專利名稱：一種藥物組合物及其制劑的制備方法和質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物組合物及其制劑的制備方法和質(zhì)量控制方法，特別涉及一種治療尖銳性濕疣、生殖器皰疹的藥物組合物及其制劑的制備方法和質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
尖銳濕疣(condyloma acuminata)又稱生殖器疣(genital warts)，系人乳頭病毒(human papillomavirus，HPV)感染生殖器皮膚粘膜所致，由于本病主要通過(guò)性接觸傳染，故認(rèn)為屬性傳播疾病(STD)的一種，近十年來(lái)國(guó)內(nèi)外發(fā)病例數(shù)均迅速增多。目前，尖銳濕疣已成為歐美國(guó)家最常見的性傳播疾病之一。國(guó)內(nèi)近年來(lái)的發(fā)病率也呈逐漸上升趨勢(shì)，在性傳播疾病中發(fā)病率僅次于淋病。生殖器皰疹又稱陰部皰疹，是由單純性皰疹病毒(herpessimplex virus-HSV)引起的性傳播性疾病。HSV是人類皰疹病毒的一種，分有HSV-1和HSV-2兩型。約90％的患者屬HSV-2型感染而引起，通常由性接觸傳播。除引起皮膚粘膜損害外，與局部癌變有一定的關(guān)系。目前生殖器皰疹的流行情況在STD中非常引人注意，它已成為歐美最常見的性病之一，在我國(guó)近幾年生殖器皰疹也明顯增加。尖銳濕疣的治療方法主要有物理療法和藥物治療兩大類。物理療法有液氮冷凍療法、CO2激光治療、微波治療、電燒灼、β-射線治療和手術(shù)治療，但這些方法或療效不佳且痛苦大、或復(fù)發(fā)率高且易產(chǎn)生副作用，另外操作方法復(fù)雜性更限制了它們的應(yīng)用。藥物治療目前還沒(méi)有特效的藥物，臨床上應(yīng)用的藥物主要分以下幾大類(1)腐蝕劑或消毒劑；(2)抗癌藥；(3)抗病毒藥；(4)免疫調(diào)節(jié)劑；(5)中草藥制劑；(6)中西藥結(jié)合制劑。更為重要的是尖銳濕疣迄今為止尚無(wú)有效的抗病毒治療手段，帶來(lái)的流行病學(xué)問(wèn)題值得高度重視。對(duì)HPV的潛伏感染，目前臨床上尚無(wú)有效的診療方法，而且是復(fù)發(fā)的主要原因。因此，尖銳濕疣治療后的原位復(fù)發(fā)或它處新發(fā)往往在所難免，成為尖銳濕疣傳播和蔓延難以控制的主要原因。雖然治療尖銳濕疣的方法很多，但無(wú)論哪種方法，都報(bào)道其復(fù)發(fā)率都較高，目前尚無(wú)有效的抗復(fù)發(fā)方法。0.5％的鬼臼毒素酊是世界衛(wèi)生組織推薦治療尖銳濕疣的第一線藥物，國(guó)內(nèi)臨床上最為常用的是0.5％的鬼臼毒素制劑-尤脫欣(0.5％鬼臼毒素酊)，但由于鬼臼毒素具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性，缺乏對(duì)病毒感染組織的特異性作用，常造成正常組織的損傷，用量太大會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的毒副作用，并且不能防止復(fù)發(fā)。因此，近年來(lái)一直都在探索一種用法簡(jiǎn)易、高效、安全、復(fù)發(fā)率低的藥物。
生殖器皰疹是一種由單純皰疹病毒侵犯生殖器皮膚、黏膜引起的紅斑、水皰、糜爛、潰瘍性損害的性傳播性疾病。臨床上治療可分系統(tǒng)治療和局部治療，以系統(tǒng)治療為主。系統(tǒng)治療是采用系統(tǒng)用藥方式并對(duì)療程進(jìn)行跟蹤觀察，這方面藥物較多。如阿昔洛韋、伐昔洛韋、泛昔洛韋、西多福韋、磷甲酸鈉、干擾素、消炎痛、左旋咪唑以及中藥等。由于阿昔洛韋、伐昔洛韋、泛昔洛韋是最常用而有效的藥物，它們對(duì)原發(fā)和復(fù)發(fā)性皰疹都有較好療效。局部治療是在系統(tǒng)用藥時(shí)配合使用一些外用制劑。可用藥物有阿昔洛韋外用膏霜，無(wú)環(huán)鳥苷眼液，酞丁胺搽劑，3％藤黃酊等。雖然目前治療生殖器皰疹的藥物較多，但臨床上常用的幾種藥物毒性較大，且容易產(chǎn)生耐藥性。目前尚無(wú)特效藥物，此病復(fù)發(fā)率較高，尚無(wú)有效根治辦法。
總之，雖然目前治療尖銳濕疣和生殖器皰疹的方法與藥物較多，但它們病情比較頑固復(fù)發(fā)率高，較難根治，尚無(wú)有效根治辦法和特效藥物，均需采用綜合療法。它們摧殘身體，影響家庭，危害社會(huì)，給患者造成極大的生理與心理痛苦。因此，應(yīng)用中醫(yī)、中藥理論開發(fā)一種治療尖銳濕疣和生殖器皰疹的安全有效的純中藥制劑，會(huì)給患者帶來(lái)新的治療手段，對(duì)個(gè)人、家庭和社會(huì)更有著重要的社會(huì)效應(yīng)。
