專利名稱：一種黃芩素衍生物其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類新型的黃芩素衍生物，具體涉及一類治療阿爾茨海默氏病等神經(jīng)退行性疾病、抗炎、降血脂、治療動(dòng)脈粥樣硬化藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
自由基與疾病的關(guān)系十分密切。當(dāng)機(jī)體內(nèi)自由基的產(chǎn)生與清除失去平衡，過量的自由基會(huì)對(duì)DNA、糖類、蛋白質(zhì)與脂質(zhì)造成損傷，從而引起一系列疾病如老年化、心血管疾病等等，所以，具有優(yōu)良抗氧化性質(zhì)的化合物很可能對(duì)這些疾病的預(yù)防與治療有效。尋找、篩選具有阻斷自由基形成或清除自由基的藥物研究越來越受到人們的關(guān)注。
黃芩素是中藥黃芩的一種主要活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗變態(tài)、降膽固醇等多種生理活性和藥理作用。黃芩素的多數(shù)藥理活性是基于其抗氧化作用，但其作用不是很強(qiáng)，而且溶解性能不好，限制了它在醫(yī)藥領(lǐng)域中的應(yīng)用。為了改善這些缺點(diǎn)以及擴(kuò)大其應(yīng)用范圍，人們對(duì)其進(jìn)行改造，旨在尋找新型的活性化合物。文獻(xiàn)報(bào)道(J.Med.Chem，2004，47，5555-5566)，通過對(duì)A環(huán)進(jìn)行烷基化獲得了一系列黃芩素衍生物，增強(qiáng)了其抑制P-糖蛋白170活性，活性測(cè)試結(jié)果表明這些化合物具有一定的細(xì)胞毒性；另有文獻(xiàn)報(bào)道(藥學(xué)學(xué)報(bào)，1997，32，140-143)了兩個(gè)芐醚類衍生物具有一定的抗HIV活性。也有專利(中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?2111185.5)報(bào)道了8-位取代的甲胺類黃芩素衍生物具有較強(qiáng)的抑制蛋白激酶C(PKC)和抑制艾滋病毒HIV/IIIB的活性。但尚未見關(guān)于對(duì)黃芩素進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造以獲得更強(qiáng)的具有抗脂質(zhì)過氧化作用和防治因自由基損傷所引起疾病的文獻(xiàn)報(bào)道。
本發(fā)明為了增強(qiáng)其抗氧化作用和改善其溶解性能，將不同有效基團(tuán)引入黃芩素，獲得一類新型的黃芩素衍生物，進(jìn)而發(fā)現(xiàn)新的生物活性，可以進(jìn)一步開發(fā)成與之相關(guān)的治療阿爾茨海默氏病等神經(jīng)退行性疾病，以及抗炎、降血脂、治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物，以滿足臨床用藥的需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一類新型的黃芩素衍生物；本發(fā)明的另一目的是公開該類化合物的幾種制備方法；本發(fā)明的第三個(gè)目的是公開該類化合物在制備治療阿爾茨海默氏病等神經(jīng)退行性疾病、抗炎、降血脂、治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明合成了有如下結(jié)構(gòu)通式的黃芩素衍生物 (I)式中R1、R2、R3可以相同或不同，R1、R2、R3代表氫、烷基、芳基、供電子基團(tuán)如F或吸電子基團(tuán)如OCH3的取代芳基、炔基、烯基、環(huán)烷基、雜原子取代的環(huán)烷基、脂肪?；?、芳香酰基、-RNR``R`、-RCOOR```；其中，R為烷基、R`、R``可以相同或不同，R`、R``與R```代表氫、烷基、烯基、炔基、芳基。
本發(fā)明的黃芩素衍生物可通過以下方法制備得到反應(yīng)式1 反應(yīng)式1給出了7-位黃芩素衍生物的合成方法。
黃芩素(1)在催化劑和溶劑作用下得到化合物(2)，反應(yīng)溫度為70～80℃，反應(yīng)時(shí)間為7-24小時(shí)；所說溶劑為醋酐，所說催化劑包括Na2CO3或吡啶；
