專利名稱：：纖維組織誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)用于疝修復(fù)的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及疝修復(fù)領(lǐng)域以及加強或修復(fù)筋膜組織的其它方法。
背景技術(shù)：
：病是結(jié)構(gòu)上的筋膜缺損，例如以腹壁為例，器官或部分器官、組織或部分組織可通過筋膜缺損伸出。通常它包括在通常結(jié)構(gòu)上含有器官或組織的筋膜的減弱、膨出或?qū)嶋H上的撕裂。疝有多種類型。例如，當(dāng)在下腹區(qū)，疝往往包含腹內(nèi)內(nèi)容物，如腸或其它組織，它們進(jìn)入或穿越腹壁的缺損。發(fā)生在腹股溝區(qū)的病至少有兩種，腹股溝病和股病。股病在女性中比在男性中更為常見，涉及通過股環(huán)的組織或器官穿透。腹股溝疝涉及通過腹股溝管表面環(huán)的器官和組織穿透。腹股溝斜病從腹腔內(nèi)環(huán)出發(fā)并下行通過腹股溝管，而直疝從位于黑塞耳巴赫三角的腹股溝管下壁伸出。發(fā)生于腹股溝以外腹壁部位的疝被稱為腹病。腹病的例子包括臍疝和切口病。其它類型的病在外科書上有詳細(xì)的特征描述。已知的疝發(fā)病原因包括肥胖癥、妊娠、緊身衣、身體突然用力例如舉重、咳嗽和腹部損傷。按照全國衛(wèi)生統(tǒng)計中心的數(shù)據(jù)，每年大約有五百萬的美國人患疝病。腹股溝疝在男性中更為普遍，主要是由于睪丸降至陰嚢后在腹股溝中留下無支撐的空間。而發(fā)生于股區(qū)的病，其位于大腿上部，在女性中更為常見，通常是由于妊娠和分娩引起?；颊咄ㄟ^配戴疝帶裝置可以暫時緩解一些疝的癥狀，該裝置能給病所在區(qū)域的腹部施加外部壓力。這種眾所周知并且歷史悠久的治療，即使曾經(jīng)有過，也只能暫時緩解疼痛并可能由于配戴疝帶而導(dǎo)致患者不適。永久解除痛苦一般要求用侵入性外科手術(shù)將脫離正常位置的器官或組織(theoffendingorganortissue),如果有的話，送回原處和正確的部位，隨之力口以^^復(fù)并加強有缺損的筋膜，該筋膜在結(jié)構(gòu)上通常包含器官或組織。此外，網(wǎng)狀補片一直用于修復(fù)結(jié)構(gòu)上形成的開口或洞，內(nèi)臟器官或組織可能通過其伸出。通常，這些補片被永久植入患者體內(nèi)并可導(dǎo)致患者術(shù)后不適。另外，已有報道它們可能包含細(xì)菌，從而導(dǎo)致感染。雖然網(wǎng)狀補片被廣泛用于疝修復(fù)，但復(fù)發(fā)是與它們的用途相關(guān)的頻發(fā)問題。復(fù)發(fā)至少已部分歸因于疝修復(fù)需要的時間長度，其往往不能得到滿足是因為，例如，或者網(wǎng)狀補片在植入患者體內(nèi)一段時間后發(fā)生移位，或者它們在體內(nèi)不能保留到疝修復(fù)所需的足夠時間(例如在應(yīng)用生物可吸收補片時的情況)。發(fā)明概述本發(fā)明涉及刺激患者筋膜組織生長的方法。筋膜是一層或一束纖維結(jié)締組織，其包裹、分離或與肌肉、器官和身體的其它軟結(jié)構(gòu)結(jié)合在一起。刺激筋膜組織生長在例如疝氣治療中是十分重要的，其通常包含筋膜組織的損傷或缺損。此處所述外科植入物和組合物對筋膜組織缺損，例如在腹腔中的疝，包括腹股溝疝(直疝和斜疝)、股疝、切口疝和復(fù)發(fā)疝的修復(fù)十分有用。本發(fā)明特異地提供用于治療筋膜組織缺損的組合物和裝置以及相關(guān)方法，該方法包含纖維組織誘導(dǎo)蛋白，例如股形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)家族成員例如BMP-12、BMP-13或MP-52。這樣的組合物可能還包含組織粘合劑，如纖維蛋白。使用這樣的組合物將導(dǎo)致筋膜更快和/或更有效的修復(fù)。包含一種或更多的纖維組織誘導(dǎo)蛋白(和任選一種或更多的組織粘合劑)的組合物可以直接或通過外科植入物例如網(wǎng)片輸送至有纖維組織缺損的部位。作為另一種選擇，包含一種或更多的纖維組織誘導(dǎo)蛋白的組合物和包含一種維組織缺損的部位。不同大小和形狀的合適的筋膜組織缺損修復(fù)植入物可以,皮鉚定至周圍的健康組織以阻止其遷移。植入物也可以配置成充分封閉并與筋膜缺損例如疝的外壁保持一致。在此還提供制造和使用本發(fā)明的組合物及裝置的方法。本發(fā)明的實施方案包括(但并非限制)如下。治療有效劑量的纖維組織誘導(dǎo)蛋白在制造藥物或哺乳動物筋膜缺損修復(fù)裝置中的用途，其中纖維組織誘導(dǎo)蛋白是(l)與BMP-12、BMP-13或MP-52有至少70%的同一性；或者(2)能夠誘導(dǎo)纖維組織的(1)的片段，其中該纖維組織裔導(dǎo)蛋白是BMP-12、BMP-13和/或MP-52。