技術(shù)方案本發(fā)明目的在于提供一種新的治療尖銳性濕疣、生殖器皰疹的藥物組合物及其制劑；本發(fā)明目的還在于提供一種新的治療尖銳性濕疣、生殖器皰疹的藥物組合物及其制劑的制備方法；本發(fā)明目的還在于提供一種治療尖銳性濕疣、生殖器皰疹的藥物組合物制劑的質(zhì)量控制方法。
本發(fā)明目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明藥物組合物主要是由如下重量配比的原料藥制成桃兒七52～78重量份、鴉膽子460～690重量份、大黃80～120重量份、苦參80～120重量份。
上述本發(fā)明藥物組合物的原料藥優(yōu)選配比為桃兒七65重量份、鴉膽子574重量份、大黃100重量份、苦參100重量份。
上述本發(fā)明藥物組合物的原料藥優(yōu)選配比為桃兒七55重量份、鴉膽子650重量份、大黃90重量份、苦參110重量份。
上述本發(fā)明藥物組合物的原料藥優(yōu)選配比還可為桃兒七75重量份、鴉膽子500重量份、大黃110重量份、苦參90重量份。
上述本發(fā)明藥物組合物原料藥中還可加入桉油8～12重量份、冰片8～12重量份，優(yōu)選桉油10重量份、冰片10重量份，桉油9重量份、冰片11重量份或桉油11重量份、冰片9重量份。
取上述本發(fā)明藥物組合物原料藥，經(jīng)對(duì)各藥的有效成分分別或組合進(jìn)行加工提取后，加入常規(guī)輔料或賦形劑，可制備成各種臨床可接受的外用藥物劑型，包括真溶液類劑型、膠體溶液類劑型、乳濁液類劑型、混懸液類劑型或氣體分散體劑型等。
所說(shuō)的真溶液類劑型選自于芳香水劑、溶液劑或醑劑等中的一種；所說(shuō)的膠體溶液類劑型選自于膠漿劑、火棉膠劑或凝膠劑等中的一種；所說(shuō)的乳濁液類劑型選自于O/W型或W/O型乳劑等中的一種；所說(shuō)的混懸液類劑型選自于合劑、洗劑或混懸劑等中的一種；所說(shuō)的氣體分散體劑型選自于噴霧劑等中的一種。
上述本發(fā)明藥物組合物的制備方法為按上述重量配比稱取原料藥，桃兒七用6～14倍量二氯甲烷，回流提取1～3次，每次1～3小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收二氯甲烷，得到固體粉末，將固體粉末40℃、-0.1MP真空干燥4小時(shí)后，過(guò)100目篩，得桃兒七提取物，備用；冰片過(guò)80目篩，備用；鴉膽子用6～10倍量石油醚，回流提取1～3次，每次1～3小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收石油醚至無(wú)石油醚味，得到鴉膽子油，加1％活性炭于100℃攪拌15分鐘，趁熱過(guò)濾除炭，得鴉膽子油精品；大黃、苦參用8～12倍量的60％～85％乙醇回流提取1～4次，每次1～3小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收乙醇，濃縮到相對(duì)密度為1.016，離心除沉淀，上清液備用；取上述桃兒七提取物、鴉膽子油精品、大黃、苦參合并提取的上清液，或再加入桉油、冰片，加入常規(guī)輔料或賦形劑，制備成各種臨床可接受的藥物劑型包括真溶液類劑型、膠體溶液類劑型、乳濁液類劑型、混懸液類劑型或氣體分散體劑型等。
所述桃兒七提取物，鴉膽子油精品，大黃、苦參合并提取的上清液(即大黃、苦參中藥液)也可按常規(guī)方法制備。
所說(shuō)的真溶液類劑型選自于芳香水劑、溶液劑或醑劑等中的一種；所說(shuō)的膠體溶液類劑型選自于膠漿劑、火棉膠劑或凝膠劑等中的一種；所說(shuō)的乳濁液類劑型選自于乳劑等中的一種；所說(shuō)的混懸液類劑型選自于合劑、洗劑或混懸劑等中的一種；所說(shuō)的氣體分散體劑型選自于噴霧劑等中的一種。其中優(yōu)選的劑型為醑劑、凝膠劑或乳劑；其中最優(yōu)選的劑型為水包油型的乳劑。
本發(fā)明藥物組合物還要可在上述重量配比的原料藥基礎(chǔ)上添加輔料制成乳劑，該乳劑可由如下下述重量份的原料制成桃兒七52～78重量份、鴉膽子460～690重量份、大黃80～120重量份、苦參80～120重量份、桉油8～12重量份、冰片8～12重量份、維生素E 3.2～4.8重量份、山梨酸0.8～1.2重量份、單硬脂酸甘油酯41.6～63.4重量份、十二烷基硫酸鈉9.6～14.4重量份。
上述本發(fā)明藥物組合物乳劑的原料藥優(yōu)選配比為桃兒七65重量份、鴉膽子574重量份、大黃100重量份、苦參100重量份、桉油10重量份、冰片10重量份、維生素E 4重量份、山梨酸1重量份、單硬脂酸甘油酯52重量份、十二烷基硫酸鈉12重量份。
上述本發(fā)明藥物組合物乳劑的原料藥優(yōu)選配比為桃兒七55重量份、鴉膽子650重量份、大黃90重量份、苦參110重量份、桉油9重量份、冰片11重量份、維生素E 3.5重量份、山梨酸1.1重量份、單硬脂酸甘油酯45重量份、十二烷基硫酸鈉14重量份。