化合物(2)在催化劑和溶劑作用下與烯丙基溴或烯丙基氯反應(yīng)得到化合物(3)，反應(yīng)溫度為60～75℃，反應(yīng)時(shí)間為8～24小時(shí)；所說溶劑包括丙酮、DMF，所說催化劑包括K2CO3、KI；化合物(3)在催化劑和溶劑作用下得到化合物(4)，反應(yīng)溫度為60～90℃，反應(yīng)時(shí)間為3～12小時(shí)；所說溶劑包括甲醇、乙醇、丙酮，所說催化劑包括濃HCl；化合物(4)在催化劑和溶劑作用下與溴化芐或氯化芐反應(yīng)得到化合物(5)，反應(yīng)溫度為60～80℃，反應(yīng)時(shí)間為6～36小時(shí)；所說溶劑包括丙酮、DMF，所說催化劑包括K2CO3、KI；化合物(5)在催化劑和溶劑作用下得到化合物(6)，反應(yīng)溫度為室溫，反應(yīng)時(shí)間為0.5～3小時(shí)；所說溶劑包括THF，所說催化劑包括Pd(Ph3)4和NaBH4；化合物(6)在催化劑和溶劑作用下與溴代物和氯代物或酰氯反應(yīng)得到化合物(7)，反應(yīng)溫度為室溫或60～80℃，反應(yīng)時(shí)間為1～12小時(shí)；所說溶劑包括吡啶和丙酮、DMF或CHCl3和CH2Cl2，所說催化劑包括Ag2CO3和K2CO3、KI和三乙胺；化合物(7)在催化劑和溶劑作用下得到化合物(I)，反應(yīng)溫度為室溫，反應(yīng)時(shí)間為4～36小時(shí)；所說溶劑包括THF，所說催化劑包括Pd/C。
反應(yīng)式2 反應(yīng)式2給出了6-位醚鍵黃芩素衍生物的合成方法。
化合物(2)在催化劑和溶劑作用下與溴化芐或氯化芐和烯丙基溴或烯丙基氯反應(yīng)得到化合物(8)，反應(yīng)溫度為60～75℃，反應(yīng)時(shí)間為8～24小時(shí)；所說溶劑包括丙酮、DMF，所說催化劑包括K2CO3、KI；
化合物(8)在催化劑和溶劑作用下得到化合物(9)，反應(yīng)溫度為60～90℃，反應(yīng)時(shí)間為3～12小時(shí)；所說溶劑包括甲醇、乙醇、丙酮，所說催化劑包括K2CO3、NaOH或KOH；化合物(9)在催化劑和溶劑作用下與溴代物和氯代物得到化合物(10)，反應(yīng)溫度60～80℃，反應(yīng)時(shí)間為8～36小時(shí)；所說溶劑包括丙酮、DMF，所說催化劑包括K2CO3、KI；化合物(10)在催化劑和溶劑作用下得到化合物(I)，反應(yīng)溫度為室溫，反應(yīng)時(shí)間為0.5～36小時(shí)；所說溶劑包括THF，所說催化劑包括Pd/C或Pd(PPh3)4和NaBH4。
反應(yīng)式3 反應(yīng)式3給出了6-位酯鍵黃芩素衍生物的合成方法。
黃芩素(1)在催化劑和溶劑作用下與芳香酸或脂肪酸反應(yīng)得到化合物(I)，反應(yīng)溫度為室溫，反應(yīng)時(shí)間為0.5-2小時(shí)；所說溶劑為DMF，所說催化劑包括benzotriazol-1-yloxytris(dimethylamino)phosphonium hexafluorophosphate(卡特縮合劑)、 三乙胺；化合物(I)在催化劑和溶劑作用下與CH3I反應(yīng)得到化合物(11)，反應(yīng)溫度為室溫，反應(yīng)時(shí)間為2-12小時(shí)；所說溶劑為DMF、丙酮，所說催化劑包括K2CO3，以NOE確證取代的位置。
對(duì)本發(fā)明的黃芩素衍生物進(jìn)行了如下的生物活性測(cè)定通過一定的生物活性篩選(如抗脂質(zhì)過氧化、對(duì)抗H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷等方法)發(fā)現(xiàn)這類衍生物表現(xiàn)出明顯的活性，強(qiáng)于黃芩素，將適用于與之相關(guān)的疾病治療，如治療阿爾茨海默氏病等神經(jīng)退行性疾病、抗炎、降血脂、治療動(dòng)脈粥樣硬化等。
1、抗脂質(zhì)過氧化MDA含量測(cè)定 取新鮮大鼠肝臟，用生理鹽水漂洗干凈，放吸水紙上拭干，稱取1g，放小燒杯中用眼科小剪剪碎，加入20mL生理鹽水，轉(zhuǎn)移到勻漿管中，冰浴勻漿7～8分鐘。取10mL離心管，每管加勻漿液1mL，加入藥液，混勻，37℃水浴90分鐘。取出后，每管加10％三氯乙酸和0.67％硫代巴比妥酸各1mL，混勻，置沸水浴中15分鐘。流水冷卻，4000rpm離心10分鐘，取上清532nm比色測(cè)定。以下列公式計(jì)算MDA含量。
MDA含量(nmol/mg prot)＝{[(A樣品-A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)]×10nmol/ml}÷蛋白質(zhì)含量蛋白質(zhì)含量的測(cè)定 在小試管中加入上述肝勻漿液0.05mL，作復(fù)管，另取0.05mL雙蒸水和0.05mL標(biāo)準(zhǔn)蛋白(1mg/mL)分別作為空白和標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照。各管加入考馬氏藍(lán)溶液(0.1g/L)3mL，混勻，10分鐘后在595nm處測(cè)定其吸光度。以下列公式計(jì)算樣品蛋白含量樣品蛋白含量(mg/ml)＝[(A樣品-A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)]×1mg/ml以不給藥肝勻漿的MDA含量為100％，計(jì)算給藥后MDA含量的降低百分?jǐn)?shù)為抑制率，通過不同濃度給藥劑量的MDA含量降低抑制率，統(tǒng)計(jì)分析得出IC50值。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1表1說明表中標(biāo)有**P＜0.01代表有顯著作用。
