專利名稱：：呋喃二烯及其衍生物在制備治療癌癥的藥物中的應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及呋喃二烯及其衍生物在制備治療癌癥的藥物中的應用，特別涉及在治療宮頸癌、喉癌、白血病、腦膠質瘤、腹水癌、肺癌、胃癌、前列腺癌和肝癌的藥物中的應用。
背景技術：
：呋喃二烯是莪術油中的主要成分，本發(fā)明人經過大量的實驗研究，發(fā)明了呋喃二烯、呋喃二烯衍生物在制備治療癌癥的藥物中的應用。
發(fā)明內容本發(fā)明提供了呋喃二烯在制備治療癌癥的藥物中的應用。本發(fā)明提供了呋喃二烯衍生物在制備治療癌癥的藥物中的應用。本發(fā)明提供了以呋喃二烯為活性成分的用于治療癌癥的藥物(實例見中國專利申請CN200710128906.1中說明書所述的試驗例15)。本發(fā)明所述的呋喃二烯可以含有呋喃二烯的中藥材為原料，采用超臨界C02法萃取，經分離提取而得，其別名為蓬莪術環(huán)二烯，英文名為Fumnodiene，結構式為<formula>complexformulaseeoriginaldocumentpage3</formula>本發(fā)明提供的呋喃二烯衍生物為中國專利申請CN200510043886.9所述的化合物。本發(fā)明所述的呋喃二烯及其衍生物在用于上述用途時，其給藥量為150-800mg。本發(fā)明提供的以呋喃二烯為活性成分的用于治療癌癥的藥物，可以以片劑、滴丸、膠囊、軟膠囊、乳劑、栓劑、注射用乳劑或凍干粉針劑的形式存在，均采用常規(guī)方法制備而成。具體實施方式-試驗例1:呋喃二烯和2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯對人早幼粒白血病HL-60、胃癌SGC-7卯1、前列腺癌PC3的作用(MTT法)。1、材料呋喃二烯按CN200510043886.9中制備例1方法制備；2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯按CN200510043886.9中制備例5方法制備；p-欖香烯由大連醫(yī)藥科學研究所提供，純度大于98%。實驗瘤株體外培養(yǎng)細胞人早幼粒白血病HL-60、胃癌SGC-7901、前列腺癌PC3、肝癌HePG2均購于中國科學院上海細胞庫。2、方法進行體外細胞增殖抑制實驗取對數生長期的人早幼粒白血病HL-60、胃癌SGC-7901、前列腺癌PC3和肝癌HePG2細胞株(其中貼壁細胞用消化液消化)，臺盼藍排染法計數活細胞數，其中HL-60、SGC-7901和HePG2用新鮮RPMI1640培養(yǎng)液，PC3用新鮮DMEM培養(yǎng)液，調整細胞密度為lxloMVml，于96孔培養(yǎng)板內，每孔加細胞懸液20(HiL(每孔約2><104個)。在37'C、體積分數為5%的(:02飽和濕度培養(yǎng)箱中將HL-60培養(yǎng)lh后，SGC-7卯1、PC3、HePG2培養(yǎng)24h后加藥處理。呋喃二烯、2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯和P-欖香烯均以DMSO為溶劑，配制成5檔劑量組，每孔加入不同濃度的試液，空白對照組不加任何試液，每檔樣品設三復孔。在37"C、體積分數為5%的C02飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h后，每孔加入8pLMTT液，繼續(xù)培養(yǎng)4h后每孔加入100fxLDMSO，置搖床搖勻至結晶全部溶解，選用SynergyHT酶聯儀于570630nm處測各孔吸光度值，將各加試液孔均值(T)與對照孔值(C)比較，以下列公式計算出各濃度組的百分抑制率[10%=(1-17(:)乂100%],并以此計算樣品的回歸方程，再求出各樣品的IC5o值。該試驗重復3次以上，重復性良好。結果見表l。