專利名稱::用于治療蛋白聚集疾病的含鯊肌醇衍生物的組合物和方法用于治療蛋白聚集疾病的含鯊肌醇衍生物的組合物和方法發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明總體上涉及鯊肌醇4b合物和組合物、該組合物的方法和用途,特別是治療以異常蛋白折疊和/或聚集、或淀粉樣蛋白形成、沉積、蓄積或存留為特征的病癥的方法。
背景技術(shù):
:多條證據(jù)表明,淀粉樣蛋白(3-肽(A(3)神經(jīng)毒性寡聚/前原纖維聚集體的蓄積,是Alzheimer病(AD)發(fā)病機(jī)理中的核心事件[1,2]。引導(dǎo)人們?cè)噲D通過阻斷A(3的產(chǎn)生(用p-或,分泌酶抑制劑),加速其消除,或防止其聚集和毒性,來(lái)開發(fā)新療法??笰(3療法來(lái)治療AD的潛在用途,已從疫苗的臨床試驗(yàn)中得到了試驗(yàn)性的支持,表明一小組的AD患者在臨床上和神經(jīng)病理學(xué)上得到改善[3,4]。但是,抗-A(3疫苗還在一些患者中誘導(dǎo)出T細(xì)胞介導(dǎo)的腦-脊髓膜炎,使得這種疫苗不適于廣泛的臨床應(yīng)用[5]。不僅如此,A(3疫苗在一些小鼠模型中顯示出能夠通過抗體介導(dǎo)的對(duì)A(3原纖維形成和毒性的抑制起作用[6,8]。因此,希望能夠鑒別出小分子A(3抑制劑,從而避免免疫療法的潛在風(fēng)險(xiǎn)。發(fā)明概述本發(fā)明提供了組合物,特別是藥用組合物,其中包含的鯊肌醇化合物能在本文所述病癥和/或疾病的治療中提供有益的效果,特別是蛋白折疊和/或聚集,和/或淀粉樣蛋白形成、沉積、蓄積或存留方面的病癥。在一個(gè)方面,本發(fā)明提供了藥用組合物,其中包含一種或多種鯊肌醇化合物,其提供有益的效果,特別是治療后還有持續(xù)的有益效果。本發(fā)明組合物能夠提供的有益的效果包括提高療效,特別是持續(xù)的療效。本發(fā)明同時(shí)提供了藥用組合物,目的是用來(lái)給予患者以提供有益效果,特別是持續(xù)的有益效果,該組合物包含鯊肌醇化合物,特別是純鯊肌醇化合物,尤其l基本純的篁肌醇化合物,任選包含一種或多種藥學(xué)可接受載體、賦形劑或溶々某。本發(fā)明同時(shí)提供了用于治療疾病和/或病癥的藥用組合物,該組合物包含治療有效量的鯊肌醇化合物,以在藥學(xué)可接受載體、賦形劑或溶媒中提供持續(xù)的有益效果。一方面,提供了含鯊肌醇的藥用組合物,該組合物適于給予患者以提供持續(xù)的有益效果來(lái)治療疾病和/或病癥。在一個(gè)實(shí)施方案中,組合物以一定的形式給予患者,從而抑制、減輕或逆轉(zhuǎn)患者的Ap原纖維裝配或聚集、Ap毒性、異常蛋白折疊、聚集、淀粉樣蛋白形成、沉積、蓄積或存留,和/或加速預(yù)先形成的原纖維解聚。具體而言,該組合物的形式能夠破壞聚集的A(3或Ap寡聚體;提高或恢復(fù)長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng);保持突觸的功能;抑制、降低或逆轉(zhuǎn)A(3誘導(dǎo)的進(jìn)行性認(rèn)知衰退和腦淀粉樣蛋白斑病變;改善認(rèn)知;延長(zhǎng)生命;減少腦Ap的蓄積;減少腦淀粉樣蛋白斑的沉積;減少腦內(nèi)可溶性A(3寡聚體;降低神經(jīng)膠質(zhì)活性;消炎;和/或延緩認(rèn)知衰退,特別是能夠在治療結(jié)束后持續(xù)一段時(shí)間。本發(fā)明涉及包含鯊肌醇化合物的組合物,該組合物提供了有益的效果,特別是持續(xù)的有益效果,用于治療疾病和/或病癥,特別是以淀粉樣蛋白沉積為特征的疾病和/或病癥,尤其是阿爾茨海默病。另一方面,本發(fā)明描繪了包含鯊肌醇化合物的組合物的特征,一定劑量的含鯊肌醇化合物能有效破壞聚集的Aj3或A(3寡聚體;提高或恢復(fù)長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng);保持突觸的功能;抑制、降低或逆轉(zhuǎn)A(3誘導(dǎo)的進(jìn)行性認(rèn)知衰退和腦淀粉樣蛋白斑病變;改善認(rèn)知;延長(zhǎng)生命;減少腦A(3的蓄積;減少腦淀粉樣蛋白斑的沉積;減少腦內(nèi)可溶性Ap寡聚體;降低神經(jīng)膠質(zhì)活性;消炎;和/或延緩認(rèn)知衰退,特別是在給藥后還能持續(xù)一段時(shí)間。該組合物可以在藥學(xué)可接受載體、賦形劑或溶:碟中。本發(fā)明還提供了制備包含一種或多種鯊肌醇化合物的穩(wěn)定組合物的方法,該組合物能夠提供有益的效果,優(yōu)選治療后持續(xù)的有益效果。本發(fā)明還提供了制備包含一種或多種純的,特別是基本純的鯊肌醇化合物的穩(wěn)定組合物的方法,該組合物能夠提供有益的效果,優(yōu)選治療后持續(xù)的有益效果。組合物制備完成后,可以將其置于合適的容器中,并標(biāo)示適應(yīng)癥。為了本發(fā)明組合物的給藥,這類標(biāo)簽應(yīng)標(biāo)出用法、用量和給藥頻率。用于本發(fā)明的鯊肌醇化合物可以是前藥形式,可在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為活性化合物。舉例而言,前藥包含可裂解基團(tuán),給予受試者后裂解基團(tuán)發(fā)生裂解,提供活性(如治療活性)化合物,或中間體化合物,然后產(chǎn)生活性化合物??闪呀饣鶊F(tuán)可以是酶法或非酶法去除的酯。用于本發(fā)明的鯊肌醇化合物可任選包含與化合物相互作用的載體。載體可包括聚合物、碳酸酯或肽,或其組合。該載體可被例如一個(gè)或多個(gè)烷基、囟素、巰基、羥基或氨基取代。一方面,本發(fā)明提供了飲食補(bǔ)充劑組合物,該組合物包含一種或多種豊肌醇化合物或其營(yíng)養(yǎng)學(xué)可4妄受的衍生物。一方面,本發(fā)明提供了供哺乳動(dòng)物用,特別是供人用的用來(lái)改善記憶的飲食補(bǔ)充劑,該添加劑包含篁肌醇化合物或其營(yíng)養(yǎng)學(xué)可接受的衍生物。另一方面,本發(fā)明提供了一種添加劑,該添加劑包含豊肌醇化合物或其營(yíng)養(yǎng)學(xué)可接受的衍生物,以減緩受試者精神病進(jìn)程的惡化,或改善其記憶,尤其是短時(shí)記憶。本發(fā)明飲食補(bǔ)充劑優(yōu)選味道宜人,可被機(jī)體有效吸收,并提供實(shí)質(zhì)性治療效果。本發(fā)明同時(shí)提供制備包含鯊肌醇化合物的市售制劑的方法。一方面,以治療或預(yù)防性目的給予受試者篁肌醇化合物,特別是純或基本純的鯊肌醇化合物,以及本發(fā)明的組合物,以治療本文公開的疾病和/或病癥,特別是以淀粉才羊蛋白形成、聚集或沉積相關(guān)的疾病和/或病癥。不希望被任何特定的理論束綽,所述化合物和組合物可用來(lái)改善疾病的病程,機(jī)理包括但不限于預(yù)防、降低、逆轉(zhuǎn)和/或抑制A(5原纖維或Ap寡聚體裝配或聚集、Ap毒性、A(342水平、異常蛋白折疊或聚集、淀粉樣蛋白形成、沉積、蓄積或存留,和/或淀粉樣蛋白脂質(zhì)相互作用;預(yù)防、降低、逆轉(zhuǎn)和/或抑制Ap誘導(dǎo)的神經(jīng)變性或細(xì)胞毒性;加速預(yù)形成的原纖維的分解;破壞或解聚聚集的A(3或A(3寡聚體;提高或恢復(fù)長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng);保持突觸的功能;提高Ap從腦中的清除;增加A卩的降解;和/或預(yù)防、降低、逆轉(zhuǎn)和/或抑制腦A(3的蓄積;減少腦淀粉樣蛋白斑的沉積;減少腦內(nèi)可溶性A(3寡聚體;降低神經(jīng)膠質(zhì)活性;消炎;和/或延緩認(rèn)知衰退。本發(fā)明還精心設(shè)計(jì)了包舍至少一種鯊肌醇化合物的組合物的用途,用于制備預(yù)防和/或治療疾病和/或病癥的藥物。本發(fā)明該提供了本發(fā)明的藥用組合物在制備治療和/或預(yù)防疾病和/或病癥藥物中的用途。本發(fā)明提供了治療和/或預(yù)防疾病和/或病癥的方法,包括給予受試者治療有效量的一種或多種鯊肌醇化合物以提供有益的效果。一方面,本發(fā)明提供了一種治療,該治療在治療后還產(chǎn)生持續(xù)的有益效果。本發(fā)明還包括補(bǔ)充健康人飲食的方案,方法為給予人鯊肌醇化合物或包含鯊肌醇化合物的組合物或其營(yíng)養(yǎng)學(xué)可接受衍生物和可接受栽體的飲食補(bǔ)充劑。本發(fā)明還包括補(bǔ)充健康人飲食的方案,方法為每天給予人罝肌醇化合物或其營(yíng)養(yǎng)學(xué)可接受的衍生物。本發(fā)明同時(shí)提供包含一種或多種鯊肌醇化合物或本發(fā)明藥用組合物的藥盒。一方面,本發(fā)明提供預(yù)防和/或治療疾病和/或病癥的藥盒,該藥盒包含的組合物中含有一種或多種鯊肌醇化合物、載體和使用說(shuō)明。該藥盒的組合物中還可包含藥學(xué)可接受載體、賦形劑或溶媒。本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)以下附圖和詳述應(yīng)對(duì)本發(fā)明的這些以及其它方面、特征和優(yōu)勢(shì)了然于心。附圖簡(jiǎn)述通過參考附圖可以更好地理解本發(fā)明,其中圖l.取5月齡小鼠(每處理組n-10),處理28天后,于6個(gè)月齡時(shí)進(jìn)行空間辨識(shí)記憶實(shí)驗(yàn)。表-肌醇處理的TgCRND8小鼠與未處理TgCRND8同窩小鼠沒有差異0>=0.27;圖1A),但與非-Tg同窩小鼠相比仍存在損害^114=11.7,p=0.004;圖1C)。相反,鯊肌醇處理的TgCRND8小鼠顯著優(yōu)于未處理的TgCRND8同窩小鼠(p-0.01;圖1B),并且與非-Tg同窩小鼠沒有差異(Fn^2.9,p=0.11;圖1D)。以環(huán)交叉指數(shù)(annuluscrossingindex)為指標(biāo)的探測(cè)實(shí)驗(yàn),表明鯊肌醇處理的小鼠與非-Tg同窩小鼠沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p^.64;圖1E)。豎直棒表示s.e.m。一個(gè)月的鯊肌醇處理后,與對(duì)照動(dòng)物相比,小鼠的斑負(fù)栽降低(圖IF,圖1G),而對(duì)照動(dòng)物海馬中斑高負(fù)載。斑負(fù)載用抗-A(3抗體(棕色)鑒別,星形膠質(zhì)細(xì)胞用抗-GFAP抗體(紅色)標(biāo)記。比例尺300拜。圖2.豈肌醇和表肌醇處理和未處理的TgCRND8小鼠(圖2A)中可溶性寡聚A(3的點(diǎn)印跡分析。可溶性蛋白分離自4只代表性的TgCRND8小鼠預(yù)防研究組4月齡和6月齡的處理和未處理小鼠,治療組5月齡處理和未處理小鼠,將分離蛋白應(yīng)用于硝基纖維素膜上并用寡聚體-特異性抗體探測(cè),然后用6E10再探測(cè)。用合成Ap42、單體(底行泳道1和2)和原纖維(泳道3和4)作為寡聚體-特異性抗體的陰性對(duì)照,其僅識(shí)別可溶性聚集體。6E10識(shí)別所有Ap種類(底行,右4個(gè)泳道)。長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)可被可溶性Ap寡聚體阻斷(圖2B;綠方形)并被鯊肌醇治療恢復(fù)(圖2B,藍(lán)方形)。LTP不受鯊肌醇處理的含A(3寡聚體的7PA2培養(yǎng)基(圖2C;紅方形;與圖2B中數(shù)據(jù)相同)和不含寡聚體的普通CHO培養(yǎng)基(圖2C;藍(lán)圓形)的影響。圖3所示為AZD103對(duì)Ap-依賴性抑制誘導(dǎo)的長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)作用的影響。重復(fù)刺激后,("強(qiáng)直電刺激(tetanus)":多箭頭),單次刺激(單箭頭)后的場(chǎng)電位提高??赏ㄟ^場(chǎng)電位斜率(EPSP)的變化百分率來(lái)定量。圖3顯示了,用以下物質(zhì)對(duì)海馬切片灌注后,EPSP斜率隨時(shí)間的百分率變化1.25jxMAZD-103+CHOCM(條件培養(yǎng)基)(CHO細(xì)胞不分泌A(3寡聚體)預(yù)孵育混合物,或1.25joMAZD-103+7PA2CM(其確實(shí)分泌Ap寡聚體)預(yù)孵育混合物以及單獨(dú)的7PA2CM(在每種情況下,CM和AZD103在灌注前一起預(yù)孵育30min)(圖3A);用7PA2CM與表肌醇和手性肌醇的預(yù)孵育混合物對(duì)海馬切片灌注后,EPSP斜率隨時(shí)間的百分率變化(圖3B);已用以下物質(zhì)對(duì)海馬切片灌注后,強(qiáng)直電刺激后60minEPSP斜率的百分率變化比較僅用7PA2CM,或與1.25pMAZD-103、表肌醇和手性肌醇的預(yù)孵育混合物;以及CHOCM與AZD103和手性肌醇的預(yù)孵育混合物(圖3C)。圖4為蛋白質(zhì)印跡,表明將AZD-103應(yīng)用于7PA2CM減少了Ap三聚體的檢出。圖5為AZD-103的劑量反應(yīng)曲線,用來(lái)評(píng)價(jià)其預(yù)防A(3對(duì)LTP的誘導(dǎo)的抑制的能力。4個(gè)不同濃度的AZD-103(0.125、0.5、1.25和5,0一)加入到7PA2CM中,然后用該混合物灌注海馬切片。圖6A證明了AZD103與7PA2CM的預(yù)孵育時(shí)間對(duì)LTP的誘導(dǎo)的作用。該圖顯示了4個(gè)不同預(yù)孵育時(shí)間(15、30、120和240分鐘)的EPSP斜率隨時(shí)間的百分率變化。圖6B的棒圖顯示了已用以下物質(zhì)對(duì)海馬切片灌注后,強(qiáng)直電剌激后60minEPSP斜率的百分率變化用7PA2CM預(yù)將育15、30、120和240分鐘的0.5|uMAZD-103。圖6C顯示了單用7PA2CM,20分鐘后再用0.5jiMAZD-103對(duì)小鼠腦切片灌注后,EPSP斜率隨時(shí)間的百分率變化。圖7A和7B為蛋白質(zhì)印跡,顯示當(dāng)AZD-103在條件培養(yǎng)前直接加入到7PA2細(xì)胞本身時(shí)(條件培養(yǎng)前);和當(dāng)AZD-103加入到7PA2CM中(條件培養(yǎng)后)時(shí)AZD103對(duì)A(3寡聚體的作用。圖7C顯示了直接測(cè)得的AZD-103對(duì)寡聚體的作用。圖7D顯示了歸一化至APP水平的AZD-103對(duì)寡聚體的作用。圖7E顯示了歸一化至Ap單體水平的AZD-103對(duì)寡聚體的作用。圖8顯示了用CM對(duì)小鼠腦切片灌注后,本身用0.5jiMAZD-103(條件培養(yǎng)前)預(yù)孵育的7PA2細(xì)胞的EPSP斜率隨時(shí)間的百分率變化。圖9顯示了A(3-誘導(dǎo)的認(rèn)知障礙被用AZD-103對(duì)Ap的預(yù)孵育所緩解。100。/。錯(cuò)誤率根據(jù)基線時(shí)動(dòng)物所犯的錯(cuò)誤數(shù)量來(lái)設(shè)置。顯示了灌注以下物質(zhì)后的錯(cuò)誤率單用Ap、A(3+AZD103和單用AZD103。圖10顯示了A(3-誘導(dǎo)的急性認(rèn)知障礙被口服AZD-103緩解。100%錯(cuò)誤率根據(jù)基線時(shí)動(dòng)物所犯的錯(cuò)誤數(shù)量來(lái)設(shè)置。顯示了口服0、30、100和300mg/kg/天AZD103時(shí),接受靜脈灌注Ap的動(dòng)物所犯錯(cuò)誤率。實(shí)施方案詳述詞匯本文述及的由端值限定的數(shù)值范圍,包括歸入該范圍內(nèi)的所用數(shù)值和分?jǐn)?shù)(例如l-5,包括l、1.5、2、2.75、3、3.90、4和5)。同樣可以理解,所有數(shù)值及其分?jǐn)?shù)都推定受術(shù)語(yǔ)"約"的修飾。術(shù)語(yǔ)"約,,是指將其參照的數(shù)值加或減0.1-50%、5-50%或10-40%,優(yōu)選10-20%,更優(yōu)選10%或15%。此外,要理解"一"和"該"包括"多",除非另有說(shuō)明。因此,例如述及包含"一種化合物"的組合物時(shí),包括兩種或多種化合物的混合物。術(shù)語(yǔ)"給藥"和"給予",是指將本文精心設(shè)計(jì)的治療有效量的化合物或組合物遞送受試者以起到預(yù)防和/或治療目的的過程。組合物的給予要按照良好藥品質(zhì)量管理規(guī)范,同時(shí)要參考受試者的臨床條件、給藥位點(diǎn)和方法、劑量、患者年齡、性別、體重和醫(yī)生所知的其它因素。術(shù)語(yǔ)"治療"是指逆轉(zhuǎn)、緩解或抑制所述述與述及的疾病和/或病癥的發(fā)展,或這類疾病和/或病癥的一種或多種癥狀。依賴于受試者的條件,該術(shù)語(yǔ)還指預(yù)防疾病,并包括預(yù)防疾病的開始,或預(yù)防疾病的相關(guān)癥狀。治療可以急性或慢性方式開展。還術(shù)語(yǔ)還指在疾病發(fā)作前減輕疾病或其相關(guān)癥狀的嚴(yán)重性。疾病發(fā)作前的這類預(yù)防或疾病嚴(yán)重性的減輕是指,給受試者本發(fā)明的化合物或組合物,而此時(shí)受試者的這類疾病尚未發(fā)作。"預(yù)防"還指預(yù)防疾病或這類疾病的一種或多種相關(guān)癥狀的復(fù)發(fā)。術(shù)語(yǔ)"治療"和"醫(yī)療上的"是指治療的作用,"治療"定義見上。術(shù)語(yǔ)"受試者"、"個(gè)體"或"患者",在本文可相換使用,是指動(dòng)物,包括溫血?jiǎng)游锶绮溉閯?dòng)物,其患有或易患本文所述疾病和/或病癥。哺乳動(dòng)物包括但不限于哺乳類的任何成員。本發(fā)明的一個(gè)方面中,該術(shù)語(yǔ)指人。該術(shù)語(yǔ)還包括食用家畜或?qū)櫸?,包括馬、牛、綿羊、家禽、魚、豬、貓、狗,和動(dòng)物園動(dòng)物、山羊、猿(例如大猩猩或黑猩猩),以及嚙齒類動(dòng)物如大鼠和小鼠。典型的待治療受試者包括已患、正患或易患本文所述疾病和/或病癥的人。受試者可以具有也可以不具有本文所述的疾病和/或病癥,例如阿爾茨海默病的遺傳傾向。在某些方面,受試者顯示出認(rèn)知缺陷和淀粉樣蛋白斑神經(jīng)變性的跡象。在本發(fā)明的實(shí)施方案中,受試者患或易患阿爾茨海默病。本文所用的術(shù)語(yǔ)"健康受試者"是指,受試者,特別是哺乳動(dòng)物,未患<壬何疾病和/或病癥,特別是未診斷出疾病、病癥、虛弱、或已知可損害或減弱記憶的其它疾患。術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)可接受載體、賦形劑或溶媒"是指,不影響活性成分的效力或活性的介質(zhì),和對(duì)服用其的宿主沒有毒性的介質(zhì)。載體、賦形劑或溶々某包括稀釋劑、粘合劑、膠粘劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、膨脹劑、潤(rùn)濕劑或乳化劑、pH調(diào)節(jié)劑,和其它材料如需要用來(lái)制備特定組合物的吸附劑。載體等的實(shí)例包括但不限于鹽水、緩沖鹽水、葡萄糖、水、甘油、乙醇及其組合?;钚晕镔|(zhì)的這類介質(zhì)和劑的用途為本領(lǐng)域所熟知。