專利名稱：骨形態(tài)發(fā)生蛋白制劑的制作方法
專利說明骨形態(tài)發(fā)生蛋白制劑 發(fā)明領域 本發(fā)明涉及可凍干的、并且在有機溶劑中穩(wěn)定的蛋白制劑。本發(fā)明也涉及用于植入和控制蛋白局部遞送的蛋白/聚合物藥物遞送裝置。

背景技術(shù)：
骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMPs)是獨特的，因為其誘導間充質(zhì)細胞向骨系細胞分化，并且增強造骨細胞的分化功能。在整形外科中具有很多用途。
骨形態(tài)發(fā)生蛋白(單體和二聚體形式)包括TGF-β超家族因子、BMP-2、BMP4、BMP-6、BMP-7、BMP-12、BMP-14、和重組人生長分化因子5(rhGDF-5)。已經(jīng)采用重組DNA技術(shù)生產(chǎn)用于醫(yī)療用途的rhGDF-5，其也稱作形態(tài)發(fā)生蛋白52(MP52)。首次分離的rhGDF-5的cDNA作為TGF-β超家族成員(Biochem.Biophy.Res.Comm.，Vol.204，No.2.1994)。隨后，高級遺傳工程技術(shù)使得制備MP52成為可能，而且并不破壞其骨形態(tài)發(fā)生活性。
典型地，為了達到骨生長誘導的目的，需要持續(xù)暴露于BMP數(shù)天/星期。因此，BMPs必需與第二種化合物，代表性地是聚合物配制，形成藥物遞送基質(zhì)的形式。蛋白質(zhì)比傳統(tǒng)的無機和有機藥物要大并且更加復雜，除了復雜的三維結(jié)構(gòu)外還具有多個功能基團。因此，用于治療用途的這樣蛋白制劑，要具有合適劑量形式則存在特殊問題。對于一種蛋白質(zhì)，如rhGDF-5，要想保留其生物活性，制劑必需至少保持蛋白質(zhì)氨基酸核心序列的構(gòu)象完整性，同時保護蛋白質(zhì)的多個功能基團免于降解。
蛋白/聚合物藥物遞送制劑中的聚合物基質(zhì)不僅提供控制蛋白質(zhì)定量釋放速度的機制，而且更重要地，保護未釋放蛋白質(zhì)不與體液直接接觸，所述接觸可降解蛋白質(zhì)。
在經(jīng)歷了制備蛋白/聚合物藥物遞送制劑所需要的制備步驟之后，要保持其生物活性是富有挑戰(zhàn)性的。通常用于混合熱塑性聚合物的高溫經(jīng)常使蛋白變性。因此，經(jīng)常在聚合物/溶劑溶液中混合蛋白質(zhì)制備蛋白/聚合物藥物遞送制劑，其中的溶劑是聚合物的溶劑?；旌喜襟E后接著進行去除溶劑的步驟，得到最終的蛋白/聚合物制劑。
通常，然而，將蛋白質(zhì)暴露于有機溶劑可使蛋白質(zhì)降解。降解蛋白質(zhì)的途徑包括化學不穩(wěn)定性(也就是任何通過健形成或斷裂修飾蛋白質(zhì)形成新的化合物實體的過程)或物理不穩(wěn)定性(也就是蛋白質(zhì)高級結(jié)構(gòu)的變化)?；瘜W不穩(wěn)定性起因于脫酰胺作用、(外)消旋作用、水解、氧化、β消除或二硫化物替換。物理不穩(wěn)定性起因于變性、聚集和沉淀，或例如，吸收。三種最通常的蛋白質(zhì)降解途徑是蛋白聚集、脫酰胺和氧化作用。因此，溶劑環(huán)境穩(wěn)定劑對于保持暴露于有機溶劑時蛋白的穩(wěn)定是至關重要的。
