專利名稱：3－烯基－8－乙基－2,7,12,15,18－五甲基－13－羧酸－17－丙酸氨基酸酰胺、其合成 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸氨基酸酰胺、其合成方法和光動(dòng)力治療藥物，屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
光動(dòng)力療法(Photodynamic therapy，PDT)是一種日趨成熟的新型診療技術(shù)，其主要作用機(jī)理是組織中的光敏劑在有氧的條件下，經(jīng)激光照射后產(chǎn)生大量毒性氧物質(zhì)，損傷組織細(xì)胞，達(dá)到治療的目的。上世紀(jì)70年代末PDT開始用于腫瘤的臨床治療，由于它可以根治早期、原位腫瘤，改善中、晚期腫瘤的癥狀，對(duì)癌前病變也可以進(jìn)行預(yù)防性治療，因此PDT已繼手術(shù)、化療、放療后被列為腫瘤的臨床治療方法之一。近年來，光動(dòng)力療法在一些良性疾病的治療中也顯示了巨大價(jià)值，如治療鮮紅斑痣(顧瑛，等.光動(dòng)力學(xué)療法選擇性治療鮮紅斑痣的臨床研究.中國(guó)激光醫(yī)學(xué)雜志.1992，1(1)6-10.光動(dòng)力療法治療鮮紅斑痣1216例臨床分析.中國(guó)激光醫(yī)學(xué)雜志.2001，10(2)86-89.)和老年性黃斑變性(Treatment of Age-related MacularDegeneration with photodynamic therapy(TAP)study group.Photodynamictherapy of subfoveal choroidal neovascularization in age-related maculardegeneration with verteporfin.Arch Ophthalmol.1999，1171329-1345.)。此外，對(duì)多種良性疾病的治療也在研究當(dāng)中，如動(dòng)脈粥樣硬化、血管成型術(shù)后再狹窄、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、頑固性青光眼、牛皮癬和增殖性瘢痕等等。光敏劑是光動(dòng)力療法的關(guān)鍵，其性質(zhì)決定了治療的效果及應(yīng)用范圍。目前國(guó)內(nèi)外市售光動(dòng)力治療藥物主要為作用光譜匹配不佳和化學(xué)組成不定及有效成分不明的混合卟啉制劑(許德余光動(dòng)力治癌藥物的歷史、現(xiàn)狀、進(jìn)展、問題和前景。中國(guó)激光醫(yī)學(xué)雜志2001，10(1)44-46；2001，10(2)115-118。Michael R.Detty，Scott L.Gibson and Stephen J.WagnerCurrentclinical and preclinical photosensitizers for use in photodynamic therapy.J MedChem 2004，47(16)3897-3915；)。已知紅光區(qū)吸收系數(shù)的大小是一種光敏劑光敏化作用強(qiáng)弱的關(guān)鍵。所以尋找一類結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的、有效成分確定的光動(dòng)力治療藥物具有非常重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
已知紅光區(qū)吸收系數(shù)的大小是一種光敏劑光敏化作用強(qiáng)弱的關(guān)鍵。3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸氨基酸酰胺作為二氫卟吩的衍生物，其在紅光區(qū)的吸收系數(shù)約高于卟啉類化合物一個(gè)數(shù)量級(jí)，且為化學(xué)結(jié)構(gòu)明確的單體，是一類優(yōu)良的光動(dòng)力治療新藥的候選化合物。
本發(fā)明一個(gè)目的是提供3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸氨基酸酰胺。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸氨基酸酰胺的制備方法。
本發(fā)明進(jìn)一步的目的是提供一種光動(dòng)力治療藥物組合物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述化合物在制備光動(dòng)力治療藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的下述通式(III)化合物
其中的R表示-CH2COOH； 3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-18-丙酸甘氨酸酰胺(IV)、3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸天門冬氨酸酰胺(V)、3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸丙氨酸酰胺(VI)、3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸亮氨酸酰胺(VII)、3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸蛋氨酸酰胺(VIII)、3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸色氨酸酰胺(IX)、3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸絲氨酸酰胺(X)等。它們2分別具有下列化學(xué)結(jié)構(gòu)
