專利名稱：用作組蛋白去乙酰酶抑制劑的磺?；苌锏闹谱鞣椒?br> 技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是涉及一種具有組蛋白去乙酰酶(HDAC)抑制酶活性的化合物。并進(jìn)一步涉及其制法、含其的組合物、及其于活體內(nèi)及活體外抑制HDAC的用途及其作為醫(yī)藥的用途，例如作為抑制增生性病癥(如癌癥與牛皮癬)的藥物的用途。

背景技術(shù)：
所有真核生物細(xì)胞中，染色質(zhì)中的基團(tuán)組DNA與組蛋白結(jié)合形成核體。各核體分別由各組蛋白質(zhì)H2A、H2B、H3與H4的兩套復(fù)本形成的蛋白質(zhì)八聚體組成。DNA環(huán)繞此蛋白質(zhì)核心，其中組蛋白的堿性氨基酸與DNA的帶負(fù)電價磷酸根交互作用。這些組蛋白核心最常見的轉(zhuǎn)譯后修飾作用為已保留的高堿性N-末端賴氨酸殘基的ε-氨基的可逆性乙酰化作用。由組蛋白乙?；D(zhuǎn)化酶(群)與本文中稱為“HDAC”的組蛋白去乙酰酶(群)之間競爭形成的動態(tài)平衡建立組蛋白乙酰化作用的穩(wěn)定狀態(tài)。組蛋白乙?；饔门c去乙酰化作用長久以來即與轉(zhuǎn)錄控制相關(guān)。近來近克隆出編碼不同組蛋白乙酰基轉(zhuǎn)化酶及組蛋白去乙酰酶的基團(tuán)提供了組蛋白乙?；饔门c轉(zhuǎn)錄控制之間關(guān)系的可能解釋。組蛋白的可逆性乙?；饔每稍斐扇旧|(zhì)再造及因此作為基團(tuán)轉(zhuǎn)錄的控制機(jī)轉(zhuǎn)。通常，組蛋白的過度乙?；饔脮偈够鶊F(tuán)表現(xiàn)，而組蛋白去乙酰化作用則與轉(zhuǎn)錄抑制有相關(guān)性。已知組蛋白乙酰基轉(zhuǎn)化酶具有作為轉(zhuǎn)錄共活化劑的作用，而組蛋白去乙酰酶則屬于轉(zhuǎn)錄抑制途徑。
組蛋白乙酰化與去乙?；g的動態(tài)平衡是正常細(xì)胞生長所必需。抑制組蛋白去乙酰酶則可造成細(xì)胞循環(huán)停止、細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡及使轉(zhuǎn)形的表型逆轉(zhuǎn)。因此，HDAC抑制劑在治療細(xì)胞增生疾病或病癥上具有極大醫(yī)療潛力(Marks等人，Nature ReviewsCancer 1194-202，2001)。
涉及組蛋白去乙酰酶(HDAC)的抑制劑研究顯示，這些酶的確在細(xì)胞增生及分化上扮演重要角色。抑制劑三克定A(Trichostatin A)(TSA)造成G1與G2期的細(xì)胞循環(huán)停止，使不同細(xì)胞株的已轉(zhuǎn)形表型反轉(zhuǎn)，并誘發(fā)弗瑞德(Friend)白血病細(xì)胞及其它細(xì)胞分化。已有文獻(xiàn)指出，TSA(與辛二?；姹桨樊惲u肟酸SAHA)在小白鼠體內(nèi)，可制抑細(xì)胞生長，誘發(fā)末端分化，及防止腫瘤形成(Finnin等人，Nature，401188-193，1999)。
亦有文獻(xiàn)指出，三克定A適用于治療纖維變性，例如肝纖維變性與肝硬化(Greets等人，1998年3月11日公告的歐洲專利申請案EP 0 827742)。
2001年5月31日公告的專利申請案WO 01/38322特別揭示通式Cy-L1-Ar-Y1-C(O)-NH-Z的其它組蛋白去乙酰酶抑制劑，并提供治療細(xì)胞增生疾病與病癥的組合物與方法。
2001年9月27日公告的專利申請案WO 01/70675提示如式Cy-S(O)2-NH-Y3-W的組蛋白去乙酰酶抑制劑，并進(jìn)一步提供治療細(xì)胞增生疾病與病癥的組合物與方法。
所要解決的問題為提供具有高酶活性的組蛋白去乙酰酶抑制劑，亦需具備有利性質(zhì)，如細(xì)胞活性及提高的生物可利用率，最好提高口服的生物可利用率，且副作用很小或沒有。
本發(fā)明新穎化合物可解決上述問題.本化合物的結(jié)構(gòu)式不同于先前技藝。
本發(fā)明化合物具有優(yōu)越的活體外組蛋白去乙酰酶抑制酶活性。本化合物在細(xì)胞活性上具有有利性質(zhì)，且針對抑制G1與G2兩個檢查點的細(xì)胞循環(huán)發(fā)展具有專一性質(zhì)(p21誘發(fā)能力)。本發(fā)明化合物具有良好代謝穩(wěn)定性及高度生物可利用率，更尤其是，其具有口服生物可用性。此外，本發(fā)明化合物對P450酶的親和性低，可降低藥物-藥物不良交互作用的危險，因此亦可提供較廣的安全范圍。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是涉及式(I)化合物
其N-氧化物型、其醫(yī)藥上可接受的加成鹽及立體化學(xué)異構(gòu)型， 其中 n為0、1、2或3，且當(dāng)n為0時，則為一直接鍵結(jié)； t為0、1、2、3或4，且當(dāng)t為0時，則為一直接鍵結(jié)； 各Q為氮或-C≤； 各X為氮或-C≤； 各Y為氮或-C≤； 各Z為氮或-CH<； R1為-C(O)NR7R8、-N(H)C(O)R9、-C(O)C1-6烷二基SR9、-NR10(C(O)N(OH)R9、-NR10C(O)C1-6烷二基SR9、-NR10C(O)C＝N(OH)R9或另一Zn-螯合基， 其中R7與R8分別獨立選自氫、羥基、C1-6烷基、羥基C1-6烷基、氨基C1-6烷基或氨芳基； R9分別獨立選自氫、C1-6烷基、C1-6烷羰基、芳基C1-6烷基、C1-6烷基吡嗪基、吡啶酮、吡咯烷酮或甲基咪唑基； R10分別獨立選自氫或C1-6烷基； R2為氫、鹵基、羥基、氨基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、三氟甲基、二(C1-6烷基)氨基、羥氨基或萘磺?；拎夯?； -L-為一直接鍵結(jié)或選自下列的二價基團(tuán)C1-6烷二基、氨基、羰基或氨羰基； 各R3分別獨立代表氫原子，且其中一個氫原子可被芳基置換； R4為氫、羥基、氨基、羥基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、芳基C1-6烷基、氨羰基、羥羰基、氨基C1-6烷基、氨羰基C1-6烷基、羥羰基C1-6烷基、羥氨羰基、C1-6烷氧羰基、C1-6烷氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；

為選自下列的基團(tuán)


其中各s分別為0、1、2、3、4或5； 各R5與R6分別獨立選自氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵C1-6烷基；三鹵C1-6烷氧基；C1-6烷基；經(jīng)芳基與C3-10環(huán)烷基取代的C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷氧基C1-6烷氧基；C1-6烷羰基；C1-6烷氧羰基；C1-6烷磺?；磺杌鵆1-6烷基；羥基C1-6烷基；羥基C1-6烷氧基；羥基C1-6烷氨基；氨基C1-6烷氧基；二(C1-6烷基)氨羰基；二(羥基C1-6烷基)氨基；(芳基)(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氨基C1-6烷基；芳基磺?；环蓟酋；被环佳趸?；芳氧基C1-6烷基；芳基C2-6烯二基；二(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基)；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基； 氨基磺?；被?C1-6烷基)氨基； 氨基磺?；被?C1-6烷基)氨基C1-6烷基； 二(C1-6烷基)氨基磺?；被?C1-6烷基)氨基； 二(C1-6烷基)氨基磺?；被?C1-6烷基)氨基C1-6烷基；氰基；噻吩基； 經(jīng)下列基團(tuán)取代的噻吩基二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、羥基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基磺酰基哌嗪基C1-6烷基、C1-6烷氧基哌啶基、C1-6烷氧基哌啶基C1-6烷基、嗎啉基C1-6烷基、羥基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、或二(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷基； 呋喃基；經(jīng)羥基C1-6烷基取代的呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；噁唑基；經(jīng)芳基與C1-6烷基取代的噁唑基；C1-6烷基三唑基；四唑基；吡咯烷基；吡咯基；哌啶基C1-6烷氧基；嗎啉基；C1-6烷基嗎啉基；嗎啉基C1-6烷氧基；嗎啉基C1-6烷基；嗎啉基C1-6烷氨基；嗎啉基C1-6烷基C1-6烷基；哌嗪基；C1-6烷基哌嗪基；C1-6烷基胺哌嗪基C1-6烷氧基；哌嗪基C1-6烷基；萘磺酰基哌嗪基；萘磺?；哙せ惠粱酋；籆1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷氨基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷氨基C1-6烷基；C1-6烷基哌嗪基磺?；?；氨基磺?；哙夯鵆1-6烷氧基；氨基磺酰基哌嗪基；氨基磺酰基哌嗪基C1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基磺?；哙夯?；二(C1-6烷基)氨基磺酰基哌嗪基C1-6烷基；羥基C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；C1-6烷氧基哌啶基；C1-6烷氧基哌啶基C1-6烷基；哌啶基氨基C1-6烷氨基；哌啶基氨基C1-6烷氨基C1-6烷基； (C1-6烷基哌啶基)(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷氨基； (C1-6烷基哌啶基)(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷氨基C1-6烷基； 羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基； 羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基； (羥基C1-6烷基)(C1-6烷基)氨基；(羥基C1-6烷基)(C1-6烷基)氨基C1-6烷基； 羥基C1-6烷氨基C1-6烷基；二(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷基； 吡咯烷基C1-6烷基；吡咯烷基C1-6烷氧基；吡唑基；硫吡唑基；經(jīng)選自C1-6烷基或三鹵C1-6烷基中兩個取代基取代的吡唑基； 吡啶基；經(jīng)C1-6烷氧基、芳氧基或芳基取代的吡啶基；嘧啶基；四氫嘧啶基哌嗪基；四氫嘧啶基哌嗪基C1-6烷基；喹啉基；吲哚基；苯基；經(jīng)分別獨立選自下列的1、2或3個取代基取代的苯基鹵基、氨基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基C1-4烷基、三氟甲基、三氟甲氧基、羥基C1-4烷氧基、C1-4烷基磺?；1-4烷氧基C1-4烷氧基、C1-4烷氧羰基、氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨羰基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、氨基磺?；被?C1-4烷基)氨基、氨基磺?；被?C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基磺?；被?C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基磺?；被?C1-4烷基)氨基C1-6烷基、氰基、哌啶基C1-4烷氧基、吡咯烷基C1-4烷氧基、氨基磺?；哙夯?、氨基磺?；哙夯鵆1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基磺?；哙夯⒍?C1-4烷基)氨基磺?；哙夯鵆1-4烷基、羥基C1-4烷基哌嗪基、羥基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、C1-4烷氧基哌啶基、C1-4烷氧基哌啶基C1-4烷基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、(羥基C1-4烷基)(C1-4烷基)氨基、(羥基C1-4烷基)(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(羥基C1-4烷基)氨基、二(羥基C1-4烷基)氨基C1-4烷基、呋喃基、經(jīng)-CH＝CH-CH＝CH-取代的呋喃基、吡咯烷基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷氧基、嗎啉基、嗎啉基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷基、嗎啉基C1-4烷氨基、嗎啉基C1-4烷氨基C1-4烷基、哌嗪基、C1-4烷基哌嗪基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷氧基、哌嗪基C1-4烷基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷氨基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷氨基C1-6烷基、四氫嘧啶基哌嗪基、四氫嘧啶基哌嗪基C1-4烷基、哌啶基氨基C1-4烷氨基、哌啶基氨基C1-4烷氨基C1-4烷基、(C1-4烷基哌啶基)(羥基C1-4烷基)氨基C1-4烷氨基、(C1-4烷基哌啶基)(羥基C1-4烷基)氨基C1-4烷氨基C1-4烷基、吡啶基C1-4烷氧基、羥基C1-4烷氨基、羥基C1-4烷氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氨基、氨基噻二唑基、氨基磺?；哙夯鵆1-4烷氧基、或噻吩基C1-4烷氨基； 中心

部份基團(tuán)亦可與亞甲基、亞乙基或亞丙基橋形成橋連(即形成雙環(huán)狀部份基團(tuán))； 各R5與R6可置于氮上替代氫； 上述芳基為苯基，或經(jīng)一個或多個分別獨立選自鹵基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、三氟甲基、氰基或羥羰基的取代基取代的苯基。
“組蛋白去乙酰酶抑制劑”是指可與組蛋白去乙酰酶交互作用且可抑制其活性，更尤其是抑制其酶活性的化合物。抑制組蛋白去乙酰酶活性意指降低組蛋白去乙酰酶脫除組蛋白的乙酰基的能力。優(yōu)選，這種抑制作用為專一性的，亦即組蛋白去乙酰酶抑制劑降低組蛋白去乙酰酶脫除組蛋白的乙?；哪芰r所需濃度低于該抑制劑為了產(chǎn)生一些其它不相關(guān)生物效應(yīng)時所需濃度。
如上文與下文中定義所使用的鹵基通指氟、氯、溴與碘；C1-4烷基指含有1至4個碳原子的直鏈與支鏈飽和烴基，如，例如甲基、乙基、丙基、丁基、1-甲基乙基、2-甲基丙基，等等；C1-6烷基包括C1-4烷基及含有5至6個碳原子的較高碳數(shù)同系物，如，例如戊基、2-甲基-丁基、己基、2-甲基戊基，等等；C1-6烷二基指含有1至6個碳原子的二價直鏈與支鏈飽和烴基，如，例如亞甲基、1，2-乙二基、1，3-丙二基、1，4-丁二基、1，5-戊二基、1，6-己二基，及其支鏈異構(gòu)體，如2-甲基戊二基、3-甲基戊二基、2，2-二甲基丁二基、2，3-二甲基丁二基，等等；三鹵C1-6烷基指含有三個相同或不同鹵基取代基的C1-6烷基，例如三氟甲基；C2-6烯二基指含有一個雙鍵及2至6個碳原子的二價直鏈與支鏈烴基，如，例如乙烯二基、2-丙烯二基、3-丁烯二基、2-戊烯二基、3-戊烯二基、3-甲基-2-丁烯二基，等等；芳基指苯基，及經(jīng)一個或多個選自鹵基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、三氟甲基、氰基或羥羰基中的取代基取代的苯基；氨芳基指經(jīng)氨基取代的芳基；及C3-10環(huán)烷基包括含有3至10個碳原子的環(huán)狀烴基，如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)戊烯基、環(huán)己基、環(huán)己烯基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、等等。
“另一Zn-螯合基”指可與Zn-離子交互作用的基團(tuán)，其可出現(xiàn)在酶結(jié)合位置。
醫(yī)藥上可接受的加成鹽包括醫(yī)藥上可接受的酸加成鹽及醫(yī)藥上可接受的堿加成鹽。如上述的醫(yī)藥上可接受的酸加成鹽包括式(I)化合物可形成的具醫(yī)療活性的無毒性酸加成鹽型。具有堿性性質(zhì)的式(I)化合物的堿型經(jīng)過適當(dāng)酸處理后，可轉(zhuǎn)化成其醫(yī)藥上可接受的酸加成鹽。適當(dāng)?shù)乃岚ɡ鐭o機(jī)酸類，如氫鹵酸，例如鹽酸或氫溴酸；硫酸；硝酸；磷酸，等等酸類；或有機(jī)酸類如，例如乙酸、三氟乙酸、丙酸、羥乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸(亦即丁二酸)、馬來酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、環(huán)己胺磺酸、水楊酸、對氨基-水楊酸、雙羥萘酸，等等酸類。
具有酸性性質(zhì)的式(I)化合物可經(jīng)過適當(dāng)有機(jī)或無機(jī)堿處理后，轉(zhuǎn)化成其醫(yī)藥上可接受的堿加成鹽。適當(dāng)?shù)膲A鹽型包括例如銨鹽、堿金屬與堿土金屬鹽，例如鋰、鈉、鉀、鎂、鈣鹽等等，與有機(jī)堿形成的鹽例如雙羥基乙二胺、N-甲基-D-葡糖胺、哈胺青霉素的鹽類，及與氨基酸如，例如精胺酸、賴氨酸，等等形成的鹽類。
“酸或堿加成鹽”一詞也包括式(I)化合物可形成的水合物及溶劑加成型。這些型式的實例為例如水合物與醇化物，等等。
本文所采用“式(I)化合物的立體化學(xué)異構(gòu)型”指由式(I)化合物的相同原子組成相同鍵結(jié)順序但具有無法互換的不同立體結(jié)構(gòu)的所有可能化合物。除非另有說明，否則化合物的化學(xué)式包括該化合物可能出現(xiàn)的所有可能立體化學(xué)異構(gòu)型的混合物。該混合物可包含該化合物基本分子結(jié)構(gòu)的所有非對映異構(gòu)體與/或?qū)τ钞悩?gòu)體。呈純型或其混合物的式(I)化合物的所有立體化學(xué)異構(gòu)型均包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
式(I)化合物的N-氧化物型包括式(I)中一個或數(shù)個氮原子被氧化成所謂的N-氧化物的那些化合物，尤其是，式中一個或多個哌啶基、哌嗪基或噠嗪基的氮被N-氧化的N-氧化物。
有些式(I)化合物亦可呈其互變異構(gòu)型。這些型式雖然未出現(xiàn)在上式中，但也包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
本文中若使用“式(I)化合物”一詞時，也包括醫(yī)藥上可接受的加成鹽及所有立體異構(gòu)型。
本文所采用“組蛋白去乙酰酶”與“HDAC”意指可自組蛋白的N-末端賴氨酸殘基的ε-氨基上脫除乙?；拿缸迦褐械娜我环N。除非本文中另有說明，否則“組蛋白”一詞意指來自任何物種的任何組蛋白的蛋白質(zhì)，包括H1、H2A、H2B、H3、H4與H5。人類HDAC蛋白質(zhì)或基因產(chǎn)物包括(但不限于)HDAC-1、HDAC-2、HDAC-3、HDAC-4、HDAC-5、HDAC-6、HDAC-7、HDAC-8、HDAC-9與HDAC-10。組蛋白去乙酰酶亦可衍生自原蟲或真菌來源。
第一類值得注意的化合物包括彼等式(I)中符合下列一項或多項限制的化合物 a)n為1或2 b)t為0、1或2； c)各Z為氮； d)R10為氫； e)R2為氫、硝基、C1-6烷氧基、三氟甲基、二(C1-6烷基)氨基、羥氨基或萘磺?；拎夯?； f)-L-為一直接鍵結(jié)或選自下列的二價基團(tuán)C1-6烷二基、羰基或氨羰基； g)各R3代表氫原子； h)R4為氫、羥基C1-6烷基、氨羰基、羥氨羰基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基； i)

為選自(a-1)、(a-7)、(a-9)、(a-10)、(a-12)、(a-14)、(a-19)、(a-20)、(a-21)、(a-22)、(a-23)、(a-30)、(a-34)、(a-49)或(a-50)的基團(tuán)； j)各s分別為0、1、2或5； k)各R5與R6分別獨立選自氫；鹵基；硝基；三鹵C1-6烷基；三鹵C1-6烷氧基；C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷磺?；?；(芳基)(C1-6烷基)氨基；芳基磺?；?；芳氧基；芳基C2-6烯二基；二(C1-6烷基)氨基；噻吩基；經(jīng)下列基團(tuán)取代的噻吩基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、羥基C2-6烷基哌嗪基C1-6烷基、羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基磺酰基哌嗪基C1-6烷基、C1-6烷氧基哌啶基C1-6烷基、嗎啉基C1-6烷基、羥基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、或二(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷基； 呋喃基；噁唑基；吡咯基；吡唑基；吡啶基；經(jīng)C1-6烷氧基取代的吡啶基；喹啉基；吲哚基；苯基；經(jīng)分別獨立選自下列1、2或3個取代基取代的苯基鹵基、氨基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基C1-4烷基、三氟甲基、三氟甲氧基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、羥基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、二(羥基C1-4烷基)氨基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基，或中心

部份基團(tuán)亦可與亞甲基橋形成橋連(即形成雙環(huán)狀部份基團(tuán))。
第二類值得注意的化合物包括式(I)中符合下列一項或多項限制的化合物 a)n為1或2； b)t為0或2； c)各Z為氮； d)R1為-C(O)NH(OH)； e)R2為氫； f)-L-為一直接鍵結(jié)； g)各R3代表氫原子； h)R4為氫； i)

為選自(a-1)、(a-9)、(a-19)、(a-20)、(a-21)、(a-22)、(a-23)、(a-49)或(a-50)的基團(tuán)； j)各s分別為0、1、2或5； k)各R5與R6分別獨立選自氫；鹵基；三鹵C1-6烷基；三鹵C1-6烷氧基；C1-6烷基；C1-6烷氧基；芳基C2-6烯二基；二(C1-6烷基)氨基；噻吩基；經(jīng)下列基團(tuán)取代的噻吩基二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、羥基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、C1-6烷氧基哌啶基C1-6烷基、嗎啉基C1-6烷基、羥基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、或二(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷基； 呋喃基；噁唑基；吡唑基；吡啶基；經(jīng)C1-6烷氧基取代的吡啶基；喹啉基；吲哚基；苯基；經(jīng)分別獨立選自下列1、2或3個取代基取代的苯基鹵基、氨基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基C1-4烷基、三氟甲基、三氟甲氧基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、羥基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、二(羥基C1-4烷基)氨基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基，或 中心

部份基團(tuán)亦可與亞甲基橋形成橋連(即形成雙環(huán)狀部份基團(tuán))。
第三類值得注意的化合物包括式(I)中符合下列一項或多項限制的化合物 a)n為1； b)t為0； c)各Z為氮； d)R1為-C(O)NH(OH)； e)R2為氫； f)-L-為一直接鍵結(jié)； g)各R3代表氫原子； h)R4為氫； i)

為選自(a-1)或(a-20)的基團(tuán)； j)各s分別為0或1； k)各R5與R6分別獨立選自氫；噻吩基；經(jīng)下列基團(tuán)取代的噻吩基二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、或C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；呋喃基；苯基；經(jīng)分別獨立選自下列之1個取代基取代的苯基二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷氧基或C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基。
第四類值得注意的化合物包括式(I)中R1為-C(O)NH(OH)且-L-為一直接鍵結(jié)的那些化合物。
第五類值得注意的化合物包括式(I)中R1為-C(O)NH(OH)，R2為氫且-L-為一直接鍵結(jié)的那些化合物。
第六類值得注意的化合物包括式(I)中符合下列一項或多項限制的那些化合物 a)t為0； b)R1為-C(O)NR7R8、-C(O)C1-6烷二基SR9、-NR10C(O)N(OH)R9、-NR10C(O)C1-6烷二基SR9、-NR10C(O)C＝N(OH)R9或另一Zn-螯合基， 其中R7與R8分別獨立選自氫、羥基、羥基C1-6烷基或氨基C1-6烷基； c)R2為氫、鹵基、羥基、氨基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、三氟甲基或二(C1-6烷基)氨基； d)-L-為一直接鍵結(jié)或選自下列的二價基團(tuán)C1-6烷二基、氨基或羰基； e)R4為氫、羥基、氨基、羥基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、芳基C1-6烷基、氨羰基、氨基C1-6烷基、C1-6烷基氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基； f)