2、對(duì)抗H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷PC12細(xì)胞用含10％小牛血清的DMEM培養(yǎng)液，以1×105個(gè)/mL密度接種于96孔培養(yǎng)板上，接種體積為100μL/孔，隨后放入含5％CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。培養(yǎng)24小時(shí)后，給藥組中加相應(yīng)濃度的化合物10μL/孔，終濃度為10-5，10-6M預(yù)孵育2小時(shí)(對(duì)照組與損傷組分別加10μL/孔PBS，使其體積保持相等)。PC12細(xì)胞孵育2小時(shí)后，在給藥組與損傷組中分別加入200μM H2O2損傷劑10μL/孔(對(duì)照組加10μL/孔PBS)。30分鐘后，將各組的培養(yǎng)液均換成無小牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液繼續(xù)放入恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24小時(shí)，培養(yǎng)液體積仍為100μL/孔。繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)后，各組中加入5mg/mL MTT 10μL/孔，進(jìn)行活細(xì)胞染色。待4小時(shí)后，各組中加入20％SDS終止液100μL/孔，室溫過夜。在570/630nm的雙波長(zhǎng)下測(cè)定各組的OD值。測(cè)試結(jié)果，重復(fù)3次，用One way ANOVA和Duncan`s test方法統(tǒng)計(jì)，各組數(shù)值表示為均數(shù)±SEM，以對(duì)照組為100％，給藥組及損傷組值以對(duì)照組的百分比表示。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表13、對(duì)抗H2O2引起的細(xì)胞凋亡將PC12細(xì)胞以1×105個(gè)/ml的密度接種于96孔板中，藥物及H2O2處理后(處理方法同MTT法一致)，將細(xì)胞上清液去掉，用PBS清洗1次，加入經(jīng)37℃4％多聚甲醛固定液，室溫15分鐘，移去多聚甲醛固定液，PBS清洗3次，用1μg/ml DAPI染色劑室溫染色30分鐘，用PBS清洗3次，熒光顯微鏡下觀察。對(duì)抗H2O2引起的細(xì)胞凋亡測(cè)試結(jié)果圖。三個(gè)化合物均表現(xiàn)較強(qiáng)的抗細(xì)胞凋亡活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見附圖。


圖1-A為空白對(duì)照?qǐng)D。
圖1-B為H2O2(300μM)圖。
圖1-E為7-正己氧基黃芩素+H2O2的細(xì)胞凋亡圖。
圖2-A為空白對(duì)照?qǐng)D。
圖2-B為H2O2(300μM)圖。
圖2-F為7-(4-甲氧基)芐氧基黃芩素+H2O2的細(xì)胞凋亡圖。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1 7-正己氧基黃芩素的制備1-a5、6、7-三乙酰氧基黃芩素 將5.40g(20mmol)黃芩素，醋酐31.8mL(300mmol)，無水醋酸鈉2.25g(28.0mmol)，置100mL反應(yīng)瓶中，80℃反應(yīng)至無原料，倒入150mL冰水中，析出灰色固體，過濾收集，以乙醇洗去雜質(zhì)，得7.21g灰白色固體，產(chǎn)率91.1％。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ2.35(s，3H)，2.36(s，3H)，2.45(s，3H)，6.66(s，1H)，7.51-7.55(m，4H)，7.85-7.87(m，2H)；MS(EI)m/z 396(M+)，354，312，270(100％)1-b5、6-二乙酰-7-烯丙氧基黃芩素 將3.96g(10mmol)5、6、7-三乙酰氧基黃芩素，無水K2CO35.52g(40mmol)，烯丙基溴2.54mL(30mmol)，無水丙酮250mL，置500mL反應(yīng)瓶中，干燥狀態(tài)下回流，至反應(yīng)完全，趁熱過濾，蒸干，得灰白色固體，以乙酸乙酯洗雜質(zhì)，得3.64g白色固體，產(chǎn)率92.4％。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ2.35(s，3H)，2.45(s，3H)，4.68-4.70(m，2H)，5.34-5.46(m，2H)，5.97-6.07(m，1H)，6.60(s，1H)，6.95(s，1H)，7.50-7.53(m，3H)，7.84-7.86(m，2H)；MS(EI)m/z394(M+)，310(100％)，270，241，69；NOE顯示4.68-4.70處的H與6.95處H相關(guān)，說明烯丙基取代在7-位。
