甲酸脂類材料包括HP55和HP5tl等材料；醋酸羥丙甲纖維素琥珀酸酯類材 料包括AS-LG (LF)，AS-MG(MF)和AS-HG (HF)等材料；載體材料在有機相的濃度為1_50%， 優(yōu)選濃度為5-20% ；本發(fā)明所述的有機相包括以下三種可以與水互溶的所有有機溶劑例如乙醇、 乙腈、丙酮、甲醇、四氫呋喃等；兩種或兩種以上與水互溶的有機溶劑的混合溶媒；一種或 一種以上的可以和水混合的溶劑的混合溶媒；有機相所占的比例為1_60%，優(yōu)選比例為 20-30% ；本發(fā)明所述的表面活性劑選自泊洛沙姆、聚乙二醇1000維生素E琥珀酸脂 (TPGS)、磷脂類物質(zhì)、膽酸鹽、脫氧膽酸鹽、聚山梨醇酯、PVA等。優(yōu)選為poloxamerlSS ；表面 活性劑的濃度為0-10%，優(yōu)選濃度為0. 1-2. 0% ；本發(fā)明所說的所載藥物為抗癌藥，包括紫杉烷及其衍生物(紫杉醇、多烯紫杉醇 等)、5 —氟尿嘧啶、鬼白乙又甙、環(huán)磷酰胺、絲裂霉素、甲氨喋呤、喜樹堿及其衍生物、三苯 氧胺等。載藥量為0. 1_30%，優(yōu)選載藥量為5-10% ；本發(fā)明所述的制備溫度為0_90°C，優(yōu)選溫度為40°C ；本發(fā)明所制備的口服pH敏感紫杉烷納米粒粒徑在IO-IOOOnm之間，包封率在70 % 以上。本發(fā)明所制備的口服pH敏感紫杉烷納米粒粒徑可以用于全身癌癥的治療，也可 以用于胃腸道局部癌癥的治療?？梢詥为毷褂?，也可以和鹽酸維拉帕米、環(huán)孢素、黃酮、槲皮 素等P-gp抑制劑聯(lián)合使用。本發(fā)明制得的口服PH敏感紫杉烷納米粒及可以供口服使用的劑型具有以下優(yōu)點1.該口服pH敏感紫杉烷納米粒將紫杉烷以分子狀態(tài)包封于納米粒內(nèi)部，增加了 水不溶性藥物的分散度，并且避免了胃腸道P-Pg的外排；在紫杉烷的主要吸收部位迅速釋 放藥物，形成藥物的高濃度梯度，從而提高的紫杉烷的口服生物利用度。2.該口服pH敏感紫杉烷納米粒包封于納米粒內(nèi)部，從而降低紫杉烷對胃腸道的 毒性；口服PH敏感紫杉烷納米粒在胃腸道的特定部位的藥物濃度增加，且在特定的pH環(huán)境 中溶解迅速釋放藥物，從而達到靶向胃腸道局部癌癥的目的。3.該口服pH敏感紫杉烷納米粒的制備方法簡單，可以工業(yè)化生產(chǎn)。


圖1 口服pH敏感紫杉烷納米粒的體外釋放曲線圖2 口服pH敏感紫杉烷納米粒和Taxol 的胃腸道藥物分布
具體實施例方式實施例1
稱取IOmg紫杉烷和400mg pH敏感性材料Eudragit L100-55，溶于40ml無水乙醇 中，構成有機相；稱取200mg Poloxamer 188溶解于IOOml蒸餾水中，構成水相；用7#骨髓 穿刺針頭將有機相迅速注入攪拌的水相中，攪拌5min，40°C水浴真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)有機溶劑，濃 縮后即得口服PH敏感紫杉烷納米粒納米粒膠體溶液。實施例2稱取IOmg紫杉烷和400mg pH敏感性材料Eudragit LlOO，溶于40ml無水乙醇中， 構成有機相；稱取200mg Poloxamer 188溶解于IOOml蒸餾水中，構成水相；用7#骨髓穿刺 針頭將有機相迅速注入攪拌的水相中，攪拌5min，40°C水浴真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)有機溶劑，濃縮后 即得口服PH敏感紫杉烷納米粒膠體溶液。實施例3稱取IOmg紫杉烷和400mg pH敏感性材料Eudragit S100，溶于40ml無水乙醇中， 構成有機相；稱取200mg Poloxamer 188溶解于IOOml蒸餾水中，構成水相；用7#骨髓穿刺 針頭將有機相迅速注入攪拌的水相中，攪拌5min，40°C水浴真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)有機溶劑，濃縮后 即得口服PH敏感紫杉烷納米粒膠體溶液。實施例4 稱取5mg紫杉烷和200mg pH敏感性材料Eudragit S100，溶于40ml乙腈中，構成有 機相；稱取200mg Poloxamer 188溶解于IOOml蒸餾水中，構成水相；用7#骨髓穿刺針頭將 有機相迅速注入攪拌的水相中，攪拌5min，40°C水浴真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)有機溶劑，濃縮后即得口 服PH敏感紫杉烷納米粒膠體溶液。