專利名稱：：奶酪蛋白的酶水解產(chǎn)物中鑒定的生物活性肽及其生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明包括源自奶蛋白的生物活性制品的生產(chǎn)。這些蛋白在酶處理后產(chǎn)生具有抗微生物活性和/或體外血管緊張素轉(zhuǎn)化劑抑制刑活性食品和藥物工業(yè)中?，F(xiàn)有技術(shù)奶在人營(yíng)養(yǎng)中的作用從出生開始就是必需的并且是高營(yíng)養(yǎng)和功能價(jià)值的食物。新的生物分離技術(shù)的最新發(fā)展使得可以分級(jí)奶的不同成分來用于新的食品和非食品目的，新的應(yīng)用有助于提高由此引起的消費(fèi)。因此，致力于從奶級(jí)分生產(chǎn)分離蛋白的不同的公司關(guān)注提高和多樣化一些成分的用途，如酪蛋白和乳清蛋白。這是涉及乳鐵蛋白生產(chǎn)的工業(yè)的情況，乳鐵蛋白用作抗微生物劑并且已經(jīng)用于嬰兒食品，酸奶，食物補(bǔ)充劑，特殊配方以及牙齒和皮膚產(chǎn)品中。乳鐵蛋白還因?yàn)槠淇刮⑸锘钚杂米黪r奶中的添加劑來延長(zhǎng)其保質(zhì)期。近幾年來，由于消費(fèi)者關(guān)于飲食和健康之間存在關(guān)系的提高意識(shí)，功能食品已經(jīng)闖入食品工業(yè)中。將功能性配料定義為將其摻入食品中時(shí)發(fā)揮特定生物活性的那些成分，該活性超出起碼的營(yíng)養(yǎng)作用，那些中由于它們的多樣性和多功能性處于突出位置的一種是生物活性肽。這些肽在前體蛋白質(zhì)內(nèi)是無活性片段，但是在通過體內(nèi)和/或體外水解過程釋放后，其在體內(nèi)發(fā)揮出不同的生理功能。因?yàn)樵?979發(fā)現(xiàn)了它們，已經(jīng)描述了源自食物蛋白的具有不同生物活性的肽，這些活性為抗微生物，抗高血壓，免疫調(diào)節(jié)，抗血栓形成，阿片類(opioid),抗氧化劑等。這些肽在食品和/或藥品中具有潛在的用途并可以通過不同的策略釋放出來，目前最常使用的是酶水解和微生物發(fā)酵。一些值得特別注意的生物活性肽是發(fā)揮抗微生物特性的那些(R.Floris，I.Recio，B.Berkhout和S.Visser,Antibacterialandantiviraleffectsofmilkproteinsandderivativesthereof,(奶蛋白及其衍生物的抗纟田菌和抗病毒效果)，CurrentPharmaceuticalDesign,2003，9:1257-1275)。已經(jīng)研究奶的抗微生物活性很長(zhǎng)時(shí)間了，并通常歸因于該食品中存在的具有抗微生物活性的不同蛋白質(zhì)(免疫球蛋白，乳鐵蛋白，乳過氧化物酶，溶菌酶等)。然而，最近也已經(jīng)證實(shí)了源自奶蛋白的肽的抗微生物活性。盡管迄今為止不存在對(duì)源自奶蛋白的抗微生物肽的作用機(jī)理的結(jié)論性研究，但主要的發(fā)現(xiàn)已經(jīng)描迷了這些生物活性序列中的一些影響和光滑細(xì)菌膜的能力(D.Chappie,D.J.Mason,C.L.Joan畫,E.W.Odell,V.Grant,R.W.Evans,Structure-functionrelationshipofantibacterialsyntheticpeptideshomologoustoahelicalsurfaceregiononhumanlactoferrinagainst￡"t、'c/ze〃.cA/aco//serotype0111(抗大腸軒菌血清型0111的人乳鐵蛋白上螺旋表面片段同源的抗細(xì)胞合成肽的結(jié)構(gòu)-功能相關(guān)性)，InfectionandImmunity,1998,66，2434-2440)。已經(jīng)描ots2-酪蛋白(EP1114060，Processforproducingcationicpeptidesfrombiologicalfluids(從生物流體生產(chǎn)陽離子肽的方法)以及P-酪蛋白和k-酪蛋白(W099/26971,Antimicrobialpeptides(抗微生物肽))。通過相似的水解過程，已經(jīng)分離并鑒定了源自乳清蛋白的具有抗微生物特性的肽，如乳鐵蛋白(WO2004/089986,Antimicrobialpeptidefromtransferrinfamily(來自轉(zhuǎn)鐵蛋白家族的抗微生物肽)。已知發(fā)達(dá)國(guó)家中與高血壓相關(guān)的冠心病的高發(fā)病率，另一組很重要的生物活性肽是具有抗高血壓活性的肽。這些肽中的許多通過抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)調(diào)節(jié)腎素-血管緊張素系統(tǒng)來起作用(T.Takano，Milkderivedpeptidesandhypertensionreduction(奶產(chǎn)生的肽和高血壓降低)，IntrnationalDairyJournal,1998,8:375-381)，盡管沒有排除它們的效果可能是通過其他機(jī)理。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了從酪蛋白(US6514941,Methodofpreparingacaseinhydrolyzateenrichedinantihypertensivepeptides(制備富含抗髙血壓肽的酪蛋白水解產(chǎn)物的方法)和乳清蛋白(WOO1/85984,Enzymatictreatmentofwheyproteinsfortheproductionofantihypertensivepeptides,theresultingproductsandtreatmentofhypertensioninmammals(用于生產(chǎn)抗高血壓肽的乳清蛋白的酶處理，所得到的產(chǎn)物以及哺乳動(dòng)物中高血壓的治療))的酶水解產(chǎn)物獲得的不同的肽具有ACE-抑制活性(AECIa)。對(duì)具有抗高血壓活性的肽的結(jié)構(gòu)-活性相關(guān)性的研究揭示了特定的疏水性氨基酸在實(shí)現(xiàn)該活性中的基礎(chǔ)作用(H,S.Cheung,F,L.Wang，M.A.Ondetti,E.F.Sabo和D.W.Cushman.Bindingofpeptidesubstratesandinhibitorsofangiotensin-convertingenzyme(肽底物和血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的結(jié)合)。ImportanceoftheCOOH-terminaldipeptidesequence(COOH-末端二肽序列的重要性)。JournalofBiologicalChemistry1980，255:401-407)。還認(rèn)為這些氨基酸中一些的存在對(duì)于發(fā)揮抗氧化活性是必需的，并且這種活性在近幾年中呈現(xiàn)出主要的重要性(H.M.Chen，K，Muramoto，F(xiàn),Yamauchi，K.Fujimoto和K.Nokihara，Antioxidativepropertiesofhistidine-contrainingpeptidesdesignedfrompeptidefragmentsfoundinthedigestsofasoybeanprotein(從大豆蛋白消化液中發(fā)現(xiàn)的肽片段設(shè)計(jì)的含組氨酸肽的抗氧化特性)，JournalofAgriculturalandFoodChemistry,1998,46:49-53)。不同的退化性疾病，如癌癥，阿爾茨海默氏病，白內(nèi)障或自身老化與細(xì)胞成分，脂質(zhì)，蛋白質(zhì)或DNA平;的結(jié)果而產(chǎn)生:出)ii原因:膳食中抗氧化化合二的4菱人在防止這類疾病中是有用的。此外，食物中存在的這些抗氧化化合物延遲了脂肪氧化過程，認(rèn)為是脂肪氧化過程引起了腐敗，并由于這些食物呈現(xiàn)出令人不愉快的氣味和口味。最近的研究已經(jīng)揭示不同奶蛋白及其衍生物通過不同的作用機(jī)理發(fā)揮抗氧化活性的能力。因此，已經(jīng)描述了來自水解的酪蛋白(K.Suets謹(jǐn),H.Ukeda和H.Ochi，Isolationandcharacterizationoffreeradicalscavengingactivitiespeptidesderivedfromcasein(源自酪蛋白的自由基清除活性肽的分離和表征)，JournalofNutritionalBiochemistry,2000,U:128-131;EP1188767，Isolatedantioxidantpeptidesfromcaseinandmethodsforpreparing,isolatingandidentifyingantioxidantpeptides(從酪蛋白分離的抗氧化肽以及制備，分離和鑒定抗氧化肽的方法)和乳清蛋白(B.Heri^ndez-Ledesma,A.Davalos，B.Bartolom6和L.Amigo，Preparationofantioxidantenzymatichydrolyzatesfroma-lactalb謹(jǐn)inandp-lactoglobulin(從a-乳清蛋白和|3-乳球蛋白制備抗氧化酶水解產(chǎn)物)。