在不存在溶劑環(huán)境穩(wěn)定劑時，rhGDF-5在暴露于有機溶劑如二烷和二氯甲烷后顯著降解(化學和物理地)。例如，當有機溶劑是二烷時，由RP-HPLC和非還原條件下十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)觀察到，這種降解是由于聚集或沉淀和非特異位點的氧化作用。暴露于二烷的rhGDF-5樣品與溫育在0.1％過氧化物溶液中的rhGDF-5樣品具有相似的RP-HPLC層析峰圖譜。非還原條件下SDS-PAGE檢查這些樣品時，只觀察到對應于完整rhGDF-5的單一條帶，顯示物理聚集是沉淀的原因。
對于長期儲存，蛋白質(zhì)在干燥狀態(tài)時通常具有更好的穩(wěn)定性。冷凍-干燥或凍干法，是保存蛋白質(zhì)普遍采用的技術(shù)，這兩項技術(shù)均是從所需蛋白質(zhì)制劑中去除水分。凍干法是使材料干燥的一種方法，首先將材料冷凍，然后通過在真空環(huán)境中升華將冰或冷凍溶劑除去。
然而，冷卻和干燥過程本身可造成壓力導致蛋白質(zhì)降解。二聚物和其他非溶性蛋白聚集物表明，物理(非-共價)聚集，也導致蛋白損失。因此，在預凍干制劑中必需包含凍干保護劑以增強冷凍-干燥過程中的穩(wěn)定性和/或提高儲存中凍干產(chǎn)品的穩(wěn)定性。
當?shù)鞍妆┞队谌軇r，會變性(解折疊)形成不可逆的聚集。變性蛋白趨向于更易于受不可逆化學過程如蛋白水解、氧化和脫酰胺作用的影響，從而造成蛋白生物活性的損失。
因此，本發(fā)明的一個目的是提供可凍干的、并且在有機溶劑中穩(wěn)定的骨形態(tài)發(fā)生蛋白制劑。凍干制劑在正常儲存條件下穩(wěn)定貯存。進一步的目的是提供在有機溶劑環(huán)境中穩(wěn)定的骨形態(tài)發(fā)生蛋白穩(wěn)定制劑，所述有機溶劑環(huán)境適于構(gòu)成植入和控制所述蛋白局部遞送的聚合基質(zhì)。
發(fā)明概述 本發(fā)明是蛋白制劑。所述制劑包含骨形態(tài)發(fā)生蛋白、凍干保護劑，和一定量的有效穩(wěn)定制劑中骨形態(tài)發(fā)生蛋白的氧化/還原穩(wěn)定劑。
令人驚奇地，蛋白制劑中添加氧化/還原穩(wěn)定劑能顯著增強制劑中骨形態(tài)發(fā)生蛋白的穩(wěn)定性，相對于無氧化/還原穩(wěn)定劑時獲得的穩(wěn)定性。增強的穩(wěn)定性吸大的提高了制劑的治療效果。
在另一個實施方案中，本發(fā)明是遞送蛋白的醫(yī)學裝置。該裝置包括聚合基質(zhì)和摻入到聚合基質(zhì)中的蛋白質(zhì)制劑。所述蛋白制劑包含骨形態(tài)發(fā)生蛋白、凍干保護劑，和一定量的有效穩(wěn)定醫(yī)學裝置中所述蛋白的氧化/還原穩(wěn)定劑。
仍在另一個實施方案中，本發(fā)明是醫(yī)學裝置的涂層。該涂層包括聚合基質(zhì)和摻入到聚合基質(zhì)中的蛋白質(zhì)制劑。所述蛋白制劑包含骨形態(tài)發(fā)生蛋白、凍干保護劑，和一定量的有效穩(wěn)定涂層中所述蛋白的氧化/還原穩(wěn)定劑。
本發(fā)明的蛋白制劑、醫(yī)學裝置和醫(yī)學裝置的涂層可用于所有需要骨生長誘導的應用中，特別是整形外科中。
發(fā)明祥述 可用于本發(fā)明的制劑中的骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMPs)包括，但不限于，TGF-β超家族因子、BMP-2、BMP-4、BMP-6、BMP-7、BMP-12、BMP-14、和重組人生長分化因子5(rhGDF-5)。優(yōu)選的BMP是rhGDF-5，其也稱作形態(tài)發(fā)生蛋白52(MP52)。制備MP52的方法產(chǎn)生的產(chǎn)物是在溶液中的形式。可商業(yè)購買溶液，其濃度至高達4.2mg/ml。