上述本發(fā)明藥物組合物乳劑的原料藥優(yōu)選配比還可為桃兒七75重量份、鴉膽子500重量份、大黃110重量份、苦參90重量份、桉油11重量份、冰片9重量份、維生素E4.5重量份、山梨酸0.9重量份、單硬脂酸甘油酯60重量份、十二烷基硫酸鈉10重量份。
上述本發(fā)明藥物組合物乳劑的制備方法為
按上述重量配比稱取原料藥，桃兒七用6～14倍量二氯甲烷，回流提取1～3次，每次1～3小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收二氯甲烷，得到固體粉末，將固體粉末40℃真空(-0.1MP)干燥4小時(shí)后，過(guò)100目篩，得桃兒七提取物，備用；冰片過(guò)80目篩，備用；鴉膽子用6～10倍量石油醚，回流提取1～3次，每次1～3小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收石油醚至無(wú)石油醚味，得到鴉膽子油，加1％活性炭于100℃攪拌15分鐘，趁熱過(guò)濾除炭，濾液備用，得鴉膽子油精品；大黃、苦參用8～12倍量的60％～85％乙醇回流提取1～4次，每次1～3小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收乙醇，濃縮到相對(duì)密度為1.016，離心除沉淀，上清液備用；取上述鴉膽子油精品、單硬脂酸甘油酯、維生素E、冰片置于容器中，水浴加熱至60-70℃，攪拌溶解，再將桉油及上述桃兒七提取物置于油相中，攪拌均勻后，作為油相；稱取山梨酸、十二烷基硫酸鈉置于中藥液中，水浴加熱至60-70℃，攪拌溶解，作為水相；將水相緩慢加入到油相中，邊加邊攪拌至乳化均勻，冷至室溫，制成乳劑。
所述桃兒七提取物，鴉膽子油精品，大黃、苦參合并提取的上清液(大黃、苦參中藥液)也可按常規(guī)提取方法制備。
本發(fā)明乳劑還可以直接以桃兒七提取物，鴉膽子油，大黃、苦參中藥液按如下重量體積比(g/ml)投料入藥桃兒七提取物2.78重量份，鴉膽子油70重量份，大黃、苦參中藥液600體積比，桉油10重量份，冰片10重量份，維生素E 4重量份，山梨酸1重量份，十二烷基硫酸鈉12重量份，單硬脂酸甘油酯52重量份，水加至1000重量份制成乳劑。
制備方法為桃兒七提取物過(guò)100目篩后備用；將冰片過(guò)80目篩后備用；按處方量稱取鴉膽子油、單硬脂酸甘油酯、維生素E、冰片置于容器中，于60-70℃水浴中加熱溶解，作為油相；稱取處方量的山梨酸、十二烷基硫酸鈉加入中藥液中，60-70℃水浴加熱攪拌溶解，作為水相；將處方量的桉油及桃兒七提取物加入到油相中，攪拌均勻后，將水相緩慢加入到油相中，邊加邊攪拌至乳化均勻，冷至室溫，將其分裝于適宜的瓶中，即得。
上述本發(fā)明藥物組合物中桃兒七藥材的質(zhì)量控制方法包括下述鑒別和/或含量測(cè)定方法中的一種或幾種鑒別取桃兒七粉末約0.5g，加10ml二氯甲烷超聲提取約10分鐘，過(guò)濾，濾液水浴蒸干，加2ml無(wú)水乙醇使溶解，作為供試品溶液；另取鬼臼毒素對(duì)照品10mg，加無(wú)水乙醇2ml使溶解，作為對(duì)照品溶液；取對(duì)照品與供試品溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以10～8∶1的氯仿-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)清晰，供試品與對(duì)照品應(yīng)在相同位置出現(xiàn)相同斑點(diǎn)。
含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以60～65∶40～35的甲醇-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為292nm；理論板數(shù)按鬼臼毒素峰計(jì)應(yīng)不低于1500，主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)為1.5以上。
取經(jīng)70℃干燥至恒重的鬼臼毒素對(duì)照品適量，用上述流動(dòng)相溶解制成每1ml中約含0.13mg的溶液，即得對(duì)照品溶液；取桃兒七粉末，過(guò)4號(hào)篩，約0.5g[同時(shí)另取本品粉末測(cè)定水分(中國(guó)藥典2005年版一部附錄IX H第一法)]，精密稱定，置燒瓶中，加二氯甲烷80ml，回流提取4小時(shí)，提取液回收二氯甲烷并濃縮至干，殘?jiān)脽o(wú)水乙醇溶解并轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加無(wú)水乙醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得；本品按干燥品計(jì)算，含鬼臼毒素(C22H22O8)不得少于2.0％。