IdentificationofactivepeptidesbyHPLC-MS/MS(通過HPLC-MS/MS鑒定活性肽)，JournalofAgriculturalandFoodchemistry2005，53，588-593)的具有螯合自由基能力的肽。此外，酪蛋白已經(jīng)成為具有酶催化脂肪氧化過程抑制活性的蛋白質(zhì)的主要來源(S.G.Rival,S.Formaroli,C.G.Boeriu和H丄Wichers，Caseinsandcaseinhydrolyzates.1.Lipooxygenaseinhibitoryproperties(酪蛋白和酪蛋白水解產(chǎn)物。I.脂氧化酶抑制特性)，JournalofAgriculturalandFoodChemistry,2001，49:287-294)。迄今為止進(jìn)行的大部分研究圍繞源自牛酪蛋白的肽的生物活性。然而，對(duì)通過其他類型酪蛋白如綿羊和山羊酪蛋白的肽發(fā)禪的生物活性存在很少的公開數(shù)據(jù)。J.A.Gomez-Ruiz,I.Recio和A.Pihlanto(Antimicrobialactivityofovinecaseinhydrolyzates(綿羊酪蛋白水解產(chǎn)物的抗樣t生物活性hApreliminarystudy:Milchwissenschaft-MilkScienceInternational2005，60:41-45)描迷了通過卩-酪蛋白水解產(chǎn)物發(fā)揮的對(duì)大腸桿菌JM103代謝活性有效的劑量依賴性抑制效果。然而，在該研究中沒有進(jìn)行鑒定引起該作用的肽。相反，實(shí)際上已經(jīng)鑒定了在Manchego干酪制備特征性的發(fā)酵和老化過程中從綿羊酪蛋白釋放的幾個(gè)序列，其中一些已經(jīng)呈現(xiàn)出ACE-抑制活性(J,A.Gomez-Ruiz,MRamos和I.Recio，Identificationandformationofangiotensin-convertingenzyme-inhibitorypeptidesinManchegocheesebyhigh-performanceliquidchromatography-tandemmassspectrometry(通過高效液相色語串聯(lián)質(zhì)譜鑒定和形成Manchego干酪中血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽)，JournalofChromatographyA,2004,1054:269:277)。這些序列的CIs"直(抑制50%酶活性的濃度)為24,1至1275.4,在該研究中，呈現(xiàn)出最高ACE-抑制活性的肽是VRYL序列(SEQIDNo.11)的cis廣酪蛋白片段f(205-208),其顯示出24.1^M的CI50值(丄A.G6mez-Ruiz，M.Ramos牙口I.Recio,Angiotensinconvertingenzyme-inhibitoryactivityofpeptidesisolatedfromManchegocheese.Stabilityundersimulatedgastrointestinaldigestion(從Manchego干酪分離的肽的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制活性。模擬胃腸消化下的穩(wěn)定性)。Int.DairyJournal2004,1075-1080)。然而，對(duì)這些肽穿過腸屏障的能力和在體內(nèi)發(fā)揮抗高血壓效果的能力不存在公開的數(shù)據(jù)。必須強(qiáng)調(diào)的是許多在體外呈現(xiàn)出ACE抑制活性的肽通常在體內(nèi)測(cè)試時(shí)失去全部或部分活性，或甚至在體外沒有呈現(xiàn)任何顯著ACE-抑制活性的肽由于消化酶的作用在體內(nèi)呈現(xiàn)出這種活性(M.Maeno,N.Yamanoto和T.takano,Indentificationofananti-hypertensivepeptidefromcaseinhydrolysateproducedbyaproteinasefromZ^"o6"c/〃ws/e/ve"cwjCP790(通過來自瑞士乳桿菌U""o6""〃w,v/ze/ve〃cw)CP790的蛋白酶產(chǎn)生的酪蛋白水解產(chǎn)物的抗高血壓肽的鑒定)，JournalofDairyScience,1996,79:1316-1321)。關(guān)于從不同類型的酪蛋白釋放的肽發(fā)揮多種生物活性如抗高血壓，抗微生物和/或抗氧化活性的多功能能力不存在任何公開的研咒》在食物蛋白的序列內(nèi)存在特定的區(qū)域，其一旦通過水解釋放，可以呈現(xiàn)出生物活性。這些片段，稱為生物活性肽，可以在體內(nèi)通過胃腸酶的作用在蛋白水解過程中產(chǎn)生，或在體外通過特定酶的作用或在制備特定食品的過程中產(chǎn)生。已知奶蛋白的高生物品質(zhì)，主要的興趣是從這些蛋白質(zhì)獲得生物活性肽，其用作膳食的一部分時(shí)，除了發(fā)揮它們基礎(chǔ)的營(yíng)養(yǎng)功能，能夠產(chǎn)生用于維持健康和防止疾病的代謝或生理效果。從奶蛋白生產(chǎn)生物活性肽使得可以發(fā)現(xiàn)該食物超出常規(guī)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的新用途，包括產(chǎn)生藥物和營(yíng)養(yǎng)藥物產(chǎn)品。這將有助于健康，安全，高質(zhì)量食品的研發(fā)，有助于最佳利用奶制品所給予的并且使它們成為更高價(jià)值的。發(fā)明描述-發(fā)明簡(jiǎn)述本發(fā)明包括通過酪蛋白部分的酶水解生產(chǎn)源自奶蛋白的產(chǎn)品，該產(chǎn)品含有具有抗微生物和/或體外ACE-抑制活性和/或抗高血壓活性和/或抗氧化活性的生物活性肽。通過一種或多種含有所迷生物活性肽氨基酸序列的蛋白，其肽或片段的水解來生產(chǎn)生物活性肽，使用蛋白水解酶(優(yōu)選胃蛋白酶，以及在合適的情況下，還可以使用CorolasePP)以及使蛋白質(zhì)鏈在用于其釋放的合適位置分裂的水解條件。在使用兩種酶模擬胃腸消化道情況中，獲得耐胃腸吸收并通過血流的最小功能肽單位。該特征開辟了將這些肽應(yīng)用于口服給藥以外的其它給藥形式或提高它們的吸收率。還可以通過化學(xué)合成或通過重組等方法來生產(chǎn)。可以按原樣或從未加工的水解產(chǎn)物，低分子量濃縮物，或通過基于大小的分離方法或色語方法獲得的其他活性子部分?jǐn)z入這些肽。這些水解產(chǎn)物，其級(jí)分或肽可以形成食品的一部分，用作食品防腐劑，以及在攝入時(shí)，支持身體的天然防御，除此之外，還可以用于制備治療疾病的藥品，特別是能夠有助于血壓和/或細(xì)菌感染的控制。本發(fā)明通過最佳利用所有奶蛋白所給予的并且使它們成為更高價(jià)值的而擴(kuò)大了奶蛋白的應(yīng)用。-發(fā)明詳述本發(fā)明提供了從奶酪蛋白生產(chǎn)生物活性肽的方法。這些生物活性肽是SEQ.IDNo.l，SEQ.IDNo.2,SEQ.IDNo.3，SEQ.IDNo.4,SEQ.IDNo.5,SEQ.IDNo.6,SEQ.IDNo.7，SEQ.IDNo.8，SEQ.IDNo.9,SEQ.IDNo,10,SEQ.IDNo.12,SEQ.IDNo.13,SEQ.IDNo.14，SEQ.IDNo.15,SEQ.IDNo.l6，SEQ.IDNo.17,(表l)中所示氨基酸序列標(biāo)識(shí)的那些，其中一些發(fā)揮抗微生物和/或體外ACE-抑制活性和/或抗高血壓和/或抗氧化活性。本發(fā)明的起始原料可以是任何合適的物質(zhì)，其包括一種或多種動(dòng)物或植物來源的蛋白質(zhì)或肽，或其可以來自微生物，其含有目標(biāo)生物活性肽的氨基酸序列。顯然可以使用屬于(Xs2-酪蛋白序列的那些，(SEQ.IDNo.l,SEQ.IDNo.2,SEQ.IDNo,3,SEQ.IDNo.4,SEQ.IDNo.5，SEQ.IDNo.6，SEQ.IDNo.7,SEQ.IDNo.8,SEQ.IDNo.9，SEQ.IDNo.lO，表1),含有不同類型(Xs2-酪蛋白，其一部分或肽或其任何大小片段的任何制劑，單獨(dú)或結(jié)合其他蛋白質(zhì)。顯然還可以使用屬于asl-酪蛋白(SEQ.IDNo.l2，SEQ.IDNo.13)的那些，含有不同類型as廣酪蛋白，其一部分或其肽或其所需大小片段的任何制刑，單獨(dú)或結(jié)合其他蛋白。顯然還可以使用屬于卩-酪蛋白(SEQ.IDNo.l2，SEQ.IDNo.l3)的那些，含有不同類型(3-酪蛋白，其一部分，或其肽或其所需大小片段的任何制劑，單獨(dú)或結(jié)合其他蛋白。因此，根據(jù)所需要的肽，可以使用純aw酪蛋白，純cts2-酪蛋白，純P-酪蛋白，完整酪蛋白，酪蛋白酸鹽，和不同呈現(xiàn)形式的奶，發(fā)酵的奶制品，奶蛋白水解產(chǎn)物，奶子產(chǎn)品，用于動(dòng)物詞料的奶衍生物等。將所迷起始原料以合適的濃度溶解或分散于水中或緩沖溶液中，在適于蛋白水解酶作用的pH。