凍干保護劑增強冷凍-干燥過程中BMP的穩(wěn)定性。其也提高凍干產(chǎn)品在儲存過程中的穩(wěn)定性。因此，其必需包括在預冷凍制劑中。用于本發(fā)明制劑中的凍干保護劑包括，但不限于，甘露醇、蔗糖、海藻糖和其混合物。在一個優(yōu)選的實施方案中，用于本發(fā)明的凍干保護劑是甘露醇。在最優(yōu)選的實施方案中，凍干保護劑是甘露醇和蔗糖的混合物。本發(fā)明制劑中骨形態(tài)發(fā)生蛋白與凍干保護劑的重量比是約1∶10到約1∶40。優(yōu)選地，重量比是約1∶25到約1∶35。
氧化/還原穩(wěn)定劑降低蛋白對不可逆化學過程如蛋白質(zhì)水解、氧化和脫酰胺作用的易感性，所述過程造成蛋白生物活性的損失。這可發(fā)生在制劑最后滅菌過程中。我們已經(jīng)證實這些穩(wěn)定劑增加蛋白的穩(wěn)定性。用于本發(fā)明制劑中的氧化/還原穩(wěn)定劑包括，但不限于，牛血清白蛋白(BSA)、甲硫氨酸、L-精氨酸、組氨酸和環(huán)糊精。本發(fā)明制劑中骨形態(tài)發(fā)生蛋白與氧化/還原穩(wěn)定劑的重量比是約1.2∶1到約1∶30。優(yōu)選地，該重量比是約1∶3到約1∶15。
溶劑環(huán)境穩(wěn)定劑可加入到本發(fā)明的制劑中。所述穩(wěn)定劑有助于在蛋白接觸有機溶劑時保持其穩(wěn)定性。用于本發(fā)明制劑中的溶劑環(huán)境穩(wěn)定劑包括，但不限于，聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯。優(yōu)選地，用于本發(fā)明中的溶劑環(huán)境穩(wěn)定劑是聚氧乙烯20去水山梨糖醇單油酸酯表面活性劑，商品名是吐溫80(ICI AmericasInc.，Bridgewater NJ)。本發(fā)明制劑中骨形態(tài)發(fā)生蛋白與溶劑環(huán)境穩(wěn)定劑的重量比是約7∶1到約1∶7。優(yōu)選地，該重量比是約1∶1到約1∶2。
理想地，將MP52貯存液(通常冷凍在-80℃)慢慢解凍到約4℃。其他等級組分的貯存液的制備就是在去離子水中簡單混合，其中的等級如美國藥典等級(USP)或歐洲藥典等級(PhEur)。將MP52貯存液，和凍干保護劑和氧化/還原穩(wěn)定劑的溶液吸入凍干瓶中。簡短地使溶液形成旋渦以保證均一性，然后放入冷凍干燥器中，進行合適的冷卻和初級干燥和二級干燥循環(huán)。理想的冷凍干燥循環(huán)是-40℃下初級干燥約10小時，接著順序在15℃、40℃下進行二級干燥，總共另外8小時。干燥過程中，真空維持在100mTorr。冷凍干燥后，通常形成無任何收縮和崩解跡象的干燥餅。白色片狀餅的玻璃轉(zhuǎn)化溫度通常在60℃以上，殘留水含量低于按重量計的3％。優(yōu)選地含水量為約1％。
不易受有機溶劑影響的骨形態(tài)發(fā)生蛋白的穩(wěn)定制劑，適合于構(gòu)造蛋白/聚合物藥物遞送裝置，所述裝置用于植入和控制所述蛋白的局部遞送。這樣的醫(yī)學裝置的特征在于具有聚合基質(zhì)和摻入其中的蛋白質(zhì)制劑。這些裝置包括膜、三維基質(zhì)和微粒。穩(wěn)定的蛋白制劑也用作許多類型的植入醫(yī)學裝置的涂層。在一相似的方式中，這些涂層具有聚合基質(zhì)以及摻入其中的蛋白制劑。
