專利名稱：：一種抗腫瘤的中藥制品及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及中藥制品，特別是一種抗惡性腫瘤的中藥制品及其制備方法，屬于醫(yī)藥、食品、飲料
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：過去IO年來，癌癥已悄然上升為人類第二大"殺手疾病"(死亡率僅次于心血管疾病)，而過去一度肆虐世界各地的感染性疾病則已退居第3位。據(jù)分析，癌發(fā)病率的急劇上升，與環(huán)境污染加劇、不科學(xué)的飲食習(xí)慣以及不健康的生活方式有關(guān)。癌癥患病率的上升，促使抗癌藥物市場(chǎng)不斷擴(kuò)大。過去幾年來，各種抗癌藥物的總銷售額呈快速上升之勢(shì)，如以美國抗癌藥物市場(chǎng)為例1999年，全美10種主要抗腫瘤藥物的總銷售額為32億美元，2000年為38億。腫瘤藥物市場(chǎng)另一引人注目的新變化是"天然抗癌藥"的新崛起。從前抗腫瘤藥物基本上都是以化學(xué)合成藥(化療藥)一統(tǒng)天下，其中常用臨床藥包括烷化劑類、抗代謝劑和阿霉素、絲裂霉素等等。其藥理作用基本上都是"殺細(xì)胞劑"，它們?cè)跉⑺荔w內(nèi)腫瘤細(xì)胞的同時(shí)也會(huì)傷及正常細(xì)胞。某些化療藥甚至有抑制骨髓細(xì)胞生長的毒副作用。所以腫瘤患者在做過幾次化療后常常會(huì)元?dú)獯髠?，有些病人甚至無法經(jīng)受化療而無奈中止治療過程。在天然植物中尋找具有抗癌活性的高效低毒藥用物質(zhì)，以期開發(fā)全新抗癌藥物是藥物學(xué)研究的一項(xiàng)重要課題。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在美國10大暢銷抗腫瘤藥物中，天然藥物已占"半壁江山"(其中包括紫杉醇、半合成紫杉醇、喜樹堿、長春花堿及其衍生物和依托泊甙等產(chǎn)品)。研究表明，白樺酯酸(betuUnicacid)(3P-hydroxy-lup-20(29)-en-28-oicacid)具有多種顯著的藥理活性。1995年就有人報(bào)道了白樺酯酸可以選擇性地抑制給色素瘤細(xì)胞的生長。2002年，Chowdhury等首次提出白樺酯酸抑制真核細(xì)胞生物的拓?fù)洚悩?gòu)酶I，并確定了抑制反應(yīng)的步驟和白樺酯酸不同碳位修飾后的衍生物的情況，認(rèn)為可以用白樺酯酸進(jìn)行抗腫瘤藥的設(shè)計(jì)。除黑色素瘤細(xì)胞外，受白樺酯酸抑制的還有兒童惡性腦瘤細(xì)胞，多種神經(jīng)瘤細(xì)胞和肉瘤細(xì)胞等。葉銀英等考察了白樺酯酸及其衍生物23-羥基白樺酯酸，結(jié)果發(fā)現(xiàn)它們對(duì)黑色素瘤和其他7種惡性腫瘤細(xì)胞的生長有明顯的抑制作用，并呈現(xiàn)出一定的劑量依賴關(guān)系，細(xì)胞生長周期被阻滯，最終導(dǎo)致了大量的細(xì)胞凋亡。,雖然白樺酯酸具有抗腫瘤的作用，但由于白樺酯酸的缺乏(量少，價(jià)位高，25mg需882元)直接影響了其作為臨床用藥的開發(fā)和研究；另一方面，白樺酯酸其本身作為臨床用藥存在水溶性差的弱點(diǎn)，也限制了它的臨床應(yīng)用。
發(fā)明內(nèi)容中國中醫(yī)藥學(xué)具有悠久的歷史，用中草藥預(yù)防和治療疾病方面也積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，因此從中藥中尋找有效的活性成分是一條有效的途徑，也是中國創(chuàng)新藥物研制的優(yōu)勢(shì)之所在?；谝陨?，本發(fā)明提供了一種抗腫瘤的中藥制品及其制備方法，其技術(shù)方案是一種抗腫瘤的中藥制品，包括藥品、試劑、食品、飲料，其特征是中藥制品的有效成分是含有白樺酯酸的白樺酯酸脂質(zhì)體。該中藥制品可以是單一的白樺酯酸脂質(zhì)體或白樺酯酸脂質(zhì)體與其它化學(xué)物質(zhì)，包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體、食品、天然產(chǎn)物、化學(xué)合成藥物、人類用藥的組合物。