可以使用任何能夠分裂起始原料中存在的蛋白質(zhì)并提供目標(biāo)肽的蛋白水解酶，但是優(yōu)選在pH2.0-3.0的胃蛋白酶。還可以使用能夠?qū)崿F(xiàn)底物發(fā)酵和蛋白質(zhì)水解的蛋白水解微生物。為了選擇最有活性水解產(chǎn)物的目的，最佳化水解條件pH，溫度，酶-底物比例，反應(yīng)中斷等。在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，通過在pH3.0使用胃蛋白酶，以3.7/100(p/p)的酶-底物比例，以及在37。C進(jìn)行水解，時(shí)間段為10分鐘至24小時(shí)，但是優(yōu)選少于30分鐘的時(shí)間段，來生產(chǎn)生物活性肽。SEQ.IDNo.15，SEQlDNo.17(表1)所標(biāo)識(shí)的生物活性肽，其具有體外ACE-抑制活性和/或抗高血壓活性，由于它們的結(jié)構(gòu)和對(duì)胃腸酶的抗性，在胃腸消化后，將是最小的功能肽單位，其將是耐胃腸吸收的并通過血流。起始原料將是任何合適的底物，其包括一種或多種動(dòng)物或植物來源的蛋白質(zhì)或肽或其來自微生物，其含有目標(biāo)生物活'性肽氨基酸序列(SEQ.IDNo.15，SEQ.ID.No.17(表1)，優(yōu)選as2-酪蛋白和P-酪蛋白。顯然可以使用含有不同類型的(Xs2-酪蛋白或P-酪蛋白或其肽或其任何大小片段的任何制劑。例如純as2-酪蛋白，純P-酪蛋白，完整酪蛋白，酪蛋白酸鹽，和不同呈現(xiàn)形式的奶，發(fā)酵的奶制品，奶蛋白水解產(chǎn)物，奶子產(chǎn)品，用于動(dòng)物飼料的奶衍生物等。為了選擇最有活性水解產(chǎn)物的目的，最佳化水解條件pH，溫度，酶-底物比例，反應(yīng)中斷等u在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，通過使用CorolasePP^水解胃蛋白酶水解的酪蛋白或其小于3000Da的部分或含有(PVYRYLSEQ.IDNo.7,HLPLPLLSEQ.ID.No.13)的合成肽來實(shí)現(xiàn)這，在pH7-8，以1:25p/p的酶-底物比例，在37。C持續(xù)大約2.5小時(shí)。通過在95。C水浴中加熱10分鐘來中斷反應(yīng)。CorolasePP是蛋白水解豬胰腺酶的制劑，除了胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶，其含有氨基和羧基肽酶。接著，理想的是濃縮生物活性肽，并且已知具有抗微生物活性的肽本質(zhì)上是陽離子，可以通過陽離子交換色鐠(FPLC)進(jìn)行含有生物活性肽的級(jí)分的分離?？梢酝ㄟ^使用陽離子交換色譜，疏水性色語等，或優(yōu)選反相高效液相色謙(RP-HPLC)來進(jìn)一步搜索，將活性子部分從更高陽離子級(jí)分中分離出來?；蛘撸梢酝ㄟ^如超濾，透析，具有合適膜孔的電透析，凝膠過濾色語等方法從水解產(chǎn)物濃縮生物活性肽。除了完整的水解產(chǎn)物及其一部分，表1中所示的標(biāo)記為SEQ.IDNo丄SEQ.IDNo.2,SEQ.IDNo'3，SEQ.IDNo.4,SEQ,IDNo.5,SEQ.IDNo.6,SEQ.IDNo.7,SEQ.IDNo.8,SEQ.IDNo.9，SEQ.IDNo.10,SEQ.IDNo.12,SEQ.IDNo.13,SEQ.IDNo.14的肽呈現(xiàn)出生物活性特征，主要是抗微生物活性和/或ACE-抑制活性和/或抗高血壓活性和/或抗氧化活性，并且這也是本發(fā)明的一個(gè)目的。特別地，用序列SEQ.IDNo丄SEQ.IDNo.2,SEQ.IDNo.3,SEQ.IDNo.4，SEQ.IDNo.5,SEQ.IDNo.6，SEQ.IDNo.7,SEQ.IDNo.8,SEQ.IDNo.9，SEQ.IDNo.10標(biāo)示的肽呈現(xiàn)出革蘭氏陽性細(xì)菌的抗微生物活性，和至少序列SEQ.ID.No,3另外發(fā)揮出抗大腸桿菌的有效抗微生物作用。除此之外，序列SEQ.IDNo.l和SEQ.IDNo.7標(biāo)識(shí)的肽呈現(xiàn)出有效的體外ACE-抑制活性,并且在口服給藥于這些動(dòng)物時(shí)，序歹'jSEQ.IDNo.7在自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)中呈現(xiàn)出抗高血壓活性。除此之外，至少SEQ.IDNo.7標(biāo)識(shí)的肽通過氧自由基螯合機(jī)理具有理想的抗氧化活性。相似地，來自卩-酪蛋白的基于修改證明標(biāo)識(shí)為SEQ.ID.No.14的肽，也呈現(xiàn)出高的ACE-抑制活性。除了胃蛋白酶水解的酪蛋白和CorolasePP，表l中所示并標(biāo)記為SEQ.ID.No.l5和SEQ.IDNo.17的肽在自發(fā)高血壓大鼠(SHR)中具有抗高血壓活性，并且也是本發(fā)明的一個(gè)目的。必須特別注意的事實(shí)是這些是來自各種食用產(chǎn)品的天然肽，可以預(yù)期其副作用少并且耐受性良好。相似地，胃蛋白酶水解產(chǎn)物中薈定的生物活性肽(SEQ.IDNo.l，SEQ.IDNo.2,SEQ.IDNo.3，SEQ.IDNo.4,SEQ.IDNo.5,SEQ.IDNo.6,SEQ.IDNo7，SEQ.IDNo.8，SEQ.IDNo.9,SEQ.IDNo.10,SEQ.IDNo.12,SEQ.IDNo.l3，SEQ.IDNo.14)，以及另外的，使用CorolasePP⑧的(SEQ.IDNo.l5，SEQ.IDNo.16，SEQ.IDNo.17,表1),—旦知道其序列，目前可用的技術(shù)可以通過化學(xué)和/或酶肽合成或通過重組方法獲得這些。表1.鑒定的生物活性肽的序列LKKISQVDQHQKAMKPWTQPKT麗PYVRYLLKKISQYYQKFAWPQYLLKKISQYYQKFAWPQYTVDQHQKAMKPWTQPKTNAIPYVPYLLKTVDQHQKAMKPWTQPKTNAIPYVRYLPYVRYLKTVDQHQKAMKPWTQPKTNAIPYVRYLLKKISQYYQKFAWPQYLKTYQKFAWPQYLKTVDQHQKAMKPWTQPKTNAIPYVRYLRYLGYAYFYPBLHLPLPLLSEQ.ID.No.lSEQ.ID.No.2SEQ,ID.No.3SEQ.ID.No.4SEQ.ID.No.5SEQ.ID.No.6SEQ.ID.No.7SEQ.ID.No.8SEQ.ID.No.9SEQ.ID.No.10SEQ.ID.Nol2SEQ.ID.No.13SEQ.ID.No.M<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>之前沒有描述過從胃蛋白酶-水解的綿羊(Xs2-酪蛋白生產(chǎn)生物活性肽，盡管源自這種牛來源蛋白的抗微生物肽實(shí)際上已經(jīng)得到了描述(EP1114060,Processforproducingcationicpeptidesfrombiologicalfluid(從生物流體生產(chǎn)陽離子肽的方法))。之前還鑒定了源自ots2-酪蛋白的一些肽和Manchego干酪中具有ACE-抑制活性的其他綿羊酪蛋白(J,A.Gomez-Ruiz,MRamos和I.Recio,Identificationandformationofangiotensin-convertingenzyme-inhibitorypeptidesinManchegocheesebyhigh-performanceliquidchromatography-tandemmassspectrometry(通過高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜薈定和形成Manchego千酪中血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽)，JournalofChromatographyA,2004，1054:269:277),盡管沒有進(jìn)行它們的體內(nèi)抗高血壓活性研究。之前鑒定的具有ACE-抑制活性的肽之一是綿羊cts2-酪蛋白的205-208片段序列VRYL(SEQ.ID.No,ll)(CI5024.,)。然而，本發(fā)明的序列SEQ.ID.No.7,PYVRYL(CI5，1.94)具有高于之前所迷那種12倍功效的ACE-抑制活性，其證明了需要本發(fā)明中發(fā)現(xiàn)的完整序列，以便發(fā)揮理想的抗高血壓和/或抗氧化和/或抗微生物活性。為了發(fā)揮抗高血壓和/或抗氧化和/或抗微生物活性，也需要完整的SEQ.ID.No.7序列。此外，還顯示出，本發(fā)明的序列SEQ.ID.No.7在胃腸模擬后，最小活性片段是序列PYVSEQ.ID.No.l5另一方面，本發(fā)明使得可以通過使用酶制劑和模擬胃腸消化的條件來獲得生物活性肽(SEQ.ID.No.15,SEQ.IDNo,16，SEQ.IDNo.l7，表1)。因此，可能的是獲得的片段將是水解的終產(chǎn)物，能夠在胃腸道中吸收并且是直接引起抗高血壓作用的那些。然而，不能排除通過血漿肽酶的進(jìn)一步水解?；钚孕∑蔚漠a(chǎn)生是有利的，因?yàn)檫@些片段更易于通過不同途徑來給藥，并且當(dāng)口服給藥時(shí)，將快速起效。