在膜的情況時，將本發(fā)明的制劑與聚合物溶液混合，然后將混合物鑄模形成膜。在去除溶劑后，聚合膜可植入到需要蛋白質(zhì)的局部位置，所述蛋白從聚合基質(zhì)中釋放長達數(shù)周，仍舊保留生物活性。另外，所述膜包含至少一種成孔試劑，或致孔劑，其在植入前、植入過程中或植入后被去除產(chǎn)生多孔的膜以有助于釋放蛋白質(zhì)。
對于制備微粒，制劑被包裹在聚合物顆粒中，要么通過傳統(tǒng)的水相/油相/水相(W/O/W)雙層乳劑，要么通過旋轉(zhuǎn)盤的方法，其中通過多種物理手段在盤周圍霧化所述聚合物溶液。制劑也可封裝入聚合顆粒中，然后研磨。微粒也可在存在致孔劑的情況下制備。
本發(fā)明的制劑也可用作多種植入醫(yī)學裝置上的蛋白/聚合物涂層。可包被本發(fā)明的蛋白/聚合物涂層的裝置包括，但不限于，縫合線、針、整形外科的大頭針、夾子、螺絲釘、盤子、回形針、U形釘、牽引鉤、按鈕、摁扣、手術(shù)器械、脊椎盤、流動移植物、和組織工程應用中的細胞支撐物。
構(gòu)成用于醫(yī)學裝置和涂層的聚合基質(zhì)的聚合物，可以是生物降解的或非生物降解的，其中的醫(yī)學裝置和涂層用于植入和控制所述蛋白的局部遞送。在接觸濕潤的身體組織時，生物降解聚合物易分解為小的片段。然后片段要么被身體吸收，要么排出體外。更具體地，生物降解片段并不會誘發(fā)永久的慢性異物反應，因為其被身體吸收或排出體外，因此體內(nèi)并不會有永久的痕跡或片段殘留。
用于蛋白/聚合物藥物遞送裝置和涂層的生物可降解聚合物和共聚物例子，包括同聚物，如聚(乙交酯)、聚(丙交酯)、聚(ε-己內(nèi)酯)、聚(環(huán)丙烷碳酸酯)、和聚(對-二烷酮(dioxanone))；共聚物如聚(丙交酯-共(co)-乙交酯)、聚(ε-己內(nèi)酯-共-乙交酯)、和聚(乙交酯-共-環(huán)丙烷碳酸酯)，其中所述裝置和涂層用于植入和控制本發(fā)明的所述蛋白的控制局部遞送。這些聚合物可以是統(tǒng)計學上的隨機共聚體、多嵌段共聚物、嵌段共聚物或接枝共聚物。
下述實施例例證了本發(fā)明的原理和實施，但并不僅限于此。包含在本發(fā)明的范圍和精神內(nèi)的無數(shù)其他實施方案對于本領域技術(shù)人員來說是顯而易見的。
實施例1MP52制劑 MP52貯存液(3.5mgMP52/ml 0.01標準HCL水溶液)，獲自BIOPHARMGmbH(Heidelberg，Germany)，分成200微升每批。每200微升MP52貯存液具有0.7毫克MP52。對于每批MP52貯存液，以表1所示的量加入凍干保護劑、氧化/還原穩(wěn)定劑、和溶劑環(huán)境穩(wěn)定劑組合，制備各種制劑。
凍干保護劑是甘露醇(EM Science，Darmstadt，Germany)和蔗糖(Fisher，F(xiàn)akLawn，NJ)。氧化/還原穩(wěn)定劑是甲硫氨酸(Sigma，St.Louis，MO)。溶劑環(huán)境穩(wěn)定劑是TWEEN 80(Sigma，St.Louis，MO)。將制劑混合，并以下述循環(huán)凍干1)-40℃下初級干燥，和2)15℃下二級干燥，其中真空維持在100mTorr?？偟睦鋬?干燥時間約20小時。干燥制劑餅中典型含水量為1％-3％重量。