實施例4稱取5mg紫杉烷和200mg pH敏感性材料Eudragit S100，溶于40ml四氫呋喃中，構 成有機相；稱取200mg Poloxamer 188溶解于IOOml蒸餾水中，構成水相；用7#骨髓穿刺針 頭將有機相迅速注入攪拌的水相中，攪拌5min，40°C水浴真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)有機溶劑，濃縮后即 得口服PH敏感紫杉烷納米粒膠體溶液。實施例4稱取5mg紫杉烷和200mg pH敏感性材料Eudragit S100，溶于40ml甲醇中，構成 有機相；稱取200mg Poloxamer 188溶解于IOOml蒸餾水中，構成水相；用7#骨髓穿刺針頭 將有機相迅速注入攪拌的水相中，攪拌5min，40°C水浴真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)有機溶劑，濃縮后即得 口服PH敏感紫杉烷納米粒膠體溶液。實施例5稱取5mg紫杉烷和200mg pH敏感性材料Eudragit S100，溶于40ml甲醇中，構成有 機相；稱取20mg TPGS溶解于IOOml蒸餾水中，構成水相；用7#骨髓穿刺針頭將有機相迅速 注入攪拌的水相中，攪拌5min，4(TC水浴真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)有機溶劑，濃縮后即得口服pH敏感 紫杉烷納米粒膠體溶液。以上實施例中所制備的口服pH敏感紫杉烷納米粒進行理化性質(zhì)分析，用激光散 射粒度測定儀測定納米粒的粒徑，用超速離心法測定包封率。所制備的口服PH敏感紫杉烷 納米粒粒徑在IO-IOOOnm范圍內(nèi)，包封率在70 %以上。實施例6
取實施例3所述的口服pH敏感紫杉烷納米粒做體外釋藥特征的研究。
取口服pH敏感紫杉烷納米粒適量(相當于紫杉烷20 μ g)，加入透析袋中，系緊透 析袋兩端，懸置在盛有30ml 0. IN HCl或三種pH環(huán)境的磷酸緩沖液(pH 6. 0，6. 8和7. 4) (含0. 吐溫80)的錐型瓶中，放入溫度為37 士 0.5 °C，轉(zhuǎn)速為IOOrpm的搖床中，在不同 時間內(nèi)定量取0. 2ml的釋藥介質(zhì)，加入0. 2ml新鮮的釋藥介質(zhì)。高效液相色譜測定紫杉烷 的濃度并計算累積釋放百分數(shù)，體外釋放曲線見圖1。從圖1可以看出，施例3所述的口服 PH敏感紫杉烷納米粒在酸性條件下不釋放或釋放很少藥物，在堿性環(huán)境中迅速釋放藥物， 使用于在腸道吸收的藥物或腸道癌癥的治療。
實施例7取實施例3所述的口服pH敏感紫杉烷納米粒。SD大鼠(260-330) 25只，隨機分為五組，分別靜注Taxol (3mg/kg)，口服紫杉烷混 懸液(60mg/kg)、口服Taxol (15mg/kg)、口服 pH 敏感紫杉烷納米粒(15mg/kg)、口服 pH 敏 感紫杉烷納米粒(15mg/kg)和鹽酸維拉帕米(30mg/kg)。分別于預定的時間點眼眶取血，放 入肝素化的EP管中，1200g離心，取血漿于-20°C冰箱中保存。用氰基柱處理血漿，高效液 相色譜儀測定血漿中紫杉烷的濃度。液相條件為5 μ m，250 X 4. 60mm色譜柱；流動相為乙 腈/水(46 54)，流速為1. Oml/min,柱溫為40°C，檢測波長為227nm。實驗結(jié)果表明，口服PH敏感紫杉烷納米粒的生物利用度比口服紫杉烷混懸液和 Taxol8有顯著提高。口服PH敏感紫杉烷納米粒的絕對生物利用度為14. 3%，是口服紫杉烷 混懸液(1. 6% )的8. 9倍，口服Taxol (4. 3)的3. 3倍。聯(lián)合使用p-gp抑制劑鹽酸維拉帕 米后口服PH敏感紫杉烷納米粒的絕對生物利用度為19. 2%，生物利用度增加。紫杉烷的口 服PH敏感紫杉烷納米粒中紫杉烷的高分散性，避免被P-蛋白外排和在藥物的主要吸收部 位(回腸)迅速釋放藥物使口服紫杉烷納米粒的生物利用度大大提高。實施例8實施例3所述的口服pH敏感紫杉烷納米粒做胃腸道靶向的研究。SD大鼠(260-330)25只，隨機分為兩組，口服Taxol 和口服PH敏感紫杉烷納米 粒(PTX-NP)。分別在0.5、4、8、12、24小時后，脫頸處死，沿腹中線打開腹部，取出大鼠的胃 腸道，按器官分成六個部分胃(Sto)，十二指腸(Duo)，空腸(平均分成三部分Jel，Je2, Je3)，回腸(平均分成三部分Iel，Ie2，Ie3)，盲腸(Ce)和結(jié)腸(Co).