專利名稱：：(2r,z)-2-氨基-2-環(huán)己基-n-(5-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-1-氧代-2,6-二氫-1h-[1,2]二...的制作方法
技術(shù)領域：
：本發(fā)明涉及使用(21^)-2-氨基-2-環(huán)己基-,(5-(1-甲基-111-吡唑-4-基)-1-氧代-2,6-二氫-lH-[l,2]二氮雜卓并[4,5,6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺或其醫(yī)藥學上可接受的鹽與抗癌劑或輻射療法的組合來治療哺乳動物癌癥的方法。
背景技術(shù)：
：化合物(2117)-2-氨基-2-環(huán)己基-^(5-(1-甲基-111-吡唑-4-基)-1-氧代-2，6-二氫-lH-[l,2]二氮雜卓并[4，5，6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺(也稱作"化合物1")，H1以及其醫(yī)藥學上可接受的鹽描述于2005年11月22日授權(quán)的美國專利No.6，967，198中，該專利的內(nèi)容以引用的方式并入本文。許多抗癌劑以及輻射療法會引起對細胞(特別是癌細胞)的DNA損傷。CHK1抑制通過廢除那些經(jīng)DNA損傷細胞的S及G2停滯并從而導致這些細胞的有絲分裂災變及細胞死亡而增強這些抗癌劑或輻射療法的抗癌效應。(2R,Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2，6-二氫-lH-[l,2]二氮雜卓并[4,5,6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺為有效的CHK1蛋白激酶抑制劑。使用(2117)-2-氨基-2-環(huán)己基-^(5-(1-甲基-111-吡唑-4-基)-1-氧代-2,6-二氫-m-[l,2]二氮雜卓并[4，5，6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺，其醫(yī)藥學上可接受的鹽或溶劑合物或其混合物與抗癌劑或輻射療法的組合將大幅增強抗癌劑或輻射療法的抗癌效應。
發(fā)明內(nèi)容在一實施方式中，本發(fā)明提供一種治療哺乳動物過度增殖性病癥的方法，其包含向哺乳動物投與治療有效量的(2R，Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(1-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2,6-二氫-lH-[l,2]二氮雜卓并[4,5,6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺、其醫(yī)藥學上可接受的鹽或溶劑合物或其混合物與治療有效量的選自抗過度增殖劑及輻射療法的抗過度增殖治療的組合。在此實施方式的一特定方面中，抗過度增殖劑是選自酶法呢基蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑及受體酪氨酸激酶PDGFr抑制劑。優(yōu)選地，抗過度增殖劑為于以下文獻中公開及要求保護的化合物美國專利6,080,769、美國專利6,194,438、美國專利6，258,824、美國專利6,586447、美國專利6,071，935、美國專利6,495,564及美國專利6,150，377、美國專利6,596，735、美國專利6,479,513、WO01/40217、美國2003-0166675。前述專利及專利申請的每一個的全文都以引用的方式并入本文。在此實施方式的一特定方面中，抗過度增殖劑為PDGRr抑制劑。PDGRr抑制劑包括(但不限于)那些于國際專利申請公開案號WO01/40217及WO2004/020431中所公開的，其內(nèi)容的全文都并入本文。優(yōu)選的PDGFr抑制劑包括Pfizer的CP-673,451及CP-868，596及其鹽。在另一實施方式中，本發(fā)明提供一種治療哺乳動物癌癥的方法，其包含向哺乳動物投與治療有效量的(2R，Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑_4_基)_1_氧代_2，6-二氫-111-[1，2]二氮雜卓并[4，5，6《(1]吲哚-8-基)乙酰胺、其醫(yī)藥學上可接受的鹽或溶劑合物或其混合物與治療有效量的選自抗癌劑及輻射療法的抗癌治療的組合。在此實施方式的一特定方面中，以及與任何其他不矛盾的特定方面的組合中，該方法增強抗癌治療的治療效應。在此實施方式的另一特定方面中，以及與任何其他不矛盾的特定方面的組合中，該方法表現(xiàn)出(2117)-2-氨基-2-環(huán)己基-^(5-(1-甲基-111-吡唑-4-基)-l-氧代-2,6-二氫-lH-[l，2]二氮雜卓并[4，5,6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺、其醫(yī)藥學上可接受的鹽或溶劑合物或其混合物與抗癌治療的協(xié)同治療效應。在此實施方式的另一特定方面中，以及與任何其他不矛盾的特定方面的組合中，癌癥選自結(jié)腸癌、前列腺癌、乳癌及白血病。甚至更優(yōu)選地，癌癥為結(jié)腸癌。在此實施方式的另一特定方面中，以及與任何其他不矛盾的特定方面的組合中，抗癌治療為抗癌劑。優(yōu)選地，抗癌劑為臨床上展示用以治療癌癥的化學或生物物質(zhì)。更優(yōu)選地，抗癌劑選自由以下物質(zhì)組成的組放線菌素D(actinomycinD)、阿德力霉素(adriamycin)、安吖啶(amsacrine)、ara-C、9-(3-D-阿拉伯糖基-2-氟腺嘌呤、BCNU、博萊霉素(bleomycin)、喜樹堿(camptothecin)、卡波鉑(carboplatin)、2-氯-2-去氧腺苷、CPT-ll、環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)、多烯紫杉醇(docetaxel)、多柔比星(doxorubicin)、伊朵泰星(edotecarin)、依托泊苷(etoposide)、氟達J立^賓(fludarabine)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、吉西他濱(gemcitabine)、HU-Gemzar、伊立替康(Irinotecan)、甲胺喋呤(methotrexate)、6-M嘌呤、絲裂霉素-C、紫杉醇(paclitaxel)、順鉑(cis-platin)、SN-38、紫杉酚(taxol)、噻替哌(thiotepa)、6-硫鳥嘌呤、三甲曲沙長春堿(trimetrexatevinblastine)、長春新堿(vincristine)及VP-16。甚至更優(yōu)選地，抗癌劑選自由以下物質(zhì)組成的組吉西他濱、伊立替康、多烯紫杉醇、SN-38、卡波鉑、多柔比星及絲裂霉素C。甚至更優(yōu)選地，抗癌劑為吉西他濱。甚至更優(yōu)選地，抗癌劑為伊立替康。甚至更優(yōu)選地，抗癌劑為多烯紫杉醇。在此實施方式的另一特定方面中，以及與任何其他不矛盾的特定方面的組合中，抗癌劑為DNA損傷劑。優(yōu)選地，"DNA損傷劑"為臨床上表現(xiàn)出可以治療癌癥的化學或生物物質(zhì)。更優(yōu)選地，DNA損傷劑選自由以下物質(zhì)組成的組烷基化劑、抗代謝物、抗腫瘤抗生素、鉑類似物、拓撲異構(gòu)酶I抑制劑及拓撲異構(gòu)酶II抑制劑。在此實施方式的另一特定方面中，以及與任何其他不矛盾的特定方面的組合中，抗癌劑為垸基化劑。優(yōu)選地，烷基化劑選自由以下物質(zhì)組成的組阿帕喹酮(apaziquone)、六甲蜜胺(altretamine)、泊羅斯星(brostallicin)、苯達莫司汀(bendamustine)、白消安(busulfan)、卡波醌(carboquone)、卡莫司汀(carmustine)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、氮芥(chlormethine)、環(huán)磷酰胺、雌莫司汀(estramustine)、福莫司汀(fotemustine)、格魯佛酰胺(glufosfamide)、異環(huán)磷酰胺(ifosfamide)、洛莫司汀(lomustine)、馬磷酉先胺(mafosfamide)、氧化氮芥(mechlorethamineoxide)、美西林(mecillinam)、美法侖(melphalan)、二溴甘露醇(mitobronitol)、二》臭衛(wèi)矛醇(mitolactol)、尼莫司？