所述醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體，包括賦形劑、潤滑劑，、崩解劑、填充劑、粘接劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、稀釋劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑及包括香味劑、甜味劑在內(nèi)的輔劑；制品劑型包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑及注射劑。白樺酯酸脂質(zhì)體的技術(shù)指標(biāo)藥物包封率達(dá)90%以上，粒徑為IOO—IOOO納米之間，無色透明液體。上述抗腫瘤的中藥制品的制備方法，其特征是首先制備白樺酯酸脂質(zhì)體，每1000ml白樺酯酸脂質(zhì)體按照下列原料配比獲取中性磷脂選自包括蛋黃卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂、雙硬脂酸卵磷脂、大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、雙軟脂酸卵磷脂或雙豆蔻酸卵磷脂；有機(jī)溶劑包括乙醇、丙醇、丙二醇-,緩沖劑包括磷酸鹽、左氨酸、組氨酸。具體方法是(1)采用薄膜法獲取白樺酯酸脂質(zhì)體稱取白樺酯酸0.10.20g，卵磷脂0.1400.160g和膽固醇0.0100.025g與梨形瓶中，加入含有白樺酯酸0.005g的10ml乙醇振搖，加入數(shù)顆玻璃珠，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上2832。C蒸干成膜，真空千燥，直到梨形瓶中無乙醇味，加入磷酸緩沖鹽溶液715ml，將膜蕩洗下來，在超聲儀中超聲1030min，使膜溶解，過0.45pm濾膜，得到無色透明液體，即得；(2)將單一的白樺酯酸脂質(zhì)體或白樺酯酸脂質(zhì)體與其它化學(xué)物質(zhì)，包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體、食品、天然產(chǎn)物、化學(xué)合成藥物或人類用藥的組合物，按照常規(guī)工藝制成藥品、食品或飲料。以下對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述本發(fā)明的抗腫瘤的中藥制品，包括藥品、試劑、食品及飲料等，是指用于治療或研究腫瘤及相關(guān)病癥的產(chǎn)品，尤其是藥物及其藥物組合物；其中，所述的抗腫瘤產(chǎn)品是包括抗腫瘤藥物、抗腫瘤試劑等中的一種或多種，最優(yōu)選抗腫瘤藥物。產(chǎn)品是包括藥物、試劑、食品或飲料等中的一種或多種，優(yōu)選藥物。白樺酯酸在自然界中分布非常廣泛，它在白樺樹皮中(樺木科植物)含量最為豐富，存在于黃杞屬、棗屬(鼠李科)、蒲桃屬(桃金娘科)、條紋烏木(柿科)、牡丹(牡丹科)白樺酯酸中性磷脂膽固醇抗氧化劑有機(jī)溶劑緩沖劑50—5000mg100—8000mg10—l0000mg0.25—450mg10—600ml0—400ml和夾竹桃(夾竹桃屬)等植物中。白樺酯酸及其衍生物是一類五環(huán)三砲類化合物，其衍生物多在C2，C3，C17，C20，C23，C28位以及丙烯基的雙鍵位置等有結(jié)構(gòu)變化。它們具有化學(xué)結(jié)構(gòu)簡單，藥理活性強(qiáng)，作用機(jī)制特異，相對(duì)分子質(zhì)量較小等特點(diǎn)。白樺酯酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)<formula>complexformulaseeoriginaldocumentpage5</formula>脂質(zhì)體是脂類分子(類脂)的自組裝體，是一種由一個(gè)或多個(gè)脂雙層中間包裹微水相結(jié)構(gòu)。構(gòu)成雙分子層的類脂分為親水的頭部和親油的尾部兩部分，在脂質(zhì)體的形成過程中，親水的頭部形成膜的內(nèi)外表面層，而親油性的尾部處于膜的中間。脂質(zhì)體的這種結(jié)構(gòu)使其能夠攜帶各種親水的、疏水的和兩親的物質(zhì)，這些物質(zhì)被包入脂質(zhì)體內(nèi)部水相，或插入類脂雙分子層，或吸附連結(jié)在脂質(zhì)體的表面。