專利名稱：：用于檢測藥物組合物中蛻皮甾酮的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種用于檢測藥物組合物中蛻皮甾酮的方法。
背景技術(shù)：
：蛻皮甾酮又稱P-脫皮松，P-蛻皮激素，具有降低血糖和膽固醇、抗心律失常、抗病毒、抗炎、抗氧化及免疫促進等作用。天然存在于莧科植物牛膝(AchyranthesbidentataBl.)等植物中。很多中藥制劑以其為活性成分。例如，一種由土牛膝、馬蘭草、車前草和天名賴-制備藥物組合物即以土牛膝為君藥，該組合物可以清熱解毒，利咽止痛，用于肺胃實熱所致的咽部腫痛、發(fā)熱、口渴、便秘，以及急性扁桃體炎、急性咽炎等諸癥的治療或緩解。對于含有蛻皮甾酮的藥物組合物，尤其是上述由土牛膝、馬蘭草、車前草和天名精制備藥物組合物，先有的質(zhì)量控制方法是采用薄層色譜掃描法測定成品中經(jīng)酸水解后的齊墩果酸含量。其具體操作如下取上述由土牛膝、馬蘭草、天名精和車前草制備藥物組合物25ml，置分液漏斗中，用水孢和的正丁醇提取6次，每次20ml，合并正丁醇液，置水浴上蒸干，殘渣加乙醇30ml，鹽酸3ml使溶解，置水浴上加熱回流提取1小時，提取液回收乙醇至無醇味，加水30ml,轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用石油醚(60~90°C)振搖提取6次，每次20ml，合并石油醚液，置水浴上蒸干，殘渣加無水乙醇孩史熱4吏溶解，定量轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，冷卻，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，另耳又齊墩果酸對照品，精密稱定，加無水乙醇制成每lml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色i普法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述供試品溶液6jul、對照品溶液2ju1與4ju1,分別交叉點于同一石圭月交G薄層才反上，以環(huán)己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯(20:5:8)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10。/c^克酸乙醇卩容液，在105。C加熱至斑點顯色清晰，耳又出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，照薄層色i普法(中國藥典2005年X反一部附錄VIB薄層掃描法)進4亍掃描，波長Xs=520nm,XR=700nm,測定供試品吸光度積分^直與對照品吸光度積分值，計算，即得。該方法操作繁瑣，重現(xiàn)性差，含量測定結(jié)果的誤差大，難以控制成品的質(zhì)量。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種簡單、可靠的分析藥物組合物中蛻皮甾酮含量的方法。本發(fā)明的另一目的是提供一種簡單、可靠的控制一種由土牛膝、馬蘭草、車前草和天名^"制備的藥物組合物的質(zhì)量的方法。本發(fā)明的一方面涉及一種用于檢測含有蛻皮甾酮的藥物組合物中蛻皮甾酮含量的方法，該檢測通過高效液相色譜進行，其中色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠填充柱，釆用紫外可見光檢測器檢測分析結(jié)果，4全測波長為240至255nm,流動相可以為乙腈一水，柱溫為25至35°C。在一種典型實施方式中，色"i普柱為AglientTC-C18，才企測波長為248nm,流動相為15:85的乙腈-水，柱溫為30°C。5本發(fā)明還涉及一種控制藥物組合物中蛻皮甾酮含量的藥物質(zhì)量控制方法，其通過在藥材的煎煮或提取環(huán)節(jié)用高效液相色語跟蹤提取液中的蛻皮甾酮濃度，在達到一目標(biāo)值之后，終止煎煮或提取，其中，檢測條件為色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠填充柱，采用紫外可見光一企測器檢測分析結(jié)果，4企測波長為240至255nm，流動相可以為乙腈一水，4主溫為25至35°C。