丁(nimustine)、氮芥子氣N-氧化物、哌泊溴烷(pipobroman)、雷諾莫司汀(ranimustine)、替莫唑胺(temozolomide)、噻替哌、曲奧舒凡(treosulfan)及曲磷酰胺(trofosframide)。甚至更優(yōu)選地，烷基化劑為環(huán)磷酰胺。在此實施方式的另一特定方面中，以及與任何其他不矛盾的特定方面的組合中，抗癌劑為抗代謝物。優(yōu)選地，抗代謝物選自由以下物質(zhì)組成的組力比泰(Alimta)、Ara陽C、5-阿扎胞苷、卡培他濱(capecitabine)、卡莫氟(carmofur)、克拉屈濱(cladribine)、克羅拉濱(clofarabine)、阿糖胞苷(cytarabine)、胞嘧徒阿拉伯糖(cytosinearabinoside)、地西他濱(decitabine)、培美曲塞二鈉(disodiumpremetrexed)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依氟鳥氨酸(eflomithine)、依諾他濱(enocitabine)、乙炔基胞嘧啶核苷(ethynylcytidine)、氮尿苷(floxuridine)、氟達拉濱、5-氟尿嘧啶(5-FU)、吉西他濱、羥基脲、亞葉酸(leucovorin)、美法侖、6-巰嘌呤、甲胺喋呤、米托蒽酉昆(mitoxantrone)、6-M嘌呤、噴司他丁(pentostatin)、培利曲唑(pelitrexol)、雷替曲賽(raltitrexed)、核糖苷基(riboside)、甲胺喋呤、，巰嘌呤、奈拉濱(nelarabine)、洛拉曲克(nolatrexed)、奧弗非特(ocfosfate)、替加氟(tegafur)、6-硫鳥嘌呤(6-TG)、硫鳥嘌呤(tioguanine)、曲阿平(triapine)、三甲曲沙(trimetrexate)、阿糖腺苷(vidarabine)、長春新堿、長春瑞賓(vinorelbine)及UFT。更優(yōu)選地，抗代謝物選自5-氟尿嘧啶及吉西他濱。甚至更優(yōu)選地，抗代謝劑為吉西他濱。在此實施方式的另一特定方面中，以及與任何其他不矛盾的特定方面的組合中，抗癌劑為抗腫瘤抗生素。優(yōu)選地，抗腫瘤抗生素選自由以下物質(zhì)組成的組阿柔比星(aclarubicin)、放線菌素D、胺柔比星(amrubicin)、脂質(zhì)體蒽環(huán)霉素(a皿amydn)、阿德力霉素、博萊霉素、放線菌素D(dactinomycin)、柔紅霉素(daunorubicin)、多柔比星、依沙戸星(elsamitrucin)、表柔比星(epirubicin)、伽柔比星(galarubicin)、伊達比星(idarubicin)、絲裂霉素C、霉酚酸(mycophenolicacid)、奈莫柔比星(nemorubicin)、新制癌菌素(neocarzinostatin)、噴司^也丁(pentostatin)、培洛霉素(peplomycin)、比柔比星(pirarubicin)、蝴蝶霉素(rebeccamycin)、替馬拉美(stimalamer)、鏈佐星(streptozocin)、伐柔比星(valrubicin)及凈司他丁(zinostatin)。更優(yōu)選地，抗生素選自由以下物質(zhì)組成的組放線菌素D、博萊霉素、多柔比星及絲裂霉素-C。甚至更優(yōu)選地，抗腫瘤抗生素選自絲裂霉素-C及多柔比星。在此實施方式的另一特定方面中，以及與任何其他不矛盾的特定方面的組合中，抗癌劑為鉑類似物。優(yōu)選地，鉑類似物選自由以下物質(zhì)組成的組卡波鉑(伯爾定(Paraplatin))、順鉑、樂沙定(Eloxatin)(奧沙利鉑(oxaliplatin)，Sanofi)、伊銷(eptaplatin)、洛銷(lobaplatin)、奈達柏(nedaplatin)及賽曲鉑(satrplatin)。更優(yōu)選地，鉑類似物選自由以下物質(zhì)組成的組順鉑、卡波鉑及樂沙定(奧沙利鉑)。甚至更優(yōu)選地，鉬類似物為卡波鉑。在此實施方式的另一特定方面中，以及與任何其他不矛盾的特定方面的組合中，抗癌劑為拓撲異構(gòu)酶I抑制劑。優(yōu)選地，拓撲異構(gòu)酶I抑制劑選自由以下物質(zhì)組成的組BN-80915(Roche)、喜樹堿、CPT-ll、伊朵泰星、伊喜替康(exatecan)、伊立替康、盧比替康(orathecin)(Supergen)、SN-38及拓撲替康(topotecan)。更優(yōu)選地，拓撲異構(gòu)酶I抑制劑選自伊立替康、SN-38及拓撲替康。甚至更優(yōu)選地，拓撲異構(gòu)酶I抑制劑為伊立替康。在此實施方式的另一特定方面中，以及與任何其他不矛盾的特定方面的組合中，抗癌劑為拓撲異構(gòu)酶II抑制—J。優(yōu)選地，拓撲異構(gòu)酶II抑制劑選自安吖啶、依托泊苷、依托泊苷磷酸鹽及表柔比星(Ellence)。在此實施方式的另一特定方面中，以及與任何其他不矛盾的特定方面的組合中，抗癌劑包括一或多種選自由以下物質(zhì)組成的組的藥劑阿魯比星(aclarubicn)、胺萘非特(amonafide)、泊洛替康(belotecan)、喜樹堿、10-羥基喜樹堿、9-氨基喜樹堿、地弗莫替康(diflomotecan)、伊立替康HC1(Camptosar)、伊朵泰星、表柔比星(Ellence)、依托泊苷、依喜替康、吉馬替康(gimatecan)、勒托替康(lurtotecan)、米托蒽醌、比柔比星、吡仙酮(pixantrone)、盧比替康(rubitecan)、索布佐生(sobuzoxane)、SN-38、他弗賽特(tafluposide)、拓樸替康。優(yōu)選地，抗癌劑包括一或多種選自由以下物質(zhì)組成的組的藥劑喜樹堿、10-羥基喜樹堿、9-氨基喜樹堿、伊立替康HC1(Camptosar)、伊朵泰星、表柔比星(Ellence)、依托泊苷、SN-38、拓樸替康及其組合。在此實施方式的另一特定方面中，以及與任何其他不矛盾的特定方面的組合中，抗癌劑為有絲分裂抑制劑。優(yōu)選地，有絲分裂抑制劑選自由以下物質(zhì)組成的組多烯紫杉醇(Taxotere)、雌莫司汀、紫杉醇、雷佐生(razoxane)、紫杉酚、替尼泊苷(teniposide)、長春堿、長春新堿、長春地辛(vindesine)及長春瑞賓。更優(yōu)選地，有絲分裂抑制劑選自多烯紫杉醇、長春新堿、長春堿及紫杉酚。甚至更優(yōu)選地，有絲分裂抑制劑為多烯紫杉醇。在此實施方式的另一特定方面中，以及與任何其他不矛盾的特定方面的組合中，抗癌治療為輻射療法。在此實施方式的另一特定方面中，以及與任何其他不矛盾的特定方面的組合中，在投與一劑量的抗癌治療后1至48小時，更優(yōu)選地2至40小時，更優(yōu)選地4至32小時，更優(yōu)選地8至28小時，甚至更優(yōu)選地16至26小時，甚至更優(yōu)選地23至25小時，甚至更優(yōu)選地約24小時投與至少一劑量，優(yōu)選地所有劑量的至少20%，更優(yōu)選地所有劑量的至少50%，甚至更優(yōu)選地所有劑量的至少90%，甚至更優(yōu)選地各自單一劑量的(2R，Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2,6-二氫-lH-[l，2]二氮雜卓并[4，5,6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺、其醫(yī)藥學上可接受的鹽或溶劑合物或其混合物。在此實施方式的另一特定方面中，以及與任何其他不矛盾的特定方面的組合中，與一劑量的抗癌治療同時投與至少一劑量，優(yōu)選地所有劑量的至少20%，更優(yōu)選地所有劑量的至少50%，甚至更優(yōu)選地所有劑量的至少90%，甚至更優(yōu)選地各自單一劑量的(21^)-2-氨基-2-環(huán)己基^-(5-(1-甲基--2，6-二氫-11"1-[1，2]二氮雜卓并[4,5,6《(1]吲哚-8-基)乙酰胺、其醫(yī)藥學上可接受的鹽或溶劑合物或其混合物。