本發(fā)明提供的3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸氨基酸酰胺的合成方法(1)是以家蠶糞(蠶沙)為基始原料，經(jīng)體積比為20∶80～40∶60丙酮-水混合液提取、濃縮制得粗品葉綠素，粗品葉綠素先后經(jīng)酸和堿降解得到葉綠素a降解產(chǎn)物3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，18-四甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸，1-乙酸，17-丙酸，葉綠素a降解產(chǎn)物在吡啶中加熱回流脫羧生成3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸；
(2)3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸在DDC、DAMP存在下與氨基酸甲酯以1∶80～1∶50的重量比例投入水-甲醇-氫氧化鈉混合溶液攪拌反應(yīng)生成3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸氨基酸甲酯，水、甲醇和氫氧化鈉的重量比例是100∶25∶10～100∶10∶5；(3)3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸氨基酸甲酯水解得到3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸氨基酸酰胺。
本發(fā)明提供的潛在光動(dòng)力治療藥物為3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸氨基酸酰胺及藥學(xué)上可接受的載體。
用于光動(dòng)力治療的藥物組合物，含有有效量的通式(III)化合物以及含有一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。
實(shí)驗(yàn)證明如3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-18-丙酸甘氨酸酰胺(IV)對(duì)人肺癌A549的半數(shù)至死量為44.26ng/ml，遠(yuǎn)低于HMME(293.93ng/ml)。此外，其在荷瘤小鼠體內(nèi)的分布顯示心臟和大腦中不含該化合物，12h后，除肝臟外，其他組織中的含量均遠(yuǎn)小于腫瘤組織。在兔體內(nèi)的半衰期為25.75h。本發(fā)明的化合物和藥物組合物對(duì)人癌細(xì)胞的光滅活作用遠(yuǎn)高于卟啉類光敏劑，可用于制備光動(dòng)力治療藥物。
上述3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸氨基酸酰胺均為墨綠色或類黑色固體，不溶于水，溶于甲醇、四氫呋喃等極性有機(jī)溶劑，易溶于乙醚、氯仿等非極性有機(jī)溶劑。
本發(fā)明所用基始原料及合成中間體脫鎂葉綠酸a、3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，18-四甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸，15-乙酸，17-丙酸和3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸均系參照國(guó)家發(fā)明專利(許德余中國(guó)發(fā)明專利ZL 99 1 19878.6)所列方法得到。
本發(fā)明的光動(dòng)力治療藥物組合物包含治療有效量的3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-18-丙酸甘氨酸酰胺(IV)、3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸天門冬氨酸酰胺(V)、3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸丙氨酸酰胺(VI)、3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸亮氨酸酰胺(VII)、3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸蛋氨酸酰胺(VIII)、3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸色氨酸酰胺(IX)、3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸絲氨酸酰胺(X)靜脈注射液。
本發(fā)明所述的“治療有效量”指0.5-2.0mg/kg體重，優(yōu)選為1.0-1.5mg/kg。
本發(fā)明所述的藥學(xué)上可接受載體為等滲氯化鈉水溶液。


圖1為本發(fā)明的通式(III)化合物。
具體實(shí)施例方式
以下用實(shí)施例對(duì)本發(fā)明舉例說明，這些實(shí)施例旨在闡述本發(fā)明的最佳實(shí)施方案。本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的啟示，結(jié)合本領(lǐng)域的常識(shí)所做的各種變更，均落在本申請(qǐng)權(quán)利要求的范圍內(nèi)。