為選自下列的基團(tuán)(a-1)、(a-3)、(a-4)、(a-5)、(a-6)、(a-7)、(a-8)、(a-9)、(a-10)、(a-11)、(a-12)、(a-13)、(a-14)、(a-15)、(a-16)、(a-17)、(a-18)、(a-19)、(a-20)、(a-21)、(a-22)、(a-23)、(a-24)、(a-25)、(a-26)、(a-28)、(a-29)、(a-30)、(a-31)、(a-32)、(a-33)、(a-34)、(a-35)、(a-36)、(a-37)、(a-38)、(a-39)、(a-40)、(a-41)、(a-42)、(a-44)、(a-45)、(a-46)、(a-47)、(a-48)或(a-51)； g)各s分別為0、1、2、3或4； h)R5為氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵C1-6烷基；三鹵C1-6烷氧基；C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷羰基；C1-6烷氧羰基；C1-6烷磺?；?；羥基C1-6烷基；芳氧基；二(C1-6烷基)氨基；氰基；噻吩基；呋喃基；經(jīng)羥基C1-6烷基取代的呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；噁唑基；經(jīng)芳基與C1-6烷基取代的噁唑基；C1-6烷基三唑基；四唑基；吡咯烷基；吡咯基；嗎啉基；C1-6烷基嗎啉基；哌嗪基；C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷基哌嗪基；C1-6烷氧基哌啶基；吡唑基；經(jīng)選自C1-6烷基或三鹵C1-6烷基的一或兩個取代基取代的吡唑基；吡啶基；經(jīng)C1-6烷氧基、芳氧基或芳基取代的吡啶基；嘧啶基；喹啉基；吲哚基；苯基；或經(jīng)分別獨立選自鹵基、C1-6烷基、C1-6烷氧基或三氟甲基中的1或2個取代基取代的苯基； i)R6為氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵C1-6烷基；三鹵C1-6烷氧基；C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷羰基；C1-6烷氧羰基；C1-6烷磺?；?；羥基C1-6烷基；芳氧基；二(C1-6烷基)氨基；氰基；吡啶基；苯基；或經(jīng)分別獨立選自鹵基、C1-6烷基、C1-6烷氧基或三氟甲基中之1或2個取代基取代的苯基； 中心

部份基團(tuán)亦可與亞乙基橋形成橋連(即形成雙環(huán)狀部份基團(tuán))。
第七類值得注意的化合物包括式(I)中符合下列一項或多項限制的那些化合物 a)R7與R8分別獨立選自氫、羥基、羥基C1-6烷基、氨基C1-6烷基或氨芳基； b)R2為氫、鹵基、羥基、氨基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、三氟甲基、羥氨基或萘磺?；拎夯? c)R4為氫、羥基、氨基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基、芳基C1-6烷基、氨羰基、羥羰基、氨基C1-6烷基、氨羰基C1-6烷基、羥羰基C1-6烷基、羥氨羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基； d)

為選自下列的基團(tuán)(a-1)、(a-2)、(a-3)、(a-4)、(a-5)、(a-6)、(a-7)、(a-8)、(a-9)、(a-10)、(a-11)、(a-12)、(a-13)、(a-14)、(a-15)、(a-16)、(a-17)、(a-18)、(a-19)、(a-20)、(a-21)、(a-22)、(a-23)、(a-24)、(a-25)、(a-26)、(a-27)、(a-28)、(a-29)、(a-30)、(a-31)、(a-32)、(a-33)、(a-34)、(a-35)、(a-36)、(a-37)、(a-38)、(a-39)、(a-40)、(a-41)、(a-42)、(a-43)或(a-44)；及 e)各R5與R6分別獨立選自氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵C1-6烷基；三鹵C1-6烷氧基；C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷氧基C1-6烷氧基；C1-6烷羰基；C1-6烷磺?；磺杌鵆1-6烷基；羥基C1-6烷基；羥基C1-6烷氧基；羥基C1-6烷氨基；氨基C1-6烷氧基；二(C1-6烷基)氨羰基；二(羥基C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氨基；芳基磺酰基；芳基磺酰基氨基；芳氧基；芳基C2-6烯二基；二(C1-6烷基)氨基；氰基；噻吩基；經(jīng)下列基團(tuán)取代的噻吩基二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基或二(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷基；呋喃基；咪唑基；C1-6烷基三唑基；四唑基；哌啶基C1-6烷氧基；嗎啉基；C1-6烷基嗎啉基；嗎啉基C1-6烷氧基；嗎啉基C1-6烷基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷氧基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；C1-6烷基哌嗪基磺酰基；氨基磺?；哙夯鵆1-6烷氧基；氨基磺酰基哌嗪基；氨基磺?；哙夯鵆1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基磺?；哙夯?；二(C1-6烷基)氨基磺?；哙夯鵆1-6烷基；羥基C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；C1-6烷氧基哌啶基；C1-6烷氧基哌啶基C1-6烷基；羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；(羥基C1-6烷基)(C1-6烷基)氨基；(羥基C1-6烷基)(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；吡咯烷基C1-6烷氧基；吡唑基；硫吡唑基；經(jīng)選自C1-6烷基或三鹵C1-6烷基中兩個取代基取代的吡唑基；吡啶基；經(jīng)C1-6烷氧基或芳基取代的吡啶基；嘧啶基；喹啉基；苯基；經(jīng)分別獨立選自下列的1、2或3個取代基取代的苯基鹵基、氨基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基C1-4烷基、三氟甲基、三氟甲氧基、羥基C1-4烷氧基、C1-4烷氧基C1-4烷氧基、氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基、哌啶基C1-4烷氧基、吡咯烷基C1-4烷氧基、氨基磺?；哙夯?、氨基磺?；哙夯鵆1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基磺?；哙夯⒍?C1-4烷基)氨基磺?；哙夯鵆1-4烷基、羥基C1-4烷基哌嗪基、羥基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、C1-4烷氧基哌啶基、C1-4烷氧基哌啶基C1-4烷基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、(羥基C1-4烷基)(C1-4烷基)氨基、(羥基C1-4烷基)(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷氧基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、羥基C1-4烷氨基、二(羥基C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氨基、氨基噻二唑基、氨基磺?；哙夯鵆1-4烷氧基、或噻吩基C1-4烷氨基。
有一類優(yōu)選化合物是由彼等式(I)中如下說明的化合物組成 R7與R8分別獨立選自氫、羥基、羥基C1-6烷基、氨基C1-6烷基或氨芳基； R2為氫、鹵基、羥基、氨基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、三氟甲基、羥氨基或萘磺?；拎夯?； R4為氫、羥基、氨基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基、芳基C1-6烷基、氨羰基、羥羰基、氨基C1-6烷基、氨羰基C1-6烷基、羥羰基C1-6烷基、羥氨羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；

為選自下列的基團(tuán)(a-1)、(a-2)、(a-3)、(a-4)、(a-5)、(a-6)、(a-7)、(a-8)、(a-9)、(a-10)、(a-11)、(a-12)、(a-13)、(a-14)、(a-15)、(a-16)、(a-17)、(a-18)、(a-19)、(a-20)、(a-21)、(a-22)、(a-23)、(a-24)、(a-25)、(a-26)、(a-27)、(a-28)、(a-29)、(a-30)、(a-31)、(a-32)、(a-33)、(a-34)、(a-35)、(a-36)、(a-37)、(a-38)、(a-39)、(a-40)、(a-41)、(a-42)、(a-43)或(a-44)；及 各R5與R6分別獨立選自氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵C1-6烷基；三鹵C1-6烷氧基；C1-6烷基；C1-6烷氧基C1-6烷氧基；C1-6烷氧基C1-6烷羰基；C1-6烷磺?；磺杌鵆1-6烷基；羥基C1-6烷基；羥基C1-6烷氧基；羥基C1-6烷氨基；氨基C1-6烷氧基；二(C1-6烷基)氨羰基；二(羥基C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氨基；芳基磺?；?；芳基磺酰基氨基；芳氧基；芳基C2-6烯二基；二(C1-6烷基)氨基；氰基；噻吩基；經(jīng)下列基團(tuán)取代的噻吩基二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基或二(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷基；呋喃基；咪唑基；C1-6烷基三唑基；四唑基；吡咯烷基；哌啶基C1-6烷氧基；嗎啉基；C1-6烷基嗎啉基；嗎啉基C1-6烷氧基；嗎啉基C1-6烷基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷氧基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；C1-6烷基哌嗪基磺?；?；氨基磺酰基哌嗪基C1-6烷氧基；氨基磺?；哙夯?；氨基磺?；哙夯鵆1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基磺?；哙夯?；二(C1-6烷基)氨基磺?；哙夯鵆1-6烷基；羥基C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；C1-6烷氧基哌啶基；C1-6烷氧基哌啶基C1-6烷基；羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；(羥基C1-6烷基)(C1-6烷基)氨基；(羥基C1-6烷基)(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；吡咯烷基C1-6烷氧基；吡唑基；硫吡唑基；經(jīng)選自C1-6烷基或三鹵C1-6烷基中兩個取代基取代的吡唑基；吡啶基；經(jīng)C1-6烷氧基或芳基取代的吡啶基；嘧啶基；喹啉基；苯基；經(jīng)分別獨立選自下列的1、2或3個取代基取代的苯的鹵基、氨基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基C1-4烷基、三氟甲基、三氟甲氧基、羥基C1-4烷氧基、C1-4烷氧基C1-4烷氧基、氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基、哌啶基C1-4烷氧基、吡咯烷基C1-4烷氧基、氨基磺?；哙夯被酋；哙夯鵆1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基磺?；哙夯?、二(C1-4烷基)氨基磺?；哙夯鵆1-4烷基、羥基C1-4烷基哌嗪基、羥基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、C1-4烷氧基哌啶基、C1-4烷氧基哌啶基C1-4烷基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、(羥基C1-4烷基)(C1-4烷基)氨基、(羥基C1-4烷基)(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷氧基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、羥基C1-4烷氨基、二(羥基C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氨基、氨基噻二唑基、氨基磺?；哙夯鵆1-4烷氧基、或噻吩基C1-4烷氨基。
另一類優(yōu)選化合物是由彼等式(I)中如下說明的化合物組成 其中t為0； R1為-C(O)NR7R8、-C(O)C1-6烷二基SR9、-NR10(C(O)N(OH)R9、-NR10(C(O)C1-6烷二基SR9、-NR10C(O)C＝N(OH)R9或另一Zn-螯合基，其中R7與R8分別獨立選自氫、羥基、羥基C1-6烷基或氨基C1-6烷基； R2為氫、鹵基、羥基、氨基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、三氟甲基或二(C1-6烷基)氨基； -L-為一直接鍵結(jié)或選自下列的二價基團(tuán)C1-6烷二基、氨基或羰基； R4為氫、羥基、氨基、羥基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、芳基C1-6烷基、氨羰基、氨基C1-6烷基、C1-6烷基氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；

為選自下列的基團(tuán)(a-1)、(a-3)、(a-4)、(a-5)、(a-6)、(a-7)、(a-8)、(a-9)、(a-10)、(a-11)、(a-12)、(a-13)、(a-14)、(a-15)、(a-16)、(a-17)、(a-18)、(a-19)、(a-20)、(a-21)、(a-22)、(a-23)、(a-24)、(a-25)、(a-26)、(a-28)、(a-29)、(a-30)、(a-31)、(a-32)、(a-33)、(a-34)、(a-35)、(a-36)、(a-37)、(a-38)、(a-39)、(a-40)、(a-41)、(a-42)、(a-44)、(a-45)、(a-46)、(a-47)、(a-48)或(a-51)； 各s分別為0、1、2、3或4； R5為氫；鹵基；羥基；氨基、硝基；三鹵C1-6烷基；三鹵C1-6烷氧基；C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷羰基；C1-6烷氧羰基；C1-6烷磺?；?；羥基C1-6烷基；芳氧基；二(C1-6烷基)氨基；氰基；噻吩基；呋喃基；經(jīng)羥基C1-6烷基取代的呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；噁唑基；經(jīng)芳基與C1-6烷基取代的噁唑基；C1-6烷基三唑基；四唑基；吡咯烷基；吡咯基；嗎啉基；C1-6烷基嗎啉基；哌嗪基；C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷基哌嗪基；C1-6烷氧基哌啶基；吡啶基；經(jīng)選自C1-6烷基或三鹵C1-6烷基的1或2個取代基取代的吡唑基；吡啶基；經(jīng)C1-6烷氧基、芳氧基或芳基取代的吡啶基；嘧啶基；喹啉基；吲哚基；苯基；或經(jīng)分別獨立選自鹵基、C1-6烷基、C1-6烷氧基或三氟甲基中的1或2個取代基取代的苯基； 且R6為氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵C1-6烷基；三鹵C1-6烷氧基、C1-6烷基、C1-6烷氧基；C1-6烷羰基；C1-6烷氧羰基；C1-6烷磺?；涣u基C1-6烷基；芳氧基；二(C1-6烷基)氨基；氰基；吡啶基；苯基；或經(jīng)分別獨立選自鹵基、C1-6烷基、C1-6烷氧基或三氟甲基中的1或2個取代基取代的苯基；或 中心

部份基團(tuán)亦可與亞乙基橋形成橋連(即形成雙環(huán)狀部份基團(tuán))。
另一類優(yōu)選化合物由式(I)中如下說明的化合物組成 其中n為1或2；t為0、1或2；各Z為氮；R10為氫；R2為氫、硝基、C1-6烷氧基、三氟甲基、二(C1-6烷基)氨基、羥氨基或萘磺酰基吡嗪基；-L-為一直接鍵結(jié)或選自下列的二價基團(tuán)C1-6烷二基、羰基或氨羰基；各R3代表氫原子；R4為氫、羥基C1-6烷基、氨羰基、羥氨羰基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；

為選自(a-1)、(a-7)、(a-9)、(a-10)、(a-12)、(a-14)、(a-19)、(a-20)、(a-21)、(a-22)、(a-23)、(a-30)、(a-34)、(a-49)或(a-50)的基團(tuán)；各s分別獨立為0、1、2或5；且各R5與R6分別獨立選自氫；鹵基；硝基；三鹵C1-6烷基；三鹵C1-6烷氧基；C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷磺?；?；(芳基)(C1-6烷基)氨基；芳基磺酰基；芳氧基；芳基C2-6烯二基二(C1-6烷基)氨基；噻吩基；經(jīng)下列基團(tuán)取代的噻吩基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、羥基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基磺?；哙夯鵆1-6烷基、C1-6烷氧基哌啶基C1-6烷基、嗎啉基C1-6烷基、羥基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、或二(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷基；呋喃基；噁唑基；吡咯基；吡唑基；吡啶基；經(jīng)C1-6烷氧基取代的吡啶基；喹啉基；吲哚基；苯基；經(jīng)分別獨立選自下列1、2或3個取代基取代的苯基鹵基、氨基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基C1-4烷基、三氟甲基、三氟甲氧基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基、羥基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、二(羥基C1-4烷基)氨基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基，或 中心

部份基團(tuán)亦可與亞甲基橋形成橋連(即形成雙環(huán)狀部份基團(tuán))。
另一類更佳化合物由式(I)中如下說明的那些化合物組成 其中n為1或2；t為0或2；各Z為氮；R1為-C(O)NH(OH)；R2為氫；-L-為一直接鍵結(jié)；各R3代表氫原子；R4為氫；

為選自(a-1)、(a-9)、(a-19)、(a-20)、(a-21)、(a-22)、(a-23)、(a-49)或(a-50)的基團(tuán)；各s分別獨立為0、2或5；且各R5與R6分別獨立選自氫；鹵基；三鹵C1-6烷基；三鹵C1-6烷氧基；C1-6烷基；C1-6烷氧基；芳基C2-6烯二基；二(C1-6烷基)氨基；噻吩基；經(jīng)下列基團(tuán)取代的噻吩基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、羥基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、C1-6烷氧基哌啶基C1-6烷基、嗎啉基C1-6烷基、羥基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、或二(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷基；呋喃基；噁唑基；吡唑基；吡啶基；經(jīng)C1-6烷氧基取代的吡啶基；喹啉基；吲哚基；苯基；經(jīng)分別獨立選自下列1、2或3個取代基取代的苯基鹵基、氨基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基C1-4烷基、三氟甲基、三氟甲氧基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氧基；二(C1-4烷基)氨基、二(C1-4氨基)氨基C1-4烷基二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、羥基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、二(羥基C1-4烷基)氨基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基；或 中心

部份基團(tuán)亦可與亞甲基橋形成橋連(即形成雙環(huán)狀部份基團(tuán))； 另一類更佳化合物由式(I)中如下說明的那些化合物組成 其中n為1；t為0；各Z為氮；R1為-C(O)NH(OH)；R2為氫；-L-為一直接鍵結(jié)；各R3代表氫原子；R4為氫；

為選自(a-1)或(a-20)的基團(tuán)；各s分別獨立為0或1；且各R5與R6分別獨立選自氫；噻吩基；經(jīng)下列基團(tuán)取代的噻吩基二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基或C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；呋喃基；苯基；經(jīng)一個分別獨立選自下列的取代基取代的苯基二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷氧基或C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基。
最佳化合物為No.6、No.100、No.104、No.128、No.144、No.124、No.154、No.125、No.157、No.156、No.159、No.163、No.164、No.168、No.169、No.127、No.171、No.170、No.172與No.173化合物。


最佳化合物為No.6化合物.
式(I)化合物及其醫(yī)藥上可接受的鹽與N-氧化物及立體化學(xué)異構(gòu)型可依一般方式制備。其各種一般合成途徑包括例如 1a)式(I)中R1為-C(O)NH(OH)的異羥肟酸(稱為式(I-a)化合物)的制法可由式(II)中間體與適當(dāng)酸，如，例如三氟乙酸反應(yīng)。該反應(yīng)于適當(dāng)溶劑，如，例如甲醇中進(jìn)行。

1b)式(II)中間體的制法可由式(III)中間體與式(IV)中間體于適當(dāng)試劑的存在下反應(yīng)，如N′-(乙基碳化亞胺酰基)-N，N-二甲基-1，3-丙二胺單鹽酸鹽(EDC)與1-羥基-1H-苯并三唑(HOBT)。該反應(yīng)可于合適溶劑，如DCM與THF的混合物中進(jìn)行。

1)式(III)中間體的制法可由式(V)中間體與適當(dāng)堿(如NaOH)，于合適溶劑，如乙醇的存在下反應(yīng)。

2)式(I)中R1為-C(O)NH(OH)的異羥肟酸(稱為式(I-a)化合物)的制法亦可由式(VI)中間體與氫于催化劑(如，例如Pd/C(10％)的存在下進(jìn)行催化性氫化反應(yīng)。該反應(yīng)于適當(dāng)溶劑，如，例如二甲基甲酰胺(DMF)或THF中進(jìn)行?；蛘?，這些化合物的制法也可由式(VI)中間體與環(huán)己二烯，于催化劑(如，例如Pd/C(10％))的存在下進(jìn)行。該反應(yīng)于適當(dāng)溶劑，如，例如1-丙醇中進(jìn)行。

3)式(I)R1為如下式基團(tuán)的化合物

或
(稱為式I-b)化合物)的制法可由式(VII)中間體與式(VIII)中間體，其中R′為

或
于N′-(乙基碳化亞胺?；?-N，N-二甲基-1，3-丙二胺單鹽酸鹽(EDC)與羥基苯并三唑(HOBT)的存在下反應(yīng)。該反應(yīng)可于合適溶劑，如，例如二氯甲烷(DCM)與THF的混合物中進(jìn)行。