本文所用的"同時"是指在之前或之后4小時內(nèi)，優(yōu)選地2小時內(nèi)，優(yōu)選地l小時內(nèi)，甚至更優(yōu)選地30分鐘、15分鐘或5分鐘內(nèi)。在此實施方式的另一特定方面中，以及與任何其他不矛盾的特定方面的組合中，該方法選擇性地靶向p53缺陷細胞，同時對正常(p53勝任)細胞具有最小的細胞毒性效應。在此實施方式的另一特定方面中，以及與任何其他不矛盾的特定方面的組合中，抗癌劑為抗血管生成劑。優(yōu)選地，抗血管生成劑選自由以下物質(zhì)組成的組EGF抑制劑、EGFR抑制劑、VEGF抑制劑、VEGFR抑制劑、TIE2抑制劑、IGF1R抑制劑、COX-II(環(huán)加氧酶II)抑制劑、MMP-2(基質(zhì)金屬蛋白酶2)抑制劑及MMP-9(基質(zhì)金屬蛋白酶9)抑制劑。優(yōu)選的VEGF抑制劑包括例如阿瓦斯丁(Avastin乂貝伐單抗(bevacizumab))，其為加州舊金山Genentech,Inc.藥廠的抗VEGF單株抗體。其他VEGF抑制劑包括CP-547,632(美國紐約PfizerInc.藥廠、AG13736(PfizerInc.藥廠)、ZD-6474(AstraZeneca藥廠)、AEE788(Novartis藥廠)、AZD-2171、VEGFTrap(Regeneron/Aventis藥廠)、凡塔藍尼(Vatalanib)(亦稱作PTK-787、ZK-222584:Novartis&ScheringAG藥廠)、Macugen(哌加他尼辛鈉(pegaptaniboctasodium)、NX-1838、EYE-001，藥廠PfizerInc./Gilead/Eyetech)、IM862(美國華盛頓州Kirkland的CytranInc.藥廠)及抗血管生成核糖核酸酶(angiozyme)，一種來自Ribozyme藥廠(科羅拉多州Boulder)及Chiron藥廠(加州Emeryville)的合成核糖核酸酶及其組合。適用于實踐本發(fā)明的VEGF抑制劑描述于美國專利第6,534，524號及第6，235,764號中，二者的全文均并入本文。其他VEGF抑制劑描述于例如WO99/24440、WO95/21613、WO99/61422、美國專利5,834,504、WO98/50356、美國專利5,883,113、美國專利5，886,020、美國專利5,792，783、美國專利6,653,308、WO99/10349、WO97/32856、WO97/22596、WO98/54093、WO98/02438、WO99/16755及WO98/02437中，所有文獻的全文均以引用的方式并入本文。優(yōu)選的EGRF抑制劑包括(但不限于)艾瑞沙(Iressa)(吉非替尼(gefitinib)，AstraZeneca藥廠)、特羅凱(Tarceva)(埃羅替尼(erlotinib)或OSI-774，OSIPharmaceuticalsInc.藥廠)、艾比特思(Erbitux)(西妥昔單抗(cetuximab)，ImclonePharmaceuticals,Inc.藥廠)、EMD-7200(MerckAG藥廠)、ABX-EGF(AmgenInc.及AbgenixInc.藥廠)、HR3(CubanGovernmentsIgA抗體(Erlangen-Nuremberg大學)、TP-38(IVAX)、EGFR融合蛋白、EGF-疫苗、抗-EGFr免疫微脂囊(HermesBiosciencesInc.藥廠)及其組合。甚至更優(yōu)選地，EGFR抑制劑選自艾瑞沙、艾比特思、特羅凱及其組合。其他抗血管生成劑包括阿曲汀(acitretin)、芬維A胺(fenretinide)、沙立度胺(thalidomide)、唑來膦酸(zoledronicacid)、血管抑制素、阿卩比啶(aplidine)、西蘭替特(cilengtide)、康柏斯達汀A-4(combretastatinA-4)、內(nèi)皮抑制素、鹵夫酮(halofuginone)、萊比馬斯特(rebimastat)、萊木瓦(removab)、萊利米德(Revlimid)、角鯊胺(squalamine)、優(yōu)克寧(ukrain)、維他星(Vitaxin)及其組合。在此實施方式的另一特定方面中，以及與任何其他不矛盾的特定方面的組合中，抗癌劑為pan激酶抑制劑。優(yōu)選的pan激酶抑制劑包括SutentTM(舒尼替尼(sunitinib))，其描述于美國專利第6,573,293號(美國紐約Pfizer,Inc藥廠)中。在此實施方式的另一特定方面中，以及與任何其他不矛盾的特定方面的組合中，抗癌劑選自由以下物質(zhì)組成的組panErb受體抑制劑或ErbB2受體抑制劑，諸如CP-724,714(Pfizer,Inc.)、Cl-1033(卡納替尼(canertinib),Pfizer,Inc.藥廠)、赫賽汀(Herceptin)(曲妥珠單抗(trastuzumab)，GenentechInc.藥廠)、奧米塔(Omitarg)(2C4、帕妥珠單抗(pertuzumab)，GenentechInc.藥廠)、TAK-165(Takeda)、GW-572016(羅纟內(nèi)法尼(lonafarnib)，GlaxoSm他Kline藥廠)、GW-282974(GlaxoSm他Kline藥廠)、EKB-569(Wyeth藥廠)、PKI-166(Novartis藥廠)、dHER2(HER2疫苗，Corixa及GlaxoSmithKline藥廠)、APC8024(HER2疫苗，Dendreon藥廠)、抗HER2/neu雙特異性抗體(Decof癌癥中心)、B7.her2.IgG3(Agensys藥廠)、ASHER2(ResearchInstituteforRadBiology&Medicine藥廠)、三官能性雙特異性抗體(慕尼黑大學)及mABAR-209(AronexPharmaceuticalsInc藥廠)及mAB2B-l(Chiron藥廠)及其組合。在此實施方式的另一特定方面中，以及與任何其他不矛盾的特定方面的組合中，抗癌劑選自Pfizer藥廠的MEKl/2抑制劑PD325901、ArrayBiopharm藥廠的MEK抑制劑ARRY-142886、BristolMyers藥廠的CDK2抑制齊ijBMS-387,032、Pfizer藥廠的CDK抑帝U劑PD0332991及AstraZeneca藥廠的AXD-5438及其組合。在此實施方式的另一特定方面中，以及與任何其他不矛盾的特定方面的組合中，抗癌劑選自賽利克西(celecoxib)(美國專利第5,466,823號)、伐地考昔(valdecoxib)(美國專利第5,633，272號)、帕瑞考昔(parecoxib)(美國專利第5,932,598號)、德拉昔布(deracoxib)(美國專利第5,521,207號)、SD-8381(美國專利第6,034，256號，實例175)、ABT-963(WO2002/24719)、羅非考昔(rofecoxib)(CAS第162011-90-7號)、如WO1998/03484中所公開的MK-663(或依托昔布(etoricoxib))、如WO1999/11605中所公開的COX-189(盧米羅可(Lumiracoxib))、BMS-347070(美國專利6,180,651)、NS-398(CAS123653-11-2)、RS57067(CAS17932-91-3)、4-甲基-2-(3,4-二甲基苯基)-l-(4-胺磺?；?苯基)-lH-吡咯、2-(4-乙氧基苯基)-4-甲基-1-(4-胺磺?；交?-1H-吡咯及美儂西康(meloxicam)。