優(yōu)選i也，色讀4主為AglientTC-C18,才企測波長為248nm,流動相為15:85的乙腈畫水，柱溫為30°C。在一種典型的實施方式中，所述藥物組合物由土牛膝、馬蘭草、車前草和天名精制備。上述藥物組合物可以由以下步^^制成，將四p未藥材加18-30倍重量的水煎煮，煎煮過程中保持煎煮液體積恒定，用高效液相色譜檢測煎煮液中蛻皮甾酮的濃度，當(dāng)檢測到樣品中蛻皮甾酮含量達到0.01mg/ml時，4亭止煎煮或才是取。在上述方法中，用于提取藥物所用的水量優(yōu)選地維持在藥材的20至25倍量，最優(yōu)選在藥材的20倍量(以重量計)。該含量測定方法操作簡單，專屬性強、重復(fù)性好，含量測定結(jié)果準(zhǔn)確度高，能更好的控制產(chǎn)品的質(zhì)量。圖1為根據(jù)本發(fā)明方法所獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。具體實施例方式在本發(fā)明的方法中，采用高效液相色譜法沖全測藥物組合物中的蛻皮甾酮的含量。色i普柱為十八烷基-圭烷4建合-圭月交填充柱，優(yōu)選Shim-PackCLC-ODS色"i普4主、Hypersil-ODS色i普4主禾口AglientTC-CI8,最優(yōu)選AglientTC-C18。采用紫外可見光檢測器檢測分析結(jié)果，檢測波長為240至255nm，最優(yōu)選為248nm;流動相可以為曱醇一水、6乙猜一7jc的^f壬一西己比，優(yōu)選為乙猜-7jc(15:85);4主5顯為25至35。C,優(yōu)選為30°C。為了進行4企測，需要將測試樣品配制成溶液。為此，常將樣品稀釋成預(yù)訂濃度的甲醇或乙醇〉容液，然后取續(xù)濾液進4亍4企測。在本發(fā)明的一種典型實施方式中，采用下述條件進行蛻皮甾酮的含量^r測儀器Waters1525高效液相色i普4義檢測器Waters2996才全測波長248nm流動相乙腈-水(15:85)色i普4主AglientTC-C18(250mmx4.6mmx5jim)柱溫30°C色譜工作站Empower蛻皮甾酮對照品(批號111638-200603中國藥品生物制品4全定所，供含量測定用)。以下以一種由土牛膝、馬蘭草、車前草和天名精制備的藥物組合物為例，詳細說明本發(fā)明。該組合物的一種典型制備方法如下以上四p未加水煎煮兩次，每次1.5小時，第一次力。14倍量水，第二次加12倍量水，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.07~1.09(60°C)的清膏。取蔗糖250g制成糖漿，與上述清膏合并，攪勻，冷卻，備用；另取薄荷腦0.2g,苯曱酸鈉3g,香精適量，用70%乙醇溶解后，加于上述藥液中，攪勻，調(diào)整總量至1000ml，攪勻，靜置，濾過，即得。供試品溶液制備方法的選擇精密量取組合物樣品25ml(2份)，置50ml容量瓶中，分別加入曱醇、乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。測定法4青密吸耳又對照品溶液與供試品溶液各5^1,注入液相色i普4義，測定并計算，釆用甲醇、乙醇作為稀釋溶劑的測定結(jié)果無明顯差異(見表1)。因乙醇的毒性較小，故選擇乙醇作為溶劑。方法為精密量取樣品25ml，置50ml量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，耳又續(xù)濾液，即得供試品溶液。表1供試品溶液制備方法的選4奪實-驗結(jié)果編號溶劑測定值Cmg/ml)平均值(mg/ml)相對偏差(%)1甲醇0.12870.12732.02乙醇0.1260陰性對照溶液的測定按處方稱取除土牛膝外的其余各藥材適量，按制備工藝制成缺土牛膝的陰性樣品，同法制備缺土牛膝的陰性樣品溶液，依法測定。結(jié)果陰性對照溶液的色譜圖中，在與蛻皮甾酮對照品色譜峰的保留時間相同處無色譜峰，說明陰性對照溶液無干擾。線性關(guān)系者察并青密吸耳又蛻皮甾酮對照品溶液(0.054mg/ml)1、3、5、7、9、15jul，注入液相色譜儀，依法測定其峰面積。以蛻皮甾酮的進樣量為4黃坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，纟會制標(biāo)準(zhǔn)曲線(見表2)。其回歸方程8為y=1282.3x+7831.1,R=0.9998。