在制造藥物或哺乳動物筋膜缺損修復(fù)裝置中治療有效劑量的纖維組織誘導(dǎo)蛋白的用途，其中筋膜缺損與創(chuàng)傷相關(guān)，和/或其中筋膜缺損與疝，例如腹股溝疝或股疝相關(guān)。治療有效劑量的纖維組織誘導(dǎo)蛋白在制造藥物或哺乳動物(例如人)筋膜缺損修復(fù)裝置中的用途，且任選的其中該哺乳動物患有糖尿病。治療有效劑量的纖維組織誘導(dǎo)蛋白在制造藥物或哺乳動物筋膜缺損修復(fù)裝置中的用途，其中藥物還包括組織粘合劑，例如纖維蛋白、纖維蛋白原、凝血酶、抑肽酶、因子VIII和2-辛基氰基丙烯酸酯。治療有效劑量的纖維組織誘導(dǎo)蛋白在制造藥物或哺乳動物筋膜缺損修復(fù)裝置中的用途，其中裝置包括為疝修復(fù)配置的植入物，例如網(wǎng)片，其包含諸如聚丙烯、聚四氟乙烯、聚M曱酸乙酯或聚酯，其中網(wǎng)片包含生物可吸收材料，其中生物可吸收材料是膠原、明膠、角蛋白、層粘連蛋白、纖維蛋白、纖連蛋白、藻酸鹽、透明質(zhì)酸、聚乙醇酸、多聚乳酸、聚乙醇酸交酯(polyglycolide)或其組合；且任選的，其中植入物包含抗粘連復(fù)合物、或粘連屏障，例如化學(xué)修飾的透明質(zhì)酸羧甲基纖維素鈉、或透明質(zhì)酸、或膠原。發(fā)明詳述此處所迷外科植入物、組合物及其使用方法一般與筋膜組織缺損治療，例如疝修復(fù)相關(guān)。更具體而言，外科植入物、組合物及方法使用纖維組織誘導(dǎo)蛋白，例如骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)家族成員如BMP-12、BMP-13或MP-52。證據(jù)顯示某些類型疝(例如成人腹股溝疝)的發(fā)病機理與膠原代謝缺陷有關(guān)，其導(dǎo)致橫肌筋膜變?nèi)酰鹆岁P(guān)于疝的有效修復(fù)以及修復(fù)后復(fù)發(fā)可能性升高的的問題。當(dāng)筋膜已受到創(chuàng)傷時，在使用一種被稱為III型的特殊類型的膠原纖維愈合。因此，從理論上來說并非意在限制，可以推測本發(fā)明的纖維組織誘導(dǎo)蛋白質(zhì)可能有益于修正膠原代謝，從而治療筋膜缺損。大體上，本發(fā)明提供治療筋膜組織缺損的方法，其包括輸送包含纖維組織誘導(dǎo)蛋白的組合物至筋膜缺損位點。這樣的組合物可能還包括組織粘合劑，例如纖維蛋白。組合物可以被直接輸送到病的部位或通過使用可植入的裝置，例如適合于筋膜組織缺損修復(fù)的外科植入物。外科植入物、組合物及方法詳述如下。纖維組織i秀導(dǎo)蛋白用于本發(fā)明的組合物、植入物及其使用方法中的纖維組織誘導(dǎo)蛋白是選自i皮稱為轉(zhuǎn)化生長因子[5(TGF-p)超家族的蛋白質(zhì)家族。該家族包括活化素、抑制素和骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)。某些骨形態(tài)發(fā)生蛋白在誘導(dǎo)纖維組織生長中特別有用。在優(yōu)選的實施方案中，其纖維組織誘導(dǎo)蛋白是從BMP-12、BMP-13和MP-52(也分別稱為GDF-7，GDF-6和GDF-5)中選擇，它們在BMP家族中形成蛋白質(zhì)亞類。BMP-12、BMP-13和MP-52的核苷酸和蛋白質(zhì)序列公布于美國專利號5，658，882且其數(shù)據(jù)庫登錄號見表1。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>其它的BMP和TGF-p家族成員的核苷酸和蛋白質(zhì)序列在本領(lǐng)域中是眾所周知的。其它可能對筋膜組織缺損修復(fù)有用的候選蛋白質(zhì)也可以用此處所述的一種或更多的用于評估疝修復(fù)的測定進(jìn)行鑒定，例如通過測量添加候選蛋白質(zhì)情況下的組織整合強度，或通過測量體外或體內(nèi)細(xì)胞的膠原(特別是III型膠原)部分來評估疝修復(fù)。BMP-13和MP-52彼此之間有86%的同一性，且與BMP-12有80%的同一性，而與TGF-p超家族中下一個同源性最高的成員BMP-2之間僅有57%的同一性。(例如參見美國專利號46,096,506的圖4)。因此，可以預(yù)期，與BMP-12、BMP-13和MP-52中任意一種至少有大約70%同一性的蛋白質(zhì)將具有所要求的纖維組織誘導(dǎo)活性。因此，一些實施方案包含纖維組織誘導(dǎo)蛋白的使用，其與BMP-12、BMP-13或MP-52有諸如70%、75%、80%、85%、卯％、95%、98%或99%的同一性。