本文所用的術(shù)語(yǔ)"營(yíng)養(yǎng)藥學(xué)可接受的衍生物"是指,所述化學(xué)物質(zhì)的衍生物和取代物,該物質(zhì)以類似的反式產(chǎn)生所需的效果,并且結(jié)構(gòu)上類似,而且生理學(xué)上相容。取代物的實(shí)例包括但不限于所述化合物的鹽、酯、水合物和絡(luò)合物。所迷取代物還可以是所述化合物的前體和前藥,其隨后在體內(nèi)反應(yīng)生成所述化合物或其取代物。術(shù)語(yǔ)"純,,通常是指純度大于90%、92%、95%、97%、98%或99%,"基本純"是指化合物經(jīng)合成從而使該化合物與適于在本發(fā)明組合物或治療劑型中考慮使用的特制的化合物一樣,僅含有那些不易于或不能以合理的方式除去的雜質(zhì)。"藥學(xué)可接受鹽,,是指藥學(xué)上可接受的并且具有所需的藥理學(xué)性質(zhì)的鹽。藥學(xué)可接受鹽是指那些適用于與受試者或患者的組織接觸,但沒有過度的毒性、刺激性、過敏反應(yīng)等,并具有合理的收益/風(fēng)險(xiǎn)比的鹽。藥學(xué)可接受鹽,例如在S.M.Berge,etal.,J.PharmaceuticalSciences(藥學(xué)科學(xué)),1977,66:1中有描述。合適的鹽包括化合物中的酸性質(zhì)子能夠與無(wú)機(jī)或有機(jī)堿反應(yīng)所形成的鹽。合適的無(wú)機(jī)鹽包括與鈉和鉀等堿金屬,以及與鈣、鎂和鋁形成的鹽。合適的有機(jī)鹽包括與胺堿,例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-曱基葡糖胺等有機(jī)堿形成的鹽。合適的鹽還包括與無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸形成的酸加成鹽,所述無(wú)機(jī)酸有鹽酸和氫溴酸,所述有機(jī)酸有乙酸、檸檬酸、馬來(lái)酸和烷和芳磺酸如曱磺酸和苯磺酸。當(dāng)有兩個(gè)酸性基團(tuán)存在時(shí),藥學(xué)可接受鹽可以是單酸單鹽或二鹽;同樣,當(dāng)有兩個(gè)以上基團(tuán)存在時(shí),部分或全部基團(tuán)可被鹽化。"聯(lián)合治療"是指將活性成分同時(shí)給予待治療的患者。當(dāng)聯(lián)用時(shí),每種組分可同時(shí)或先后以任何次序在不同位點(diǎn)給予。因此,每種組分可分開給予,但在時(shí)間上應(yīng)足夠接近以提供所需的療效,特別是有益的、加合的或協(xié)同的療效。第一化合物可在另外包含用第二化合物的治療的方案中給予。在某些方面,該術(shù)語(yǔ)是指任選在一年內(nèi)給予鯊肌醇化合物和笫二治療藥,包括分開給予以及同時(shí)給予各自含有一種該化合物的藥物,而不論該化合物存在于一種制劑中還是分屬不同的制劑。"可檢測(cè)物質(zhì),,包括但不限于放射性同位素(例如3H、14C、35S、125I、131I),熒光標(biāo)記(例如FITC、藍(lán)光鹼性蕊香紅、鑭系元素、磷光劑),發(fā)光標(biāo)記例如魯米諾;酶標(biāo)記(例如辣根過氧化物酶、(3-半乳糖苷酶、螢蟲素酶、堿性磷酸酯酶、乙酰膽堿酯酶),生物素基團(tuán)(其可通過標(biāo)記的抗生物素蛋白例如鏈霉抗生物素檢測(cè),其含有可被光學(xué)或比色法檢測(cè)的發(fā)光標(biāo)記或酶活性),被二級(jí)報(bào)告物識(shí)別的預(yù)先確定的抗原表位(例如亮氨酸拉鏈對(duì)序列、二級(jí)抗體的結(jié)合位點(diǎn)、金屬結(jié)合域或表位標(biāo)記)。在一些實(shí)施方案中,標(biāo)記物經(jīng)各種長(zhǎng)度的間隔臂連接,以減少潛在的立體阻礙。"有益的效果"是指本發(fā)明某些方面中本發(fā)明化合物或其組合物的效果,包括適宜的藥理學(xué)和/或治療效果,和/或改善的生物學(xué)活性。在本發(fā)明的一個(gè)方面,有益的效果包括但不限于降低、逆轉(zhuǎn)或抑制A(3原纖維裝配或聚集、Ap毒性、A(342水平、異常蛋白折疊、聚集、淀粉樣蛋白形成、沉積、蓄積或存留,和/或淀粉樣蛋白脂質(zhì)相互作用,和/或加速預(yù)形成的原纖維的分解。在本發(fā)明的一個(gè)特定的實(shí)施方案中,有益的效果包括但不限于一種或多種以下的作用破壞聚集的A(3或A(3寡聚體;提高或恢復(fù)長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng);保持突觸的功能;抑制、降低或逆轉(zhuǎn)A(3誘導(dǎo)的進(jìn)行性認(rèn)知衰退和腦淀粉樣蛋白斑病變;改善認(rèn)知;延長(zhǎng)生命;減少腦Ap的蓄積;減少腦淀粉樣蛋白斑的沉積;減少腦內(nèi)可溶性A(3(例如A(342)寡聚體;降低神經(jīng)膠質(zhì)活性;消炎;和/或延緩認(rèn)知衰退。在一個(gè)方面,有益的效果是本發(fā)明組合物/制劑的適宜的特征,包括提高穩(wěn)定性、延長(zhǎng)生命,和/或增加通過血腦屏障的攝取和轉(zhuǎn)運(yùn),特別是提高給藥后1-6、1-5、1-4、l-3和l-2小時(shí)的腦透過率。有益的效果可以是,豊肌醇化合物的效果與未使用所述化合物的效果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析后認(rèn)為具統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性的效果。"統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性"或"統(tǒng)計(jì)學(xué)差異"效果或水平可代表高于或低于標(biāo)準(zhǔn)的水平。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,所述差異可以是沒有給予鯊肌醇化合物所得效果的1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或50倍或上述數(shù)值分之一。"治療有效量"是指能夠提供或產(chǎn)生一種或多種所需有益效果,特別是一種或多種持續(xù)效果的本發(fā)明活性化合物或組合物的量或劑量。物質(zhì)的治療有效量可根據(jù)多種因素變化,其中有個(gè)體的疾病狀態(tài)、年齡、性別和體重,以及該物質(zhì)引起所述個(gè)體所需反應(yīng)的能力。劑量方案可加以調(diào)整,以提供最佳的治療反應(yīng),例如一種或多種有益的效果,特別是實(shí)質(zhì)性有益的效果。例如,每天可給予幾個(gè)分劑量,或根據(jù)治療情況的緊急程度按比例增減劑量。"鯊肌醇"化合物應(yīng)理解為是指,全部或部分,直接或間接提供一種或多種本文所述有益效果的任何化合物。可用于本發(fā)明的i:肌醇化合物具有式Ia或式Ib的基本結(jié)構(gòu):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>鯊肌醇化合物包括式Ia或式Ib化合物的功能衍生物。"功能衍生物"是指具有與式la或式Ib的鯊肌醇的生物學(xué)活性基本類似的生物學(xué)活性(或者是功能性或者是結(jié)構(gòu)性)的化合物。術(shù)語(yǔ)"功能衍生物"目的是包括簠肌醇的"變異體"、"類似物"或"化學(xué)衍生物"。術(shù)語(yǔ)"變異體"是指結(jié)構(gòu)和功能基本類似于鯊肌醇或其部分的分子。如果兩個(gè)分子具有基本類似的結(jié)構(gòu)或兩個(gè)分子具有基本類似的生物活性,則該分子與簠肌醇"基本類似,,。術(shù)語(yǔ)"類似物"是指功能類似于鯊肌醇分子的分子。術(shù)語(yǔ)"化學(xué)衍生物"是指包含通常不l基本分子的一部分的附加的化學(xué)基團(tuán)的分子。本發(fā)明的鯊肌醇化合物包括結(jié)晶形式的化合物,也可以是多晶型。與水或普通有機(jī)溶劑形成的化合物的溶劑合物也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。此外,鯊肌醇化合物及其鹽的水合物也包括于本發(fā)明的范圍內(nèi)。簠肌醇化合物包括式Ia或式Ib的化合物,其中一、二或三個(gè)羥基被取代基置換,特別是被一價(jià)取代基置換而保持構(gòu)型不變。合適的取代基包括但不限于氬;烷基;?;?;烯基;環(huán)烷基;鹵素;-NHR1,其中RJ為氫、?;?、烷基或-R2113,其中112和113可相同或不同并表示?;蛲榛?;-P03H2;-SR4,其中R4為氫、烷基或-03比和-OR3,其中R3為氬、烷基或-SOgli。在本發(fā)明的一些方面,鯊肌醇化合物不包括被一種或多種磷酸基團(tuán)取代的鯊肌醇。本發(fā)明的特定方面使用式Ia或式Ib的鯊肌醇化合物,其中一或多個(gè)羥基被以下取代基置換烷基;?;幌┗?;-NHR1,其中R'為氬、?;?、烷基或-R2113,其中112和R3可相同或不同并表示?;蛲榛?SR4,其中R4為氫、烷基或-0311。一個(gè)實(shí)施方案中,鯊肌醇,特別是純或基本純的鯊肌醇,可用于本文7>開的組合物、方法和用途中。選為卜6個(gè)碳原子。該術(shù)語(yǔ)的實(shí)例有甲基、乙基、正丙基、正丁基、異丁基、正己基等。烷基可以是取代的烷基。"取代烷基"是指優(yōu)選具有1-10個(gè)碳原子的烷基基團(tuán),具有1-5個(gè)取代基,優(yōu)選1-3個(gè)取代基,例如烷基、烷氧基、環(huán)烷基、?;?、氨基、氰基、卣素、羥基、tt、g烷基、S同、硫酮、巰基、硫代烷氧基、芳基、羥基氨基、烷M氨基和硝基。"烯基"是指優(yōu)選具有2-10個(gè)碳原子且優(yōu)選2-6個(gè)碳原子的烯基基團(tuán),具有至少1個(gè)且優(yōu)選1-2個(gè)烯基不飽和位點(diǎn)。優(yōu)選的烯基基團(tuán)包括乙烯基(-CHhCH2)、正丙烯基(-CH2CH-CH2)、異丙烯基(^(0^)=012)等。"取代的烯基"是指具有1-3個(gè)取代基的烯基基團(tuán),例如烷基、烷氧基、環(huán)烷基、環(huán)烷氧基、?;?、?;被ⅤQ趸?、氨基、氨基酰基、M酰氧基、氰基、鹵素、羥基、羧基、并樣烷基、S同、硫酮、巰基、疏代烷氧基、芳基、羥基氨基、烷M氨基和硝基。"?;?是指烷基-C(O)-、取代的烷基-C(O)-、環(huán)烷基-C(O)-取代的環(huán)烷基-C(O)-、芳基-C(O)-、雜芳基-C(O)-和雜環(huán)基-C(O)-,其中烷基、取代烷基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、芳基、取代芳基、雜芳基和雜環(huán)基的定義見上述。"芳基,,是指不飽和芳香性含6-14個(gè)碳原子具有單環(huán)(苯基)或多個(gè)稠合的環(huán)(如萘或蒽)的碳環(huán)基團(tuán)。優(yōu)選的芳基包括苯基、萘基等。芳基可以是取代芳基,可包括具1-8、1-6、1-4或1-3個(gè)取代基的本文限定的芳基,所述取代基可以是烷基、烷氧基、環(huán)烷基、酰基、氨基、氰基、卣素、羥基、羧基、羧基烷基、酮、硫酮、巰基、硫代烷氧基、芳基羥基氨基、烷氧基氨基和硝基。"環(huán)烷基,,是指3-12個(gè)碳原子的具有單環(huán)或多稠環(huán)的環(huán)狀烷基。環(huán)烷基的實(shí)例包括單環(huán)結(jié)構(gòu)如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)辛基等,或多環(huán)結(jié)構(gòu)如金剛烷基等。環(huán)烷基可以是取代的環(huán)烷基。"取代環(huán)烷基"是指有1-5個(gè)(特別是1-3個(gè))選自以下取代基的環(huán)烷基烷氧基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、環(huán)烯基、?;?、酰基氨基、?;趸?、氨基、氨基酰基、氨基酰氧基、氰基、卣素、羥基、羧基、羧基烷基、酮、硫酮、巰基、硫代烷氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳基氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)基氧基、羥基氨基、烷氧基氨基和硝基。"卣素"是指氟、氯、溴和碘,優(yōu)選氟或氯。"雜芳基"是指具有1-15個(gè)碳原子和在至少一個(gè)環(huán)中(如果存在一個(gè)以上的環(huán))具有1-4個(gè)選自氧、氮和辟u的雜原子的芳香族基團(tuán)。這類雜芳基可任選被1-5個(gè)取代基取代,例如,酰基氧基、羥基、酰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、取代烷基、取代烯基、取代炔基、氨基、取代氨基、氨基?;?、?;被?、烷芳基、芳基、芳氧基、疊氮基、羧基、羧基烷基、氰基、鹵素、硝基、雜芳基、雜環(huán)基、氨基酰氧基、氧基酰氨基、硫代烷氧基、取代硫代烷氧基、硫代芳氧基和硫代雜芳氧基。這類雜芳基可以具單環(huán)(例如吡咬基或呋喃基),也可以具多稠合環(huán)(如吲。秦基或苯并噻吩基)。"雜環(huán)"或"雜環(huán)的"是指具單環(huán)或多稠環(huán)的一價(jià)飽和/或不飽和基團(tuán),環(huán)內(nèi)有1-15個(gè)碳原子和1-4個(gè)選自氮、硫或氧的雜原子。雜環(huán)基團(tuán)可具有單環(huán)或多稠環(huán)。雜環(huán)基團(tuán)可任選被1-5個(gè)取代基取代,例如,烷氧基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、環(huán)烯基、?;?、?;被Ⅴ;趸?、氨基、氨基?;?、氨基酰氧基、氰基、鹵素、羥基、羧基、羧基烷基、酮、硫酮、巰基、硫代烷氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳基氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)基氧基、羥基氨基、烷氧基氨基和硝基。雜環(huán)和雜芳基的實(shí)例包括^旦不限于,吡咯、呋喃、咪唑、吡唑、吡咬、吡。秦、嘧啶、噠。秦、p引漆、異吲咮、巧l咮、吲唑、嘌呤、喹口秦、異*啉、喹啉、酞。秦、萘啶、p套喔啉、喹唑啉、噌啉、蝶啶、啼唑、??ㄟ⒎凄?、吖啶、菲咯啉、異噻唑、吩嗪、異嗯唑、吩嗨溱、P分瘞。秦、四氫咪唑、咪唑啉、哌啶、哌嗪、二氫吲咮、嗎啉代、哌咬基、四清呋喃基等,以及含有N-烷氧基-氮的雜環(huán)。鯊肌醇化合物可用常規(guī)方法制備,或購(gòu)買得到。鯊肌醇化合物可用化學(xué)和/或微生物方法制備。在本發(fā)明的某些發(fā)明,莖肌醇化合物用文獻(xiàn)(M.SarmahandShashidhar,M.,CarbohydrateResearch(糖類研究),2003,338,999-1001或Husson,C.,etal,CarbohyrateResearch307(1998)163-165)或WO05035774(HokkoChemicalIndustries)中所述的方法步驟制備鯊肌醇來(lái)生產(chǎn)。在本發(fā)明的組合物和方法的特定方面,鯊肌醇化合物用化學(xué)方法(Husson,C.,etal,CarbohyrateResearch(糖類研究)307(1998)163-165)步驟來(lái)制備。在本發(fā)明組合物和方法的其它一些方面,篁肌醇化合物用微生物方法步驟(WO05035774(HokkoChemicalIndustries))制備。衍生物可由本領(lǐng)域技術(shù)人員用已知方法向鯊肌醇中引入取代基來(lái)制備。豊肌醇化合物還可包含載體,包括但不限于一種或多種聚合物、糖類、肽或其衍生物。載體可纟支本文所述的取代基取代,包括但不限于一個(gè)或多個(gè)烷基、M、硝基、鹵素、巰基、硫代烷基、硫酸基團(tuán)、磺酰基、、烷硫基(sulfenyl)、亞磺?;?、亞砜、羥基。載體可直接或間接共價(jià)連接于本發(fā)明的化合物。本發(fā)明的一個(gè)方面,載體為氨基酸,包括丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、甲疏氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或天冬氨酸。另一方面,載體為肽,包括丙氨酰-丙氨酰、脯氨酰-甲硫氨?;蚋拾滨?甘氨酰。載體還包括使本發(fā)明化合物靶向作用于特定組織或器官的分子。特別是,載體可促進(jìn)或提高本發(fā)明化合物向腦的主動(dòng)或被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)。本文所用的"聚合物,,是指包括兩個(gè)或多個(gè)單體亞單位的分子,這些亞基可以是相同或不溶的重復(fù)亞單位。單體通常包含結(jié)構(gòu)筒單的低分子量含碳分子。聚合物可任選被取代??捎糜诒景l(fā)明的聚合物的實(shí)例為乙烯基、丙烯基、苯乙烯、糖衍生的聚合物、聚乙二醇(PEG)、聚氧乙烯、聚亞曱基二醇、聚三甲基二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物及其共聚物、鹽和衍生物。在本發(fā)明的特定方面,聚合物為聚(2-丙烯酰氨基-2-甲基-l-丙磺酸-co-苯乙烯)、聚(乙烯磺酸);聚(4-苯乙烯磺酸鈉);及其衍生的石克酸和磺酸鹽或酯;聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸酯)、聚(曱基丙烯酸甲酯)和聚(乙烯醇)。本文所用的"糖類"是指多羥基醛或多羥基酮及其衍生物。最筒單的糖是單糖,其為具有許多羥基的小直鏈醛和酮,通常除官能團(tuán)外在每個(gè)碳原子上帶有一個(gè)羥基。單糖的實(shí)例包括赤蘚糖、阿拉伯糖、阿洛糖、阿卓糖、葡萄糖、甘露糖、蘇阿糖、木糖、古洛糖、伊杜糖、半乳糖、塔羅糖、己醛糖、果糖、己酮糖、核糖和戊醛糖。其它糖由單糖單元組成,包括二糖、寡糖或多糖,視單糖單元的數(shù)目而定。二糖由兩個(gè)通過共價(jià)糖苷鍵連接的單糖單元組成。二糖的實(shí)例有蔗糖、乳糖和麥芽糖。寡糖和多糖由通過糖苷鍵連^l妻在一起的單糖單元的長(zhǎng)鏈組成。寡糖通常含3-9個(gè)單糖單元,多糖通常含10個(gè)以上單糖單元。糖基可在1-4個(gè)不是與式Ia或式Ib的化合物連4lr位置的位置發(fā)生取代。例如,糖可被一個(gè)或多個(gè)任選取代的烷基、氨基、硝基、鹵素、巰基、羧基或羥基取代。說(shuō)明性的取代糖為葡糖胺或半乳糖胺。本發(fā)明的某些方面中,糖類即碳水化合物,是指糖,特別是己糖或戊糖,并且可以是醛糖或酮糖。糖可以是D或L型,可包括氨基糖、脫氧糖及其糖酸酸衍生物。在本發(fā)明的實(shí)施方案中,糖是指己糖,選自葡糖、半乳糖或甘露糖,或取代的己糖殘基如氨基糖殘基如己糖胺、半乳糖胺、葡糖胺,特別是D-葡糖胺(2-氨基-2-脫氧-D-葡糖)或D-半乳糖胺(2-氨基-2-脫氧-D-半乳糖)。合適的戊糖包括阿拉伯糖、巖藻糖和核糖。