式(I)化合物亦可使用固相合成技術(shù)制備。通常，固相合成法涉及由中間體于合成法中與聚合物載體反應(yīng)。該聚合物承載的中間體可再進(jìn)行許多合成步驟。每一步驟之后，過濾樹脂，以多種不同溶劑洗滌數(shù)次，以排除雜質(zhì)。每一步驟的樹脂可以分開與下一個步驟中的不同中間體反應(yīng)，以合成大量化合物。在制備過程的最后一個步驟之后，以試劑處理樹脂或加工裂解樹脂上的樣品。固相化學(xué)中所使用技術(shù)的更詳細(xì)說明示于例如The Combinatorial Index＂(B.Bunin，Academic Press)及Novabiochem’s 1999 Catalogue & Peptide Synthesis Handbook(瑞士Novabiochem AG)，其內(nèi)容已以引用的方式并入本文中。
式(I)化合物及一些中間體的結(jié)構(gòu)式可具有至少一個立體中心。該立體中心可呈R或S構(gòu)型。
依上述制法制備的式(I)化合物通常為對映異構(gòu)體的消旋混合物，其可依相關(guān)領(lǐng)域已知的解析法分離。式(I)的消旋化合物可經(jīng)由與合適的手性酸反應(yīng)而轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的非對映異構(gòu)性鹽型。該非對映異構(gòu)性鹽型再經(jīng)例如選擇性或分段式結(jié)晶法分離，使用堿釋出對映異構(gòu)體。另一種分離式(I)化合物的對映異構(gòu)型的方法涉及使用手性固相進(jìn)行液相層析。如果該反應(yīng)為立體專一性反應(yīng)，該純立體化學(xué)異構(gòu)型也可衍生自適當(dāng)起始物的相應(yīng)純立體化學(xué)異構(gòu)型。如果需要專一性立體異構(gòu)體，最好以立體專一性制法合成該化合物。這些方法最好使用純對映異構(gòu)性起始物。
式(I)化合物其醫(yī)藥上可接受的酸加成鹽及立體異構(gòu)型具有抑制組蛋白去乙酰酶(HDAC)效果的有價值的醫(yī)藥性質(zhì)。
本發(fā)明提供一種抑制細(xì)胞(包括轉(zhuǎn)形細(xì)胞)異常生長的方法，其中供給有效量的本發(fā)明化合物。細(xì)胞的異常生長指細(xì)胞不依靠正常的調(diào)節(jié)機(jī)制生長(亦即喪失接觸抑制作用)。其包括直接造成癌癥細(xì)胞生長停止、末端分化及/或細(xì)胞凋亡，及間接抑制腫瘤的新血管形成兩種作法來抑制腫瘤生長。
本發(fā)明亦提供一種抑制腫瘤生長的方法，其中對有此需要的個體例如哺乳動物(更尤其是人類)供給有效量的本發(fā)明化合物。尤其是，本發(fā)明提供一種抑制腫瘤生長的方法，其是供給有效量的本發(fā)明化合物?？墒芤种频哪[瘤實例為(但不限于)肺癌(例如腺癌瘤，包括非小細(xì)胞肺癌)、胰癌(例如胰癌瘤，如，例如外分泌胰癌瘤)、結(jié)腸癌(例如結(jié)腸直腸癌瘤，如，例如結(jié)腸腺癌瘤與結(jié)腸腺瘤)、前列腺癌包括前進(jìn)式疾病、類淋巴球的造血性腫瘤(例如急性淋巴球性白血病、B-細(xì)胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma))、骨髓性白血病(例如急性骨髓性白血病(AML))、甲狀腺濾泡癌、脊髓發(fā)育不良癥候群(MDS)、間質(zhì)性腫瘤(例如纖維肉瘤與橫紋肌肉瘤)、黑色素瘤，惡性畸胎瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、良性皮膚腫瘤(例如角化棘皮瘤)、乳癌瘤(例如前進(jìn)式乳癌)、腎癌瘤、卵巢癌瘤、膀胱癌瘤、與上皮癌瘤。
根據(jù)本發(fā)明化合物可用于其它醫(yī)療目的，例如 a)在治療癌癥的腫瘤放射法之前、其間或之后供給根據(jù)本發(fā)明化合物，使腫瘤對放射療法產(chǎn)生敏化作用； b)治療關(guān)節(jié)病變與骨病變病癥，如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、幼年型關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)、多關(guān)節(jié)炎、乾癬性關(guān)節(jié)炎、僵直性脊柱炎與全身性紅斑狼瘡； c)抑制平滑肌細(xì)胞增生，包括血管增生性病變、動脈粥樣硬化及術(shù)后再狹窄； d)治療炎癥與皮膚病，如潰瘍性結(jié)腸炎、克隆氏癥、過敏性鼻炎、移植物對抗宿主疾病、結(jié)膜炎、氣喘、ARDS、貝希特氏癥(Behcetsdisease)、移植排斥、蕁麻疹、過敏性皮膚炎、局部性脫發(fā)、硬皮癥、疹病、濕疹、皮肌炎、痤瘡、糖尿病、全身性紅斑狼瘡、川崎氏癥、多發(fā)性硬化、肺氣腫、囊性纖維變性與慢性支氣管炎；、 e)治療子宮內(nèi)膜異位癥、子宮纖維瘤、功能障礙性子宮出血及子宮內(nèi)膜增生； f)治療眼睛血管形成，包括影響視網(wǎng)膜與脈絡(luò)膜血管之血管病變； g)治療心功能障礙； h)抑制免疫抑制性病癥，如治療HIV感染； i)治療腎功能障礙； j)抑制內(nèi)分泌病變； k)抑制生糖作用異常的功能障礙； l)治療神經(jīng)病變，例如，巴金森氏癥或造成認(rèn)知異常的神經(jīng)病變，例如阿茲海默氏癥或與聚麩酰胺病變涉及的神經(jīng)元疾病； m)抑制神經(jīng)肌肉病變，例如肌萎縮性側(cè)硬化； n)治療脊柱肌肉萎縮； o)治療其它可因加強(qiáng)基因表現(xiàn)而治療的其它病變； p)加強(qiáng)基因療法。
因此，本發(fā)明揭示以式(I)化合物作為醫(yī)藥的用途及以式(I)化合物制造醫(yī)藥供治療上述一種或多種病癥的用途。
式(I)化合物、其醫(yī)藥上可接受的酸加成鹽及立體異構(gòu)型因為其可用于生物樣品中檢測或判別HDAC而具有有價值的診斷性質(zhì)，其包括檢測或測定有標(biāo)記的化合物與HDAC之間所形成的配合物。
該檢測或判別法可使用標(biāo)記如放射性同位素、酶、螢光物質(zhì)、發(fā)光物質(zhì)，等等的標(biāo)記試劑的化合物。放射性同位素的實例包括125I、131I、3H與14C。酶的檢測法通常與適當(dāng)?shù)孜锏墓曹椇螅俅呋蓹z測的反應(yīng)。其實例包括例如β-半乳糖苷酶、β-葡糖苷酶、堿性磷酸酶、過氧化酶與蘋果酸脫氫酶，優(yōu)選辣根過氧化酶。發(fā)光物質(zhì)包括例如魯米諾(luminol)及魯米諾衍生物、螢光素、多管水母素(aequorin)與螢光素酶。
生物樣品的定義為體組織或體液。體液實例為腦脊髓液、血液、血漿、血清、尿液、痰、唾液，等等。
就其實用的醫(yī)藥性質(zhì)而言，本化合物可制成不同給藥用的醫(yī)藥形式。
為了制備本發(fā)明的醫(yī)藥組合物，使用有效量的堿或酸加成鹽型特定化合物作為活性成分，與醫(yī)藥上可接受的載體均勻混合，該載體可呈多種不同形式，取決于所需給藥制劑型式。這些醫(yī)藥組合物最好呈適合例如經(jīng)口、直腸、經(jīng)皮膚給藥或非經(jīng)腸式注射用的單位劑型。例如制備口服劑型組合物時，任何常用的醫(yī)藥介質(zhì)均可使用，如，例如水、甘醇、油類、醇類，等等，可用于制備口服用液體制劑，如懸浮液、糖漿、酏劑與溶液；或固態(tài)載體如淀粉、糖類、高嶺土、潤滑劑、結(jié)合劑、崩解劑，等等，可用于制備散劑、丸劑、膠囊、與錠劑。
由于錠劑與膠囊方便給藥，因此代表最有利的口服單位劑型，此時當(dāng)然使用固態(tài)醫(yī)藥載體。非經(jīng)腸式組合物中的載體通常包括無菌水，至少占絕大部分，但如可包含其它成份，例如有助于溶解的成份。例如可制備注射液，其中載體則包括鹽水溶液，葡萄糖溶液或鹽水與葡萄糖溶液的混合物。也可制備注射用懸浮液，此時則可使用適當(dāng)液態(tài)載體、懸浮劑，等等。在適合經(jīng)皮膚給藥的組合物中，載體可視需要包含滲透加強(qiáng)劑及/或合適的濕化劑，可視需要與任何性質(zhì)的少量合適添加物組合，該添加物不可對皮膚引起顯著的不良效應(yīng)。這些添加物可促進(jìn)給藥至皮膚及/或可能有助于制備所需組合物。這些組合物可促進(jìn)給藥至皮膚及/或可能有助于制備所需組合物。這些組合物可依多種方法給藥，例如呈透皮式貼布、滴劑、或油膏。
上述醫(yī)藥組合物特別有利于調(diào)配形式方便給藥且劑量均一的單位制劑。本說明書與申請專利范圍所使用的單位劑型指物理性分離的單位劑量，各單位包含經(jīng)計算可產(chǎn)生所需醫(yī)療效果的預(yù)定量活性成份，與所需的醫(yī)藥載體組合。這些單位劑型實例為錠劑(包括有畫線或有包衣的錠劑)、膠囊、丸劑、散劑包、扁囊片、注射用溶液或懸浮液、茶匙劑、湯匙劑，等等，及其多重劑量組合。
熟悉相關(guān)技藝的人士很容易即可由下文出示的試驗結(jié)果決定有效量。通常，醫(yī)療有效量為每公斤體重0.005毫克至100毫克，特定鹽之每公斤體重0.005毫克至10毫克?？梢栽谝惶靸?nèi)將所需劑量分成2、3、4或更多個小劑量，在適當(dāng)間隔時間下給藥。該小劑量可調(diào)配成單位劑型，例如每單位劑型包含0.5至500毫克，特定言的10至500毫克活性成份。
本發(fā)明另一方面提出一種含HDAC-抑制劑與另一種抗癌劑的組合，尤其用于醫(yī)藥，更明確言說，用于治療癌癥或相關(guān)疾病。
治療上述病癥時，本發(fā)明化合物宜用于與一種或多種其它醫(yī)藥劑組合，更尤其是，與其它抗癌劑組合?？拱﹦┑膶嵗秊? -鉑配位化合物，例如順氯銨鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)或草酸鉑(oxalyplatin)； -紫杉烷化合物，例如帕尼特西(paclitaxel)或哚希特西(docetaxel)； -拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑，如喜樹鹼化合物，例如；抑特康(irinotecan)或托普特康(topotecan)； -拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑，如抗腫瘤鬼臼毒素衍生物，例如抑托泊苷(etoposide)或登尼泊苷(teniposide)； -抗腫瘤長春花植物鹼，例如長春花鹼、長春新鹼或長春瑞寶(vinorelbine)； -抗腫瘤核苷衍生物，例如5-氟尿嘧啶、真希嗒本(gemcitabine)或卡希嗒本(capecitabine)； -烷化劑，如氮芥或亞硝酸脲，例如環(huán)磷酰胺、苯丁酸氮芥、卡莫司汀(carmustin)或洛莫司汀(lomustin)； -抗腫瘤蒽環(huán)素衍生物、例如道諾紅菌素(daunorubicin)、道索紅菌素(doxorubicin)、依道紅菌素(idarubicin)或米托恩昆(mitoxantrone) -HER2抗體，例如嗒茲美布(trastuzumab)； -雌激素受體擷抗劑或選擇性雌激素受體控制劑，例如嗒莫希芬(tamoxifen)、妥洛米芬(toremifene)、特洛希芬(droloxifene)、法洛得斯(faslodex)、或拉洛希芬(raloxifene)； -芳構(gòu)酶抑制劑，如抑美斯坦(exemestane)、安斯特唑(anastrozole)、樂特唑(letrazole)、與弗洛唑(vorozole)； -分化劑，如類視黃素、維生素D與視黃酸代謝阻斷劑(RAMBA)，例如異維甲酸(accutane)； -DNA甲基轉(zhuǎn)化酶抑制劑，例如阿扎胞苷(azacytidine) -激酶抑制劑，例如黃吡哚(flavoperidol)、抑麻特本(imatinib)甲磺酸鹽或吉菲特本(gefitinib)； -法呢基轉(zhuǎn)化酶抑制劑；或 -其它HDAC抑制劑。
“鉑配位化合物”一詞在本文中指可抑制任何腫瘤細(xì)胞生長的鉑配位化合物，其可提供離子形式的鉑。
“紫杉烷化合物”一詞指具有紫杉烷環(huán)系且與某些紫杉類(Taxus)樹木的萃出物相關(guān)或其所衍生物的化合物。
“拓樸異構(gòu)酶抑制劑”一詞是指可于真核生物細(xì)胞中改變DNA拓樸結(jié)構(gòu)的酶。其對細(xì)胞重要功能及細(xì)胞增生具有重要性。真核生物細(xì)胞中有兩類拓樸異構(gòu)酶，亦即I型與II型。拓樸異構(gòu)酶I為一種分子量約100,000的單體酶。該酶會結(jié)合DNA，引進(jìn)一個暫時性單股裂口，打開雙螺旋(或使之解開)，然后先使裂口封合后，再自DNA股上解離。拓樸異構(gòu)酶II的作用機(jī)理類似，其涉及誘導(dǎo)DNA股開裂或形成游離基。
“喜樹堿化合物”是指與喜樹堿母化合物涉及或其所衍生的化合物，它是衍生自中國樹種Camptothecin acuminata及印度樹種Nothapodytes foetida的不可溶于水的植物鹼。
“鬼臼毒素化合物”一詞指與自剝度比爾莫(mandrake)植物萃出的鬼臼毒素母化合物涉及或其所衍生的化合物。
“抗腫瘤長春花植物鹼”一詞指與自長春花(Vinca rosea)植物的萃出物涉及或其所衍生的化合物。
“烷化劑”一詞包括一類共同特點為在生理條件下有能力提供烷基給具有生物活性的大分子如DNA的化學(xué)劑。大多數(shù)的較重要制劑如氮芥及亞硝基脲中的活性烷化部分基團(tuán)在活體內(nèi)在復(fù)雜的降解反應(yīng)(其中有些為酶反映)之后產(chǎn)生。烷化劑的最重要醫(yī)藥作用為特別在DNA合成與細(xì)胞分裂過程中干擾與細(xì)胞增生涉及的基本機(jī)理。烷化劑在快速增生組織中干擾DNA功能與整體性的能力可作為其醫(yī)療用途及其多種毒性的基礎(chǔ)。
“抗腫瘤蒽環(huán)素衍生物”一詞包括得自真菌波賽鏈霉菌(Strep.peuticus var.caesius)的抗生素及其衍生物，其特征在于具有一個四環(huán)素環(huán)結(jié)構(gòu)，利用糖苷鍵連接一種罕見糖道諾糖苷(daunosamine)。
已知原發(fā)性乳癌瘤中人類的上皮生長因子受體2蛋白質(zhì)(HER2)的擴(kuò)增作用與某些患者的臨床預(yù)后結(jié)果不佳有相關(guān)性。嗒茲美布(trastuzumab)為一種高度純化的重組DNA-衍生的擬人化單株1gGI-k抗體，與其HER2受體的細(xì)胞外功能部位具有高的和專一的結(jié)合性。
許多乳癌有雌激素受體，且這些腫瘤的生長可受到雌激素刺激。“雌激素受體擷抗劑”及“選擇性雌激素受體調(diào)控劑“是指與雌激素受體(ER)結(jié)合的雌二醇的競爭性抑制劑。選擇性雌激素受體調(diào)控劑與ER結(jié)合時，會誘發(fā)受體的三維空間形狀改變，抑制其與DNA上雌激素反映元素(ERE)的結(jié)合。
停經(jīng)后婦女的循環(huán)雌激素主要來源為腎上腺與卵巢雄激素(雄烯二醇與睪固酮)經(jīng)由周邊組織中芳構(gòu)酶轉(zhuǎn)化成雌激素(雌固酮與雌二醇)。經(jīng)由抑制芳構(gòu)酶或去活化作用消耗雌激素的作法可有效且選擇性治療停經(jīng)后某些與激素相關(guān)的乳癌患者。
“抗雌激素劑”一詞不僅包括雌激素受體擷抗劑與選擇性雌激素受體調(diào)控劑，而且包括如上所述的芳構(gòu)酶抑制劑。
“分化劑”一詞包括可依不同方式抑制細(xì)胞增生及誘發(fā)分化的化合物。已知維生素D與類視黃素在調(diào)節(jié)多種正常及惡性細(xì)胞型態(tài)的生長與分化上扮演重要角色。視黃酸代謝作用阻斷劑(RAMBA′s)通過抑制細(xì)胞色素P450-所媒介的視黃酸分解代謝作用而提高內(nèi)因性視黃酸含量。
DNA的甲基化變化為人體贅生瘤最常見的異常現(xiàn)象。特定基因的發(fā)動子中的過度甲基化通常與所涉及的基因失去活性有關(guān)?！癉NA甲基轉(zhuǎn)化酶抑制劑”一詞指透過DNA甲基轉(zhuǎn)化酶的醫(yī)藥抑制作用而發(fā)揮作用及使腫瘤抑制基因表達(dá)再活化的化合物。
“激酶抑制劑”一詞包括涉及細(xì)胞循環(huán)發(fā)展及計劃性細(xì)胞死亡(細(xì)胞凋亡)的激酶的強(qiáng)力抑制劑。
“法呢基轉(zhuǎn)化酶抑制劑”一詞指其設(shè)計用于防止Ras及其它細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的法呢基化反應(yīng)的化合物。已知其可影響惡性細(xì)胞增生與存活。
“其它HDAC抑制劑”一詞包括(但不限于) -短鏈脂肪酸，例如丁酸酯、4-苯基丁酸酯或2-丙基戊酸。
-異羥虧酸，例如辛二?；姹桨樊惲u虧酸(SAHA)、雙芳基異羥肟酸酯A-161906、雙環(huán)芳基-N-羥基羧酰胺、焦酰胺(pyroxamide)、CG-1521、PDX-101、磺酰胺異羥肟酸、LAQ-824、三克定A(trichostatinA)(TSA)、歐色弗丁(oxamflation)、史克嗒(scriptaid)、間羧基肉桂酸雙異羥肟酸或查布辛素(trapoxin)、異羥肟酸類似物。
-環(huán)狀四肽，例如查布辛素、阿狄辛(apidicin)或狄希肽(depsipeptide) -苯甲酰胺，例如MS-275或CI-994，或 -狄普特辛(depudecin)。
治療癌癥的根據(jù)本發(fā)明化合物可配合放射療法，依上述供給患者。放射療法指離子線照射，尤其是指迦瑪射線，尤指由直線加速器所發(fā)射的或由現(xiàn)在常用的放射核種發(fā)射的。使用放射核種照射腫瘤的方法可外部或內(nèi)部進(jìn)行。
本發(fā)明還涉及抗癌劑與根據(jù)本發(fā)明HDAC抑制劑的根據(jù)本發(fā)明的組合。
本發(fā)明還涉及以根據(jù)本發(fā)明的組合于例如抑制腫瘤細(xì)胞生長的醫(yī)療法上的用途。
本發(fā)明還涉及以根據(jù)本發(fā)明的組合于抑制腫瘤細(xì)胞生長的用途。
本發(fā)明還涉及一種于人體中抑制腫瘤細(xì)胞生長的方法，其包括對該個體供給有效量的根據(jù)本發(fā)明的組合。
本發(fā)明還提供一種抑制異常細(xì)胞(包括轉(zhuǎn)型細(xì)胞)生長的方法，其中供給有效量的根據(jù)本發(fā)明的組合。
其它醫(yī)藥劑與HDAC抑制劑可同時(例如分開或呈單一組合物)或按任何次序給藥。后項作法中，兩種化合物將在同一時期給藥。其用量與方式應(yīng)足以確保達(dá)成有利或增效的效用?？梢岳斫?，該組合中各成分的優(yōu)選給藥法與給藥順序及相應(yīng)的劑量與療程將依所供給的特定的其它醫(yī)藥劑及HDAC抑制劑、其給藥途徑、所治療的特定腫瘤及所治療的特定宿主而定。最佳給藥方法及順序及劑量與療程很容易由熟悉相關(guān)技藝的人士使用常用方法，依據(jù)本文中所示的資料即可決定。
鉑配位化合物的合宜給藥劑量為每平方米體表面積使用1至500毫克(mg/m2)，例如50至400mg/m2，尤其是，每個療程的順氯銨鉑(cisplatin)劑量為約75mg/m2，卡鉑(carboplatin)劑量為約300mg/m2。
紫杉烷化合物的合宜給藥劑量為每平方米體表面積使用50至400毫克(mg/m2)，例如75至250mg/m2，尤其是，每個療程的帕尼特西(paclitaxel)劑量為約175至250mg/m2，及哚希特西(docetaxel)的劑量為約75至150mg/m2。
喜樹鹼化合物的合宜給藥劑量為每平方米體表面積使用0.1至400毫克(mg/m2)，例如1至300mg/m2，尤其是，每個療程的抑特康(irinotecan)劑量為約100至350mg/m2，托普特康(topotecan)劑量為約1至2mg/m2. 抗腫瘤鬼臼毒素衍生物的合宜給藥劑量為每平方米體表面積使用30至300毫克(mg/m2)，例如50至250mg/m2，尤其是，每個療程的抑托泊苷(etoposide)劑量為約35至100mg/m2，登尼泊苷(teniposide)劑量為約50至250mg/m2。
抗腫瘤長春花植物鹼的合宜給藥劑量為每平方米體表面積使用2至30毫克(mg/m2)，尤其是，每個療程的長春花堿劑量為約3至12mg/m2，長春新鹼劑量為約1至2mg/m2，長春瑞寶(vinorelbine)劑量為約10至30mg/m2。
抗腫瘤核苷衍生物的合宜給藥劑量為每平方米體表面積使用200至2500mg/m2，例如700至1500mg/m2，尤其是，每個療程的5-FU劑量為200至500mg/m2，真希嗒本(gemcitabine)劑量為約800至1200mg/m2，卡希嗒本(capecitabine)劑量為約1000至2500mg/m2。
烷化劑，如氮芥或亞硝基脲的合宜給藥劑量為每平方米體表面積使用100至500毫克(mg/m2)，例如120至200mg/m2，尤其是，每個療程的環(huán)磷酰胺劑量為約100至500mg/m2，苯丁酸氮芥劑量為約0.1至0.2mg/m2，卡莫司汀(carmustin)劑量為約150至200mg/m2，洛莫司汀(lomustin)劑量為約100至150mg/m2。
抗腫瘤蒽環(huán)素衍生物的合宜給藥劑量為每平方米體表面積使用10至75毫克(mg/m2)，例如15至60mg/m2，尤其是，每個療程的道諾紅菌素(daunorubicin)劑量為約40至75mg/m2，道索紅菌素(idoxorubicin)劑量為約25至45mg/m2，依道紅菌素(darubicin)劑量為約10至15mg/m2。
嗒茲美布(trastuzumab)的合宜給藥劑量為約每平方米體表面積使用1至5毫克(mg/m2)，尤其是，每個療程劑量為2至4mg/m2。
抗雌激素的合宜給藥劑量為每天使用約1至100毫克，依所使用的特定藥劑及所治療病癥而定。嗒莫希芬(tamoxifen)的合宜口服劑量為一天服用兩次5至50毫克，優(yōu)選為10至20毫克，持續(xù)治療一段足夠時間，以達(dá)成及維持醫(yī)療效果。妥洛米芬(toremifene)的合宜口服劑量為一天服用一次約60毫克，持續(xù)治療一段足夠時間，以達(dá)成及維持醫(yī)療效果。安斯特唑(anastrozole)的合宜口服劑量為一天服用一次約1毫克。特洛希芬(droloxifene)的合宜口服劑量為一天服用一次約20-100毫克。拉洛希芬(raloxifene)的合宜口服劑量為一天服用一次約60毫克。抑美斯坦(exemestane)的合宜口服劑量為一天服用一次約25毫克。
這些劑量可以每個療程給藥例如一次，兩次或多次，可以每7、14、21或28天重復(fù)一次。
就其有用的醫(yī)藥性質(zhì)而言，根據(jù)本發(fā)明的組合中的成分(亦即其它醫(yī)藥劑與HDAC抑制劑)可調(diào)配成各種不同給藥用醫(yī)藥形式。各成分可于分開的醫(yī)藥組合物中分開調(diào)配，或于單一醫(yī)藥組合物中同時含有兩種成分。
因此本發(fā)明還涉及包含其它醫(yī)藥劑與HDAC抑制劑及一種或多種醫(yī)藥用載體的醫(yī)藥組合物。
本發(fā)明還涉及呈醫(yī)藥組合物型式的根據(jù)本發(fā)明的組合，其包含抗癌劑與根據(jù)本發(fā)明HDAC抑制劑及一種或多種醫(yī)藥用載體。
本發(fā)明還涉及以根據(jù)本發(fā)明的組合于制造抑制腫瘤細(xì)胞生長的醫(yī)藥組合物上的用途。
本發(fā)明還涉及一種產(chǎn)品，其包含根據(jù)本發(fā)明HDAC抑制劑作為第一種活性成分，及包含抗癌劑作為第二種活性成分，形成組合制劑，供同時，分開或順序用于治療癌癥患者。

具體實施例方式 實驗部份 下列實例供說明用。
下文中，“AMMC”指3-[2-(N，N-二乙基-N-甲氨基)乙基]-7-甲氧基-4-甲基香豆素，“BFC”指苯甲氧基-三氟甲基香豆素“BINAP”指2，2′-雙(二苯基膦基)-1，1′-聯(lián)萘，“Boc”指第三丁氧羰基，“BuLi”指正丁基鋰，“BTEAC”指苯甲基三乙基銨化氯，“BSA”指牛血清白蛋白，“DCM”指二氯甲烷，“DIC”指二異丙基碳二亞胺，“DIEA”指二異丙基乙胺，“DIPE”指二異丙基醚，“DMAP”指二甲氨基吡啶，“DMF”指二甲基甲酰胺，“DMSO”指二甲亞砜，“EDC”指N′-(乙基碳化亞胺?；?-N，N-二甲基-1，3-丙二胺單鹽酸鹽，“EDTA”指乙二胺四乙酸，“EtOAC”指乙酸乙酯，“Fmoc”指芴基甲氧羰基，“Hepes”指4-(2-羥乙基)-1-哌嗪-乙磺酸，“HOAC”指乙酸，“MeOH”指甲醇，“MTT”指3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基-2H-四唑鎓溴化物，“NMP”指N-甲基吡咯烷酮，“PBS”指鏻酸鹽緩沖生理食鹽水，“PyBOP”指苯并三唑-1-基-氧-參-吡咯烷基-膦六氟磷酸鹽，“PyBrOP”指溴-參-吡咯烷基-鏻六氟磷酸鹽，“TEA”指三乙胺，“TFA”指三氟乙酸，“TIS”指三異丙基矽烷，“THF”指四氫呋喃，“THP”指四氫吡喃基，及“TMSOTf”指三甲矽烷基三氟甲磺酸酯。ExtrelutTM為德國Darmstadt市Merck KgaA藥廠的產(chǎn)品，是一種含矽藻土的短柱。FlashtubeTM為Trikonex的產(chǎn)品，是一種填充8.0克含螢光指示劑的矽石的聚乙烯管。
A中間體的制法 實例A1 a)取含4-(六氫-1H-1，4-二氮雜

-1-基)-苯甲酸乙酯鹽酸鹽(12)(0.01mol)與2-萘磺酰氯(0.011mol)的DCM p.a.(150mol)混合物于室溫下攪拌。添加NaHCO3(飽和水溶液，50ml)，反應(yīng)混合物于室溫下攪拌4小時。分層。有機(jī)層干燥，過濾及蒸發(fā)溶劑。殘余物與2-丙醇研磨，過濾及干燥，產(chǎn)生4.5g(全收量)4-[六氫-4-(2-萘磺?；?-1H-1，4-二氮雜

-1-基]-苯甲酸乙酯(中間體1)。
b)取含中間體1(0.0091mol)的35％HCl(10ml)與1，4-二噁烷(30ml)的混合物攪拌及回流24小時，然后冷卻，過濾所得沉淀，以二噁烷洗滌，干燥。取一部份(0.9g)殘余物(3.9g，96％)自含有少量DMF的乙醇中再結(jié)晶，過濾及干燥，產(chǎn)生0.43g4-[六氫-4-(2-萘磺?；?-1H-1，4-二氮雜

-1-基]苯甲酸(中間體2)。
c)取含中間體2(0.0067mol)、O-(苯基甲基)-羥基胺鹽酸鹽(2當(dāng)量，0.0134mol)、4-甲基嗎啉(4當(dāng)量，0.027mol)與DMAP(0.5g)的DCMp.a.(200ml)混合物于室溫下攪拌。添加DIC(2當(dāng)量，0.0134mol)，反應(yīng)混合物于室溫下攪拌2小時。蒸發(fā)溶劑。殘余物與乙醇研磨，過濾及干燥。殘余物經(jīng)玻璃濾器上的矽膠純化(洗脫劑DCM/MeOH99/1)。收集所需級分，蒸發(fā)溶劑。殘余物與DCM(30ml)研磨，過濾及干燥，產(chǎn)生1.9g(55％)4-[六氫-4-(2-萘磺?；?1H1，4-二氮雜