凍干樣品浸在200微升二氯甲烷(Mallinckrodt Baker Inc.，Phillisburg，NJ)中，真空箱(23℃)中干燥過夜。凍干樣品重新溶解在0.01標準(Normal)HCL水溶液中，通過反相高效液相層析(RP-HPLC)測定蛋白量。HPLC測試使用RP-HPLC系統(tǒng)(Waters，Milford，MA)，所述系統(tǒng)由泵(Model 510)和UV監(jiān)測器(Waters 490E)和自動加樣器(Waters 717 Plus auto sampler)組成。HPLC系統(tǒng)配有C18218TP54 Vydac柱(The Separation Group，Hesperia，CA)。所述柱子用流動相洗脫，其中以設定比例混合乙腈和0.1％三氟乙酸形成梯度模式。
表1顯示各種制劑和RP-HPLC測定的MP52的復蘇(recovery)百分比。
表1.制劑 表1顯示單獨的凍干保護劑(甘露醇和蔗糖)或與溶劑環(huán)境穩(wěn)定劑(吐溫80)的組合顯示MP52復蘇很少(少于50％)至沒有(編號B-0到B-6)。當氧化/還原穩(wěn)定劑(甲硫氨酸)加入到凍干保護劑(單獨或與溶劑環(huán)境穩(wěn)定劑的組合)時，MP52復蘇率提高到超過80％。
實施例2比較氧化/還原穩(wěn)定劑 MP52貯存液(3.5mgMP52/ml 0.01標準(Normal)HCL水溶液)，獲自BIOPHARM GmbH(Heidelberg，Germany)，分成200微升每批。每200微升MP52貯存液具有0.7毫克MP52。對于每批MP52貯存液，以表2-6所示的量加入凍干保護劑、氧化/還原穩(wěn)定劑、和溶劑環(huán)境穩(wěn)定劑的組合，制備各種制劑。
凍干保護劑是甘露醇(EM Science，Darmstadt，Germany)和蔗糖(Fisher，F(xiàn)airLawn，NJ)。氧化/還原穩(wěn)定劑是L-組氨酸、L-精氨酸、環(huán)糊精、牛血清白蛋白(BSA)和甲硫氨酸(所有都來自Sigma，St.Louis，MO)。溶劑環(huán)境穩(wěn)定劑是TWEEN 80(Sigma，St.Louis，MO)。
將制劑如實施例1描述的混合并凍干。干燥制劑餅中典型含水量為1％-3％。如實施例1所描述的，凍干樣品浸在200微升二氯甲烷中，真空箱(23℃)中干燥過夜。凍干樣品重新溶解在0.01標準(Normal)HCL水溶液中，通過反相高效液相層析(RP-HPLC)測定蛋白量。
表2-6顯示各種制劑和RP-HPLC測定的MP52的復蘇(recovery)百分比。
表2.L-組氨酸制劑 表3.L-精氨酸制劑 表4.環(huán)糊精制劑 表5.牛血清白蛋白(BSA)制劑 表6.甲硫氨酸制劑 上述表顯示所有測試的氧化/還原穩(wěn)定劑都能增加MP52復蘇。氧化/還原穩(wěn)定劑甲硫氨酸和BSA顯示最強的MP52復蘇能力。
實施例3甲硫氨酸作為氧化/還原穩(wěn)定劑 制劑包括MP52、凍干保護劑(甘露醇和蔗糖)、氧化/還原穩(wěn)定劑(甲硫氨酸)，和溶劑環(huán)境穩(wěn)定劑(吐溫80)，如實施例1和2所述的混合并凍干。干燥制劑餅中典型含水量為1％-3％。如實施例1和2所描述的，凍干樣品浸在200微升二氯甲烷中，真空箱(23℃)中干燥過夜。凍干樣品重新溶解在0.01標準(Normal)HCL水溶液中，通過RP-HPLC測定蛋白量。表7顯示所述制劑，以及RP-HPLC測定的MP52的復蘇百分比。
表7.甲硫氨酸制劑 表7顯示甲硫氨酸和少量吐溫80的組合能夠有效提高MP52蛋白的復蘇率。此表也顯示高水平的吐溫80是無益處的。