我們利用脂質(zhì)體的這種特殊功能，就可以解決白樺酯酸溶解度差的難題。本發(fā)明制備的白樺酯酸脂質(zhì)體，解決脂溶性藥物不易溶于水的難題，為它的臨床應(yīng)用開辟了新的道路；同時(shí)，這種微粒具有類細(xì)胞結(jié)構(gòu)，進(jìn)入人體后主要被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬而激活機(jī)體的自身免疫功能，并改變被包封藥物的體內(nèi)分布，使藥物主要在肝、脾、肺和骨髓等組織器官中積蓄，從而提高藥物的治療指數(shù)，減少藥物的治療劑量和降低藥物毒性。本發(fā)明所述的白樺酯酸脂質(zhì)體可以單獨(dú)或與其它活性組分聯(lián)合使用，包括用于制備用于診斷、檢測(cè)、預(yù)防、保護(hù)、治療或研究相關(guān)疾病的產(chǎn)品，包括藥物、試劑、食品或飲料等，尤其是藥物。在具體使用方面，本發(fā)明所述的白樺酯酸脂質(zhì)體能夠單獨(dú)使用，還能夠與其他許多化學(xué)物質(zhì)一起使用。無論這些化學(xué)物質(zhì)是否具有生物活性或具有治療疾病的功能，包括輔助功能如協(xié)同放大作用、拮抗或緩解白樺酯酸脂質(zhì)體的副作^等，這些化學(xué)物質(zhì)是包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體、食品、天然產(chǎn)物、化學(xué)合成藥物或人類用藥等中的一種或多種；優(yōu)選包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體或者食品等中的一種或多種；進(jìn)一步優(yōu)選醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體。本文使用的"醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體"包括任何和所有的生理適用的溶劑、分散介質(zhì)、胞衣、抗菌劑和抗真菌劑、等滲劑或吸收延遲劑等中的一種或多種。醫(yī)藥學(xué)上可接受載體的例子包括一種或多種的水、鹽水、磷酸緩沖鹽水、葡萄糖、甘油或乙醇等及其組合物中的一種或多種。醫(yī)藥學(xué)上可接受載體還可以包含少量的輔助物質(zhì)，例如潤濕劑或乳化劑、防腐劑或緩沖液等中的一種或多種，它們?cè)鰪?qiáng)了該白樺酯酸脂質(zhì)體的有效期或效力。從具體的分類上看，所說的醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體是指醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，包括賦形劑，如淀粉或水等中的一種或多種；潤滑劑，如甘油或硬脂酸鎂等中的一種或多種；崩解劑，如微晶纖維素、瓊脂、碳酸鈣或碳酸氫鈉等；填充劑，如淀粉或乳糖等中的一種或多種；粘接劑，如預(yù)膠化淀粉、糊精、纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠或聚乙烯吡咯垸酮等中的一種或多種；滲透壓調(diào)節(jié)劑，如葡萄糖、蔗糖、山梨醇或甘露醇等中的一種或多種；稀釋劑，如水等；吸收促進(jìn)劑，如季銨化合物等；表面活性劑，如十六垸醇等；吸附載體，如高嶺土或皂粘土等中的一種或多種；潤滑劑，如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂或聚乙二醇等中的一種或多種；另外，還可以在組合物中加入其它輔劑，如香味劑或甜味劑等中的一種或多種。本發(fā)明所述及的白樺酯酸脂質(zhì)體還可以以組合物的形式聯(lián)合使用，特別是與用其它化學(xué)物質(zhì)如藥物對(duì)動(dòng)物尤其是哺乳動(dòng)物包括人或其他動(dòng)物進(jìn)行治療所用的組合物或者是類似的組合物。所述哺乳動(dòng)物，包括人、小鼠、大鼠、羊、猴、牛、豬、馬、兔、犬、黑猩猩、狒狒、狨、獼猴或恒河猴等中的一種或多種。例如，可以將本發(fā)明白樺酯酸脂質(zhì)體加入適于給與受治療者的藥用組合物中。通常，該藥用組合物包含本發(fā)明白樺酯酸脂質(zhì)體和藥學(xué)上可接受的載體。