專利名稱：：番荔枝內(nèi)酯化合物v在制備治療抗癌藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種抗癌藥物的新用途，具體地說是以番荔枝種子為原料提取的一種番荔枝內(nèi)酯化合物v的新用途，該化合物v在制備治療肺癌、乳腺癌及肝癌藥物中的應(yīng)用。二
背景技術(shù)：
：癌癥是危害人類健康的大敵。我國每年新發(fā)癌癥病例約有160萬人，每年死于癌癥的約有130萬人，全國因癌癥而死亡的人數(shù)逐年上升，我國為肺癌、乳腺癌、肝癌等癌癥的高發(fā)區(qū)域，癌癥死亡率居高不下。目前尚無有效的藥物治愈大多數(shù)癌癥患者?；熕幬飳Π┌Y雖有一定療效，但毒副作用大，中成藥對癌癥的療效普遍較低，療效均不理想。本發(fā)明人經(jīng)過十幾年艱苦研究了番荔枝(AnnonasquamosaLinn)種子的抗癌有效物質(zhì)，從中提取出多種抗癌活性化合物，經(jīng)抗癌實(shí)驗(yàn)研究表明，對人肝癌細(xì)胞、人胃癌細(xì)胞、人食管癌細(xì)胞和動(dòng)物移植性腫瘤(如Si犯、H22和Heps)均有顯著的體內(nèi)外抗癌治療效果，并己申請獲得3項(xiàng)抗癌產(chǎn)品發(fā)明專利證書(專利號(hào)分別為ZL02148474.0、ZL02148475.9、ZL03112707.X)。在上述研究的基礎(chǔ)上，本發(fā)明人繼續(xù)提取分離、篩選番荔枝種子的抗癌有效化學(xué)成分，即番荔枝內(nèi)酯化合物V，具有特別顯著抗癌活性。三
發(fā)明內(nèi)容1、發(fā)明目的本發(fā)明的目的是涉及一種番荔枝內(nèi)酯化合物V的新用途，具體是涉及其番荔枝內(nèi)酯化合物V在制備治療抗癌藥物中的應(yīng)用。2、技術(shù)方案本發(fā)明從番荔枝(AnnonasquamosaLinn)種子提取分離到一種抗癌物質(zhì)番荔枝內(nèi)酯化合物V。先用乙醇、石油醚、氯仿等有機(jī)溶劑從番荔枝種子中提取番荔枝內(nèi)酯；再將番荔枝內(nèi)酯經(jīng)硅膠柱層析，氯仿-甲醇，石油醚-乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇梯度洗脫，得到一種番荔枝內(nèi)酯化合物V，其含量為質(zhì)量分?jǐn)?shù)的50%90%。番荔枝種子粗粉用濃度為95%97%的乙醇回流提?。灰掖继崛∫撼簼饪s后，依次用石油醚(206(TC)、水飽和乙酸乙酯、氯仿萃??；萃取液濃縮干燥后經(jīng)多次硅膠柱層析，硅膠粒度為ioo300目，與萃取物的質(zhì)量比為io:i20:i;以體積比為ioo:090:io的氯仿-甲醇梯度洗脫，將收集到的番荔枝內(nèi)酯物質(zhì)濃縮干燥。再經(jīng)多次硅膠柱層析，硅膠粒度為ioo300目，與番荔枝內(nèi)酯物質(zhì)的質(zhì)量比為io:i50:i;以體積比為ioo:o90:io的石油醚-乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇梯度洗脫，用薄層層析檢査，以碘化鉍鉀試劑顯色；將收集到的番荔枝內(nèi)酯化合物v濃縮干燥，其含量為質(zhì)量分?jǐn)?shù)的50%90%。番荔枝內(nèi)酯化合物V對肺癌、乳腺癌、肝癌細(xì)胞的生長有明顯的抑制作用，其抗癌活性百倍高于化療藥5-氟脲嘧啶(5-FU)。番荔枝內(nèi)酯化合物V對小鼠移植性肺癌的生長抑制作用不同劑量15pg/kg、30|ag/kg和60pg/kg的番荔枝內(nèi)酯化合物V均能顯著抑制小鼠移植性肺癌的生長(PO.Ol)，其抑瘤率分別為63.01%、70.04%、77.81%。番荔枝內(nèi)酯化合物V抗肺癌活性是化療藥5-氟脲嘧啶的百倍以上。番荔枝內(nèi)酯化合物V對小鼠移植性乳腺癌的生長抑制作用不同劑量15pg/kg、3(Hig^cg和60pg/kg的番荔枝內(nèi)酯化合物V均能顯著抑制小鼠移植性乳腺癌的生長(PO.Ol)，其抑瘤率分別為41.18%、65.44%、78.68%。