術(shù)語(yǔ)"糖類,,還包括糖蛋白,例如凝集素(如,刀豆蛋白A、麥芽凝集素、花生凝集素、血清粘蛋白和血清類粘蛋白)和糖脂如腦苷脂和神經(jīng)節(jié)苷脂。在本發(fā)明實(shí)踐中用作載體的"肽"包括1、2、3、4、5或更多個(gè)通過肽鍵共價(jià)連接在一起的氨基酸。肽可包含一種或多種天然存在的氨基酸及其類似物、衍生物和同系物。肽可經(jīng)修飾而提高其穩(wěn)定性、生物利用度、溶解度等。"肽類似物"和"肽衍生物"包括模擬肽的化學(xué)結(jié)構(gòu)并保留的肽的功能的分子。本發(fā)明的某些方面中,載體是氨基酸,如丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、曱硫氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、組氨酸或天冬氨酸。其它方面,載體是肽,如丙氨酰-丙氨酰、脯氨酰-曱硫氨?;蚋拾滨?甘氨酰。另外的方面,載體脂多肽,如白蛋白、抗胰蛋白酶、巨球蛋白、觸珠蛋白、caeruloplasm、轉(zhuǎn)4失蛋白、a-或(3-脂蛋白、(3-或丫-球蛋白或纖維蛋白原。肽類似物、衍生物和模擬物的設(shè)計(jì)方法在本領(lǐng)域已知。例如,參見Farmer,P.S.inDrugDesign(E.J.Ariens,ed〕AcademicPress,NewYork,1980,vol.10,pp.119-143;Ball.J.B.andAlewood,P.F.(1990)JMol.Recognition3:55;Morgan,B.A.andGainor,J.A.(1989)Ann.Rep.Med.Chem.24:243;andFreidinger,R.M.(1989)TrendsPharmacol.Sci.10:270.SeealsoSawyer,T.K.(1995)"PeptidomimeticDesignandChemicalApproachestoPeptideMetabolism(肽才莫擬物設(shè)計(jì)和肽代謝的化學(xué)方法)"inTaylor,M.D.andAmidon,G.L.(eds.)Peptide-BasedDrugDesign:ControllingTransportandMetabolism(基于肽的藥物i殳計(jì)控制轉(zhuǎn)運(yùn)和代^謝),Chapter17;Smith,A.B.3rd,etal.(1995)J.Am.Chem.Soc.117:11113-11123;Smith,A.B.3rd,etal.(1994)J.Am.Chem.Soc.116:9947-9962;andHirschman,R.,etal.(1993)J.Am.Chem.Soc.115:12550-12568。肽類似物、衍生物和肽才莫擬物的實(shí)例包括纟皮一個(gè)或多個(gè)苯并二氮雜蕈分子取代的肽(參見,如James,G.L.etal.(1993)Science260:1937-〗942)、具甲基化酰胺鍵的肽和"反-轉(zhuǎn),,肽(參見Sisto的U.S.Pat.No.4,522,752)。肽衍生物的實(shí)例包括氨基酸側(cè)鏈、肽骨架或氨基或羧基末端被衍生化的肽(例如,具甲基化酰胺^l定的肽化合物)。術(shù)語(yǔ)模擬物,尤其是肽模擬物,包括電子等排物。術(shù)語(yǔ)"電子等排體"是指可被取代為第二種化學(xué)結(jié)構(gòu)的化學(xué)結(jié)構(gòu),因?yàn)榈谝环N結(jié)構(gòu)的立體構(gòu)型調(diào)整為適合笫二種結(jié)構(gòu)的結(jié)合特異性位點(diǎn)。該術(shù)語(yǔ)特別包括本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的肽骨架修飾(即酰胺鍵模擬物)。這類修飾包括酰胺氮、Ot-碳、酰胺羰基的修飾,酰胺鍵的完全置換、延伸、刪除或骨架交聯(lián)。其它的電子等排體的實(shí)例包括被一種或多種苯并二氮雜萆分子取代的肽(見,James,G.L.etal.(1993)Science260:1937-1942)。其它可能的修飾包括N-烷基(或芳基)取代([CONR])、骨架交聯(lián)構(gòu)成內(nèi)酰胺和其它環(huán)狀結(jié)構(gòu)、化合物內(nèi)的所有L-氨基酸取代為D-氨基酸("轉(zhuǎn)型(inverso)")或插入反-轉(zhuǎn)氨基酸([NHCO])。"轉(zhuǎn)型"是指用D-氨基酸替代L-氨基酸,"反-轉(zhuǎn)"或"對(duì)-轉(zhuǎn)"是指倒轉(zhuǎn)氨基酸序列(反(retro))并用D-氨基酸替代L-氨基酸。例如,如果母體肽是Thr-Ala-丁yr,反修飾形式是Tyr-Ala-Thr,轉(zhuǎn)修飾形式是thr-ala-tyr,反-轉(zhuǎn)修飾形式是tyr-ala-thr(小寫字母形式是指D-氨基酸)。相比于母體肽,反-轉(zhuǎn)肽具有反向骨架,同時(shí)基本保留了側(cè)鏈的原始空間構(gòu)象,從而產(chǎn)生拓樸學(xué)上非常類似于母體肽的的反-轉(zhuǎn)異構(gòu)體。"反-轉(zhuǎn)"肽的進(jìn)一步描述,參見Sisto的U.S.Pat.No.4,522,752。肽可通過某些氨基酸(如絲氨酸)側(cè)鏈上的官能團(tuán)或其它合適的官能團(tuán)連接于本發(fā)明化合物。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,載體可包舍四或多個(gè)氨基酸,基團(tuán)通過側(cè)鏈上的官能團(tuán)連接于三或多個(gè)M酸上。在另一實(shí)施方案中,載體是一個(gè)氨基酸,特別是氨基酸的磺酸衍生物,例如磺基丙氨酸。"疾病和/或病癥"、"病癥,,和"疾病',在本文可互換使用,并且包括具以下特征的疾病異常蛋白折疊和/或聚集,和/或淀粉樣蛋白形成、沉積、蓄積或存留,或淀粉樣蛋白脂質(zhì)相互作用。在一些方面,該術(shù)語(yǔ)包括具有以下特征的疾病異常蛋白折疊和/或聚集,和/或淀粉樣蛋白形成、沉積、蓄積或存留。在特定的方面,所述疾病為中樞或外周神經(jīng)系統(tǒng)或系統(tǒng)器官疾病。在更特定的方面,該術(shù)語(yǔ)包括淀粉樣蛋白或淀粉樣蛋白原纖維形成、沉積、蓄積或存留相關(guān)的疾病,包括與AP淀粉樣蛋白、AA淀粉樣蛋白、AL淀粉樣蛋白、IAPP淀粉樣蛋白、PrP淀粉樣蛋白、(V微球蛋白淀4分樣蛋白、運(yùn)曱狀腺素蛋白、前清蛋白和促降鈣素、尤其是A卩淀粉樣蛋白和IAPP淀粉樣蛋白相關(guān)的疾病。疾病和/或病癥可以是需要解聚異常聚集的蛋白的疾病,和/或溶解和破壞預(yù)先形成的或預(yù)先沉積的淀粉^=羊蛋白或淀粉樣原纖維的疾病。在本發(fā)明的某些方面,所述疾病為淀粉樣變性。"淀粉樣變性"是指一類先天或后天疾病,特征為一種或多種不同類型的性質(zhì)相似稱為淀粉樣蛋白的蛋白原纖維聚集。淀粉樣蛋白可蓄積在單個(gè)器官中,或廣泛分布于體內(nèi)。該疾病可引發(fā)特定區(qū)域的嚴(yán)重問題,這些區(qū)域包括心、腦、腎和消化道。腦內(nèi)和腦血管沉積主要由p淀粉樣蛋白肽(p-AP)組成,是阿爾茨海默病的特征(家族型和偶發(fā)型);胰島淀粉樣蛋白肽(IAPP;淀粉不溶素)是胰島細(xì)胞淀粉樣蛋白沉積伴發(fā)II型糖尿病的原纖維的特征;(3-2-微球蛋白淀粉樣蛋白沉積的主要組分,其隨后導(dǎo)致長(zhǎng)時(shí)程血液透析治療。朊蛋白-相關(guān)疾病,例如Creutzfeld-Jacob病、羊瘙癢病、牛海綿狀腦病等的特征是抗蛋白酶形式的朊蛋白的蓄積(稱為AScrroPrP畫27)。某些疾病被認(rèn)為是原發(fā)性淀粉樣變性,其中沒有先前存在或共存疾病的證據(jù)。原發(fā)性淀粉樣變性的典型特征是"淀粉樣蛋白輕鏈-型"(AL-型)蛋白原纖維的存在。在繼發(fā)性淀粉樣變性中,有慢性炎性或感染性疾病的存在(例如,風(fēng)濕病樣關(guān)節(jié)炎、少年型慢性關(guān)節(jié)炎、僵硬型脊推炎、銀屑病、Reiter,s綜合征、AdultStill's疾病、Behcet's綜合征、Crohn's疾病、慢性微生物感染如骨髓炎、結(jié)核病和麻瘋病,惡性胂瘤如Hodgkin,s淋巴瘤、腎癌、腸癌、肺癌和泌尿生殖道癌,基底細(xì)胞癌和發(fā)細(xì)胞癌)。繼發(fā)性淀粉樣變性的特征在于衍生自血清淀粉樣蛋白A蛋白(ApoSSA)的AA型原纖維的沉積。家族遺傳性的淀粉樣變性可伴發(fā)ATTR運(yùn)甲狀腺蛋白型神經(jīng)病性、腎性或心血管性沉積,并且它們包括具有不同淀粉樣蛋白成分的其它綜合征(例如,以AA原纖維為特征的家族性地中海熱)。其它形式的淀粉樣變性包括局部型,以病灶為特征,通常是發(fā)生于分離的器官中的腫瘤樣沉積。此外,淀粉樣變性伴隨著老化,并且常常在心或腦中形成特征性斑。淀粉樣變性包括系統(tǒng)性疾病,例如成年發(fā)病的糖尿病、長(zhǎng)時(shí)程血液透析的并發(fā)癥和慢性炎癥或血漿細(xì)胞惡液質(zhì)的后遺癥??捎帽景l(fā)明化合物、組合物和方法治療和/或預(yù)防的淀粉樣變性疾病包括但不限于Alzheimer氏病、Down氏綜合征、拳擊員癡呆、多系統(tǒng)萎縮、包涵體肌炎、遺傳性腦出血伴隨Dutch型淀粉樣變性、C型Nieman-Pick病、腦(3-淀粉樣蛋白血管病、癡呆伴隨皮層基底變性、2型糖尿病淀粉樣變性、慢性炎癥的淀粉樣變性、惡性及家族性地中海熱的淀粉樣變性、多發(fā)性骨髓瘤和B細(xì)胞惡液質(zhì)的淀粉樣變性、腎病伴發(fā)蕁麻滲和耳聾(Muckle-Wells綜合征)、系統(tǒng)性炎癥伴發(fā)的淀粉樣變性、伴隨骨髓瘤或巨球蛋白血癥的特發(fā)原發(fā)性淀粉樣變性;伴隨免疫細(xì)胞惡液質(zhì)的淀粉樣變性;單克隆丙種^^蛋白病;隱性惡液質(zhì);伴隨慢性炎癥的局部結(jié)節(jié)性淀粉樣變性;伴隨幾種免疫細(xì)胞惡液質(zhì)的淀粉樣變性;家族性淀粉樣蛋白多神經(jīng)病;遺傳性腦出血伴發(fā)淀粉樣變性Alzheimer病和其它神經(jīng)變性疾?。宦匝和肝霭殡S的淀粉樣變性;II型糖尿?。灰葝u瘤;朊病毒蛋白病的淀粉樣變性、(傳播性海綿型腦朊蛋白病)、Creutzfeldt畫Jakob病、Gerstmann陽(yáng)Straussler病、庫(kù)魯病和瘙癢病、4半隨腕挖掘綜合征的淀粉樣變性、老年心臟性淀粉樣變性、家族淀粉樣變性性多神經(jīng)病或伴隨內(nèi)分泌腺腫瘤的淀粉樣變性,特別是阿爾茨海默癥和II型糖尿病。本發(fā)明的一個(gè)方面,疾病和/或病癥包括與淀粉樣蛋白原纖維形成、沉積、蓄積或存留相關(guān)的疾病,特別是與選自以下淀粉樣蛋白原纖維相關(guān)的疾病AP淀粉樣蛋白、AA淀粉樣蛋白、AL淀粉樣蛋白、IAPP淀粉樣蛋白、PrP淀粉樣蛋白、002-微球蛋白淀粉樣蛋白、運(yùn)曱狀腺素蛋白、前清蛋白和促降鈣素,特別是AP淀粉樣蛋白和IAPP淀粉樣蛋白。所述疾病的實(shí)例包括Alzheimer氏病、Down氏綜合征、拳擊員癡呆、多系統(tǒng)萎縮、包涵體月幾炎、遺傳性腦出血伴隨Dutch型淀粉樣變性、C型Nieman-Pick病、腦p-淀4分樣蛋白血管病、癡呆伴隨皮層基底變性、2型糖尿病淀粉樣變性、慢性炎癥的淀粉樣變性、惡性及家族性地中海熱的淀粉樣變性、多發(fā)性骨髓瘤和B細(xì)胞惡液質(zhì)的淀粉樣變性,朊病毒蛋白病的淀并分才羊變性、Creutzfeldt-Jakob病、Gerstmann-Straussler病、庫(kù)魯病和瘙癢病、伴隨腕挖掘綜合征的淀粉樣變性、老年心臟性淀粉樣變性、家族淀粉樣變性性多神經(jīng)病或伴隨內(nèi)分泌腺腫瘤的淀粉樣變性,特別是阿爾茨海默癥和II型糖尿病。本發(fā)明的另一方面,可利用本發(fā)明的化合物、組合物和方法治療和預(yù)防的疾病和/或病癥包括導(dǎo)致P-片層、原纖維和/或聚集體或寡聚體中的蛋白、蛋白片段和肽發(fā)生沉積的中樞或外周神經(jīng)系統(tǒng)病癥或系統(tǒng)器官病癥。特別是早老型和老年型Alzheimer氏??;淀粉樣蛋白血管??;輕度認(rèn)知功能損傷;Alzheimer氏病相關(guān)性癡呆(如血管性癡呆癥或阿爾茨海默氏癡呆);tau疾病(如嗜銀顆粒性癡呆、皮質(zhì)基底節(jié)變性、拳擊家癡呆癥);彌漫性神經(jīng)原纖維纏結(jié)伴鈣化癥,額顳葉型癡呆癥伴隨帕金森病,朊病毒相關(guān)疾病,哈勒沃登-施帕茨病,強(qiáng)直性肌營(yíng)養(yǎng)不良,C型尼曼一匹克病,非關(guān)島運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾病伴隨神經(jīng)纖維纏結(jié),皮克氏病,腦炎后帕金森綜合征,淀粉樣腦血管病,進(jìn)行性皮質(zhì)下膠質(zhì)細(xì)胞增生,進(jìn)行性上眼神經(jīng)核麻痹癥,亞急性硬化性全腦炎,和單純纏結(jié)性癡呆(tangleonlydementia)),a-突觸核蛋白病[如路易體癡呆,多系統(tǒng)萎縮伴隨膠質(zhì)細(xì)胞包涵體,夏-德綜合征,脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)(例如,齒狀核紅核蒼白球路易斯核萎縮DRPLA或馬查多-約瑟夫病);紋狀體黑質(zhì)變性,橄欖橋腦小腦萎縮,腦內(nèi)鐵沉積性神經(jīng)變性病I型,嗅覺障礙(olfactorydysftmction),和肌萎縮性側(cè)索石更化];帕金森氏癥(如,家族性和非家族性);肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥;痙攣性截癱(如,伴侶蛋白和/或三聯(lián)A蛋白);亨廷頓舞蹈病,脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào),弗立特里希氏共濟(jì)失調(diào);神經(jīng)退化性疾病伴隨由相應(yīng)基因中三核苷酸或四核普酸片段病理性擴(kuò)增而產(chǎn)生的富含多聚谷氨酰胺或聚丙氨酸或其它重復(fù)片段的蛋白細(xì)胞內(nèi)和/或細(xì)胞外聚集;腦血管疾?。惶剖暇C合癥;頭外傷伴隨創(chuàng)傷后淀粉樣蛋白p肽聚集;朊病毒相關(guān)疾病(Creutzfeld-Jakob病、Gerstmann-Straussler-Scheinker病和變異型Creutzfeldt-Jakob病);家族性英國(guó)型癡呆;家族性丹麥型癡呆;早老型癡呆伴隨痙攣性共濟(jì)失調(diào);淀粉樣腦血管病(英國(guó)型);早老型癡呆伴隨痙攣性共濟(jì)失調(diào)淀粉樣腦血管病(丹麥型);神經(jīng)抑絲酶包含體家族性腦病(FENIB);淀粉樣變多發(fā)性神經(jīng)病(如,老年淀粉樣多神經(jīng)病或系統(tǒng)性淀粉樣變性病);淀粉樣P肽導(dǎo)致的包涵體肌炎;家族性和芬蘭性淀粉樣變性?。话l(fā)性骨髓瘤伴系統(tǒng)性淀粉樣變性?。坏刂泻幔患毙愿腥竞脱装Y;II型糖尿病伴隨胰島淀粉樣多肽(IAPP)。本發(fā)明的一個(gè)方面,特別是^:合治療方面,其中所述的疾病和/或病癥為一種神經(jīng)元疾病(如Alzheimer's病,唐氏綜合癥,帕金森病,亨廷頓舞蹈病,致病性精神病(pathogenicpsychoticconditions),精神分裂癥,食物攝入受損,睡眠-清醒周期紊亂,能量代謝調(diào)節(jié)受損,自主功能受損,激素平衡受損,調(diào)節(jié)受損,體液失衡,高血壓,發(fā)燒,睡眠失調(diào),食欲減退,包括抑郁等焦慮相關(guān)的病癥,包括癲癇、戒毒和酒精中毒等發(fā)作,包括認(rèn)知功能障礙和癡呆相關(guān)的神經(jīng)系統(tǒng)退變性疾病)。本發(fā)明的化合物也可以抑制或阻止a-突觸核蛋白/非淀粉樣(NAC)原纖維的形成和生長(zhǎng),和/或引起其解體,分裂,和/或使預(yù)形成的a-突觸核蛋白/非淀粉樣(NAC)原纖維和oc-突觸核蛋白/非淀粉樣(NAC)原纖維相關(guān)蛋白沉積物解聚。適合應(yīng)用本發(fā)明的化合物和組合物治療突觸核蛋白疾病或突觸共核蛋白病的實(shí)例為突觸核蛋白形成、沉積、蓄積或體內(nèi)存留相關(guān)的疾病,包括而不限于Parkinson's病、家族性Parkinson's病、路易小體病、阿爾茨海默病路易體變異型、路易體癡呆、多系統(tǒng)萎縮癥、橄欖橋小腦萎縮、腦內(nèi)鐵沉積性神經(jīng)變性病I型、嗅覺障礙、關(guān)島帕金森癡呆綜合征。本發(fā)明的一個(gè)方面,所述的疾病為與神經(jīng)絲、神經(jīng)絲集聚和/或超氧化物歧化酶蛋白相關(guān)的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病,或伴隨伴估蛋白和/或三聯(lián)A蛋白功能缺陷的痙攣性截癱,或DRPLA或Machado-Joseph病等脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)癥。本發(fā)明另一方面,所述的疾病為朊病毒疾病,包括Creutzfeldt誦Jakob病、Gerstmann-Strausller-Scheinfer病、變異型Creutzfeldt國(guó)Jakob病,或?yàn)橐环N淀粉樣多神經(jīng)病,包括老年淀粉樣多神經(jīng)病或系統(tǒng)性淀粉樣變性。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,所述疾病為阿爾茨海默癥或Parkinson病,包括家族性或非家族性。本發(fā)明的某一方面,所述疾病可以被描述為因巨噬細(xì)胞存在由淀粉樣化的蛋白或肽而導(dǎo)致的炎癥過程。本發(fā)明的一個(gè)方法為抑制巨噬細(xì)胞活化和/或抑制炎癥過程。該方法包括降低、減緩、緩解或逆轉(zhuǎn)病人巨噬細(xì)胞侵染或炎癥的進(jìn)程或程度。所述疾病可為一種與分子相互作用相關(guān)的病癥,所述相互作用可以被本發(fā)明的化合物所破壞或離解。所述的"可以被本發(fā)明的化合物所破壞或離解的分子相互作用"包括涉及淀粉樣蛋白與蛋白或糖蛋白的相互作用。所述涉及淀粉樣蛋白的相互作用包括淀粉樣蛋白-淀粉樣蛋白的相互作用、淀粉樣蛋白-蛋白聚糖的相互作用、淀粉樣蛋白-蛋白聚糖/粘多糖(GAG)和/或淀粉樣蛋白-粘多糖相互作用。相互作用蛋白可以為細(xì)胞表面蛋白、分泌蛋白或細(xì)胞外蛋白。子相互作用的破壞或解離的疾病,所述分子相互作用涉及淀粉樣蛋白與包括蛋白或糖蛋白在內(nèi)的相互作用化合物??捎帽景l(fā)明化合物或組合物治療或預(yù)防的疾病例子包括細(xì)菌、病毒、朊病毒和真菌引起的疾病。這種疾病和病癥的例子涉及的病原體包括單純性皰滲病毒(7/er/7"Ww//e;cvirus)、狂犬病病毒(i^ewctoraZ^'^virus)、人巨纟田月包病毒(humancytomegalovirus),人免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiencyvirus)、百日咳博德特氏菌(5orafe&〃a;eWw^&」、沙目艮衣原體(C//awj^afrafc/20/77""^、;庇感p者血才干菌fT/aewop/H'/z^,/7j7i/e"2fle)、幽門蟲累軒菌(7fe//coZGcter"/or"、博氏疏螺旋體(5。