表l數據說明呋喃二烯、2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯對人早幼粒白血病HL-60、胃癌SGC-7901、前列腺癌PC3、肝癌HePG2的作用均強于p-欖香烯。表l呋喃二<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>試驗例2:呋喃二烯和2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯對人早幼粒白血病HL-60、人宮頸癌Hela、人喉癌Hep-2的作用(SRB法)。1材料按CN200510043886.9中制備例1方法制備；2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯按CN200510043886.9中制備例5方法制備；[3-欖香烯大連醫(yī)藥科學研究所提供，純度大于98%。實驗瘤株體外培養(yǎng)細胞人早幼粒白血病HL-60、人宮頸癌Hela、人喉癌Hep-2細胞，均購于中國科學院上海細胞庫。2方法進行體外細胞增殖抑制實驗采用SRB法測定呋喃二烯、2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯對3種人癌細胞增殖的體外抑制作用。分別取對數生長期的HL-60、Hela、Hep-2的人癌細胞，臺盼藍排染法計數活細胞數，HL-60用新鮮的RPMI1640培養(yǎng)液調整細胞密度為3.0xl05cell/mL，Hela和Hep-2用新鮮的RPMI1640培養(yǎng)液調整細胞密度為1.0xl05cell/mL，以每孔100|iL接種于96孔板內。在37°C、體積分數5。/。的C02飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后加藥處理。呋喃二烯、2-(吡啶-2-甲酰基)呋喃二烯和P-欖香烯以DMSO為溶劑，配制成5檔劑量組，每孔加入不同濃度的試液，空白對照組不加任何試液，每檔樣品設三復孔。藥物處理細胞48h后，細胞HL-60每孔各加入50^L、4'C預冷的體積分數80%的三氯醋酸，使其最終達到體積分數為16%。細胞Hela、Hep-2每孔各加入50pL，4'C預冷的體積分數50%的三氯醋酸，使其最終達到體積分數為10%。4"C冰箱固定細胞lh后，倒掉固定液，用去離子水沖洗96孔板5遍，空氣干燥。經三氯醋酸固定后的細胞加入體積分數0.4。/。的SRB(磺酰羅丹明B)，每孔100)iL，室溫染色30min。用體積分數1%的醋酸沖洗96孔板5遍，空氣干燥。最后加入10mmol丄"Tris堿，每孔150pL，在微量振蕩器上振蕩15min，直至染料全部溶解，用酶標儀在540nm處測每孔溶液的吸光度值(A值)。將各加試液孔均值(T)與對照孔值(C)比較，以下列公式計算出各濃度組的百分抑制率[IC%=(1-T/C)xl00%]，并以此計算樣品的回歸方程，再求出各樣品的IC5o值。該試驗重復3次以上，重復性良好。結果見表2。表2數據說明呋喃二烯、2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯對人喉癌Hep-2、人宮頸癌Hda、人早幼粒白血病HL-60細胞的體外增殖抑制作用顯著高于參照組P-欖香烯。數據結果還表明呋喃二烯、2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯對三種腫瘤細胞的體外增殖抑制作用強弱依次為人宮頸癌Hela細胞、人喉癌Hep-2細胞、人早幼粒白血病HL-60細胞。MTT法和SRB法試驗結果都證實呋喃二烯、2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯對人早幼粒白血病HL-60細胞有很強的體外增殖抑制作用。表2呋喃二烯、2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯體外抗癌的IC鄰值(SRB法)腫瘤細胞類型分組回歸方程相關系數ic50(Y)(r)(Hg/ml)Hela呋喃二烯63.104+12.141lnx0.99330.3463.506+10.112lnx0.98680.262陽(吡啶-2-甲酰基)呋喃.