上述本發(fā)明藥物組合物制成乳劑的質(zhì)量控制方法包括下述含量測(cè)定和/或鑒別方法中的一種或幾種含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VI D)測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以60～65∶40～35的甲醇-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為292nm；理論板數(shù)按鬼臼毒素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000，主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。
測(cè)定法取乳劑約10g，精密稱重，置于100ml的錐形瓶中，加0.1ml鹽酸輕搖，加入約50ml流動(dòng)相，超聲20分鐘(超聲時(shí)上下?lián)u動(dòng)2次)，溶解后冰浴30分鐘，立即減壓過(guò)濾，用流動(dòng)相少量多次洗滌沉淀及濾瓶，將洗滌液及濾液合并置燒杯中，放至室溫，用1mol/L的氫氧化鈉調(diào)pH值3.0～5.0，將此濾液轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，流動(dòng)相加至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取鬼臼毒素對(duì)照品適量，用流動(dòng)相配制成每1ml中約含0.15mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量，即得。
鑒別A.桃兒七的鑒別稱取鬼臼毒素對(duì)照品適量，加上述含量測(cè)定項(xiàng)下的流動(dòng)相制成每1ml中含0.15mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；取裝量差異項(xiàng)下的樣品適量(約相當(dāng)于鬼臼毒素15mg)，照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件及方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，記錄色譜圖，對(duì)照品溶液及供試品溶液主峰保留時(shí)間應(yīng)-致。
B.大黃的鑒別色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，75～85∶25～15的甲醇-0.1％磷酸溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為440nm；理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。稱取乳劑10g，置小燒杯中，加入適量無(wú)水乙醇，超聲破乳后，置冰箱中冷卻20分鐘，過(guò)濾，濾液水浴蒸干，殘?jiān)?ml無(wú)水乙醇溶解后，過(guò)濾，濾液加到3ml的流動(dòng)相中，置冰箱中冷卻20分鐘后用0.45μm的濾膜過(guò)濾至澄清，作為供試品溶液；另取大黃素對(duì)照品，用流動(dòng)相制備成每1ml中約含2μg的溶液，作為對(duì)照品溶液；取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，對(duì)照品溶液及供試品溶液主峰保留時(shí)間應(yīng)一致。
C.苦參的鑒別稱取乳劑樣品約5g，加無(wú)水乙醇約10ml超聲破乳后，于4℃冷卻20分鐘，過(guò)濾，濾液水浴蒸干，殘?jiān)?ml水溶解后，加入1滴氨水，輕輕振搖，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用氯仿萃取3次，每次10ml，合并萃取液，轉(zhuǎn)移至蒸發(fā)皿中，水浴揮干，用約5ml無(wú)水乙醇溶解，過(guò)濾，作為供試品溶液；另取氧化苦參堿對(duì)照品，用無(wú)水乙醇制備成每1ml中約含5μg的溶液，作為對(duì)照品溶液；同法按處方比例制備不含苦參的空白溶液一份；照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VI B)測(cè)定，分別吸取對(duì)照品和供試品溶液及空白溶液各5ul，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以4～6∶0.6∶0.2的氯仿-甲醇-氨水為展開劑，展開，取出，涼干，噴以碘化鉍鉀試液顯色，樣品與對(duì)照品應(yīng)在相同位置出現(xiàn)橘紅色斑點(diǎn)，而不含苦參的空白樣品應(yīng)在相同位置未出現(xiàn)斑點(diǎn)。