^//06w廠gcto//—、淋病奈瑟球菌(臉/,"力gowo/r/zoe—、結(jié)核分支桿菌(M少co6acfe"'謂勵(lì)ercw/o鄉(xiāng)、金黃色葡萄球菌(iS鄉(xiāng)一ococcMsaw腦^、突變鏈球菌(5V,tococc"5"WMto"^、豬鏈3求菌(S&eptococcwssw/^、惡斗生癥原蟲(尸/asmo力'ww々/cz)an/m,、巴西利4十曼原蟲(Z^/Wwam'aa附azowem^、克式錐蟲(T)yp朋ozomacrw^、單核細(xì)胞增多性李斯特桿菌附owoc)^ogewg^、肺炎支y^體(A/yco;to5wa/wew附om'ae)、腸毒素大腸軒菌(enterotoxigenicco/"、尿路致病性大腸^矣希菌(uropathogenic五.co/^牙口銅纟錄々i單月包菌(尸sew(io附o"ayaen/g/"osa,。組合物鯊肌醇化合物可以制成供受試者使用的藥用組合物或飲食補(bǔ)充劑的形式。本發(fā)明的藥用組合物或其部分通常包括合適的藥學(xué)可接受的載體、賦形劑和溶J(某,這要依據(jù)給藥的目的形式來(lái)決定,并要與常規(guī)的制劑操作相一致。本發(fā)明的特定組合物包含純的和基本純的鯊肌醇化合物。在如下標(biāo)準(zhǔn)教科書中表述了適合的藥物載體、賦形劑和溶媒,雷明登氏藥學(xué)的理論與實(shí)踐(第二十一版),費(fèi)城科技大學(xué)(編者),Mack出片反公司(Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy,21stEdition.UniversityoftheSciencesinPhiladelphia(Editor),MackPublishingCompany)。通過舉例的方式,對(duì)以膠嚢或藥片形式的口服給藥而言,活性成分可以與可口服的、非毒性、藥學(xué)可接受的惰性載體合并應(yīng)用,如乳糖、淀粉、甲基纖維素、硬脂酸鎂、葡萄糖、硫酸鈣、磷酸二鈣、甘露醇、山梨醇等等。對(duì)以液體形式的口服給藥而言,藥物成分可與任何可口服、無(wú)毒性、藥學(xué)可接受的載體合并應(yīng)用,如乙醇甘油、水等等。適合的粘合劑(如白明膠、淀粉、玉米甜漿、天然糖包括葡萄糖、天然或合成樹脂,和蠟)、潤(rùn)滑劑(如油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、安息香酸鈉、乙酸鈉和氯化鈉)、崩解劑(如淀粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤(rùn)土、黃原膠),調(diào)味劑和著色劑也可合并入組合物或其成分中。本文描述的組合物可進(jìn)一步包括潤(rùn)濕劑、乳化劑和pH緩沖劑。本發(fā)明提供了一種商業(yè)化的制劑,包括而不限于丸劑、片劑、膠囊形片劑、軟和硬明膠膠嚢、錠劑、小嚢劑、扁嚢劑、植物膠嚢、液滴劑、酏劑、懸浮劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑、氣霧劑(以固體形式或在液體介質(zhì)中)、栓劑、無(wú)菌注射液,和/或滅菌包裝粉末,上述劑型含有一種肌醇化合物,特別是純的或基本純的肌醇化合物。組合物可以為液體溶液、懸浮液、乳化液、丸劑、片劑、膠嚢形片劑、緩釋制劑,或粉末形式。組合物可以用傳統(tǒng)的粘合劑和載體如甘油三酸酯制成栓劑??诜┬桶?biāo)準(zhǔn)的載體,如藥用級(jí)別的甘露糖、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。各種遞釋系統(tǒng)為人們所熟知,可以用來(lái)遞釋本發(fā)明組合物,如包于脂質(zhì)體、微粒、微膠嚢中等等。本發(fā)明一方面,提供了一種口服一種或多種肌醇化合物治療疾病和/或病癥的藥用組合物。在特定方面,提供了一種穩(wěn)定的可口服的藥用組合物,以治療以異常蛋白折疊和/或聚集,和/或淀粉樣蛋白形成、沉積、聚集或存留(如阿爾茨海默癥)為特征的疾病和/或病癥。所述組合物包括一種基本純的式Ia或Ib化合物。非胃腸道給藥制劑可包括水溶液、糖漿、水或油混懸液以及用食用油乳化的乳液,食用油包括棉花子油、杏仁油或花生油??捎糜谒畱腋∫旱姆稚┗驊腋┌ê铣苫蜃匀坏哪z,如黃蓍膠、藻酸鹽、阿拉伯膠、右旋糖酐、羧甲基纖維素鈉、明膠、曱基纖維素和聚乙烯吡咯烷酮。非腸道給藥制劑可包括無(wú)菌水溶液和非水溶劑,如水、等滲鹽水、等滲葡萄糖溶液、緩沖溶液,或其它便于治療活性藥物非腸道給藥的溶劑。意欲非腸道給藥的組合物還包括傳統(tǒng)的添加劑如穩(wěn)定劑,緩沖溶液,或防腐劑,如抗氧化劑,如羥基苯曱酸曱酯或相似的添加劑。本發(fā)明組合物可^^皮配制成如下描述的藥學(xué)可接受鹽。本發(fā)明一方面,所述組合物包括而不限于至少一種緩沖劑或溶液。緩沖劑的例子包括但不限于鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、磷酸、曱酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、乙二酸、葡萄糖醛酸、馬來(lái)酸、糠酸、枸椽酸、谷氨酸、苯曱酸、鄰氨基苯甲酸、水楊酸、苯乙酸、扁桃酸、樸酸、雙羥萘酸、曱磺酸、乙磺酸、泛酸、苯磺酸、硬脂酸、對(duì)氨基苯磺酸、海藻酸、半乳糖醛酸和其混合物??砂ㄆ渌镔|(zhì),如一種或多種預(yù)膠化玉米淀粉、聚乙烯聚吡咯烷酮、幾丙曱纖維素、乳糖、微晶纖維素、磷酸氫鈣、硬脂酸鎂、滑石粉、二氧化硅、馬鈴薯淀粉、淀粉羥乙酸鈉、十二烷基硫酸鈉、山梨糖醇漿、纖維素衍生物、氬化食用油脂、卵磷脂、阿拉伯樹膠、杏仁油、油性酯、乙醇、分餾植物油、木精、對(duì)羥基苯曱酸丙酯、山梨酸和其混合物。緩沖劑可另外包括一種或多種如下試劑,包括二氯二氟曱烷、三氯氟甲烷、克立氟烷、二氧化碳、聚(N-乙烯基吡咯烷酮)、聚甲基丙烯酸甲酯、聚交酯、聚羥基乙酸和其混合物。在一實(shí)施方案中,緩沖劑另包括一種配方劑,包括而不僅限于藥學(xué)可接受的載體、賦形劑、懸浮劑或分散劑。本發(fā)明的組合物可以用如下方法滅菌,如用細(xì)菌截留濾器過濾,在組合物中加入滅菌劑,輻照組合物或加熱組合物。做為一種選擇,本發(fā)明的化合物或組合物可以以無(wú)菌液體制劑形式提供,如凍干粉末,很容易在使用前立刻溶解到無(wú)菌溶液中。藥用組合物制備完畢后,它們可被放入到適當(dāng)?shù)娜萜髦?,并被?biāo)示用于治療一種適應(yīng)癥。為服用本發(fā)明的組合物,這種標(biāo)識(shí)應(yīng)包括用量、頻率和服用方法。做為飲食補(bǔ)充劑,篁肌醇化合物可制成適合服用的形式。本發(fā)明的補(bǔ)充劑可包含有任選的非活性成分,如稀釋液或填充物、粘性調(diào)節(jié)劑、防腐劑、轎味劑、著色劑,或其它本領(lǐng)域傳統(tǒng)的添加劑。僅做為舉例,常規(guī)的成分,如^f^蠟、卵石粦脂、白明膠、甘油、焦糖、胭脂紅也可包含在其中。本發(fā)明的飲食補(bǔ)充劑可包含^f壬選的第二種活性成分。在一個(gè)實(shí)施方案中,第二種活性成分為松醇或其活性的衍生物或代謝物。松醇產(chǎn)自植物,包括而不限于紫花苜蓿、九重葛屬葉、鷹嘴豆、松樹和黃豆。松醇也是商業(yè)化的產(chǎn)品,例如InzitoFM(HumaneticsCorporation,Min)。松醇衍生物或代謝物的例子包括而不限于松醇糖苷、松醇磷脂、松醇酯化物、脂質(zhì)結(jié)合的松醇、磷酸松醇、松醇肌醇六磷酸和松醇水解物,如d-手性-肌醇。食品補(bǔ)充劑可以液體飲食補(bǔ)充劑形式提供(如,一次性液體形式(dispensableliquid》,或做為一種選擇可以做成顆粒劑、膠嚢或栓劑,液體補(bǔ)充劑可以包括許多合適的載體和添加劑,包括水、二醇類、油、醇類、調(diào)味劑、防腐劑、著色劑等等。本發(fā)明的組合物與藥學(xué)可接受的載體混合,制成膠嚢、顆粒劑或栓劑。一方面,本發(fā)明的飲食補(bǔ)充劑可以做成飲料形式,也可以制劑成顆粒劑、膠嚢或栓劑形式。飲食補(bǔ)充劑可以根據(jù)傳統(tǒng)的方法做成軟膠嚢形式。軟膠嚢通常包括一層白明膠,內(nèi)包裹少量補(bǔ)充劑。補(bǔ)充劑也可以用傳統(tǒng)方法做成液體灌裝,白明膠密封的膠嚢形式。為將本發(fā)明的飲食補(bǔ)充劑組合物做成膠囊、顆粒劑或栓劑形式,根據(jù)傳統(tǒng)的制劑技術(shù),將一種或多種本發(fā)明的組合物與藥學(xué)可接受的載體均勻混合。對(duì)固體口服制劑,如膠嚢和顆粒劑,選用適合的載體和添加劑如淀粉、糖、稀釋劑、?;瘎?rùn)滑劑、粘合劑、崩解劑等等。本發(fā)明的另一方面,提供了一個(gè)藥盒。一方面,該藥盒包括本發(fā)明的化合-物或藥用組合物。該藥盒可以為一個(gè)包裝,內(nèi)有一個(gè)容器,容器內(nèi)含有本發(fā)明的組合物,并且內(nèi)有指導(dǎo)給受試者服藥的說(shuō)明書。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,提供了一個(gè)藥用包裝或藥盒,其中包括一個(gè)或多個(gè)容器,盛有一種或多種本發(fā)明的藥用組合物成分,以提供有益作用,特別是持續(xù)的有益作用。與容器在一起的是各種書面材料,如使用說(shuō)明書,或由負(fù)責(zé)管理藥品或生物制品標(biāo)識(shí)、生產(chǎn)、使用或銷售的政府機(jī)關(guān)規(guī)定格式的注意事項(xiàng),該注意事項(xiàng)反映了政府機(jī)關(guān)以人用為目的對(duì)生產(chǎn)、使用和銷售的批準(zhǔn)。應(yīng)用本發(fā)明涉及應(yīng)用一種或者多種鯊肌醇化合物,以提供有益效果的組合物和方法。特別是,本發(fā)明致力于應(yīng)用本發(fā)明的組合物治療本文提及的疾病和/或病癥,特別是預(yù)防和/或改善疾病的嚴(yán)重程度,疾病癥狀,和/或本文提及的疾病和/或病癥的復(fù)發(fā)周期。本發(fā)明還致力于應(yīng)本發(fā)明實(shí)施方案可提供組合物,所述組合物包括能夠提供有益效果的化合物,所述的有益效果包括更好的溶解度、穩(wěn)定性、效能、效價(jià)和/或?qū)嵱眯裕貏e是較好的溶解度和穩(wěn)定性。在一個(gè)方面,本發(fā)明通過給予一種或多種有效劑量的i:肌醇化合物,或其組合物,提供了一種可以改善健康受試者記憶和老年性記憶損傷受試者記憶的方法。其中所述的組合物包含一種或多種鯊肌醇類化合物,及其藥學(xué)可接受載體、賦形劑或溶々某。在另一方面,本發(fā)明進(jìn)一步涉及了改善記憶的方法,特別是短期記憶和其它與衰老過程相關(guān)的心理功能障礙。所述方法包括給予一種或多種有效劑量的莖肌醇化合物,及其藥學(xué)可接受鹽;或包含一種或多種豊肌醇化合物組合物,及其藥學(xué)可接受載體、賦形劑或溶々某。在一個(gè)實(shí)施方案中,提供了一種治療需要增強(qiáng)記憶的哺乳動(dòng)物的方法,其中所述的哺乳動(dòng)物沒有診斷出疾病、病癥、虛弱、或已知可損害或減弱記憶的其它疾患。所述方法包括給藥哺乳動(dòng)物有效改善記憶劑量的一種或多種篁肌醇化合物,或其藥學(xué)可接受的鹽,或飲食補(bǔ)充劑,所述的飲食補(bǔ)充劑包括一種或多種鯊肌醇化合物或其營(yíng)養(yǎng)學(xué)可接受的衍生物本發(fā)明的另一方面,提供了一種受試者中樞或外周神經(jīng)系統(tǒng)或系統(tǒng)器官疾病的治療方法。所述疾病與蛋白折疊和/或聚集紊亂、淀粉樣蛋白形成、沉積、蓄積或存留在內(nèi)的疾病和/或病癥有關(guān)。所述方法包括給予一種或多種有效劑量的鯊肌醇化合物,及其藥學(xué)可接受鹽;或包含一種或多種鯊肌醇化合物的組合物,及其藥學(xué)可接受載體、賦形劑或溶媒。另一方面,本發(fā)明提供了一種涉及給予受試者治療化合物的方法。所述方法包括給予一種或多種有效劑量的簠肌醇化合物,及其藥學(xué)可接受鹽;或包含一種或多種鯊肌醇化合物及其藥學(xué)可接受載體、賦形劑或溶^(某的組合物。所述化合物和組合物可抑制淀粉樣蛋白形成、沉積、蓄積或在內(nèi)存留,和/或引起分解/破壞已有的淀粉樣蛋白。所以,本發(fā)明的化合物和組合物可以用來(lái)抑制發(fā)生淀粉樣蛋白沉積的淀粉樣變性病。另一方面,本發(fā)明提供一種治療與淀粉樣蛋白相互作用有關(guān)病癥的方法。所述的淀粉樣蛋白相互作用可被本發(fā)明的一個(gè)化合物所破壞或離解。所述方法包括給予受試者有效量的一種或多種鯊肌醇化合物或藥學(xué)可接受鹽,或組合物,所述組合物包括一種或多種鯊肌醇化合物和藥學(xué)可接受的載體、賦形劑或溶力某。一個(gè)方面,本發(fā)明提供了一種在受試者體內(nèi)抑制、逆轉(zhuǎn)、降低或抑制淀粉樣蛋白集聚,提高了淀粉樣蛋白沉積物清除率,或減緩淀粉樣蛋白沉積物沉積的方法。所述方法包括給予受試者有效量的一種或多種鯊肌醇化合物或藥學(xué)可接受鹽,或一種組合物,所述組合物包括一種或多種篁肌醇化合物和藥學(xué)可接受的載體、賦形劑或溶々某。一方面,本發(fā)明提供一種在受試者體內(nèi)抑制,逆轉(zhuǎn),降低或抑制淀粉樣蛋白原纖維形成,器官功能障礙(如神經(jīng)退化疾病),或細(xì)胞毒性的方法。所述方法包括給予受試者治療有效量的一種或多種篁肌醇化合物或藥學(xué)可接受鹽,或一種組合物,所述組合物包括一種或多種鯊肌醇化合物和一種藥學(xué)可4^受的載體、賦形劑或溶^某。另一方面,本發(fā)明提供了一種動(dòng)物體內(nèi)抑制或逆轉(zhuǎn)構(gòu)象改變蛋白的組裝或集聚,所述方法包括對(duì)構(gòu)象改變蛋白引入一種或多種鯊肌醇化合物,其中包括其類似物,衍生物。本發(fā)明另一方面,提供了一種動(dòng)物體內(nèi)抑制或逆轉(zhuǎn)構(gòu)象改變蛋白組裝或集聚的方法,所述方法包括對(duì)構(gòu)象改變蛋白引入一種或多種鯊肌醇化合物。本發(fā)明的另一方面,提供了一種動(dòng)物體內(nèi)治療構(gòu)象改變蛋白組裝或集聚的方法,所述方法包括給予治療有效量的本發(fā)明的組合物。一發(fā)面,本發(fā)明提供一種增加或保持受試者突觸功能的方法。所述方法包括給予受試者治療有效量的一種或多種畫肌醇化合物或藥學(xué)可接受鹽,或一種組合物,所述組合物包括一種或多種鯊肌醇化合物和一種藥學(xué)可接受的載體、賦形劑或溶々某。本發(fā)明特別應(yīng)用于治療以淀粉樣蛋白沉積,特別是淀粉樣變性為表征的疾病和/或病癥,尤其是阿爾茨海默癥。所以,本發(fā)明與一種治療方法有關(guān),所述方法包括給予受試者治療有效量的一種或多種鯊肌醇化合物或藥學(xué)可接受鹽,或一種組合物,所述組合物包括一種或多種鯊肌醇化合物和一種藥學(xué)可接受的載體、賦形劑或溶々某。該方法中,對(duì)以淀粉樣蛋白沉積為表征的受試者,尤其是阿爾茨海默癥患者,給予本發(fā)明的化合物或組合物,將產(chǎn)生有益效果,更為理想的是持續(xù)的有益效果。在一實(shí)施方案中,如下一條或多條內(nèi)容確證了有益效應(yīng)的存在聚集的Ap和Ap寡聚體的破壞;長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)效應(yīng)增強(qiáng)或恢復(fù);和/或突觸功能的保持或增強(qiáng);和/或Ap腦聚集水平,腦淀粉樣蛋白斑沉積,腦可溶性Ap水平,神經(jīng)膠質(zhì)活性降低,消炎;和/或認(rèn)知功能衰退。在一方面,本發(fā)明為患病受試者(如阿爾茨海默癥)提供了一種改善疾病和/或癥狀進(jìn)程,或使疾病處于較低嚴(yán)重程度階段的方法,所述方法包括給予治療有效量的一種或多種畫肌醇化合物或藥學(xué)可接受鹽,或一種組合物,所述組合物包括一種或多種鯊肌醇化合物和一種藥學(xué)可4妄受的載體、賦形劑或溶々某。在另一方面,本發(fā)明與一種延遲疾病和/或癥狀進(jìn)程(如阿爾茨海默癥)的方法,所述方法包括給予治療有效量的一種或多種鯊肌醇化合物或藥學(xué)可接受鹽,或一種組合物,所述組合物包括一種或多種豈肌醇化合物和一種藥學(xué)可接受的載體、賦形劑或溶媒。在另一方面,本發(fā)明與一種增加患病受試者生存時(shí)間的方法,所述方法包括給予治療有效量的一種或多種鯊肌醇化合物或藥學(xué)可接受鹽,或一種組合物,所述組合物包括一種或多種簠肌醇化合物和一種藥學(xué)可接受的載體、賦形劑或諒^某。在一實(shí)施方案中,本發(fā)明與一種提高患病受試者(如阿爾茨海默癥)壽命的方法有關(guān)。所述方法包括給予治療有效量的一種或多種鯊肌醇化合物或藥學(xué)可接受鹽,或一種組合物,所述組合物包括一種或多種鯊肌醇化合物和一種藥學(xué)可接受的載體、賦形劑或溶^f某。本發(fā)明一方面,提供了一種治療輕度認(rèn)知損害的方法,所述方法包括給予治療有效量的一種或多種鯊肌醇化合物或藥學(xué)可接受鹽,或一種組合物,所述組合物包括一種或多種鯊肌醇化合物和一種藥學(xué)可接受的載體、賦形劑或溶媒。在一實(shí)施方案中,本發(fā)明提供了一種受試者認(rèn)知缺陷和淀粉樣蛋白斑病理學(xué)癥狀早期降低或逆轉(zhuǎn)淀粉樣蛋白沉積或神經(jīng)病理學(xué)癥狀的方法。所述方法包括給予受試者治療有效量的一種或多種鯊肌醇化合物或藥學(xué)可接受鹽,或一種組合物,所述組合物包括一種或多種鯊肌醇化合物和一種藥學(xué)可接受的載體、賦形劑或溶々某。在另一實(shí)施方案中,本發(fā)明提供了一種受試者認(rèn)知缺陷和淀粉樣蛋白斑病理學(xué)癥狀早期降低或逆轉(zhuǎn)淀粉樣蛋白沉積或神經(jīng)病理學(xué)癥狀的方法。所述方法包括給予受試者治療有效量的一種或多種鯊肌醇化合物或藥學(xué)可接受鹽,或一種組合物,所述組合物包括一種或多種鯊肌醇化合物和一種藥學(xué)可接受的載體、賦形劑或溶媒,以在認(rèn)知缺陷和淀粉樣蛋白斑病理學(xué)癥狀早期有效降^f氐或逆轉(zhuǎn)淀粉樣蛋白沉積或神經(jīng)病理學(xué)癥狀。本發(fā)明一方面,提供了利用一種或多種鯊肌醇化合物持續(xù)治療疾病和/或病癥(如阿爾茨海默癥)的改良方法和化合物組合。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中提供了組合物,所迷組合物包括一種或多種鯊肌醇化合物,可以取得更好的效能,效價(jià)和實(shí)用性。如,阿爾茨海默癥患者停止治療后仍可獲得持續(xù)的認(rèn)知功能衰退的改善和生存時(shí)間的提高,這都可表明該方法和組合物具有更好的效果。本發(fā)明的一個(gè)方面,式Ia或Ib的化合物可被用于治療阿爾茨海默癥。因此,可用治療有效劑量的式Ia或Ib化合物治療阿爾茨海默癥。這種治療方法可有效延緩阿爾茨海默癥的退化效應(yīng),尤其包括,而不僅限于,中樞神經(jīng)系統(tǒng)退化,智力喪失,短時(shí)記憶喪失和方向知覺喪失。在一實(shí)施方案中,其中所述疾病為阿爾茨海默病,其中所3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15種,或如下所有有益效果,進(jìn)一步講是5或10種或更多有益效果,更進(jìn)一層是如下15種或更多有益效果。