白樺酯酸脂質(zhì)體的組合物特別是藥物組合物可以有各種形式，包括例如液體、半固體和固體等劑量形式中的一種或多種；其中所說的藥物組合物包括治療有效量的白樺酯酸脂質(zhì)體為活性成分，以及一種或多種醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體。白樺酯酸脂質(zhì)體的藥物組合物可以采用本領(lǐng)域公知的常規(guī)生產(chǎn)方法制成各種劑型，例如使活性成分與一種或多種載體混合，然后將其制成所需的劑型。所述的劑型包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑或注射劑等中的一種或多種，采取口服或注射(包括靜脈注射、靜脈滴注、肌肉注射或皮下注射等中的一種或多種)、粘膜透析等中的一種或多種給藥途徑進(jìn)行以及腫瘤及相關(guān)病癥的診斷、檢測(cè)、治療或科學(xué)研究。白樺酯酸脂質(zhì)體的藥物組合物一般必須無菌且在生產(chǎn)儲(chǔ)存條件下穩(wěn)定。通過將所需量的該白樺酯酸脂質(zhì)體加入適當(dāng)?shù)娜軇┲胁⒔又M(jìn)行除菌過濾制備無菌注射液。一般而言，通過將該白樺酯酸脂質(zhì)體加入含有基本分散介質(zhì)和所需的上述其它成分的無菌溶媒中制備分散液。在用于制備無菌注射液的無菌粉劑的情況下，推薦的制備方法是真空干燥和冷凍干燥劑。"治療有效量"是指在必要的劑量和時(shí)間下有效達(dá)到所需治療效果的量。白樺酯酸脂質(zhì)體的治療有效量可以根據(jù)諸如個(gè)體的病況、年齡、性別和體重以及該白樺酯酸脂質(zhì)體在該個(gè)體引起所需反應(yīng)的能力等因素而變化。治療有效量亦指該白樺酯酸脂質(zhì)體的有益治療效果超過其任何毒性或有害效果的量。本發(fā)明白樺酯酸脂質(zhì)體的治療有效量的典型的非限制性范圍是lmg40mg/kg，更優(yōu)選為5mg20mg/kg。應(yīng)注意，劑量值將根據(jù)欲減輕的疾病類型和嚴(yán)重性變化，也就是說用于患者時(shí)，本發(fā)明所述的白樺酯酸脂質(zhì)體的劑量或用量，通常根據(jù)患者或使用者的年齡和體重以及身體狀況或患者癥狀的狀況來決定。另外，應(yīng)理解，對(duì)于任何特定受治療者，應(yīng)隨著時(shí)間根據(jù)個(gè)體需要和給與或監(jiān)督給與所述組合物的人的專業(yè)判斷調(diào)整特定劑量制度，并且本文設(shè)定的劑量范圍僅為例證性的，并不會(huì)限制要求保護(hù)的組合物的范圍或?qū)嵺`。本發(fā)明所述的白樺酯酸脂質(zhì)體及其組合物制備抗腫瘤產(chǎn)品，能夠治療腫瘤及其相關(guān)病癥；按照醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
的要求制備的產(chǎn)品能夠用于患者的治療，既能夠單獨(dú)直接用于制備治療的藥物，也能夠與許多化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行混合或組合，直接或間接用于制備治療或保健的藥物。這里所述的化學(xué)物質(zhì)與前述的相同。在本發(fā)明中，所需物料包括本發(fā)明的原料、上述配套使用的化學(xué)物質(zhì)等，均應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況和需要，采用食品級(jí)或藥用級(jí)的物料。白樺酯酸脂質(zhì)體制備的藥物及其藥物組合物可以采用本領(lǐng)域公知的方法制成各種劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑、注射劑等，采取口服或注射(包括靜脈注射、靜脈滴注、肌肉注射、皮下注射等)、粘膜透析等給藥途徑進(jìn)行腫瘤的防治。用于注射時(shí)，可將其制成常規(guī)的注射制劑如凍干粉針。此外，白樺酯酸脂質(zhì)體所使用的藥材原料在某些情況下也能夠單獨(dú)直接用于制備抗腫瘤產(chǎn)品，也能夠與許多化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行混合或組合，以組合物的形式直接或間接用于制備抗腫瘤產(chǎn)品。這里所述的化學(xué)物質(zhì)與前述的相同。