1-c7-烯丙氧基黃芩素 將5.52g(14.01mmol)5、6-二乙酰-7-烯丙基氧基黃芩素，200mL乙醇，6mL濃HCl，置500mL反應(yīng)瓶中，回流，至反應(yīng)完全，加入50mL水，減壓濃縮至大量黃色固體出現(xiàn)，收集，以少量乙醇洗去雜質(zhì)，得3.94g黃色固體，產(chǎn)率90.7％。
1HNMR(400MHz，CDCl3)84.73-4.75(m，2H)，5.38-5.51(m，3H)，6.06-6.16(m，1H)，6.62(s，1H)，6.69(s，1H)，7.50-7.58(m，3H)，7.88-7.91(m，2H)，12.52(s，1H)；MS(EI)m/z310(M+)，296(100％)，241，139，69；1-d5、6-二芐氧基-7-烯丙氧基黃芩素 將4.65g(15mmol)7-烯丙氧基黃芩素，溴化芐14.28mL(120mmol)，無水K2CO316.56g(120mmol)，無水丙酮200mL，置500mL反應(yīng)瓶中，干燥狀態(tài)下回流，至反應(yīng)完全，趁熱過濾，減壓蒸干，得灰色固體，以乙醇洗雜質(zhì)，得6.06g白色固體，產(chǎn)率82.4％。
1HNMR(400MHz，CDCl3)84.65-4.67(m，2H)，5.06(s，2H)，5.14(s，2H)，5.36-5.40(m，1H)，5.45-5.51(m，1H)，6.04-6.13(m，1H)，6.70(s，2H)，6.82(s，2H)，7.32-7.40(m，6H)，7.44-7.46(m，2H)，7.50-7.54(m，3H)，7.66-7.68(m，2H)，7.88-7.90(m，2H)；MS(EI)m/z490(M+)，399，309，91(100％)；1-e5、6-二芐氧基黃芩素 將3.12g(6.37mmol)5、6-二芐氧基-7-烯丙基氧基黃芩素，Pd(Ph3P)40.172g(0.149mmol)，重蒸THF 80mL，在室溫?cái)嚢?min后，加入NaBH40.378g(9.99mmol)，繼續(xù)反應(yīng)至無原料。以稀HCl溶液調(diào)pH值至4～5，收集暗灰色固體，以柱快速純化，用乙酸乙酯和石油醚混合液淋洗脫，得2.72g白色固體，產(chǎn)率95.0％。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)85.00(s，4H)，6.77(s，1H)，6.95(s，1H)，7.30-7.37(m，6H)，7.40-7.43(m，2H)，7.54-7.58(m，5H)，8.01-8.04(m，2H)，11.00(s，1H)；MS(EI)m/z450(M+)，359，269，241，91(100％)；1-f5、6-二芐氧基-7-正己氧基黃芩素 將0.252g(0.56mmol)5、6-二芐氧基黃芩素，0.178g(1.68mmol)無水Na2CO3，65mL無水丙酮，5mL無水DMF，0.236mL(1.68mmol)1-Bromohexane，置100mL反應(yīng)瓶中，干燥狀態(tài)下回流，反應(yīng)至無原料，過濾，以柱純化，用乙酸乙酯和石油醚混合液洗脫，得0.208g白色固體，產(chǎn)率69.7％。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ0.91-0.95(m，3H)，1.36-1.56(m，4H)，1.87-1.94(m，4H)，4.09(t，2H，J＝6.46)，5.04(s，2H)，5.14(s，2H)，6.81(s，1H)，6.84(s，1H)，7.33-7.40(m，6H)，7.45-7.47(m，2H)，7.51-7.54(s，3H)，7.66-7.68(m，2H)，7.89-7.92(m，2H)；MS(EI)m/z534(M+)，443(100％)，353，269，91；1-g7-正己氧基黃芩素 將0.094g(0.176mmol)5、6-二芐氧基-7-正己氧基黃芩素，10％Pd/C 47mg，THF 60mL，置100mL反應(yīng)瓶中，在H2狀態(tài)下，室溫反應(yīng)至無原料，過濾，以柱純化，用CH2Cl2和CH3OH混合液洗脫，得0.039g黃色固體，產(chǎn)率62.6％1HNMR(400MHz，CDCl3)δ0.88-0.94(m，3H)，1.33-1.40(m，4H)，1.46-1.52(m，2H)，1.87-1.94(m，2H)，4.13-4.16(m，2H)，5.38(s，1H)，6.60(s，1H)，6.70(s，1H)，7.50-7.56(m，3H)，7.88-7.91(m，2H)；12.50(s，1H)；MS(EI)m/z354(M+)，283，270(100％)，168；實(shí)施例2 7-十六烷氧基黃芩素的制備2-a5、6-二芐氧基-7-十六烷氧基黃芩素 