a)具有阿爾茨海默癥狀的受試者接受本文公開的化合物治療后,與未服用化合物的水平比較,其長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)作用增強(qiáng)或恢復(fù)。本發(fā)明一方面,化合物引起受試者長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)作用至少提高約0.05%、0.1%、0.5%、1%、2%、5%、10%、15%、20%、30%、33%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、90%、95%,或99%。b)具有阿爾茨海默癥狀的受試者接受本文公開的化合物治療后,與未服用化合物的突觸功能水平比較,其突觸功能得到增強(qiáng)和/或保持。本發(fā)明一方面,化合物引起受試者突觸功能至少增強(qiáng)約0.05%、0.1%、0.5%、1%、2%、5%、10%、15%、20%、30%、33%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%、100%、125%、150%、175%或200%。c)突觸小泡蛋白水平增加。本發(fā)明的一個(gè)方面,突觸小泡蛋白水平至少增加約2%、5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%、100%、125%、150%、175%或200%。d)突觸小泡蛋白反應(yīng)扣結(jié)和細(xì)胞小體增加,本發(fā)明的一個(gè)方面,突觸小泡蛋白反應(yīng)扣結(jié)和細(xì)胞小體至少增加約2%、5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%、100%、125%、150%、175%或200%,尤其是約100-150%或140-150%。e)給予具有阿爾茨海默癥癥狀的受試者藥物治療后,炎癥癥狀降低或消失,尤其是Ap誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。f)與未接受鯊肌醇化合物治療的阿爾茨海默癥受試者比較,治療者腦(3-淀粉樣蛋白聚集減少。本發(fā)明的一個(gè)方面,所述化合物引起腦(3-淀粉樣蛋白聚集至少減少約2%、5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。g)與未接受鯊肌醇化合物治療的阿爾茨海默癥受試者比較,治療者腦P-淀粉樣蛋白斑沉積減少。本發(fā)明的一個(gè)方面,所述化合物引起p-淀粉樣蛋白斑沉積至少減少約2%、5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。h)蛋白斑數(shù)目減少。本發(fā)明的一個(gè)方面,所述化合物引起斑數(shù)目至少減少約2%、5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。本發(fā)明特定的方面,所述化合物引起蛋白斑數(shù)目減少5-15%和10-15%。i)蛋白斑尺寸的降低。本發(fā)明的一個(gè)方面,所述化合物引起蛋白斑尺寸最少降低約2%、5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。本發(fā)明特定的方面,所述化合物引起蛋白斑尺寸減少5-15%和10-15%。j)蛋白斑覆蓋腦面積百分?jǐn)?shù)降低。本發(fā)明的一個(gè)方面,所述化合物引起蛋白斑覆蓋腦面積百分凄t至少降低約2%、5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。本發(fā)明特定的方面,所述化合物引起蛋白斑覆蓋腦面積百分?jǐn)?shù)降低5-15%或10-15%。K)與未接受鯊肌醇化合物治療的阿爾茨海默癥受試者比較,治療者腦可溶性Ap寡聚體水平降低。本發(fā)明的一個(gè)方面,所述化合物引起腦可溶性A(3寡聚體至少降低約2%、5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。l)腦A|340水平降低。本發(fā)明的一個(gè)方面,所述化合物引起腦A(540水平至少降低約2%、5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。本發(fā)明特定的方面,所述化合物引起腦A(340水平降低10-50%,20-45%或25-35%。m)腦A(342水平降低。本發(fā)明的一個(gè)方面,所述化合物引起腦A(342水平至少降低約2%、5°/。、10%、15%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。本發(fā)明更具體的方面,所述化合物引起腦A|342水平降低10-50%、15-40%或20-25%。N)與未接受鯊肌醇化合物治療的阿爾茨海默癥受試者比較,治療者腦神經(jīng)膠質(zhì)活性降低。優(yōu)選地,所述化合物引起腦神經(jīng)膠質(zhì)活性至少降低約2%、5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。o)在延長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi),使突觸功能保持在正常水平。特別是治療后至少5星期、6星期、8星期、10星期、12星期、14星期、16星期、20星期、24星期、30星期、40星期、52星期、or78星期、更具體講、2到4星期、2到5星期、3到5星期、2到6星期、2到8星期、2到IO星期、2到12星期、2到16星期、2到20星期、2到24星期、2星期到12月,或2星期到24月。p)降低或減緩阿爾茨海默癥受試者疾病進(jìn)程的速度,特別是降低或減緩阿爾茨海默癥受試者認(rèn)知功能衰退。q)降低或減緩認(rèn)知功能障礙r)降低或減緩淀粉樣蛋白血管病。s)降低加速的死亡率t)阿爾茨海默癥受試者生存時(shí)間增加本發(fā)明的一個(gè)方面,本發(fā)明的組合物或治療方法的有益效果可表現(xiàn)為(a)和(b);(a)、(b)和(c);(a)、(b)、(e)、(f)和(g);(a)、(b)、(e)、(f)到(h);(a)、(b)、(e)、(f)到(i);(a)、(b)、(e)、(f)到①;(a)、(b)、(e)、(f)到(k);(a)、(b)、(e)、(f)到(l);(a)、(b)、(e)、(f)到(m);(a)、(b)、(e)、(f)到(n);(a)、(b)、(e)、(f)到(o);(a)、(b)、(e)、(f)到(p);(a)、(b)、(e)、(f)到(q);(a)、(b)、(e)、(f)到(r);(a)、(b)、(e)、(f)到(s);(a)、(b)、(e)、(f)到(t);(a)到(d);(a)到(e);(a)到(f);(a)到(g);(a)到(h);(a)到(i);(a)到(j);(a)到(k);(a)到(l);(a)到(m);(a)到(n);(a)到(o);(a)到(p);(a)到(q);(a)到(r);(a)到(s);和(a)-(t)。本發(fā)明可選擇的化合物,制劑和方法具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的有益效果,特別是上述(a)到(t)的一種或多種有益效果。本發(fā)明可選擇的化合物,制劑和方法具有持續(xù)的有益效果,特別是具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的持續(xù)有益效果。在一實(shí)施方案中,提供了一種藥用組合物,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的持續(xù)有益效果,特別是如上述(a)到(t)的一種或多種持續(xù)有益效果,所述的藥用組合物包括一種或多種鯊肌醇化合物。本發(fā)明一方面,一種或多種有益效果比傳統(tǒng)的治療方法能提供更好的治療效果。在某些方面,本發(fā)明治療方法具有較大效能和效價(jià)可提高治療的治愈率,降低很多麻煩的副作用和毒性。本發(fā)明選擇的方法也可改善長(zhǎng)期存在的阿爾茨海默癥,即使治療開始于癥狀顯現(xiàn)后很長(zhǎng)時(shí)間。根一方面,本發(fā)明有涉及一種利用一種或多種肌醇化合物或包括一種肌醇化合物的組合物治療阿爾茨海默癥受試者的方法,所述方法將Ap,Ap聚集體,A(3寡聚體,特別是A|340或AP40聚集體或寡聚體,和/或A(342或A|342聚集體或寡聚體在另一方面,本發(fā)明提供一種應(yīng)用組合物治療阿爾茨海默癥的方法,所述組合物包括一種或多種鯊肌醇化合物,采用劑量足以在服用后破壞A(3或Ap寡聚物并在給藥后持續(xù)維持較長(zhǎng)一段時(shí)間。另一方面,本發(fā)明提供一種治療阿爾茨海默癥迫切患者的方法,所述方法包括給予病人一種包含一種或多種鯊肌醇化合物的組合物,采用劑量足以增強(qiáng)或恢復(fù)長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)作用,和/或保持突觸功能。另一方面,本發(fā)明提供了一種治療阿爾茨海默癥的方法,所述方法包括給予哺乳動(dòng)物,優(yōu)選口服或全身給藥,一定量的鯊肌醇化合物,以降低腦A(3聚集體、腦淀粉樣蛋白斑沉積、腦可溶性A(3寡聚體、神經(jīng)膠質(zhì)活性,和/或炎癥并在給藥后維持較長(zhǎng)一段時(shí)間。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,提供了一種治療阿爾茨海默癥的方法,所述方法包括給予需治療哺乳動(dòng)物一種組合物。所迷組合物包括一種或多種鯊肌醇化合物的組合物,采用劑量足以減緩認(rèn)知功能衰退,特別在給藥后一段較長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)。因此,可用于治療阿爾茨海默癥。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,提供了一種治療阿爾茨海默癥的方法,所述方法包括給予需治療哺乳動(dòng)物一種組合物。所述組合物包括一種或多種篁肌醇化合物的組合物,采用劑量足以增強(qiáng)或保持突觸功能,特別在給藥后一段較長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)。因此,可用于治療阿爾茨海默癥。一方面,本發(fā)明提供了一種預(yù)防和/或治療阿爾茨海默癥的方法,所述方法包括給予需治療哺乳動(dòng)物一種組合物。所述組合物包括一種或多種鯊肌醇化合物的組合物,采用劑量足以破壞聚集的A(3或A(3寡聚體并維持給藥后一段較長(zhǎng)的時(shí)間。可用A(3特異性抗體或可檢測(cè)物標(biāo)記的堇肌醇檢測(cè)聚集的Ap或Ap寡聚體水平。本發(fā)明還包括用本發(fā)明的組合物與一種或多種其它治療藥物聯(lián)合用藥的方法。其中所述的其它治療藥物包括而不限于(3-分泌酶抑制劑、Y-分泌酶抑制劑、s-分泌酶抑制劑、其它|3-片層聚集/原纖維發(fā)生/ADDL生成(如Alzhemed)的抑制劑、NMDA拮抗劑(如美金剛)、非甾體抗炎化合物(如布洛芬、塞來(lái)考昔)、抗氧化劑(維他命E)、激素(如雌激素)、營(yíng)養(yǎng)劑和食物增補(bǔ)劑(如銀杏)、他汀類和其它降膽固醇藥物(如洛伐他丁和斯伐他汀)、乙酰膽石威酯酶抑制劑(如donezepil)、毒蕈堿激動(dòng)劑[如AF102B(Cevimehne,EVOXAC)、AF150(S)和AF267B]、抗精神病藥(氟哌啶醇、氯氮平、奧氮平)、抗抑郁藥包括三環(huán)和5-羥色胺重?cái)z取抑制劑(如舍曲林和西酞普蘭)、他汀類和其它降膽固醇藥物(如洛伐他丁和斯伐他汀)、免疫療法和A卩抗體(如ELANAN-1792)、疫苗、負(fù)責(zé)Tau蛋白磷酸化的激酶(CDK5,GSK3a,GSK3p)抑制劑(如氯化鋰)、調(diào)節(jié)AJ3產(chǎn)生酶(GSK3a,GSK3)3,Rho/ROCK激酶)的抑制劑(氯化鋰和布洛芬)、上調(diào)腦啡肽酶的藥物(降解AP的酶)、上調(diào)胰島素降解酶(降解AP的酶)的藥物,用于治療某一疾病導(dǎo)致的或與之相關(guān)并發(fā)癥的藥物,或治療或阻止副反應(yīng)的常規(guī)藥物療法。本發(fā)明同樣還包括用本發(fā)明的組合物與一種或多種其它治療方法聯(lián)合治療的方法,其中所述的其它治療方法包括而不僅限于基因治療和/或以藥物為基礎(chǔ)的上調(diào)腦啡肽酶(降解A卩的酶)的方法,基因治療和/或以藥物為基礎(chǔ)的上調(diào)胰島素降解酶的方法,或干細(xì)胞和其它以細(xì)^;為基礎(chǔ)的療法。選擇豈肌醇化合物和其它治療藥物或治療方法聯(lián)合治療可產(chǎn)生出乎意料的相加效應(yīng),甚至大于相加效應(yīng)。如協(xié)同效應(yīng)。其它治療藥物和方法可以通過一種不同的^4,]發(fā)揮作用,和本發(fā)明產(chǎn)生相加/協(xié)同效應(yīng)。一種組合物或方法(如聯(lián)合治療),可提高治療耐受力,降低單藥治療時(shí)(如每個(gè)化合物單獨(dú)治療)較高劑量和較長(zhǎng)時(shí)間產(chǎn)生副作用的風(fēng)險(xiǎn)。其中所述的聯(lián)合治療包括一種或多種鯊肌醇化合物和具有不同機(jī)制的治療藥物,以獲得最大的治療效杲。聯(lián)合治療時(shí)可對(duì)每一化合物采用較低劑量,從而降低每種化合物的毒副反應(yīng)。最優(yōu)劑量以下的劑量可提高安全性,也可降低達(dá)到預(yù)防和治療效果所必須的藥物費(fèi)用。另外,聯(lián)合用藥僅采用單個(gè)合并給藥單元,可以增加便利和提高順應(yīng)性。另外,聯(lián)合治療的其它優(yōu)點(diǎn)還包括抵抗降解和代謝的較高穩(wěn)定性,作用時(shí)間長(zhǎng),和/或即使在特別低的劑量下,也具有作用時(shí)間長(zhǎng),效力持久的優(yōu)點(diǎn)。一方面,本發(fā)明精心設(shè)計(jì)了包含至少一種鯊肌醇化合物的組合物的用途,用于制備藥物,以治療疾病和/或病癥。本發(fā)明精心設(shè)計(jì)了包含至少一種鯊肌醇化合物的組合物的用途,用于制備藥物,以預(yù)防和/或治療疾病和/或病癥的。本發(fā)明另提供了本發(fā)明的藥用組合物的用途,用于制備藥物,以治療疾病和/或病癥。所述藥物提供有益效果,最優(yōu)為治療后的持續(xù)有益效果。所述藥物可以以病人可消費(fèi)的形式,如丸劑、片劑、膠嚢形片劑、軟和^5更明膠膠嚢、錠劑、小嚢劑、扁嚢劑、植物膠嚢、液滴劑、酏劑、懸浮劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑、氣霧劑(以固體形式或在液體介質(zhì)中)、栓劑、無(wú)菌注射液,和/或滅菌包裝粉末,抑制淀粉樣蛋白的形成、沉積、蓄積和/或存留,而不用考慮其臨床環(huán)境。在一實(shí)施方案中,本發(fā)明涉及了包含至少一種本發(fā)明的治療有效劑量的鯊肌醇化合物或組合物的用途,用于制藥物治療疾病/或病癥,提供治療效應(yīng),尤其是有益效應(yīng),最優(yōu)為持續(xù)的有益效應(yīng)。在另一實(shí)施方案中,本發(fā)明提供了本發(fā)明的一種或多種肌醇化合物或組合物的用途,用來(lái)制備藥物,用以長(zhǎng)久或持續(xù)治療阿爾茨海默癥。在另一實(shí)施方案中,本發(fā)明提供了利用肌醇化合物制備藥用組合物,以可通過口腹給藥治療蛋白異常折疊和/或聚集,和/或淀粉樣蛋白形成、沉積、蓄積或存留為特征的病癥的方法。本發(fā)明的治療效果和毒性可以在細(xì)胞培養(yǎng)中用標(biāo)準(zhǔn)藥物規(guī)程進(jìn)行測(cè)定,或用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物如計(jì)算統(tǒng)計(jì)學(xué)參數(shù)測(cè)定,如EDJ群體50%有效的劑量)或LD^(群體50%致死的劑量)。治療指數(shù)為有效劑量和毒性劑量的比率,可以表示為EDs。/LDs。比。具有較大治療指數(shù)的藥用組合物是優(yōu)選的??梢栽谑茉囌吆图膊∧P椭姓撟C一種或多種治療效果,特別是本文公開的有益效應(yīng)。例如,在本文的例子的描述中,采用模型論證有益效果,具體的說(shuō)是在具有阿爾茨海默癥癥狀的TgCRND8鼠中論證有益效應(yīng)。本發(fā)明的方法另包括測(cè)定A(M故為指示物的方法。一方面,本發(fā)明與評(píng)價(jià)以淀粉樣沉積為特征的疾病,具體講是阿爾茨海默癥受試者的治療效果的方法有關(guān)。所述方法包括藥物治療前用標(biāo)記有可測(cè)定物質(zhì)的鯊肌醇化合物測(cè)定受試者來(lái)源樣品中A(340和/或Ap42水平,藥物治療后受試者來(lái)源樣品中A(340和/或Af542水平與A(540和/或A(342基礎(chǔ)水平進(jìn)行比較,治療后A(340和/或A(342水平較治療前基礎(chǔ)水平降低,提示為陽(yáng)性治療結(jié)果。可以在服用治療藥物后,逐步增大間隔測(cè)定A(340和/或A(342水平。如Ap40和/或A(M2水平持續(xù)性降低(如,持續(xù)3、6、12、18或24月),提示治療藥物具有持續(xù)的有益效果。受試者樣品中A(340和/或A(342水平也可以與由于藥物治療而癥狀改善或消失的的人群的A(340和/或Ap42對(duì)照值比較,如與對(duì)照值至少相等,提示治療陽(yáng)性反應(yīng)。給藥本發(fā)明的化合物和組合物可以能使活性藥物在受試者或病人體內(nèi)與藥物作用位點(diǎn)發(fā)生相互接觸的任何方式給藥,以產(chǎn)生治療效應(yīng),特別是有益效應(yīng),更具體說(shuō)是持續(xù)有益效應(yīng)?;钚猿煞挚梢酝瑫r(shí)給藥,也可以在不同時(shí)間點(diǎn)按任何順序依次給藥,以產(chǎn)生預(yù)期的有益效應(yīng)。本發(fā)明的化合物和組合物可以做成緩釋制劑,以實(shí)現(xiàn)局部或系統(tǒng)遞釋。選擇合適的給藥途徑和形式,以優(yōu)化本發(fā)明化組合物和治療的效應(yīng),以產(chǎn)生治療效應(yīng),特別使有益效應(yīng),更具體說(shuō)是持續(xù)的有益效應(yīng),這取決于熟練醫(yī)師和獸醫(yī)的能力??梢钥诜苿┬问椒迷摶衔锖徒M合物,如片劑、膠嚢(每個(gè)都包括緩釋或定時(shí)釋放片)、丸劑、粉末、顆粒劑、酏劑、酊劑、懸浮劑、糖漿劑和乳劑。它們也可以通過靜脈注射(推注或輸注)、腹腔注射、皮下注射、或肌肉注射,這些給藥途徑所采用的劑型都是藥學(xué)領(lǐng)域的才支術(shù)人員所熟知的劑型。本發(fā)明的組合物可以局部應(yīng)用合適的鼻內(nèi)介質(zhì),或通過經(jīng)皮途徑實(shí)現(xiàn)鼻內(nèi)給藥,如應(yīng)用方便的經(jīng)皮貼膜。經(jīng)皮遞釋系統(tǒng)的給藥方案應(yīng)為連續(xù)的而不是斷斷續(xù)續(xù)的。還可以采用緩釋制劑給藥。本發(fā)明一方面,所述的化合物和組合物可以通過外周給藥,特別是靜脈給藥、腹腔給藥、皮下給藥、肌肉給藥、口服給藥、局部給藥、鼻內(nèi)給藥或肺部給藥。