-1-基)-N-(苯基甲氧基)-苯酰胺(中間體3) 實例A2 a)取含4-(4-羧苯基)-1-哌嗪羧酸1-(1，1-二甲基乙基)酯(0.032mol)、O-(苯基甲基)-羥基胺鹽酸鹽(0.64mol)、DMAP(0.03mol)的DCMp.a.(250mol)與TEA(14ml)混合物于室溫下攪拌。添加DIC(0.64mol)。反應(yīng)混合物于室溫下攪拌8小時。然后以水、HCl(0.5N)與水洗滌。分離的有機(jī)層干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑。殘余物經(jīng)矽膠管柱層析法純化(洗脫劑DCM/MeOH 98/2)。收集所需級分，蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生13.7g4-[4-[[(苯基甲氧基)氨基]羰基]苯基]-1-哌嗪羧酸1，1-二甲基乙酯(中間體4)。
b)取含中間體4(0.0137mol)的TFA(57ml)于DCM(300ml)混合物于室溫下攪拌2小時。蒸發(fā)溶劑。殘余物溶于水/DCM中，以NH4OH堿化。分離的水層經(jīng)NaCl飽和，以DCM萃取。合并的有機(jī)層干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑。殘余物懸浮于DIPE中。沉淀物過濾及干燥，產(chǎn)生1.6g(37.6％)N-(苯基甲氧基)-4-(1-哌嗪基)-苯酰胺(中間體5)。
c)取含中間體5(0.011mol)的DCM(150mol)與TEA(1.75ml)混合物于室溫下攪拌。取2-萘磺酰氯(0.013mol)溶于DCM(10mol)中，滴加至反應(yīng)混合物中。反應(yīng)混合物于室溫下攪拌30分鐘，然后以水洗滌。分離的有機(jī)層干燥(MgSO4)過濾及蒸發(fā)溶劑。殘余物懸浮于DIPE中。過濾沉淀物及干燥。產(chǎn)生3.6g 4-[4-(2-萘磺?；?1-哌嗪基)-N-(苯基甲氧基)-苯酰胺(中間體6)。
實例A3 取含1-(2-萘磺?；?-4-(4-硝基苯基)-哌嗪(7.5mmol)的THF(150ml)混合物于50℃下，使用Pd/C10％(1g)為催化劑，于噻吩溶液(0.5ml)的存在下氫化。在吸收H2(3當(dāng)量)后，濾出催化劑，蒸發(fā)濾液。殘余物自2-丙醇中結(jié)晶。濾出所形成的沉淀，以2-丙醇洗滌及干燥(55℃，真空)，產(chǎn)生2.39g(87％)1-(4-氨基苯基)-4-(2-萘磺?；?-哌嗪(中間體7)。
實例A4 a)于室溫下分批添加NaH 60％(0.0217mol)至N2氣流下含1-(2-萘磺?；?-哌嗪(0.011mol)的THF(50ml)溶液中?；旌衔镉谑覝叵?小時。然后冷卻至0℃。加速添加含2-(甲磺?；?-5-嘧啶羧酸乙酯(0.014mol)的THF(30ml)溶液?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?小時，倒至水中，以EtOAC萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑。殘余物溶于乙醚中。濾出沉淀并干燥，產(chǎn)生3.92g(84％)2-[4-(2-萘磺酰基)-1-哌嗪基]-5-嘧啶羧酸乙酯(中間體8)，熔點>260℃。
b)取含中間體8(0.0011mol)于氫氧化鉀(4.7mmol)的乙醇(5ml)混合物攪拌及回流24小時，然后冷卻，倒至冷水中，以HCl 6N酸化。混合物部份蒸發(fā)，冷卻。濾出沉淀，以水洗滌，干燥，產(chǎn)生0.47g(100％)2-[4-(2-萘磺酰基)-1-哌嗪基]-5-嘧啶羧酸(中間體9)，熔點>260℃。
c)于室溫下添加TEA(0.0011mol)、EDC(0.0011mol)、1-羥基苯并三唑(1.1mmol)與O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.0011mol)至N2氣流下含中間體9(8mol)的DCM/THF(50/50)(20ml)溶液中?；旌衔飻嚢?4小時，然后倒至冰水中，以EtOAC萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑。殘余物(0.56g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(洗脫劑DCM100至DCM/MeOH 90/10；5μm)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑。殘余物(0.471g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(洗脫劑DCM/MeOH/NH4OH 92/8/1；15-40μm)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑。產(chǎn)生0.293g(69％)2-[4-(2-萘磺酰基)-1-哌嗪基]-N-[(四氫-2H-吡喃-2-基)氧]-5-嘧啶羧酰胺(中間體10)，熔點198℃。
實例A5 a)中間體11的制法
中間體11 取含1-(2-萘基磺?；?-哌嗪(1當(dāng)量；37mmol)、3-(溴甲基)-苯甲酸甲酯(0.00037mol)與嗎啉基甲基聚苯乙烯2％ DVB(0.2g，Novabiochem01-64-0171，200-400篩目，承載量3.2-3.8mmol/g)的DMP，p.a.(5ml)混合物于100℃下攪拌過夜(20小時)。反應(yīng)混合物過濾。樹脂經(jīng)DMF洗滌。于80℃及溫和的N2氣流下蒸發(fā)溶劑。殘余物經(jīng)管柱層析法純化(洗脫劑CH2Cl2/EtOAC 1/1)。收集產(chǎn)物級分，產(chǎn)生0.044g中間體11。
b)中間體12的制法
取含中間體11(1mmol)的THF p.a.(3ml)與NaOH 1N(1ml)混合物于60℃下攪拌過夜。添加HCl IN(1ml)。添加DCM(10ml)，反應(yīng)混合物經(jīng)ExtrelutTMNT(供應(yīng)商MERCK過濾。濾液(有機(jī)層)蒸發(fā)，產(chǎn)生0.036g中間體12。
c)中間體13的制法
取中間體12(0.088mmol)溶于THF/DCM 50/50(6ml)中。依序添加EDC(1.1當(dāng)量)、TEA(1.2當(dāng)量)、1-羥基-1H-苯并三唑(1.1當(dāng)量)、及O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(1.3當(dāng)量)。反應(yīng)混合物于室溫下攪拌過夜。添加水(2ml)，反應(yīng)混合物攪拌15分鐘。添加DCM(10ml)，混合物經(jīng)ExtrelutTMNT(供應(yīng)商MERCK藥廠)干燥。分離有機(jī)層，于50℃及N2氣流下蒸發(fā)溶劑。殘余物經(jīng)FlashtubeTM2008(供應(yīng)商Trikonex藥廠)(洗脫劑EtOAC)急驟管柱層析法純化。收集產(chǎn)物級分(分段)，然后以DCM/MeOH(90/10)洗脫。收集產(chǎn)物級分，于50℃及N2氣流下蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生0.025g中間體13。
實例A6 a)中間體14的制法
中間體14 取含4-[[[4-(苯基甲基)-1-哌嗪基]羰基]氨基]-苯甲酸乙酯(9.6mmol)的乙醇(100ml)混合物于室溫下使用Pd/C10％(1g)為催化劑氫化。在吸收H2(1當(dāng)量)后，經(jīng)矽藻土濾出催化劑，蒸發(fā)濾液，產(chǎn)生3g中間體14。
b)中間體15的制法
取含中間體14(9.6mmol)與TEA(0.012mol)的DCM(100ml)混合物于室溫下攪拌。于室溫下分批添加2-萘磺酰氯(9.6mol)。反應(yīng)混合物于室溫下攪拌30分鐘，然后以水洗滌。干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑。殘余物自DIPE/CH3CN中結(jié)晶，過濾及干燥。產(chǎn)生3.02g(67.4％)中間體15，熔點182℃。
c)中間體16的制法
取含中間體15(2mmol)的NaOH IN(30ml)、THF(80ml)與MeOH(20ml)混合物于室溫下攪拌20小時?；旌衔锝?jīng)HCl IN(30ml)中和?；旌衔锛铀?100ml)稀釋，然后以DCM萃取3次。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生0.9g(95.7％)中間體16，熔點242℃。
d)中間體17的制法
取含中間體16(0.23mmol)、O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.25mmol)、1-羥基-苯并三唑(0.00025mol)與TEA(0.00030mol)的DCM，p.a.(10ml)混合物于室溫下攪拌。添加EDC(0.00025mol)，反應(yīng)混合物于室溫下攪拌一個周末。反應(yīng)混合物經(jīng)水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生中間體17。
實例A7 a)中間體18的制法
中間體18 取含1-(2-萘磺?；?-4-(4-硝基苯基)-哌嗪(7.5mmol)的THF(150ml)混合物于50℃下，使用Pd/C 10％(1g)為催化劑，于噻吩溶液(0.5ml)的存在下氫化。在吸收H2(3當(dāng)量)后，過濾催化劑，蒸發(fā)濾液。殘余物自2-丙醇中結(jié)晶。濾出所形成的沉淀，以2-丙醇洗滌，及干燥(55℃，真空)，產(chǎn)生2.39g(87％)中間體18。
b)中間體19的制法
中間體19 于室溫下添加O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(8.5mmol)、至含α-氧代-苯丙酸(7.8mmol)的吡啶(12ml)與乙醇(23ml)混合物中?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?小時。蒸發(fā)溶劑至干。殘余物(2.6g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(洗脫劑DCM/MeOH/NH4OH 85/15/170/30/3；15-40μm)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑。產(chǎn)生1.7g(83％)中間體19。
c)中間體20的制法
中間體20 于室溫與N2氣流下，添加EDC(1.3mol)至含中間體18(1.1mmol)、中間體19(1.3mmol)與1-羥基苯并三唑水合物(1.3mmol)的DCM/THF(8ml)混合物中?；旌衔镉谑覝叵聰嚢柽^夜。添加10％K2CO3。混合物經(jīng)DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑至干，殘余物(0.9g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(洗脫劑環(huán)己烷/EtOAC 65/35；15-35μm)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑。殘余物(0.35g，52％)自CH3CN中結(jié)晶。濾出沉淀及干燥，產(chǎn)生0.3g(45％)中間體20，熔點213℃。
實例A8 a)中間體21的制法
中間體21 取含1-(2-萘磺?；?-哌嗪(7.2mmol)、1-(4-氟苯基)-乙酮(11mmol)與Na2CO3(11mmol)的二甲基乙酰胺(5ml)混合物于140℃下攪拌24小時，添加1-(4-氟苯基)-乙酮(4mmol)。混合物于140℃下攪拌48小時，然后冷卻，倒至冰水中，以EtOAC萃取。有機(jī)層以水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑。殘余物(3.5g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(洗脫劑環(huán)己烷/EtOAC 65/35；15-35μm)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑。殘余物(0.95g，34％)自乙腈中結(jié)晶。濾出沉淀，及干燥，產(chǎn)生0.8g中間體21，熔點218℃。
b)中間體22的制法
于室溫下，添加含中間體21(2.2mmol)的三氯甲烷(15ml)溶液至含CuBr2(3.7mmol)的EtOAC(25ml)混合物中?；旌衔镉?0℃下攪拌12小時，然后冷卻至室溫，倒至水中，以EtOAC萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，及蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生1g(96％)中間體22。
實例A9 a)中間體23的制法
取含1-(2-萘磺?；?-哌嗪(3.6mmol)、4-氟-2-(三氟甲基)-苯甲酸乙酯(7.2mmol)與Na2CO3(7.2mmol)的二甲基乙酰胺(10ml)混合物于140℃下攪拌20小時，然后冷卻至室溫，倒入冰水中，以EtOAC萃取。有機(jī)層經(jīng)水洗滌、干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑。殘余物(2.93g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(洗脫劑環(huán)己烷/EtOAC 75/35；15-40μm)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑。殘余物(1.8g)自乙醚中結(jié)晶。濾出沉淀及干燥，產(chǎn)生1.265g中間體23(71％)，熔點122℃。
b)中間體24的制法
取含中間體23(3.4mmol)與KOH(0.017mol)的乙醇(15ml)混合物攪拌及回流24小時，倒至水中，以HCl 3N萃取。濾出沉淀，以水/乙醚洗滌及干燥，產(chǎn)生1.255g(80％)中間體24，熔點194℃。
c)中間體25的制法
中間體25 于12℃下，依序添加TEA(1.4mmol)、EDC(1.4mmol)、1-羥基苯亞三唑水合物(1.4mmol)與O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(1.4mmol)至N2氣流下，含(中間體24)(1mmol)的DCM/THF 50/50(20ml)溶液中。混合物于室溫下攪拌24小時，倒至冰水中，以DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑。殘余物自DCM/乙醚中結(jié)晶。濾出沉淀，及干燥，產(chǎn)生0.48g(79％)中間體25，熔點192℃ 實例A10 a)中間體26的制法
于室溫下分批添加NaH 60％(15mmol)至含1-(2-萘磺酰基)-哌嗪(7.5mmol)的THP(35ml)混合物中?；旌衔镉谑覝叵屡cN2氣流下攪拌1小時30分種。滴加含4-氯-2-(甲磺?；?-5-嘧啶羧酸乙酯(9.8mmol)的THF(35ml)溶液?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?小時30分鐘，倒至冰水中，以EtOAC萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑。殘余物(4.6g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(洗脫劑環(huán)己烷/EtOAC 80/20至20/80；15-40μm)。收集三種級分，蒸發(fā)溶劑。其中一種級分即用于進(jìn)行下一種反應(yīng)，產(chǎn)生0.48g(14％)中間體26，熔點123℃。
b)中間體27的制法
取含中間體26(0.8mmol)與KOH(4.2mmol)的乙醇(10ml)混合物攪拌及回流24小時，然后冷卻至室溫，倒至冰水中，以HCl 6N酸化。濾出沉淀，以水/乙醚洗滌，及干燥，產(chǎn)生0.33g(93％)中間體27，熔點244℃。
c)中間體28的制法
于室溫下依序添加TEA(0.8mmol)、1-羥基苯亞三唑水合物(0.8mmol)、EDC(0.8mmol)及O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.8mmol)至N2氣流下含(中間體27)(0.6mmol)的DCM/THF(10ml)溶液中。混合物于室溫下攪拌24小時，倒至冰水中，以DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑。殘余物(0.47g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(洗脫劑DCM/MeOH/NH4OH 98/2/0.115-40μm)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑。產(chǎn)生0.18g(53％)中間體28，熔點80℃。
實例A11 a)中間體29的制法
取1-(苯基甲基)-哌嗪(0.125mol)溶于乙腈(200ml)中。添加K2CO3(0.34mol)。滴加含2-(甲磺?；?-5-嘧啶羧酸乙酯(0.161mol)的乙腈(200ml)溶液?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?小時，然后以DCM(1000ml)稀釋，以水洗滌。分離有機(jī)層、干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑。殘余物經(jīng)矽膠管柱層析法純化(DCM/MeOH 98/2)收集純級分，蒸發(fā)溶劑。殘余物于50℃下真空干燥，產(chǎn)生33.6g(82.5％)中間體29。
b)中間體30的制法
中間體30 取含中間體29(0.03mol)的乙醇(250ml)混合物50℃下使用Pd/C10％(2g)為催化劑進(jìn)行氫化。吸收H2(1當(dāng)量)后，經(jīng)矽藻土過濾催化劑，濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上蒸發(fā)。殘余物經(jīng)矽膠管柱層析法純化(洗脫劑DCM/(MeOH/NH3)90/10)收集產(chǎn)物級分，蒸發(fā)溶劑。產(chǎn)生6.8g(>96％)中間體30。
c)中間體31的制法
中間體31 添加TEA(0.038mol)至含中間體30(0.029mol)的DCM(150ml)溶液中。添加2-萘磺酰氯(0.032mol)，反應(yīng)混合物于室溫下攪拌過夜，然后以水洗滌混合物。分離有機(jī)層，以水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑。殘余物自CH3CN中結(jié)晶。過濾及真空干燥，產(chǎn)生7.4g(>60％)中間體31，熔點>260℃ d)中間體32之制法
中間體32 取含中間體31(0.017mol)的THF(250ml)、NaOH 1N(250ml)與MeOH(50ml)的混合物于室溫下攪拌5小時。添加HCl IN(250ml)?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?5分鐘。濾出沉淀，干燥(真空，60℃，過夜)，產(chǎn)生6.0g(89％)中間體32，熔點>260℃。
e)中間體33的制法
取中間體32(0.015mol)于DCM/THF 50/50(650ml)中攪拌。添加EDC(0.018mol)。添加TEA(0.020mol)。依序添加1-羥基-1H-苯并三唑(0.018mol)及O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.018mol)。反應(yīng)混合物于室溫下攪拌6小時，然后以水洗滌2次，添加DCM。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑。殘余物懸浮于煮沸的CH3CN中，然后于室溫下攪拌過夜，濾出所得沉淀，以CH3CN洗滌，干燥(真空；50℃)，產(chǎn)生6.1g(82％)中間體33，熔點198℃。
實例A12 a)中間體34的制法
中間體34 于室溫下添加NaH(6.5mmol)至N2氣流下含4-(1-哌嗪基磺酰基)-嗎啉(3.2mmol)的THF(15ml)溶液中。混合物攪拌1小時，然后冷卻至0℃。添加含2-(甲磺?；?-5-嘧啶羧酸乙酯(4.2mmol)的THF(9ml)溶液。混合物攪拌2小時，倒至冰水中。濾出沉淀，及干燥。殘余物(0.665g)溶于乙醚中。濾出沉淀，及干燥。濾液蒸發(fā)，與沉淀合并，產(chǎn)生0.408g中間體34。
b)中間體35的制法
中間體35 取含中間體34(1mmol)與LiOH H2O(3.1mmol)的THF(6ml)與水(6ml)混合物攪拌及回流24小時，然后冷卻。蒸發(fā)溶劑。混合物經(jīng)HCl 3N酸化。添加EtOAC。混合物經(jīng)寅式鹽過濾。有機(jī)層經(jīng)EtOAC萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生0.139g中間體35。
c)中間體36的制法
中間體36 于10℃下添加1-羥基苯并三唑水合物(0.5mmol)與EDC(0.5mmol)至N2氣流下含中間體35(0.3mmol)與TEA(0.5mmol)的THF/DCM(6ml)溶液中?；旌衔飻嚢?小時。添加O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.5mmol)?；旌衔镉谑覝叵聰嚢柽^夜。添加冰與水?；旌衔锝?jīng)DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘余物(0.259g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(洗脫劑CH2Cl3/iPrOH/NH4OH 98/2/0.210μm)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑。產(chǎn)生0.024g中間體36。
實例A13 a)中間體37的制法
中間體37 取中間體30(114mmol)與800ml DCM中攪拌，添加TEA(180mmol)、分批添加4-碘-苯磺酰氯(149mmol)。反應(yīng)混合物于室溫下攪拌過夜。添加DCM(1000ml)與水(300ml)。萃取有機(jī)層，分層及干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑。(粗)產(chǎn)物懸浮于煮沸的乙腈中，使之回到室溫，過濾。產(chǎn)物于50℃下真空干燥，產(chǎn)生51.4g(89.5％)中間體37。
b)中間體38的制法
添加含中間體37(0.1mmol)與碳酸銫(0.15mmol)的DMF(2ml)溶液至含(3-甲氧苯基)二羥硼酸(0.149mmol)的DMF(1ml)溶液中。反應(yīng)混合物于N2蒙氣下振蕩2分鐘。添加乙酸鈀(II)(0.02mmol)及1，3-雙(二苯膦基)丙烷(0.02mmol)。反應(yīng)混合物于80℃下振蕩4小時，然后使之回到室溫。于80℃下真空蒸發(fā)溶劑。殘余物溶于DCM(20ml)與MeOH(2ml)中，然后以3ml 10％ Na2CO3的水溶液洗滌。反應(yīng)混合物經(jīng)ExtrelutTMNT(供應(yīng)商MERCK藥廠)干燥，于50℃與N2氣流下濃縮。產(chǎn)物經(jīng)矽膠管柱層析法純化，收集純級分，蒸發(fā)溶劑。于50℃與N2氣流下干燥，產(chǎn)生中間體38。
c)中間體39的制法
取中間體38(0.0352mmol)溶于THF(4ml)與MeOH(1ml)中。添加NaOH(1.5mmol)?；旌衔镉谑覝叵聰嚢柽^夜。添加含HCl(1.5ml)與10至20ml THF的混合物。反應(yīng)混合物經(jīng)ExtrelutTMNT(供應(yīng)商MERCK藥廠)干燥。蒸發(fā)溶劑(60℃，N2吹入氣流)。添加甲苯。于70℃下真空蒸發(fā)溶劑。再添加甲苯。于80℃下真空蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生16mg(100％)中間體39。
d)中間體40的制法
中間體40 添加含1-羥基苯亞三唑(0.1mmol)、EDC(0.1mmol)與TEA(0.12mmol)的DCM(3ml)與THF(4ml)溶液至(中間體39)(0.1mmol)中。反應(yīng)混合物于室溫下攪拌5分鐘，添加O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.1mmol)。反應(yīng)混合物于室溫下攪拌過夜。添加水(3ml)與DCM(10ml)。反應(yīng)混合物干燥。反應(yīng)混合物于60℃與N2蒙氣下濃縮。殘余物溶于DCM(5ml)中，與150mg異氰酸甲酯聚苯乙烯2％DVB 200-400篩目，承載量1.4-1.8mmol/g(供應(yīng)商N(yùn)ovabio Chem 01-64-0169)溫和振蕩4小時，以清除過量O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺。混合物過濾，樹脂經(jīng)DCM(2ml)洗滌2次?；旌衔镉?0℃與N2氣流下濃縮，然后經(jīng)矽膠管柱層析法純化(洗脫劑50％ EtOAC/DCM)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑。產(chǎn)生中間體40。
實例A14 中間體41的制法
中間體41 取含3，6-二氯-噠嗪(0.0034mol)與1-(2-萘磺?；?-哌嗪(0.0034mol)的DMF(2ml)混合物于110℃下攪拌4小時，然后冷卻至室溫，倒至EtOAC/H2O中。過濾混合物。萃取濾液。有機(jī)層經(jīng)水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑。殘余物(0.85g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(20-45μm)(洗脫劑環(huán)己烷/EtOAC 90/10)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑。(0.56g，42％)。級分自乙醚中結(jié)晶。濾出沉淀及干燥，產(chǎn)生0.178g(14％)中間體41，熔點213℃。
實例A15 a)中間體42的制法
中間體42 于0℃下，滴加含2-萘磺酰氯(0.0066mol)的DCM(15ml)溶液至含2，5-重氮雙環(huán)[2.2.1]庚烷-2-羧酸1，1-二甲基乙酯，(1S，4S)(0.0051mol)與TEA(0.0098mol)的DCM(15ml)混合物中?；旌衔锸覝叵聰嚢?2小時，倒至冰水中，以DCM萃取。有機(jī)層以10％碳酸鉀洗滌，干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑。殘余物自乙醚中結(jié)晶。濾出沉淀及干燥，產(chǎn)生2.05g(85％)中間體42(S，S)，熔點129℃。
c)中間體43的制法
中間體43 取含中間體42(S，S)(0.0049mol)的HCl 6N(20ml)與THF(5ml)混合物于80℃下攪拌12小時，然后冷卻至室溫，倒至冰水中，以NH4OH堿化，以DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘余物(1.4g)自乙醚中結(jié)晶。濾出沉淀及干燥，產(chǎn)生0.5g(36％)中間體43(S，S)，熔點159℃。
c)中間體44的制法
于0℃下添加氫化鈉60％(0.0051mol)至N2氣流下含中間體43(S，S)(0.0034mol)的THF(20ml)混合物中。混合物攪拌1小時。滴加含2-(甲磺酰基)-5-嘧啶羧酸乙酯(0.0045mol)的THF(10ml)溶液。混合物于室溫下攪拌2小時，倒至冰水中。添加EtOAC。混合物過濾，以乙醚洗滌，干燥，產(chǎn)生0.4g中間體44(S，S)，熔點212℃。萃取過濾。有機(jī)層以水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑。殘余物(1.7g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(15-35μm)(洗脫劑環(huán)己烷/EtOAC 60/40)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生1g(66％)中間體44(S，S)。
d)中間體45的鈉鹽的制法
取含中間體44(S，S)(0.0021mol)與氫氧化鈉(0.0042mol)的EtOH(40ml)混合物攪拌及回流12小時，然后冷卻。濾出沉淀，以乙醚洗滌及干燥，產(chǎn)生0.56g(62％)中間體45.Na(S，S)。