二烯56.502+10.147lnx0.99140.5360.113+14.412lnx0.98770.49P-欖香烯34.576+10.678lnx0.93524.2338.775+10.005lnx0.98553.07Hep-2呋喃二烯50.274+13.096lnx0.98510鄰50.52+40.34lnx0.99480.992-(吡啶-2-甲?；?呋喃-二烯21.593+33.548lnx0.98422.3329.527+34.45lnx0.98421.82P-欖香烯22.195.卄14.515lnx0.98566.7921.147-f15.645lnx0.98776.32HL-60呋喃二烯13.334-f22.223lnx0.98335.216.475+20.359lnx0.96458.482國(吡啶-2-甲酰基)呋喃二二烯9.3284-21.365lnx0.97916.718.763+-20.1161nx0.96247.77(3-欖香烯-19.569+20.334lnx0.935230.61-35.102+22.784lnx0.981941.89試驗例3:呋喃二烯、2-(吡啶-2-甲酰基)呋喃二烯脂肪乳注射劑對小鼠宮頸癌U14實體瘤模型、人喉鱗狀細胞癌細胞株Hep-2細胞荷瘤裸鼠模型的生長抑制作用。1藥品呋喃二烯和2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯的脂肪乳注射劑的制備見制備例8，欖香烯乳注射液購于大連金港制藥有限公司，批號940828。2動物BALB/c2nu裸鼠，購自山東醫(yī)科大學試驗動物中心，56周齡，雌雄各半，體重平均(21.27士0.80)g。無特定病原體條件飼養(yǎng)，保持一定濕度、溫度(2528。C)。所用食物、水、飼養(yǎng)籠和墊料均經高壓消毒。昆明小鼠由山東綠葉制藥有限責任公司動物中心提供(許可證號SYXK(魯)20030020)，體重1820g。雌雄皆可，每次實驗使用同一性別。動物數實驗組、參照組及陰性對照組昆明小鼠均各為10只。3瘤源小鼠宮頸癌U14、人喉鱗狀細胞癌Hep-2細胞株購于中國科學院上海細胞庫。4劑量設置小鼠宮頸癌U14模型呋喃二烯和2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯的脂肪乳注射劑100(qd)、50(qd)、10(qd)和50(bid)mg/kg。參照組欖香烯乳注射液腹腔注射100(qd)mg/kg。人喉鱗狀細胞癌細胞株Hep-2細胞荷瘤裸鼠模型呋喃二烯和2-(吡啶-2-甲酰基)呋喃二烯的脂肪乳注射劑100(qd)、50(qd)、10(qd)mg/kg和50(bid)mg/kg。參照組欖香烯乳注射液腹腔注射100(qd)mg/kg。5給藥方案小鼠宮頸癌U14模型以劑量設置呋喃二烯和2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯的脂肪乳注射劑小鼠腹腔100、50和10mg/kg注射給藥，每天1次，連續(xù)9d，共給藥9次。強化給藥分別采用劑量設置的的中劑量靜脈輸注輸液小鼠腹腔注射給藥，每天2次，連續(xù)9d，共給藥18次。參照組欖香烯乳注射液小鼠腹腔注射100mg/kg注射給藥，每天腹腔給藥1次，共給藥9次。人喉鱗狀細胞癌細胞株Hep-2細胞荷瘤裸鼠模型以劑量設置呋喃二烯和2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯的脂肪乳注射劑小鼠腹腔IOO、50和10mg/kg注射給藥，每3天腹腔給藥l次，共給藥8次。強化給藥分別采用劑量設置的呋喃二烯和2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯的脂肪乳注射劑的中劑量靜脈輸注輸液小鼠腹腔注射給藥，每3天腹腔給藥，每天2次，共給藥16次。以劑量設置參照組欖香烯乳注射液小鼠腹腔注射100mg/kg注射給藥，每3天腹腔給藥1次，共給藥8次。