這樣的蛋白質(zhì)可以通過基因工程改造，例如通過突變或缺失許多非保守的氨基酸殘基，例如，當(dāng)序列比對時，那些在小鼠和人的相應(yīng)序列(或其它物種)之間不同的殘基，或者那些在BMP-12、BMP-13和MP-52的任何兩種之間不同的殘基。天然序列中保守氨基酸的替代也是可以期待的。備選的，這樣的同源或修飾的蛋白質(zhì)的片段以及天然纖維組織誘導(dǎo)蛋白的片段，其保留纖維組織誘導(dǎo)活性，可應(yīng)用于本發(fā)明使用的方法中。纖維組織誘導(dǎo)蛋白可以或通過重組產(chǎn)生或從天然資源中純化得到。在優(yōu)選的實施方案中，此類蛋白質(zhì)是人源的并且是重組的。蛋白質(zhì)重組生產(chǎn)的方法是眾所周知的，且如美國專利號5,658,882所述。在一些實施方案中，能用于在此所述的組合物和植入物中的纖維組織誘導(dǎo)蛋白的有效劑量，是其足夠使治療對象的筋膜修復(fù)速度比相應(yīng)的缺乏組織纖維誘導(dǎo)蛋白時的修復(fù)快10%、20%、30%、50%或者快更多的劑量，并且一般依賴于待修復(fù)的筋膜缺損的大小和性質(zhì)和/或所用植入物的表面積。在其它的實施方案中，纖維組織誘導(dǎo)蛋白的有效劑量是其足夠刺激筋膜組織以高于缺乏纖維組織誘導(dǎo)蛋白時的10%、20%、30%、50%或者更快的速度生長的劑量。一般地，用于修復(fù)筋膜缺損和/或刺激筋膜組織生長，每立方厘米的材料所需蛋白質(zhì)的量在0.001至10mg、0.01至1mg或0.1至0.5mg的范圍內(nèi)。在一些情況中，可以從應(yīng)用于網(wǎng)片中的組合物的蛋白質(zhì)濃度推斷其所需劑量。例如，應(yīng)用于網(wǎng)片的組合物可能包含一種或多種纖維組織誘導(dǎo)蛋白，其濃度從0.001至10mg/ml、從0.01至1.0mg/ml或從0.1至0.5mg/ml。例如，如果一個網(wǎng)片體積為l立方厘米，并能吸收等量的液體，為達(dá)到100%的浸泡裝載量需將1ml組合物加到網(wǎng)片上。浸泡裝載量可以從25%至200%、從50%至150%、或從75%至100%改變。具體的劑量需要通過所表現(xiàn)的臨床指征以及通過多種患者變量(如體重、年齡、性別)和臨床表現(xiàn)(如:筋膜缺損的程度和/或位點等)來確定。組織粘合劑用于本發(fā)明的組合物和外科植入物的組織粘合劑包括纖維蛋白、纖維蛋白原、凝血酶、抑肽酶和因子VIII?？缮藤彽慕M織粘合劑包括TISSEEL(纖維蛋白原；BaxterHealthcareCorp.,Deerfield,IL)和DERMABONDTM(2-辛基氰基丙烯酸酯；Ethicon，Somerville，NJ)。這些粘合劑可以直接與纖維組織誘導(dǎo)蛋白結(jié)合或者在纖維組織誘導(dǎo)蛋白使用之前或者之后或者同時使用。此類粘合劑也可以如纖維組織^l"導(dǎo)蛋白所述的同樣方法與外科植入物合為一體。包含組織粘合劑的組合物也可以用于刺激筋膜組織生長。在一些實施方案中，組織粘合劑，單獨或與至少一種纖維組織誘導(dǎo)蛋白組合，在組合物中以糊劑或凝膠的形式被輸送。其它添加劑此處所述可以用于組合物和外科植入物中的添加劑包括，但不限于，可用于制藥的鹽、多糖、肽、蛋白質(zhì)、氨基酸、合成高分子、天然高分子和/或表面活性劑。有助于減少或預(yù)防周圍組織和器官與外科植入物粘連的添加劑是特別有用的，并在此處被稱為抗粘連化合物。這樣的添加劑的非限制性的實例包括，例如化學(xué)修飾的透明質(zhì)酸羧甲基纖維素鈉(用激活劑l一(3-二曱氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸化物(EDC)修飾的且可作為SEPRAFILM⑧粘連屏障(GenzymeCorp.,Cambridge,MA)商購的)、透明質(zhì)酸和膠原。在一些實施方案中，在此所述的組合物和外科植入物包含抗微生物劑，例如抗生素。施用抗生素是為了預(yù)防感染?？捎玫目股匕ǎ幌抻赥YGACIL(替加環(huán)素(tigecycline);Wyeth,Madison，NJ)、頭孢菌素如頭孢唑啉和羥唑頭孢菌素(cephamandol)、奈替米星、青霉素類例如苯唑西林或美洛西林、四環(huán)素、甲硝唑或氨基糖苷類如慶大霉素或新霉素和利福平。一般地，每立方厘米材料所需抗生素的用量范圍在0.001至10mg、0.01至1mg、或0.1至0.5mg之間。與粘合劑相似，這些添加劑可以與纖維組織誘導(dǎo)蛋白直接結(jié)合，或在纖維組織誘導(dǎo)蛋白使用之前、之后或同時應(yīng)用到筋膜缺損部位。也可以與所述纖維組織誘導(dǎo)蛋白同樣的方法將添加劑摻入外科植入物。在本發(fā)明的方法中有用的組合物可以直接傳遞到筋膜缺損部位?？