e)中間體46的制法
中間體46 于室溫下添加EDC(0.0017mol)與DCM(20ml)至含中間體45(0.0013mol)、O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.0017mol)與1-羥基苯并三唑(0.0017mol)的THF(20ml)混合物中?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?2小時，倒至水中，以DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘余物(0.8g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(15-40μm)(洗脫劑DCM/MeOH90.5/0.5)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑。殘余物(0.43g，66％)自乙醚/DIPE中結(jié)晶。濾出沉淀及干燥，產(chǎn)生0.36g中間體46(S，S)，熔點176℃。
實例A16 a)中間體47的制法
取含中間體26(0.001mol)、N-甲基-甲胺鹽酸鹽(0.0015mol)與碳酸鉀(0.003mol)的乙腈(10ml)混合物于80℃下攪拌24小時，然后冷卻，倒至冷水中，以DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘余物(0.45g)自DIPE中結(jié)晶。濾出沉淀及干燥，產(chǎn)生0.254g(53％)中間體47，熔點117℃。
b)中間體48的制法
取含中間體47(0.0008mol)與氫氧化鈉(0.0019mol)的EtOH(10ml)混合物攪拌及回流24小時，然后冷卻至室溫，倒至冰水中，以HCl 3N酸化，以EtOAC萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生0.25g(67％)中間體48。此產(chǎn)物直接用于下一反應(yīng)。
c)中間體49的制法
于室溫下添加1-羥基苯并三唑(0.0007mol)與EDC(0.0007mol)至含中間體48(0.0005mol)與TEA(0.0007mol)的THF/DCM(6ml)溶液中?；旌衔飻嚢?0分鐘。添加O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.0007mol)?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?4小時，倒至冰水中?；旌衔锝?jīng)EtOAC萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘余物(0.48g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(10μm)(洗脫劑DCM/MeOH 98/2)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑。殘余物(0.127g)自乙醚中結(jié)晶。濾出沉淀及干燥，產(chǎn)生0.12g(40％)中間體49，熔點118℃。
實例A17 a)中間體50的制法
于室溫下添加氫化鈉(0.0181mol)至N2氣流下含1-(2-萘磺?；?-哌嗪(0.009mol)的THF(15ml)溶液中，混合物攪拌1小時，然后冷卻至0℃。添加含5-氯-吡嗪羧酸甲酯(0.0136mol)的THF(5ml)溶液。混合物于90℃下攪拌過夜，然后冷卻，倒至冰水中。濾出沉淀，以水洗滌，然后以乙醚洗滌，干燥，產(chǎn)生3.3g(89％)中間體50，熔點216℃。
b)中間體51的制法
取含中間體50(0.0079mol)與氫氧化鉀(0.039mmol)的MeOH(50ml)混合物攪拌及回流過夜，然后冷卻。倒至冰水中，以HCl 3N酸化。濾出沉淀，以水洗滌，干燥，產(chǎn)生2.88g(92％)中間體51，熔點273℃。
c)中間體52的制法
于室溫下添加EDC(0.0092mol)與1-羥基苯并三唑(0.0092mol)至N2氣流下含中間體51(0.007mol)與TEA(0.0092mol)的THF/DCM(96ml)溶液中。混合物攪拌1小時。添加O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.0092mol)?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?天，倒至冰水中。以DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘余物(4.2g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(15-40μm)(洗脫劑DCM/MeOH/NH4OH 98/2/0.1)。收集兩種級分，蒸發(fā)溶劑。產(chǎn)生2g F1與1.2g F2。F1自乙醚中結(jié)晶。濾出沉淀及干燥，產(chǎn)生1.84g中間體52，熔點210℃。F2自乙醚/DCM/MeOH中結(jié)晶。濾出沉淀及干燥，產(chǎn)生1.2g(24％)中間體52。共產(chǎn)生2.576g(77％)中間體52。
實例A18 a)中間體53的制法
于室溫下添加氫化鈉60％(0.0052mol)至N2氣流下含1-(2-萘磺?；?-哌嗪(0.0026mol)的THF(10ml)溶液中?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?小時，然后冷卻至0℃?？焖偬砑雍?-氯-2-(甲磺酰基)-5-嘧啶羧酸乙酯(0.0008mol)的THF(5ml)溶液?；旌衔镉?℃下攪拌3小時，倒至冰水中。以EtOAC萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘余物(0.86g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(10μm)(洗脫劑環(huán)己烷/EtOAC 80/20)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑。殘余物(0.29g)溶于乙醚中。濾出沉淀，及干燥，產(chǎn)生0.264g(43％)中間體53，熔點124℃。
b)中間體54的制法
取含中間體53(0.0003mol)與氫氧化鉀(0.0012mol)的EtOH(8ml)混合物攪拌及回流24小時，然后冷卻。蒸發(fā)溶劑。殘余物溶于冰水中，以HCl 3N酸化，以EtOAC萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生(0.14g)中間體54。該級分直接進(jìn)行下一反應(yīng)。
c)中間體55的制法
于室溫下添加1-羥基苯并三唑(0.0002mol)與EDC(0.0002mol)至N2氣流下含中間體54(0.0002mol)和TEA(0.0002mol)的THF/DCM(6ml)溶液中?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?小時。添加O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.0002mol)?；旌衔镉谑覝叵聰嚢柽^夜，倒至冰水中。以DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘余物(0.16g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(10μm)(洗脫劑DCM 100然后DCM/MeOH 99/1)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑。產(chǎn)生0.023g中間體55。
實例A19 a)中間體56的制法
中間體56 于0℃下滴加含2-萘磺酰氯(0.0022mol)的DCM(5ml)溶液至含3-(氨基羰基)-1-哌嗪羧酸1，1-二甲基乙酯(0.0022mol)與TEA(0.0044mol)的DCM(5ml)混合物中?；旌衔锸覝叵聰嚢?0小時，倒至冰水中，以DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑。殘余物(0.9g)自DCM/甲醇/乙醚中結(jié)晶。濾出沉淀，及干燥，產(chǎn)生0.7g(76％)中間體56，熔點200℃。
b)中間體57之制法
中間體57 添加三氟乙酸(2ml)至含中間體56(0.0015mol)的DCM(20ml)溶液中，于室溫下攪拌7小時?；旌衔锏怪帘?，以NH4OH堿化，以DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生0.44g(90％)中間體57，熔點148℃。
c)中間體58的制法
于10℃下添加2-(甲磺?；?-5-嘧啶羧酸乙酯(0.0164mol)的乙腈(30ml)溶液至含中間體57(0.0164mol)與碳酸鉀(0.019mol)的乙腈(30ml)溶液中?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?小時，倒至冰水中，以EtOAC萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘余物(8.4g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(15-40μm)(洗脫劑DCM/MeOH/NH4OH 97/3/0.1)。收集兩種級分，蒸發(fā)溶劑。產(chǎn)生1.49g F1與2.41g F2。F1自乙醚中結(jié)晶。濾出沉淀及干燥，產(chǎn)生1.42g(19％)中間體58。熔點171℃。F2自乙醚/MeOH中結(jié)晶。濾出沉淀及干燥，產(chǎn)生1.405g(18％)中間體58。共產(chǎn)生2.8g(37％)中間體58。
d)中間體59的制法
取含中間體58(0.0059mol)與氫氧化鋰單水合物(0.0095mol)的THF(50ml)與水(50ml)混合物于室溫下攪拌5小時，倒至冰水中，以HCl3N酸化。濾出沉淀，過濾，以水洗滌，于真空下使用乙醚干燥，產(chǎn)生1.96g(76％)中間體59，熔點277℃。該級分直接用于下一反應(yīng)。
e)中間體60的制法
于10℃下添加EDC(0.0058mol)與1-羥基苯并三唑(0.0058mol)至N2氣流下含中間體59(0.0044mol)與TEA(0.0058mol)的THF/DCM(40ml)溶液中?；旌衔飻嚢?小時。添加O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.0058mol)?；旌衔镉?0℃攪拌至室溫過夜，倒至冰水中。以DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘余物(2.95g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(15-40μm)(洗脫劑DCM/MeOH/Me4OH 97/3/0.1)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑。殘余物(1.6g)自乙醚中結(jié)晶。濾出沉淀及干燥，產(chǎn)生1.355g(57％)中間體60，熔點160℃。
實例A20 a)中間體61之制法
取含中間體26(0.0043mol)與氫氧化鋰單水合物(0.013mol)的THF(60ml)與水(60ml)混合物于室溫下攪拌24小時，倒至冰水中，以HCl 3N酸化，以EtOAC萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘余物(2.37g)自乙醚中結(jié)晶。濾出沉淀干燥，產(chǎn)生1.76g(94％)中間體61。
b)中間體62的制法
于室溫下添加EDC(0.0007mol)與1-羥基苯并三唑(0.0007mol)至含中間體61(0.0005mol)與TEA(0.0007mol)的THF/DCM(6ml)溶液中?；旌衔飻嚢?0分鐘，添加O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.0007mol)?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?4小時，再添加O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.0007mol)。混合物攪拌過夜，倒至冰水中。以DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘余物(0.47g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(10μm)(洗脫劑DCM100然后DCM/MeOH 99/1)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑。殘余物(0.25g82％)自乙醚中結(jié)晶。濾出沉淀，及干燥，產(chǎn)生0.215g(70％)中間體62，熔點122℃。
實例A21 a)中間體63的制法
取含中間體41(0.0013mol)、Pd(OAC)2(0.0006mol)、1，3-丙烷二基雙[二苯基]膦(0.0006mol)與乙酸鉀鹽(0.0026mol)的MeOH(35ml)混合物于5巴CO壓力及100℃下攪拌5小時，倒至冰水中。添加DCM?；旌衔锝?jīng)寅式鹽過濾。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘余物(2.06g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(15-40μm)(洗脫劑DCM/MeOH/NH4OH 97/3/0.1)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生0.40g(74％)中間體63。
b)中間體64的制法
取含中間體63(0.0014mol)與氫氧化鉀(0.0059mol)的MeOH(15ml)混合物于60℃下攪拌5小時，然后冷卻至室溫，倒至冰水中，以HCl 3N酸化。濾出沉淀以水/乙醚洗滌，干燥，產(chǎn)生0.47g(80％)中間體64。熔點238℃。該產(chǎn)物直接用于下一反應(yīng)。
c)中間體65的制法
于室溫下添加含EDC(0.0015mol)與1-羥基苯并三唑(0.0015mol)的溶液至N2氣流下含中間體64(0.0012mol)與TEA(0.0015mol)的THF/DCM(50/50)(16ml)中?；旌衔飻嚢?0分鐘，添加O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.0015mol)?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?4小時，倒至冰水中。以DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘余物(1g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(15-40μm)(洗脫劑DCM/MeOH/Me4OH98/2/0.1)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑。殘余物(0.36g)自乙醚中結(jié)晶。濾出沉淀及干燥，產(chǎn)生0.275g(46％)中間體65，熔點211℃。
實例A22 a)中間體66的制法
于0℃下，滴加含2-萘磺酰氯(0.028mol)的DCM(40ml)溶液至N2氣流下含4-(三苯基甲基)-2-哌嗪羧酸乙酯(0.025mol)與TEA(0.038mol)的DCM(70ml)混合物中?；旌衔锸覝叵聰嚢?2小時，倒至冰水中，以DCM萃取。有機(jī)層以水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘余物(15g)自乙腈中結(jié)晶。濾出沉淀，及干燥，產(chǎn)生6g中間體66，熔點145℃。母液層蒸發(fā)，自CH3CN/乙醚中結(jié)晶。濾出沉淀，及干燥，產(chǎn)生2.2g中間體66。母液層蒸發(fā)，產(chǎn)生4.5g中間體66。
b)中間體67的制法
于0℃下，分批添加中間體66(0.0102mol)至N2氣流下含LiAlH4(0.0203mol)的THF(60ml)懸浮液中，然后添加THF(200ml)?；旌衔飶?℃攪拌至室溫2小時。依序添加EtOAC與水。混合物經(jīng)Celite過濾。以MeOH洗滌Celite。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生5.3g(95％)中間體67。取部分的該級分(0.15g)自乙醚/DIPE中結(jié)晶。濾出沉淀及干燥，產(chǎn)生0.049g中間體67，熔點277℃。
c)中間體68的制法
中間體68 取含中間體67(0.0091mol)的HCl 3N(3ml)與2丙酮(100ml)混合物于室溫下攪拌3小時，蒸發(fā)溶劑。加水。混合物經(jīng)乙醚萃取2次。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。產(chǎn)生1.4g(50％)中間體68。取部分的該級分(0.2g)自DIPE中結(jié)晶。濾出沉淀及干燥，產(chǎn)生0.08g中間體68，熔點130℃。
d)中間體69的制法
取含中間體68(0.0036mol)、2-(甲磺?；?-5-嘧啶羧酸乙酯(0.0047mol)與碳酸鉀(0.0072mol)的乙腈(80ml)混合物于室溫下攪拌過夜，倒至水中，以EtOAC萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘留(1.5g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(15-40μm)(洗脫劑DCM/MeOH/NH4OH 97/3/0.1)。收集級分，蒸發(fā)溶劑。產(chǎn)生0.91g中間體69。取部分的該級分(0.59g)自CH3CN/DIPE中結(jié)晶。濾出沉淀及干燥，產(chǎn)生0.3g中間體69。熔點151℃ e)中間體70鈉鹽的制法
取含中間體69(0.0011mol)與氫氧化鈉(0.0022mol)的EtOH(30ml)混合物于80℃下攪拌12小時，然后冷卻至室溫。濾出沉淀，以EtOH洗滌，然后以乙醚洗滌，干燥，產(chǎn)生0.36g(72％)中間體70.Na鹽，熔點>260℃。
f)中間體71的制法
于室溫下依序添加1-羥基苯并三唑(0.001mol)與EDC(0.001mol)至含中間體70(0.0007mol)與O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.001mol)的DCM(20ml)與THF(20ml)混合物中，混合物于室溫下攪拌12小時，倒至水中。以DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘余物(0.4g)自CH3CN/乙醚中結(jié)晶。濾出沉淀并干燥，產(chǎn)生0.17g(41％)中間體71，熔點194℃。
實例A23 a)中間體72的制法
中間體72 取含2-哌嗪羧酸乙酯(0.0108mol)、2-(甲磺?；?-5-嘧啶羧酸乙酯(0.012mol)與碳酸鉀(0.0215mol)的乙腈(20ml)混合物于80℃下攪拌24小時，然后冷卻至室溫，倒至冰水中，以DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生2.56g中間體72。該產(chǎn)物直接用于下一反應(yīng)。
b)中間體73的制法
于10℃下，添加含2-萘磺酰氯(0.0095mol)的DCM(30ml)溶液至含中間體72(0.0086mol)與TEA(0.0172mol)的DCM(30ml)溶液中?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?小時，倒至冰水中，以DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘余物(6.04g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(洗脫劑環(huán)己烷/EtOAC80/20；15-40μm)，收集純級分，蒸發(fā)溶劑。殘余物(0.69g，16％)自乙醚/DM中結(jié)晶。濾出沉淀及干燥，產(chǎn)生0.45g(10％)中間體73，熔點148℃。
c)中間體74的制法
中間體74 取含是間物73(0.0011mol)與氫氧化鋰單水合物(0.0044mol)的THF與水(5ml)混合物于室溫下攪拌27小時，倒至冰水中，以HCl 3N酸化，以EtOAC萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘余物(0.62g)自乙醚中結(jié)晶。濾出沉淀，干燥，產(chǎn)生0.26g(54％)中間體74，熔點247℃。
d)中間體74的制法
于室溫下依序添加EDC(0.0027mmol)與1-羥基苯并三唑(0.0027mol)至N2氣流下含中間體74(0.001mol)的TEA(0.0027mol)與THF/DCM(16ml)溶液中?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?8小時，倒至冰水中。以DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘余物(2.22g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(15-40μm)(洗脫劑DCM/MeOH/NH4OH97/3/0.1)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑。產(chǎn)生0.242g中間體75。
實例A24 a)中間體76的制法
于10℃下，添加含2-(甲磺醯基)-5-嘧啶羧酸乙酯(0.0048mol)的乙腈(20ml)溶液至N2氣流下含N，N-二甲基-2-哌嗪甲胺(0.01mol)與碳酸鉀(0.02mol)的乙腈(20ml)溶液中?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?小時，倒至冰水中，以DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘余物(2.25g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(15-40μm)(洗脫劑DCM/MeOH/NH4OH 96/4/0.5)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑。產(chǎn)生1.34g(91％)中間體76。
b)中間體77的制法
于10℃下滴加含2-萘磺酰氯(0.0027mol)的DCM(5ml)溶液至N2氣流下含中間體76(0.0018mol)與TEA(0.0037mol)的DCM(10ml)溶液中?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?小時，倒至冰水中，以DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘余物(1.22g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(15-40μm)(洗脫劑DCM/MeOH/NH4OH 98/2/0.1)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑。殘余物(1.1g)自乙醚中結(jié)晶。濾出沉淀及干燥，產(chǎn)生0.74g(84％)中間體77，熔點138℃。
c)中間體78的鈉鹽的制法
取含中間體77(0.0014mol)與氫氧化鈉(0.0057mol)的EtOH(20ml)混合物攪拌及回流6小時，然后冷卻至室溫。濾出沉淀，以乙醚洗滌，并干燥，產(chǎn)生0.56g(84％)中間體78.Na鹽。該產(chǎn)物直接用于下一反應(yīng) d)中間體79的制法
于室溫下添加EDC(0.0015mol)與1-羥基苯并三唑(0.0015mol)至N2氣流下含中間體78(0.0012mol)的THF(5ml)與DCM(5ml)溶液中?；旌衔飻嚢?5分鐘。添加O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.0015mol)?；旌衔镉谑覝叵聰嚢柽^夜，倒至冰水中。以DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘余物(0.62g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(15-40μm)(洗脫劑DCM/MeOH/NH4OH94/6/0.1)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑。產(chǎn)生0.55g(77％)中間體79，熔點100℃。
實例A25 a)中間體80的制法
取含中間體30(0.066mol)的TEA(0.1mol)與DCM(500ml)的混合物于室溫下攪拌，然后于室溫下滴加含4-碘-苯磺酰氯(0.079mol)的DCM(50ml)溶液，反應(yīng)混合物于室溫下攪拌2小時?；旌衔锝?jīng)水洗滌，干燥(MgSO4)及蒸發(fā)溶劑。殘余物懸浮于CH3CN中，濾出所得沉淀，然后以CH3CN洗滌，干燥，產(chǎn)生27g(81.4％)中間體80，熔點257℃。
b)中間體81的制法
取含中間體80(0.0995mol)懸浮于DMF(250mol)中，混合物于N2氣氛下攪拌5分鐘。依序添加碳酸銫(0.0184mol)及(2-甲酰基-3-噻吩基)-二羥硼酸(0.0149mol)，反應(yīng)混合物于N2氣氛下攪拌5分鐘。最后，添加二氯雙-(三苯基膦)-鈀(0.00199mol)反應(yīng)混合物于N2氣氛與80-100℃下攪拌及回流3.5小時。使混合物回升室溫，蒸發(fā)溶劑(真空)。殘余物懸浮于乙腈中，濾出所得沉淀，然后經(jīng)矽膠管柱層析法純化(洗脫劑DCM/MeOH由100/0至98/2)。收集產(chǎn)物級分，蒸發(fā)溶劑，過濾殘余物后，干燥(真空)，產(chǎn)生4.250g(87.8％)中間體81。
c)中間體82的制法
取含N-甲基-甲胺(0.011mol)與中間體81(0.0021mol)的EtOH(100ml)混合物于50℃下使用Pd/C 10％(1g)為催化劑，于噻吩溶液(1ml)的存在下氫化過夜。在吸收H2(1當(dāng)量)后，反應(yīng)混合物經(jīng)矽藻土過濾，蒸發(fā)溶劑。殘余物經(jīng)矽膠管柱層析法純化(梯度洗脫劑DCM/MeOH由100/0至97/3)。收集產(chǎn)物級分，蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生0.54g(51％)中間體82。
d)中間體83的制法
取含中間體82(0.001mol)與氫氧化鈉(0.010mol)的THF(10ml)混合物于室溫下攪拌4天，然后添加HCl 1N(10ml)，反應(yīng)混合物攪拌10分鐘。濾出所得沉淀，于50℃下真空干燥5小時，產(chǎn)生0.47g(92％)中間體83。
e)中間體84的制法
中間體84 取中間體83(0.0009639mol)與DCM(20ml)與THF(20ml)中攪拌，然后依序添加N′-(乙基碳化亞胺酰基)-N，N-二甲基-1，3-丙二胺單鹽酸鹽(0.001253mol)、1-羥基-1H-苯并三唑(0.001253mol)與O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.001253mol)。反應(yīng)混合物于室溫下攪拌2天，加水，分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，蒸發(fā)溶劑。殘余物經(jīng)矽膠管柱層析法純化(梯度洗脫劑DCM/MeOH由100/0至97/3)。收集產(chǎn)物級分，蒸發(fā)溶劑。產(chǎn)生0.5g(8841％)中間體84。
實例A26 a)中間體85的制法
中間體85 取含中間體80(0.015mol)的DMF(700ml)混合物于N2氣氛下攪拌15分鐘。然后添加碳酸銫(0.023mol)，混合物于N2氣氛下攪拌5分鐘。依序添加2-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊環(huán)-2-基)-苯酚(0.023mol)與二氯雙(三苯基膦)-鈀(0.00030mol)，反應(yīng)混合物于80℃與N2氣氛下攪拌4小時。混合物經(jīng)矽藻土過濾，該矽藻土經(jīng)DCM與DMF洗滌。分離有機(jī)層，濃縮。添加DCM，混合物經(jīng)10％碳酸鈉溶液洗滌，然后分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑。殘余物經(jīng)矽膠管柱層析法純化(洗脫劑DCM/MeO97/3)。收集產(chǎn)物級分，蒸發(fā)溶劑。產(chǎn)生5.6g(79％)中間體85。