D.鴉膽子的鑒別稱取乳劑樣品約5g，加無(wú)水乙醇約10ml，超聲破乳，趁熱過(guò)濾，濾液水浴蒸干，殘?jiān)?ml石油醚溶解后，過(guò)濾至澄清，取濾液作為供試品溶液；另取亞油酸對(duì)照品，用石油醚制備成每1ml中含約2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VI B)測(cè)定，分別吸取對(duì)照品和供試品溶液各5ul，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以80～90∶20～10∶0.1的石油醚-乙酸乙酯-乙酸為展開劑，飽和1小時(shí)，上行展開，取出，涼干，置于碘缸中用碘蒸氣熏約15分鐘，直至出現(xiàn)清晰斑點(diǎn)；樣品與對(duì)照品在相同位置出現(xiàn)棕色斑點(diǎn)。
E、冰片、桉油的鑒別稱取乳劑樣品約5g，加無(wú)水乙醇約10ml，超聲破乳，于4℃冷卻約6-8分鐘，過(guò)濾至澄清，取濾液作為供試品溶液；另取冰片、桉油精對(duì)照品適量，分別加無(wú)水乙醇制備成每1ml中約含5μg的溶液，作為對(duì)照品溶液；同法按處方比例制備不含冰片、不含桉油的空白溶液各一份；照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VI B)測(cè)定，分別吸取對(duì)照品和供試品溶液及空白溶液各5ul，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以9-9.5∶1-0.5的環(huán)己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，涼干，噴以新配制的1％香草醛硫酸溶液顯色，即可；結(jié)果應(yīng)與冰片對(duì)照品相同位置出現(xiàn)紫紅色斑點(diǎn)，與桉油精相同位置出現(xiàn)紫褐色斑點(diǎn)。
中醫(yī)認(rèn)為尖銳濕疣的發(fā)生主要由于房事不潔或間接接觸污穢之品，濕熱淫毒從外侵入外陰皮膚粘膜，導(dǎo)致肝經(jīng)郁熱，氣血不和，濕熱毒邪博結(jié)而成；而濕毒為陰邪，其性粘滯，纏綿難去，容易耗傷正氣，正虛邪戀，以致尖銳濕疣容易復(fù)發(fā)。生殖器皰疹主要由于素體濕熱內(nèi)蘊(yùn)，外感淫毒，熱毒相結(jié)，肝膽濕熱下注二陰而成。
本發(fā)明藥物組合物按照祖國(guó)醫(yī)學(xué)對(duì)尖銳濕疣和皰疹的發(fā)病機(jī)理論證，吸取了中醫(yī)多年來(lái)的臨床經(jīng)驗(yàn)，對(duì)病癥進(jìn)行辨證施治，以祛濕清熱解毒和化瘀散結(jié)為主，適當(dāng)輔以益氣扶正，既能抗病毒，又能提高病人的免疫力，祛邪與扶正并舉，力求標(biāo)本兼治，提高治療質(zhì)量，避免病情反復(fù)發(fā)作。
方中桃兒七具有祛風(fēng)除濕、活血化淤、解毒的功效；其性辛溫，有利于濕邪消散；味苦，苦能燥能泄，亦利于濕熱毒邪驅(qū)除，其為君?，F(xiàn)代藥理研究表明桃兒七主要成分鬼臼毒素能抑制人乳頭狀瘤病毒(HPV)感染細(xì)胞的有絲分裂，因此引起生殖器疣體壞死、脫落。鴉膽子性寒味苦，入肝經(jīng)，長(zhǎng)于清熱燥濕，殺蟲解毒，善治各種疔毒，贅疣；《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》謂其“善利下焦”，故可直達(dá)病所，腐蝕贅疣；具輔助和補(bǔ)充君藥之清熱解毒和腐蝕贅疣之功，是為臣。方以大黃和苦參佐助君臣藥清熱解毒，燥濕止癢；大黃性寒味苦，入胃、大腸、肝經(jīng)，功能瀉熱毒、破積滯、逐瘀血。《日華子本草》謂其宣通一切氣，調(diào)血脈，利關(guān)節(jié)，泄壅滯……并敷一切瘡癤腫毒；《本草綱目》言其能主諸火瘡?？鄥⒖嗪?，入肝、腎、大腸和小腸經(jīng)，能清熱燥濕，祛風(fēng)止癢和殺蟲?！兜崮媳静荨分^其涼血、解熱毒、疥癩、瘡毒，療皮膚瘙癢，血風(fēng)癬瘡。冰片辛寒而味苦，入肺、肝經(jīng)，通諸竅，散郁火；《本草綱目》謂其氣先入肺，傳于心脾，能走能散，使壅塞通利，則經(jīng)絡(luò)調(diào)達(dá)而瘡毒能出；桉油從桉葉而來(lái)，芳香而辛涼，治疥癬、濕疹、癰瘡腫毒；方以冰片和桉油調(diào)和諸藥并能泄熱毒，散瘡腫。諸藥合用，共奏清熱解毒，利濕抗疣之功效，與主治病證病因病機(jī)切合。
本發(fā)明組方治療尖銳濕疣和生殖器皰疹有明顯的優(yōu)勢(shì)1、組方中各味藥物的協(xié)同作用，可較好的保證其綜合療效，桃兒七及鴉膽子油起主要治療作用，桉油等可軟化皮膚角質(zhì)，促進(jìn)藥物作用，其他成份有抗感染減輕局部炎癥反應(yīng)。
2、防止復(fù)發(fā)尖銳濕疣治療失敗的關(guān)鍵是易復(fù)發(fā)，本發(fā)明組方可以軟化疣體及周圍皮膚表層，本發(fā)明乳劑藥物可在皮膚表面存留較長(zhǎng)時(shí)間，使主藥易于進(jìn)入皮膚較深部位，殺死感染病毒的細(xì)胞，可有效防止復(fù)發(fā)。