蓪⑺鼈儜?yīng)用(如注入)于缺損部位，否則該缺損需用傳統(tǒng)的外科技術(shù)^^復(fù)。此類組合物也可以與用其處理過的外科植入物結(jié)合使用。做為另一種選擇，此處述及的組合物可以在外科植入物放至患處之前或之后被應(yīng)用于受到影響的部位。外科植入物用于疝修復(fù)的外科植入物一般包括網(wǎng)片或其它的結(jié)構(gòu)支持工具。植入物具有能夠以時間依賴的方式釋放蛋白質(zhì)并為疝修復(fù)提供結(jié)構(gòu)支持的結(jié)構(gòu)。外科植入物可能包括至少一種纖維組織誘導(dǎo)蛋白和任選的至少一種組織粘合劑。外科植入物可以用任何的方法處理，只要該方法允許纖維組織誘導(dǎo)蛋白被輸送到患者的筋膜缺損部位點。例如，可通過在纖維組織誘導(dǎo)蛋白溶液中浸漬或浸泡例如，從1分鐘到1小時，10分鐘到45分鐘或15分鐘到30分鐘的方法，用纖維組織誘導(dǎo)蛋白包被網(wǎng)片。例如用這樣的溶液對網(wǎng)片噴霧也可以成功包被網(wǎng)片。然而在其它實施方案中，可通過化學(xué)交聯(lián)的方法使網(wǎng)片被纖維組織誘導(dǎo)蛋白質(zhì)所飽和。能夠用作外科植入物的網(wǎng)片包括，例如聚丙烯網(wǎng)片(PPM)，它被廣泛用'需的支持。其它的例子包括膨體聚四氟乙烯(ePTFE)、sepramesh生物外科組合物、聚對苯二甲酸乙二酯(PET)和鈦。理想的網(wǎng)片特性包括，但不限于惰性、在植入位點抗感染，分子的滲透性、柔軟性、透明性、機械完整性和強度以及生物相容性。植入物可能有一個背表面和內(nèi)表面。背表面是植入物遠(yuǎn)離筋膜缺損向外的部分，而內(nèi)表面是向內(nèi)面對缺損的部分。在植入之前，此處述及的一些植入物可能，在無壓力狀態(tài)下，呈現(xiàn)平面或扁平的形狀；或可能在一個或多個表面呈現(xiàn)凹和/或凸的形狀。然而在其它的實施方案中，植入物包括海綿形式的網(wǎng)片，例如，它浸漬或浸泡于包含纖維組織誘導(dǎo)蛋白的組合物及任意的組織粘合劑中，以便組合物完全滲透海綿的小孔。這樣的海綿既可由合成材料，例如聚乙烯醇制成或由生物可吸收材料例如膠原、明膠、角蛋白、層粘連蛋白、纖維蛋白或纖連蛋白制成。實例包括HELISTAT、HELITENE和VITAGUARD(IntegraLifeSciences,Plainsboro，NJ)和ULTRAFOAM(Davol，Inc.,Cranston,RI)。在某些例子中，優(yōu)先選用只在患者體內(nèi)暫時存在的生物可吸收的海綿。此處述及的網(wǎng)片和海綿也可以其它的術(shù)語來稱謂，例如襯墊或紗布等等。在某些實施方案中，植入物可能是柔韌到足以讓外科醫(yī)生操作使植入物與手術(shù)位點相一致和/或在腹腔鏡檢查操作中易于輸送。然而，在某些情況下，可能優(yōu)選限制植入物的壓縮和/或膨脹的更嚴(yán)格的安排。在某些實施方案中植入物可能是可折疊的，例如通過折疊、巻曲或其它的方式可折疊成細(xì)長的結(jié)構(gòu)，以便其能通過腹腔鏡檢查裝置的狹窄管腔進(jìn)行輸送。植入物的柔韌性受多種因子影響，包括制造植入物的材料、對植入物的處理或植入體的其它任何特性。網(wǎng)片植入物可能或包括單塊網(wǎng)片或由兩塊或多塊網(wǎng)片結(jié)合或重疊形成。在某些實施方案中，將網(wǎng)片配置成能連續(xù)地輸送至少一種纖維組織誘導(dǎo)蛋白和任意的至少一種組織粘合劑到患者的筋膜缺損部位，從而導(dǎo)致缺損修復(fù)?？深A(yù)期的是網(wǎng)片能配置成連續(xù)的，例如大約15天、20天和30天輸送至少一種纖維組織誘導(dǎo)蛋白。然而，時間長度應(yīng)依據(jù)所修復(fù)缺損的程度和部位、患者年齡和外科醫(yī)生一般考慮的其它臨床參數(shù)而變化。在本發(fā)明的方法中所使用的外科植入物可能是已消毒并封裝于包裝袋中直到外科操作應(yīng)用時才打開的制成品?？梢詰?yīng)用任何適當(dāng)?shù)南痉椒?，包括常?guī)的物理或化學(xué)的方法或用離子輻射，例如y或P射線處理。輸送方法此處所述的外科植入物和組合物可以用于外科醫(yī)生修復(fù)筋膜缺損的任何外科操作中。在一些實施方案中，在患者的疝部位開一個切口，并將此處述及的外科植入物插入以覆蓋缺損區(qū)域。在其它的實施方案中，使用腹腔鏡檢查的方法給患者安放外科植入物。筋膜組織缺損修復(fù)可以通過全身麻醉、區(qū)域麻醉或局部麻醉來完成。局部麻醉的一些優(yōu)點包括短的恢復(fù)時間以及手術(shù)中能夠測試修復(fù)的情況。另外，局部麻醉能避免全身麻醉對呼吸和免疫系統(tǒng)的抑制效應(yīng)。