用2ml生理鹽水適量 沖洗其內(nèi)容物，勻漿，用PBS(pH7. 4)溶液稀釋到5ml (十二指腸，空腸和回腸)或15ml (胃， 盲腸，結(jié)腸)。精密量取胃腸道內(nèi)容物勻漿液0. 3ml置于IOml具塞離心管中，加50 μ 1多 烯紫杉烷70%乙腈溶液(12 μ g/ml)和50 μ 1 70%乙腈溶液，渦旋混勻2分鐘；加2. 5ml叔 丁基甲基醚，蝸旋5分鐘，4000rpm離心5分鐘，吸取叔丁基甲基醚層到另一個IOml具塞離 心管中，50°C氮氣吹干，精密加入200 μ 1流動相斡旋，進樣20 μ 1測定內(nèi)容物中紫杉烷的濃 度。液相條件為5 μ m，250 X 4. 60mm色譜柱；流動相為乙腈/水(55 45)，流速為1. Oml/ min，柱溫為40°C，檢測波長為227nm。實驗結(jié)果見圖2，圖2表明口服pH敏感紫杉烷納米粒能夠顯著提高藥物在結(jié)腸和 盲腸中的藥物濃度，靶向于結(jié)腸和盲腸，適用于治療大腸癌。實施例9稱取5mg紫杉烷和200mg pH敏感性材料羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸脂(HP50)，溶于40ml甲醇中，構成有機相；稱取20mg Poloxamer 188溶解于IOOml蒸餾水中，構成水 相；用7#骨髓穿刺針頭將有機相迅速注入攪拌的水相中，攪拌5min，4(TC水浴真空旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)有機溶劑，濃縮后即得口服PH敏感紫杉烷納米粒膠體溶液。實施例10 稱取5mg紫杉烷和200mg pH敏感性材料羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸脂(HP50)， 溶于40ml甲醇中，構成有機相；稱取20mg PVA溶解于IOOml蒸餾水中，構成水相；用7#骨 髓穿刺針頭將有機相迅速注入攪拌的水相中，攪拌5min，40°C水浴真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)有機溶劑， 濃縮后即得口服PH敏感紫杉烷納米粒膠體溶液。實施例11稱取5mg紫杉烷和200mg pH敏感性材料羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸脂(HP55)， 溶于40ml甲醇中，構成有機相；稱取20mg Poloxamerl88溶解于IOOml蒸餾水中，構成水 相；用7#骨髓穿刺針頭將有機相迅速注入攪拌的水相中，攪拌5min，4(TC水浴真空旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)有機溶劑，濃縮后即得口服PH敏感紫杉烷納米粒膠體溶液。實施例12稱取5mg紫杉烷和200mg pH敏感性材料羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸脂(HP55)， 溶于40ml甲醇中，構成有機相；稱取20mg PVA溶解于IOOml蒸餾水中，構成水相；用7#骨 髓穿刺針頭將有機相迅速注入攪拌的水相中，攪拌5min，40°C水浴真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)有機溶劑， 濃縮后即得口服PH敏感紫杉烷納米粒膠體溶液。實施例13稱取5mg紫杉烷和200mg pH敏感性材料醋酸羥丙甲纖維素琥珀酸酯(HPMCAP)，溶 于40ml甲醇中，構成有機相；稱取20mg Poloxamerl88溶解于IOOml蒸餾水中，構成水相； 用7#骨髓穿刺針頭將有機相迅速注入攪拌的水相中，攪拌5min，4(TC水浴真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)有 機溶劑，濃縮后即得口服PH敏感紫杉烷納米粒膠體溶液。實施例14稱取5mg紫杉烷和200mg pH敏感性材料醋酸羥丙甲纖維素琥珀酸酯(HPMCAP)，溶 于40ml甲醇中，構成有機相；稱取20mg PVA溶解于IOOml蒸餾水中，構成水相；用7#骨髓 穿刺針頭將有機相迅速注入攪拌的水相中，攪拌5min，40°C水浴真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)有機溶劑，濃 縮后即得口服PH敏感紫杉烷納米粒膠體溶液。