將0.121g(0.269mmol)5、6-二芐氧基黃芩素，0.133g(1.25mmol)無水Na2CO3，0.458mL(1.50mmol)1-Bromohexadecane，65mL無水丙酮，5mL無水DMF，置100mL反應(yīng)瓶中，干燥狀態(tài)下回流，反應(yīng)至無原料，過濾，以柱純化，用乙酸乙酯和石油醚混合液洗脫，得0.152g白色固體，產(chǎn)率83.9％1HNMR(400MHz，CDCl3)δ0.86-0.90(m，3H)，1.18-1.57(m，26H)，1.87-1.94(m，2H)，4.08(t，2H)，5.05(s，2H)，5.15(s，2H)，6.70(s，1H)，6.84(s，1H)，7.32-7.41(m，6H)，7.45-7.54(m，5H)，7.68-7.70(m，2H)，7.88-7.90(m，2H)；MS(EI)m/z674(M+)，583(100％)，493，359，269，91；2-b7-十六烷氧基黃芩素 將0.150g(0.222mmol)5、6-二芐氧基-7-十六烷氧基黃芩素，10％Pd/C 75mg，THF 60mL，置100mL反應(yīng)瓶中，在H2狀態(tài)下，室溫反應(yīng)至無原料，過濾，以柱純化，用CH2Cl2和CH3OH混合液洗脫，得0.077g黃色固體，產(chǎn)率為70.0％1HNMR(400MHz，CDCl3)δ0.86-0.89(m，3H)，1.25-1.52(m，26H)，1.87-1.94(m，2H)，4.14(t，J＝6.71，2H)，5.34(s，1H)，6.58(s，1H)，6.64(s，1H)，7.50-7.57(m，3H)，7.88-7.90(m，2H)，12.45(s，1H)；MS(EI)m/z494(M+)，283，270(100％)，168，57；實(shí)施例3 7-(4`-甲氧基)芐氧基黃芩素的制備3-a5、6-二乙酰基-7-(4`-甲氧基)芐氧基黃芩素 將0.277g(0.70mmol)5、6、7-三乙酰氧基黃芩素，0.483g(3.50mmol)無水K2CO3，0.24mL(1.75mmol)4-甲氧基氯化芐，0.015g(0.09mmol)KI，無水丙酮40mL，干燥狀態(tài)下回流，至反應(yīng)完全，趁熱過濾，蒸干，得灰白色固體，以乙酸乙酯洗雜質(zhì)，得0.269g白色固體，產(chǎn)率81.0％.
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ2.28(s，3H)，2.45(s，3H)，3.82(s，3H)，5.12(s，2H)，6.60(s，1H)，6.92-6.94(m，2H)，7.01(s，1H)，7.32-7.34(d，2H)，7.49-7.54(m，3H)，7.83-7.85(m，2H)；MS(EI)m/z474(M+)，432，390，270，121(100％)，84；3-b7-(4`-甲氧基)芐氧基黃芩素將0.160g(0.338mmol)5、6-二乙?；?7-(4-甲氧基)苯氧基黃芩素，2mL5％NaOH，30mL丙酮，在N2氣保護(hù)下，40～50℃反應(yīng)至完全，以稀HCl液調(diào)pH至5～6，加入10mL水，減壓濃縮至大量黃色固體出現(xiàn)，收集，以少量乙醇洗去雜質(zhì)，得0.114g黃色固體，產(chǎn)率86.4％。
1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.75(s，3H)，5.20(s，2H)，6.94-7.00(m，3H)，7.06(s，1H)，7.44-7.47(m，2H)，7.55-7.62(m，3H)，8.07-8.10(m，2H)；MS(EI)m/z390(M+)，375，270，121(100％)按實(shí)施例3的制備方法還可制備7-(4`-氟)芐氧基黃芩素、7-(3`，4`-二氧亞叉基)芐氧基黃芩素等等化合物。
實(shí)施例4 7-[1`-(乙氧羰基)]丙氧基黃芩素的制備4-a5、6-二芐氧基-7-[1`-(乙氧羰基)]丙氧基黃芩素 將0.127g(0.282mmol)5、6-二芐氧基黃芩素，無水吡啶10mL，Ag2CO30.320g(1.16mmol)，置25mL反應(yīng)瓶中，密封，用注射器注入62μL(0.423mmol)2-溴代丁酸乙酯，室溫反應(yīng)至無原料，倒入150mL CHCl3中，以稀HCl溶液洗三次，CHCl3液以無水Na2SO4干燥，以柱純化，用乙酸乙酯和石油醚混合液洗脫，得0.116g無定型固體，產(chǎn)率73.0％。