如前所述，此處述及的組合物可以被直接應(yīng)用于筋膜缺損部位、注射到缺損部位或在外科植入物放置到筋膜缺損部位之前或之后應(yīng)用。在一些實施方案中，此處述及的組合物可以用于與覆蓋筋膜缺損的網(wǎng)片結(jié)合，在結(jié)構(gòu)上正常情況下筋膜容納器官或組織，例如腹壁。例如，可用適合施用組合物到達(dá)或接近病部位的裝置將包含纖維組織誘導(dǎo)蛋白和任意組織粘合劑的組合物輸送至疝部位。這樣的輸送方式將在植入患者體內(nèi)之前不再需要在組合物中處理或浸泡網(wǎng)片或其它外科植入物。多種疝修復(fù)方法和適用于疝修復(fù)的植入物是已知的并已在諸如美國專利號5,176,692、5,569,273、6，800，0825，824，082、6,166,286、5，2卯，217和5,356,432中述及。一般而言，這樣的裝置包括(a)用于受試者筋膜缺損修復(fù)的網(wǎng)片樣部件，以及任選的(b)將網(wǎng)片樣部件固定到筋膜部位的方法。本發(fā)明的裝置是獨特的，其中外科植入物或網(wǎng)片樣的部件包含治療有效劑量的一種或多種纖維組織誘導(dǎo)蛋白以及任選的一種或多種組織粘合劑。用途型中進(jìn)行筋膜組織缺損修復(fù)測試。例如，可以按照Uen教導(dǎo)的豬腹股溝病復(fù)應(yīng)力負(fù)荷試驗測試疝修復(fù)強度，"ComparativeLaparoscopicEvaluationofthePROLENEpolypropyleneherniasystemvs.thePerFixplugrepairinaporcinegroinherniarepairmodel"，/.丄a/flroewfifosc.Jt/v.7>cA.14(6):368-73(2004)。還能如Berndsen等人所教導(dǎo)的，用光學(xué)顯微鏡對疝周圍的其它結(jié)構(gòu)的健康狀態(tài)進(jìn)行評估，"DoesmeshimplantationaffectthespermaticcordstructuresafteringuinalherniasurgeryAnexperimentalstudyinrats",Eur.Surg.Res.36(5):318畫22(2004)。可以預(yù)期，除了修復(fù)病和刺激筋膜組織生長之外，本發(fā)明的方法也能應(yīng)用于修復(fù)與諸如結(jié)腸手術(shù)、直腸手術(shù)、整形外科手術(shù)、創(chuàng)傷手術(shù)、血管手術(shù)、骨盆底修復(fù)或傷口相關(guān)的筋膜組織損傷，以及由長期疲勞和不動導(dǎo)致的筋膜缺損。因此，可以使用本發(fā)明治療多種類型的筋膜缺損，包括例如重癥病、復(fù)發(fā)疝、在患有糖尿病或與受損的傷口愈合有關(guān)的其它病癥患者中的疝，或在患有糖尿病或與受損的傷口愈合有關(guān)的其它病癥患者中的任何其它的筋膜缺損。下列實施例是對本發(fā)明的說明而不是以任何方式進(jìn)行限制。修飾、變化和小改進(jìn)是可以預(yù)期的并在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。實施例在后面的實施例中用到下述的材料和方法。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解盡管在實施例中應(yīng)用BMP-12,能夠以類似的方式用于BMP-13、MP-52和任何其它的纖維組織誘導(dǎo)蛋白。類似地，其它組織粘合劑和外科植入物可以替代在實施例中描述的那些材料。在下面的實施例中使用多種網(wǎng)片作為外科植入物，其包括Bard網(wǎng)片，它們是聚丙烯網(wǎng)片(PPM)和BardComposix網(wǎng)片，它有兩層PPM和一層膨體聚四氟乙烯以使組織與網(wǎng)片(Davol，Inc.,Cranston,RI)的粘連降到最低程度。jt匕夕卜，還用至!jsepramesh生物夕卜科纟且合物(GenzymeSurgicalProducts,Cambridge,MA)，它包括以化學(xué)修飾的透明質(zhì)酸/羧甲基纖維素鈉(HA/CMC)包被的PPM。此處述及的可用作外科植入物的生物可吸收網(wǎng)片的實例包括保麗格來丁偉克合網(wǎng)片(Ethicon，Somerville，NJ)?？捎米魍饪浦踩胛锏亩喾N生物可吸收海綿包括膠原海綿HELISTAT和HELITENE⑧(Integra,Plainsboro,NJ)以及ULTRAFOAM⑧(Davol，Inc.,Cranston,Rl)。最后，利用組織粘合劑TISSEEL(BaxterHealthcareCorp.,Deerfidd，IL)來制備包含TISSEEL⑧和rhBMP-12的組合物。A.