這些奶制品全奶，奶級(jí)分，酪蛋白，酪蛋白酸鹽等，是便宜的，即可獲得的物質(zhì)，用于生產(chǎn)生物活性肽，其可以用作具有抗微生物活性和/或ACE-抑制活性和/或抗高血壓和/或抗氧化活性的治療物質(zhì)。這些奶制品可以經(jīng)受熱處理，如巴氏殺菌，或者經(jīng)受干燥或冷凍干燥處理等，以便用作功能食品，添加劑或食品配料，或藥品，用于治療和/或預(yù)防感染和/或所有形式的動(dòng)脈高血壓，主要是在人類中，盡管也可以在動(dòng)物中。水解產(chǎn)物，低分子量級(jí)分，肽，其衍生物或藥物學(xué)上可接受的鹽及其組合的含量，以及它們用于治療任何疾病的劑量，將根據(jù)各種因素而改變，如年齡，疾病或障礙的嚴(yán)重程度，給藥途徑和給藥頻率。這些化合物可以以任何給藥形式呈現(xiàn)，固體或液體，并且通過任何合適的給藥途徑給藥，口服，呼吸道，直腸或局部，盡管將它們特別設(shè)計(jì)成用于以固體或液體形式口服給藥。通常，可以最佳化生產(chǎn)這些制品完全水解產(chǎn)物，其級(jí)分及其構(gòu)成肽，的方法，通過聚焦于最大可能量的生物活性肽的生產(chǎn)或控制苦味至可能的程度，通常由高濃度培養(yǎng)基或低分子量疏水性肽引起的。分析方法抗微生物活性的測(cè)量根據(jù)A.Pellegrini,C.Deltting,U.Thomas,P.Hunziker的方法測(cè)定4元孩￡生4勿活')"生(Isolationandcharacterizationoffourbactericidaldomainsinthebovine卩-lactoglobulin(牛卩-乳球蛋白中四個(gè)殺菌結(jié)構(gòu)域的分離和表征)BiochimicaetBiophysicaActa,2001，1526:131-140),使用微生物大腸桿菌(￡:vc/2enc/n"co//)[美國(guó)典型微生物培養(yǎng)中心(ATCC)，Rockville，MD,USA]ATCC25922,無害李斯特氏菌(L,We〃of)[ColeccionEspanoladeCultivosTipo(CECT)Valencia,Spain]CECT910T，表皮葡萄球菌(5Ya//^/ococcwe/7/'t/e/7m'(i/'s)CECT231，糞腸球菌(5V^racoccws/aeca/"')CECT795,粘質(zhì)沙雷氏菌(Serra〃"畫n:'wew)CECT854和肉葡萄球菌(S啤一ococct^co環(huán))CECT4491T。對(duì)于大腸桿菌，粘質(zhì)沙雷氏菌和葡萄球菌屬的菌林，以1%將細(xì)菌懸浮液接種于胰蛋白大豆培養(yǎng)液(TSB)中，或?qū)τ诩S腸球菌和無害李斯特氏菌，接種于腦心浸液(BHI)培養(yǎng)液中。在37。C進(jìn)行培養(yǎng)，除了粘質(zhì)沙雷菌的情況中，其在30。C進(jìn)行培養(yǎng)。在37。C或30。C將生長(zhǎng)于10mLTSB或BHI中TSB-瓊脂或BHI-瓊脂中的菌落培養(yǎng)過夜后，獲得開始工作的細(xì)菌接種物。用相應(yīng)的培養(yǎng)基將細(xì)菌懸浮液(1mL)稀釋1/50,在對(duì)于每個(gè)菌株合適的溫度下培養(yǎng)直至獲得每mL1-4"08菌落形成單位(CFU)的種群密度。將培養(yǎng)物在2000xg離心IO分鐘，用15mL磷酸鹽緩沖液(pH7.4)將沉淀的細(xì)菌洗滌兩次并將種群調(diào)節(jié)至106CFU/mL。在無菌多孔平板(GreinerLabortechnik，F(xiàn)rickenhausen,Germany)上，將50|liL纟田菌懸浮液，50pL待測(cè)試的物質(zhì)和100|iiL磷酸鹽緩沖液與每種情況中2%合適的培養(yǎng)基混合，然后將混合物在37。C或30。C培養(yǎng)2小時(shí)。該時(shí)間后，將混合物稀釋至10—5,將每一種100,uL的稀釋液加入TSB-瓊脂或BHI-瓊脂平板中并將平板培養(yǎng)24小時(shí)，該時(shí)間后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。將以下等式用于計(jì)算抗微生物活'f生抗微生物活性^og^，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>其中No是開始的CFU/mL數(shù)量Nt是最后的CFU/mL數(shù)量血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制活性(ACEIa)的測(cè)量通過D.W.Cush畫和H.S.Cheung的方法在體外測(cè)量ACE-抑制活性(Spectrophotometricassayandpropertiesofangiotensin-covertingenzymeinrabbitlung(兔子肺中血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的光i普測(cè)試和特性)。BiochemicalPharmacology,1971,20:1637-1648)，之后由Y.K.Kim,S.Yoon，D.Y.Yu,B.Lonnerdal和B.H.Chung改進(jìn)(Novelangiotensin-I-convertingenzymeinhibitorypeptidesderivedfromrecombinanthumanasi—caseinexpressedinEyc/zen'c/n.aco//,(源自大腸4干菌中表達(dá)的重組人(Xs廣酪蛋白的新血管緊張素-I-轉(zhuǎn)化酶抑制肽)。JournalofDairyResearch1999,66，431-439)。將底物，馬尿酰-組氨酰(hipunlhistidil)亮氨酸(HHL,Sigma,ChemicalCo,St.Louis，MO，USA),溶解于含有0.3MNaCl的0.IM硼酸鹽緩沖劑中，pH8.3,來獲得5mM的終濃度。將每種40pL待測(cè)定ACE-抑制活性的樣品加入100pL底物中。加入ACE酶(CE3.4.5.1，Sigma),溶解于50%甘油中并在進(jìn)行測(cè)試的時(shí)間點(diǎn)以1/10稀釋于重蒸水中。將反應(yīng)在37。C的水浴中進(jìn)行30分鐘。通過用150plINHC1降低pH來使酶滅活。用lOOOpL乙酸乙酯提取所形成的馬尿酸(hipuricacid)。渴旋攪拌20秒后，在室溫3000xg離心10分鐘，從95。C熱蒸發(fā)10分鐘的有機(jī)相中取出750|iiL。將馬尿酸殘余物再溶解于800pL重蒸水中，并在攪拌20秒鐘后，在來自BeckmanInstruments,Inc.,Fullerton，USA的Dur-70光語儀中測(cè)量228nm處的吸光值。使用以下等式計(jì)算ACE-抑制活性的百分比0/oACE-抑制活性-(A對(duì)照-A徉品)/(A對(duì)照-A￡白)x100空白用于校正背景吸光值。該空白含有底物，酶和20^L替代樣品的重蒸水，并在時(shí)間零時(shí)停止反應(yīng)。對(duì)照需要抑制劑不存在時(shí)對(duì)底物的100°/。酶反應(yīng)并含有20pL替代樣品的水并培養(yǎng)與樣品相同長(zhǎng)的時(shí)間。將結(jié)果顯示為CI5。(pM)或50%酶活性得到抑制的濃度。通過雙辛丁酸(bicinchomnicacid)測(cè)試測(cè)定蛋白質(zhì)濃度(Pierce-Rockord，IL，USA)，使用牛血清白蛋白作為模式?？寡趸钚缘臏y(cè)量通過B.X.Ou.M.Hampsh-Woodill，RL.Prior產(chǎn)生的方法(Developmentandvalidationofanimprovedoxygenradicalabsorbancecapacityassayusingfluoresceinasthefluorescentprobe(使用焚光素作為熒光探針的改進(jìn)氧自由基吸收能力測(cè)試的研發(fā)和證實(shí))，2001,49:4619-4626)測(cè)定氧自由基吸收能力(ORAC)。該方法是基于熒光素通過在XeXQ=493nm和、m=515nm熱分解2,2'偶氮-雙2-脒基丙烷二鹽酸鹽原位產(chǎn)生的過氧自由基的氧化。抗氧化劑的存在防止或延遲了熒光素的分解。每日從75nM磷酸鹽緩沖液(pH7,5)中的100|liM焚光素母液制備60nM濃度的熒光素工作溶液。作為對(duì)照抗氧化劑，使用6-羥基-2,5,7,8-四甲基色滿-2-羧酸(Trolox),將其在磷酸鹽緩沖液中制備成20nM濃度(母液)并存儲(chǔ)于-2(TCu通過分析從母液制備的濃度12.5，25，40,50和lOOpM的模式溶液來作出Trolox標(biāo)準(zhǔn)曲線。將AAPH溶解于磷酸鹽緩沖液中至143mM的終濃度，保持在低溫來防止其分解。為了進(jìn)行該測(cè)試，將375pL樣品與375pLAAPH和2.225mL熒光素混合，將該混合物在37t:培養(yǎng)。每5分鐘，在RF-1501熒光計(jì)(Sh畫dzu)中(U3nm和^cm=515nm)測(cè)量熒光。