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)及有益效果本發(fā)明有針對(duì)性地研究白樺酯酸脂質(zhì)體，解決脂溶性藥物不易溶于水的難題，拓展了醫(yī)藥用途，也為治療和研究腫瘤提供了一種新的藥物來源。該原料安全低毒，藥理作用較強(qiáng)，其原料來源廣泛、價(jià)廉，制備工藝簡單、得率高，可用于制備治療腫瘤的產(chǎn)品，易于推廣應(yīng)用。經(jīng)文獻(xiàn)檢索，到目前為止，尚未發(fā)現(xiàn)有白樺酯酸脂質(zhì)體具有防治腫瘤作用方面的報(bào)道。本發(fā)明的研究結(jié)果可被進(jìn)一步深入開發(fā)為具有臨床應(yīng)用前景的防治腫瘤的產(chǎn)品尤其是新藥。與中國國內(nèi)、國際上的同類產(chǎn)品相比具有顯著的優(yōu)勢(shì)。因此，本發(fā)明還可為后續(xù)的新藥研究打下良好的基礎(chǔ)，并進(jìn)一步產(chǎn)生較大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。本發(fā)明經(jīng)過長期的藥理學(xué)試驗(yàn)，白樺酯酸脂質(zhì)體具有治療腫瘤及其相關(guān)病癥的活性，實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明所述及的白樺酯酸脂質(zhì)體以及組合物特別是藥物組合物是一種安全、高效、穩(wěn)定、價(jià)廉的防治腫瘤的藥物，其制備成本低廉，活性成分明確。白拌酯酸脂質(zhì)體性質(zhì)穩(wěn)定，治療腫瘤及其相關(guān)病癥的效果明顯，使用白樺酯酸脂質(zhì)體制備的制劑質(zhì)量穩(wěn)定，故其更適于治療黑色素瘤及其相關(guān)病癥藥物的工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明研究了白樺酯酸脂質(zhì)體的用途，提供了一種能夠用于制備治療腫瘤產(chǎn)品如藥物等或者是抗腫瘤產(chǎn)品特別是藥物的原料，便于醫(yī)療行業(yè)和相關(guān)行業(yè)如食品、飲料等領(lǐng)域的安全使用，包括疾病的診斷、檢測(cè)、治療或科學(xué)研究等?？傊景l(fā)明積極適應(yīng)了現(xiàn)代醫(yī)療、食品、飲料和科研領(lǐng)域的工作需要和人性化服務(wù)的需要，是用于制備抗腫瘤產(chǎn)品的安全原料，可直接或間接治療或研究腫瘤及其相關(guān)病癥。具體實(shí)施方式實(shí)施例1.白樺酯酸脂質(zhì)體粉針的制備1、白樺酯酸脂質(zhì)體粉針的制備方法(一)白樺酯酸脂質(zhì)體粉針的制備白樺酯酸0.15g卵磷脂0.15g膽固醇(U5g甘露醇0.30g薄膜法(TFV):稱取白樺酯酸0.15g，卵磷脂0.15g和膽固醇0.15g與梨形瓶中，加入10ml乙醇，振搖，加入數(shù)顆玻璃珠，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上2832。C蒸干成膜，真空干燥，直到梨形瓶中無乙醇味，加入磷酸緩沖鹽溶液715ml，將膜蕩洗下來，在超聲儀中超聲1030min，使膜溶解，過0.45pm濾膜，得到無色透明液體，藥物包封率達(dá)90%以上。稱取處方量甘露醇，以15ml水合介質(zhì)加水溶解后，倒入1000ml茄形瓶中，輕搖，將類脂質(zhì)膜洗脫并分散到水合介質(zhì)溶解后，既得脂質(zhì)體混懸液。將其倒入APV2000乳勻機(jī)(丹麥APV)，在一級(jí)閥1760Bar，二級(jí)閥270bar壓力下，連續(xù)乳勻5次，既得，對(duì)其冷凍或噴霧干燥既得粉針。(二)白樺酯酸脂質(zhì)體的含量測(cè)定(1)對(duì)照品溶液的制備精密稱取白樺酯酸的對(duì)照品10mg，用無水乙醇定容于10ml容量瓶中，制成lmg'ml—'的對(duì)照品溶液，備用。(2)空白脂質(zhì)體的制備按處方量稱取PC、Ch，加入至500ml的梨形瓶中，加入無水乙醇10ml，超聲溶解，加入10顆玻璃珠，搖均。3(TC減壓蒸發(fā)至干，成膜，真空干燥至無乙醇味。加入PH值為6.8(0.05mol/L)的磷酸緩沖鹽溶液5ml，超聲蕩洗，將膜完全洗脫下來。