番荔枝內(nèi)酯化合物V抗乳腺癌活性是化療藥5-氟脲嘧啶的百倍以上。番荔枝內(nèi)酯化合物V對小鼠移植性肝癌的生長抑制作用不同劑量15ng/kg、30pg/kg和60pg/kg的番荔枝內(nèi)酯化合物V均能顯著抑制小鼠移植性肝癌的生長(PO.Ol)，其抑瘤率分別為49.70%、64.24%、78.18%。番荔枝內(nèi)酯化合物V抗肝癌活性是化療藥5-氟脲嘧啶的百倍以上。3、有益效果本發(fā)明一種番蔡枝內(nèi)酯化合物V是從番荔枝種子中提取得到的抗癌活性物質(zhì)。動(dòng)物體內(nèi)抗癌實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，番荔枝內(nèi)酯化合物V對肺癌、乳腺癌、肝癌細(xì)胞的生長均有非常高的抗癌活性，其體內(nèi)抗癌活性百倍高于化療藥5-氟脲嘧啶(5-Fu)。這為提高抗癌臨床療效提供了非常有前景的高效預(yù)選藥物。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:番荔枝內(nèi)酯化合物V的提取制備方法番荔枝種子20kg，粉碎成粗粉，用濃度為95%的乙醇回流提取3次，乙醇提取液常壓濃縮后得1.2kg。依次用10倍量石油醚(2060°C)、水飽和乙酸乙酯、氯仿萃取3次，合并萃取液濃縮干燥后得610g。經(jīng)多次硅膠柱層析，硅膠粒度為ioo300目，與萃取物的質(zhì)量比為io:120:i;以體積比為ioo:o90:io的氯仿-甲醇梯度洗脫，收集到的番荔枝內(nèi)酯物質(zhì)濃縮干燥得230g。再經(jīng)多次硅膠柱層析，硅膠粒度為100300目，與番荔枝內(nèi)酯物質(zhì)的質(zhì)量比為io:i50:i;以體積比為ioo:090:10的石油醚-乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇梯度洗脫，收集到的流分濃縮干燥得到蠟狀固體38g，即為番荔枝內(nèi)酯V。實(shí)施例2:番荔枝內(nèi)酯化合物V對移植性肺癌的抑制作用1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和瘤株雄性健康C57BL/6小鼠，體重18—22g，鼠齡6_8周，購自本校動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心；小鼠Lewis肺癌瘤株購自江蘇省腫瘤研究所動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。2、造模與實(shí)驗(yàn)方法C57BL/6小鼠60只，按比例隨機(jī)留10只為陰性對照組，其余50只進(jìn)行造模。制備Lewis肺癌荷瘤小鼠，剝離生長旺盛期的瘤組織，選取生長良好的腫塊1.5mn^左右，按腫瘤(g):生理鹽水(ml)為1:3比例勻漿，調(diào)細(xì)胞數(shù)為2X106/ml。選取健康小鼠，在無菌條件下每只小鼠右側(cè)腋窩皮下接種0.2ml。整個(gè)接種過程須在無菌罩內(nèi)以無菌操作進(jìn)行，lh內(nèi)完成接種。接種后隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為腫瘤模型對照組、15pg/kg、30pg/kg和60ng/kg試驗(yàn)組、5-fu陽性對照組，另加陰性對照組，共6組。接種瘤細(xì)胞24h后，試驗(yàn)組腹腔注射番荔枝內(nèi)酯V，劑量分別為15|ag/kg、30pg/kg和60pg/kg，陰性對照組和腫瘤模型對照組等體積注射藥物溶媒，5-FU對照組以生理鹽水為溶劑，劑量為20mg/kg，各組動(dòng)物均按0.2ml在腹腔注射，連續(xù)給藥10d。末次給藥后次日，進(jìn)行如下觀察完整剝離瘤塊,并稱重計(jì)算腫瘤抑制率，腫瘤抑制率=(對照組腫瘤重量一治療組腫瘤重量)/對照組腫瘤重量><100%。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果番荔枝內(nèi)酯化合物V對小鼠移植性肺癌的生長抑制作用不同劑量的番荔枝內(nèi)酯化合物V均能顯著抑制小鼠移植性肺癌的生長(PO.01)。