本發(fā)明的劑量方案可根據(jù)已知因素加以改變,如藥物的藥動(dòng)學(xué)特性,它們的給藥模式和途徑、種群、年齡、性別、健康狀況、醫(yī)療條件、患者體重、癥狀的本性和程度、同步治療的種類、治療的頻率、給藥途徑、病人肝腎功能狀況,和預(yù)期效果。篁肌醇化合物或組合物可有效治療特定疾病和/或病癥,以提供效應(yīng),特別是有益效果,進(jìn)一步講是持續(xù)有益效果。其劑量決定于疾病和/或病癥本性,可以用標(biāo)準(zhǔn)的臨床技術(shù)測(cè)定。制劑中采用的準(zhǔn)確劑量也決定于給藥途徑,疾病嚴(yán)重程度,并且要根據(jù)從業(yè)者的判斷和每個(gè)病人的情況來(lái)決定。選擇合適的給藥劑量范圍,以獲得治療效果,特別是有益效果,進(jìn)一步講是持續(xù)的有益效果。這一劑量范圍一般可有效引發(fā)目的生物響應(yīng)。這一劑量范圍通常約為0.5mg到約2g每公斤、約lmg到約lg每公斤、約lmg到約200mg每公斤、約lmg到約100mg每公斤、約lmg到約50mg每公斤、約10mg到約100mg每公斤,或約30mg到約70mg每公斤患者體重。本發(fā)明的組合物或治療方法包括含有至少一種鯊肌醇化合物的單元?jiǎng)┝?,以提供有益效果,特別是本文陳述的(a)到(t)的一種或多種有益效果。"單元?jiǎng)┝?或"劑量單元"指一個(gè)整體,就是能夠給病人服用的單一劑量,并且很容易被處理和包裝,保持物理和化學(xué)穩(wěn)定的單元?jiǎng)┝?,包括這些活性藥物或包含一種多種固體或液體藥學(xué)賦形劑,載體或溶媒。受試者可基本上根據(jù)目的時(shí)間服用鯊肌醇化合物或組合物或制劑接受治療。本發(fā)明的組合物可以每天服用治療1到多次,特別是每天1或2次,每周1次,每月1次或連續(xù)服用。但,受試者也可以以更低頻率服用接受治療,如隔日服用,或每周l次,或更高頻率服用。本發(fā)明的一種肌醇化合物,組合物或制劑可被周期性或連續(xù)性給予受試者服用至少l周、2周到4周、2周到6周、2周到8周、2周到10周、2周到12周、2周到14周、2周到16周、2周到6月、2周到12月、2周到18月,或2周到24月。一方面,本發(fā)明提供了補(bǔ)充人類飲食的方案,所述方案為給予包括豈肌醇化合物或其營(yíng)養(yǎng)學(xué)可接受的衍生物的一種補(bǔ)充劑。受試者可每天至少接受一次飲食補(bǔ)充劑治療,或更低頻率,如每隔一天或每星期一次。可每天服用食品添加劑,但如果降低頻率,如每星期幾次,或即使單獨(dú)一次服用,也會(huì)有有益效果。本發(fā)明的一個(gè)特定方面,l是供了補(bǔ)充人類飲食的方案,所述方案包括每天給予人25到約200mg的式Ia或Ib化合物,或其營(yíng)養(yǎng)學(xué)可接受的衍生物。另一方面,每天給予人50-100mg的式Ia或Ib化合物。本發(fā)明的添加劑可在進(jìn)餐期間或餐后被吸收。所以,可以在早餐,和/或午餐期間服用添加劑。可在早餐前不久,早餐中或早餐后不久服用一份添加劑。在午餐前不久,午餐中或午餐后不久服用第二份添加劑。中餐和午餐添加劑可提供同量的肌醇化合物。本文描述的添加劑和方案如配合根據(jù)公眾認(rèn)可營(yíng)養(yǎng)指導(dǎo)原則制定的平衡飲食,和每星期幾次的適度至中等的鍛煉計(jì)劃,可取得最大效果。在一實(shí)施方案中,提供了一人類飲食補(bǔ)充劑方案,所述方案為給予人食品添加劑,所述添加劑每克含有5到約30mg—種或多種肌醇化合物,或影響學(xué)可接受的衍生物。在一實(shí)施方案中,在早餐時(shí)服用一份添加劑,在午餐時(shí)J11用第二份添加劑。將通過特定實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)的描述。提供下列實(shí)施例是以說(shuō)明為目的,而非意欲以任何方式限制該發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠很容易的領(lǐng)會(huì)其中多種非關(guān)鍵參數(shù),從而對(duì)其加以改變或修改,得到本質(zhì)相同的結(jié)果。,實(shí)施例1實(shí)施例所描述的研究采用了下述方法。小鼠實(shí)驗(yàn)組選用具有C3H/B6雜交背景的TgCRND8小鼠[17,18]。實(shí)驗(yàn)組小鼠按每天30mg初治劑量給予表肌醇或鯊肌醇。初治劑量是根據(jù)肌肌醇臨床上治療各種精神障礙患者的常規(guī)劑量(6-18mg/天/成人,或86-257mg/Kg/天)選定的[36]。該劑量水平的肌肌醇對(duì)人和動(dòng)物都無(wú)毒性反應(yīng)。選用511^/1^/天-100mg/Kg/天的劑量,重復(fù)進(jìn)行了本文所描迷的研究,各劑量都得到了同樣的無(wú)毒性試驗(yàn)結(jié)果(數(shù)據(jù)未顯示)。選用5月齡小鼠(每組10只)入組試驗(yàn),治療1個(gè)月后分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。監(jiān)控記錄動(dòng)物的體重,皮毛特性和籠內(nèi)行為??紤],實(shí)驗(yàn)選用甘露醇作為熱量攝入潛在改變的陰性對(duì)照。所有實(shí)驗(yàn)操作遵守《加拿大動(dòng)物保護(hù)協(xié)會(huì)的指導(dǎo)原則》(CanadianCouncilonAnimalCareguidelines^行為學(xué)檢驗(yàn)據(jù)前述實(shí)驗(yàn)方法[18],進(jìn)行Moms水迷宮測(cè)試。小鼠先進(jìn)行非空間預(yù)訓(xùn)練后,再進(jìn)行5天的定位航行實(shí)驗(yàn)(空間識(shí)別訓(xùn)練),每天訓(xùn)練4次,然后通過提示的可見平板排除一般動(dòng)機(jī)缺陷,學(xué)習(xí)能力缺陷和運(yùn)動(dòng)能力問題,通過空間探索實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)小鼠的記憶力。以各處理方法(未處理組,表肌醇組或鯊肌醇組)和基因型(TgCRND8組與非轉(zhuǎn)基因組比較)作為組間因素,用重復(fù)測(cè)量混合模型對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析(ANOVA)。根據(jù)前述方法[41],進(jìn)行開場(chǎng)實(shí)驗(yàn),以小鼠行走持續(xù)時(shí)間,靜止時(shí)間和洗毛時(shí)間作為小鼠自發(fā)性運(yùn)動(dòng)能力的指標(biāo),測(cè)試小鼠運(yùn)動(dòng)活動(dòng)能力。根據(jù)前述方法[42],用Economex加速旋轉(zhuǎn)棒(ColumbusInstruments,Columbus,OH)檢測(cè)小鼠的感覺運(yùn)動(dòng)功能,旋轉(zhuǎn)棒從5r.p.m/s初始恒定速度以0.2r.p.m./s加速,記錄小鼠在旋轉(zhuǎn)桿上的潛伏時(shí)間,每天測(cè)試4次,2次測(cè)試之間間隔30min。各小鼠在測(cè)試前訓(xùn)練7天,測(cè)試日各小鼠4次從旋轉(zhuǎn)棒上滑落的潛伏時(shí)間之和為小鼠的最終得分。腦淀粉樣蛋白斑負(fù)載取小鼠大腦,用4%多聚甲醛固定一腦半球,從正中矢狀面方向用固體石蠟包埋。為得到系統(tǒng)的均勻隨機(jī)切片組,對(duì)整個(gè)腦半^Ui行厚度為5pm的連續(xù)切片。選擇間隔50|um的切片組用于分析(10-14片/組)。腦淀粉樣蛋白斑的鑒定如下進(jìn)行用甲酸對(duì)切片上的抗原進(jìn)行提取,先與Ap—抗(DakoM-0872)進(jìn)行孵育,然后與二抗(DakoStreptABCcomplex/horseradishkit)進(jìn)行孵育。最后用DAB染色顯象并用勞克堅(jiān)牢藍(lán)反染。用連接萊卡顯微鏡和日立KP-M1UCCD攝影機(jī)的LecoIA-3001圖象分析軟件評(píng)價(jià)腦淀粉樣蛋白斑負(fù)載水平。然后用Openlab圖象軟件(Improvision,Lexington,MA)將顯微照片轉(zhuǎn)化為二進(jìn)制圖象,測(cè)定斑點(diǎn)數(shù)目和面積。起源于血管或血管周圍的淀粉樣蛋白定義為血管性淀粉樣蛋白負(fù)載,也可用同樣的方法進(jìn)行分析。血漿和大腦中淀粉樣蛋白AP的含量在蔗糖緩沖溶液中勻漿半腦組織樣品,然后用0.4%二乙胺/100mMNaCl提取可溶性Ap,或用冰甲酸分離提取總A(5。提取液中和后,稀釋,用商品化的試劑盒(BIOSOURCEInternational)測(cè)定Ap40和A(M2水平。每腦半球測(cè)定三份樣品,報(bào)告x士SEM數(shù)據(jù)。用尿素膠電泳分離樣品,用蛋白質(zhì)印跡分析各組分A(3種群[43]。用6E10抗體(BIOSOURCEIntemational)和增強(qiáng)焚光化學(xué)法(Amersham)檢測(cè)分析Ap水平。神經(jīng)膠質(zhì)增生的定量對(duì)處理組和對(duì)照組小鼠腦半球進(jìn)行多聚甲醛固定,冷凍,矢狀向切片,從中隨機(jī)選取間隔均勻的5張切片。在切片上用抗鼠膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)IgG2a(Dako;1:50稀釋)免疫標(biāo)記星形膠質(zhì)細(xì)胞,用抗鼠CD68IgG2b(Dako;1:50稀釋)標(biāo)記小膠質(zhì)細(xì)胞。用安裝在ZeissAxioscope2Plus顯纟敖鏡上的Coolsnap數(shù)碼相機(jī)抓拍數(shù)碼相片。用Openlab3.08圖像軟件(Improvision,LexingtonMA)對(duì)相片進(jìn)行分析。存活普查本研究采用Kaplan-Meier法[44]評(píng)估小鼠治療的生存概率,因Kaplan-Meier法可根據(jù)每一死亡事件的發(fā)生計(jì)算生存概率,所以適合小樣本研究。在本存活分析實(shí)驗(yàn)中,每治療組采用35只小鼠,用Tarone-Ware4全驗(yàn)法評(píng)估治療的效果。腦中淀粉樣前體蛋白(APP)的分析在緩沖液中(20mMTrispH7.4,0.25M蔗糖,ImMEDTA,ImMEGTA,混合有0.4%DEA(二乙胺)/100mMNaCl的蛋白酶抑制劑混合物,)勻漿半腦組織,109,000xg離心。如前述方法[17,18],用單克隆抗體22C11進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析上清中淀粉樣前體蛋白(APP)水平,用單克隆抗體C1/6.1分析沉淀中APP全蛋白水平??扇苄訟P寡聚體分析本研究用一種抗A(3寡聚體特異性抗體進(jìn)行斑點(diǎn)雜交實(shí)驗(yàn)分析樣品中可溶性Ap寡聚體[24]。簡(jiǎn)述如下在蛋白酶抑制劑混合物(Sigma)的存在下,將A(3寡聚體^v腦半球組織溶解到PBS緩沖溶液中,4°C,78,500xg離心lh,對(duì)上清進(jìn)行分析。用BCA蛋白質(zhì)分析法(Pierce)測(cè)定上清中蛋白含量。將2嗎總蛋白點(diǎn)樣到硝化纖維膜上,用10。/。的脫脂牛奶TBS溶液封閉膜,然后與生物素化的Af3寡聚體特異性抗體進(jìn)行孵育。印跡與鏈親合素-HRP孵育后,用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光試劑盒檢測(cè)可溶性A(3寡聚體水平。本研究用可溶性,纖維狀的Ap42做陰性對(duì)照,采用合成的Ap42寡聚體用做陽(yáng)性對(duì)照[23]。所用對(duì)照樣品在寡聚體抗體洗脫后,用抗A(5抗體6E10進(jìn)行再探測(cè)予以鑒定。長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)效應(yīng)按標(biāo)準(zhǔn)操作方法[45,46],記錄小鼠海馬CA1區(qū)的場(chǎng)電位。選用P16到P26年齡的SwissWebster小鼠,用異氟醚麻醉??焖偃〕瞿X組織,放入水冷的富氧的蔗糖-腦脊液中(單位mM:248蔗糖,2KC1,2MgS04,1.24NaH2P04,1CaCl2,1MgCl2,26NaHC03,10D-葡萄糖,pH7.4,~315mOsmol[47])。分離各腦半球的海馬區(qū),以350iLim厚度做冠狀切片。切片轉(zhuǎn)移到盛有NaCl-腦脊液(單位mM:124NaCl,2KC1,2MgS04,1.25Na^PO^2CaCl2,26NaHC03,10D-葡萄糖,pH7.4,310mOsmol)的保持室中,使其活性恢復(fù)lh以上。切片轉(zhuǎn)移至保持室后,立刻在15ml人工腦脊液閉合回路中連續(xù)灌流,以保持A(3寡聚體活性?;€穩(wěn)定20min后,在灌流回路中加入lml含或不含1.25fjM鯊肌醇的15x濃7PA2條件培養(yǎng)基。將一雙極刺激電極(WorldPrecisionInst.)埋置于謝弗側(cè)枝以傳遞基礎(chǔ)刺激和強(qiáng)直電刺激。將一灌有人工腦脊液的硼硅酸鹽玻璃記錄電極(2-4MQ)安置于刺激電極75-200附近。以能獲得25-40%的最大場(chǎng)電位響應(yīng)設(shè)置刺激強(qiáng)度(通常設(shè)置為10-20微安培),測(cè)試刺激頻率為0.05HZ。每間隔5min,以4次強(qiáng)直電刺激(100HZ,堅(jiān)持ls)誘導(dǎo)LTP發(fā)生。場(chǎng)電位響應(yīng)值被Axopatch200B放大10倍后,在10KHz頻率下收集數(shù)據(jù),在2kHz頻率下篩選數(shù)據(jù)。用pClamp9.2軟件跟蹤分析軌跡。用總響應(yīng)約10-60%的數(shù)據(jù)評(píng)估場(chǎng)電位響應(yīng)的斜率。突觸小泡蛋白的定量從處理組和對(duì)照組多聚甲醛固定的鼠腦半球矢向切片中,選取間隔均勻的3張切片進(jìn)行突觸小泡蛋白免疫化學(xué)染色分析。用抗突觸小泡蛋白抗體IgG(1:40;Roche,Laval,PQ)免疫標(biāo)記切片。按上述方法進(jìn)行數(shù)碼拍照和分析。每一切片隨機(jī)選取海馬CA1區(qū)100拜2的面積,計(jì)算突觸小泡蛋白反應(yīng)小體和扣結(jié)的數(shù)目。結(jié)果以100nn^面積含有多少反應(yīng)小體和扣結(jié)表示[48,49]。結(jié)果給阿爾茨海默病才莫型小鼠(TgCRND8)詞以肌醇類化合物卩7,18],以評(píng)價(jià)該類化合物的體內(nèi)效果。TgCRND8小鼠可表達(dá)人淀粉樣前體蛋白的轉(zhuǎn)基因(APP奶),該基因含有兩個(gè)錯(cuò)義突變(KM670/6"NL和V"7F),可導(dǎo)致人AD。具有該基因的3月齡小鼠,表現(xiàn)為漸進(jìn)型空間學(xué)習(xí)能力缺陷,并伴隨腦AP水平升高和腦細(xì)胞外淀粉樣蛋白斑數(shù)目的增加[U]。6月齡TgCRND8小鼠,腦內(nèi)Aji水平,淀粉樣蛋白斑形態(tài),密度和分布與已確診的AD患者腦部情況非常相近。與AD患者相似,模型小鼠生化學(xué),行為學(xué)和神經(jīng)病理學(xué)特征的惡化也伴隨著死亡率的增加。將TgCRND8小鼠和同窩出生的非轉(zhuǎn)基因小鼠,分成性別和年齡相匹配的群別,用以測(cè)試肌醇立體異構(gòu)體做為治療藥物的效果(因?qū)嶒?yàn)推遲至5月齡開始,持續(xù)1個(gè)月時(shí)間,到6月齡結(jié)束)。小鼠隨機(jī)分組口服給藥如下活性化合物(l,2,3,4,5/6-表肌醇或1,3,5/2,4,6-鯊肌醇),另安排安慰治療組(甘露醇)和未處理組。實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)是對(duì)認(rèn)知功能,腦A(3水平和神經(jīng)病理學(xué)的研究分析。1,2,3,5/4,6-月幾肌醇未#皮包括在本研究中,因前述體外實(shí)驗(yàn)表明,肌肌醇僅僅具有較弱的活性,體內(nèi)初步研究也表明沒有顯著效應(yīng)(數(shù)據(jù)未顯示)。實(shí)驗(yàn)過程中,觀察者不了解基因型和處理組的信息。肌醇立體異構(gòu)體逆轉(zhuǎn)已形成腦淀粉樣蛋白沉積多數(shù)AD患者只有當(dāng)出現(xiàn)癥狀時(shí)才會(huì)尋求治療,如A(M氐聚化,沉積,毒性,斑形成等發(fā)展到相當(dāng)嚴(yán)重的程度的時(shí)候。為評(píng)價(jià)肌醇立體異構(gòu)體能否消除已形成的AD樣表型,將TgCRND8小鼠實(shí)驗(yàn)推遲到5月齡,該年齡段的小鼠具有明顯的行為缺陷,伴有大量的Ap肽和斑負(fù)載。用表肌醇,或鯊肌醇處理TgCRND8小鼠和/或非轉(zhuǎn)基因同窩小鼠(10只每組)28天,并設(shè)置未處理對(duì)照組。該實(shí)驗(yàn)中活性化合物的給藥劑量,口服給藥方式,及神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)和神經(jīng)病理的分析方法,都與前述的預(yù)防性實(shí)驗(yàn)采用的方法一致。本次動(dòng)物實(shí)驗(yàn)并未給出死亡率曲線,因?qū)嶒?yàn)時(shí)間很短,TgCRND8小鼠未處理組死亡動(dòng)物很少,不能提供有意義的數(shù)據(jù)。本研究比較了表肌醇或鯊肌醇處理28天或未處理組6月齡小鼠空間學(xué)習(xí)能力。表肌醇處理28天的TgCRND86月齡小鼠與未處理TgCRND8同窩小鼠比較無(wú)顯著性差異^15=3.02;p=0.27;圖1A),而顯著性差于同窩非轉(zhuǎn)基因小鼠(?114=11.7,p=0.004;圖1C)。進(jìn)一步講,探針實(shí)驗(yàn)也確證了表肌醇處理的TgCRND8小鼠與未處理TgCRND8小鼠比較,在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)顯著性差異(p-0.52;圖1E)。表肌醇處理對(duì)已患疾病動(dòng)物腦部A(340和/或A(M2水平,腦部A(3斑覆蓋面積和斑數(shù)目無(wú)明顯影響(表1)。用鯊肌醇處理28天的TgCRND85月齡小鼠的行為表現(xiàn)明顯優(yōu)于未處理TgCRND8同窩小鼠(p岣.Ol)。實(shí)際上,鯊肌醇處理的TgCRND8小鼠的認(rèn)知行為與其非轉(zhuǎn)基因同窩小鼠已無(wú)區(qū)別(F卬-2.9,p=0.11;圖IB,D)。這種有益效果不能歸于篁肌醇對(duì)行為系統(tǒng),運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)和感知系統(tǒng)的非特異性作用,因?yàn)榧〈继幚韺?duì)非轉(zhuǎn)基因小鼠的認(rèn)知行為無(wú)有益作用(Fy『0.98;p=0.39)。