實(shí)施例13-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，24H-13-羧酸-17-丙酸甘氨酸酰胺(IV)的合成。
一、3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，24H-13-羧酸-17-丙酸甘氨酸酯胺的合成3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，24H-13-羧酸-17-丙酸55.2mg(0.1mmol)溶于15ml無水二氯甲烷中，分別加入DCC(25mg，0.12mmol)、DMAP(2.5mg)、甘氨酸甲酯鹽酸鹽(15mg，0.12mmol)以及三乙胺(0.016ml)，室溫?cái)嚢柽^夜。薄板檢測(cè)無起始原料，另加入35ml的二氯甲烷，用50ml的水洗，水層用20ml的二氯甲烷回提，合并二氯甲烷，有機(jī)溶劑蒸干，用硅膠H純化，展開劑為氯仿∶甲醇∶丙酮∶甲酸＝10∶0.6∶0.6∶0.06，薄板檢測(cè)為一個(gè)完整的點(diǎn)算合格。得31mg黑色固體二氫卟吩e4甘氨酸酯酰胺，收率50％。
二、3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，24H-13-羧酸-17-丙酸甘氨酸酰胺的合成3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，24H-13-羧酸-17-丙酸甘氨酸酯(62mg，0.1mmol)加入20ml的甲醇、3.5ml的水、1N NaOH水溶液0.2～0.3ml，25度攪拌反應(yīng)48h。薄板檢測(cè)無起始原料，反應(yīng)液加入0.02～0.03ml醋酸，減壓回收溶液，殘液加30ml氯仿和30ml 10％的檸檬酸，激烈振搖，分取氯仿層，檸檬酸水層連續(xù)用20ml、10ml氯仿提取。合并氯仿層，有機(jī)溶劑蒸干，用硅膠H純化，展開劑為氯仿∶甲醇∶丙酮∶甲酸＝10∶1∶1∶0.1，薄板檢測(cè)為一個(gè)完整的點(diǎn)算合格。得48mg黑色固體3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，24H-13-羧酸-17-丙酸甘氨酸酰胺，收率80％。二步總收率40％。
MS(ESI+)m/z(C35H39N5O5)610(M+1，100％)。1H-NMR(δppm，CDCl3+CD3OD)10.02(s，1H，β-meso H)，9.90(s，1H，α-meso H)，9.25(s，1H，δ-meso H)，8.13(dd，1H，3a-H)，6.37(dd，2H，3b-H)，4.34～4.74(m，2H，17-Hand 18-H)，4.05(s，3H，15-CH3)，3.73～3.79(m，2H，8-CH2)，3.76～3.81(m，2H，NHCH2)，3.69(s，3H，12-CH3)，3.57(s，3H，2-CH3)，3.41(s，3H，7-CH3)，2.48～2.57(m，2H，17b-H)，2.24～2.29 and 1.99～2.29(m，2H，17a-H)，1.88～1.95(m，3H，18-CH3)，1.66～1.69(m，3H，8b-CH3)。
實(shí)施例23-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，24H-13-羧酸-17-丙酸天門冬氨酸酰胺的合成。
一、乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，24H-13-羧酸-17-丙酸天門氨酸酯酰胺的合成二氫卟吩e4(55.2mg，0.1mmol)溶于15ml無水二氯甲烷中，分別加入催化劑DCC(Dicyclohexylcarbodiimide，25mg，0.12mmol)、DMAP(N，N-Dimethyl-4-pyridinamine，2.5mg)、天冬氨酸甲酯鹽酸鹽(40mg，0.2mmol)以及三乙胺(0.016ml)，室溫?cái)嚢柽^夜。薄板檢測(cè)無起始原料，另加入35ml的二氯甲烷，用50ml的水洗，水層用20ml的二氯甲烷回提，合并二氯甲烷，有機(jī)溶劑蒸干，用硅膠H純化，展開劑為氯仿∶甲醇∶丙酮∶甲酸＝10∶0.8∶0.8∶0.08，薄板檢測(cè)為一個(gè)完整的點(diǎn)算合格。得28mg黑色固體乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，24H-13-羧酸-17-丙酸天冬氨酸酯酰胺，收率40％。
二、3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，24H-13-羧酸-17-丙酸天門氨酸酰胺的合成乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，24H-13-羧酸-17-丙酸天冬氨酸酯酰胺(70mg，0.1mmol)加入20ml的甲醇、3.5ml的水、1N NaOH水溶液0.2～0.3ml，25度攪拌反應(yīng)72h。薄板檢測(cè)無起始原料，反應(yīng)液加入0.04～0.05ml醋酸，減壓回收溶液，殘液加30ml氯仿和30ml 10％的檸檬酸，激烈振搖，分取氯仿層，檸檬酸水層連續(xù)用20ml、10ml氯仿提取。合并氯仿層，有機(jī)溶劑蒸干，用硅膠H純化，展開劑為氯仿∶甲醇∶丙酮∶甲酸＝10∶1.5∶1.5∶0.15，薄板檢測(cè)為一個(gè)完整的點(diǎn)算合格。得53mg黑色固體乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，24H-13-羧酸-17-丙酸天冬氨酸酰胺，收率80％。二步總收率30％。