6實驗對照陰性對照組給予實驗組高劑量等體積等濃度的相應溶劑，給藥方案同欖香烯乳注射液。7實驗方法無菌抽取傳代第8天的宮頸癌U14小鼠的腹水，以無菌生理鹽水調整細胞數在8><106個/ml,于每鼠右側腋窩皮下接種0.21111，24小時后，依據給藥方案給藥，停藥后24h稱重，處死小鼠，剝離瘤塊，稱量瘤重，計算腫瘤抑瘤率。以t檢驗進行統(tǒng)計學處理。取體外培養(yǎng)對數生長的喉癌Hep-2細胞，每只裸鼠于右耳后下皮下種植1x1(^個/mL喉癌Hep-2細胞懸液0.2ml使之生長，建立喉癌裸鼠動物模型。觀察接種部位液體吸收、腫瘤生長過程及裸鼠狀況，待腫瘤生長25d，至直徑〉lcm時進行治療。依據給藥方案給藥，每3天稱量鼠重，重新調整給藥劑量，按小鼠體重給藥。分別于l、4、7、10、13、16、19和22d給藥。停藥后3d，處死裸鼠，剝離瘤塊，稱量瘤重，計算腫瘤抑瘤率。以t檢驗進行統(tǒng)計學處理。按下列公式計算腫瘤抑制率抑瘤率％=(l-實驗組平均瘤重/對照組平均瘤重)xl00%。8結果(1)小鼠宮頸癌U14模型的抑制率呋喃二烯和-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯脂肪乳注射劑輸液樣品的劑量為100mg/kgipx9qd、50mg/kgipx9qd及10mg/kgipx9qd，試驗結果分別為52.16、54.68，41.44、44.12,36.00、34.25%;47.23、45.42，38.45、37.56，27.36、30.15%;呋喃二烯和2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯采用中劑量50mg/kgivx9bid強化方案給藥，試驗結果分別為67.12、68.21，53.44、50.66%。詳細數據見表3。(2)人喉鱗狀細胞癌Hep-2模型的抑制率呋喃二烯和2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯脂肪乳注射劑兩個乳輸液樣品的劑量100mg/kgipx9qd、50mg/kgipx9qd及10mg/kgipx9qd試驗結果分別為56.33、54.35，45.01、40.71，30.30、28.99%;50.67、53.10，40.22、38.95，25.93、23.35%。呋喃二烯、2-(吡啶-2-甲酰基)呋喃二烯采用中劑量50mg/kgivx9bid強化方案給藥，試驗結果分別為60.54、63.21，56.87、54.25%。詳細數據見表4。呋喃二烯和2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯脂肪乳注射劑對U14小鼠宮頸癌及人喉癌Hep-2裸鼠兩個模型試驗結果顯示呋喃二烯和2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯脂肪乳注射劑具有良好的抗腫瘤作用，三個治療劑量間具有量效關系，采用同劑量但不同給藥方案時，每天兩次腹腔給藥較一次腹腔給藥效果好，甚至超過高劑量組。呋喃二烯脂肪乳注射劑抑癌效果明顯優(yōu)于呋喃二烯衍生物脂肪乳注射劑。在同劑量情況下與同類型的欖香烯乳注射液相比，呋喃:烯和2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯脂肪乳注射劑的抗宮頸癌的抑制率明顯高于欖香烯乳注射液。表3呋喃二烯、2-(B比啶-2-甲酰基)呋喃二烯脂肪乳注射劑對小鼠U14宮頸癌實體瘤型的療效試驗<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>"P值〈0.01與陰性對照組相比表4呋喃二烯、2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯脂肪乳注射劑對人喉癌裸鼠模型的療效試驗<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>"P值〈0.01與陰性對照組相比試驗例4:呋喃二烯和2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯脂肪乳注射劑對顱內接種的小鼠神經膠質瘤G-422及B16小鼠黑色素瘤實驗肺轉移的抗腫瘤療效。