用于疝^"復(fù)的外科植入物的制備可以理解的是當(dāng)前能獲得的任何網(wǎng)片和/或海綿都能用作外科植入物。至于網(wǎng)片，或用包含至少一種纖維組織誘導(dǎo)蛋白如rhBMP-12的組合物將其包被，或用包含至少一種纖維組織誘導(dǎo)蛋白的組合物將其飽和。每一種Bard網(wǎng)片、Bardcomposix網(wǎng)片、sepramesh生物外科組合物以及保麗格來丁偉克合網(wǎng)片，在從制造商處收到之后，用包含rhBMP-12的組合物將其包被。或者包被網(wǎng)片的兩個表面或者僅包被一個表面，例如在植入后背離缺損部位的表面即背面。此外，用抗生素包被網(wǎng)片以預(yù)防網(wǎng)片植入?yún)^(qū)域的感染。合適的抗生素能夠或者包含在與纖維組織誘導(dǎo)蛋白同樣的組合物中或者將其單獨包被到網(wǎng)片上。在一些實例中，網(wǎng)片用包含纖維組織誘導(dǎo)蛋白如rhBMP-12的組合物飽和。這是通過在纖維編織成網(wǎng)片之前將纖維組織誘導(dǎo)蛋白交聯(lián)到網(wǎng)片纖維上來完成的。然而，可以預(yù)期的是，不論用纖維組織誘導(dǎo)蛋白包被或飽和網(wǎng)片，在疝修復(fù)中將沒有區(qū)別。用于外科植入物的海綿或者浸漬于包含至少一種纖維組織誘導(dǎo)蛋白的組合物中，或者能將至少一種纖維組織誘導(dǎo)蛋白交聯(lián)到海綿材料例如膠原上。交聯(lián)可用任何適當(dāng)?shù)慕宦?lián)劑來完成。B.疝動物模型的產(chǎn)生疝動物模型的產(chǎn)生如下所述。動物研究準(zhǔn)則是根據(jù)實驗動物保護(hù)指南(NationalAcademyPress,1996)中所述NIH準(zhǔn)則。成熟的雌性新西蘭白兔(0O;cto/tfg"scwm'cti/Mc),每只重約3.5-4.5公斤，預(yù)先用乙酰丙喚(0.5mg/kg，皮下注射)麻醉。在施用前驅(qū)麻醉10到30分鐘之后，用鹽酸氯胺酮(30mg/kg，肌肉注射)和鹽酸賽拉"秦(xylazinehydrochloride)(10mg/kg，肌肉注射)麻醉動物。對動物進(jìn)行插管和用異氟烷(1.0-3.0%)和氧(1.5-2.0升/分鐘)全身麻醉接著施用丁丙諾啡(0.02-0.05mg/kg，皮下注射)作為止痛劑。每只動物的腹部剃除毛發(fā)并用聚乙烯吡咯酮/碘擦拭并接著進(jìn)行酒精擦拭以做好準(zhǔn)備。在臨近劍狀突起尾部大約2cm處起始開一個10到12cm的皮膚切口并在腹白線周圍切除一段以制造一個5到7cm的包含全層肌肉、腹膜的腹壁缺損。如有需要，夾住動脈以止血。將動物的盲腸從腹腔外翻并用無菌的尼龍外科刷刮擦。直觀上看盲腸分為四段并且每一段刮擦15次至逐步出現(xiàn)點狀出血。隨后將盲腸送回腹腔，該動物即可用于植入外科植入物和灌輸纖維組織誘導(dǎo)蛋白質(zhì)組合物。C.組織學(xué)為了對筋膜缺損修復(fù)進(jìn)行評估，將每一組動物最初缺損周圍的全部組織區(qū)切下并在PBS中于40/。的多聚曱醛(Polysciences,Warrington,PA)固定。用石蠟包埋組織樣本，將其切成5nm厚的切片并用蘇木精和伊紅染色，并進(jìn)行盲分析。記錄下每種網(wǎng)片的細(xì)胞應(yīng)答和組織向內(nèi)生長的形態(tài)特征。D.組織整合強度測定組織整合測定是用于在使用此處描述的多種方法進(jìn)行病修復(fù)之后對組織強度進(jìn)行評估。與植入物的橫軸平行切下大約2x5cm的長條，其包括植入物、組織/植入物接口和動物康復(fù)后的正常組織。用張力計的計力傳感器對每種組織樣本的張力強度進(jìn)行測量。記錄每個樣本的組織/植入物接口失效的最大負(fù)荷。實施例1:用含有纖維組織誘導(dǎo)蛋白的組合物包被的網(wǎng)片，所述組合物為在動物模型中更有效和更牢固的疝修復(fù)而設(shè)計。如上所述準(zhǔn)備好兔子并按照每一種網(wǎng)片Bard網(wǎng)片、Bardcomposix網(wǎng)片和sepramesh生物外科組合物分成兩組。在每種情況下，一組被植入在無菌鹽水中預(yù)7jC合的網(wǎng)片，另一組如上所述被植入包被了包括纖維組織誘導(dǎo)蛋白，rhBMP-12的組合物的網(wǎng)片。在每種情況下，用3-0Prolene以簡單的連續(xù)模式將網(wǎng)片固定到如上所述制造的5x7cm缺損的邊緣。用可吸收縫合線以連續(xù)的表皮下方式使皮下組織閉合。將該動物的插管拔除并讓其在保溫箱中康復(fù)。