對(duì)測(cè)試進(jìn)行對(duì)照，包括含有焚光素和磷酸鹽緩沖液的空白，用于檢測(cè)來確保實(shí)驗(yàn)過程中熒光的穩(wěn)定性，和含有熒光素，AAPH和磷酸鹽緩沖液的陽性最大氧化對(duì)照。作為最大抗氧化活性的對(duì)照，待分析的每套樣品中包括40pMtrolox溶液。所有樣品重復(fù)三份分析。通過曲線下熒光素?zé)晒獾?曲線下面積"(AUC)測(cè)量的來定量抗氧化活性并在Trolox等式(ORAC曲線)中給出。使用以下等式計(jì)算AUC:AUO(0.5+f5/f0+f10/f0+f15/f0+……+f30/f0其中fo是時(shí)間零時(shí)的熒光，且f,是時(shí)間"i，，時(shí)的熒光。使用以下等式測(cè)定肽的相對(duì)ORAC值ORAO[(AUC樣品-AUC4白)/(AUClrolox-AUC空白)]X[(trolox體積摩爾濃度/樣品體積摩爾濃度)]通過離子交換色譜(FPLC)分離肽級(jí)分通過帶有一些改進(jìn)的I.Recio,S.Visser的方法進(jìn)行陽離子型肽級(jí)分的分離(Identificationoftwodistinctantibacterialdomainswithinthesequenceofbovineas2-casein(牛(Xs2-酪蛋白序歹'J內(nèi)兩個(gè)截然不同的抗菌結(jié)構(gòu)域的筌定)，在FPLC系統(tǒng)內(nèi)，使用HiLoadTM26/10SPSepharoseFastFlow陽離子交換柱(Pharmacia,Uppsala,Sweden)。A和B相各自包括10nMNH4HCO3(用HCOOH調(diào)節(jié)至pH7.0),和1.5MNH3。將樣品溶解于制備成濃度5mg/mL的A相中，通過50mL的Superloop(Pharmacia)加樣5mL體積。以5mL/min的流速洗脫水解產(chǎn)物。用100%溶劑A20分鐘后，在60分鐘內(nèi)使用A中0%至50%溶劑B梯度，接著20分鐘使用50%溶劑B。在214nm進(jìn)行吸光率的檢測(cè)。柱子和移動(dòng)相的溫度是9。C。幾次色譜分析后收集級(jí)分。通過半制備規(guī)模的反相高效液相色譜(RF-HPLC)分離肽級(jí)分使用包括兩個(gè)可編程的泵模型WatersDelta600的系統(tǒng)，Mod.966二極管陣列檢測(cè)儀，Mod.717加自動(dòng)加樣器和自動(dòng)級(jí)分收集器(WaterCorp,,Milford,MA，USA)。使用C18PrepNovaPackHR柱，7.8x300mm和6^mi孔大小(Waters),C18藥筒(Waters)作為保護(hù)柱。在30。C進(jìn)行分析，并在214和280nm檢測(cè)。用MillenniumSoftware版本3.2(Waters)進(jìn)行數(shù)據(jù)獲取。將c^-酪蛋白樣品制成2.5mg/mL的濃度，并且在加樣之前，在16000xg離心10分鐘。為了樣品的洗脫，各自使用含有0.1%和0.08%三氟醋酸的二相Milli(/水梯度(相A)和乙腈(相B),流速為4mL/min。相B梯度在50分鐘內(nèi)從0%至40%,并從40%至70%持續(xù)5分鐘，用70%B洗滌柱子5分鐘并將柱子恢復(fù)至起始條件25分鐘。加樣的樣品體積是300pL。制備濃度為100mg/mL總酪蛋白樣品，并在加樣之前，通過具有0.45pm孔徑的濾器。為了樣品的洗脫，各自使用含有0.1%和0.08%三氟醋酸的二相MilliQ⑧水梯度(相A)和乙腈(相B)，流速為4mL/min。相B梯度在70分鐘內(nèi)從0%至35%并從35。/q至70%持續(xù)5分鐘，用70%B洗滌柱子5分鐘并將柱子恢復(fù)至起始條件20分鐘。加樣樣品的體積是50pL。通過串聯(lián)質(zhì)語的分析(離線)使用Esquire3000離子捕獲系統(tǒng)(BrukerDaltonikGmbH,Bremen,Germany)。將樣品在含有0.01%甲酸(v/v)的50%(v/v)水乙腈溶液中制成2mg/mL的濃度。使用模型22加樣泵(HavardApparatus,SouthNatik,MA，USA)將樣品以4nl/min的流速加樣至電噴霧器中。系統(tǒng)使用氮作為噴霧和干燥氣體并在5xl(T3巴氦壓下工作。以13000Da/秒的速率以100-2000m/z的間隔獲取質(zhì)鐠。使用Biotools2.1程序(BrukerDaltonikGmbH，Bremen,Germany)進(jìn)行用于鑒定肽序列的串聯(lián)質(zhì)鐠的判讀。通過在線連接串聯(lián)質(zhì)語的RP-HPLC(RP-HPLC-MS/MS)的分析4吏用Esquire-LC系統(tǒng)(BrukerDaltonikGmbH,Bremen,Germany)。hplc(1100系列)由四聯(lián)泵，自動(dòng)加樣器，洗脫液脫氣系統(tǒng)和可變波長(zhǎng)f^夕卜纟戈沖企別H義沖勾成。(AgilentTechnologies,Waldbronn,Germany)在線連接Esquire3000離子捕獲光譜儀(BrukerDaltonik)。柱子是Hi-PoreC18柱(250x4.6mmi.d.,5拜粒徑)(Bio-RadLaboratories,Richmond,CA，USA)。溶劑A是水和三氟醋酸的混合物(1000:0.37)，溶劑B是乙腈和三氟醋酸的混合物(1000:0.27)。加樣制成4.5mg/ml濃度的50pL樣品。使用0.8ml/min的流速，60分鐘內(nèi)A中0°/。至50%溶劑B的線性梯度。在上述的相同條件下通過質(zhì)譜在214nm處監(jiān)控洗脫液，除了通過噴霧器的樣品的加樣流速為275|tiL/rnin。自發(fā)高血壓大鼠(SHR)中抗高血壓活性的研究研究了所鑒定的肽對(duì)自發(fā)高血壓大鼠(SHR)血壓的幾個(gè)作用。為了該研究，化學(xué)合成肽。用來自CharlesRiverLaboratoriesEspanaS.A的17-20周大稱重300至350的雄性大鼠進(jìn)行研究。將大鼠飼養(yǎng)在籠子中，每只籠子五只，維持25。C的溫度溫度，使用12-小時(shí)亮-暗循環(huán)，自由飲水和進(jìn)食。荻得收縮壓(SBP)和舒張壓(DBP)測(cè)量值，為了該目的，使用tailcuff方法(R,D.Bunag，Validationinawakeratsoftail-cuffmethodformeasuringsystolicpressure(清醒大鼠中測(cè)量收縮壓的tail-cuff方法的確定)，J,Appl,Physiol.,1973，34:279-282)。使用的設(shè)備(Le5001,Letica)自動(dòng)提供了遠(yuǎn)端SBP和DBP值。該設(shè)備記錄并且還促進(jìn)動(dòng)物的心率。將tail-cuff和轉(zhuǎn)換器置于大鼠尾巴上之前，將大鼠暴露于接近37。C的溫度，使得促進(jìn)尾動(dòng)脈的舒張。此外，為了確保測(cè)量的可靠性，在進(jìn)行所述測(cè)試之前使動(dòng)物適應(yīng)程序2周。通過取3個(gè)連續(xù)的測(cè)量值來測(cè)定SBP和DBP值并對(duì)于這兩個(gè)變量中的每一個(gè)來計(jì)算這三個(gè)值的平均值。用于研究的自發(fā)高血壓大鼠(SHR)具有190mmHg至220mmHg的SBP值，130mmHg至180mmHg的DBP值。在9a.m.至lOa.m,的時(shí)間跨度內(nèi)通過胃內(nèi)導(dǎo)管給藥待測(cè)試的產(chǎn)品，并溶解于lml蒸餾水中來給藥測(cè)試的劑量。在給藥之前獲得SBP和DBP讀數(shù)，并且在給藥后每2小時(shí)還進(jìn)行了這些變量的定期測(cè)量，直至給藥后8小時(shí)。此外，還在給藥所述產(chǎn)品后24小時(shí)獲得SBP和DBP測(cè)量值。作為陰性對(duì)照(用于建立插管大鼠中SBP和DBP的晝夜節(jié)律變化)，使用通過胃內(nèi)導(dǎo)管給藥lml水的大鼠，在相似的測(cè)試中獲得SBP和Dap測(cè)量值。作為陽性對(duì)照，使用已經(jīng)給藥50mg/kg卡托普利(captopril)(原型ACE-抑制藥物)的大鼠，在相似的測(cè)試中獲得SBP和DBP測(cè)量值。將該卡托普利藥物溶解于lml蒸餾水中來給藥于每只大鼠。集合結(jié)果并計(jì)算最小6個(gè)同樣測(cè)試的測(cè)量值的±標(biāo)準(zhǔn)誤差平均(SEM)。為了比較，使用方差的one-way分析，接著Bonferroni測(cè)試。認(rèn)為p<0.05的值差異是顯著的。附圖簡(jiǎn)述圖1:使用陽離子交換色譜(FPLC)獲得胃蛋白酶水解30分鐘的綿羊ois2-酪蛋白的色層譜，其中選擇了5個(gè)級(jí)分(FA-FE),將其人工收集。將以分鐘給出的時(shí)間繪制于X-軸上。圖2A:使用反相高效液相色語(RP-HPLC)獲取半制備規(guī)模的FC級(jí)分的色層語，F(xiàn)C級(jí)分是從胃蛋白酶水解30分鐘的綿羊(Xs2-酪蛋白收集的。選擇了四(4)個(gè)人工收集的子部分(FC1-FC4)。將以分鐘給出的時(shí)間繪制在X-軸上。圖2B:使用反相高效液相色譜(RP-HPLC)獲取半制備規(guī)模的FD級(jí)分的色層譜，F(xiàn)D級(jí)分是從胃蛋白酶水解30分鐘的綿羊otsr酪蛋白收集的。