在此實施方式的另一特定方面中，以及與任何其他不矛盾的特定方面的組合中，抗癌劑選自格列森(Genasense)(奧莫森(augmerosen)，Genta藥廠)、盤尼圖單抗(Panitumumab)(Abgenix/Amgen藥廠)、澤娃靈(Zevalin)(Schering藥廠)、貝沙(Bexxar)(Corixa/GlaxoSmithKline藥廠)、阿倍瑞克(Abarelix)、力比泰、EPO906(Novartis藥廠)、迪斯德莫來(discodermolide)(XAA-296)、ABT-510(Abbott藥廠)、新伐司他(Neovastat藥廠)(Aetema藥廠)、伊扎泰靈(enzastaurin)(EliLilly藥廠)、風車子阻生素A4P(CombrestatinA4P)(Oxigene藥廠)、ZD-6126(AstraZeneca藥廠)、黃皮利多(flavopiridol)(Aventis藥廠)、CYC-202(Cyclacel藥廠)、AVE-8062(Aventis藥廠)、DMXAA(Roche/Antisoma藥廠)、諾拉曲特(Thymitaq)(Eximias藥廠)、特莫達(Temodar)(替莫唑胺，ScheringPlough藥廠)及萊維利德(Revilimd)(Celegene藥廠)及其組合。在此實施方式的另一特定方面中，以及與任何其他不矛盾的特定方面的組合中，抗癌劑選自CyPat(環(huán)丙孕酮乙酸酯)、赫特林(Histerelin)(赫特林乙酸酯)、皮萊奈西(Plenaixis)(阿倍瑞克藥物儲槽)、阿曲生坦(Atrasentan)(ABT-627)、撒塔鉬(Satraplatin)(JM-216)、塞洛米得(thalomid)(沙利竇邁(thalidomide))、塞拉托普(Theratope)、特米利芬(Temilifene)(DPPE)、ABI-007(紫杉醇)、Evista(雷諾昔酚(raloxifene))、阿他美坦(Atamestane)(Biomed-777)、Xyotax(聚谷氨酸紫杉醇(polyglutamatepaclitaxel))、塔吉汀(Targetin)(貝沙羅汀(bexarotine))及其組合。在此實施方式的另一特定方面中，以及與任何其他不矛盾的特定方面的組合中，抗癌劑選自Trizaone(替拉扎明(tirapazamine))、Aposyn(伊西舒德(exisulind))、奈瓦斯塔(Nevastat)(AE-941)、Ceplene(組氨酸二鹽酸鹽)、Orathecin(魯比特康(rubitecan))、維如禾lj金(Virulizin)、胃免疫素(Gastrimmune)(G17DT)、DX-8951f(伊喜替康甲磺酸鹽)、Onconase(豹蛙酶(ranpirnase))、BEC2(密突莫勃(mitumoab))、Xcytrin(莫牛寺沙、芬韋L(motexafmgadolini謹》及其組合。在此實施方式的另一特定方面中，以及與任何其他不矛盾的特定方面的組合中，抗癌劑選自CeaVac(CEA)、NeuTrexin(三甲曲沙葡萄糖醛酸鹽)及其組合。其他抗腫瘤劑可選自以下藥劑OvaRex(歐萊格單抗(oregovomab))、Osidem(IDM-l)及其組合。其他抗腫瘤劑可選自以下藥劑Advexin(ING201)、Tirazone(替拉扎明(tirapazamine))及其組合。其他抗腫瘤劑可選自以下藥劑RSR13(乙丙昔羅(efaproxira1))、Cotara(1311chTNT1/b)、NBI-3001(IL-4)及其組合。其他抗腫瘤劑可選自以下藥劑Canvaxin、GMK疫苗、PEG干擾素A、泰索普新(Taxoprexin)(DHA/紫杉醇)及其組合。本文所用的術(shù)語"烷基化劑"、"抗代謝物"、"抗腫瘤抗生素"、"鉑類似物"、"拓撲異構(gòu)酶i抑制劑"、"拓撲異構(gòu)酶n抑制劑"及"有絲分裂抑制劑"是指臨床上使用的抗癌劑種類(化學的或生物的)。這些術(shù)語各自包括屬于特定種類的目前臨床上使用的任何抗癌劑，以及尚未發(fā)明但將屬于特定種類的任何未來臨床抗癌劑。關于這些種類抗癌劑各自的實例，參見Physician'sCancerChemotherapyDrugManual,2006,ISBN0-7637-4019-5。關于這些種類抗癌劑各自的更詳盡清單，參見Martindale'sCompleteDrugReference,第34版。如本文所定義，術(shù)語"抗癌治療"是指"抗癌劑"或"輻射療法"。術(shù)語"抗癌劑"是指可用以治療癌癥的任何物質(zhì)(化學或生物物質(zhì))。術(shù)語"DNA損傷劑"是指直接或間接阻止哺乳動物體內(nèi)DNA的正常復制或正常功能的任何抗癌劑(化學或生物)。如本文所定義，"DNA損傷劑"的實例包括(但不限于)烷基化劑、抗代謝物、抗癌抗生素、鉑類似物、拓撲異構(gòu)酶I抑制劑及拓撲異構(gòu)酶II抑制劑。術(shù)語"與......組合"是指向有此需要的哺乳動物投與諸如(2尺^:)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2,6-二氫-lH-[l,2]二氮雜卓并[4,5,6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺、其醫(yī)藥學上可接受的鹽或溶劑合物或其混合物的治療性治療與投與諸如抗癌劑或輻射療法的另一種治療性治療的相對時序，該相對時序為那些通常用于組合療法醫(yī)藥領域的相對時序。具體而言，相對時序可為依序的或同時的。依序投藥的優(yōu)選的實施方式為首先投與抗癌劑或輻射療法，繼而在24小時內(nèi)投與(211,2)-2-氨基-2-環(huán)己基^-(5-(1-甲基-111-吡唑-4-基)-1-氧代-2,6-二氫-111-[1，2]二氮雜卓并[4,5,6-0(1]吲哚-8-基)乙酰胺、其醫(yī)藥學上可接受的鹽或溶劑合物或其混合物。術(shù)語"過度增殖性病癥"是指與正常調(diào)控機制無關的異常細胞生長(例如接觸抑制的損耗)，包括正常細胞的異常生長及異常細胞的生長。其包括(但不限于)腫瘤細胞(腫瘤)的異常生長(良性及惡性)。這些良性增殖性疾病的實例為牛皮癬、良性前列腺肥大、人類乳頭狀瘤病毒(HPV)及再狹窄。術(shù)語"癌癥"包括(但不限于)肺癌、骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚或眼內(nèi)黑素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門區(qū)癌、胃癌、結(jié)腸癌、乳癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內(nèi)膜癌、子宮頸癌、陰道癌、陰門癌、霍奇金氏病(Hodgkin'sDisease)、食道癌、小腸癌、內(nèi)分泌系統(tǒng)癌、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、淋巴球性淋巴瘤、膀胱癌、腎或輸尿管癌、腎細胞癌、腎盂癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌(CNS)、原發(fā)性CNS淋巴瘤、脊柱腫瘤、腦干神經(jīng)膠質(zhì)瘤、垂體腺瘤或一或多種前述癌癥的組合。在該方法的另一實施方式中，該異常細胞生長為良性增殖性疾病，包括(但不限于)牛皮癬、良性前列腺肥大或再狹窄。術(shù)語"以CHK1蛋白激酶活性介導"是指由CHK1蛋白激酶活性調(diào)控、調(diào)節(jié)或抑制的生物或分子過程。術(shù)語"醫(yī)藥學上可接受的鹽"是指化合物中可存在的酸性或堿性基團的鹽。性質(zhì)上為堿性的化合物能夠與各種無機酸及有機酸形成多種鹽。可用以制備此等堿性化合物的醫(yī)藥學上可接受的酸加成鹽的酸為那些形成非毒性酸加成鹽的酸，即含有藥理學上可接受的陰離子的鹽，諸如乙酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、酒石酸氫鹽、硼酸鹽、溴化物、乙二胺四乙酸鈣、樟腦磺酸鹽、碳酸鹽、氯化物、棒酸鹽、檸檬酸鹽、二氫氯酸鹽、乙二胺四乙酸鹽、edislyate、硫酸月桂酸鹽(estolate)、乙磺酸鹽、乙基琥珀酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡糖酸鹽、麩氨酸鹽、糖基對氨基苯胂酸鹽(glycollylarsanilate)、己基間苯二酚酸鹽、海卓胺、氫溴酸鹽、氫氯酸鹽、碘化物、異硫代羥酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、月桂酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、粘液酸鹽(mucate)、萘磺酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽(恩波酸鹽(embonate))、棕櫚酸鹽(palmitate)、泛酸鹽(pantothenate)、磷酸鹽/二磷酸鹽、聚半乳糖醛酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、次乙酸鹽、琥珀酸鹽、丹寧酸鹽、酒石酸鹽、茶氯酸鹽、甲苯磺酸鹽、triethiodode及戊酸鹽。