在探針實(shí)驗(yàn)中,環(huán)形交叉指數(shù)也表明豊肌醇處理TgCRND8小鼠記憶力明顯得到提高,統(tǒng)計(jì)學(xué)上已與非轉(zhuǎn)基因同窩小鼠無(wú)差異(p-0.64;圖1E)。在另一組獨(dú)立的小鼠實(shí)驗(yàn)中,選用小鼠在目標(biāo)象限滯留的時(shí)間百分?jǐn)?shù)做為另一可選的量度標(biāo)準(zhǔn)。鯊肌醇處理的TgCRND8小鼠與非轉(zhuǎn)基因同窩小鼠已無(wú)顯著性差異(p-0.28;數(shù)據(jù)未顯示),這種有益效果并不歸因于感覺運(yùn)動(dòng)行為的改變。在開場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中(補(bǔ)充的數(shù)據(jù)),鯊肌醇處理對(duì)TgCRND8小鼠洗刷行為或其活動(dòng),與未處理組(F^-0.25;口=0.63)和非轉(zhuǎn)基因同窩小鼠(Fn^0.02;p^.89)比較,都沒有差異。同樣,轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)也表明在感覺運(yùn)動(dòng)功能方面,莖肌醇處理TgCRND8小鼠與未處理TgCRND8小鼠比較^=0.42),處理TgCRND8小鼠與處理或未處理的非轉(zhuǎn)基因小鼠之間比較(p-0.79),也都沒有差異。與前述預(yù)防性實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果相一致,一項(xiàng)堇肌醇處理5月齡小鼠的28天實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下l)腦Af340和A(342水平降低(如不溶性Ap40降低29±2.3%,p〈0.05;不溶性A(342降低23±1.4%,p〈0.05);2)淀粉樣蛋白斑數(shù)目,尺寸和斑腦內(nèi)覆蓋面積百分?jǐn)?shù)顯著性降低(斑數(shù)目降低13土0.3%,p<0.05;斑尺寸降低16±0.4%,p=0.05;斑腦內(nèi)覆蓋面積百分?jǐn)?shù)降低14±0.5%;表格1;圖1C-D)。這些結(jié)果在有效性上可與6個(gè)月的預(yù)防性實(shí)驗(yàn)結(jié)果相媲美??傊?,數(shù)據(jù)表明簠肌醇,更低一些要求說(shuō),包括表肌醇,能預(yù)防或逆轉(zhuǎn)TgCRND8小鼠AD樣表型,如降低或減輕認(rèn)知缺陷,淀粉樣蛋白斑,淀粉樣蛋白血管疾病,Ap誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng),加速的死亡進(jìn)程等。這些效果可能是該類化合物在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的直接作用,因?yàn)閘)該類化合物能通過易化轉(zhuǎn)運(yùn)穿過血腦屏障[20,22];2)用氣相-質(zhì)譜分析可以證明該類化合物在處理小鼠腦組織內(nèi)的存在(數(shù)據(jù)未顯示)。處理組和未處理組TgCRND8小鼠腦勻漿中APP全蛋白,糖基化APP,APPs-a或APPs-(3,或Ap新型(如Apl-38水平)都沒有變化(數(shù)據(jù)未顯示)。同樣,反映A(3外周分布的血漿A(342水平測(cè)定結(jié)果表明,處理組和未處理組TgCRND8小鼠A(3的外周分布也無(wú)差異。肌醇處理5月齡TgCRND8小鼠28天后,血漿中的A(342水平如下未處理組=1144±76pg/ml;表肌醇組=1079±79pg/ml;鯊肌醇組=990±73pg/ml;p=0.87。外周/血漿中的A|342未發(fā)生變化,可能與A(3有關(guān),因AD患者接受A(3免疫治療后,發(fā)生強(qiáng)烈的抗體反應(yīng),并取得明顯的臨床改善,但血漿中A(3水平也無(wú)變化[4]。為直接證實(shí)肌醇立體異構(gòu)體在腦內(nèi)可能具有體外實(shí)驗(yàn)中已明確的抑制Ap寡聚化的活性[15,16],研究采用斑點(diǎn)印跡免疫分析[24]測(cè)定處理和未處理TgCRND8小鼠腦A(3寡聚體水平。這項(xiàng)研究選用特異性識(shí)別寡聚A(3種屬的抗體[24]。處理組腦可溶性Ap寡聚體水平顯著性降低,(圖2)。用表肌醇處理已有病理學(xué)改變的5月齡TgCRND8小鼠1個(gè)月,A(3水平與未處理組比較,無(wú)顯著性降低(未處理組56士4象素,對(duì)應(yīng)表肌醇處理組47±2象素,p=0.12)。而鯊月幾醇延遲處理5月齡TgCRND8小鼠28天,引起可溶性Ap寡聚體降低30。/。(未處理組63±3象素,對(duì)應(yīng)處理組45±2象素,p=0.008)。斑點(diǎn)印跡實(shí)驗(yàn)對(duì)Tau蛋白,a-共核蛋白和微管蛋白交叉反應(yīng)結(jié)果為陰性,證明釆用的抗體對(duì)TgCRND8腦勻漿中A(3是特異的。這一結(jié)果直接闡明篁肌醇,而非表肌醇,能降低腦組織可溶性AI3寡聚體的含量。為證實(shí)鯊肌醇有可能抑制A(3寡聚體誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性,通過分析鼠海馬切片長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)作用(LTP)和TgCRND8鼠腦突觸小泡蛋白免疫反應(yīng)活性所代表的突觸密度來(lái)確定畫肌醇的作用。海馬LTP是突觸可塑性的量度標(biāo)準(zhǔn),現(xiàn)已發(fā)現(xiàn),天然細(xì)胞來(lái)源的Ap寡聚體種群可破壞海馬LTP[26]。此前的大鼠有關(guān)報(bào)道[26,27]中,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染人APPV717F(7PA2細(xì)胞)的CHO細(xì)胞分泌到條件培養(yǎng)基的可溶性A(3寡聚體,抑制了野生型鼠海馬切片的LTP(圖2B)。然而,如果7PA2條件條件培養(yǎng)基體外用鯊肌醇預(yù)處理,與單獨(dú)使用7PA2CM組比較,可明顯恢復(fù)LTP(p=0.003;圖2B)。鯊肌醇對(duì)LTP沒有直接作用,因?yàn)轶蚣〈继幚淼奈崔D(zhuǎn)染人APP的普通CHO細(xì)胞培養(yǎng)液(圖2C),及其未處理培養(yǎng)液與鯊肌醇處理的7PA2培養(yǎng)液一樣,三種樣品都有LTP發(fā)生。鯊肌醇導(dǎo)致的LTP恢復(fù)效應(yīng)并非基線傳送(transmission)改變的結(jié)果,因?yàn)槿绻粡?qiáng)化強(qiáng)直電刺激,畫肌醇并不能改突觸響應(yīng)(數(shù)據(jù)未顯示)。為將鯊肌醇對(duì)腦片培養(yǎng)中LTP保護(hù)作用和對(duì)體內(nèi)突觸功能的效用聯(lián)系起來(lái),測(cè)定了莖肌醇處理組和未處理組鼠腦海馬CA1區(qū)突觸小泡蛋白的免疫反應(yīng)活性。突觸小泡蛋白的免疫反應(yīng)活性是突觸密度的量度標(biāo)準(zhǔn),與突觸功能有密切關(guān)系。結(jié)果,突觸小泡蛋白水平顯著性增加。預(yù)防性研究中,鯊肌醇可使海馬CA1區(qū)突觸小泡蛋白反應(yīng)扣結(jié)和細(xì)胞小體增加至148%(未處理組TgCRND8鼠1610±176/100拜2,對(duì)應(yīng)的鯊肌醇處理組TgCRND8鼠2384±232/100|xm2;p=0.03),延遲治療研究中,相應(yīng)數(shù)值為150%(未處理組TgCRND8鼠1750±84/100|um2,對(duì)應(yīng)的簠肌醇處理組TgCRND8鼠2625±124/100jxm2;pO.OOl)??傊?,LTP和突觸小泡蛋白研究結(jié)果表明,在腦內(nèi)鯊肌醇可以解除天然分泌的人A(3寡聚體對(duì)LTP的抑制,并保持突觸功能。在另一實(shí)驗(yàn)中,還將篁肌醇處理TgCRND8鼠兩個(gè)月,到7月齡結(jié)束,觀察了其對(duì)處理動(dòng)物認(rèn)知功能和病理學(xué)的持續(xù)改善效果。實(shí)施例2研究AZD-103對(duì)細(xì)胞來(lái)源的Ap寡聚體的效應(yīng)及對(duì)海馬長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)作用的影響本研究的目的A(3寡聚體^R認(rèn)為在阿爾茨海默病發(fā)病過程中起重要作用,本實(shí)驗(yàn)擬研究AZD-103是否可通過中和可溶性Ap寡聚體在AD疾病治療中發(fā)揮潛在的治療作用。本研究考察了一種鯊-肌醇化合物(如,AZD-103—種蓋肌醇)對(duì)來(lái)源于一種穩(wěn)定過量表達(dá)APP751V717F的CHO細(xì)胞系-"7PA2"細(xì)胞的,小的,可溶性的A(3寡聚體的中和作用。如蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)所證明,證明該細(xì)胞可表達(dá)一系列Ap寡聚體。該系列Ap寡聚體裙:證明可強(qiáng)效抑制嚙齒類動(dòng)物海馬長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)作用(采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中一種量度突觸效能和可塑性的方法)。因而,本研究的主要目的是用蛋白質(zhì)印跡法研究AZD-103是否影響了A(3寡聚體的模式(或者表現(xiàn)為解聚或者表現(xiàn)為表位掩閉),二是考察AZD-103是否能克服Ap寡聚體的副作用恢復(fù)LTP。目的l)進(jìn)行LTP實(shí)驗(yàn)前,考察在7PA2的條件培養(yǎng)基中快速加入1.25|uMAZD-103產(chǎn)生的效用。該實(shí)驗(yàn)的目的是考察AZD-103能否解除完整組裝的Ap寡聚體對(duì)LTP的抑制作用。2)考察快速加入1.25pMAZD-103手性和表對(duì)映異構(gòu)體產(chǎn)生的效應(yīng)。該實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖谴_定這種效用是否是AZD-103特有的,而不是其它較低活性或無(wú)活性化合物所具備的。3)在LTP實(shí)驗(yàn)范式中,建立AZD-103的劑量響應(yīng)曲線。該實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖枪浪鉇ZD-103在7PA2條件培養(yǎng)基中的IC50。4)在LTP實(shí)驗(yàn)范式中,建立低濃度的AZD-103孵育時(shí)間曲線。該實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖谴_定AZD-103和7PA2條件培養(yǎng)基共孵育更長(zhǎng)時(shí)間是否可以更好提高AZD-103對(duì)LTP的恢復(fù)效果。5)考察高水平的AZD-103是否仍然能夠恢復(fù)已暴露于7PA2條件培養(yǎng)基海馬切片的LTP。該研究的目的是確定AZD-103是否能逆轉(zhuǎn)Ap寡聚體4曼染的腦組織切片的LTP抑制效應(yīng)。6)在7PA2CM中加入系列稀釋的AZD-103(培養(yǎng)后),并對(duì)其進(jìn)行免疫沉淀蛋白質(zhì)印跡分析?;?qū)ZD-103直接加入到條件培養(yǎng)前的7PA2細(xì)胞中(培養(yǎng)前),同樣方法進(jìn)行免疫沉淀蛋白質(zhì)印跡分析。本實(shí)驗(yàn)的目的是比較AZD-103對(duì)寡聚體穩(wěn)定和寡聚體生產(chǎn)的效應(yīng)。7)考察是否相對(duì)低水平的AZD-103在培養(yǎng)前加入比培養(yǎng)后加入能更有效恢復(fù)LTP。方法電生理學(xué)Walsh等的出版物中詳細(xì)的描述了電生理學(xué)的實(shí)驗(yàn)方法(JournalofNeuroscience25:2455-242)。主要如下制備pl6-p28年齡SwissWebster小鼠腦的350拜冠狀切片。當(dāng)刺激謝弗側(cè)枝時(shí),記錄海馬區(qū)CA1區(qū)的場(chǎng)電位。在人工腦脊液中(ACSF)中記錄20min,至基線平穩(wěn)。在實(shí)驗(yàn)間隙,取1ml15x濃7PA2CM,于37°C解凍,5min后在該條件培養(yǎng)基中加入18.75fiMAZD-103,混合,放回37。C孵育,15min后,用15mlACSF稀釋7PA2CM和AZD-103混合物,得到終濃度為lx7PA2CM和1.25)iMAZD-103的溶液。該'溶液循環(huán)流過腦片20min,使A(3能侵染入腦組織中。為誘導(dǎo)LTP,每5min施加4次100Hz強(qiáng)直電刺激,跟蹤強(qiáng)直刺激后激發(fā)的EPSP斜率lh。該lh時(shí)間點(diǎn)的數(shù)據(jù)是分析的關(guān)鍵部分,因?yàn)檫@是LTP的開始階段,而LTP受AI3寡聚體的影響巨大。條件培養(yǎng)基的制備當(dāng)CHO-或7PA2細(xì)胞長(zhǎng)到~90%融匯時(shí),細(xì)胞用lx無(wú)血清DMEM培養(yǎng)基洗滌,然后在無(wú)血清DMEM培養(yǎng)基(青霉素/鏈霉素,L-谷氨酸,有/無(wú)AZD-103),4ml/10cm盤中培養(yǎng)過夜(約15h)。第二天,收集條件培養(yǎng)基(CM),1000xg離心,用生化實(shí)驗(yàn)用蛋白酶完全抑制劑(單位mg/ml1亮肽酶素,1抑肽素,0.1抑酞酶,40EDTA和2mM1/10二氮菲)或細(xì)胞培養(yǎng)配套的蛋白酶抑制劑(SigmaP18601:1000)處理培養(yǎng)基(CM),為電生理實(shí)驗(yàn)備用。條件培養(yǎng)置于-80。C凍存至收集足夠體積以完成一"批"次實(shí)驗(yàn)-通常為300ml。樣品在YM-3centricon離心過濾裝置中濃縮至15x。收集最終濃縮產(chǎn)物,lml分裝,保存于-80。C。7PA2CM批和批之間可能存在變易性(通常抑制狀況為基線的120%-150%,而對(duì)照CHO-細(xì)胞為基線的200%-220%),可能來(lái)源于幾個(gè)因素,例如細(xì)胞融匯度的微小區(qū)別,傳代次數(shù)不同等,所以對(duì)某一組實(shí)驗(yàn)而言(如劑量響應(yīng)曲線,時(shí)間曲線等等),僅制備一個(gè)批次并與該批的單獨(dú)應(yīng)用的7PA2相比較。免疫沉淀蛋白質(zhì)印跡用40|li1蛋白A瓊脂糖珠子處理8ml7PA2CM30min(以除去IgG抗體)。珠子旋轉(zhuǎn)除去,上清中加入多克隆抗A(3抗體R1282,另加入40^1蛋白A瓊脂糖珠子。樣品在4。C孵育過夜,用一系列緩沖溶液,包括0.5STEN(氯化鈉,tris,EDTA,NP-40),SDSSTEN,STEN洗滌珠子。在洗滌過的珠子中加入2xN-[三(羥甲基)甲基]甘氨酸(tricine)樣品緩沖溶液,然后沸水浴,離心,上清在10-20%tricine膠上樣,蛋白轉(zhuǎn)移到硝化纖維上,用抗A(3抗體6E10進(jìn)行探針實(shí)驗(yàn)。結(jié)果在條件培養(yǎng)基應(yīng)用于腦片孵育前15min,1.25mMAZD-103直接加入到培養(yǎng)基中(培養(yǎng)后),可完全解除Ap寡聚體對(duì)LTP的抑制作用(圖3A,3Band3C,表2)。120min時(shí)(強(qiáng)直電刺激60min后),CHO-/AZD-103對(duì)照中EPSP斜率為基線的218%(這是單獨(dú)應(yīng)用未處理CHO細(xì)胞培養(yǎng)基的典型行為)。正如所料,強(qiáng)直電刺激60min后,7PA2CM明顯抑制了LTP(EPSP斜率為基線的150%)。然而,1.25一AZD-103和7PA2CM共孵育15min,足以完全解除7PA2CM對(duì)LTP的抑制作用。AZD-103表-對(duì)映異構(gòu)體也被發(fā)現(xiàn)具有恢復(fù)LTP效用(盡管結(jié)果沒有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,可能因?yàn)閚值較小),而1.25mM的手性對(duì)映異構(gòu)體沒有作用。初步的實(shí)驗(yàn)表明,AZD-103加入CM中(處理后)可降低CM蛋白質(zhì)印跡上A(3三聚體的檢測(cè)量(圖4),而對(duì)二聚體似乎影響不大(實(shí)驗(yàn)1,圖4),在第一次實(shí)驗(yàn)中,測(cè)試了兩個(gè)劑量的AZD-103,高劑量組(1.25jaM)AZD-103能降低A(3三聚體水平,增加了一條纖細(xì)的條帶,降低單體的水平,而二聚體水平不受影響(實(shí)驗(yàn)2,圖4)。在第二次實(shí)驗(yàn)中,1.25pM的AZD-103也可降低三聚體水平,而二聚體和單體不受影響。因化合物RS0406先前被證明培養(yǎng)前加入可降低寡聚體的水平,被用做陽(yáng)性對(duì)照。本研究建立了AZD-103劑量響應(yīng)曲線,以確定AZD-103有效恢復(fù)LTP效應(yīng)的濃度范圍(圖5,表3)。在7PA2CM中加入4個(gè)濃度的AZD-103(0.125,0.5,1.25和5.0^M)(培養(yǎng)后)。需要注意的是,本批7PA2CM較前面研究中釆用的批次對(duì)LTP(7PA2單獨(dú)使用時(shí)EPSP斜率為基線的113%)抑制作用稍強(qiáng),所以1.25一AZD-103也不如較前研究有效,但仍可以得到明確的劑量響應(yīng)關(guān)系,iq。約為1mM(需要注意的是這可能因7PA2CM批次不同而有所變化)。研究發(fā)現(xiàn),延長(zhǎng)AZD-103/7PA2CM共孵育時(shí)間并未改變對(duì)LTP的恢復(fù)效果(圖6A和6B,表4)。選擇相對(duì)較低劑量的AZD-103(0.5pM)以確定是否更長(zhǎng)的孵育時(shí)間(15,30,120,240min)能夠得到更好的LTP恢復(fù)效果。結(jié)果表明,更長(zhǎng)時(shí)間的孵育與15min或者PA2單獨(dú)使用無(wú)顯著性差異。但,與CHO-比較時(shí),除15min,其它時(shí)間點(diǎn)無(wú)顯著性差異。這與0.5mMAZD-103僅具有緩解ltp抑制的部分效果相吻合,如圖5所示。一旦腦切片被完整的A(3寡聚體預(yù)灌住過,AZD-103便失去了逆轉(zhuǎn)Ap寡聚體抑制LTP的效用(圖6C)。鼠腦切片用7PA2CM灌注20min后,選用較高濃度的AZD-103(IOmM)加入到切片上。該切片用AZD-103/7PA2CM再灌注10min。強(qiáng)直電刺激60min后,LTP與7PA2對(duì)照無(wú)顯著性差異。不過,選用相對(duì)較低濃度的AZD-103(0.5luM)直接處理7PA2細(xì)胞(培養(yǎng)前)卻成功解除了該細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)鼠腦切片的LTP抑制。