b)中間體86的制法
此制備過程的第一部分進(jìn)行10次取含1-(2-氯乙基)吡咯啶鹽酸鹽(0.0006mol)與中間體85(0.0002mol)的THF(4ml)混合物于氫氧化納(2ml)于150℃下在微波中反應(yīng)2小時。然后合并10次反應(yīng)混合物，加水稀釋，以HCl(1N)酸化至pH4.5-5.5。濾出所得沉淀，并干燥(真空)，產(chǎn)生2g中間體86。
c)中間體87的制法
中間體87 取中間體86(0.00372mol)與DCM(50ml)與THF(50ml)中攪拌，依序添加TEA(0.03594mol)、N′-(乙基碳亞氨酰基)-N，N-二甲基-1，3-丙二胺單鹽酸鹽(0.00372mol)、1-羥基-1H-苯并三唑(0.004836mol)及最后添加O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.004836mol)。反應(yīng)混合物于室溫下攪拌1天，然后使混合物溶于DCM中，以水洗滌。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑。殘余物經(jīng)矽膠管柱層析法純化(Biotage，40M，梯度洗脫劑DCM/(MeOH/NH3)由100/0至93/7)。合并產(chǎn)物級分，蒸發(fā)溶劑。產(chǎn)生0.770g中間體87。
實例A27 a)中間體88的制法
中間體88 取中間體80(0.020mol)于EtOH(500ml)中攪拌，然后于N2氣氛及室溫下攪拌20分鐘。依序添加(2-甲?；交?-二羥硼酸(0.030mol)、碳酸銫(0.030mol)及最后添加二氯雙-(三苯基膦)-鈀(0.00040mol)。反應(yīng)混合物于N2氣氛下攪拌及回流6小時。然后蒸發(fā)溶劑。殘余物溶于DCM中，以水洗滌。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑，殘余物經(jīng)矽膠管柱層析法純化(梯度洗脫劑DCM/MeOH由100/0至98/2)。收集產(chǎn)物級分，蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生5.1g(53％)中間體88。
b)中間體89的制法
中間體89 取含中間體88(0.00208mol)與N-甲基-甲胺(0.0222mol)的MeOH(100ml)混合物于室溫下，使用Pd/C10％(0.5g)為催化劑，于噻吩溶液(1ml)的存在下氫化1天。在吸收H2(1當(dāng)量)后，反應(yīng)混合物經(jīng)矽藻土過濾，濾液蒸發(fā)。殘余物經(jīng)矽膠管柱層析法純化(梯度洗脫劑DCM/MeOH由100/0至90/10)。收集產(chǎn)物級分，蒸發(fā)溶劑。殘余物自乙腈中結(jié)晶，濾出所得沉淀，經(jīng)洗滌及干燥(真空)，產(chǎn)生0.710g(66.9％)中間體89。
c)中間體90的制法
中間體90 取含中間體89(0.00139mol)與氫氧化鈉1N(0.010mol)的THF(10ml)與MeOH(2ml)混合物與室溫下攪拌過夜，然后添加HCl 1N(10ml)，反應(yīng)混合物與室溫下攪拌15分鐘。濾出所得沉淀，并干燥(真空，60℃)，產(chǎn)生0.610g(90.9％)中間體90。
d)中間體91的制法
中間體91 取中間體90(0.001267mol)于DCM(50ml)與THF(50ml)中攪拌，依序添加TEA(0.007189mol)、N′-(乙基碳亞氨?；?-N，N-二甲基-1，3-丙二胺單鹽酸鹽(0.001647mol)、1-羥基-1H-苯并三唑(0.001647mol)及最后添加O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.001647mol)。反應(yīng)混合物于室溫下攪拌1天，然后使混合物溶于DCM中，以水洗滌。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑。殘余物自乙腈中結(jié)晶，濾出所得沉淀，并干燥(真空，50℃)，產(chǎn)生0.560g(76.13％)中間體91。
實例A28 a)中間體92的制法
中間體92 于-70℃下，滴加nBnLi 1.6M的己烷溶液(0.0069mol)至N2氣流下含[2-(3-溴苯基)乙氧基](1，1-二甲基乙基)二甲基-矽烷(0.0063mol)的THF(20ml)溶液中，混合物攪拌1小時，滴加三-異丙氧硼烷(0.0069mol)?；旌衔镉?70℃下攪拌30分鐘，然后回升至-20℃。加水，混合物經(jīng)DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑至干，產(chǎn)生1.8g(100％)中間體92。
b)中間體93的制法
添加含中間體92(0.0063mol)的DMF(60ml)溶液至含中間體80(0.0045mol)與碳酸銫(0.0063mol)的DMF(20ml)混合物中。混合物攪拌15分鐘。添加四-(三苯基膦)-鈀(0.0004mol)?；旌衔镉?0℃下攪拌18小時，然后冷卻至室溫。添加HCl 3N?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?小時，然后經(jīng)Celite過濾。以水洗滌Celite數(shù)次。濾液溶于DCM中數(shù)次。有機(jī)層經(jīng)水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑至干，殘余物(2.4g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(15-40μm)(洗脫劑DCM/MeOH 99/1)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生1.76g(78％)中間體93。
c)中間體94的制法
于5℃下滴加甲磺酰氯(0.0133mol)至N2氣流下含中間體93(0.0044mol)與TEA(0.0177mol)的DCM(30ml)混合物中?；旌衔飻嚢?小時，然后回升室溫。加冰水?；旌衔锝?jīng)DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑至干。產(chǎn)生3.43g(>100％)中間體94，該產(chǎn)物未再純化即使用。
d)中間體95的制法
取含中間體94(0.0014mol)、吡咯烷酮(0.0147mol)與碳酸鉀(0.0222mol)的乙腈(20ml)混合物攪拌及回流18小時。加水。混合物經(jīng)DCM/MeOH萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑至干。殘余物(1g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(70-200μm)(洗脫劑DCM/MeOH/NH4OH 95/5/0.1)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑。產(chǎn)生0.4g(49％)中間體95，熔點190℃。
e)中間體96的鈉鹽的制法
中間體96的鈉鹽 取含中間體95(0.0007mol)與氫氧化鈉(0.0014mol)的EtOH(10ml)混合物攪拌及回流3小時，然后冷卻至室溫。濾出沉淀，以EtOH洗滌，然后以乙醚洗滌，于50℃下真空干燥，產(chǎn)生0.35g(88％)中間體96.Na鹽。
f)中間體97的制法
中間體97 添加EDC(0.0008mol)至N2氣流下含中間體96(0.0006mol)、O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.0008mol)。與1-羥基苯并三唑(0.0008mol)的DCM/THF(10ml)混合物中?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?8小時。加水?；旌衔镆訢CM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑至干，殘余物(0.7g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(5μm)(洗脫劑DCM/MeOH/NH4OH92/8/0.1)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生0.31g(77％)中間體97。
實例A29 a)中間體98的制法
取含中間體30(0.00021mol)、[1，1-聯(lián)苯]-4-磺酰氯(±0.00032mol，1.5當(dāng)量)與嗎啉基甲基-PS-清除劑(供應(yīng)商N(yùn)ovabioChem目錄No01-64-0171)(0.150g)的DCM(5ml)混合物于室溫下攪拌20小時，然后添加三-(2-氨基乙基)胺-PS清除劑(供應(yīng)商N(yùn)ovabioChem目錄No01-64-0170)(0.150g)，混合物再攪拌4小時，產(chǎn)生中間體98。
b)中間體99的制法
取含中間體98(0.00021mol)的氫氧化鈉1N(1.5ml)、MeOH(1ml)與THF(4ml)混合物于60℃下攪拌2小時，然后于室溫下攪拌20小時。反應(yīng)混合物經(jīng)1.5ml HCl 1N中和。收集所需產(chǎn)物，干燥，產(chǎn)生中間體99。
c)中間體100的制法
取含中間體99(0.00021mol)、1-羥基-1H-苯并三唑(0.00014mol)、N′-(乙基碳亞氨酰基)-N，N-二甲基-1，3-丙二胺單鹽酸鹽(0.00015mol)與O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.00015mol)的TEA(0.025ml)與DCM/THF(10ml)混合物于室溫下攪拌過夜，然后加水(2ml)，反應(yīng)混合物經(jīng)ExtrelutTMNT(供應(yīng)商MERCK藥廠)過濾。添加異氰酸酯-PS-樹脂(供應(yīng)商Argonaut目錄No 800260)(0.100g)，混合物于室溫下攪拌4小時，然后濾出樹脂，濾液蒸發(fā)。殘余物經(jīng)FlashtubeTM2008(供應(yīng)商Trikonex)管柱層析法純化(洗脫劑DCM/EtOAC 1/1)。收集產(chǎn)物級分，蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生中間體100。
實例A30 a)中間體101的納鹽制法
中間體101的鈉鹽 取含中間體93(0.001mol)與氫氧化鈉(0.004mol)的EtOH(20ml)混合物攪拌及回流4小時，然后冷卻至室溫。添加乙醚。濾出沉淀，并干燥，產(chǎn)生0.476(97％)中間體101.Na鹽。
b)中間體102之制法
于室溫下添加EDC(0.0014mol)與1-羥基苯并三唑(0.0014mol)至含中間體101(0.0009mol)之THF(5ml)與DCM(5ml)溶液中?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?0分鐘，添加O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥基胺(0.0014mol)?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?天，倒至冰水中，以DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑，殘余物(0.62g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(5μm)(洗脫劑DCM/MeOH/NH4OH 97/3/0.3)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑，殘余物(0.38g，69％)自乙醚中結(jié)晶，濾出沉淀并干燥，產(chǎn)生0.3g(54％)中間體102，熔點214℃。
B.最終化合物的制法 實例B1 N-Fmoc-羥基胺2-氯三苯甲基樹脂(Novabiochem，01-64-0165)經(jīng)50％哌啶的DMF溶液處理而去保護(hù)(室溫，24小時)1。樹脂經(jīng)DCM與DMF洗滌2，于DMF中膨脹。一次性添加2當(dāng)量酸3，PyBrOP4及4當(dāng)量DIEA。混合物振蕩24小時，瀝干液體，樹脂經(jīng)DCM與DMF洗滌數(shù)次。樹脂于含2當(dāng)量胺的DMF中膨脹。于室溫下振蕩24小時。瀝干液體，樹脂經(jīng)DCM與DMF洗滌。一次性添加芳基磺酰氯(2當(dāng)量)至己于含4當(dāng)量TEA的DMF中膨脹的樹脂中。反應(yīng)攪拌過夜，瀝干，樹脂經(jīng)DCM與DMF洗滌。以含5％TFA的DCM溶液裂解終產(chǎn)物，以HPLC及MS分析，于已預(yù)先稱重的試管中蒸發(fā)。
1其中一項實例使用化合物16甘氨醇2-氯三苯甲基-樹脂(Novabiochem，01-64-0087)。另兩項實例使用2-氯三苯甲基氯-樹脂(Novabiochem，01-64-0114)與1，2-苯二胺化合物17或乙二胺化合物18。另一項實例使用化合物19羧基甲硫醇4-甲氧基三苯甲基樹脂(Novabiochem，01-64-0238)。
2有些例子亦以MeOH用于化合物16、17、18與19的不同洗滌過程中。
3以樹脂的承載量為基準(zhǔn)計。
4有些例子用PyBOP(化合物16、17、18與19)替代PyBrOP。
為了說明本發(fā)明，本文中包括下列方案
實例B2 化合物1的制法
化合物1 取含中間體3(0.0027mol)的DMF(100ml)混合物于室溫下使用Pd/C 10％(0.5g)為催化劑氫化48小時。在吸收H2(1當(dāng)量)后，濾出催化劑，濾液蒸發(fā)。殘余物與DCM研磨，過濾，然后自HOAc中再結(jié)晶，過濾，以HOAc與乙醇洗滌，然后干燥，產(chǎn)生0.75g(65％)化合物1。
實例B3 化合物2的制法
化合物2 取含中間體6(0.0022mol)的THF(100ml)使用Pd/C10％(1g)為催化劑氫化5小時。在吸收H2(1當(dāng)量)后，經(jīng)矽藻土過濾催化劑，蒸發(fā)溶劑。殘余物懸浮于DCM中。濾出沉淀，以少量DCM洗滌，干燥(真空)，產(chǎn)生0.9g(100％)化合物2。
實例B4 化合物3的制法
化合物3 于N2氣流下，依序添加TEA(0.0008mol)與乙酰氯(0.0008mol)至含中間體7(0.0008mol)的DCM(5ml)混合物中。混合物保持在室溫下30分鐘，倒至10％K2CO3/H2O中，以DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑至干。殘余物(0.41g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(洗脫劑DCM/MeOH 98/2；10μm)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑，殘余物(0.22g，66％)自DCM/CH3CN中結(jié)晶。濾出沉淀，以乙醚洗滌，干燥，產(chǎn)生0.18g(54％)化合物3，熔點200℃。
實例B5 化合物4的制法
化合物4 于室溫下添加1，1-羰基二咪唑(0.0003mol)至N2氣流下含中間體7(0.0002mol)的DCM(1ml)混合物中?；旌衔锉３质覝叵?小時。添加羥基胺(0.0003mol)?；旌衔飻嚢柽^夜。添加10％ K2CO3?；旌衔锝?jīng)DCM萃取。濾出沉淀，以乙醚洗滌及干燥，產(chǎn)生0.034g(29％)化合物4，熔點210℃ 實例B6。
化合物5的制法
化合物5 取含中間體7(0.0013mol)、1-甲基-1H-咪唑-4-羧酸(0.002mol)、EDC(0.002mol)與1-羥基苯并三唑(0.002mol)的DCM/THF(10ml)混合物于室溫下攪拌18小時，倒至10％ K2CO3中，以DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑至干。殘余物(1.3g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(洗脫劑DCM/MeOH 98/2；15-40μm)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑，殘余物(0.25g，39％)溶于CH3CN中。濾出沉淀，并干燥，產(chǎn)生0.15g(23％)化合物5，熔點252℃。
實例B7 化合物6的制法
于0℃下添加TFA(4ml)至含中間體10(0.0005mol)的MeOH(20ml)溶液中?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?8小時。蒸發(fā)溶劑至干。殘余物溶于乙醚中。濾出沉淀，并干燥，產(chǎn)生0.195g(83％)化合物6，熔點265℃。
另一種制備化合物6的方法 添加CF3COOH(25ml)至含中間體33(0.012mol)的DCM p.a.(250mol)與MeOH p.a.(250mol)混合物中。反應(yīng)混合物于室溫下攪拌24小時。濾出沉淀，懸浮于熱CH3CN中，然后攪拌冷卻至室溫，然后過濾，以CH3CN洗滌，干燥(真空，50℃)，產(chǎn)生3.43g化合物6。取相應(yīng)的濾液濃縮。固體殘余物懸浮于熱CH3CN中，攪拌，使之冷卻至室溫，過濾并干燥(真空，50℃)，產(chǎn)生1.22g化合物6。共產(chǎn)生4.65g(94％)化合物6。
實例B8 化合物7的制法
化合物7 取含中間體13(0.000049mol)的5％CF3COOH/MeOH(5ml)混合物于室溫下振蕩40小時。于室溫及N2氣流下蒸發(fā)溶劑。添加DCM，然后再蒸發(fā)溶劑。添加二噁烷，然后再于室溫及N2氣流下蒸發(fā)溶劑。添加DCM，于30℃及N2氣流下蒸發(fā)溶劑。殘余物于40℃下真空干燥度過周末，產(chǎn)生0.024g化合物7。
實例B9 化合物8的制法
取含中間體17(0.00018mol)的5％CF3COOH/MeOH(6ml)混合物于室溫下攪拌度過周末?；旌衔镉谑覝睾椭獨饬飨嘛L(fēng)干。殘余物懸浮于EtOAC中，然后過濾并真空干燥，產(chǎn)生0.0222g化合物8。
實例B10 化合物9的制法
于室溫下添加甲磺酸(1.5ml)至含中間體20(0.0018mol)的MeOH(15ml)混合物中。混合物保持18小時。加冰?；旌衔锝?jīng)10％K2CO3堿化，以DCM萃取。有機(jī)層經(jīng)水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑至干。殘余物(1.1g)自DCM/MeOH中結(jié)晶。濾出沉淀，干燥，產(chǎn)生0.68g(76％)化合物9，(E構(gòu)型)，熔點226℃。
實例B11 化合物10的制法
于0℃下添加乙硫代酸(0.0023mol)至含中間體22(0.0021mol)與TEA(0.0032mol)的2-丙酮(10ml)混合物中。使混合物回升至室溫，然后攪拌2小時。加水?；旌衔锝?jīng)DCM萃取。有機(jī)層經(jīng)水洗滌2次，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑。殘余物(0.85g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(洗脫劑環(huán)己烷/EtOAC 70/30；10μm)。收集級分，蒸發(fā)溶劑。殘余物自乙醚中結(jié)晶。濾出沉淀，并干燥，產(chǎn)生0.088g(10％)化合物10，熔點179℃。
實例B12 化合物11的制法
化合物11 添加CF3COOH(0.7ml)至含中間體25(0.0007mol)的MeOH(7ml)與DCM(7ml)溶液中?；旌衔镉谑覝叵聰嚢柽^夜。濾出沉淀，以乙醚洗滌及干燥。殘余物(0.23g，68％)再干燥一次，產(chǎn)生0.194g(57％)化合物11，熔點196℃。
實例B13 化合物12的制法
化合物12 添加CF3COOH(2.6ml)至含中間體28(0.0005mol)的MeOH(12ml)與DCM(10ml)溶液中?；旌衔镉?4℃下攪拌過夜。蒸發(fā)溶劑至干。殘余物自DCM/乙醚中結(jié)晶。濾出沉淀并干燥，產(chǎn)生0.124g(49％)化合物12，熔點197℃。
實例B14 化合物13的制法
于室溫下添加EDC(0.0026mol)與1-羥基苯并三唑水合物(0.0023mol)至含中間體32(0.0017mol)與TEA(0.0021mol)的DMF(14ml)溶液中?；旌衔飻嚢?小時。添加1，2-苯二胺(0.0021mol)?；旌衔镉谑覝叵聰嚢柽^夜，然后于60℃下攪拌3小時，倒至冰水中，以EtOAC萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)溶劑，殘余物(0.9g)經(jīng)矽膠管柱層析法純化(洗脫劑DCM/MeOH/NH4OH 97/3/0.1；15-40μm)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑。殘余物(0.45g)自乙醚中結(jié)晶。濾出沉淀，干燥，產(chǎn)生0.414g(48％)化合物13，熔點238℃。
實例B15 化合物14的制法
于0℃下，添加CF3COOH(0.2ml)至含中間體36(0.0005mol)的MeOH(1ml)與DCM(1ml)混合物中?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?4小時。蒸發(fā)溶劑至干，產(chǎn)生0.0174g(89％)化合物14。
實例B16 化合物15的制法
取中間體40(0.0903mmol)溶于DCM(2ml)與MeOH(3ml)中。添加三氟乙酸(250μl)?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?天。于室溫及N2氣流下蒸發(fā)溶劑。添加兩次二噁烷。產(chǎn)物于40℃及N2氣流下吹干，產(chǎn)生化合物15。
實例B17 化合物113的制法
添加Pd(PPh3)4(0.0002mol)與碳酸鉀(0.0056mol)至含中間體41(0.0028mol)的EtOH(22ml)與DMF(22ml)混合物中。混合物于80℃與5巴CO壓力下攪拌48小時，然后溶于EtOAc/H2O中，經(jīng)Celite過濾。有機(jī)層以水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾及蒸發(fā)溶劑，殘余物經(jīng)矽膠管柱層析法純化(15-40μm)(洗脫劑DCM/MeOH/NH4OH 98/2/0.1)。收集純級分，蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生0.27g(23％)化合物113，熔點200℃。
實例B18 化合物114的制法
化合物114 于0℃下添加TFA(0.5ml)至含中間體46(S，S)(0.0006mol)的MeOH(10mol)混合物中。使混合物回升至室溫，然后攪拌12小時。再添加TFA?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?2小時。濾出沉淀，以MeOH洗滌，然后以乙醚洗滌，并干燥。殘余物(0.276g)于60℃下干燥4小時，產(chǎn)生0.258g，然后于75℃下干燥8小時，然后溶于DCM中，于室溫下攪拌。濾出沉淀，以乙醚洗滌，干燥，產(chǎn)生0.158g(56％)化合物114(S，S)。
實例B19 化合物115的制法
化合物115 取含中間體49(0.0001mol)的TFM(2ml)、MeOH(4ml)與DCM(3ml)的混合物于室溫下攪拌19天。蒸發(fā)溶劑。殘余物自乙醚中結(jié)晶。濾出沉淀，產(chǎn)生0.0852g(85％)化合物115，熔點135℃。
實例B20 化合物116的制法
于0℃下添加TFA(10ml)至含中間體52(0.0051mol)的MeOH(50mol)與DCM(50ml)溶液中?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?8小時。濾出沉淀，以乙醚洗滌及干燥，產(chǎn)生2.07g(97％)化合物116，熔點249℃。
實例B21 化合物117的制法
取含中間體55(0.00003mol)的TFA(0.5ml)、MeOH(3ml)與DCM(2ml)的混合物于室溫下攪拌5天。蒸發(fā)溶劑至干，產(chǎn)生0.017g(62％)化合物117.2C2HF3O2，熔點80℃。
實例B22 化合物118的制法
取含中間體60(0.0022mol)的TFA(3ml)、MeOH(10ml)與DCM(10ml)混合物于室溫下攪拌24小時。添加乙醚。濾出沉淀并干燥，產(chǎn)生1g(97％)化合物118，熔點210℃。
實例B23 化合物119的制法
取含中間體62(0.0024mol)的TFA(5ml)、MeOH(22ml)與DCM(10ml)的混合物于室溫下攪拌8天。然后過濾。沉淀棄置不要，濾液蒸發(fā)。殘余物(1.4g)自DCM/MeOH/CH3CN/乙醚中結(jié)晶。濾出沉淀并干燥，產(chǎn)生0.388g(36％)化合物119，熔點225℃(純度90％)。
實例B24 化合物120的制法
取含中間體65(0.0004mol)的TFA(2ml)、MeOH(20ml)與DCM(10ml)的混合物于室溫下攪拌72小時。蒸發(fā)溶劑。添加乙醚，濾出沉淀并干燥，產(chǎn)生0.19g(94％)化合物120，熔點>260℃。
實例B25 化合物121的制法
取含中間體71(0.0003mol)的TFA(1ml)、MeOH(10ml)混合物于室溫下攪拌4天。濾出沉淀，以MeOH洗滌，然后以乙醚洗滌并干燥，產(chǎn)生0.096g(72％)化合物121，熔點220℃。
實例B26 化合物122的制法
取含中間體75(0.0003mol)的TFA(2ml)與MeOH(5ml)混合物于室溫下攪拌72小時。濾出沉淀，以乙醚洗滌并干燥，產(chǎn)生0.112g(63％)化合物122，熔點166℃。
實例B27 化合物123的制法
取含中間體79(0.0009mol)的TFA(0.5ml)與MeOH(5ml)混合物于室溫下攪拌48小時。然后蒸發(fā)溶劑至干。殘余物溶于MeOH/乙醚中。濾出沉淀并干燥，產(chǎn)生0.42g(82％)化合物123.C2HF3O2，熔點114℃。
實例B28 化合物124的制法
化合物124 取中間體84(0.000852mol)于TFA(5％MeOH/DCM溶液)(40ml)中攪拌3天，然后濾出所得沉淀并干燥(真空，50℃)，產(chǎn)生0.316g(60％)化合物124.C2HF3O2，熔點192℃。
實例B29 化合物125的制法
.0.2 H2O .C2HF3O2 化合物125 于室溫下，取中間體87(0.00121mol)于TFA(5％ MeOH溶液)(60ml)中攪拌6天(4天后添加0.25ml TFA)，于室溫下蒸發(fā)溶劑(真空)。殘余物自EtOAC中于回流下結(jié)晶，濾出所得沉淀并干燥(真空)，產(chǎn)生0.356g(44.2％)化合物125.0.2 H2O.C2HF3O2，熔點146.9℃。
實例B30 化合物126的制法
.C2HF3O2 化合物126 于室溫下，取中間體91(0.00096mol)于TFA(40ml 5％ DCM/MeOH溶液)中攪拌4天，于室溫下部分蒸發(fā)溶劑(真空)。于濃縮液中產(chǎn)生沉淀，濾出沉淀，然后干燥(真空，50℃)產(chǎn)生0.455g(78％)化合物126.C2HF3O2，熔點190.7℃。
實例B31 化合物127的制法
化合物127 添加TFA(0.5ml)至含中間體97(0.0004mol)的MeOH(10ml)混合物中?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?8小時。濾出沉淀，及干燥，產(chǎn)生0.22g(66％)化合物127.1.16C2HF3O2，熔點243℃。
實例B32 化合物128的制法
取含中間體100(0.00021mol)的TFA(5ml，5％ MeOH溶液)與DCM(1ml)混合物于室溫下攪拌48小時。然后蒸發(fā)溶劑，產(chǎn)生化合物128。
實例B33 化合物129的制法
取含中間體102(0.0005mol)的TFA(1.2ml)、MeOH(10ml)與DCM(2ml)混合物于室溫下攪拌3天。添加乙醚。濾出沉淀及干燥，產(chǎn)生0.232g(94％)化合物129，熔點>260℃。
表F-1列出根據(jù)上述實例之一制備化合物。表中采用下列縮寫Co.No.代表化合物編號，Ex.[Bn0]指與Bn0實例中所述的相同方法，C2HF3O2代表三氟乙酸鹽。有些化合物已說明其熔點(mp)特性，其它化合物以質(zhì)譜數(shù)據(jù)[MH+](ms.)說明其特性。
表F-1















