專利名稱：一種三七三醇組皂苷提取物及其制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥提取物及其制備方法，特別涉及中藥三七的提取物三七三醇 皂苷提取物及其制備。
背景技術(shù)：
三七又名田七，為五加科人參屬植物，是中醫(yī)治療心、腦血管疾病及各種血癥的
“圣藥”?！侗静菥V目》1578年明代李時(shí)珍著“味微甘而苦，頗似人參之味......故能治一
切血病?！薄侗静菥V目拾遺》1765年清代趙學(xué)敏著“人參補(bǔ)氣第一，三七補(bǔ)血第一，味同而功 亦等，故稱人參三七，為中藥之最珍貴者?！薄吨兴幋筠o典》(1997年版)“三七功用補(bǔ)血，去 瘀損，止血衄，能通能補(bǔ)，功效最良，是方藥中之最珍貴者。三七生吃，去瘀生新，消腫定痛， 并有止血不留瘀血，行血不傷新的優(yōu)點(diǎn)；熟服可補(bǔ)益健體。”三七的藥理作用主要表現(xiàn)為具有保護(hù)心臟，明顯提高心肌供氧能力，增加冠脈流 量，防治腦缺血，降血壓，擴(kuò)張心臟血管，耐缺氧，改善心肌微循環(huán)，抗心律失常，抑制動(dòng)脈硬 化和抗休克等作用；具有良好的止血功效，能增加血小板數(shù)目，提高造血功能，有明顯的活 血和溶血作用；有明顯的鎮(zhèn)痛作用表現(xiàn)在還能提高腦力活動(dòng)，增強(qiáng)學(xué)習(xí)和記憶能力；具有 延緩衰老及抗疲勞作用。此外，三七還有促進(jìn)蛋白質(zhì)和DNA、RNA的合成，保護(hù)肝臟，雙向調(diào) 節(jié)血糖等功能。三七的藥理試驗(yàn)及臨床應(yīng)用從本世紀(jì)三十年代開(kāi)始，特別是近20多年來(lái)，國(guó)內(nèi)外 學(xué)者對(duì)三七進(jìn)行了廣泛的藥理研究和臨床實(shí)驗(yàn)，取得了大量的新成果，使三七的醫(yī)學(xué)應(yīng)用 領(lǐng)域得到了有力的拓展?，F(xiàn)代藥理研究表明，三七含有多種類型的化學(xué)成分，皂苷為三七的主要有效成分 之一，具有多種藥理活性，皂苷為達(dá)瑪烷型。三七中總皂苷含量可達(dá)8% 12%，其中所含 單體有人參皂苷Rbl、Rb2、Re、Rd、Re、Rf、Rgl、Rg2、Rh等9種，但以Rbl和Rgl為主。皂苷 元為人參二醇和人參三醇，以人參三醇含量為高。但Rbl的苷元為20 (S)-原人參二醇，Rgl 的苷元為20 (S)-原人參三醇。以三七單體皂苷Rgl為代表的原人參三醇皂苷具有興奮中樞神經(jīng)、增強(qiáng)記憶、恢 復(fù)疲勞，促進(jìn)DNA，RNA合成，抗血小板凝集等作用，該成分在三七中含量為1.9%。三七中 Rgl還具有免疫調(diào)節(jié)劑的作用，能使過(guò)高或過(guò)低的免疫反應(yīng)恢復(fù)到正常，并活化人體內(nèi)的淋 巴球細(xì)胞，但不干擾人體正常的免疫反應(yīng)。三七皂苷Rgl還可提高大鼠腸上皮細(xì)胞線粒體 編碼基因COX I，COX II的表達(dá)，對(duì)失血性休克腸上皮細(xì)胞線粒體損傷有明顯的保護(hù)作用。 Rgl可以抑制腫瘤壞死因子平滑肌血管增生，藉以抑制腫瘤細(xì)胞汲取養(yǎng)分，達(dá)到抑制腫瘤生 長(zhǎng)的目的。Rgl和雌激素即女性荷爾蒙(Estrogen)有類似相同的結(jié)構(gòu)，可以和雌激素受體 結(jié)合，和雌激素產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)抑制，減少雌激素和受體結(jié)合所引起的乳癌及其降低發(fā)生率，同時(shí) Rbl也具有相同的作用，也具有抑制血管新生的功能。