1藥品呋喃二烯、2-(吡啶-2-甲酰基)呋喃二烯脂肪乳注射劑的制備見制備例8，欖香烯乳注射液購于大連金港制藥有限公司，批號940828。。2動物C57BL/6小鼠、昆明小鼠由上海中科院實驗動物中心提供，合格證號滬動合證字第107號。體重1820g。雌雄皆可，每次實驗使用同一性別。動物數實驗組小鼠均各為IO只，陰性對照組20只。3瘤源G-422小鼠腦瘤模型、B16小鼠黑色素瘤模型由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院藥理室傳代維持。4劑量設置呋喃二烯、2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯脂肪乳注射劑靜脈注射40和20mg/kg;欖香烯乳注射液40mg/kg。5給藥方案以劑量設置呋喃二烯、2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯脂肪乳注射劑小鼠尾靜脈40和20mg/kg注射給藥，每天1次，連續(xù)10d，共給藥10次。強化給藥分別采用劑量設置的呋喃二烯和2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯脂肪乳注射劑低劑量靜脈輸注輸液小鼠尾靜脈注射給藥，每天2次，連續(xù)10d,共給藥20次。6實驗對照陰性對照給與實驗組高劑量等體積等濃度的相應溶劑，給藥方案為小鼠尾靜脈途徑，每天1次，連續(xù)10d。參照組欖香烯乳注射液為小鼠尾靜脈40mg/kg注射給藥，每天1次，連續(xù)10d，共給藥10次。7實驗方法顱內接種動物腫瘤模型取生長旺盛的小鼠G-422瘤源，無菌條件下勻漿法制備成約34xl(^個/mL均漿，于昆明小鼠顱內接種0.05mL/鼠，分組，接種24h后開始靜脈給藥治療。B16小鼠黑色素瘤模型取體外培養(yǎng)對數生長的B16小鼠黑色素瘤細胞，從C57BL/6小鼠尾靜脈接種5><104個細胞。G-422觀察荷瘤小鼠30天內的存活率，與陰性對照組比較，計算腫瘤抑制率；B16試驗三周后取各組動物的肺臟，檢査肺克隆數。按下列公式求出荷瘤宿主的生命延長率生命延長率(。/。)-[像藥組平均生存天數-對照組平均生存天數)/對照組平均生存天數]xl00。/。依據各組腫瘤平均集落數，按下列公式計算腫瘤抑制率腫瘤抑制率(％)=[(對照組平均集落數-給藥組平均集落數)/對照組平均集落數^100%統(tǒng)計學方法采用乂2檢驗。8結果顱內接種的小鼠神經膠質瘤G422對荷瘤宿主的生命延長率呋喃二烯、2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯脂肪乳注射劑高劑量40mg/kgivxlOqd及低劑量20mg/kgivxlOqd試驗結果分別為69.93、72.52，63.75、63.22%;58.60、60.12，52.42、49.79%;呋喃二烯、2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯脂肪乳注射劑采用低劑量20mg/kgivxl0bid強化方案給藥，試驗結果分別為77.69，62.19%。詳細數據見表5。B16小鼠黑色素瘤試驗性肺轉移模型的腫瘤抑制率呋喃二烯和2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯脂肪乳注射劑的高劑量40mg/kgivxlOqd及低劑量20mg/kgivxlOqd試驗結果分別為66.39、69.56，57.32、60.28%;49.07、51.21，42.89、40.73%;呋喃二烯、2誦(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯脂肪乳注射劑采用低劑量20mg/kgivxl0bid強化方案給藥，試驗結果分別為73.79，56.25%。