番荔枝內(nèi)酯化合物V的劑量極小，其抗肺癌活性是化療藥5-氟脲嘧啶(5-FU)的百倍以上，見表l。表1番蒸枝內(nèi)酯V對小鼠移植性肺癌Lewis作用結(jié)果劑量動(dòng)物數(shù)(開始/結(jié)束)瘤重(x±s)抑瘤率(％)P值NS10/103.92±0.195-FU20mg/kg10/101.36±0.2065.31%<0.01番荔枝內(nèi)酯V15pg/kg10/101.45±0.1763.01%<0.0130|ig/kg10/101.16±0.2170.04%<0.0160pg/kg10/100.87±0.1577.81%<0.01實(shí)施例3:番蘊(yùn)枝內(nèi)酯化合物V對移植性乳腺癌的抑制作用2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和瘤株雌性健康TA2小鼠，體重18—22g，鼠齡6—8周，購自本校動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心；小鼠乳腺癌細(xì)胞株MA-891購自江蘇省腫瘤研究所動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。2、造模與實(shí)驗(yàn)方法TA2小鼠60只，按比例隨機(jī)留IO只為陰性對照組，其余50只進(jìn)行造模。取體外培養(yǎng)的對數(shù)生長期MA-891小鼠乳腺癌細(xì)胞，細(xì)胞濃度調(diào)整為lX107/ml。無菌條件下，將MA-891小鼠乳腺癌細(xì)胞接種于TA2小鼠右腋部皮下，接種量為0.2ml/只(細(xì)胞數(shù)為2X10V只)。整個(gè)接種過程須在無菌罩內(nèi)以無菌操作進(jìn)行，lh內(nèi)完成接種。接種后隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為腫瘤模型對照組、15pg/kg、30)ag/kg和60pg/kg試驗(yàn)組、5-fia陽性對照組，另加陰性對照組，共6組。接種瘤細(xì)胞24h后，試驗(yàn)組腹腔注射番荔枝內(nèi)酯V，劑量分別為15pg/kg、3(Vg/kg和60pg/kg，陰性對照組和腫瘤模型對照組等體積注射藥物溶媒，5-FU對照組以生理鹽水為溶劑，劑量為20mg/kg，各組動(dòng)物均按0.21111在腹腔注射，連續(xù)給藥10d。末次給藥后次日，進(jìn)行如下觀察完整剝離瘤塊,并稱重計(jì)算腫瘤抑制率，腫瘤抑制率=(對照組腫瘤重量一治療組腫瘤重量)/對照組腫瘤重量><100%。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果番荔枝內(nèi)酯化合物V對小鼠移植性乳腺癌的生長抑制作用不同劑量的番荔枝內(nèi)酯化合物V均能顯著抑制小鼠移植性乳腺癌的生長(PO.Ol)。番荔枝內(nèi)酯化合物V的劑量極小，其抗乳腺癌活性是化療藥5-氟脲嘧啶(5-FU)的百倍以上，見表2。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實(shí)施例4:番荔枝內(nèi)酯化合物V對移植性肝癌的抑制作用3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和瘤株雄性健康昆明種小鼠，體重18—22g，鼠齡6—8周，來自本校動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心；昆明鼠傳代腹水型鼠肝癌HepS瘤株均購自江蘇省腫瘤研究所動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。小鼠在南京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)房飼養(yǎng)，溫度2125'C，濕度為45%55%。