結(jié)果表明，蛻皮甾酮的進樣量在54ng810ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(見圖1)。表2標(biāo)準(zhǔn)曲線測定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>精密度試驗精密吸取同一供試品溶液(批號20060501),進樣6次，每次5ju1,測定，其蛻皮甾酮峰面積積分值的RSD為2.1%,結(jié)果表明精密度良好(見表3)。表3精密度試驗結(jié)果表<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>穩(wěn)、定性試-驗取同一(批號20060501)供試品溶液，分別于配制后的O、2、4、7、13、20、25、35小時，斗青密吸耳又5jul，注入液相色i普4義，測定，結(jié)果見表4。表4穩(wěn)定性試^r結(jié)果表<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>結(jié)果表明供試品溶液在配制后35小時內(nèi)基本穩(wěn)定。重復(fù)性試驗取同一批號(批號20060501)供試品樣品6份，依同樣方法測定，結(jié)果見表5。表5重復(fù)性試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>結(jié)果表明本方法重復(fù)性較好。回收率試驗取已測定含量的同一批號(批號20060501)樣品(含蛻皮留酮0.1283mg/ml)3ml、15ml、25ml,置50ml量弁瓦中，分別4青密加入對照品溶液(0.13484mg/ml)3ml、lOml、20ml，力口50%乙醇稀釋至刻度并測定。結(jié)果見表6。表6回4欠率試3全結(jié)果表編號取樣量(ml)樣品中蛻皮甾酮含量(mg)添力口蟲兌皮甾酮量(mg)實測±兌皮甾酮量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)10.80097102.9220.80047102.800.38490.404520.78979100.1640.79104100.470.78921100.0260.79415101.2473.2539498.70583.27568100.319151.92451.34843.2706999.94101.521.9103.2640899.45113.2480898.27123.28035100.66135.96531102.35145.94558101.6215253.20752.69686.00667103.88166.02143104.43176.03065104.77185.97373102.6611結(jié)果表明本方法加樣回收率較好。其中編號1-6及13-18為范圍-驗證結(jié)果，平均回收率為102.2%,RSD為1.570/。。上述研究結(jié)果表明，本含量測定方法操作簡單，專屬性強、重復(fù)性好，含量測定結(jié)果準(zhǔn)確度高。本發(fā)明的另一方面是提供一種通過高效液相色譜法控制藥物組合物中蛻皮甾酮含量的藥物質(zhì)量控制方法。其通過在藥材的煎煮或提取環(huán)節(jié)用高效液相色譜跟蹤提取液中的蛻皮甾酮濃度，在達到一目標(biāo)值之后，終止煎煮或提取。在上述方面的一個具體實施例中，用于控制由申^青人/>司采用前述四味中藥材生產(chǎn)的喉咽清口服液中的蛻皮甾酮含量。為了采用上述方法，發(fā)明人將現(xiàn)有的工藝進行了改進，即，不再采用現(xiàn)有才支術(shù)中的多次重復(fù)4是耳又法，而是一次性地加入足量的水或者其他提取溶劑，例如乙醇，進行連續(xù)提取或煎煮，在煎煮過程中檢測提取液中的蛻皮甾酮的濃度。當(dāng)達到一個預(yù)定值時，停止煎煮或沖是取操作。采用這種方法，簡化了工藝，制得的產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，采用本發(fā)明的方法，用于提取藥物的溶劑的量是影響工藝效率和產(chǎn)品質(zhì)量的一個重要因素。溶劑的加量不能過小，如果過小，即使提取的時間被延長，藥材中的活性成分也不能有效的析出；溶劑的量也不適于過大，如果過大，會相應(yīng)增加后續(xù)作業(yè)的負(fù)擔(dān)。