以Rbl為代表的原人參二醇皂苷，促進(jìn)神經(jīng)纖維的形成并維持其功能，防止性功 能減退，抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)，具有抗緊張、抑制中樞的鎮(zhèn)靜、安神、解熱、促進(jìn)睡眠作用；促進(jìn)血清蛋白合成，促進(jìn)膽留醇的合成與分解，抑制中性脂肪分解，抗溶血。該成分在三七中含 量達(dá)1.8%。三七花中的人參皂苷Rbl，Rb3，Rc和Rg3可以協(xié)同大腸癌治療藥物氟嘧啶二酮 (5-Fluorouracil)誘導(dǎo)大腸癌細(xì)胞細(xì)胞凋亡，以補(bǔ)氟嘧啶二酮無(wú)法誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡之不足。三七中其它成分的作用如下人參皂苷Rb2抑制中樞神經(jīng)，促進(jìn)DNA，RNA合成，抗溶血，抗糖尿病。人參皂苷Rc 抑制中樞神經(jīng)，促進(jìn)DNA，RNA合成，促進(jìn)血清蛋白合成。人參皂苷Rd增強(qiáng)免疫功能，抑制癌 細(xì)胞成長(zhǎng)。人參皂苷Rh2促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化為非癌細(xì)胞。四環(huán)三萜達(dá)瑪烷型原人參三醇組皂 苷人參皂甙Re抑制中樞神經(jīng)，促進(jìn)DNA，RNA合成。人參皂苷Rg2抗血小板凝集。人參皂苷 Rhl促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化為非癌細(xì)胞。三七皂苷Rl誘導(dǎo)白血病細(xì)胞分化。由于三七具有以上的優(yōu)點(diǎn)，現(xiàn)在對(duì)三七的開(kāi)發(fā)利用也成為醫(yī)藥領(lǐng)域內(nèi)的熱點(diǎn)。中 國(guó)專利200410073881. 6公開(kāi)了一種三七三醇組皂苷組合物及制備方法。該專利采用大孔 吸附樹(shù)脂分離，不能將三七三醇和三七二醇進(jìn)行有效的分離，提取物中Rbl的含量過(guò)高。中國(guó)專利200610066204.0公開(kāi)了一種用于治療心血管疾病的三七總皂苷組合 物。該專利的提取工藝采用D型大孔吸附樹(shù)脂分離，在該專利的工藝條件下提取的三七總 皂苷組合物Rgl35% -50%, Rbl20% -35%。三七三醇和三七二醇沒(méi)有進(jìn)行有效的分離， 三七二醇的含量過(guò)高。由于以上方法均使用大孔吸附樹(shù)脂分離，三七三醇和三七二醇分離效果不佳。因 此，需要對(duì)現(xiàn)有提取技術(shù)進(jìn)行改進(jìn)，使三七三醇和三七二醇能夠進(jìn)行有效的分離，制備出 三七三醇含量高的提取物。

發(fā)明內(nèi)容
為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明人在對(duì)三七三醇皂苷進(jìn)行研究過(guò)程中，采用柱層析硅膠 柱分離，試驗(yàn)出一組新的三七三醇皂甙提取物及其制備方法，能夠?qū)崿F(xiàn)三七三醇和三七二 醇的有效分離。本發(fā)明的目的是提供一種治療心腦血管疾病的含有三七三醇組皂苷提取物的中 藥組合物。為實(shí)現(xiàn)所述上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案一種三七三醇組皂苷提取物，其中含Rgl (C42H72O14)含量范圍40 70%，三七皂苷 Rl (C47H80O18)含量范圍10 30%，人參皂苷Re (C48H82O18)含量范圍5 10%。優(yōu)選地，Rgl含量范圍50 65%，三七皂苷Rl含量范圍15 25%，人參皂苷Re 含量范圍5 10%。上述Rgl (C42H72O14)，三七皂苷Rl (C47H80O18)和人參皂苷Re含量總和小于100 %。優(yōu)選地，本發(fā)明提取物中將總皂苷含量控制在80%以上；更優(yōu)選地，將總皂苷含 量控制在85%以上。優(yōu)選地，本發(fā)明提取物中Rbl不多于10% ；更優(yōu)選地，Rbl不多于8%。優(yōu)選地，本發(fā)明提取物中總皂苷含量控制在80%以上，Rbl不多于10%。優(yōu)選地，本發(fā)明提取物中總皂苷含量控制在85%以上，Rbl不多于8%。上述三七三醇組皂苷提取物性狀為淡黃色或棕褐色粉末，味苦；水分不超過(guò)