實施例I5稱取5mg紫杉烷和200mg pH敏感性材料醋酸羥丙甲纖維素琥珀酸酯(HPMCAP)， 溶于40ml甲醇中，構成有機相；稱取20mg聚乙二醇1000維生素E琥珀酸脂(TPGS)溶解 于IOOml蒸餾水中，構成水相；用7#骨髓穿刺針頭將有機相迅速注入攪拌的水相中，攪拌 5min，4(TC水浴真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)有機溶劑，濃縮后即得口服pH敏感紫杉烷納米粒膠體溶液。實施例I6稱取5mg紫杉烷和200mg pH敏感性材料Eudragit LlOO，溶于40ml甲醇中，構成有 機相；稱取20mg PVA溶解于IOOml蒸餾水中，構成水相；用7#骨髓穿刺針頭將有機相迅速 注入攪拌的水相中，攪拌5min，4(TC水浴真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)有機溶劑，濃縮后即得口服pH敏感 紫杉烷納米粒膠體溶液。
權利要求
一種口服紫杉烷pH敏感性納米粒組合物，其特征在于，由所述組合物包括紫杉烷類藥物，pH敏感性載體材料和表面活性劑。
2.權利要求1的納米粒組合物，其特征在于，其中紫杉烷類藥物所占重量百分比為 5-20%, pH敏感性載體材料所占重量百分比為60-90%，表面活性劑所占重量百分比為 5-20%。
3.權利要求1的納米粒組合物，其特征在于，其中紫杉烷類藥物包括紫杉醇或多烯 紫杉醇；PH敏感性載體材料選自腸溶型丙烯酸樹脂、羥丙甲纖維素酞酸酯、醋酸纖維素酞 酸酯、醋酸羥丙甲纖維素琥珀酸酯、聚乙烯醇乙酸苯二甲酸酯、醋酸纖維素苯三酸酯、1，2， 4_苯三酸羥丙基甲基纖維素、琥珀酸乙酸纖維素、蟲膠或它們的混合物；表面活性劑選自 泊洛沙姆、聚乙二醇1000維生素E琥珀酸脂、磷脂、膽酸鹽、脫氧膽酸鹽、聚山梨酯、脂肪酸 山梨坦、十二烷基硫酸鈉、聚氧乙烯蓖麻油、PVA或它們的混合物。
4.權利要求1的納米粒組合物，其特征在于，所述組合物包封率在70%以上，載藥量為 0. 1-30%，粒徑在 10-1000nm 之間。
5.權利要求1的納米粒組合物的制備方法，包括以下步驟1)紫杉烷、載體材料和油溶性表面活性劑溶解于可以與水混溶的溶劑或它們之間及與 水的混合溶媒中制備有機相；將水溶性表面活性劑溶解于水中制備水相；2)將有機相注入到水相中，揮發(fā)有機溶劑，既可得口服pH敏感性紫杉烷納米粒膠體溶液；3)用上述膠體溶液作為藥物活性物質(zhì)，用制劑學常規(guī)技術制備成藥物制劑，其中，載體材料在有機相的濃度為1_50%，優(yōu)選濃度為5-20%;表面活性劑在水相的濃 度為0-10%，優(yōu)選濃度為0. 1-1. 0% ；
6.根據(jù)權利要求5所述的制備方法，其特征在于，載體材料在有機相的濃度為5-20%; 表面活性劑在水相的濃度為0. 1-1. 0%。
7.根據(jù)權利要求5所述的制備方法，其特征在于，有機相和水相的溫度為0-90°C。
8.根據(jù)權利要求5所述的制備方法，其特征在于，有機相所用溶劑包括以下三類可 以與水互溶的有機溶劑例如乙醇、乙腈、丙酮、甲醇、四氫呋喃等；與水互溶的有機溶劑的混 合溶媒；以及上述溶媒與水的混合溶媒；其中有機相與水相的比例，有機相所占的比例為 1-60%，優(yōu)選比例為20-30% ；
9.權利要求1的納米粒組合物在制備治療癌癥的藥物中的應用。
10.權利要求9的應用，其特征在于，用于單獨使用或者和選自鹽酸維拉帕米、環(huán)孢素、 黃酮、槲皮素的P-gp抑制劑聯(lián)合使用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種供口服用紫杉烷pH敏感納米粒組合物的制備及其應用，其特征在于將紫杉烷類藥物包裹在由pH敏感的高分子材料組成的納米粒子中制備成納米給藥系統(tǒng)，該系統(tǒng)可明顯改善難溶性藥物的溶出速率，并具有明顯的pH敏感性，在腸道的特定部位控制釋放藥物，有利于提高體內(nèi)藥物生物利用度和局部部位靶向性，該制劑將在腫瘤治療，尤其胃腸道局部腫瘤治療的應用方面有很好的應用前景。
文檔編號A61K47/42GK101836958SQ200910119060
公開日2010年9月22日 申請日期2009年3月20日 優(yōu)先權日2009年3月20日
發(fā)明者吳翠栓, 張強, 王堅成 申請人:北京大學