優(yōu)選地，優(yōu)選的鹽包括磷酸鹽及葡糖酸鹽。術(shù)語"醫(yī)藥組合物"是指本文所述的一或多種化合物或其生理學/醫(yī)藥學上可接受的鹽或溶劑合物與其他化學組份，諸如生理學/醫(yī)藥學上可接受的載劑及賦形劑的混合物。醫(yī)藥組合物的目的在于便于向有機體投與化合術(shù)語"輻射療法"是指輻射用于控制惡性細胞的醫(yī)藥用途。術(shù)語"治療有效量"一般是指所投與的將在一定程度上緩解所治療病癥的一種或多種癥狀的化合物、其醫(yī)藥學上可接受的鹽或溶劑合物或其混合物的量。具體而言，當該術(shù)語用以描述組合療法時，"治療有效量"是指將l)增強諸如抗癌劑或輻射療法的另一種療法的治療效應，或2)與另一種療法組合以在一定程度上緩解所治療病癥的一或多種癥狀的特定療法的量。關于癌癥的治療，緩解所治療疾病的癥狀包括a)降低腫瘤尺寸；b)抑制(即在一定程度上減緩，優(yōu)選停止)腫瘤轉(zhuǎn)移；及C)在一定程度上抑制(即在一定程度上減緩，優(yōu)選停止)腫瘤生長。除非另有所指，否則如本文所用的術(shù)語"治療"意指逆轉(zhuǎn)、減輕、抑制應用該術(shù)語的病癥或病況或該病癥或病況的一種或多種癥狀的進程，或預防該病癥或病況或該病癥或病況的一或種多種癥狀。除非另有所指，否則如本文所用的術(shù)語"治療"還指治療作用，其中"治療"如上文剛所定義。具體實施例方式如僅在此部分中所用的術(shù)語"化合物1"是指(2尺^)-2-氨基-2-環(huán)己基^-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2,6-二氫-111-[1，2]二氮雜卓并[4，5，6^(1]吲哚-8-基)乙酰胺、其醫(yī)藥學上可接受的鹽或溶劑合物或其混合物；"MTD"是指最大耐受劑量；Q3dx4是指每3天一次總共4次治療的給藥時程；Qlwx3是指每周一次總共3次治療的給藥時程。已在各種活體外及活體內(nèi)系統(tǒng)中研究(2117)-2-氨基-2-環(huán)己基-^(5-(1-甲基-111-吡唑-4-基)-1-氧代-2，6-二氫-111-[1,2]二氮雜卓并[4,5,6-0(1]吲哚-8-基)乙酰胺以測定對抗其分子靶的效能、激酶選擇性、作用機制、PK/PD關系及抗腫瘤功效的化學增強作用。I.激酶選擇性(2R,Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-!^-(5-(1-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2，6-二氫隱lH-[l,2]二氮雜卓并[4，5,6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺為CHKl的有效ATP競爭性抑制劑。(2R,Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2,6-二氫-lH-[l,2]二氮雜卓并[4,5,6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺對抗CHKl(l-289)催化域的Ki值為0.49士0.29nM。以針對100種以上蛋白激酶的平板的生物化學激酶篩檢分析法評估(211^)-2-氨基-2-環(huán)己基-^(5-(1-甲基-1}1-吡唑-4-基)-1-氧代-2，6-二氫-11^[1,2]二氮雜卓并[4，5，6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺相對于Chkl的激酶選擇性。八種激酶展示所篩檢激酶的IC5o或Ki與CHKl催化域的Ki比率為100倍以下或約100倍。這些八種激酶為Aurora-A、FGFR3、Flt3、Fms(CSFlR)、Ret、VEGFR2、Yes及CHK2。(表l)對于選擇性考慮而言，在藥理學上與CHK1抑制劑最相關的激酶為那些瞬間間歇性抑制將影響細胞周期進程(例如CDK的有絲分裂激酶)、檢查點控制(例如CHK2、ATM、ATR)或作用于細胞凋亡路徑(例如AKT，p38)的激酶。因此，不認為VEGFR2、Fms/CSF1R、FGFR2、Flt3及Ret為相關的，因為需要持續(xù)抑制作用來從這些RTK引發(fā)可觀測的藥性。類似地，預期Yes激酶的瞬間抑制作用無用，因為Yes基因剔除小鼠不展現(xiàn)顯著表型。Aurom-A為相關激酶，但己發(fā)現(xiàn)酶分析法與細胞活性無良好相關性。在基于細胞的功能分析法中，(2R,Z》2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2,6-二氫-lH-[l,2]二氮雜卓并[4,5，6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺展示對Aurora激酶100倍以上的選擇性。最后，對CHK2的選擇性比率基本上等于100倍，且已觀測到在基于細胞的分析法或離體分析法中無跡象表明(2117)-2-氨基-2-環(huán)己基^-(5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-l-氧代-2，6-二氫-lH-[l，2]二氮雜卓并[4,5，6-cd]卩引哚-8-基)乙酰胺調(diào)節(jié)CHK2的活性。表l展示(2R,Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2,6-二氫-lH-[l，2]二氮雜卓并[4,5,6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺對所選擇激酶的IC5o或Ki值及所選激酶的IC5o或Ki與CHKl的Ki之間的比率。表l對所選激酶的IC50<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>II.在基于細胞的功能分析法中的細胞毒性增強效應檢査點介導的細胞周期停滯為對化療劑或輻射所誘發(fā)DNA損傷的典型反應。與如吉西他濱、伊立替康及多柔比星的常用化療劑組合時，(2R,Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2,6-二氫-m-[l,2]二氮雜卓并[4,5，6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺廢除由DNA損傷劑誘發(fā)的S及G2檢查點且增強細胞毒性。該檢查點廢除的活性及增強的細胞毒性活性表示對p53缺陷癌細胞系優(yōu)于p53勝任正常細胞的選擇性。檢查點廢除的特征為蘇氨酸-14及酪氨酸-15的去磷酸化及有絲分裂蛋白激酶CDKl的活化、提早有絲分裂、有絲分裂災變及最終細胞凋亡性細胞死亡。進行一系列實驗以便l)證實己廢除DNA損傷誘發(fā)的細胞周期檢查點；2)評估(2117)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-1-氧代-2，6-二氫-111-[1，2]二氮雜卓并[4,5,6-0^口引哚-8-基)乙酰胺與某些化療劑組合的化學增強活性及3)證明對p53缺陷癌細胞的選擇性。檢查點廢除活性組蛋白H3磷酸化分析法檢測進入有絲分裂的細胞且代表用以量測(21^)-2-氨基-2-環(huán)己基^-(5-(1-甲基-111-吡唑-4-基)-1-氧代-2,6-二氫-lH-[l,2]二氮雜卓并[4,5,6-cd]卩引哚-8-基)乙酰胺在廢除由喜樹堿誘發(fā)的G2檢查點中的細胞效能的基于細胞為的初級活體外分析法。