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ1.14(t，3H，J＝7.28)，1.26(t，3H，J＝7.14)，2.08-2.15(m，2H)，4.26(q，J＝7.14，2H)，4.77(t，J＝5.90，1H)，5.02-5.17(m，4H)，6.72(s，1H)，6.88(s，1H)，7.31-7.40(m，6H)，7.47-7.54(m，5H)，7.64-7.66(m，2H)，7.88-7.90(m，2H)；MS(EI)m/z564(M+)，473，383，269，91(100％)；4-b7-[1`-(乙氧羰基)]丙氧基黃芩素 將0.113g(0.200mmol)5、6-二芐氧基-7-[1`-乙基-2`-(乙氧羰基)]乙氧基黃芩素，10％Pd/C 56.5mg，THF 60mL，置100mL反應(yīng)瓶中，在H2狀態(tài)下，室溫反應(yīng)至無原料，過濾，以柱純化，用CH2Cl2和CH3OH混合液洗脫，得0.046g黃色固體，產(chǎn)率60.0％1HNMR(400MHz，CDCl3)δ1.14(t，J＝7.42，3H)，1.26(t，J＝7.15，3H)，2.05-2.13(m，1H)，4.24(q，J＝7.14，2H)，4.70(t，J＝5.36，1H)，6.54(s，1H)，6.68(s，1H)，7.48-7.55(m，3H)，7.85-7.87(m，2H)；MS(EI)m/z384(M+)，338，311，281，270(100％)，254，241，168；實(shí)施例5 7-[2`-(對(duì)氯苯氧基)]異丁酰氧基黃芩素的制備5-a5、6-二芐氧基-7-[2`-(對(duì)氯苯氧基)]異丁酰氧基黃芩素 將0.115g(0.256mmol)5、6-二芐氧基黃芩素，0.089g(0.382mmol)2-甲基-2-(4-氯苯氧基)丙酰氯，84μL(0.60mmol)三乙胺，重蒸CH2Cl250mL，置100mL反應(yīng)瓶中，室溫反應(yīng)至無原料，倒入150mL CH2Cl2中，以水洗，飽和NaCl液洗，用無水Na2SO4干燥，過濾，蒸干，以少量乙酸乙酯洗去雜質(zhì)，得0.138g白色固體，產(chǎn)率83.6％1HNMR(400MHz，CDCl3)1.60(s，6H)，5.10(s，2H)，5.17(s，2H)，6.75(s，1H)，6.87-6.90(m，2H)，7.02(s，1H)，7.13-7.16(m，2H)，7.29-7.40(m，8H)，7.51-7.64(m，5H)，7.88-7.90(m，2H)；MS(EI)646(M+)，555，359，269，91(100％)；5-b7-[2`-(對(duì)氯苯氧基)]異丁酰氧基黃芩素 將0.129g(0.200mmol)5、6-二芐氧基-7-[2`-甲基-2`-(4-氯苯氧基)]丙酰氧基黃芩素，10％Pd/C 64.5mg，THF 60mL，置100mL反應(yīng)瓶中，在H2狀態(tài)下，室溫反應(yīng)至無原料，過濾，以柱純化，用CH2Cl2和CH3OH混合液洗脫，得0.073g深黃色固體，產(chǎn)率78.2％1HNMR(400MHz，CDCl3)δ1.82(s，6H)，6.57(s，1H)，6.65(s，1H)，6.98-7.08(m，2H)，7.26-7.30(m，2H)，7.50-7.56(m，3H)，7.85-7.87(d，2H)，12.98(s，1H)；MS(EI)m/z466(M+)，270(100％)，168；實(shí)施例6 6-正己氧基黃芩素的制備6-a5、6-二乙酰氧基-7-芐氧基黃芩素 將1.98g(5mmol)5、6、7-三乙酰氧基黃芩素，2.26g(20mmol)無水K2CO3，芐溴1.78mL(15mmol)，5mgKI，無水丙酮200mL，置500mL反應(yīng)瓶中，干燥狀態(tài)下回流，至反應(yīng)完全，趁熱過濾，蒸干，得灰白色固體，以乙酸乙酯洗雜質(zhì)，得1.88g白色固體，產(chǎn)率84.8％。
1HNMR(400MHz，CDCl3)2.32(s，3H)，2.46(s，3H)，5.22(s，2H)，6.60(s，1H)，7.00(s，1H)，7.36-7.43(m，5H)，7.48-7.54(m，3H)，7.83-7.85(m，2H)；MS(EI)m/z444(M+)，402，360，269，91(100％)；NOE顯示5.22處的H與7.00處的H相關(guān)，表明芐基取代7-位。
6-b7-芐氧基黃芩素 將5.33g(12.00mmol)5、6-二乙酰氧基-7-芐氧基黃芩素，37.4mL5％NaOH，150mL丙酮，置250mL反應(yīng)瓶中，在N2氣保護(hù)下，40～50℃反應(yīng)至完全，以稀HCl液調(diào)pH至5～6，加入50mL水，減壓濃縮至大量黃色固體出現(xiàn)，收集，以少量乙醇洗去雜質(zhì)，得4.32g黃色固體，產(chǎn)率96.8％。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ5.27(s，2H)，5.43(s，1H)，6.67(s，1H)，6.69(s，1H)，7.36-7.73(m，8H)，7.87-7.89(m，2H)，12.54(s，1H)；MS(EI)m/z360(M+)，269(100％)，241，139，91，69；6-c6-正己氧基-7-芐氧基黃芩素 將0.180g(0.5mmol)7-芐氧基黃芩素，0.166g(1.20mmol)無水K2CO3，87μL(0.625mmol)1-Bromohexane，無水丙酮50mL，干燥狀態(tài)下回流，至反應(yīng)完全，趁熱過濾，得灰色固體，以柱純化，用乙酸乙酯與石油醚的混合液淋洗，得0.133g淺白色固體，產(chǎn)率59.9％。