410%。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種治療心腦血管疾病的含有上述三七三醇組皂苷 提取物的藥物。所述的藥物由上述三七三醇組皂苷提取物及藥學(xué)上可接受的輔料制成。所述藥物可接受的輔料可以選自甘露醇、山梨醇、焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代 硫酸鈉、鹽酸半胱氨酸、巰基乙酸、蛋氨酸、維生素C、EDTA 二鈉、EDTA鈣鈉，一價(jià)堿金屬的碳 酸鹽、醋酸鹽、磷酸鹽或其水溶液、鹽酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化鈉、氯化鉀、乳酸鈉、 木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纖 維素及其衍生物、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土溫80、瓊脂、碳酸鈣、碳酸氫鈣、表 面活性劑、聚乙二醇、環(huán)糊精、β-環(huán)糊精、磷脂類材料、高嶺土、滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂寸。本發(fā)明的藥物組合物可以是任何可藥用的劑型，這些劑型包括本發(fā)明藥物的活性組分可以加入制備不同劑型時(shí)所需的各種常規(guī)輔料，如崩解 劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑等以常規(guī)的中藥制劑方法制備成任何一種常用劑型，如粉針劑、片劑、丸 劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑、糖漿、滴丸劑、口服液及其它藥學(xué)上可以接受的劑型，如口含劑、 沖齊 、膏劑、丹劑、混懸劑、溶液劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜?jiǎng)?、噴霧劑、滴劑、貼劑寸。本發(fā)明的另一目的是提供一種三七三醇組皂苷提取物的制備方法。本發(fā)明所述的 三七三醇組皂苷的制備方法包括以下步驟a.取三七，粉碎成粗顆粒，加4-40倍量45% -95%乙醇煎煮兩次，每次1_3小時(shí)；b.合并煎液，70°C以下減壓濃縮至藥材量的1. 5倍體積；c.靜置至室溫，4000-6000rpm，20min，離心或100-300目過(guò)濾，分離出上清液；d.將上清液在70°C以下減壓濃縮至干粉；優(yōu)選地，55 70°C濃縮至干；e.干粉和硅膠重量比1 1 3拌樣；上200 300目硅膠柱，樣品與分離硅膠 重量比1 50 150，上樣流速為0. 5BV/h;f.用乙酸乙酯和無(wú)水乙醇體積比3 5 1為洗脫劑，5-10倍柱體積流速1 1. 5BV/h洗脫，薄層層析法判斷洗脫終點(diǎn)；g.洗脫液70°C以下真空減壓濃縮至干或常規(guī)方法凍干、噴干，即得。由于三七的地下部分以含人參皂苷rgl和rbl為主，三七的地上部分只分離到原 人參二醇的皂苷，未發(fā)現(xiàn)五環(huán)三萜皂苷，因此本發(fā)明所用的材料優(yōu)選的是三七根。