3、本組方是純中藥制劑，各味中藥協(xié)同發(fā)揮治療作用，而不完全依賴鬼臼毒素，因而制劑中鬼臼毒素的濃度較低，對(duì)局部的刺激損傷較小，給患者帶來(lái)的痛苦小，有可能提高治療的依從性，提高療效。
本組方中中藥材來(lái)源廣泛，易于獲取，制造工藝不復(fù)雜，質(zhì)量易于控制，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，生產(chǎn)成本較低，易于生產(chǎn)、運(yùn)輸，使用方便。
桃兒七為方中君藥，藥材中的主要藥效成分鬼臼毒素為治療人尖銳濕疣的首選藥物。由于77版藥典收載的桃兒七藥材標(biāo)準(zhǔn)較為簡(jiǎn)單，難以控制藥材質(zhì)量，因此，對(duì)桃兒七藥材中的鬼臼毒素含量重新進(jìn)行測(cè)定，制定出藥材的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)，從控制原料的質(zhì)量開始來(lái)確保成品質(zhì)量。
實(shí)驗(yàn)例1稀露液(本發(fā)明乳劑)治療尖銳濕疣的臨床觀察1.臨床資料尖銳濕疣患者共48例，男性31例，女性17例。年齡最大65歲，最小16歲。男性多發(fā)于龜頭及冠狀溝，女性多發(fā)于陰唇。所有病例都經(jīng)病理活檢證實(shí)為尖銳濕疣。疣體(單發(fā)或多發(fā))大于5MM，均先行激光灼燒或電切治療。然后隨機(jī)分成2組，分別用稀露液(本發(fā)明乳劑，下同)及氟脲嘧啶外用治療。
表1 病例分組

2.材料與方法第1組選用稀露液涂于疣體或灼燒后創(chuàng)面，5次/日，10天。第2組用15％氟脲嘧啶液涂于疣體或灼燒后創(chuàng)面，4次/日，10天。每一組病人疣體大于5MM，均先行激光或電切治療。療效評(píng)價(jià)分以下4級(jí)1)痊愈疣體完全消失，創(chuàng)面愈合好，表面皮膚或粘膜恢復(fù)正常。
2)顯效疣體基本消失，創(chuàng)面愈合欠佳。
3)進(jìn)步疣體縮小。
4)無(wú)效用藥后疣體無(wú)變化。
痊愈+顯效作臨床有效計(jì)算，進(jìn)步+無(wú)效作無(wú)效計(jì)算。
3.結(jié)果見表2表2 稀露液組(1)與氟脲嘧啶組(2)臨床療效比較

P＜0.05對(duì)觀察結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，Ridit檢驗(yàn)，P＜0.05。稀露液治療組療效顯著高于氟脲嘧啶治療組。對(duì)氟脲嘧啶治療組無(wú)效患者，再用稀露液治療，效果良好，全部治愈。稀露液治療組用藥后無(wú)全身不適等反應(yīng)，局部無(wú)潰爛、大量滲出等局部反應(yīng)。稀露液治療組隨訪3-6個(gè)月，僅1例復(fù)發(fā)。
4.結(jié)論稀露液治療尖銳濕疣具有顯著的療效。治療過(guò)程中患者的局部腐蝕、創(chuàng)面潰爛、滲出未曾出現(xiàn)。再加上其特有的抗菌、殺菌、殺病毒作用，更未出現(xiàn)細(xì)菌感染。在治療過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，對(duì)于較大的尖銳濕疣，如果先用激光灼燒，再外用稀露液，效果更佳，而且可縮短治療時(shí)間。由此可見，稀露液治療尖銳濕疣可成為首選。
實(shí)驗(yàn)例2桃兒七的含量測(cè)定按本發(fā)明技術(shù)方案所述桃兒七藥材的含量測(cè)定方法，對(duì)不同進(jìn)貨時(shí)間的三批桃兒七藥材進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果如下表3 桃兒七的含量測(cè)定

根據(jù)以上結(jié)果，確定桃兒七藥材中按干燥品計(jì)算，含鬼臼毒素(C22H22O8)不得少于2.0％。
實(shí)驗(yàn)例3桃兒七提取工藝研究1.桃兒七提取條件考察桃兒七主要有效成分是鬼臼毒素，不溶于水，溶于乙醇，二氯甲烷，三氯甲烷。采用二氯甲烷回流提取時(shí)，鬼臼毒素提取率最高，又因?yàn)槠溆昧可?，作用?qiáng)，與全方共同提取時(shí)有效成分損失較多，提取率低，故采用二氯甲烷單獨(dú)提取。
桃兒七用回流法進(jìn)行提取，溶媒用量經(jīng)過(guò)初步的4、6、8、10、12、14倍量進(jìn)行提取研究可知，4倍量提取率低，而10、12、14倍量提取率幾乎無(wú)差別，所以我們選擇6、8、10倍量進(jìn)行考察，即以二氯甲烷的用量、提取時(shí)間、提取次數(shù)為考察因素進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn)，并以出膏量及鬼臼毒素含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)(出膏量及鬼臼毒素含量權(quán)重系數(shù)分別為0.5，0.5)篩選最佳工藝條件。