選擇了兩(2)個(gè)人工收集的子部分(FD1-FD2)。將以分鐘給出的時(shí)間繪制在X-軸上。圖3:通過半制備規(guī)模的RP-HPLC從FC和FD級(jí)分獲得的不同子部分的抗微生物活性。圖4:通過胃內(nèi)導(dǎo)管給藥lml水(o),50mg/kg卡托普利(口)，3mg/kgPYVRYL(▲)和3mg/kgLKK1SQ()后，在自發(fā)高血壓大鼠中發(fā)現(xiàn)了收縮壓(SBP)降低和舒張壓(DBP)降低。T(h)表示從給藥開始流逝的時(shí)間長(zhǎng)度，以小時(shí)給出。數(shù)據(jù)顯示出最少6只動(dòng)物的士平均SEM。apO.05vs水；bP<0.05vs卡托普利；cP<0.05vsPYVRYL。圖5:通過胃內(nèi)導(dǎo)管給藥lml水(。)，50mg/kg卡托普利(□),400mg/kg酪蛋白(■),400mg/kg酪蛋白水解產(chǎn)物(▲)和200mg/kgF<3000Da的酪蛋白水解產(chǎn)物(,)后，在自發(fā)高血壓大鼠中發(fā)現(xiàn)了收縮壓(SBP)降低和舒張壓(DBP)降低。T(h)表示從給藥開始流逝的時(shí)間長(zhǎng)度，以小時(shí)給出。數(shù)據(jù)顯示出最少4只動(dòng)物的士平均SEM。aP<0.05vs水；bP<0.05vs卡托普利；cP<0.05vs400mg/kg酪蛋白。圖6A:使用反相高效液相色語(RP-HPLC)獲取半制備規(guī)模的3000Da次要部分的色層語，該次要部分是從胃蛋白酶水解3小時(shí)的綿羊ots2-酪蛋白獲得的。將214nm處的吸光值繪制在Y-軸上，將以分鐘計(jì)的時(shí)間繪制在X-軸上。圖6B對(duì)應(yīng)于通過RP-HPLC獲得的色譜級(jí)分的血管緊張素酶抑制活性(ACEIa)。由于其有效的ACE-抑制活性，選擇了人工收集的3個(gè)級(jí)分(F3，F(xiàn)5和F6)。圖7:在用胃蛋白酶和Corolase@按次序水解之前和之后，使用合成肽PYVRYLSEQ.ID.N0.7的反相高效液相色語(RP-HPLC)獲取色層譜。將214nm處的吸光值繪制在Y-軸上，將以分鐘計(jì)的時(shí)間繪制在X-軸上。圖8:通過胃內(nèi)導(dǎo)管給藥lml水(o),50mg/kg卡托普利(□)，3mg/kgPYVRYL()和2mg/kgPYV(,)后，在自發(fā)高血壓大鼠中發(fā)現(xiàn)了收縮壓(SBP)降低和舒張壓(DBP)降低。T(h)表示從給藥開始流逝的時(shí)間長(zhǎng)度，以小時(shí)給出。數(shù)據(jù)顯示出最少4只動(dòng)物的士平均SEM。"PO.05vs水；bP<0.05vs卡托普利；cP<0.05vs3mg/kgPYVRYL。圖9:在用胃蛋白酶和CorolasePP按次序水解之前和之后，使用合成肽HLPLPLLSEQ.ID.No,14的反相高效液相色語(RP-HPLC)獲取色層譜。將214nm處的吸光值繪制在Y-軸上，將以分鐘計(jì)的時(shí)間繪制在X-軸上。圖10:通過胃內(nèi)導(dǎo)管給藥lml水(o),50mg/kg卡托普利(□),7mg/kgHLPLP()后，在自發(fā)高血壓大鼠中獲得了收縮壓(SBP)降低和舒張壓(DBP)降低。T(h)表示從給藥開始流逝的時(shí)間長(zhǎng)度，以小時(shí)給出。數(shù)據(jù)顯示出最少4只動(dòng)物的土平均SEM。aP<0.05vs水；bP<0.05vs卡托普利。本發(fā)明實(shí)施方案的實(shí)施例以下實(shí)施例說明了本發(fā)明，盡管必須不能將它們認(rèn)為是限制其范圍。實(shí)施例1.從胃蛋白酶水解的綿羊cts2-酪蛋白生產(chǎn)具有抗微生物，ACE-抑制，抗高血壓和抗氧化活性的生物活性肽。通過使用綿羊Cts2-酪蛋白作為底物來獲得水解產(chǎn)物，底物通過H.J.Vreeman，J.A.M.vanRiel的方法分離剩余酪蛋白后獲得(Thelarge-scaleisolationofas2-caseinfrombovinecasein(從牛酪蛋白大規(guī)模分離ots2-酪蛋白)。NetherlandsMilkandDairyJournal,1990,44:43-48)。作為酶，使用來自豬胃的豬胃蛋白酶(E.C.3.4.23.1.570U/mg蛋白質(zhì))(SigmaChemical,St.Louis,USA)制備0.5%的&2-酪蛋白水溶液，并用1MHC1將pH調(diào)節(jié)至3.0。加入胃蛋白酶(酶-底物比例3.7/100，p/p)。在37。C進(jìn)行水解30分鐘。通過在8(TC加熱15分鐘來獲得胃蛋白酶的失活，然后用1MNaOH將pH調(diào)節(jié)至7.0。將水解產(chǎn)物在16000g5。C離心5分鐘后收集上清液，通過HPLC來分析(圖1),已經(jīng)分離五個(gè)級(jí)分(FA-FE),將其人工收集，然后凍干。在2.5mg/mL的濃度測(cè)量這五個(gè)級(jí)分的抗微生物活性，使用5.9xl03CFU/mL大腸桿菌作為對(duì)照。結(jié)果表明FC和FD級(jí)分具有抗微生物活性，各自將微生物的數(shù)量降低了2.54和0.6個(gè)數(shù)量級(jí)。為了鑒定負(fù)責(zé)抗微生物活性的肽的目的，通過半制備規(guī)模的RP-HPLC分析FC和FD級(jí)分。圖2顯示了FC級(jí)分(圖2A)和FD級(jí)分(圖2B)的色鐠特征。從FC部分中分離出四個(gè)子部分(FC-FC4),從FD級(jí)分中分離出兩個(gè)子部分(FD1-FD2)。收集這些子部分中的每一個(gè)，并在乙腈蒸發(fā)后，將其凍干。在2,5mg/mL濃度測(cè)量這些子部分對(duì)抗大腸桿菌(6,2xl06CFU/mL)的抗微生物活性。圖3顯示出這些子部分對(duì)抗大腸桿菌的抗微生物活性。在所有這些子部分中，必須特意提及FC1,其是呈現(xiàn)出較大抗微生物活性之一，已知其在測(cè)試的濃度具有殺菌效果(1ogNt/N。大于6)。FC4，F(xiàn)D1和FD2子部分呈現(xiàn)中中等的抗微生物活性，各自具有1.24，1.31和1.64數(shù)量級(jí)的微生物降低值。按照之前所述的方法，使用離子捕獲分析儀，通過質(zhì)鐠分析FC1，F(xiàn)C4，F(xiàn)D1和FD2子部分。表l中顯示了鑒定的肽。表2.從胃蛋白酶水解30分鐘的綿羊cts2-酪蛋白獲得的子部分FC1,FC4，F(xiàn)D1和FD2中鑒定的肽。<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>實(shí)施例2.化學(xué)上合成的肽具有抗微生物活性?；瘜W(xué)合成大部分存在于從胃蛋白酶水解綿羊as2-酪蛋白30分鐘獲得的子部分中的肽(SEQ.ID.No.l,SEQ.ID.No.2，SEQ.ID.No.3和SEQ.ID.No.7)。通過Fmoc固相方法合成這些肽，并通過RP-HPLC-MS/MS證實(shí)它們的純度。測(cè)量.05mM濃度的合成肽對(duì)抗大腸桿菌，粘質(zhì)沙雷氏菌，肉葡萄球菌，表皮葡萄球菌，糞腸球菌和無害李斯特氏菌的抗微生物活性。活性結(jié)果顯示于表2中。表3,從胃蛋白酶水解綿羊as2-酪蛋白30分鐘獲得的子部分FC1，F(xiàn)C4和FD1種鑒定的合成肽的抗微生物活性。<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>這些肽呈現(xiàn)出抗革蘭氏陽性細(xì)菌的高度抗微生物活性，尤其是抗葡萄球菌屬的測(cè)試菌抹。這些肽中的三個(gè)SEQ.ID.No.l,SEQ.ID.No.2和SEQ.ID.No.3呈現(xiàn)出抗肉葡萄球菌的殺菌活性。然而，革蘭氏陰性細(xì)菌(大腸桿菌和粘質(zhì)沙雷氏菌)對(duì)所有這些肽的作用是高度抗性的，盡管必須提及SEQ.ID.No.3標(biāo)識(shí)的肽呈現(xiàn)出抗大腸桿菌的高度抗微生物活性的事實(shí)。實(shí)施例3.化學(xué)上合成的肽具有ACE-抑制和抗高血壓活性。測(cè)量了實(shí)施例1中提及的兩種化學(xué)上合成肽的ACE-抑制活性，特別是序列SEQ.ID.No.1和SEQ.ID.No.7。作為CIso或抑制50%酶活性需要的蛋白質(zhì)濃度給出的活性結(jié)果顯示于表3中。這兩種肽呈現(xiàn)出有效的ACE-抑制活性。表4.從胃蛋白酶水解30分鐘的cts2-酪蛋白獲得的FC1和FD1子部分中鑒定的合成肽的ACE-抑制活性。<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>測(cè)試了SEQ.ID.No.l和SEQ,ID.No.7肽的抗高血壓活性，為了該目的，將這些肽(3mg/kg)給藥于自發(fā)高血壓大鼠(SHR)。將肽溶解于蒸餾水中，并在lml體積中將相應(yīng)劑量給藥于每只大鼠。圖4顯示了在給藥3mg/kgSEQ.ID.No.l和SEQ.ID.No.7肽后不同時(shí)間點(diǎn)的自發(fā)高血壓大鼠(SHR)中SBP和DBP的降低程度?？梢钥吹絊EQ.ID.No.7肽的給藥引起這些動(dòng)物中SBP和DBP的顯著降低。