詳細數據見表6。表5和表6結果說明呋喃二烯、2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯脂肪乳注射劑對顱內接種的小鼠G-422腦神經膠質瘤(腦內接種)及B16小鼠黑色素瘤實驗肺轉移兩個模型試驗顯示呋喃二烯、2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯脂肪乳注射劑具有良好的抗腫瘤作用，其中對原位接種的腦神經膠質瘤效果更為顯著，顯示本品有通過血腦屏障的特點，兩個治療劑量間具有量效關系，其中呋喃二烯脂肪乳注射劑抑癌效果明顯優(yōu)于呋喃二烯衍生物脂肪乳注射劑。在同劑量情況下與同類型的欖香烯乳注射液相比，呋喃二烯脂肪乳注射劑的抗腫瘤抑制率明顯優(yōu)于欖香烯乳注射液。采用同劑量但不同給藥方案時，每天兩次靜脈給藥較一次靜脈給藥效果好，甚至超過高劑量組。表5呋喃二烯、2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯脂肪乳注射劑對G-422小鼠神經膠質瘤的療效試驗樣品劑量給藥方案動物數平均生存時間生命延長率mg/kg始/終(只)X土SD(天)%陰性對照組相應溶劑ivxlOqd20/09.71±2.220/09.68±2.2參照比較組40ivxJOqd10/015.1±1.8***55.51欖香烯乳注射液10/014.8±2.6***52.89呋喃二烯脂肪乳注射劑40ivxlOqd10/016.5±3.5***69.9310/016.7±3.0***72.5220ivxlOqd鶴15.9±3.1***63.7510/015.8±3.4***63.22ivxlObid10/017.2±3.6***77.692-(吡啶-2-甲酰基)呋喃二烯脂肪乳注射劑40ivxOqd聽15.4±3.4***58.60鵬15.5±3.2***60.1220ivxlOqd10/014.8±3.4***52.42讓14.5±2.9***49.79ivxlObid10/015.7±3.5*"62.19豐"P值〈0.01與陰性對照組相比表6呋喃二烯、2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯脂肪乳注射劑對小鼠黑色素瘤B16實驗肺轉移療效試驗<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>***P值<0.01與陰性對照組相比試驗例5:呋喃二烯和2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯脂肪乳注射劑對移植性P388白血病腹水癌和小鼠移植性艾氏腹水癌(EAC)的體內抗腫瘤療效。1藥品呋喃二烯和2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯脂肪乳注射劑的制備見試驗例8，欖香烯乳注射液購于大連金港制藥有限公司，批號940828。。2動物昆明小鼠由上海中科院實驗動物中心提供，(合格證號滬動合證字第107號)。體重18~20g。DBA/2小鼠，19±2g，由中國科學院上海實驗動物中心提供(合格證號中科動005號)。雌雄皆可，每次實驗使用同一性別。動物數實驗組及參照組昆明小鼠均各為10只、陰性對照組20只。3瘤源小鼠P388白血病瘤株模型和艾氏腹水癌瘤(EAC)模型由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院藥理室傳代維持。4劑量設置呋喃二烯和2-(吡啶-2-甲酰基)呋喃二烯脂肪乳注射劑靜脈注射40和20tng/kg;欖香烯乳注射液40mg/kg。5給藥方案以劑量設置的呋喃二烯、2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯脂肪乳注射劑于接種后的24h、72h、120h小鼠腹腔40和20mg/kg給藥，共給藥3次。6實驗對照陰性對照給與實驗組高劑量等體積的生理鹽水，給藥方案均為小鼠腹腔途徑，每天1次，連續(xù)3d。