上述制備方法中，優(yōu)選步驟a中加6-8倍量70 %乙醇煎煮兩次；更優(yōu)選地，將原料 加乙醇提取時(shí)，第一次加6倍量70%乙醇，煎煮2. 5小時(shí)；第二次加5倍量70%乙醇，煎煮 2小時(shí)。上述制備方法中，優(yōu)選步驟b、d、g中在55_70°C濃縮；優(yōu)選地，70°C減壓濃縮。步驟f中所述的薄層層析條件氯仿乙酸乙酯甲醇水體積比 15 40 22 10，下層展開(kāi)后，用噴10%硫酸乙醇加熱105°C顯色。本發(fā)明所述的制備方法所提取的活性成分，Rgl和Rl的含量大大提高，能夠?qū)崿F(xiàn) 三醇組和二醇組的分離；Rbl含量微量；總皂苷提取物中成分明確，結(jié)構(gòu)明確的成分占85% 以上；成品脫色后顏色比現(xiàn)有工藝淺，適宜做粉針。這些三七三醇皂苷提取物具有純度高， 療效好，質(zhì)量穩(wěn)定，同時(shí)制備方法分離效果佳，含量高，工藝簡(jiǎn)單，操作方便，成本低廉，適合
5工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式本實(shí)施例是為了便于理解本發(fā)明，而不以任何方式限制本發(fā)明的權(quán)利要求和核心 內(nèi)容實(shí)施例1取三七20. 0g，粉碎成粗顆粒，加6倍量70%乙醇回流提取2次，第一次2. 5小時(shí)， 第二次2小時(shí)合并提取液，提取液于60°C減壓濃縮至藥材的1. 5倍，4200rpm，20min，離心， 上清液60°C減壓濃縮至干，干粉和硅膠比例1 1拌樣；然后上200 300目硅膠柱；樣品 與分離硅膠比例1 80，上樣流速為0.5BV/h;用乙酸乙酯與無(wú)水乙醇體積比4 1為洗脫 齊IJ，5倍柱體積流速lBV/h洗脫，薄層判斷洗脫終點(diǎn)。洗脫液70°C真空減壓濃縮至干，即得。高效液相色譜法測(cè)定提取物含量
成分名稱含量(百分比)~收率
Rgl61%Rl 19% __2.4%
Re5.4%
Rbl22%實(shí)施例2取三七20. Og粉碎成粗顆粒，加4倍量70%乙醇回流提取2次，第一次1小時(shí)，第 二次1小時(shí)合并提取液，提取液于55°C減壓濃縮至藥材的1. 5倍，4000rpm，20min，離心，上 清液60°C減壓濃縮至干，干粉和硅膠比例1 1.5拌樣；然后上200 300目硅膠柱；樣品 與分離硅膠比例1 50，上樣流速為0.5BV/h;用乙酸乙酯與無(wú)水乙醇體積比5 1為洗脫 齊U，10倍柱體積流速1. 5BV/h洗脫，薄層判斷洗脫終點(diǎn)。洗脫液60°C真空減壓濃縮至干，即 得。高效液相色譜法測(cè)定提取物含量
成分名稱含量(百分比)WRgl65%2.7%
Rl23%
Re7^8%____
Rbl3.4%實(shí)施例3取三七100. 0g，粉碎成粗顆粒，加40倍量70%乙醇回流提取2次，第一次3小時(shí)， 第二次2小時(shí)合并提取液，提取液于65°C減壓濃縮至藥材的1. 5倍，6000rpm，20min，離心， 上清液65°C減壓濃縮至干，干粉和硅膠比例1 3拌樣；然后上300目硅膠柱，樣品與分離 硅膠比例1 150，上樣流速為0.5BV/h;用乙酸乙酯與無(wú)水乙醇體積比3 1，8倍柱體積 流速1. 5BV/h沖洗，薄層判斷洗脫終點(diǎn)。洗脫液55°C真空減壓濃縮至干，即得。
高效液相色譜法測(cè)定提取物含量
「0055權(quán)利要求