C.藥理實例 組蛋白去乙酰酶抑制作用的活體外分析法(參見實例C.1)度量式(I)化合物所得的抑制HDAC酶活性。
式(I)化合物的細(xì)胞活性在A2780腫瘤細(xì)胞上采用測試細(xì)胞毒性或存活性的比色測定法測定(Mosmamm Tim，Journal of ImmunologicaMethods 6555-63，1983)(參見實例C.2)。
在水性介質(zhì)中的動力溶解性度量該化合物于稀釋時保持水溶液狀態(tài)的能力(參見實例C.3)。
DMSO母液使用單一水性緩沖溶劑，于連續(xù)3個步驟中稀釋。每一次稀釋后的濁度均使用濁度計測定。
藥物的通透性表現(xiàn)其由一種介質(zhì)移動至或通過另一種介質(zhì)的能力。具體地說，其移動通過腸膜進(jìn)入血流與/或自血流進(jìn)入目標(biāo)的能力。通透性(參見實例C.4)的測定法可測定濾器固定化的人工膜磷脂雙層形成量。在濾器固定化的人工膜分析法中，由96孔微滴定板與96孔過濾板形成“夾心”，因此每個復(fù)合孔被分隔成兩個隔間，底層為供體溶液，上層為受體溶液，中間以涂覆2％(重量/體積)二油?；字；?膽堿的十二碳烷溶液的125微米微過濾片(0.45微米孔徑)分隔，當(dāng)該系統(tǒng)接觸到水性緩沖液時，渡片通道內(nèi)會形成多層膜的雙層物。測定通過該人工膜的化合物通透性，以厘米/秒表示。其目的為檢視藥物在兩種不同pH4.0與7.4下通過平行人工膜的通透性。采用UV-分光光度計，于250至500nm之間的最適當(dāng)波長下檢測化合物。
藥物的代謝作用指該脂溶性異種生物化合物或生物內(nèi)生化合物經(jīng)酶轉(zhuǎn)化成極性，水溶性且可排泄的代謝物(群)。藥物代謝作用的主要器官為肝臟。代謝產(chǎn)物的活性通常低于母化合物或無活性。然而，有些代謝物可能加強(qiáng)活性或毒性效果。因此，藥物代謝作用可包括“去毒化”與“毒化”過程。其中決定生物體是否有能力處理藥物與化學(xué)物的主要酶系統(tǒng)代表為細(xì)胞色素P450單氧化酶，它是一種NADPH依賴性酶?；衔锏拇x安全性可于活體外，使用亞細(xì)胞人類組織測定(參見實例C.5)。本文中化合物的代謝穩(wěn)定性由這些化合物與微粒體培養(yǎng)15分鐘后的藥物代謝％表示。以LC-MS分析法為化合物定量。
腫瘤抑制子p53可因應(yīng)DNA損傷而轉(zhuǎn)錄性活化多種基因，包括WAF1/CIP1基因。WAFI/基因21kDa產(chǎn)物出現(xiàn)在正常細(xì)胞中包括環(huán)素、依賴環(huán)素的激酶(CDKs)及增生細(xì)胞核抗原(PCNA)的復(fù)合體中，但不出現(xiàn)在轉(zhuǎn)形細(xì)胞中，似乎為CDK活性的通用抑制劑。p21WAF1結(jié)合并抑制CDKs的一種后果為防止依賴CDK的磷酸化反應(yīng)及隨后為Rb蛋白質(zhì)的去活化作用，這對細(xì)胞循環(huán)發(fā)展所必要的。因此，使用HDAC抑制劑因與細(xì)胞接觸而誘發(fā)產(chǎn)生的p21WAF1即可成為細(xì)胞循環(huán)發(fā)展過程中，在G1與G2檢查點的抑制作用的強(qiáng)加和專一指示劑。
化合物誘發(fā)p21WAF1的能力采用p21WAF1酶連結(jié)免疫吸附性分析法測定(致癌基因的WAF1ELISA)。p21WAF1分析法為一種同時使用小白鼠單株抗體與兔子多株抗體的“夾心”酶免疫分析法。對人類WAF1蛋白質(zhì)具專一性的句子多株抗體已固定在試驗套組所提供的塑膠孔表面上。樣品中所要分析的任何p21WAF均會與捕捉抗體結(jié)合。生物素基化檢測劑單株抗體亦可辨識人類p21WAF1蛋白質(zhì)，而且會與捕捉抗體所保留的任何p21WAF1結(jié)合。檢測劑抗體則再與辣根過氧化酶-共軛的抗生物素結(jié)合。辣根過氧化酶催化發(fā)色性受質(zhì)四甲基聯(lián)苯胺的無色溶液轉(zhuǎn)呈藍(lán)色溶液(或當(dāng)添加中止劑后，則轉(zhuǎn)呈黃色)，其深度與分析板上p21WAF1蛋白質(zhì)的結(jié)合量成比例。采用分光光度計定量有色反應(yīng)產(chǎn)物。使用已知濃度的p21WAF1(冷凍乾燥物)所構(gòu)成的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量(參見實例C.6)。
專一性HDAC抑制劑不應(yīng)限制其它例如大量存在的CYP P450蛋白質(zhì)的酶。CYP P450(大腸桿菌所表現(xiàn))蛋白質(zhì)3A4、2D6及269可將其專一性受質(zhì)轉(zhuǎn)化成螢光分子。CYP 3A4蛋白質(zhì)可使7-苯甲氧基-三氟甲基香豆素(BFC)轉(zhuǎn)化成7-羥基-三氟甲基香豆素。CYP 2D6蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化3-[2-(N，N-二乙基-N-甲氨基)乙基]-7-甲氧基-4-甲基香豆素(AMMC)形成3-[2-(N，N-二乙基-氨基)乙基]-7-羥基-4-甲基香豆素鹽酸鹽，CYP2C9蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化-7-甲氧基-4-三氟甲基香豆素(MFC)形成7-羥基-4-三氟甲基香豆素。抑制這種酶反應(yīng)的化合物即會降低螢光訊號(參見實例C.7)。
實例C.1組蛋白去乙酰酶的抑制作用的活體外分析法 取60ug/ml HeLa核萃出物(供應(yīng)商Biomol)與2 x 10-8M放射性標(biāo)記的肽受質(zhì)培養(yǎng)。測定HDAC活性所使用的受質(zhì)為合成肽，即組蛋白H4的氨基酸14-21。該受質(zhì)的NH2末端部份經(jīng)6-氨基己酸間隔基進(jìn)行生物素基化，其COOH-末端部份則被酰氨基保護(hù)，并于賴氨酸16上專一性[3H]乙酰化。添加受質(zhì)生物素-(6-氨基己酸)Gly-Ala-([H]3-乙?；?Lys-Arg-His-Ary-Lys-Val-NH2)至含25mM Hepes、IM蔗糖、0.1mg/mlBSA與0.01％ Triton X-100的pH7.4緩沖液中。30分鐘后，添加CHl與乙酸中止去乙?；磻?yīng)(終濃度分別為0.035mM與3.8mM)，反應(yīng)停止后，以乙酸乙酯萃取游離的3H-乙酸酯?；旌吓c離心后，于β-計算器上計算上層有機(jī)相的放射活性。
每次實驗均平行進(jìn)行對照組(含HeLa核萃物與DMSO，但不含化合物)、空白培養(yǎng)組(含DMSO，但不含HeLa核萃物或化合物)及樣品試驗組(含溶于DMSO中的化合物與HeLa核萃物)。第一例中，化合物的試驗濃度為1015M。當(dāng)化合物于10-5M下表現(xiàn)活性時，則在10-5M與10-12M之間濃度測試化合物，制成濃度-響應(yīng)曲線。每次試驗的對照組與樣品組的數(shù)值均扣除空白組數(shù)值。對照組樣品代表100％受質(zhì)去乙酰化。各樣品的放射活性以相對于對照組平均值的百分比表示。若適當(dāng)時，采用概率分析法計算已分級的數(shù)據(jù)，計算IC50值(使代謝物量下降至對照組的50％時所需藥物濃度)。此時，以pIC50(IC50)值的負(fù)對數(shù)值)表示試驗化合物的效應(yīng)。所有實驗化合物在10-5M的實驗濃度下均表現(xiàn)酶活性，有144種化合物的pIC50≥5(參見表F-2)。
實例C.2于A2780細(xì)胞上測定抗增生活性 所有試驗化合物均溶于DMSO中，再于培養(yǎng)基中稀釋。細(xì)胞增生分析法中的最終DMSO濃度不可超0.1％(v/v)。對照組含有A2078細(xì)胞及不含化合物DMSO，但不含細(xì)胞。取MTT溶于PBS中，5mg/ml。制備甘胺酸緩沖液，其包含0.1M甘胺酸與0.1M NaCl，經(jīng)1N NaOH緩沖至pH10.5(所有試劑均來自Merck藥廠)。
取人類A2780卵巢癌瘤細(xì)胞(美國賓州Fox Chase癌癥中心T.C.Hamilton博士的熱心捐贈)于補(bǔ)充2mM L-麩酰胺、50ug/ml健大霉素與10％胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。細(xì)胞照例呈單層培養(yǎng)物保持在37℃的潮濕5％CO2氣氛中。每周使用胰蛋白酶/EDTA溶液傅代細(xì)胞一次，分割比例為1:40。所有培養(yǎng)基與補(bǔ)充物均得自LifeTechnologies。采用Gen-Probe霉?jié){菌組織培養(yǎng)套組(供應(yīng)商BioMerieuX)測得細(xì)胞中不含霉?jié){菌污染物。
將細(xì)胞接種在NUNCTM96孔培養(yǎng)板中(供應(yīng)商LiFe Technologies)，使之附著在塑膠板上過夜。用于涂覆的密度為每孔1500個細(xì)胞，總體積為200μl培養(yǎng)基。細(xì)胞附著在培養(yǎng)板上后，換下培養(yǎng)基，添加藥物與/溶劑至最終體積200μl。培養(yǎng)4天后，以200μl新鮮培養(yǎng)基置換培養(yǎng)基，采用以MTT為主的分析法分析細(xì)胞密度與活力。每孔中添加25μl MTT溶液，細(xì)胞再于37℃下培養(yǎng)2小時。小心吸出培養(yǎng)基，依序添加25μl甘胺酸緩沖液及100μl DMSO，使藍(lán)色MTT-甲臘產(chǎn)物溶解。微試驗板于微試驗板振蕩器上振蕩10分鐘，使用Emax96孔分光光度計(供應(yīng)商Sopachem)測定540nm的吸光度。實驗中，各實驗條件的結(jié)果均為3個重復(fù)孔的平均值。初次篩選用的化合物在單一固定濃度10-6M下測試。活性化合物則重復(fù)試驗，以建立完整的濃度-響應(yīng)曲線。每次實驗的對照組(不含藥物)及空白培養(yǎng)組(不含細(xì)胞或藥物)均平行進(jìn)行。所有對照組與樣品組數(shù)值均扣除空白組數(shù)值。每個樣品的細(xì)胞生長平均值(以吸光度為單位)均以相對于對照組細(xì)胞生長平均值的百分比表示。若適當(dāng)時，采用概率分析法計算已分級的數(shù)值，計算IC50值(使細(xì)胞生長下降至對照組的50％時所需藥物濃度)(Finney，D.J.，Probit Analyses，第2版，第10章，Graded Response，Cambridge University Press，Cambridge，1962)。本文中以pIC50(IC50值的負(fù)對數(shù)值)表示試驗化合物的效果。大多數(shù)試驗化合物在10-6M的試驗濃度下具有細(xì)胞活性且有129種化合物的pIC50≥5(參見表F-2)。
實例C.3于水性介質(zhì)中的動態(tài)溶解性 在第一個稀釋步驟中，取10μl活性化合物的濃縮母液溶于DMSO中(5mM)，加至100μl磷酸鹽檸檬酸鹽緩沖液pH7.4中，混合。在第二個稀釋步驟中，取一部分(20μl)第一個稀釋步驟溶液再加至100μl磷酸鹽檸檬酸鹽緩沖液pH7.4中，混合。最后，在第三個稀釋步驟中，取一部份(20μl)第二個稀釋步驟溶液再加至100μl磷酸鹽檸檬酸鹽緩沖液pH7.4中稀釋，混合。所有稀釋均于96孔板中進(jìn)行。最后一次稀釋后，立即使用濁度計測定連續(xù)3個稀釋步驟的濁度。每種化合物的稀釋液均進(jìn)行三重復(fù)，以排除偶然誤差。依據(jù)濁度測定值，分成3級。高溶解度的化合物得到3分，這種化合物的第一次稀釋呈澄清狀。中度溶解度的化合物得到2分。這種化合物的第一次稀釋液不澄清，但第二次稀釋液即澄清。低溶解度的化合物得到1分。這種化合物的第一次與第二次稀釋液均不澄清。測定112種化合物的溶解度。其中有42種化合物得到3分，32種化合物得到2分，及38種化合物得到1分(參見表F-2)。
實例C.4平行人工膜通透性分析 于含2ml水性緩沖液系統(tǒng)pH4或pH7.4(PSR4系統(tǒng)溶液濃縮物(pION))的深孔或預(yù)混合板中稀釋母液樣品(10μl含于100％DMSO中的5mM母液)。在添加樣品至參考板中之前，先添加150μl緩沖液至孔中，測定空白UV值。之后，棄置緩沖液，并將該板用作參考板。所有測定法均在耐UV的板子上進(jìn)行(供應(yīng)商Coaster或Greiner)。
在測定參考板的空白值后，添加150μl稀釋的樣品至參考板中，添加200μl稀釋樣品至供體板1中。使用4μl人工膜形成溶液(1，2-二油酰基-順式-甘油-3-膽堿磷酸含于含0.1％ 2，6-二-叔丁基-4-甲基苯酚的十二碳烷中)涂覆受體過濾板1(供應(yīng)商Millipore，MAIP N45型)，置于供體板1上方，形成“夾心”。添加緩沖液(200μl)至上方的受體孔中。此“夾心”加蓋，保存在室溫與黑暗中18小時。
在添加150μl緩沖液至孔中后，測定UV值，測定受體板2的空白值。在受體板2測定空白值后，棄置緩沖液，自受體過濾液1中取出150μl受體溶液移至受體板2中。然后自夾心中取出受體過濾板1。在測定供體板2的空白值(如上述)后，自供體板1中取出150μl供體溶液移至供體板2中。掃描供體板2、受體板2及參考板的孔中UV光譜(SpectraMAX 190)。所有光譜均經(jīng)PSR4p精算軟體(Command Software)計算通透性。所有化合物均進(jìn)行三次重復(fù)。每次實驗均使用酰胺咪嗪(carbamazepine)、灰黃霉素(griseofulvin)、無環(huán)鳥苷(acycloguanosine)、氨酰心安(atenolol)、呋喃苯胺酸(furosemide)與氯噻嗪(chlorothiazide)作為標(biāo)準(zhǔn)物?；衔锓殖扇惖屯ㄍ感?平均值<0.5 x 10-6cm/s；得分1)，中通透性(1 x 10-6cm/s>平均值≥0.5 x 10-6cm/s；得分2)或高速透性(≥0.5 x 10-6cm/s；得分3)。所試驗的22種化合物中，有14種化合物在所測試的兩種pH值中之一得到至少3分。有3種化合物在其中一種pH測定值下得到至少2分，及有5種化合物在其中一種pH測定值下只得到1分。
實例C.5代謝穩(wěn)定性 依據(jù)Gorrod等人(Xenobiotica 5453-462，1975)制備亞細(xì)胞組織制劑，其中使組織經(jīng)過機(jī)械性均質(zhì)化后離心分離。肝組織于冰冷0.1MTris-HCl(pH7.4)緩沖液中漂洗，以洗除過量血液。隨后吸干組織，稱重，使用手術(shù)用剪刀粗略間斷。組織碎片于3倍體積冰冷的0.1M磷酸鹽緩沖液(pH7.4)中，使用裝有鐵弗龍搗桿的Pottr-S(意大利Braun公司)或Sorvall Omni-Mix均質(zhì)器均質(zhì)化7 x 10秒，均質(zhì)化期間，容器保持在冰中/上。
組織均質(zhì)液均4℃下，使用Sorvall離心機(jī)或Beckmenn超離心機(jī)，于9000xg下離心20分鐘。所得的上澄清液保存在-80℃下，稱為“S9”。
此“S9”部分再使用Beckmann超離心機(jī)，于100,000xg下離心60分鐘(4℃)。小心吸出所得上澄液，此部分稱為“胞液”。離心塊再懸浮于0.1M磷酸鹽緩沖液中(pH7.4)，每0.5克組織原始重的終體積為1ml，稱為“微粒體”。
所有亞細(xì)胞組織部分被等分，立即于液氮中冷凍，保存在-80℃下，直到使用為止。
試驗樣品的培養(yǎng)混合物含有PBS(0.1M)、化合物(5μM)、微粒體(1mg/ml)與NADPH-發(fā)生系統(tǒng)(0.8mM葡萄糖-6-磷酸、0.8mM氯化鎂及0.8單位葡萄糖-6-磷酸去氫酶)。對照組樣品含有相同材料，但微粒體改為經(jīng)受熱去活性(95℃下10分鐘)的微粒體。對照組樣品中化合物的回收率總是100％。
混合物于37℃下預(yù)培養(yǎng)5分鐘。添加0.8mM NADPH的零時間點(t＝0)開始反應(yīng)，樣品培養(yǎng)15分鐘(t＝15)。添加2倍體積DMSO停止反應(yīng)。樣品隨后于900xg下離心10分鐘，分析前保存在室溫下的上澄液不可超過24小時。所有培養(yǎng)均進(jìn)行二次重復(fù)。采用LC-MS分析法分析上澄液。于Xterra MS C18(50 X 4.6mm5μm，美國Waters公司)上洗脫樣品。采用Alliance 2790(供應(yīng)商美國Waters公司)HPLC系統(tǒng)。洗脫劑為緩沖液A在H2O/乙腈(95/5)中的25mM乙酸銨(pH5.2))。溶劑B為乙腈，且溶劑C為甲醇，流速為2.4ml/分鐘。所使用的梯度為在5分鐘內(nèi)，以線性梯度，使有機(jī)相濃度由0％逐漸提高至50％B與50％C，于1分鐘內(nèi)至100％B，然后保持有機(jī)相濃度固定1.5分鐘。注射樣品總體積為25μl。
采用附有ESI光源之Quattro(供應(yīng)商英國曼撤斯特市Micromass公司)三重四極質(zhì)譜儀作為檢測器。光源與去溶劑化溫度分別設(shè)定在120與350℃，使用氮氣作為氣霧劑及干燥氣體。以正掃描模式取得數(shù)據(jù)(單離子反應(yīng))，錐管電壓設(shè)定在10V，滯留時間為1秒。
代謝穩(wěn)定性以化合物于活性微粒體(E(act))的存在下15分鐘培養(yǎng)后的代謝％表示(代謝％＝100％-((E(ast)于t＝15時的總離子電流(TIC)/E(ast)于t＝0時的TIC)X100)。代謝百分比小于20％的化合物則定義為具高度代謝穩(wěn)定性。代謝百分比在20與70％之間的化合物則定義為具中度穩(wěn)定性，而代謝百分比高于70％的化合物則定義為具低度代謝穩(wěn)定性。當(dāng)進(jìn)行代謝穩(wěn)定性試驗時，總是包含3種參考化合物。使用菲帕米(Verapamil)作為低度代謝穩(wěn)定性的化合物(代謝％＝73％)。使用希普萊德(Cisapride)作為中度代謝穩(wěn)定性的化合物(代謝＝45％)。使用丙醇作為中度至高度代謝穩(wěn)定性的化合物(代謝％＝25％)。使用這些參考化合物確認(rèn)代謝穩(wěn)定性分析法的有效性。
試驗5種化合物，3種化合物的代謝百分比小于20％，2種的代謝百分比在20至70之間。
實例C.6p21誘發(fā)能力 采用下列方法，于人類A2780卵巢癌瘤細(xì)胞上測定p21蛋白質(zhì)表現(xiàn)程度。將A2780細(xì)胞(20000個細(xì)胞/180μl)接種在96孔微分析板中的補(bǔ)充2mM L-麩酰胺、50μg/ml健大霉素與10％胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基中。溶解細(xì)胞前24小時，化合物的最終添加濃度為10-5、10-6、10-7與10-8M。所有試驗化合物均溶在DMSO中，再于培養(yǎng)基中稀釋。在添加化合物24小時后，排出細(xì)胞的上澄液。以200μl冰冷PBS洗滌細(xì)胞。吸清凹孔，添加30μl溶胞緩沖液(50mM Tris.HCl(pH7.6))，150mMHCl，1％Nonidet p40與10％甘油)。分析板于70℃下培養(yǎng)過夜。
自金屬箔包裝中取出適量微滴定孔，置入空的凹孔維持器中。制備洗滌緩沖液(20x 分析板洗滌濃縮液100ml PBS與界面活性劑的20倍濃縮液。含有2％氯乙酰胺)的操作溶液(1x)。冷凍干燥的p21WAF標(biāo)準(zhǔn)物與蒸餾水重新組合，再經(jīng)樣品稀釋液(由套組中供應(yīng))稀釋。
樣品經(jīng)樣品稀釋液稀釋1:4。吸取樣品(100μl)與p21WAF1標(biāo)準(zhǔn)物(100μl)加至適當(dāng)凹孔中，于室溫下培養(yǎng)2小時。以1x洗滌緩沖液洗滌凹孔3次后，吸取100μl檢測劑抗體試劑。(生物素基化單株p21WAF1抗體溶液)加至各孔中。凹孔于室溫下培養(yǎng)1小時后，以1x洗滌緩沖液洗滌3次，稀釋400x共軛物(過氧化酶抗生物素共軛物400倍濃縮液)，取100μl 1x溶液加至孔中。凹孔于室溫下培養(yǎng)30分鐘后，以1x洗滌緩沖液洗滌3次，以蒸餾水洗滌1次。添加受質(zhì)溶液(發(fā)色性受質(zhì))(100μl)至孔中，于黑暗中室溫下培養(yǎng)30分鐘。依前述添加受質(zhì)溶液的相同順序添加停止反應(yīng)溶液至各孔中。使用分光光度計讀板機(jī)，與450/595nm雙重波長下測定各孔吸光度。
每次實驗均平行進(jìn)行對照組(不含藥物)與空白培養(yǎng)組(不含細(xì)胞或藥物)。所有對照組與樣品組數(shù)值均扣除空白組數(shù)值。各樣品的p21 WAFI誘發(fā)數(shù)值(單位為吸光度)以相對于對照組中p21WAF1數(shù)值百分比表示。誘發(fā)百分比高于130％時，定義為顯著誘發(fā)。本分析法中，試驗34種化合物，其中28種表現(xiàn)顯著的誘發(fā)作用。
實例C.7P450抑制能力 所有試驗化合物均溶于DMSO(5mM)中，再于乙腈中稀釋至5x10-4M。進(jìn)一步使用分析緩沖液(0.1M NaK磷酸鹽緩沖液pH7.4)稀釋，最終溶劑濃度不可超過2％。
CYP3A4蛋白質(zhì)的分析法包括每孔中含15pmol P450/mg蛋白質(zhì)(含于0.01M NaK磷酸鹽緩沖液+1.15％KCl中)、NADPH發(fā)生系統(tǒng)(含3.3mM葡萄糖-6-磷酸、0.4U/ml葡萄糖-6-磷酸去氫酶、1.3mM NADP與3.3mM MgCl26H2O的分析緩沖液)及化合物，總分析體積為100微升。于37℃下預(yù)培養(yǎng)5分鐘后，添加150μM含熒光探針受質(zhì)BFC的分析緩沖液開始酶反應(yīng)。于室溫下培養(yǎng)30分鐘后，添加2倍體積乙腈中止反應(yīng)。于激發(fā)波長405nm及發(fā)射波長535nm下測定熒光。其中包含酮基康唑(Ketoconazole)(IC50值＝3 x 10-8M)作為此實驗的參考化合物。
CYP2D6蛋白質(zhì)的分析法包括每孔中含6pmol P450/mg蛋白質(zhì)(含于0.01M NaK磷酸鹽緩沖液+1.15％KCl中)、NADPH發(fā)生系統(tǒng)(含0.41mM葡萄糖-6-磷酸0.4U/ml葡萄糖-6-磷酸去氫酶、0.0082mM NADP與0.41mM MgCl2·6H2O的分析緩沖液)及化合物，總分析體積為100微升。于37℃下預(yù)培養(yǎng)5分鐘后，添加3μM含熒光探針受質(zhì)AMMC的分析緩沖液開始酶反應(yīng)。于室溫下培養(yǎng)45分鐘后，添加2倍體積乙腈中止反應(yīng)。于激發(fā)波長405nm及發(fā)射波長460nm下測定熒光。其中包含奎尼定(quinidine)(IC50值<5 x 10-8M)作為此實驗的參考化合物。
CYP2C9蛋白質(zhì)的分析法包括每孔中含15pmol P450/mg蛋白質(zhì)(含于0.01M NaK磷酸鹽緩沖液+1.15％KCl中)、NADPH發(fā)生系統(tǒng)(含3.3mM葡萄糖-6-磷酸、0.4U/ml葡萄糖-6-磷酸去氫酶、1.3mM NADP與3.3mM MgCl2·6H2O的分析緩沖液)及化合物，總分析體積為100微升。于37℃下預(yù)培養(yǎng)5分鐘后，添加200μM含熒光探針受質(zhì)MFC的分析緩沖液開始酶反應(yīng)。于室溫下培養(yǎng)30分鐘后，添加2倍體積乙腈中止反應(yīng)。于激發(fā)波長405nm及發(fā)射波長535nm下測定熒光。其中包含速吩唑(sulfaphenazole)(IC50值＝6.8 x 10-7M)作為此實驗的參考化合物。
初次篩選時，化合物固定在1 x 10-6M的單一濃度下試驗。試驗活性化合物時，則重復(fù)實驗，以建立完整的濃度-響應(yīng)曲線。每次實驗均平行進(jìn)行對照組(不含藥物)與空白培養(yǎng)組(不含酶或藥物)。所有化合物均分析四次重復(fù)。所有對照組與樣品組數(shù)值均扣除空白組數(shù)值。各樣品的P450活性平均值(以相對熒光單位表示)以相對于對照組中P450活性平均值的百分比表示。抑制作用百分比以100％減去樣品中P450活性平均值表示。若適當(dāng)時，計算IC50值(使P450活性下降至對照組的50％時所需藥物濃度)。本分析法分析4種化合物。其中只有一種化合物可使用CYP3A4蛋白質(zhì)測得IC50值為7.9 x 10-6M 實例C.8A2780小白鼠異種移植物模式 在免疫缺乏性小白鼠皮下注射A2780卵巢癌瘤細(xì)胞(107個細(xì)胞/200μl/只)。隨后在第4天至第32天之間每天一次經(jīng)口供給10、20與40mpk化合物。此化合物是溶于0.9％NaCl、20％β-環(huán)糊精中。第32天時，收集腫瘤，分別測量每只小白鼠的各腫瘤重量。每次實驗包括10只小白鼠。
每天一次經(jīng)口供給10、20與40mpk No.6化合物的兩次獨立的A2780異種移植物實驗顯示，所有試驗劑量均具有強(qiáng)烈的抗腫瘤效果，最高抑制作用在20mpk時出現(xiàn)一次，在40mpk時出現(xiàn)一次。
表F-2表F-2示出依據(jù)實例C.1、C.2與C.3試驗的混合物的結(jié)果 D.組合物實例膜衣錠 錠劑核心制法 取含100g式(I)化合物、570g乳糖與200g淀粉的混合物混合均勻后，用含5g十二烷基硫酸鈉及10g聚乙烯吡咯烷酮的約200ml水溶液濕化。濕粉末混合物經(jīng)過篩、干燥及再過篩一次，然后添加100g微晶纖維素與15g氫化植物油。全部混合均勻，壓成錠劑，產(chǎn)生10,000片錠劑，各含10mg式(I)化合物。
包衣 添加含5g乙基纖維素的150ml二氯甲烷溶液至含10g甲基纖維素的75ml變性乙醇溶液中。然后添加75ml二氯甲烷與2.5ml 1，2，3-丙三醇。取10g聚乙二醇熔化及溶解于75ml二氯甲烷中。后者溶液加至前者溶液中，然后添加2.5g十八碳烷酸鎂、5g聚乙烯吡咯烷酮與30ml濃縮色素懸浮液，全部均質(zhì)化。于包覆設(shè)備中，以所得混合物包覆錠劑核心。
權(quán)利要求
1.一種式(I)化合物
其N-氧化物型、其醫(yī)藥上可接受的加成鹽及立體化學(xué)異構(gòu)型，
其中
n為0、1、2或3，且當(dāng)n為0時，則為一直接鍵結(jié)；
t為0、1、2、3或4，且當(dāng)t為0時，則為一直接鍵結(jié)；
各Q為氮或-C≤；
各X為氮或-C≤；
各Y為氮或-C≤；
各Z為氮或-CH<；
R1為-C(O)NR7R8、-N(H)C(O)NR9、-C(O)C1-6烷二基SR9、-NR10C(O)N(OH)R9、-NR10C(O)C1-6烷二基SR9、-NR10C(O)C＝N(OH)R9或另一個Zn-螯合基，其中R7與R8分別獨立選自氫、羥基、C1-6烷基、羥基C1-6烷基、氨基C1-6烷基或氨芳基；
R9分別獨立選自氫、C1-6烷基、C1-6烷羰基、芳基C1-6烷基、C1-6烷基吡嗪基、吡啶酮、吡咯烷酮或甲基咪唑基；
R10分別獨立選自氫或C1-6烷基；
R2為氫、鹵基、羥基、氨基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、三氟甲基、二(C1-6烷基)氨基、羥氨基或萘磺?；拎夯?；
-L-為一直接鍵結(jié)或選自下列的二價基團(tuán)C1-6烷二基、氨基、羰基或氨羰基；
各R3分別獨立代表氫原子，且其中一個氫原子可被芳基置換；
R4為氫、羥基、氨基、羥基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、芳基C1-6烷基、氨羰基、羥羰基、氨基C1-6烷基、氨羰基C1-6烷基、羥羰基C1-6烷基、羥氨羰基、C1-6烷氧羰基、C1-6烷氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；
為選自下列的基團(tuán)
其中各s分別為0、1、2、3、4或5；