參照組欖香烯乳注射液于接種后的24h、72h、120h小鼠腹腔25mg/kg給藥，共給藥3次。7實驗方法-小鼠P388白血病瘤株模型取腹水生長旺盛，傳代第7天的P388白血病小鼠，頸椎脫臼處死，新潔爾滅浸泡消毒，無菌條件下抽取腹水，用生理鹽水1:10稀釋后制成細胞懸液，接種于DBA/2小鼠，每只小鼠腹腔接種0.2mL[細胞數為(l5)xl(^個/mL]。于接種后24，72，120h按實驗設計方案給藥。停藥后觀察小鼠的存活情況，求得各組的平均生存天數，與陰性對照組比較，求出生命延長率。見表7。艾氏腹水癌瘤EAC模型取健康狀況良好，傳代第7天的EAC荷瘤小鼠，頸椎脫臼處死，新潔爾滅浸泡消毒，無菌條件下抽取腹水，按l:4加入無菌生理鹽水制成細胞懸液，每只小鼠腹腔接種0.2mL[細胞數為(l5)xl0S個/mL]。接種后，動物隨機分組，每組10只，共分4組，于接種后的24、72、120h按實驗設計方案給藥。停藥后觀察小鼠的存活情況，求得各組的平均生存天數，與陰性對照組比較，按下列公式求出生命延長率(見表8):生命延長率(％)=[(給藥組平均生存夫數-對照組平均生存天數)/對照組平均生存天數]><100%8結果表7結果說明呋喃二烯和2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯脂肪乳注射劑對小鼠移植性腫瘤P388白血病腹水性模型試驗顯示出P388小鼠生存期可顯著延長，其平均存活時間和生命延長率與陰性對照組比較有顯著差異。表8結果說明呋喃二烯和2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯脂肪乳注射劑對小鼠移植性艾氏腹水癌瘤(EAC)模型試驗顯示出EAC小鼠生存期可顯著延長，其平均存活時間和生命延長率與陰性對照組比較有顯著差異。表7呋喃二烯、2-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯脂肪乳注射劑對小鼠P388白血病腹水型的療效試驗樣品劑量動物數平均生存時間生命延長率mg/kg始/終(只)X±SD(天)%陰性對照組相應溶劑20/2011.1±1.520/2010.4±2.5參照比較組40磨18.4±2.2***65.77欖香烯乳注射液湖018.6±2.5***78.85呋喃二烯脂肪乳注射劑4010/1019.5±3.7***75.6810/1020.6±2.5***98.082010/1016.2±1.8***45.9510/1015.9±3.1***52.882-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯脂肪乳注射劑4010/919.2±3.2***72.9710/918.8±2.5***80.772010/1014.7±2.6***32.4310/1015.8±2.6***51.92'P值<0.01與陰性對照組相比!呋喃二烯、2-(吡啶-2-甲酰基)呋喃:二烯脂肪乳注射劑對艾氏腹水癌瘤EAC的療效該樣品劑量動物數平均生存時間生命延長率mg/kg始/終(只)X±SD(天)%陰性對照組相應溶劑9.8±2.320/010.8±2.0參照比較組8010/833.6±11.2***242.86欖香烯乳注射液10/936.4±10.9***237.04呋喃二烯脂肪乳注射劑8010/937.8±13.7*"285.7110/1038.9±13.0***260.194010/1026.9±9.8***174.4910/1027.8±11.5***157.412-(吡啶-2-甲?；?呋喃二烯脂肪乳注射劑8010/832.6±15.4*"232.6510/834.9±14.1***'223.154010/822.8±12.4***132.6510/824.5±12.6***126.85f"P值〈0.01與陰性對照組相比制備例l:制備呋喃二烯片劑將5g呋喃二烯過80目篩，與3g乳糖、1.5g淀粉混勻，加入10%淀粉漿適量制成軟材，用16目篩制顆粒后，置708(TC干燥，經14目篩整粒，加入0.5g干淀粉及0.05g硬脂酸鎂混合均勻，壓成100片。