然后，水浴超聲20min，0.45pm無機(jī)相濾膜過濾，得到空白脂質(zhì)體溶液，備用。通過高效液相檢驗(yàn)，卵磷脂和膽固醇與藥物峰分離良好，不會(huì)對(duì)其有影響。(3)分析方法的建立將適量的白樺酯酸的無水乙醇溶液放置于紫外分光光度計(jì)中進(jìn)行波長掃描，結(jié)果在212nm處，白樺酯酸有最大吸收，因此，確定白樺酯酸的檢測(cè)波長為212nm。因此，分析方法采用KromasailC18柱(250X4.6mm，5pm);流動(dòng)相為乙腈-水(85:15);流速為0.8ml.min:柱溫為室溫；檢測(cè)波長為212nm。(4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取制備好的對(duì)照品溶液稀釋成五個(gè)不同濃度，再用流動(dòng)相稀釋，得到80ng.mr1、40昭.mr1、20嗎-ml—1、10嗎-mr1、5pLg'ml—1五個(gè)濃度的溶液，20^1進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。以對(duì)照品峰面積(Y)對(duì)樣品濃度(X叱'mr1)進(jìn)行線形回歸，回歸方程為Y=9694.6X+5740.2(r=0.9999)，在5嗎'mr180嗎'mr1之間具有良好的線形關(guān)系。(5)精密度試驗(yàn)取濃度為20嗎.mr'的對(duì)照品溶液一日之內(nèi)連續(xù)測(cè)定5次，結(jié)果見下表精密度試驗(yàn)結(jié)果(n-5)次數(shù)峰面積RSD%1179234~218233231771341.7741850325178513結(jié)論儀器的精密度良好。(6)穩(wěn)定性試驗(yàn)取濃度為20嗎.mr1的對(duì)照品溶液進(jìn)行五天連續(xù)測(cè)定，結(jié)果見下表:穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果(11=5)天數(shù)峰面積RSD%1177134217636731751842.9041749165164835結(jié)論含量測(cè)定方法的穩(wěn)定性良好。(7)空白回收率試驗(yàn)精密吸取三份lml空白脂質(zhì)體溶液，分別加入lml對(duì)照品溶液20嗎'mr1、10嗎'mr1、5嗎TnT1，2(Hd進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，結(jié)果見下表回收率試驗(yàn)結(jié)果(n-5)加入量(嗎)測(cè)定量(嗎)回收率(％)RSD%20.49TM310.0010.26102.60.595細(xì)_5.075_101.5___結(jié)論表明本測(cè)定方法具有良好的回收率，方法可靠性強(qiáng)。(三)載藥率的測(cè)定采用過膜法測(cè)定載藥率。精密稱取卵磷脂0.150g和膽固醇0.015g置于梨形瓶中，加入10ml乙醇(其中含有白樺酯酸0.005g)，振搖，加入10顆玻璃珠，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上3(TC、50rpm旋轉(zhuǎn)蒸干成膜，真空干燥，直到梨形瓶中無乙醇味，加入磷酸緩沖鹽溶液5ml(pH=6.8、0.05moI/L)，將膜蕩洗下來，在超聲儀中超聲20min，使膜乳化成脂質(zhì)體，過0.45pm無機(jī)相濾膜，即得。應(yīng)用過濾法測(cè)定載藥率的公式為載藥率(％)=(過膜后的藥物峰面積/過膜前的藥物峰面積)X100%測(cè)得3個(gè)批號(hào)脂質(zhì)體的載藥率分別為96.1%，97.0%,96.4%。實(shí)施例2.白樺酯酸及其脂質(zhì)體對(duì)人黑色素瘤細(xì)胞株A375的影響1材料和方法1.1藥物白樺酯酸脂質(zhì)體參照實(shí)施例1制備。1.2瘤株人黑色素瘤細(xì)胞株A375由中科院細(xì)胞所提供。1.3試劑及儀器MTT(購于Sigma公司)；DMEM、胰蛋白酶、小牛血清(購于GIBCO公司)。MultiskanMK3型酶標(biāo)儀(LabsystemsDragon公司)1.4MTT法測(cè)細(xì)胞增殖抑制率分別收集對(duì)數(shù)生長期的人黑色素瘤細(xì)胞株A375(2X104/ml)，種入96孔培養(yǎng)板，每孔100pl,分別按設(shè)計(jì)加入藥液，陰性對(duì)照用相應(yīng)培養(yǎng)液代之，置5%(302、37。