實施例4從聚合物膜中釋放MP52 聚(丙交酯-co-乙交酯)，或50/50PLGA聚合物(Alkermes，Cincinnati，OH)，固有粘度(L.V)為0.25-0.43dl/g，與二氯甲烷在30℃混合制備10％重量百分比的聚合物溶液。一種成孔劑，致孔劑188(BASF，Mt.Olive，NJ)以177.5毫克每5克聚合物溶液的比率加入到聚合物溶液中。致孔劑，也叫作Pluronic F68，是環(huán)氧乙烷和環(huán)氧丙烷的嵌段共聚物。
將凍干制劑餅B-8-8m-2(參見實施例3，表7)研磨成小顆粒。將上述小顆粒與聚合物溶液混合，濃度水平分別為17％重量百分比(高)和5.25％重量百分比(低)，通過溫和旋轉(zhuǎn)以形成均一的懸浮液。將所述溶液倒入TEFLON-包被的模子中，室溫下層流通風櫥中涼干。
干燥的膜用于測試釋放介質(zhì)中MP52的釋放，所述介質(zhì)的組成20mmol醋酸鈉和0.1％牛血清白蛋白(pH4.0)。每個時間點更換釋放介質(zhì)，更換下的釋放介質(zhì)使用如實施例1描述的RP-HPLC測定方法測定MP52。
表8.聚合物膜中MP52的累積釋放 表8顯示從蛋白裝載膜中累積釋放MP52的百分比。此表顯示，在加速釋放條件下，復蘇的MP52是完整的。釋放百分比與裝載蛋白有正的相關性，較高裝載的膜在48小時的加速研究中釋放蛋白約80％，在同一個時間間隔較低裝載膜僅釋放61％。
實施例5包含MP52的微球 制備12單位的制劑，每單位制劑包含2.8mg MP52、分別10mg的甘露醇和蔗糖(凍干保護劑)、6mg甲硫氨酸(氧化/還原穩(wěn)定劑)，和1mg吐溫80(溶劑環(huán)境穩(wěn)定劑)。如實施例1和2所述的依次將制劑混合并凍干。干燥制劑餅中典型含水量為1％-3％。凍干制劑餅研磨成小顆粒。
另外，將8克50/50PLGA聚合物(Alkermes，Cincinnati，OH)，固有粘度(I.V)為0.66-0.80dl/gm，溶解在二氯甲烷中制備5％(w/w)聚合物溶液。
將12單位的制劑通過高速旋轉(zhuǎn)一分鐘而懸浮在聚合物溶液中。
旋轉(zhuǎn)盤裝置如下所述室頂部的溫度設定為58-60℃；底層室的溫度設定為45-47℃，在底層收集顆粒。盤的直徑為3英寸。懸浮蛋白粉的聚合物溶液以150g/min的速率添加到盤上，盤旋轉(zhuǎn)速度為4000rpm。微球從系統(tǒng)霧化后，用旋流器上的玻璃瓶收集微球，使用氮氣將微球從圓盤室吹入玻璃瓶。
篩選微球，收集尺寸小于65微米的微球。復蘇(recover)MP52時，微球放入二氯甲烷中，其從聚合相中溶解，沉淀出MP52。MP52隨后溶解在6M尿素和磷酸鹽緩沖系統(tǒng)(pH＝2.75)中。使用反相高效液相層析(RP-HPLC)如上所述分析測定蛋白量。RP-HPLC分析測定結(jié)果為復蘇的MP52占到微球最初總裝載量的約80％。
權(quán)利要求
1.一種蛋白制劑，包含骨形態(tài)發(fā)生蛋白、凍干保護劑，和一定量的有效穩(wěn)定制劑中骨形態(tài)發(fā)生蛋白的氧化/還原穩(wěn)定劑。
2.權(quán)利要求1的蛋白制劑，其中骨形態(tài)發(fā)生蛋白選自TGF-β超家族因子、BMP-2、BMP-4、BMP-6、BMP-7、BMP-12、BMP-14、和rhGDF-5。
3.權(quán)利要求2的蛋白制劑，其中骨形態(tài)發(fā)生蛋白是rhGDF-5。
4.權(quán)利要求1的蛋白制劑，其中凍干保護劑選自甘露醇、蔗糖和海藻糖。
5.權(quán)利要求4的蛋白制劑，其中凍干保護劑是甘露醇和蔗糖的混合物。