2、造模與實(shí)驗(yàn)方法昆明種雄性小鼠60只，按比例隨機(jī)留IO只為陰性對照組，其余50只進(jìn)行造模。無菌抽取接種HepS瘤種8天的小鼠的腹水，以生理鹽水稀釋10倍，0.02%伊紅染色,滴加到細(xì)胞計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù)后，調(diào)細(xì)胞濃度至lX107/ml，迅速地分別將50只小鼠右腋皮膚消毒，每鼠接種0.2111111叩8腫瘤細(xì)胞懸液于皮下。整個(gè)接種過程須在無菌罩內(nèi)以無菌操作進(jìn)行，lh內(nèi)完成接種。接種后隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為腫瘤模型對照組、15pg/kg、30pg/kg和60ng/kg試驗(yàn)組、5-fo陽性對照組，另加陰性對照組，共6組。接種瘤細(xì)胞24h后，試驗(yàn)組腹腔注射番荔枝內(nèi)酯化合物V，劑量分別為15pg/kg、30|ig/kg和60pg/kg，陰性對照組和腫瘤模型對照組等體積注射藥物溶媒，5-FU對照組以生理鹽水為溶劑，劑量為20mg/kg，各組動(dòng)物均按0.2ml在腹腔注射，連續(xù)給藥8d。末次給藥后次日，進(jìn)行如下觀察完整剝離瘤塊,并稱重計(jì)算腫瘤抑制率，腫瘤抑制率=(對照組腫瘤重量一治療組腫瘤重量)/對照組腫瘤重量x100。/。。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果番荔枝內(nèi)酯化合物V對小鼠移植性肝癌HepS的生長抑制作用不同劑量的番荔枝內(nèi)酯V均能顯著抑制小鼠移植性肝癌HepS的生長(PO.Ol)。番荔枝內(nèi)酯V的劑量極小，其抗肝癌活性是化療藥5-氟脲嘧啶(5-FU)的百倍以上，見表3。表3番荔枝內(nèi)酯V對小鼠移植性肝癌HepS作用結(jié)果<table>complextableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>權(quán)利要求1、一種番荔枝內(nèi)酯化合物V在制備治療抗癌藥物中的應(yīng)用。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于番荔枝內(nèi)酯化合物V在制備治療肺癌藥物中的應(yīng)用。3、根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于番荔枝內(nèi)酯化合物V在制備治療乳腺癌藥物中的應(yīng)用。4、根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于番荔枝內(nèi)酯化合物V在制備治療肝癌藥物中的應(yīng)用。5、根據(jù)權(quán)利要求2、3或4所述的應(yīng)用，其特征在于番荔枝內(nèi)酯化合物V在體內(nèi)對肺癌，乳腺癌或肝癌細(xì)胞有明顯的抑制作用，其抗癌活性高于化療藥物5-氟脲嘧啶。全文摘要本發(fā)明涉及一種番荔枝內(nèi)酯化合物V的新用途，具體地說是涉及化合物V在制備治療抗癌藥物中的應(yīng)用。先用乙醇、石油醚、乙酸乙酯、氯仿等有機(jī)溶劑從番荔枝種子粗粉中提取番荔枝內(nèi)酯；再將番荔枝內(nèi)酯經(jīng)硅膠柱層析，氯仿-甲醇，石油醚-乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇洗脫，得到一種番荔枝內(nèi)酯化合物V，其含量為質(zhì)量分?jǐn)?shù)的50％～90％。經(jīng)動(dòng)物體內(nèi)抗癌藥理實(shí)驗(yàn)，其內(nèi)酯化合物V對肺癌、乳腺癌、肝癌細(xì)胞的生長有明顯的抑制作用，其抗癌活性百倍高于化療藥5-氟脲嘧啶，可用于抗癌藥物的制備。文檔編號(hào)A61K31/365GK101342202SQ20081012458公開日2009年1月14日申請日期2008年8月26日優(yōu)先權(quán)日2008年8月26日發(fā)明者章永紅申請人:南京中醫(yī)藥大學(xué)