1HNMR(300MHz，CDCl3)0.85-0.90(m，3H)，1.25-1.35(m，4H)，1.40-1.49(m，2H)，1.73-1.82(m，2H)，4.04-4.10(m，2H)，5.20(s，2H)，6.61(s，1H)，6.67(s，1H)，7.35-7.56(m，8H)，7.86-7.89(m，2H)，12.66(s，1H)；MS(EI)m/z444(M+)，373，269(100％)，241，91；6-d6-正己氧基黃芩素 將0.124g(0.28mmol)6-正己氧基-7-芐氧基黃芩素，10％Pd/C62.0mg，THF 60mL，置100mL反應(yīng)瓶中，在H2狀態(tài)下，室溫反應(yīng)至無原料，過濾，以柱純化，用CH2Cl2和CH3OH混合液洗脫，得0.085g黃色固體，產(chǎn)率86.1％1HNMR(300MHz，CDCl3)0.86-0.93(m，3H)，1.22-1.50(m，6H)，1.74-1.83(m，2H)，4.25(t，J＝6.7，2H)，6.55(s，1H)，6.62(s，1H)，6.66(s，1H)，7.49-7.57(m，3H)，7.87-7.90(m，2H)，13.01(s，1H)；MS(EI)m/z354(M+)，270(100％)，241，168；實(shí)施例7 6-對(duì)氟芐氧基黃芩素的制備7-a7-烯丙氧基-6-對(duì)氟芐氧基黃芩素 將0.465g(1.5mmol)7-烯丙氧基黃芩素，無水K2CO30.414g(3mmol)，對(duì)氟芐溴0.213mL(1.725mmol)，無水丙酮50mL，置100mL反應(yīng)瓶中，干燥狀態(tài)下回流，至反應(yīng)完全，趁熱過濾，得灰色固體，以柱純化，用乙酸乙酯與石油醚的混合液淋洗，得0.458g淺白色固體，產(chǎn)率73.0％。
1HNMR(300MHz，CDCl3)4.62-4.65(m，2H)，5.09(s，2H)，5.33-5.47(m，2H)，5.99-6.12(m，1H)，6.51(s，1H)，6.68(s，1H)，6.98-7.06(m，2H)，7.47-7.59(m，5H)，7.87-7.91(m，2H)，12.75(s，1H)；MS(EI)m/z418(M+)，309(100％)，253，109；7-b6-對(duì)氟芐氧基黃芩素 將0.200g(0.478mmol)6-對(duì)氟芐氧-7-烯丙氧基黃芩素，Pd(PPh3)40.014g(0.012mmol)，重蒸THF 50mL，在室溫?cái)嚢?min后，加入NaBH40.029g(0.77mmol)，繼續(xù)反應(yīng)至無原料。以稀HCl溶液調(diào)pH值至4～5，收集暗灰色固體，以柱快速純化，用乙酸乙酯和石油醚混合液洗脫，得0.162g淺黃色固體，產(chǎn)率89.5％
1HNMR(300MHz，CDCl3)5.20(s，2H)，6.41(s，1H)，6.54(s，1H)，6.67(s，1H)，7.02-7.09(m，2H)，7.39-7.44(m，2H)，7.49-7.58(m，3H)，7.86-7.90(m，2H)，13.2(s，1H)；MS(EI)m/z378(M+)，269(100％)，241，91；按實(shí)施例7的制備方法還可制備6-對(duì)甲氧基芐氧基黃芩素、6-芐氧基黃芩素等等化合物。
實(shí)施例88-a6-(2`-苯氧基)丙酰氧基黃芩素的制備將0.135g(0.5mmol)黃芩素，0.083g(0.5mmol)2-苯氧丙酸，Bop試劑0.275g(0.6mmol)，三乙胺0.17mL(1.2mmol)，重蒸DMF 5.0mL，置10mL反應(yīng)瓶中，室溫反應(yīng)至無原料，倒入100mL乙酸乙酯中，以冷1MHCl液洗，然后用冷飽和NaHCO3液洗，再以飽和NaCl液洗，用無水Na2SO4干燥，以柱純化，用乙酸乙酯與石油醚的混合液沖洗，得0.139g淺黃色固體8，產(chǎn)率66.7％1HNMR(400MHz，CDCl3)δppm1.88(d，J＝6.7，3H)，5.14(q，J＝6.7，1H)，5.48(s，1H)，6.52(s，1H)，6.65(s，1H)，7.04-7.09(m，3H)，7.36-7.40(m，2H)，7.49-7.51(m，3H)，7.84-7.87(m，2H)，12.98(b，1H)；MS(EI)m/z 418(M+)，270(100％)，168；按實(shí)施例8的制備方法還可制備6-苯甲酰氧基黃芩素、6-(3`-三氟甲基)苯甲酰氧基黃芩素、6-(4`-甲氧基)苯甲酰氧基黃芩素等等化合物。
實(shí)施例9生物活性測(cè)試 抗脂質(zhì)過氧化與對(duì)抗H2O2誘導(dǎo)的大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞損傷測(cè)定結(jié)果表1

權(quán)利要求