由SerlO(進入有絲分裂的標記)上組蛋白H3磷酸化的增加量所測得的EC5o值為45nM。在不存在DNA損傷下，(2R,Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-^(5-(1-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2,6-二氫-m-[l,2]二氮雜卓并[4,5,6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺對細胞周期無影響。與吉西他濱組合時，流式細胞儀分析展示(2R，Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2,6-二氫-lH-[l，2]二氮雜卓并[4,5，6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺廢除吉西他濱所誘發(fā)的S相停滯。由(2R，Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2，6-二氫-lH-[l，2]二氮雜卓并[4,5，6-(:(1]吲哚-8-基)乙酰胺所誘發(fā)的3相細胞隨時間遞減的量相應于02-M及G。-Gi細胞群體的增加量，這表示細胞正進入有絲分裂且試圖再進入細胞周期。流式細胞儀分析證實，與單獨使用吉西他濱治療時相比，吉西他濱與(2R,Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-1-氧代-2，6-二氫-1H-[l，2]二氮雜卓并[4，5，6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺的組合治療中的細胞凋亡性細胞顯著增加?；瘜W增強作用在p53缺陷人類癌細胞系分析板中進行細胞存活分析法及MTT(溴化3-(4,5-二甲基噻唑2-基)-2,5-二苯基四銼鹽分析法)分析法，以判別(2R，Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2,6-二氫-lH-[l，2]二氮雜卓并[4,5,6-cd]n引哚-8-基)乙酰胺對于增強吉西他濱、伊立替康、卡波鉑、多柔比星及絲裂霉素C的細胞毒性效應的活性。與對照組(未經(jīng)處理組)細胞相比，單獨使用的(21^)-2-氨基-2-環(huán)己基-^(5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1-氧代-2，6-二氫-111-[1,2]二氮雜卓并[4，5,6《(1]吲哚-8-基)乙酰胺對細胞活力不產(chǎn)生顯著影響。(211^)-2-氨基-2-環(huán)己基-^(5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-l-氧代-2,6-二氫-lH-[l,2]二氮雜卓并[4,5，6-cd]卩引哚-8-基)乙酰胺與吉西他濱組合時，其誘發(fā)吉西他濱細胞毒性與單獨使用的吉西他濱時相比，顯著增強(89%)。(211,2)-2-氨基-2-環(huán)己基-^(5-(1-甲基-111-吡唑-4-基)-l-氧代-2,6-二氫-lH-[口]二氮雜卓并[4,5,6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺誘發(fā)大多數(shù)藥劑的穩(wěn)固且恒定的增強作用，其中在細胞系之間觀測到一些變化(表2)。在表2中，在不存在(2!^)-2-氨基-2-環(huán)己基-^(5-(1-甲基-1^吡唑-4-基)-1-氧代-2,6-二氫-111-[1,2]二氮雜卓并[4，5,6-0(1]吲哚-8-基)乙酰胺下，吉西他濱以不誘發(fā)毒性或誘發(fā)最小毒性(<10%)的濃度使用5nM(Colo205細胞)、10nM(MDA-MB-231、HT29及K562細胞)或20nM(PC-3細胞)。表2:所選細胞系的活體外組合細胞毒性細胞系HT29Colo205PC-3MDA-MB-231K562(腫瘤類型)(結(jié)腸癌)(結(jié)腸癌)(前列腺癌)(乳癌)(白血病)IC50(MM)a1.81.31.61.40.42OTSIb8.51413.22,19.3DNA損傷劑PF50C吉西他濱911.312.23.65.6SN-383.72.11.32.41.9卡波鉑35.43.12.551.9多柔比星2.2U1.52.251,1絲裂霉素c3.75.3NDd1.2NDCa(211,2)-2-氨基-2-環(huán)己基-^(5-(1-甲基-111-吡唑-4-基)-1-氧代-2,6-二氫-1H-[l，2]二氮雜卓并[4,5,6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺是在不存在另一種細胞毒性劑下使用。b0丁31(靶上選擇性指數(shù))是以(21^)-2-氨基-2-環(huán)己基^-(5-(1-甲基-111-吡唑-4-基)-l-氧代-2，6-二氫-lH-[l,2]二氮雜卓并[4,5，6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺的IQo對組合治療的IQ。來計算。ePF5。(增強因子5。)是以IC5o(單獨的細胞毒性劑)/IC5o(組合治療)來計算。(211，2)-2-氨基-2-環(huán)己基-1^-(5-(1-甲基-111-吡唑-4-基)-1-氧代-2，6-二氫-lH-[l,2]二氮雜卓并[4,5,6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺是以8xEC5Q(360nM)用于除K-562細胞以外的所有細胞系中，在K-562中其是以4xECso(180nM)使用。d未經(jīng)測定；在這些分析法中，曲線分布使得無法計算精確的PFso。對p53缺陷細胞的選擇性預期(2R,Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-^(5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-l-氧代-2，6-二氫-lH-[l,2]二氮雜卓并[4,5,6-cd]卩引哚-8-基)乙酰胺與針對DNA的化學療法組合會選擇性地靶向p53缺陷癌細胞，同時對正常(p53勝任)細胞具有最小的細胞毒性效應。為評估(2R,Z)-2-氨基-2-環(huán)己基_^(5-(1-甲基-111-吡唑-4-基)-1-氧代-2，6-二氫-111-[1,2]二氮雜卓并[4，5,6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺與化療劑組合對正常細胞的細胞毒性效應，于HUVEC細胞中進行細胞存活分析法。(2R，Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2,6-二氫-lH-[l，2]二氮雜卓并[4，5,6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺與吉西他濱或喜樹堿組合使用，這二者均以誘發(fā)最小細胞毒性(<10%)的固定濃度使用。組合中最高濃度(12xEC5。，540nM)的(2R,Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2，6-二氫-lH-[l，2]二氮雜卓并[4，5,6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺與單獨的吉西他濱或喜樹堿相比分別引起31.2%或21.7%的細胞殺傷增加。HUVEC細胞中由組合治療誘發(fā)的細胞毒性效應與腫瘤細胞中相同治療誘發(fā)的細胞毒性相比可忽略不計。(211^)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2,6-二氫-lH-[l，2]二氮雜卓并[4，5，6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺與化學療法組合在p53勝任非腫瘤細胞中誘發(fā)的最小毒性可作為證據(jù)證明其對p53缺陷癌細胞的選擇性及于正常細胞中具有最小不良效應的可能性。