C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。處理后的細(xì)胞，移去DMEM培養(yǎng)基，D-Hank's液洗2次，每孔加入100^1DMEM培養(yǎng)基和10^1MTT(5mg/ml)，37。C孵育4h。棄去液體，每孔加入10(^1DMS0，放置數(shù)分鐘，使MTT結(jié)晶溶解，在酶標(biāo)儀上540nm處測(cè)吸收值。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用x土S表示，顯著性差異采用student's—t檢驗(yàn)評(píng)價(jià)。2結(jié)果白樺酯酸脂質(zhì)體的體外抑瘤作用基本上與白樺酯酸相似，在最低濃度和最高濃度時(shí)，比白樺酯酸稍微好些，但是差別不大。說明白樺酯酸脂質(zhì)體對(duì)人黑色素瘤細(xì)胞A375有抑瘤作用，并且在與白樺酯酸同等濃度條件下，作用效果相當(dāng)，那么，由脂質(zhì)體包裹的PA-1的體外實(shí)驗(yàn)，即對(duì)人黑色素瘤細(xì)胞株A375是有效的。白樺酯酸脂質(zhì)體與白樺酯酸對(duì)人黑色素瘤細(xì)胞A375的生長影響見下表。白樺酯酸及其脂質(zhì)體對(duì)人黑色素瘤細(xì)胞株A375的影響(5±S，n=3)濃度(mg/ml)OD值抑瘤率(％)白樺酯酸脂質(zhì)體白樺酯酸白樺酯酸脂質(zhì)體白樺酯酸白樺酯酸脂質(zhì)體白樺酯酸9<table>complextableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實(shí)施例3.白樺酯酸脂質(zhì)體對(duì)小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞株(C26)移植性腫瘤的影響1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞株C26由上海市醫(yī)工院提供；BABL/C+ICR-F1小鼠，1922克，購自由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，許可證號(hào)SCXK(滬)2003—0003。1.2試劑及儀器環(huán)磷酰胺(規(guī)格200mg/瓶，批號(hào):050206，上海華聯(lián)制藥有限公司)；天平(JA2003A，上海精天電子儀器有限公司)1.3小鼠結(jié)腸癌(C26)移植性腫瘤模型建立及藥物作用選生長旺盛之小鼠結(jié)腸癌(C26)瘤源，以勻漿法(1:8)制備成細(xì)胞懸液，每只小鼠右腋皮下接種0.2ml。同時(shí)每天腹腔注射白樺酯酸脂質(zhì)體(lmg/kg、10mg/kg)，陽性對(duì)照藥腹腔注射環(huán)磷酰胺(25mg/kg)，每天1次。接種后10天處死動(dòng)物，解剖，取皮下小鼠腫瘤，稱瘤重。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用土S表示，顯著性差異采用student's—t檢驗(yàn)評(píng)價(jià)。2結(jié)果生理鹽水組移植小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞株(C26)荷瘤腫瘤重量可達(dá)1.675土0.217g，白樺酯酸脂質(zhì)體可顯著減小移植小鼠結(jié)腸癌(C26)荷瘤小鼠腫瘤，非常顯著減輕腫瘤重量(PO.Ol)，低、高劑量組(lmg/kg、10mg/kg)抑制率分別為31.4%和54.5%，表明白樺酯酸脂質(zhì)體對(duì)移植小鼠結(jié)腸癌(C26)荷瘤小鼠腫瘤有抑制作用。結(jié)果見下表。對(duì)移植小鼠結(jié)腸癌(C26)荷瘤小鼠腫瘤重量的影響(5±5,n=10)<table>complextableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>與生理鹽水組比較，**P<0.01實(shí)施例4.