衍生物片劑可按此法制備。制備例2:制備膠囊將5g呋喃二烯過80目篩，與20g可壓性淀粉、14g乳糖混合均勻，再加入0.05g硬脂酸鎂混勻，裝填2號空膠囊即可。衍生物膠囊可按些法制備制備例3.滴丸劑將呋喃二烯粉碎，過80目篩后，與5g聚維酮K30按l:l混合均勻，加適量無水乙醇，置60。C水浴中攪拌使其完全溶解。減壓回收乙醇并干燥，粉碎，過100目篩，制成固體分散體。取30g聚乙二醇4000，置7(TC水浴中加熱熔融，在攪拌下加入上述固體分散體，在此溫度下攪拌40分鐘使分散均勻，藥液轉移至8(TC恒溫的滴丸機儲料罐中，在滴頭口徑為3.0/4.0mm，滴速60滴/分鐘，冷卻劑為二甲基硅油，冷卻液溫度10士rC條件下，調節(jié)滴丸丸重為40mg，滴制成丸，除去滴丸表面上的冷卻液，分裝，即得。制備例4.口服乳劑-制備將0.5g呋喃二烯、8g大豆油、0.9g大豆磷脂混合均勻后，置60'C恒溫水浴攪拌至澄清油溶液。再將溶有0.01g羥丙丁酯或甲酯的去離子水80ml加熱至6(TC，按一定比例油相與水相置組織搗碎機中，以800010000rpm速度制成初乳劑，迅速降溫后，經高壓均質機勻化二遍，即可。呋喃二烯合成衍生物滴丸劑可按此法制備。制備例5.制備軟膠囊將5g呋喃二烯、20g甘油、40g聚乙二醇混勻溶解后，調整藥液為每粒膠丸含呋喃二烯50mg，再，藥液置軟膠囊機的藥液漏斗中，采用模具壓制成型，即可。呋喃二烯合成衍生物軟膠囊可按此法制備。制備例6.栓劑取35gS-40、9g聚乙二醇4000在水浴上熔融后，將5g呋喃二烯研細，如入已融化的基質研磨均勻，在熔融狀態(tài)下灌入栓劑模具，待完全冷卻至室溫后，刮去模具口的溢出部分，即得100粒。(注S-40為聚氧乙烯(40)單硬脂酸酯類；商品名Myri52)。制備例7.凍干粉針取呋喃二烯1.0g溶于適量無水乙醇中，取20g羥丙基-p-環(huán)糊精20g，溶于80ml注射用水中，將呋喃二烯乙醇溶液滴加進入羥丙基-P-環(huán)糊精溶液中，室溫攪拌35小時，取甘露醇0.6g用適量注射用水溶解加入上述藥液后，用注射用水使成100ml。采用0.22pm微孔濾膜濾過，置凍干機中冷凍干燥，得疏松白色粉末型，即得第只含20mg的凍干粉針。呋喃二烯衍生物凍干粉針可按此法制備。制備例8.注射脂肪乳劑將5.0g呋喃二烯、100g注射用大豆油、12g注射用蛋黃磷脂、0.02g維生素E混合均勻后，置6(TC恒溫水浴攪拌至澄清油溶液；將2g泊洛沙姆188、22.5g注射用甘油溶解分散在800ml注射用水中，加熱至60'C為水相；將上述油溶液與水相按一定比例置組織搗碎機中，分次以800010000rpm高速攪拌，制成初乳劑；然后迅速降溫后，調整pH值89，用注射用水使乳劑成1000ml;再經高壓均質機勻化后，用0.22pm微孔濾膜濾過，灌封，即得100支乳劑(每支含呋喃二烯50mg/10ml)。呋喃二烯合成衍生物注射脂肪乳劑可采用以上方法制備。權利要求1.呋喃二烯在制備治療癌癥的藥物中的應用。2.根據權利要求l所述的應用，其在制備治療宮頸癌、喉癌、白血病、腦膠質瘤、腹水癌、肺癌、胃癌、前列腺癌和肝癌的藥物中的用途。3.呋喃二烯衍生物在制備治療癌癥的藥物中的應用。4.根據權利要求3所述的應用，其在制備治療宮頸癌、喉癌、白血病、腦膠質瘤、腹水癌、肺癌、胃癌、前列腺癌和肝癌的藥物中的用途。5.以呋喃二烯為活性成分的用于治療癌癥的藥物。6.根據權利要求5所述的藥物，其以片劑、滴丸、膠囊、軟膠囊、乳劑或栓劑形式存在。7.根據權利要求5所述的藥物，其以注射用乳劑或凍干粉針劑形式存在。全文摘要本發(fā)明涉及呋喃二烯及其衍生物在制備治療癌癥的藥物中的應用，特別涉及在治療宮頸癌、喉癌、白血病、腦膠質瘤、腹水癌、肺癌、胃癌、前列腺癌和肝癌的藥物中的應用。本發(fā)明還涉及以呋喃二烯為活性成分治療癌癥的藥物。文檔編號A61K31/343GK101199507SQ200710169718公開日2008年6月18日申請日期2007年11月19日優(yōu)先權日2006年12月13日發(fā)明者孫秀燕申請人:煙臺大學