這些變量的降低在給藥這種肽后4小時(shí)達(dá)到峰值。該降低還呈現(xiàn)出與給藥卡托普利引起的SBP和DBP降低相似的時(shí)間過程，這證明了其是具有抗高血壓活性的化合物。這些結(jié)果表明基于急性基礎(chǔ)口服給藥時(shí)，SEQ.ID.No.7標(biāo)識(shí)的肽具有清楚而顯著的抗高血壓效果。實(shí)施例4.具有抗氧化活性的化學(xué)合成肽。測(cè)量了實(shí)施例1中提及的SEQ，ID.No.7的抗氧化活性。以下顯示了過氧自由基螯合活性O(shè)RACpyvryl=182(_imolTrolox等價(jià)物/pmol肽因此結(jié)果顯示出PYVRYL(SEQ.ID.No.7)具有比1,1Trolox高1.82倍的抗氧化活性。實(shí)施例5.用胃蛋白酶從牛酪蛋白生產(chǎn)具有ACE-抑制活性的生物活性肽。通過從未加工的牛奶等電點(diǎn)沉淀來獲得牛酪蛋白底物，使用該底物來進(jìn)行水解。將來自豬胃的豬肽用作酶(E.C.3.4.23.1.570U/mg蛋白質(zhì))(SigmaChemical,St.Louis,USA)。制備0.5%的牛酪蛋白水溶液并用1MHC1將pH調(diào)節(jié)至2.0。加入胃蛋白酶(酶-底物比例3.7/100p/p)。在37。C進(jìn)行水解3小時(shí)。通過在8CTC加熱20分鐘使胃蛋白酶滅活，然后用1MNaOH調(diào)節(jié)pH至7.0。將水解產(chǎn)物在16000xg5°C離心15分鐘后收集上清液，然后將上清液通過具有3000Da孔徑的疏水性膜(Cemripep,Amiconlnc，Beverly,MA,USA)超濾。在SHR中測(cè)定總水解產(chǎn)物和透過物(分子量小于3000Da的水解產(chǎn)物部分)的ACE-抑制和抗高血壓活性(根據(jù)之前分析方法中所述的)。表4顯示出以CI50或抑制50°/。酶活性需要的蛋白質(zhì)濃度給出的ACE-抑制活性值，并通過凱氏法測(cè)定蛋白質(zhì)含量。圖5顯示出給藥酪蛋白水解產(chǎn)物后和給藥具有低于3000Da分子量的酪蛋白水解產(chǎn)物級(jí)分后不同時(shí)間的自發(fā)高血壓大鼠(SHR)中發(fā)現(xiàn)的SBP和DBP降低。如表中所示的，酪蛋白水解產(chǎn)物的給藥引起這些動(dòng)物中SBP和DBP的顯著降低。分子量小于3000Da的酪蛋白水解產(chǎn)物級(jí)分的給藥引起自發(fā)高血壓大鼠中SBP和DBP降低至與給藥酪蛋白水解產(chǎn)物后觀察到那些相似的程度。這些變量的降低在給藥這些產(chǎn)物后2小時(shí)達(dá)到峰值。未水解酪蛋白的給藥沒有顯著改變自發(fā)高血壓大鼠(SHR)的SBP并且比之前的化合物將這些動(dòng)物中的DBP降低至更低的程度。這些結(jié)果表明基于急性基礎(chǔ)口服給藥時(shí)，酪蛋白水解產(chǎn)物和分子量小于300Da的酪蛋白水解產(chǎn)物級(jí)分具有明顯的抗高血壓效果。表5:胃蛋白酶水解的牛酪蛋白以及超濾處理后獲得的透過物(〈300Da的部分)和截留物(F〉3000Da)的ACE-抑制活性CI50(pg/ml)%蛋白質(zhì)(p/p)(凱氏法)酪蛋白水解產(chǎn)物52.80.45透過物(F〈3000Da)5.50.03截留物(F〉3000Da)242.03.29為了鑒定負(fù)責(zé)ACE-抑制和抗高血壓活性的肽的目的，超濾后，將透過物接受半制備規(guī)模RP-HPLC的分離處理，其中收集了8個(gè)級(jí)分。乙腈蒸發(fā)后，將這些色譜級(jí)分凍干，并通過二辛可寧酸方法測(cè)定蛋白質(zhì)含量。圖6顯示了色語特征和所獲得的級(jí)分，以及對(duì)于每一種色譜級(jí)分以CIm)給出的ACE-抑制活性值。圖6中稱為F3，F(xiàn)5和F6的級(jí)分是呈現(xiàn)出更高ACE-抑制活性的那些，換句話說，更低的CIso值。使用之前所迷的方法通過在線連接串聯(lián)質(zhì)譜的RP-HPLC(RP-HPLC-MS/MS)分析這些級(jí)分。表5中顯示了所鑒定的主要的肽。表6:從胃蛋白酶水解3小時(shí)的牛酪蛋白的透過物獲得的級(jí)分F3，F(xiàn)5和F6中鑒定的主要活性肽<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>通過固相Fmoc方法化學(xué)合成這些色譜級(jí)分中獲得的主要肽，并通過RP-HPLC-MS/MS證實(shí)其純度。測(cè)定了化學(xué)合成肽的ACE-抑制活性，尤其是序列SEQ.ID.No.12,SEQ.ID.No.13和SEQ.ID.No.3。表6中顯示了以CI5o或抑制50%ACE活性需要的蛋白質(zhì)濃度給出的活性結(jié)果。鑒定的三種主要肽中的至少兩種呈現(xiàn)出有效的ACE-抑制活性。表7:級(jí)分中鑒定的合成肽的ACE-抑制活性<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>實(shí)施例6:水解cts2-酪蛋白獲得的片段SEQ.ID,No.7的模擬胃腸消化后肽的ACE-抑制和抗高血壓活性。之前已經(jīng)在ds2-酪蛋白水解產(chǎn)物中鑒定了PVYRYLSEQ.ID.No.7肽并化學(xué)合成，接受模擬胃腸消化的兩級(jí)水解過程(Alting，A.C.,Meijer,R,J.G.M.,VanBerestijn,E.C.H.IncompleteeliminationoftheABBQSepitopeofbovineserumalbuminundersimulatedgastrointestinalconditionsofinfants.(模擬嬰兒胃腸條件下牛血清白蛋白的ABBOS抗原決定部位的不完全消除)DiabetesCare,1997,20:875-880)。為了該目的，首先用胃蛋白酶(E.C.3.4,4.1,570U/mg蛋白)(Sigma)(酶-底物比例，1:50，p/p)在pH2.0和37。C水解合成肽的水溶液(10mg/ml)90分鐘，此后用CorolasePP⑧(酶-底物比例1:25，p/p)(R6hm，Darmstadt,Germany)在pH7-8和37。C水解2.5小時(shí)。通過在95。C水浴中加熱IO分鐘來中斷反應(yīng)。圖7顯示了用胃蛋白和CorolasePP⑧孵育后，PYVRYL肽SEQ.ID.No.7完全水解。通過RP-HPLC-MS/MS鑒定的主要獲得片段是三肽PVYSEQ.ID.No.15。化學(xué)合成這種肽并測(cè)定其ACE-抑制活性，獲得741.3pM的CIs()值，換句話說，ACE-抑制活性比初始的肽低370倍。通過給藥于SHR來測(cè)定該三肽PVYSEQ.ID.No.15的抗高血壓活性。將肽溶解于蒸餾水中并將lml體積中相應(yīng)的劑量給藥于每只大鼠。圖8顯示出給藥2mg/kg劑量PVYSEQ.ID.No.15和3mg/kg劑量PYCRYL肽SEQ.ID.No.7后不同時(shí)間點(diǎn)SHR大鼠中發(fā)現(xiàn)的SBP和DBP降低，其中顯示出這兩種肽的給藥引起這些動(dòng)物中SBP和DBP的顯著降低。同時(shí)在給藥后2小時(shí)產(chǎn)生PVYSEQ.ID.No.15對(duì)SBP的峰值效果，直至給藥后4小時(shí)也沒有產(chǎn)生PYVRYL肽SEQ.ID.No.7的峰值效果。在SEQ.ID.No.15的情況中，抗高血壓效果的較快發(fā)作可能是由于給藥該序列時(shí)，消除了對(duì)于其在體內(nèi)引起的必須發(fā)生的酶消化過程。這些結(jié)果證明了盡管在原理上SEQ.ID.No.15的抗高血壓活性，但這不能歸因于ACE-抑制活性。重要的是強(qiáng)調(diào)迄今為止至今還沒有描述過PYV肽SEQ.ID,No.15的有效抗高血壓活性。實(shí)施例7:通過水解完整酪蛋白HLPLPLLSEQ.ID.No.l4獲得的片段的模擬胃腸消化后肽的ACE-抑制和抗髙血壓活性。之前已經(jīng)在具有低于3000Da分子量總酪蛋白水解產(chǎn)物部分中鑒定了HLPLPLL肽SEQ.ID.No.14并化學(xué)合成，將其接受模擬胃腸消化的兩級(jí)水解過程(Alting,A.C.，Meijer,R.丄G.M.,VanBerestijn，E.C.H.IncompleteeliminationoftheABBOSepitopeofbovineserumalbuminundersimulatedgastrointestinalconditionsofinfants.(模擬嬰兒胃腸條件下牛血清白蛋白的ABBOS抗原決定部位的不完全消除)DiabetesCare,1997,20:875-880)。為了該目的，首先用胃蛋白酶(E.C.3.4.4.1,570U/mg蛋白)(Sigma)(酶-底物比例,1:50,p/p)在pH2.0和37。C水解合成肽的水溶液(10mg/ml)90分鐘，此后用CorolasePP(酶-底物比例1:25,p/p)(R6hm,Darmstadt,Germany)在pH7-8和37。C水解2.5小時(shí)。通過在95。C水浴中加熱10分鐘來中斷反應(yīng)。圖9顯示出通過RP-HPLC-MS/MS鑒定HLPLPLL肽SEQ.ID.No.14水解后獲得的肽，其對(duì)應(yīng)于HLPLPL六肽SEQ.ID.No.16和HLPLP五肽SEQ.ID.No.l7。