在六個組(即Bard網(wǎng)片和Bard網(wǎng)片+rhBMP;Bardcomposix網(wǎng)片和Bardcomposix網(wǎng)片+rhBMP-12;以及sepramesh生物外科組合物和sepramesh生物外科組合物+rhBMP-12)的每一組中，一些動物在大約15天被執(zhí)行安樂死，另一些動物在大約20天被執(zhí)行安樂死，且其它的動物在對處理和未處理的網(wǎng)片一段時間的總性能進(jìn)行手術(shù)監(jiān)測，在大約一個月后被執(zhí)行安樂死。用組織學(xué)方法和上述組織整合強度測定來評估每組動物腹部缺損的修復(fù)。在每一組中，可以預(yù)期的是，相對于僅植入網(wǎng)片的動物而言在植入包被rhBMP-12的網(wǎng)片的動物組中病修復(fù)更牢固。實施例2:用包含纖維組織誘導(dǎo)蛋白的組合物處理的外科植入物，所述組合物為在動物模型中更快地進(jìn)行疝修復(fù)而設(shè)計。如上所述準(zhǔn)備好兔子并將其分為兩組。一組兔子被植入PPM網(wǎng)片且另一組兔子^皮植入生物可吸收海綿。具體說來，在一組中，用包含纖維組織誘導(dǎo)蛋白如rhBMP-12的組合物包^皮的PPM網(wǎng)片覆蓋疝缺損，或者如上所述，用無菌鹽水處理的PPM網(wǎng)片覆蓋病缺損。在另一組兔子中，或者用浸泡過包含纖維組織誘導(dǎo)蛋白如rhBMP-12的組合物的膠原海綿覆蓋病缺損，或者用無菌鹽溶液浸泡過的海綿覆蓋疝缺損。在每一組動物中，外科植入物，即PPM網(wǎng)片或生物可吸收海綿被固定到用上述方法制造的5x7cm缺損的邊緣。讓動物康復(fù)并且每一組中一些動物在大約一個月后被執(zhí)行安樂死以評估疝修復(fù)效果。在每一組動物中，可以預(yù)期相對于植入單獨的網(wǎng)片的動物而言，在才直入包被rhBMP-12的網(wǎng)片的動物組中，疝修復(fù)速度更快。實施例3:包含BMP-12的組合物和組織粘合劑，其被設(shè)計為單獨使用或包^L網(wǎng)片時有效。如上所述準(zhǔn)備好兔子并將其分成三組單獨的網(wǎng)片；包含rhBMP-12和TISSEEL⑧的組合物；以及將包含rhBMP-12和TISSEEl/的組合物應(yīng)用于網(wǎng)片。在使用網(wǎng)片組中，用3-0Prolene以簡單的連續(xù)式樣將網(wǎng)片固定到如上所述制造的5x7cm缺損的邊緣。用可吸收縫線以連續(xù)的表皮下結(jié)構(gòu)將皮下組織閉合。將該動物的插管拔除并讓其在保溫箱中康復(fù)。在使用包含rhBMP-12和TISSEEI^組合物的組中，如上所述實施疝修復(fù)手術(shù)并且將rhBMP-12和TISSEEL⑧組合物注入疝部位。用可吸收縫線以連續(xù)的表皮下結(jié)構(gòu)將皮下組織閉合。將該動物的插管拔除并讓其在保溫箱中康復(fù)。在這三個組的每一組中，一些動物在大約15天被執(zhí)行安樂死，另一些動物在大約20天被執(zhí)行安樂死，且其它的動物在手術(shù)監(jiān)測一段時間的治療總性能之后，在大約一個月被執(zhí)行安樂死。用組織學(xué)方法和上述組織整合強度測定對每一組動物腹部缺損的修復(fù)效果進(jìn)行評估。可以預(yù)期，相對于植入單獨的網(wǎng)片的動物而言，在植入包被rhBMP-12和TISSEEL②的網(wǎng)片的動物組中疝修復(fù)速度更快，其次是給予包含rhBMP-12和TISSEEI^的組合物的動物組。按照i)L明書中引用的參考文獻(xiàn)的教導(dǎo)能夠最徹底地理解本說明書，所述參考文獻(xiàn)被整體引入作為參考。說明書中的實施方案提供對本發(fā)明實施方案的解釋，并且不應(yīng)該解釋為本發(fā)明的限制范圍。熟練的技術(shù)人員容易認(rèn)識到本說明書包含很多其它的實施方案。所有的出版物、專利和序列以其整體引入作為參考。對于引用作為參考的材料與本說明書抵觸或不一致的情況，本說明書將替代任何這樣的材料。此處對任何參考材料的引用并非承認(rèn)這樣的參考材料是現(xiàn)有技術(shù)。除非另有說明，本說明書，包括權(quán)利要求書中用到的表示成分量、處理條件等等的任何數(shù)字應(yīng)該被理解為在所有情況中均被術(shù)語"大約"修飾。因此，除非另有說明情況相反，否則數(shù)值參數(shù)是近似值并可能根據(jù)所期望獲得的性質(zhì)而變化。除非另有說明，在一系列的組分前面的術(shù)語"至少"應(yīng)該理解為指該系列中的每一種組分。本領(lǐng)域的技術(shù)人員將能夠僅使用常規(guī)實驗識別或者確定與此處描述的具體實施方案同等的方案。這樣的同等方案將包括在下列權(quán)利要求中。權(quán)利要求1.治療哺乳動物筋膜缺損的方法，該方法包括將包含治療有效量的纖維組織誘導(dǎo)蛋白的組合物施用到筋膜缺損部位。2.