對(duì)肝癌細(xì)胞株7721的影響1材料與方法1.1藥物白樺酯酸脂質(zhì)體參照實(shí)施例1制備。1.2瘤株及試劑人肝癌SMMC-7721細(xì)胞株、QSG-7701細(xì)胞株均由第二軍醫(yī)大學(xué)生化教研室提供；MTT(購于Sigma公司)；DMEM、胰蛋白酶、馬血清(購于GIBCO公司)。1.3MTT法測(cè)細(xì)胞增殖抑制率[6]:分別收集對(duì)數(shù)生長期的人肝癌細(xì)胞株7721、7701(2X104/ml)，種入96孔培養(yǎng)板，每孔10(^1，分別按設(shè)計(jì)加入藥液，陰性對(duì)照用相應(yīng)培養(yǎng)液代之，置5。/。C02、37。C的培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)12、24、36h。處理后的細(xì)胞，移去DMEM培養(yǎng)基，D-Hank's液洗2次，每孔加入1OOplDMEM培養(yǎng)基和10|_dMTT(5mg/ml),37"孵育4h。棄去液體，每孔加入100W異丙醇(含0.1N鹽酸)，放置數(shù)分鐘，使MTT結(jié)晶溶解，在酶標(biāo)儀上595nm處測(cè)吸收值。藥物的劑量一效應(yīng)關(guān)系通過與肝癌細(xì)胞共培養(yǎng)36h測(cè)定得出。1.4儀器MultiskanMK3型酶標(biāo)儀(LabsystemsDragon公司)1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用^士S表示，顯著性差異采用配對(duì)t檢驗(yàn)評(píng)價(jià)。2.結(jié)果MTT法測(cè)細(xì)胞增殖抑制率白樺酯酸脂質(zhì)體對(duì)SMMC-7721、QSG-7701肝癌腫瘤細(xì)胞的生長均有非常顯著的抑制作用(PO.OOl)。結(jié)果見下表。白樺酯酸脂質(zhì)體對(duì)人肝癌細(xì)胞株QSG-7701的生長影響(5±S，n=3)組別濃度A抑制率(mg/ml)(%)對(duì)照一0.389±0.034一0.10.277±0.019c28.36±8.50白樺酯酸脂質(zhì)體10.187士0.013c51.82±3.24100.065士0.015c83.12±4.54與對(duì)照組比bpO.05,cpO.01白樺酯酸脂質(zhì)體對(duì)人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721的生長影響(5土SD，n-3)組別濃度A抑制率_(mg/ml)_(%)對(duì)照一0.355士0.013—10.211士0.022c40.57±5.46白樺酯酸脂質(zhì)體20.151±0.031c57.53±7.38__^__0.033士0.009c90.67±2.31與對(duì)照組比cpO.Ol"結(jié)論經(jīng)體外和體內(nèi)試驗(yàn)表明白樺酯酸脂質(zhì)體具有抗腫瘤作用。權(quán)利要求1、一種抗腫瘤的中藥制品，包括藥品、試劑、食品、飲料，其特征是中藥制品的有效成分是含有白樺酯酸的白樺酯酸脂質(zhì)體。全文摘要一種抗腫瘤的中藥制品，包括藥品、試劑、食品、飲料，其特征是中藥制品的有效成分是含有白樺酯酸的白樺酯酸脂質(zhì)體，白樺酯酸脂質(zhì)體藥物包封率達(dá)90％以上，粒徑為100-1000納米之間，無色透明液體。上述抗腫瘤的中藥制品的制備方法，首先采用薄膜法獲取白樺酯酸脂質(zhì)體，然后將單一的白樺酯酸脂質(zhì)體或白樺酯酸脂質(zhì)體與其它化學(xué)物質(zhì)，包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體、食品、天然產(chǎn)物、化學(xué)合成藥物或人類用藥的組合物，按照常規(guī)工藝制成藥品、食品或飲料。文檔編號(hào)A61P35/00GK101342179SQ20081012446公開日2009年1月14日申請(qǐng)日期2008年7月8日優(yōu)先權(quán)日2008年7月8日發(fā)明者劉靜涵,司梁宏,朱昌羅,楊春華,趙伯誠,彥邱,瑜陸,黃大超申請(qǐng)人:中國人民解放軍第四五四醫(yī)院;南京博耀科技有限責(zé)任公司