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，對于使用水提取的情況，在煎煮的情況下，水的利用量以重量計不能^f氐于藥材的18倍量。^旦通常不高于30倍量。對于采用乙醇的情況，使用量應(yīng)該在24至35倍量之間。最優(yōu)選的條件是采用20至25倍量的水，特別優(yōu)選20倍量的水。在所有情況下，在提取過程中應(yīng)維持恒量的溶劑。實施例1以申請人公司生產(chǎn)的一種喉咽清口服液為測試樣品，該產(chǎn)品也由前述四p木中藥材制成。含量測定才喿作方法如下色i普條4牛色i普^主為AglientTC-C18(250mmx4.6mmx5nm);;危動相為乙腈-水(15:85);才企測波長為248nm;柱溫30°C。理i侖才反數(shù)按蛻皮甾酮峰計算不低于2000。對照品溶液的制備精密稱取蛻皮甾酮對照品適量，加稀乙醇制成每lml含30jug的溶液，即得。供試品溶液的制備取喉咽清口服液樣品，混勻，精密量取25ml,置50ml量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5jlU,注入液相色讀^義，測定，即得。按照本發(fā)明提供的含量測定方法，測定了15批喉咽清口服液樣品的含量，每批樣品平行測定兩次，結(jié)果見表7。表7喉咽清口服液樣品含量測定結(jié)果批號測定結(jié)果(mg/ml)測定結(jié)果平均值(mg/ml)相對偏差(%)20060502*0.10580.10540.750.105020060503*0.10360.10461.910.1056200807040.091850.092671.790.09348200807050.089090.090132.300.09117132008070600.071280.072152.430.07303200808010.067910.067780.380.06766200806050.067290.068282.890.06927200806060.064270.064050.680.06383200807030.095130.094112.160.09309200809010.080060.080140.190.08022200809020.073010.074082.880.07515200809030.088020.087690.750.08736200809040.086540.086011.230.08547200809050.088080.088821.660.08956200809060.081590.081680.220.08177實施例2按照實施例l相同的方法，測定了IO批土牛膝藥材的含量，每批樣品平行測定兩次，結(jié)果見表8。表8十批土牛膝藥材含量測定結(jié)果編號取樣量(g)測定結(jié)果(％)平均值(%)RSD(%)11.00340.024130.023180.023572.431.00170.023990.0229821.00290.029740.029160.029111.67141.00360.028990.0285631.00210.020120.019970.019732.511.00740.019820.0190141.00290.023420.023090.023150.861.00380.023170.022941.00210.047820.047690.047630.501.00340.047730.0472861.00720.039820.039080.039171.131.00690.038970.038821.00430.029730.029120.029341.201.00720.029540.0289781.00190.057480.057190.057240.341.00530.057280.0570191.00210.033120.032940.032980.341.00740.033010.03285102.51930.192260.192850.191910.662.49010.190980.19157按處方量計算，制備每lml喉咽清口服液需要土牛膝0.25g。經(jīng)測定，10批土牛膝藥材的平均含量以重量百分比為0.04938%。經(jīng)測15批喉咽清口服液樣品，平均含量為0.08383mg/ml,轉(zhuǎn)移率為67.9%。