權(quán)利要求1的方法，其中纖維組織誘導(dǎo)蛋白是(l)與BMP-12、BMP-13或MP-52有至少70%的同一性；或(2)能夠i秀導(dǎo)纖維組織的(l)的片段。3.權(quán)利要求l的方法，其中纖維組織誘導(dǎo)蛋白是BMP-12。4.權(quán)利要求l的方法，其中纖維組織誘導(dǎo)蛋白是BMP-13。5.權(quán)利要求l的方法，其中纖維組織誘導(dǎo)蛋白是MP-52。6.權(quán)利要求l的方法，其中筋膜缺損與創(chuàng)傷相關(guān)。7.權(quán)利要求l的方法，其中筋膜缺損與疝相關(guān)。8.權(quán)利要求7的方法，其中疝是腹股溝疝或股疝。9.權(quán)利要求l的方法，其中哺乳動物是人。10.權(quán)利要求l的方法，其中哺乳動物患有糖尿病。11.權(quán)利要求1的方法，其中組合物還包含組織粘合劑。12.權(quán)利要求ll的方法，其中組織粘合劑選自由纖維蛋白、纖維蛋白原、凝血酶、抑肽酶、因子VIII和2-辛基氰基丙烯酸酯組成的組。13.權(quán)利要求l的方法，其中使用為疝修復(fù)配置的外科植入物輸送該組合物。14.權(quán)利要求13的方法，其中該外科植入物包括網(wǎng)片。15.權(quán)利要求14的方法，其中網(wǎng)片包括聚丙烯、聚四氟乙烯、聚氨基甲酸乙酯或聚酯。16.權(quán)利要求14的方法，其中網(wǎng)片包含生物可吸收材料。17.權(quán)利要求16的方法，其中生物可吸收材料是膠原、明膠、角蛋白、層粘連蛋白、纖維蛋白、纖連蛋白、藻酸鹽、透明質(zhì)酸、聚乙醇酸、多聚乳酸、聚乙醇酸交酯或其組合。18.權(quán)利要求13的方法，其中外科植入物包含抗粘連化合物或粘連屏障。19.權(quán)利要求18的方法，其中抗粘連化合物是化學(xué)修飾的透明質(zhì)酸羧曱基纖維素鈉、或透明質(zhì)酸、或膠原。20.疝修復(fù)裝置，包括(a)為修復(fù)受試者的筋膜缺損而配置的并且包含治療有效量的纖維組織誘導(dǎo)蛋白的網(wǎng)片樣部件；以及任選的(b)將網(wǎng)片樣部件固定到筋膜部位的方法。21.權(quán)利要求20的裝置，其中纖維組織誘導(dǎo)蛋白是(l)與BMP-12、BMP-13、或MP-52有至少70%的同一性；或(2)能夠誘導(dǎo)纖維組織的(1)的片段。22.治療有效量的纖維組織誘導(dǎo)蛋白在制備用于哺乳動物筋膜缺損修復(fù)的藥物或裝置中的用途。23.權(quán)利要求22的用途，其中纖維組織誘導(dǎo)蛋白是(l)與BMP-12、BMP-13、或MP-S2有至少70%的同一性；或(2)能夠誘導(dǎo)纖維組織的(1)的片段。24.權(quán)利要求22的用途，其中纖維組織誘導(dǎo)蛋白是BMP-12。25.權(quán)利要求22的用途，其中纖維組織誘導(dǎo)蛋白是BMP-13。26.權(quán)利要求22的用途，其中纖維組織誘導(dǎo)蛋白是MP-52。27.權(quán)利要求22的用途，其中筋膜缺損與創(chuàng)傷相關(guān)。28.權(quán)利要求22的用途，其中筋膜缺損與疝相關(guān)。29.權(quán)利要求28的用途，其中疝是腹股溝疝或股疝。30.權(quán)利要求22的用途，其中哺乳動物是人。31.權(quán)利要求22的用途，其中哺乳動物患有糖尿病。32.權(quán)利要求22的用途，其中藥物還包含組織粘合劑。33.權(quán)利要求32的用途，其中組織粘合劑選自由纖維蛋白、纖維蛋白原、凝血酶、抑肽酶、因子vni和2-辛基氰基丙烯酸酯組成的組。34.權(quán)利要求22的用途，其中裝置包括為疝修復(fù)配置的植入物。35.權(quán)利要求34的用途，其中植入物包括網(wǎng)片。36.權(quán)利要求35的用途，其中網(wǎng)片包括聚丙烯、聚四氟乙烯、聚^J^甲酸乙酯或聚酯。37.權(quán)利要求35的用途，其中網(wǎng)片包括生物可吸收材料。38.權(quán)利要求37的用途，其中生物可吸收材料是膠原、明膠、角蛋白、層粘連蛋白、纖維蛋白、纖連蛋白、藻酸鹽、透明質(zhì)酸、聚乙醇酸、多聚乳酸、聚乙醇酸交酯或其組合。39.權(quán)利要求34的用途，其中植入物包括抗粘連化合物或粘連屏障。全文摘要本公開涉及疝修復(fù)和使用包含纖維組織誘導(dǎo)蛋白的組合物刺激筋膜組織生長的方法。在優(yōu)選的實施方案中，外科的疝網(wǎng)片用rhBMP-12飽和。文檔編號A61K38/18GK101171028SQ200680014930公開日2008年4月30日申請日期2006年3月23日優(yōu)先權(quán)日2005年3月24日發(fā)明者H·瑟赫曼,J·H·皮卡爾,J·M·阿查姆褒特申請人:惠氏公司