MS(ESI+)m/z(C37H41N5O7)668(M+1，100％)。1H-NMR(δppm，CDCl3+CD3OD)9.85(s，1H，β-meso H)，9.73(s，1H，α-meso H)，9.09(s，1H，δ-meso H)，8.10(dd，1H，3a-H)，6.30(dd，2H，3b-H)，4.54～4.66(m，3H，17-H，18-H and NHCH)，4.00(s，3H，15-CH3)，3.81～3.787(m，2H，8-CH2)，3.64(s，3H，12-CH3)，3.55(s，3H，2-CH3)，3.34(s，3H，7-CH3)，2.68～2.81(m，2H，CH2COOH)，2.35～2.45(m，2H，17b-H)，1.99～2.10(m，2H，17a-H)，1.91～1.92(m，3H，18-CH3)，1.65～1.69(m，3H，8b-CH3)。
實(shí)施例3-7分別用丙氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、色氨酸和絲氨酸代替實(shí)施例1中的甘氨酸或?qū)嵤├?中的天門冬氨酸，同實(shí)施例2的操作，分別合成得到3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸丙氨酸酰胺(VI)、3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸亮氨酸酰胺(VII)、3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸蛋氨酸酰胺(VIII)、3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸色氨酸酰胺(IX)和3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸絲氨酸酰胺(X)。質(zhì)譜測(cè)定結(jié)果表明，它們的質(zhì)量數(shù)與上述目標(biāo)化合物的分子式所示一致。
表1。實(shí)施例3-7中目標(biāo)化合物VI-X的MS(ESI+)m/z測(cè)定結(jié)果


MS(ESI+)m/z(C34H40N4O5)585(M+1，100％)。1H-NMR(δppm，CDCl3+CD3OD)9.88(s，1H，β-meso H)，9.76(s，1H，α-meso H)，8.87(s，1H，δ-meso H)，5.91～5.95(m，1H，3-CH)，4.50～4.58(m，2H，17-H and 18-H)，3.96(s，3H，15-CH3)，3.61～3.85(m，2H，8-CH2)，3.61(s，3H，3-OCH3)，3.55(s，3H，12-CH3)，3.48(s，3H，2-CH3)，3.33(s，3H，7-CH3)，2.42～2.57(m，2H，17b-H)，1.95～2.22(m，2H，17a-H)，2.11～2.13(m，3H，3-CH3)，1.76～1.77(m，3H，18-CH3)，1.70～1.72(m，3H，8b-CH3)。
權(quán)利要求
1.下述通式(III)化合物 其中的R表示
2.權(quán)利要求1所述的化合物的制備方法，其特征在于該方法包括以下的步驟(1)3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸在DDC、DAMP存在下與氨基酸甲酯以1∶80～1∶50的重量比例投入水-甲醇-氫氧化鈉混合溶液攪拌反應(yīng)生成3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸氨基酸甲酯，水、甲醇和氫氧化鈉的重量比例是100∶25∶10～100∶10∶5；(2)3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸氨基酸甲酯水解得到3-乙烯基-8-乙基-2，7，12，15，18-五甲基-17H，18H，21H，23H-13-羧酸-17-丙酸氨基酸酰胺。
3.用于光動(dòng)力治療的藥物組合物，其特征在于含有有效量的權(quán)利要求1化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
4.權(quán)利要求1所述化合物在制備光動(dòng)力治療藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供如下所示的3－烯乙基－8－乙基－2，7，12，15，18－五甲基－17H，18H，21H，23H－13－羧酸－17－丙酸氨基酸酰胺(III)及其合成方法，3－乙烯基－8－乙基－2，7，12，15，18－五甲基－17H，18H，21H，23H－13－羧酸－17－丙酸在DDC、DAMP存在下與氨基酸甲酯在一定比例的水－甲醇－氫氧化鈉混合溶液中攪拌反應(yīng)生成3－乙烯基－8－乙基－2，7，12，15，18－五甲基－17H，18H，21H，23H－13－羧酸－17－丙酸氨基酸甲酯，后者水解得到3－乙烯基－8－乙基－2，7，12，15，18－五甲基－17H，18H，21H，23H－13－羧酸－17－丙酸氨基酸酰胺，以及本發(fā)明化合物和藥用組合物對(duì)人癌細(xì)胞的光動(dòng)力滅活作用。
文檔編號(hào)A61P17/00GK1944433SQ200610011830
公開日2007年4月11日 申請(qǐng)日期2006年4月30日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月30日
發(fā)明者顧瑛, 許德余 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院