還在被含有p53野生型或p53突變體的質(zhì)體瞬間轉(zhuǎn)染的HTC116細胞(人類結(jié)腸癌)中進行細胞存活分析法。在突變p53HCT116細胞中，(2R,Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2,6-二氫-lH-[l,2]二氮雜卓并[4,5，6-cd]B引哚-8-基)乙酰胺與吉西他濱的組合與單獨的吉西他濱相比誘發(fā)44%的細胞生長抑制作用，而在野生型p53HCT116細胞中，相同組合治療與單獨的吉西他濱相比僅誘發(fā)15%的細胞生長抑制作用。這些結(jié)果證實p53缺陷癌細胞比其p53勝任對應物更易受Chkl抑制作用的損害。III.活體內(nèi)研究中的化學增強效應于HT29及Colo205人類結(jié)腸癌異種移植物中進行(2R，Z)-2-氨基-2-環(huán)己基_^(5-(1-甲基-111-吡唑-4-基)-1-氧代-2，6-二氫-111-[1,2]二氮雜卓并[4,5,6-cd]B引哚-8-基)乙酰胺與細胞毒性劑的組合研究。實驗1至39是在小鼠異種移植物中進行。實驗40-42是在大鼠異種移植物中進行。具體而言，伊立替康組合研究是在HT29及Colo205中進行。吉西他濱組合研究是在Colo205中進行。多烯紫杉醇組合研究是在Colo205中進行。在以上所有組合研究中都表現(xiàn)出(2R,Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2,6-二氫-lH-[l,2]二氮雜卓并[4，5,6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺的化學增強作用。吉西他濱和伊立替康為已知的能誘發(fā)檢查點活化及隨后的S/G2M相停滯的針對DNA的細胞毒素。(21^)-2-氨基-2-環(huán)己基-^(5-(1-甲基-11^-吡唑-4-基)-l-氧代-2，6-二氫-lH-[l,2]二氮雜卓并[4,5，6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺一般是在吉西他濱或伊立替康先前給藥后24小時給藥。多烯紫杉醇為抗有絲分裂劑，最近發(fā)現(xiàn)其具有CHK1在有絲分裂檢査點中的新穎功能。(2R,Z:>-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2,6-二氫-lH-[l,2]二氮雜卓并[4,5，6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺與多烯紫杉醇同時給藥。在各自的這些研究中，(2R,Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2，6-二氫-lH-[l，2]二氮雜卓并[4,5,6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺在乙酸鈉及4。/。右旋糖/水溶液中以5mL/kg給藥。結(jié)果總結(jié)于表3中。表3:抗腫瘤活性的活體內(nèi)化學增強作用<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>表3中所用的"ExpNo."是指實施例編號；"AmtA"是指每次給藥投與異種移植物的細胞毒性劑的量；"AmtB"是指每次給藥投與異種移植物的(2尺^)-2-氨基-2-環(huán)己基->^(5-(1-甲基-111-吡唑-4-基)-1-氧代-2,6-二氫-111-[1，2]二氮雜卓并[4,5,6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺的量；。/。TGI(腫瘤生長抑制)百分比以100x[l-(TVrTvi)經(jīng)治療/(TVrTvO載劑]計算，其中TVf及Tvj分別為最終劑量+2天及一組的初始平均腫瘤體積；％potenTGI(增強TGI)百分比以100x[1-(1^^1\)組合/(1^^1>0單獨的細胞毒性劑]計算，其中TVf及Tvi分別為最終劑量+2天及一組的初始平均腫瘤體積；生長延遲以達到雙重加倍(800mm"的治療-載劑(T-C)的中值天數(shù)來計算；％TTPER(時間與進程增強的比率)百分比以[延遲(組合)/延遲(單獨的細胞毒性劑)xl00-100]]計算。在ExpNo.1至17中，(若合適)伊立替康或吉西他濱是根據(jù)Q3dx4經(jīng)腹膜內(nèi)(IP)給藥，(2117)-2-氨基-2-環(huán)己基-^(5-(1-甲基-111-吡唑-4-基)-1-氧代-2，6-二氫-lH-[l,2]二氮雜卓并[4，5，6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺是根據(jù)Q3dx4于伊立替康或吉西他濱后24小時開始經(jīng)IP給藥。在ExpNo.18至25中，多烯紫杉醇與(2R，Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2，6-二氫-lH-[l,2]二氮雜卓并[4,5,6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺是根據(jù)Qlwx3時程同時經(jīng)腹膜內(nèi)(IP)給藥。在Exp.25中，(2R，Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2,6-二氫-lH-[l,2]二氮雜卓并[4,5，6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺是以120mg/kg的總劑量給藥兩個周期。在ExpNo.26至35中，伊立替康是根據(jù)Q3dx4經(jīng)腹膜內(nèi)(IP)給藥，且(2R,Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2,6-二氫-lH-[1，2]二氮雜卓并[4，5,6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺是根據(jù)Q3dx4于伊立替康或吉西他濱后24小時開始經(jīng)IP給藥。在ExpNo.36-39中，伊立替康是以Qlwx3經(jīng)IP給藥，且(2R,Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2,6-二氫-lH-[l,2]二氮雜卓并[4，5,6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺是在伊立替康投與后24及72小時每周兩次經(jīng)IP給藥歷時三周。在ExpNo.40至42中，伊立替康是根據(jù)Q3dx4經(jīng)IP給藥，且(2R，Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2,6-二氫-lH-[l，2]二氮雜卓并[4,5,6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺是根據(jù)Q3dx4于伊立替康投與后24小時開始通過兩小時IV輸液給藥。根據(jù)發(fā)生10%至20%的平均體重損耗來評估，確定(2R,Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基—m-吡唑-4-基)-l-側(cè)氧基-2，6-二氫-lH-[l,2]二氮雜卓并[4,5,6-cd]卩引哚-8-基)乙酰胺的MTD為40mg/kgQ3dx4或60mg/kgQlwx3。IV.化合物1的放射線致敏效應的活體內(nèi)研究將雌性Balb/c裸小鼠(6周齡)于右后肢上用PBS中的3xl(f個A431細胞接種且使腫瘤生長至平均腫瘤體積為約IOOmm3。將小鼠隨機分為每組10個動物的小組。接著使未經(jīng)麻醉的小鼠經(jīng)受輻射。使用來自Varian2100LinearAccelerator(PaloAlto，CA)的6MeV高劑量率電子束傳遞輻射。所用的劑量率為20Gy/min。