(1)實(shí)驗(yàn)方法稱取桃兒七粗粉50g，采用回流法提取，合并提取液，過(guò)濾，濾液濃縮至干，即得固體粉末。固體粉末用無(wú)水乙醇溶解，將其轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻(每1ml含1g的桃兒七藥材)，得到供試品溶液。
(2)出膏量精密吸取供試品溶液10ml，置于干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105℃干燥至恒重，置于干燥器中放至室溫，稱定重量，計(jì)算，即得。
(3)鬼臼毒素的測(cè)定參照鬼臼毒素(國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)《WS1-(X-043)-2002Z》)含量測(cè)定項(xiàng)下方法進(jìn)行。試驗(yàn)結(jié)果見表4、5、6。
表4 桃兒七正交試驗(yàn)因素水平表

表5 桃兒七回流提取正交試驗(yàn)

注桃兒七正交試驗(yàn)評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用綜合評(píng)分進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，出膏量，鬼臼毒素權(quán)重系數(shù)分別為0.5、0.5。
出膏量評(píng)分＝出膏量/最大出膏量×0.5×100鬼臼毒素評(píng)分＝鬼臼毒素/最大鬼臼毒素×0.5×100綜合評(píng)分＝出膏量評(píng)分+鬼臼毒素評(píng)分正交試驗(yàn)結(jié)果顯示，A3B3C3為最佳方案，據(jù)此條件驗(yàn)證三批，結(jié)果見表6。
表6 桃兒七正交試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果

可見，驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果與正交試驗(yàn)結(jié)果一致。根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定桃兒七的回流提取工藝條件為10倍量二氯甲烷，提取3次，每次3小時(shí)。
2.桃兒七提取物中殘留溶劑的去除及檢查桃兒七采用二氯甲烷提取，得到的固體粉末中經(jīng)檢測(cè)有二氯甲烷的殘留，所以將得到的固體粉末，采用40℃真空(-0.1MP)干燥4小時(shí)的方法處理，并對(duì)二氯甲烷的殘留量進(jìn)行檢查。結(jié)果表明三批樣品中二氯甲烷的殘留量均在標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定范圍內(nèi)，符合規(guī)定，因此采用此法可以將固體粉末中二氯甲烷的殘留量控制到標(biāo)準(zhǔn)要求的范圍內(nèi)。
結(jié)論根據(jù)上述試驗(yàn)結(jié)果，確定出桃兒七的最佳提取工藝為采用10倍量二氯甲烷，提取3次，每次3小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，回收，得到固體粉末，將固體粉末40℃真空(-0.1MP)干燥4小時(shí)，即得。
實(shí)驗(yàn)例4鴉膽子提取工藝研究1.鴉膽子提取條件考察因鴉膽子主要成分為鴉膽子油，為一種脂肪油。故不能與方中其他用水提或醇提藥物共同提取，本發(fā)明采用石油醚回流提取。
(1)提取方法稱取鴉膽子50g，去種皮，取種仁，以出油率為指標(biāo)，用石油醚為溶劑回流提取，按正交L9(34)表進(jìn)行試驗(yàn)，合并提取液，過(guò)濾，濾液減壓回收石油醚，即得鴉膽子油。
(2)出油率測(cè)定將上述得到的鴉膽子油，用石油醚溶解，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用石油醚稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液(每1ml含1g鴉膽子藥材)。精密吸取30ml供試品溶液，置于干燥到恒重的蒸發(fā)皿中，水浴揮發(fā)2小時(shí)后，置于干燥器中，放置30min，稱定重量，計(jì)算。結(jié)果見表7、8、9。
表7 鴉膽子正交試驗(yàn)因素水平表

表8 鴉膽子回流正交試驗(yàn)表

正交試驗(yàn)結(jié)果顯示，A1B3C2為最佳方案，據(jù)此條件，驗(yàn)證三批，結(jié)果見下表。
表9 鴉膽子正交試驗(yàn)結(jié)果

可見，驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果與正交試驗(yàn)結(jié)果相接近，因此根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定鴉膽子的提取條件為6倍量石油醚，回流提取2次，每次3小時(shí)。