6.權(quán)利要求1的蛋白制劑，其中氧化/還原穩(wěn)定劑選自牛血清白蛋白、甲硫氨酸、L-精氨酸、組氨酸和環(huán)糊精。
7.權(quán)利要求6的蛋白制劑，其中氧化/還原穩(wěn)定劑是甲硫氨酸。
8.權(quán)利要求1的蛋白制劑，其中所述制劑進一步包括溶劑環(huán)境穩(wěn)定劑。
9.權(quán)利要求8的蛋白制劑，其中溶劑環(huán)境穩(wěn)定劑選自聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯和聚氧乙烯20去水山梨糖醇單油酸酯。
10.權(quán)利要求1的蛋白制劑，其中氧化/還原穩(wěn)定劑在制劑中的含量是骨形態(tài)發(fā)生蛋白與氧化/還原穩(wěn)定劑的重量比是約1.2∶1到約1∶30。
11.權(quán)利要求10的蛋白制劑，其中骨形態(tài)發(fā)生蛋白與氧化/還原穩(wěn)定劑的重量比是約1∶3到約1∶15。
12.遞送蛋白質(zhì)的一種醫(yī)學裝置，所述裝置包括聚合基質(zhì)和摻入聚合基質(zhì)中的蛋白制劑，其中的蛋白制劑包含骨形態(tài)發(fā)生蛋白、凍干保護劑、和一定量的有效穩(wěn)定醫(yī)學裝置中所述蛋白的氧化/還原穩(wěn)定劑。
13.權(quán)利要求12的醫(yī)學裝置，其中所述蛋白制劑進一步包括溶劑環(huán)境穩(wěn)定劑。
14.權(quán)利要求12的醫(yī)學裝置，其中的聚合基質(zhì)由生物可降解聚合物組成。
15.權(quán)利要求14的醫(yī)學裝置，其中的生物可降解聚合物選自聚(乙交酯)、聚(丙交酯)、聚(ε-己內(nèi)酯)、聚(環(huán)丙烷碳酸酯)、聚(對-二烷酮(dioxanone))、聚(丙交酯-共(co)-乙交酯)、聚(ε-己內(nèi)酯-共-乙交酯)、和聚(乙交酯-共-環(huán)丙烷碳酸酯)。
16.權(quán)利要求12的醫(yī)學裝置，其中所述裝置的形式是膜、三維基質(zhì)或微粒。
17.一種醫(yī)學裝置的涂層，所述涂層包括聚合基質(zhì)和摻入聚合基質(zhì)中的蛋白制劑，其中的蛋白制劑包含骨形態(tài)發(fā)生蛋白、凍干保護劑、和一定量的有效穩(wěn)定涂層中所述蛋白的氧化/還原穩(wěn)定劑。
18.權(quán)利要求17的涂層，其中所述制劑進一步包括溶劑環(huán)境穩(wěn)定劑。
19.權(quán)利要求18的涂層，其中所述醫(yī)學裝置選自縫合線、針、整形外科的大頭針、夾子、螺絲釘、盤子、回形針、U形釘、牽引鉤、按鈕、摁扣、手術(shù)器械、脊椎盤、流動移植物、和組織工程應用中的細胞支撐物。
全文摘要
可以被凍干、并且在有機溶劑中穩(wěn)定的蛋白制劑。所述制劑包含骨形態(tài)發(fā)生蛋白、凍干保護劑、和氧化/還原穩(wěn)定劑。任選地，所述制劑還包含溶劑環(huán)境穩(wěn)定劑。所述蛋白制劑可以摻入到聚合基質(zhì)中制備用于遞送所述蛋白的醫(yī)學裝置，和醫(yī)學裝置的涂層。
文檔編號A61K38/18GK101198348SQ200680021260
公開日2008年6月11日 申請日期2006年6月5日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月17日
發(fā)明者T·周, C·楊, J·C·吉辛, A·納坦, J·J·哈默 申請人:伊西康公司