因此,證明AZD-103培養(yǎng)前加入比培養(yǎng)后加入更能有效的恢復(fù)urn本研究建立了AZD-103劑量響應(yīng)曲線,以確定蛋白質(zhì)印跡法分析AZD-103有效降低A(3寡聚體水平的濃度范圍(圖7A-7E)。實(shí)驗(yàn)中,AZD-103直接加入到7PA2細(xì)胞中(培養(yǎng)前)和7PA2CM中(培養(yǎng)后)。培養(yǎng)前和培養(yǎng)后加入都有效降低了Ap寡聚體水平。實(shí)驗(yàn)操作的一個(gè)挑戰(zhàn)是在免疫沉淀實(shí)驗(yàn)洗滌過程如^f可降低樣品間的變異。因此對(duì)Ap二聚體和三聚體的絕對(duì)值測(cè)量是必須的(圖7C),也需要?dú)w一化折算成APP或A(3單體水平(圖7D和圖7E)。以絕對(duì)測(cè)量值或者歸一化折算到單體水平計(jì)算,似乎所有濃度的AZD103都可以降低A(3二聚體或三聚體水平。如歸一化折算成APP,AZD103的作用呈現(xiàn)劑量效應(yīng)。圖7中,AZD103直接加入到7PA2細(xì)胞中(培養(yǎng)前),與AZD1(B和7PA2CM孵育法(培養(yǎng)后)比較,二種方法對(duì)A(3二聚體的作用無(wú)顯著性區(qū)別。本研究考察了AZD-103培養(yǎng)前處理細(xì)胞(培養(yǎng)前),其7PA2CM對(duì)LTP范式的作用。實(shí)驗(yàn)選用了一相對(duì)較低的濃度(0.5pM),該濃度在培養(yǎng)后方法中被證明僅具有部分效用。0.5jnMAZD103直接加入到細(xì)胞中(培養(yǎng)前),對(duì)CM抑制LTP有深遠(yuǎn)影響。120min時(shí)EPSP斜率變化變化百分?jǐn)?shù)與無(wú)A(3寡聚體存在的情況相近似(CH0-)(圖8;c與圖6,0.5一AZD103處理后組比較)。這些結(jié)果表明,當(dāng)AZD-103以較低濃度直接加入到產(chǎn)生Ap寡聚體的細(xì)胞中的效果優(yōu)于加入到處理后的培養(yǎng)基中時(shí)的效果。結(jié)論本研究的主要結(jié)論是證明了AZD-103具有較強(qiáng)中和Ap寡聚體對(duì)鼠海馬突觸功能短期效用的作用(圖3)。長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)作用實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)分析方法已在文獻(xiàn)中被廣泛描述,也被廣泛認(rèn)可是測(cè)量腦突觸效率和可塑性的一種方法。LTP細(xì)胞和分子機(jī)制4皮認(rèn)為與人學(xué)習(xí)記憶功能所必須的機(jī)制為同一機(jī)制。所以,A(3寡聚體對(duì)LTP的干擾可能與阿爾茨海默癥病人記憶損害過程相似?;谏鲜黾俣?,AZD-103的主要作用是恢復(fù)鼠海馬中LTP,這與AZD-103可能對(duì)阿爾茨海默癥病人具有相似的功能或提供相似的效應(yīng)的假設(shè)是一致的。本研究的第二個(gè)興趣點(diǎn)是深入的研究了AZD-103如何改變A|3寡聚體使其不能抑制LTP。初步研究(其中的部分包含在圖4中)表明,AZD-103可能掩閉或解聚了可強(qiáng)效抑制LTP的Ap三聚體。滴定實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖7,基本支持了這一結(jié)果。已證明,AZD-103加入到7PA2細(xì)胞中(處理前)比加入到7PA2CM中(處理后)能更有效恢復(fù)LTP。雖然AZD103可以直接降低二聚體和三聚體水平,但當(dāng)與分泌寡聚體的細(xì)胞孵育時(shí),具有更高/進(jìn)一步的效應(yīng)。對(duì)7PA2CM灌注過的腦切片,AZD-103不能恢復(fù)其LTP(圖6)。但是,即使AZD-103不能逆轉(zhuǎn)已經(jīng)存在的腦部損傷,仍可有效中和新產(chǎn)生的A(3寡聚體,并且阻止額外損傷。這可能需要其他恢復(fù)機(jī)制以便更有效的操作,并在甚至在本實(shí)驗(yàn)無(wú)法測(cè)量的更長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)提高預(yù)后質(zhì)量。該研究中,采用了WT小鼠和細(xì)胞來(lái)源的外源性A(3寡聚體。該實(shí)驗(yàn)方法的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是,可以研究A(3對(duì)突觸功能的急性效應(yīng),并降低抵抗Ap毒性的補(bǔ)償效應(yīng)和Ap初始損傷帶來(lái)的次級(jí)和三級(jí)損傷。第二個(gè)優(yōu)點(diǎn)是細(xì)胞來(lái)源的CM包含類別豐富的高度穩(wěn)定的A(3寡聚體,這是合成Ap法不能比擬的。最后,Ap削弱LTP所需的水平非常低(初步估計(jì)為稍高的微微摩爾范圍),這與阿爾茨海默癥患者中A(3大致水平非常接近。因此,這是一個(gè)可以檢測(cè)AZD-103干涉Af3寡聚體對(duì)突觸功能有害作用的辨識(shí)系統(tǒng)。研究未發(fā)現(xiàn)AZD-103毒性反應(yīng)的直接證據(jù)(AZD-103存在下7PA2細(xì)胞看起來(lái)更健康)。即使A(3三聚體降低后,APPs的表達(dá)未受到影響,并且在CHO-/AZD-103條件下,也未發(fā)現(xiàn)對(duì)LTP的負(fù)作用(圖3)??偨Y(jié)天然的細(xì)胞來(lái)源的人A(3寡聚體體內(nèi)能強(qiáng)效抑制嚙齒動(dòng)物海馬長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)作用(LTP)。這些寡聚體也可損傷大鼠對(duì)學(xué)習(xí)行為的回憶,這一發(fā)現(xiàn)支持了如下假設(shè)可溶性的,低聚合值(n)的A(3寡聚體可損傷記憶,并可導(dǎo)致阿爾茨海默癥患者早期癥狀。本研究的主要目的是確定肌醇,AZD-103是否可通過中和Ap寡聚體對(duì)突觸功能的抑制,提供有益的治療效果。用AZD-103處理過的含有分泌的Ap寡聚體的條件培養(yǎng)基(CM)(較低的nM濃度水平)灌流野生型鼠海馬切片,1-2MM濃度的AZD-103,能完全恢復(fù)LTP作用,而無(wú)活性的對(duì)映體纟皮確認(rèn)為無(wú)有益效應(yīng)。當(dāng)AZD-103直接加入到分泌A卩的細(xì)胞中時(shí),即使低濃度的也具有有益效果。免疫沉淀蛋白質(zhì)雜交分析CM中Ap寡聚體表明,AZD-103降低了Ap水平。AZD-103通過降低預(yù)形成的寡聚體水平,發(fā)揮其解除可溶性AP對(duì)LTP抑制的效應(yīng)。所以,AZD-103可以干預(yù)AD早期發(fā)病階段。實(shí)施例3AZD103對(duì)p淀粉樣蛋白寡聚體誘導(dǎo)的認(rèn)知缺陷的效應(yīng)目的以阿爾茨海默癥ALCR(AlternatingLeverCyclicRatio)鼠才莫型測(cè)試各化合物,其中包括AZD103。ALCR鼠模型非常靈敏,可檢測(cè)鼠腦部注射寡聚體引起的認(rèn)知缺陷。AP寡聚體被認(rèn)為可負(fù)向影響認(rèn)知功能,小分子化合物和A|3寡聚體一起給藥大鼠,評(píng)價(jià)它們對(duì)A|3寡聚體誘導(dǎo)認(rèn)知能力衰減的中和作用。AP寡聚體正常分泌自淀粉樣前體蛋白(APP)過量表達(dá)基因轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。APP^皮分泌酶切割,在細(xì)^9包內(nèi)Ap寡聚體被組裝成2-12單位的淀粉樣蛋白(2到12單位),并分泌到培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基中[5]。另外,A卩寡聚體也可從SwedishAPP突變體轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)基因小鼠(Tg2576)腦勻漿中提取[51]。A卩寡聚體是可溶性的,并未形成原纖維/斑,并在溶液中是穩(wěn)定的。無(wú)論來(lái)自CM還是腦勻漿的AP寡聚體,都采用分子排阻色譜(SEC)分離純化,得到具有負(fù)向影響認(rèn)知功能的特定分子量范圍的組分[50]。在動(dòng)物清醒及活動(dòng)狀態(tài)下,將與AD患者生理濃度相當(dāng)?shù)模兓腁P寡聚體通過留置管注射到大鼠側(cè)腦室中,注射2h后,用靈敏的認(rèn)知分析方法檢測(cè)大鼠。ALCR測(cè)試法被證明較以前發(fā)表的研究藥物對(duì)認(rèn)知功能作用的方法[52,53]具有更高的靈敏度。該實(shí)驗(yàn)中,須使大鼠學(xué)習(xí)按壓杠桿需求的復(fù)雜順序,以使大鼠在雙杠桿實(shí)驗(yàn)箱中接受食物強(qiáng)化刺激。測(cè)試大鼠必須按壓第一杠桿后,轉(zhuǎn)而按壓另一杠桿,從而在兩杠桿之間交替輪換按壓達(dá)到足夠次數(shù),以獲取食物獎(jiǎng)賞。獲得食物獎(jiǎng)賞的準(zhǔn)確按壓次數(shù),從開始時(shí)的2次/食物丸增加到56次/食物丸,然后減少到2次/食物九。中間值按照二次方程,義計(jì)算。按壓杠桿要求實(shí)驗(yàn)的上升和下降順序組成一個(gè)循環(huán)(如,2,6,12,20,30,42,56,56,42,30,20,12,6,2次按壓/食物獎(jiǎng)賞)。每天進(jìn)行6個(gè)全循環(huán)測(cè)試。如測(cè)試大鼠經(jīng)過充分按壓獲取食物后,仍滯留在某一杠桿上,記錄為錯(cuò)誤,即不交替按壓(一種固拍J昔誤),或測(cè)試大鼠未完成在某杠桿上響應(yīng)要求而進(jìn)行杠桿切換(一種切換錯(cuò)誤)。方法AP寡聚體本研究從轉(zhuǎn)染的中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(7PA2細(xì)胞)中制備A卩寡聚體,該細(xì)胞可將生理水平的Aj3分泌培養(yǎng)基中(CM)。AP寡聚體也可從Tg2576鼠腦勻漿中利用分子排阻色譜分離制備。采用蛋白質(zhì)雜交分析描述樣品中的AP寡聚體特性。生產(chǎn)相應(yīng)的對(duì)照化合物以檢測(cè)各種活性的AP寡聚體的構(gòu)型。大鼠訓(xùn)練40只大鼠ALCR實(shí)驗(yàn)約3個(gè)月時(shí)間,直到它們的錯(cuò)誤率比較穩(wěn)定。訓(xùn)練期間,每周訓(xùn)練5天。外科手術(shù)訓(xùn)練結(jié)束,所有大鼠都接受安裝一個(gè)永久性貼附于頭骨的28號(hào)套管,套管通向側(cè)腦室(處于左右腦室正中間)。大鼠手術(shù)后恢復(fù)5天。給藥將AZD103溶解于飲用水中,以大鼠飲用方式進(jìn)行體內(nèi)給藥。制備不同濃度樣品,根據(jù)每天平均水?dāng)z入量來(lái)確定具體的每天平均劑量。因此,劑量水平是近似的數(shù)值。測(cè)試測(cè)試AZD103抵抗已知的具有破壞認(rèn)知功能的AP寡聚體的作用。實(shí)驗(yàn)方法對(duì)兩種常規(guī)的操作進(jìn)行了整合。1.AZD103與含有A|3寡聚體的注射溶媒進(jìn)行預(yù)孵育,然后評(píng)估其對(duì)ALCR效應(yīng)。相應(yīng)的注射對(duì)照組為腦室注射未預(yù)先孵育(未處理)的A|3寡聚體和AZD103。2.在測(cè)試ICV注射被公i人的在ALCR實(shí)驗(yàn)中可影響認(rèn)知功能的Ap寡聚體制劑前,大鼠以溶有AZD103的飲用水祠喂處理至少3-4天。按如下順序評(píng)價(jià)各種處理1.單獨(dú)腦室注射7PA20CM2.單獨(dú)腦室注射AZD1033.離體腦室注射用AZD103孵育的7PA2CM大鼠隨機(jī)順序接受上述1-3處理方式1.口服AZD10330mg/kg/天4日后,腦室注射ICV7PA2培養(yǎng)基2.口服AZD103100mg/kg/天4日后,腦室注射ICV7PA2培養(yǎng)基3.口服AZD103300mg/kg/天4日后,腦室注射ICV7PA2培養(yǎng)基4.未做處理4日后,腦室注射ICV7PA2培養(yǎng)基錯(cuò)誤率分析將AZD103處理后的錯(cuò)誤率與注射AZD103前至少3-4天的基礎(chǔ)錯(cuò)誤率進(jìn)行比較。本研究在試驗(yàn)設(shè)計(jì)內(nèi)重復(fù)測(cè)量,可最大限度測(cè)定錯(cuò)誤率的改變。組織學(xué)實(shí)驗(yàn)完畢后,立刻取20只大鼠腦并進(jìn)行保存,其余20只腦進(jìn)行組織學(xué)分析,評(píng)價(jià)其炎癥發(fā)生,神經(jīng)膠質(zhì)增生和留置管放置的情況。20只灌注固定的大鼠腦組織在福爾馬林中進(jìn)行液滴固定(dr叩fixed),并將左半右半球分開處理。從一半腦組織選擇連續(xù)的蘇木精和曙紅染色的切片評(píng)價(jià)留置管的放置情況。同一半腦組織采用標(biāo)準(zhǔn)蘇木精和曙紅染色法,或?yàn)樵u(píng)價(jià)神經(jīng)膠質(zhì)增生采用特異性標(biāo)記物法,分析炎癥發(fā)生(嗜中性粒細(xì)胞/淋巴細(xì)胞/巨噬細(xì)胞),神經(jīng)膠質(zhì)增生(微神經(jīng)膠質(zhì)和星形膠質(zhì)細(xì)胞)和神經(jīng)元損失情況。如果H&E分析i/v為炎性變化顯著,則另一半腦組織保存在福爾馬林中,用于共聚焦免疫組化熒光顯微照片分析(神經(jīng)膠質(zhì)元纖維,和神經(jīng)元特異性核蛋白,DAPI,碘化丙咬)。結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果列于表5,AP寡聚體注射后兩種類型的錯(cuò)誤都增加(切換錯(cuò)誤和固執(zhí)錯(cuò)誤分別為基礎(chǔ)錯(cuò)誤的120%和135%(p=0.011和0.007)。A(3寡聚體注射前與先與AZD103進(jìn)行孵育,錯(cuò)誤率恢復(fù)到基礎(chǔ)水平(切換錯(cuò)誤和固執(zhí)錯(cuò)誤分別為基礎(chǔ)錯(cuò)誤的95%和100%(p=0.50和0.99》。所以,AZD103可以阻止AJ3寡聚體引發(fā)的認(rèn)知功能紊亂。AZD103不與Ap寡聚合體并用藥,對(duì)大鼠行為無(wú)影響,這"^兌明該藥物并非非特異性增強(qiáng)認(rèn)知功能C圖9)。研究了口服給藥AZD103抑制淀粉樣蛋白誘導(dǎo)的急性認(rèn)知功能紊亂的能力。大鼠給藥AZD103,每個(gè)劑量水平給藥4天(按30,100,和300mg/kg/天,以飲用水形式飼喂)。將Ap通過留置管注射到腦中,2h后進(jìn)行ALCR測(cè)試。A(3寡聚體明顯引起未治療組動(dòng)物錯(cuò)誤增加(切換錯(cuò)誤為基礎(chǔ)錯(cuò)誤的130%,p=0.003;固執(zhí)錯(cuò)誤為基礎(chǔ)錯(cuò)誤的169%,p=0.009)。而AZD103各劑量組都將錯(cuò)誤率恢復(fù)到基線水平(30,100和300mg/kg/天劑量,切換錯(cuò)誤分別為基礎(chǔ)錯(cuò)誤的109%,100%,109%;固執(zhí)錯(cuò)誤分別為基礎(chǔ)錯(cuò)誤的120%,120%,99%)(圖10)。因而AZD103可有效減輕鼠腦急性暴露于淀粉樣蛋白引起的認(rèn)知功能紊亂?;伢w孵育實(shí)驗(yàn)表明,AZD103在大鼠內(nèi)能夠中和Ap的認(rèn)知衰退作用。因此,體內(nèi)給藥的數(shù)據(jù)表明,AZD103口服給藥后,可充分侵入腦組織,發(fā)揮治療潛能。本研究表明,AZD103具有治療淀粉樣蛋白引起的認(rèn)知功能紊亂的潛在療效。本發(fā)明不限于本文所迷具體實(shí)施方案的范圍,因?yàn)檫@類實(shí)施方案僅用來(lái)說(shuō)明本發(fā)明的一個(gè)方面,并且任何起作用的等價(jià)的實(shí)施方案都包含在本發(fā)明范圍內(nèi)。實(shí)際上,除本文所述之外的對(duì)本發(fā)明的各種修改,對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見的,可以從上述說(shuō)明和附圖中得到啟示。這類修改也落在所附權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。所有出版物、專利和專利申請(qǐng)都通過引用以其整體并入本文,其程度與各出版物、專利或?qū)@暾?qǐng)單獨(dú)而具體地表明通過引用以其整體并入本文的程度相同。本文中對(duì)任何參考文獻(xiàn)的引用,都不表示承認(rèn)該參考文獻(xiàn)可以用作本發(fā)明的現(xiàn)有技術(shù)。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage65</column></row><table>表2如圖3C所示,腦切片用提及的CM和測(cè)試藥物預(yù)先共孵育的混合液灌流后,強(qiáng)直電刺激60min,EPSP斜率變化百分?jǐn)?shù)。<table>tableseeoriginaldocumentpage66</column></row><table>表3如圖5所示,腦切片用提及的CM和測(cè)試藥物預(yù)先共孵育的混合液灌流后,強(qiáng)直電刺激60min,EPSP斜率變化百分?jǐn)?shù)。<table>tableseeoriginaldocumentpage67</column></row><table>表4<table>tableseeoriginaldocumentpage68</column></row><table>表5AZD103與Ap寡聚體體外預(yù)先孵育或口服給藥AZD103情況下,大鼠注射AP寡聚體后的錯(cuò)誤率<table>tableseeoriginaldocumentpage69</column></row><table>以下是引用的參考文獻(xiàn)。1.Selkoe,D.J.Decipheringthegenesisandfateofamyloidbeta-proteinyieldsnoveltherapiesforAlzheimerdisease(對(duì)淀4分樣蛋白p蛋白的產(chǎn)生和結(jié)果分析產(chǎn)生了阿爾茨海默病的新療法).丄C/w/"ve對(duì).110,1375-1381(2002).2.Wong,P.C.,Cai,I.T.,Borchelt,D.R.&Price,D丄.Geneticallyengineeredmousemodelsofneurodegenerativediseases(4申經(jīng)變'l"生疾病的基因工程小鼠才莫型).Ato.A^/msc/'.5,633-639(2002).3.Nicoll,J.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