各R5與R6分別獨立選自氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵C1-6烷基；三鹵C1-6烷氧基；C1-6烷基；經(jīng)芳基與C3-10環(huán)烷基取代的C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷氧基C1-6烷氧基；C1-6烷羰基；C1-6烷氧羰基；C1-6烷磺?；?；氰基C1-6烷基；羥基C1-6烷基；羥基C1-6烷氧基；羥基C1-6烷氨基；氨基C1-6烷氧基；二(C1-6烷基)氨羰基；二(羥基C1-6烷基)氨基；(芳基)(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氨基C1-6烷基，芳基磺?；环蓟酋；被?；芳氧基；芳氧基C1-6烷基；芳基C2-6烯二基；二(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基)；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；
氨基磺?；被?C1-6烷基)氨基；
氨基磺?；被?C1-6烷基)氨基C1-6烷基；
二(C1-6烷基)氨基磺?；被?C1-6烷基)氨基；
二(C1-6烷基)氨基磺酰基氨基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；氰基；噻吩基；
經(jīng)下列基團(tuán)取代的噻吩基二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、羥基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基磺?；哙夯鵆1-6烷基、C1-6烷氧基哌啶基、C1-6烷氧基哌啶基C1-6烷基、嗎啉基C1-6烷基、羥基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、或二(羥基C1-6烷基C1-6烷基)氨基C1-6烷基；
呋喃基；經(jīng)羥基C1-6烷基取代的呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；噁唑基；經(jīng)芳基與C1-6烷基取代的噁唑基；C1-6烷基三唑基；四唑基；吡咯烷基；吡咯基；哌啶基C1-6烷氧基；嗎啉基；C1-6烷基嗎啉基；嗎啉基C1-6烷氧基；嗎啉基C1-6烷基；嗎啉基C1-6烷氨基；嗎啉基C1-6烷氨基C1-6烷基；哌嗪基；C1-6烷基哌嗪基，C1-6烷基哌嗪基C1-6烷氧基；哌嗪基C1-6烷基；萘磺?；哙夯惠粱酋；哙せ?；萘磺酰基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷氨基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷氨基C1-6烷基；C1-6烷基哌嗪基磺?；?；氨基磺酰基哌嗪基C1-6烷氧基；氨基磺酰基哌嗪基；氨基磺?；哙夯鵆1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基磺?；哙夯欢?C1-6烷基)氨基磺?；哙夯鵆1-6烷基；羥基C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；C1-6烷氧基哌啶基；C1-6烷氧基哌啶基C1-6烷基；哌啶基氨基C1-6烷氨基；哌啶基氨基C1-6烷氨基C1-6烷基；
(C1-6烷基哌啶基)(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷氨基；
(C1-6烷基哌啶基)(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷氨基C1-6烷基；
羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基；
羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；
(羥基C1-6烷基)(C1-6烷基)氨基；(羥基C1-6烷基)(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；
羥基C1-6烷氨基C1-6烷基；二(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷基；
吡咯烷基C1-6烷基；吡咯烷基C1-6烷氧基；吡唑基；硫吡唑基；經(jīng)選自C1-6烷基或三鹵C1-6烷基中兩個取代基取代的吡唑基；
吡啶基；經(jīng)C1-6烷氧基、芳氧基或芳基取代的吡啶基；嘧啶基；四氫嘧啶基哌嗪基；四氫嘧啶基哌嗪基C1-6烷基；喹啉基；吲哚基；苯基；經(jīng)分別獨立選自下列1、2或3個取代基取代的苯的鹵基、氨基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基C1-4烷基、三氟甲基、三氟甲氧基、羥基C1-4烷氧基、C1-4烷基磺?；?、C1-4烷氧基C1-4烷氧基、C1-4烷氧羰基、氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨羰基、二C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、氨基磺酰基氨基(C1-4烷基)氨基、氨基磺酰基氨基(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基磺酰基氨基(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基磺?；被?C1-4烷基)氨基C1-6烷基、氰基、哌啶基C1-4烷氧基、吡咯烷基C1-4烷氧基、氨基磺酰基哌嗪基、氨基磺酰基哌嗪基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基磺?；哙夯?、二(C1-4烷基)氨基磺?；哙夯鵆1-4烷基、羥基C1-4烷基哌嗪基、羥基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、C1-4烷氧基哌啶基、C1-4烷氧基哌啶基C1-4烷基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、(羥基C1-4烷基)(C1-4烷基)氨基、(羥基C1-4烷基)(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(羥基C1-4烷基)氨基、二(羥基C1-4烷基)氨基C1-4烷基、呋喃基、經(jīng)-CH＝CH-CH＝CH-取代的呋喃基、吡咯烷基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷氧基、嗎啉基、嗎啉基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷基、嗎啉基C1-4烷氨基、嗎啉基C1-4烷氨基C1-4烷基、哌嗪基、C1-4烷基哌嗪基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷氧基、哌嗪基C1-4烷基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷氨基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷氨基C1-6烷基、四氫嘧啶基哌嗪基、四氫嘧啶基哌嗪基C1-4烷基、哌啶基氨基C1-4烷氨基、哌啶基氨基C1-4烷氨基C1-4烷基、(C1-4烷基哌啶基)(羥基C1-4烷基)氨基C1-4烷氨基、(C1-4烷基哌啶基)(羥基C1-4烷基)氨基C1-4烷氨基C1-4烷基、吡啶基C1-4烷氧基、羥基C1-4烷氨基、羥基C1-4烷氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氨基、氨基噻二唑基、氨基磺?；哙夯鵆1-4烷氧基、或噻吩基C1-4烷氨基；
中心
部份基團(tuán)亦可與亞甲基、亞乙基或亞丙基橋形成橋連(即形成雙環(huán)狀部份基團(tuán))；
各R5與R6可置于氮上替代氫；
上述芳基為苯基，或經(jīng)一個或多個分別獨立選自鹵基、C1-6烷基、C1-6烷氧基；三氟甲基、氰基或羥羰基的取代基取代的苯基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中
R7與R8分別獨立選自氫、羥基、羥基C1-6烷基、氨基C1-6烷基或氨芳基；
R2為氫、鹵基、羥基、氨基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、三氟甲基、羥氨基或萘磺酰基吡嗪基；
R4為氫、羥基、氨基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基、芳基C1-6烷基、氨羰基、羥羰基、氨基C1-6烷基、氨羰基C1-6烷基、羥羰基C1-6烷基、羥氨羰基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；
為選自下列的基團(tuán)(a-1)、(a-2)、(a-3)、(a-4)、(a-5)、(a-6)、(a-7)、(a-8)、(a-9)、(a-10)、(a-11)、(a-12)、(a-13)、(a-14)、(a-15)、(a-16)、(a-17)、(a-18)、(a-19)、(a-20)、(a-21)、(a-22)、(a-23)、(a-24)、(a-25)、(a-26)、(a-27)、(a-28)、(a-29)、(a-30)、(a-31)、(a-32)、(a-33)、(a-34)、(a-35)、(a-36)、(a-37)、(a-38)、(a-39)、(a-40)、(a-41)、(a-42)、(a-43)或(a-44)；
各R5與R6分別獨立選自氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵C1-6烷基；三鹵C1-6烷氧基；C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷氧基C1-6烷氧基；C1-6烷羰基；C1-6烷磺?；?；氰基C1-6烷基；羥基C1-6烷基；羥基C1-6烷氧基；羥基C1-6烷氨基；氨基C1-6烷氧基；二(C1-6烷基)氨羰基、二(羥基C1-6烷基)氨基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷氨基；芳基磺?；?；芳基磺酰基氨基；芳氧基；芳基C2-9烯二基；二(C1-6烷基)氨基；氰基；噻吩基；經(jīng)下列基團(tuán)取代的噻吩基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基或二(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷基；呋喃基；咪唑基；C1-6烷基三唑基；四唑基；哌啶基C1-6烷氧基；嗎啉基；C1-6烷基嗎啉基；嗎啉基C1-6烷氧基；嗎啉基C1-6烷基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷氧基；C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基C1-6烷基哌嗪基磺酰基；氨基磺?；哙夯鵆1-6烷氧基；氨基磺酰基哌嗪基；氨基磺?；哙夯鵆1-6烷基；二(C1-6烷基)氨基磺?；哙夯?；二(C1-6烷基)氨基磺?；哙夯鵆1-6烷基；羥基C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；C1-6烷氧基哌啶基；C1-6烷氧基哌啶基C1-6烷基；羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基；
羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；
(羥基C1-6烷基)(C1-6烷基)氨基；(羥基C1-6烷基)(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；
吡咯烷基C1-6烷氧基；吡唑基；硫吡唑基；經(jīng)選自C1-6烷基或三鹵C1-6烷基中兩個取代基取代的吡唑基；
吡啶基；經(jīng)C1-6烷氧基或芳基取代的吡啶基；嘧啶基；喹啉基；苯基；經(jīng)分別獨立選自下列的1、2或3個取代基取代的苯基鹵基、氨基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基C1-4烷基、三氟甲基、三氟甲氧基、羥基C1-4烷氧基、C1-4烷氧基C1-4烷氧基、氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基、哌啶基C1-4烷氧基、吡咯烷基C1-4烷氧基、氨基磺?；哙夯?、氨基磺酰基哌嗪基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基磺?；哙夯?、二(C1-4烷基)氨基磺酰基哌嗪基C1-4烷基、羥基C1-4烷基哌嗪基、羥基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、C1-4烷氧基哌啶基、C1-4烷氧基哌啶基C1-4烷基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、(羥基C1-4烷基)(C1-4烷基)氨基、(羥基C1-4烷基)(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷氧基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、羥基C1-4烷氨基、二(羥基C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氨基、氨基噻二唑基、氨基磺?；哙夯鵆1-4烷氧基、或噻吩基C1-4烷氨基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中t為0；
t為0；
R1為-C(O)NR7R8、-C(O)C1-6烷二基SR9、-NR10(C(O)N(OH)R9、-NR10(C(O)C1-6烷二基SR9、-NR10(C(O)C＝N(OH)R9或另一Zn-螯合基，其中R7與R8分別獨立選自氫、羥基、羥基C1-6烷基或氨基C1-6烷基；
R2為氫、鹵基、羥基、氨基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、三氟甲基或二(C1-6烷基)氨基；
-L-為一直接鍵結(jié)或選自下列的二價基團(tuán)C1-6烷二基、氨基或羰基；
R4為氫、羥基、氨基、羥基C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、芳基C1-6烷基、氨羰基、氨基C1-6烷基、C1-6烷基氨基C1-6烷基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；
為選自下列的基團(tuán)(a-1)、(a-3)、(a-4)、(a-5)、(a-6)、(a-7)、(a-8)、(a-9)、(a-10)、(a-11)、(a-12)、(a-13)、(a-14)、(a-15)、(a-16)、(a-17)、(a-18)、(a-19)、(a-20)、(a-21)、(a-22)、(a-23)、(a-24)、(a-25)、(a-26)、(a-28)、(a-29)、(a-30)、(a-31)、(a-32)、(a-33)、(a-34)、(a-35)、(a-36)、(a-37)、(a-38)、(a-39)、(a-40)、(a-41)、(a-42)、(a-44)、(a-45)、(a-46)、(a-47)、(a-48)或(a-51)；
各s分別為0、1、2、3或4；
R5為氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵C1-6烷基；三鹵C1-6烷氧基；C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷羰基；C1-6烷氧羰基；C1-6烷磺?；?；羥基C1-6烷基；芳氧基；二(C1-6烷基)氨基；氰基；噻吩基；呋喃基；經(jīng)羥基C1-6烷基取代的呋喃基；苯并呋喃基；咪唑基；噁唑基；經(jīng)芳基與C1-6烷基取代的噁唑基；C1-6烷基三唑基；四唑基；吡咯烷基；吡咯基；嗎啉基；C1-6烷基嗎啉基；哌嗪基；C1-6烷基哌嗪基；羥基C1-6烷基哌嗪基；C1-6烷氧基哌嗪基；吡唑基、經(jīng)選自C1-6烷基或三鹵C1-6烷基中一或兩個取代基取代的吡唑基；吡啶基、經(jīng)C1-6烷基氧基/芳氧基或芳基取代的吡啶基；嘧啶基；喹啉基；吲哚基；苯基；或經(jīng)分別獨立選自鹵基、C1-6烷基、C1-6烷氧基或三氟甲基中的1或2個取代基取代的苯基；
R6為氫；鹵基；羥基；氨基；硝基；三鹵C1-6烷基；三鹵C1-6烷氧基；C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷羰基；C1-6烷氧羰基；C1-6烷磺?；?；羥基C1-6烷基；芳氧基；二(C1-6烷基)氨基；氰基；吡啶基；苯基；或經(jīng)分別獨立選自鹵基、C1-6烷基、C1-6烷氧基或三氟甲基中的1或2個取代基取代的苯基；
中心的
部份基團(tuán)也可與亞乙基橋形成橋連(即形成雙環(huán)狀部份基團(tuán))。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中n為1或2；t為0、1或2；各Z為氮；R10為氫；R2為氫、硝基、C1-6烷氧基、三氟甲基、二(C1-6烷基)氨基、羥氨基或萘磺?；拎夯?L-為一直接鍵結(jié)或選自下列的二價基團(tuán)C1-6烷二基、羰基或氨羰基；各R3代表氫原子；R4為氫、羥基C1-6烷基、氨羰基、羥氨羰基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；
為選自(a-1)、(a-7)、(a-9)、(a-10)、(a-12)、(a-14)、(a-19)、(a-20)、(a-21)、(a-22)、(a-23)、(a-30)、(a-34)、(a-49).或(a-50)的基團(tuán)；各s分別為0、1、2或5；各R5與R6分別獨立選自氫；鹵基；硝基；三鹵C1-6烷基；三鹵C1-6烷氧基；C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷磺酰基；(芳基)(C1-6烷基)氨基；芳基磺?；环佳趸?；芳基C2-6烯二基；二(C1-6烷基)氨基；噻吩基；經(jīng)下列基團(tuán)取代的噻吩基；二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、羥基C2-6烷基哌嗪基C1-6烷基、羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基磺?；哙夯鵆1-6烷基、C1-6烷氧基哌啶基C1-6烷基、嗎啉基C1-6烷基、羥基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、或(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷基；
呋喃基；噁唑基；吡咯基；吡唑基；吡啶基；經(jīng)C1-6烷氧基取代的吡啶基；喹啉基；吲哚基；苯基；經(jīng)分別獨立選自下列1、2或3個取代基取代的苯基鹵基、氨基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基C1-4烷基、三氟甲基、三氟甲氧基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基；二(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、羥基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、二(羥基C1-4烷基)氨基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基，或中心的
部份基團(tuán)亦可與亞甲基橋連基形成橋連(亦即形成雙環(huán)狀部份基團(tuán))。
5.根據(jù)權(quán)利要求1與4的化合物，其中n為1或2；t為0、1或2；各Z為氮；R10為氫；R2為氫、硝基、C1-6烷氧基、三氟甲基、二(C1-6烷基)氨基、羥氨基或萘磺?；拎夯?；-L-為一直接鍵結(jié)或選自下列的二價基團(tuán)C1-6烷二基、羰基或氨羰基；各R3代表氫原子；R4為氫、羥基C1-6烷基、氨羰基、羥氨羰基或二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基；
為選自(a-1)、(a-7)、(a-9)、(a-10)、(a-12)、(a-14)、(a-19)、(a-20)、(a-21)、(a-22)、(a-23)、(a-30)、(a-34)、(a-49)或(a-50)的基團(tuán)；各s分別為0、1、2或5；各R5與R6分別獨立選自氫；鹵基；硝基；三鹵C1-6烷基；三鹵C1-6烷氧基；C1-6烷基；C1-6烷氧基；C1-6烷磺酰基；(芳基)(C1-6烷基)氨基；芳基磺酰基；芳氧基；芳基C2-6烯二基；二(C1-6烷基)氨基；噻吩基；經(jīng)下列基團(tuán)取代的噻吩基二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、二(C1-6烷基)氨基(C1-6烷基)、C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基、羥基C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基，羥基C1-6烷氧基C1-6烷基哌嗪C1-6烷基二、(C1-6烷基)氨基磺?；哙夯鵆1-6烷基、C1-6烷氧基哌啶基C1-6烷基、嗎啉基C1-6烷基、羥基C1-6烷基C1-6烷基)氨基C1-6烷基、或二(羥基C1-6烷基)氨基C1-6烷基；
呋喃基；噁唑基；吡咯基；吡唑基；吡啶基；經(jīng)C1-6烷氧基取代的吡啶基；喹啉基；吲哚基；苯基；經(jīng)分別獨立選自下列1、2或3個取代基取代的苯基鹵基、氨基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基C1-4烷基、三氟甲基、三氟甲氧基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氧基；二(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基、二C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、羥基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、羥基C1-4烷氧基C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基、二(羥基C1-4烷基)氨基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷氧基、嗎啉基C1-4烷基、C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基，或中心的
部份基團(tuán)亦可與亞甲基橋形成橋連(即形成雙環(huán)狀部份基團(tuán))。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、4與5的化合物，其中n為1；t為0；各Z為氮；R1為-C(O)NH(OH)；R2為氫；-L-為一直接鍵結(jié)；各R3代表氫原子；R4為氫；
為選自(a-1)或(a-20)的基團(tuán)；各s分別為0或1；各R5與R6分別獨立選自氫；噻吩基；經(jīng)下列基團(tuán)取代的噻吩基二(C1-6烷基)氨基C1-6烷基、或C1-6烷基哌嗪基C1-6烷基；呋喃基；苯基；經(jīng)分別獨立選自下列的1個取代基取代的苯基二(C1-4烷基)氨基C1-4烷氧基、二(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、二(C1-4烷基)氨基C1-4烷基(C1-4烷基)氨基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷基、吡咯烷基C1-4烷氧基或C1-4烷基哌嗪基C1-4烷基。
7.根據(jù)權(quán)利要求1、4、5與6的化合物，其是選自下列的化合物No.6、No.100、No.104、No.128、No.144、No.124、No.154、No.125、No.157、No.156、No.159、No.163、No.164、No.168、No.169、No.127、No.171、No.170、No.172與No.173化合物。
8.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、4、5、6與7的化合物，其中該化合物為化合物No.6。
化合物6
9.一種醫(yī)藥組合物，其包含醫(yī)藥上可接受的載體及作為活性成分的醫(yī)療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1至8的化合物。
10.一種制備根據(jù)權(quán)利要求9項的醫(yī)藥組合物的方法，其中均勻混合醫(yī)藥上可接受的載體及根據(jù)權(quán)利要求1至8的化合物。
11.根據(jù)權(quán)利要求1至8項中任一的化合物，其是用為醫(yī)藥。
12.根據(jù)權(quán)利要求1至8項中任一的化合物在制造用于治療增生疾病的醫(yī)藥的用途。
13.一種制備根據(jù)權(quán)利要求1的化合物的方法，其特征在于
a)由式(II)中間體與適當(dāng)酸，如，例如三氟乙酸反應(yīng)，產(chǎn)生式(I-a)異羥肟酸，式中R1為-C(O)NH(OH)；
b)由式(VI)中間體與氫于催化劑媒(如，例如Pd/C(10％))的存在下進(jìn)行催化氫化反應(yīng)，產(chǎn)生式(I-a)異羥肟酸，式中R1為-C(O)NH(OH)；
c)由式(VII)中間體與式(VIII)中間體，其中R′為
或
于N′-(乙基碳化亞胺?；?-N，N-二甲基-1，3-丙二胺單鹽酸鹽(EDC)與羥基苯并三唑(HOBT)的存在下反應(yīng)，產(chǎn)生式(I-b)化合物，式中R1為
或
14.一種在生物樣品中檢測或判別HDAC的方法，其包括檢測或測定如權(quán)利要求1項所定義的標(biāo)記化合物與HDAC之間所形成的配合物。
15.抗癌劑與根據(jù)權(quán)利要求1至8項中任一項的HDAC抑制劑的組合。
全文摘要
本發(fā)明涉及用作組蛋白去乙酰酶抑制劑的磺?；苌铩＞唧w地說，本發(fā)明包括一種新穎的式(I)化合物其中n、m、t、R1、R2、R3、R4、L、Q、X、Y、Z與-如本文中定義，其具有組蛋白去乙酰酶抑制酶素活性；并包括其制法、含其之組合物及其作為醫(yī)藥的用途。
文檔編號A61K31/53GK101450934SQ20081017042
公開日2009年6月10日 申請日期2003年3月11日 優(yōu)先權(quán)日2002年3月13日
發(fā)明者K·范埃梅倫, J·阿特斯, L·J·J·巴克西, H·L·J·德溫特, S·F·A·范布蘭德特, M·G·C·維當(dāng)克, L·米爾波, I·N·C·皮拉特, V·S·龐塞勒特, A·B·德亞特金, 吉米·阿諾德·維維恩·范休斯登 申請人:詹森藥業(yè)有限公司