1.一類具有如下通式(I)的黃芩素衍生物 其特征在于R1、R2、R3可以相同或不同，R1、R2、R3代表氫、烷基、芳基、供電子基團(tuán)或吸電子基團(tuán)的取代芳基、炔基、烯基、環(huán)烷基、雜原子取代的環(huán)烷基、脂肪?；⒎枷沲；?RNR″R′、-RCOOR；其中，R為烷基、R′、R″可以相同或不同，R′、R″與R代表氫、烷基、烯基、炔基、芳基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃芩素衍生物，其特征在于，當(dāng)R2、R3為H時(shí)，R1可以是C4-C25的烷基、C3-C16的炔基、烯基、C3-C9的環(huán)烷基、雜原子取代的C3-C9環(huán)烷基、芳基、取代芳基、脂肪?；?、芳香?；?、取代芳香酰基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃芩素衍生物，其特征在于，當(dāng)R1、R3為H時(shí)，R2為C4-C25的烷基、C3-C16的炔基、烯基、C3-C9的環(huán)烷基、雜原子取代的C3-C9環(huán)烷基、芳基、取代芳基、脂肪?；?、芳香?；?、取代芳香酰基。
4.如權(quán)利要求1所述的黃芩素衍生物的制備方法，其特征在于化合物的制備包括如下步驟反應(yīng)式1 7-位黃芩素衍生物的合成方法 a)將黃芩素1在催化劑Na2CO3或吡啶的作用下與醋酐在70～80℃條件下反應(yīng)7-24小時(shí)，得到化合物2；b)化合物2在催化劑和溶劑作用下與烯丙基溴或烯丙基氯在60～75℃條件下反應(yīng)8～24小時(shí)得到化合物3；其中溶劑為丙酮、DMF，催化劑為K2CO3、KI；c)化合物3在催化劑和溶劑作用下在60～90℃反應(yīng)3～12小時(shí)得到化合物4；其中溶劑為甲醇、乙醇、丙酮，催化劑為濃HCl；d)化合物4在催化劑和溶劑作用下在60～80℃條件下與溴化芐或氯化芐反應(yīng)6～36小時(shí)得到化合物5；其中溶劑為丙酮、DMF，所說催化劑為K2CO3、KI；e)化合物5在催化劑和溶劑作用下于室溫反應(yīng)0.5～3小時(shí)得到化合物6，其中溶劑為THF，催化劑為Pd(Ph3)4和NaBH4；f)化合物6在催化劑和溶劑作用下與溴代物和氯代物或酰氯于室溫或60～80℃反應(yīng)1～12小時(shí)得到化合物7，其中溶劑包括吡啶和丙酮、DMF、CHCl3或CH2Cl2，催化劑包括Ag2CO3、K2CO3、KI或三乙胺；g)化合物7在催化劑Pd/C和溶劑THF的作用下于室溫反應(yīng)4～36小時(shí)得到通式化合物(I)反應(yīng)式2 6-位醚鍵黃芩素衍生物的合成方法 a)化合物2在催化劑和溶劑作用下與溴化芐或氯化芐和烯丙基溴或烯丙基氯于60～75℃反應(yīng)8～24小時(shí)得到化合物8，其中溶劑包括丙酮、DMF，催化劑包括K2CO3、KI；b)化合物8在催化劑和溶劑作用于60～90℃反應(yīng)3～12小時(shí)得到化合物9，其中溶劑包括甲醇、乙醇、丙酮，催化劑包括K2CO3、NaOH或KOH；c)化合物9在催化劑和溶劑作用下與溴代物或氯代物于60～80℃反應(yīng)8～36小時(shí)得到化合物10，其中溶劑包括丙酮、DMF，催化劑包括K2CO3、KI；d)化合物10在催化劑和溶劑THF作用于室溫反應(yīng)0.5～36小時(shí)得到化合物(I)，其中催化劑包括Pd/C、Pd(PPh3)4或NaBH4；反應(yīng)式3 6-位酯鍵黃芩素衍生物的合成方法 a)黃芩素1在催化劑和溶劑DMF作用下與芳香酸或脂肪酸 在室溫下反應(yīng)0.5-2小時(shí)得到化合物(I)，其中催化劑為卡特縮合劑BOP(benzotriazol-1-yloxytris(dimethylamino)phosphonium hexafluorophosphate) 或三乙胺；b)化合物(I)在催化劑K2CO3和溶劑作用下與CH3I于室溫反應(yīng)2-12小時(shí)得到6-位酯鍵化合物(11)，其中溶劑為DMF、丙酮。
5.如權(quán)利要求1所述的黃芩素衍生物的用途，在制備治療神經(jīng)退行性疾病藥物中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的黃芩素衍生物的用途，在制備治療與神經(jīng)退行性疾病相關(guān)的阿爾茨海默氏病以及抗炎、降血脂、動(dòng)脈粥樣硬化藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一類新型的黃芩素衍生物，以及它的制備方法和應(yīng)用。藥理實(shí)驗(yàn)證明，這類化合物具有明顯的抗脂質(zhì)過氧化作用以及抑制Cu
文檔編號(hào)A61P3/06GK1990481SQ200510112280
公開日2007年7月4日 申請(qǐng)日期2005年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月29日
發(fā)明者沈競(jìng)康, 丁德榮, 張福軍, 王蕊, 傅燕, 龔邦強(qiáng), 王逸平, 蔡茂軍, 馬蘭萍, 李欣 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所