一種三七三醇組皂苷提取物，其特征在于，Rg1(C42H72O14)含量范圍占總提取物40～70％，三七皂苷R1(C47H80O18)含量范圍占總提取物10～30％，人參皂苷Re(C48H82O18)含量范圍占總提取物5～10％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三七三醇組皂苷提取物，其特征在于，Rgl含量占總提取物 50 65%，三七皂苷Rl含量占總提取物15 25%，人參皂苷Re含量占總提取物5 10%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三七三醇組皂苷提取物，其特征在于，提取物中水分不超過(guò) 10. 0%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3所述的任一三七三醇組皂苷提取物，其特征在于，三七總皂苷含 量在80%以上，三七總皂苷中Rbl不多于10%。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的任一三七三醇組皂苷提取物，其特征在于，三七總皂苷含量 在85%以上，三七總皂苷中Rbl不多于8%。
6.權(quán)利要求1所述的三七三醇組皂苷提取物的制備方法，包括以下步驟將原料以乙 醇提取，提取液濃縮，濃縮物與硅膠拌樣，樣品再用硅膠柱分離，樣品與分離用硅膠的重量 比例為1 80，洗脫，收集洗脫液，濃縮得到本發(fā)明的提取物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的三七三醇組皂苷提取物的制備方法，其特征在于，包括以下 步驟a.取三七，粉碎成粗顆粒，加乙醇煎煮兩次，每次1-3小時(shí)；所述的將原料加乙醇提取 時(shí)，加4-40倍量45% -95%乙醇煎煮；b.合并煎液，55-70°C減壓濃縮至藥材量的1.5倍體積；c.靜置至室溫，離心或過(guò)濾，分離出上清液；d.將上清液在55-70°C減壓濃縮至干粉；e.干粉和硅膠拌樣；然后上200 300目硅膠柱，樣品與分離硅膠重量比1 50-150; 干粉和硅膠重量比1 1-3拌樣，上樣流速為0.5BV/h;f.用乙酸乙酯和無(wú)水乙醇洗脫，薄層層析法判斷洗脫終點(diǎn)；乙酸乙酯和無(wú)水乙醇體積 比3-5 1，5-10倍柱體積流速1-1. 5BV/h洗脫;所述的薄層層析條件氯仿乙酸乙酯甲醇水按體積比15 40 22 10，下層 展開(kāi)后，用噴10%硫酸乙醇加熱105°C顯色；g.洗脫液55-70°C真空減壓濃縮至干或凍干、噴干，即得。
8.根據(jù)權(quán)利要求11所述的三七三醇組皂苷提取物的制備方法，其特征在于，步驟a中 加6-8倍量70%乙醇煎煮，第一次加6倍量70%乙醇，煎煮2. 5小時(shí)；第二次加5倍量70% 乙醇，煎煮2小時(shí)。
9.根據(jù)權(quán)利要求11所述的三七三醇組皂苷提取物的制備方法，其特征在于，步驟a中 的原料為三七根。
10.權(quán)利要求1所述的三七三醇皂苷提取物所制成的藥物。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種三七三醇組皂苷提取物及其制備工藝，所述的提取物Rg1(C42H72O14)含量范圍占總提取物40～70％，三七皂苷R1(C47H80O18)含量范圍占總提取物10～30％，人參皂苷Re(C48H82O18)含量范圍占總提取物5～10％。上述提取物的制備方法為將原料以乙醇提取，提取液濃縮，濃縮物與硅膠拌樣，樣品再用硅膠柱分離，樣品與分離用硅膠的重量比例為1∶80，洗脫，收集洗脫液，濃縮得到本發(fā)明的提取物。本發(fā)明的提取物具有純度高，療效好，質(zhì)量穩(wěn)定，同時(shí)制備方法分離效果佳，含量高，工藝簡(jiǎn)單，操作方便，成本低廉，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61P9/00GK101966217SQ200910069899
公開(kāi)日2011年2月9日 申請(qǐng)日期2009年7月27日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月27日
發(fā)明者周水平, 張?zhí)m蘭, 李瑞明, 林萬(wàn)里, 王玉 申請(qǐng)人:天津天士力制藥股份有限公司