電子束的深度-劑量特征為使得在10mm的組織深度內(nèi)獲得±5%以內(nèi)的劑量均一性。其足以覆蓋所有經(jīng)輻射的腫瘤。穿過連接至6mm厚Perspex薄片的3mm厚鉛薄片切割的25mm正方形對準器輻射腫瘤。腫瘤與對準器(Perspex)的表面下側(cè)之間的距離大約為25mm。將裝置支撐于加熱至37"C的平板上以降低小鼠體內(nèi)的熱損耗效應。計算輻射劑量且由一資深輻射物理學家計算并操作。如上所述于第0-4天以2、3或4Gy的每日部分進行放射線療法。制備pH緩沖水溶液形式的(2R，Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2,6-二氫-lH-[l，2]二氮雜卓并[4,5,6-cd]B引哚-8-基)乙酰胺(化合物l)。溶液是在給藥前即刻制備，且于放射線療法后即刻于第0-4天以15mg/kg經(jīng)腹膜內(nèi)注射給藥(15mg/kg)。不含化合物l的上述溶液被認為是"藥物載齊IJ"或"載劑"。以相同時程以每10克體重0.1毫升給予藥物載劑。將各組小鼠僅以化合物l、僅以輻射或以化合物l與輻射的組合進行處理。當腫瘤體積比率(TVR)達到或超過4時，或者如果小鼠于已損耗15%以上的其第O天基線體重，則處死動物。腫瘤體積比率被定義為特定時間的腫瘤體積與基線腫瘤體積(即第O天的腫瘤體積)之間的比率。在第0天至第11天且甚至進一步至第23天，每周三次量測腫瘤體積。使用電子測徑規(guī)測量腫瘤體積且以長度/2><寬度2來計算。計算各組小鼠的平均腫瘤體積。表4示出未經(jīng)處理、經(jīng)藥物載劑、化合物l、輻射或化合物l與輻射的組合處理的各組小鼠的平均腫瘤體積。表4A431小鼠異種移植物中與化合物l組合的輻射療法的抗腫瘤功效<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>表5示出基于表4所示腫瘤體積數(shù)據(jù)的腫瘤生長延遲與增強的比率。腫瘤生長延遲被定義為腫瘤達到4的TVR的天數(shù)減去載劑對照腫瘤達到相同尺寸的時間的中值時間。標準化生長延遲被定義為經(jīng)組合處理的小鼠腫瘤達至U4的TVR的時間(以天數(shù)計)減去僅以藥物處理的小鼠腫瘤達到相同尺寸的時間(以天數(shù)計)。增強比率被定義為經(jīng)藥物與輻射處理的小鼠體內(nèi)的標準化腫瘤生長延遲除以僅經(jīng)輻射處理的小鼠體內(nèi)的腫瘤生長延遲。表5:化合物1于A431腫瘤異種移植物中的放射線致敏效應的活體內(nèi)研究<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>權(quán)利要求1.一種治療哺乳動物癌癥的方法，包括向需要治療的哺乳動物給予治療有效量的(2R，Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1-氧代-2，6-二氫-1H-[1，2]二氮雜卓并[4，5，6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺、其醫(yī)藥學上可接受的鹽或溶劑化物、或其混合物與治療有效量的選自抗癌劑和輻射療法的抗癌治療組合。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述(2R,Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(1-甲基-111-吡唑-4-基)-1-氧代-2，6-二氫-111-[1,2]二氮雜卓并[4,5,6《(1]吲哚-8-基)乙酰胺、其醫(yī)藥學上可接受的鹽或溶劑化物、或其混合物，增強了所述抗癌治療的治療效應。3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述方法表現(xiàn)出(2R,Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2,6-二氫-lH-[l，2]二氮雜卓并[4,5,6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺、其醫(yī)藥學上可接受的鹽或溶劑化物、或其混合物與所述抗癌治療具有協(xié)同治療效應。4.如權(quán)利要求1_3中任一項所述的方法，其中所述癌癥選自結(jié)腸癌、前列腺癌、乳癌及白血病。5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述癌癥為結(jié)腸癌。6.如權(quán)利要求l一5中任一項所述的方法，其中所述抗癌治療為治療有效量的抗癌劑。7.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述抗癌劑選自由以下物質(zhì)組成的組放線菌素D、阿德力霉素、安吖啶、am-C、9-(3-D-阿糖基-2-氟腺嘌呤、BCNU、博萊霉素、喜樹堿、卡波鉑、2-氯-2-去氧腺苷、CPT-ll、環(huán)磷酰胺、多烯紫杉醇、多柔比星、伊朵泰星)、依托泊苷、氟達拉濱、5-氟尿嘧啶(5-FU)、吉西他濱、HU-Gemzar、伊立替康、甲胺喋呤、6-M嘌呤、絲裂霉素-C、紫杉醇、順鉑、SN-38、紫杉酚、噻替哌、6-硫鳥嘌呤、三甲曲沙長春堿、長春新堿及VP-16。8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所述抗癌劑選自由以下物質(zhì)組成的組吉西他濱、伊立替康、多烯紫杉醇、SN-38、卡波鉑、多柔比星及絲裂霉素C。9.如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述抗癌劑為吉西他濱。10.如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述抗癌劑為伊立替康。11.如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述抗癌劑為多烯紫杉醇。12.如權(quán)利要求1_5中任一項所述的方法，其中所述抗癌劑為DNA損傷劑。13.如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述DNA損傷劑選自烷基化劑、抗代謝物、抗腫瘤抗生素、鉑類似物、拓撲異構(gòu)酶I抑制劑及拓撲異構(gòu)酶II抑制劑。14.如權(quán)利要求1_5中任一項所述的方法，其中所述抗癌劑為有絲分裂抑制劑。15.如權(quán)利要求l一5中任一項所述的方法，其中至少一劑量的(2R,Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2,6-二氫-lH-[l,2]二氮雜卓并[4,5,6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺、其醫(yī)藥學上可接受的鹽或溶劑化物、或其混合物，是在先進行所述抗癌治療后1至48小時給藥。16.如權(quán)利要求l一5中任一項所述的方法，其中至少一劑量的(2R，Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(l-甲基-lH-吡唑-4-基)-l-氧代-2,6-二氫-lH-[l,2]二氮雜卓并[4,5,6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺、其醫(yī)藥學上可接受的鹽或溶劑化物、或其混合物的給藥，與所述抗癌治療同時進行。全文摘要本發(fā)明涉及(2R，Z)-2-氨基-2-環(huán)己基-N-(5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1-氧代-2，6-二氫-1H-[1，2]二氮雜卓并[4，5，6-cd]吲哚-8-基)乙酰胺(化合物1)，其醫(yī)藥學上可接受的鹽或溶劑合物或其混合物與抗癌劑或輻射療法組合的新穎組合療法。文檔編號A61K31/337GK101415417SQ200780012181公開日2009年4月22日申請日期2007年3月26日優(yōu)先權(quán)日2006年4月4日發(fā)明者亞歷山卓·比拉西那,肯納·里恩·安德瑞斯申請人:輝瑞產(chǎn)品公司