15經(jīng)測15批樣品，平均含量為0.08383mg/ml，按70%折算，為0.058mg/ml，故暫定含量限度為每lml含土牛膝以蛻皮甾酮(C27H34011)計，不得少于50jug。上述試驗結(jié)果表明本方法重復(fù)性較好，含量測定準(zhǔn)確度高，誤差小。實施例3喉咽清口服液生產(chǎn)過程中的質(zhì)量監(jiān)控四味配方量藥材加20倍量水煎煮，煎煮過程中保持煎煮液體積恒定。用高效液相色譜檢測煎煮液中蛻皮甾酮的濃度。檢測條件及操作同實施例1,其中，取煎煮液，初濾，精密量取25ml，置50ml量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，進樣檢測。當(dāng)才全測到樣品中蛻皮甾酮含量達到0.01mg/ml時，停止煎煮。每批測試品進行兩次，通過這種方法控制的產(chǎn)品中，蛻皮甾酮的含量達到0.075mg/ml。在本實施例的條件下，通常只需要1至3小時即完成提耳又步驟。工藝最省時，產(chǎn)品質(zhì)量4艮穩(wěn)定。產(chǎn)品中蛻皮甾酮的含量穩(wěn)、定在0.05mg/ml以上。權(quán)利要求1.一種用于檢測含有蛻皮甾酮的藥物組合物中蛻皮甾酮含量的方法，其特征在于，該檢測通過高效液相色譜進行，色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠填充柱，采用紫外可見光檢測器檢測分析結(jié)果，檢測波長為240至255nm，流動相可以為乙腈—水，柱溫為25至35℃。2.才艮據(jù)4又利要求1所述的方法，其中色i普柱為AglientTC-C18，牙企觀'h皮長為248nm，；克動片目為15:85的乙猜-7jc，4主;顯為30°C。3.—種控制藥物組合物中蛻皮甾酮含量的藥物質(zhì)量控制方法，其通過在藥材的煎煮或提取環(huán)節(jié)用高效液相色譜跟蹤提取液中的蛻皮甾酮濃度，在達到一目標(biāo)值之后，終止煎煮或提取，其中，檢測條件為色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠填充柱，采用紫外可見光4全測器4企測分析結(jié)果，4企測波長為240至255nm，流動相可以為乙腈一水，柱溫為25至35°C。4.才艮據(jù)片又利要求3所述的方法，其中色i普柱為AglientTC-C18,才企測波長為248nm，流動相為15:85的乙腈隱水，柱溫為30°C。5.4艮據(jù)權(quán)利要求3或4所述的方法，其中，所述藥物組合物由土牛膝、馬蘭草、車前草和天名精制備。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，包括以下步驟將四味藥材加18-30倍重量的水煎煮，煎煮過程中保持煎煮液體積恒定，用高效液相色譜沖企測煎煮液中蛻皮甾酮的濃度，當(dāng)4企測到樣品中蛻皮甾酮含量達到0.01mg/ml時，停止煎煮或提取。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中，所用的水量維持在藥材的20至25倍量。8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中，所用的水量維持在藥材的20倍量。全文摘要一種用于檢測含有蛻皮甾酮的藥物組合物中蛻皮甾酮含量的方法，其特征在于，色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠填充柱，采用紫外可見光檢測器檢測分析結(jié)果，檢測波長為240至255nm，流動相可以為乙腈—水，柱溫為25至35℃。本發(fā)明還提供一種通過在藥材的煎煮或提取環(huán)節(jié)用高效液相色譜跟蹤提取液中的蛻皮甾酮濃度，來控制產(chǎn)品質(zhì)量的方法，其中，在達到一目標(biāo)值之后，終止煎煮或提取操作。根據(jù)本發(fā)明的方法操作簡單，專屬性強、重復(fù)性好，含量測定結(jié)果準(zhǔn)確度高，能更好的控制本產(chǎn)品的質(zhì)量。文檔編號A61K36/68GK101504396SQ20091011888公開日2009年8月12日申請日期2009年3月5日優(yōu)先權(quán)日2009年3月5日發(fā)明者唐代鳳,唐純玉,朱光葵,赫杜,鐘振平申請人:湖南時代陽光制藥有限公司