HLPLPLSEQ.ID.No.l6是中間片段，而五肽HLPLPSEQ.ID.No.17是對(duì)胃腸酶的作用抗性的并可能是HLPKPLL肽SEQ.ID.No.14的最終蛋白水解產(chǎn)物。測(cè)定HLPLP五肽SEQ.ID,No.17的ACE-抑制活性并發(fā)現(xiàn)21pM的CIso值。相似地，以7mg/kg劑量給藥時(shí)，測(cè)定了水解HLPLPSEQ.ID.No.17獲得的最后的肽在SHR大鼠中的抗高血壓活性。圖10中顯示了SBP和DBP的降低。在這些動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)了SBP和DBP的顯著降低，但是在這種情況中，實(shí)際上抗髙血壓效果至少部分可以歸因于ACE-抑制活性。權(quán)利要求1.生物活性肽，其特征在于a.具有抗微生物活性和/或體外ACE-抑制活性和/或體內(nèi)抗高血壓活性和/或抗氧化活性b.存在于胃蛋白酶水解的乳糖酶酪蛋白酶水解產(chǎn)物中，和c.以下組的氨基酸序列SEQ.IDNo.1，SEQ.IDNo.2，SEQ.IDNo.3，SEQ.IDNo.4，SEQ.IDNo.5，SEQ.IDNo.6，SEQ.IDNo.7，SEQ.IDNo.8，SEQ.IDNo.9，SEQ.IDNo.10，SEQ.IDNo.12，SEQ.IDNo.13，SEQIDNo.14。2.根據(jù)以上權(quán)利要求1的序列SEQ.IDNo.2，SEQ.IDNo.5,SEQ,IDNo.6,SEQ.IDNo.7，SEQ.IDNo.8或SEQ.IDNo.10的生物活性肽其特征在于包括SEQ.IDNo.7，并且源自ots2-酪蛋白。3.源自以上權(quán)利要求2的生物活性肽的生物活性肽，其特征在于SEQ.ID.No.15,并且模擬SEQ.ID.No.7的胃腸消化后獲得端基。4.根據(jù)以上權(quán)利要求1的序列SEQ.ID.No.l,SEQ.ID.No.3,SEQ.ID.No.4或SEQ.ID.No.9的生物活性肽，其特征在于包括SEQ.ID.No.l并且源自(Xsr酪蛋白。5.根據(jù)以上權(quán)利要求1的序列SEQ.ID.No.12,SEQ.IDNo.13的生物活性肽，其特征在于源自a『酪蛋白。6.根據(jù)以上權(quán)利要求1的序列SEQ.ID.No.14的生物活性肽，其特征在于源自p-酪蛋白。7.源自以上權(quán)利要求2生物活性肽的生物活性肽，其特征在于SEQ.ID.No.l6和SEQ.ID.No.17，并且模擬SEQ.ID.No.14的胃腸消化后獲得端基。8.根椐以上權(quán)利要求1至3的生物活性肽，其特征在于呈現(xiàn)出抗革蘭氏陽性細(xì)菌的抗微生物活性。9.根據(jù)以上權(quán)利要求1至3的生物活性肽，其特征在于氨基酸序列SEQ.ID.No.3并呈現(xiàn)出抗革蘭氏陰性細(xì)菌如大腸桿菌的抗微生物活性。10.根椐以上權(quán)利要求1至7的生物活性肽，其特征在于氨基酸序列SEQ.ID.No.l,SEQ.ID.No.7，SEQ.ID.No.12，SEQ.ID.No.13,SEQ.ID.No.l4，SEQ.ID.No.15,SEQ.ID.No.16和SEQ.ID.No.17并呈現(xiàn)出體外ACE-抑制活性。11.根據(jù)以上權(quán)利要求1至7的生物活性肽，其特征在于氨基酸序列SEQ.ID.No.7,SEQ.ID.No.l2，SEQ.ID.No.13，SEQ.ID.No.14,SEQ.ID.No.15,SEQ.ID.No.16和SEQ.ID.No.17并呈現(xiàn)出抗高血壓活性。12.根據(jù)以上權(quán)利要求1至3的生物活性肽，其特征在于氨基酸序列SEQ.ID.No.7并通過氧自由基螯合呈現(xiàn)出抗高血壓活性。13.根據(jù)以上權(quán)利要求1至12的生物活性肽，其特征在于通過化學(xué)或酶合成方法或通過重組方法獲得。14.根據(jù)以上權(quán)利要求13的生物活性肽，其特征在于通過酶水解asl—酪蛋白，a,2-酪蛋白，(3-酪蛋白或完整酪蛋白或不同呈現(xiàn)形式的奶，奶子產(chǎn)品或發(fā)酵奶制品獲得的。15.生產(chǎn)根據(jù)以上權(quán)利要求1-14任一種生物活性肽的方法，其特征在于a.通過水解起始原料獲得，起始原料為含有一種或多種動(dòng)物或植物來源，或來自微生物的蛋白質(zhì)或肽的任何合適底物，優(yōu)選酪蛋白和全奶，其氨基酸序列包括以上權(quán)利要求1中所迷任一種目標(biāo)生物活性肽的氨基酸序列，b.將所述起始原料以合適的濃度溶解或分散于適于蛋白水解酶作用pH的水或緩沖溶液中，c.使用任何能夠破壞起始原料中存在的蛋白質(zhì)并提供目標(biāo)多肽的蛋白水解酶，但是優(yōu)選pH3.0的胃蛋白酶；或用來進(jìn)行底物發(fā)酵的蛋白水解微生物，和d.反應(yīng)時(shí)間為10分鐘至24小時(shí)，但優(yōu)選30分鐘至3小時(shí)。16.生產(chǎn)根據(jù)權(quán)利要求3，7,10，11,13,14中任一種生物活性肽的方法，其特征在于a.通過水解起始原料獲得，起始原料為含有一種或多種動(dòng)物或植物來源，或來自微生物的蛋白質(zhì)或肽的任何合適底物，優(yōu)選酪蛋白和全奶，其氨基酸序列包括以上權(quán)利要求3和7中所述任一種目標(biāo)生物活性肽的氨基酸序列，b.將所述起始原料以合適的濃度溶解或分散于適于蛋白水解酶作用pH的水或緩沖溶液中，C.使用任何能夠破壞起始原料中存在的蛋白質(zhì)并提供目標(biāo)多肽的蛋白水解酶，但是優(yōu)選pH3,0的胃蛋白酶，酶-底物比例3.7/100(p/p)并在37"C進(jìn)行水解；pH7-8的CorolasePP,酶-底物比例l:25p/p,37°C;或用來進(jìn)行底物發(fā)酵的蛋白水解微生物，和d.對(duì)于胃蛋白酶的情況，反應(yīng)時(shí)間為10分鐘至24小時(shí)，但是優(yōu)選30分鐘，對(duì)于CorolasePP的情況，整個(gè)時(shí)間段大約為2.5小時(shí)，通過在95匸的水浴中加熱IO分鐘來中斷反應(yīng)。17.根據(jù)以上權(quán)利要求1至5的生物活性肽，其特征在于，對(duì)于其生產(chǎn)，使用以上權(quán)利要求15中所述的方法。18.根據(jù)以上權(quán)利要求3和7的生物活性肽，其特征在于，對(duì)于其生產(chǎn)，使用以上權(quán)利要求16中所述的方法。19.生物活性制品，其特征在于其含有至少一種以上權(quán)利要求1至7中所述的肽，其是適當(dāng)?shù)拿杆猱a(chǎn)物，其任何級(jí)分或其純化物。20.生物活性肽，其特征在于是以上權(quán)利要求1至14和17，18,19中所述的任一種生物活性制品的藥物學(xué)衍生物或鹽，或混合物。21.藥物組合物，其特征在于包括至少一種根據(jù)以上權(quán)利要求1至14和17至20的具有抗微生物活性和/或體外ACE-抑制活性和/或體內(nèi)抗高血壓活性和/或抗氧化活性的生物活性制品。22.功能性食品添加劑，配料或補(bǔ)充劑，其特征在于包括至少一種根據(jù)以上權(quán)利要求至14和17至20的具有抗微生物，體外ACE-抑制活性和/或體內(nèi)抗高血壓活性和/或抗氧化活性的生物活性制品。23.功能性食品，特征在于包括至少一種根據(jù)以上權(quán)利要求1至14和17至20和22的具有抗微生物，體外ACE-抑制活性和/或體內(nèi)抗高血壓活性和/或抗氧化活性的生物活性制品。24.根據(jù)以上權(quán)利要求21的藥物組合物在制備預(yù)防和/或治療微生物感染的藥物中的用途。25.根椐以上權(quán)利要求21的藥物組合物在制備預(yù)防和/或治療高血壓的藥物中的用途。26.根據(jù)以上權(quán)利要求22的功能性食品添加劑，配料在制備適于預(yù)防微生物感染的功能性食品中的用途。27.根據(jù)以上權(quán)利要求22的功能性食品添加劑，配料在制備適于減輕高血壓的功能性食品中的用途。全文摘要本發(fā)明涉及源自奶蛋白的生物活性制品的生產(chǎn)，該奶蛋白用于生產(chǎn)源自奶蛋白，特別是酪蛋白的生物活性奶制品?？梢酝ㄟ^化學(xué)，生化或通過酶處理從含有其的蛋白質(zhì)獲得本發(fā)明的16個(gè)肽并產(chǎn)生具有抗微生物活性，體外血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑活性和/或抗高血壓活性和/或抗氧化活性的肽。所述營(yíng)養(yǎng)藥物產(chǎn)品適用于食品和制藥工業(yè)中，以水解產(chǎn)物或生物活性肽的形式。文檔編號(hào)A61K38/17GK101305017SQ200680029333公開日2008年11月12日申請(qǐng)日期2006年6月8日優(yōu)先權(quán)日2005年6月8日發(fā)明者A·奎羅斯德爾博斯奎,A·阿萊克桑德里德阿蒂納諾,B·赫南德茨勒德斯馬,I·洛佩茨?？怂共ㄎ魍?I·雷西奧桑徹茨,J·A·戈梅茨魯茨,M·L·阿米戈加里多,M·M·拉莫斯岡扎勒茨,M·康特雷拉斯戈梅茨,M·米古爾卡斯特羅申請(qǐng)人:康斯喬最高科學(xué)研究公司