2.鴉膽子油中殘留溶劑的檢查鴉膽子采用石油醚提取，經(jīng)減壓回收石油醚后得到鴉膽子油，并對(duì)鴉膽子油中石油醚的殘留量進(jìn)行檢查，結(jié)果表明三批樣品中石油醚的殘留量均在標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定范圍內(nèi)，符合規(guī)定。
3.鴉膽子油的精制按上述方法提取出的鴉膽子油，色深，渾濁，需要進(jìn)一步精制，采用加1％活性炭100℃攪拌15分鐘，趁熱過(guò)濾除炭，濾液即為鴉膽子油精品。
結(jié)論根據(jù)上述試驗(yàn)結(jié)果，確定出鴉膽子的最佳提取工藝為采用6倍量石油醚，提取2次，每次3小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，減壓回收溶劑至無(wú)石油醚味，得到鴉膽子油，將鴉膽子油用1％活性炭100℃攪拌15分鐘，趁熱過(guò)濾除炭，濾液即為鴉膽子油精品。
實(shí)驗(yàn)例5大黃、苦參提取條件考察大黃所含抗菌抗病毒成分為蒽醌類，用一定濃度的乙醇(或呈酸性的乙醇)提取，效果較好，可得到總蒽醌類，而苦參中所含有的有效成分群為總生物堿類，可用酸水滲漉提取或用一定濃度的乙醇回流提取，為比較兩味藥用不同的溶劑、不同的提取方法及合并提取與分別提取有效成分的差異，我們進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)研究。
1.單獨(dú)提取(1)實(shí)驗(yàn)方法分別稱取大黃粗粉、苦參粗粉各40g，分別用(1)10倍量70％乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)；(2)10倍量70％乙醇(加酸)回流提取2次，每次2小時(shí)；(3)0.1％HCL滲漉至滲漉液無(wú)色；(4)65％乙醇滲漉至無(wú)色。將各法的提取液分別合并，過(guò)濾，濃縮至一定體積，分別以大黃素、苦參堿為指標(biāo)來(lái)考察各提取方法。結(jié)果見表10。
(2)大黃素含量測(cè)定參照中國(guó)藥典2000年版一部P18大黃含量測(cè)定項(xiàng)下的高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定。
(3)苦參堿含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部)測(cè)定。
流動(dòng)相的選擇通過(guò)對(duì)幾個(gè)流動(dòng)相的摸索，確定采用以下的色譜條件對(duì)本品的分離度較好，重現(xiàn)性強(qiáng)，具體如下色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.2％磷酸溶液(90∶10)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為205nm。理論板數(shù)按苦參堿峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。
測(cè)定法精密吸取樣品液5ml，置小燒杯中，加入1滴氨水，超聲2分鐘，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用三氯甲烷萃取3次，每次10ml，合并萃取液，轉(zhuǎn)移至蒸發(fā)皿中，水浴揮干，殘?jiān)脽o(wú)水乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，作為供試品溶液；另取苦參堿對(duì)照品，用無(wú)水乙醇制備成每1ml中約含0.1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。
表10 大黃、苦參單獨(dú)提取結(jié)果

結(jié)果單獨(dú)提取時(shí)，以70％乙醇回流提取方法提取的苦參堿、大黃素的含量最高。
2.合并提取(1)實(shí)驗(yàn)方法分別稱取大黃粗粉，苦參粗粉各40g，合并后，分別用①10倍量70％乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)；②10倍量70％乙醇加酸回流提取2次，每次2小時(shí)；③0.1％HCL滲漉至滲漉液接近無(wú)色；④65％乙醇滲漉至滲漉液無(wú)色。將各法的提取液分別合并，過(guò)濾，濃縮至一定體積，分別以大黃素、苦參堿為指標(biāo)來(lái)考察各提取方法。結(jié)果見表11。
(2)含量測(cè)定大黃素、苦參堿的測(cè)定與單獨(dú)提取時(shí)測(cè)定方法相同。
表11 大黃、苦參合并提取結(jié)果

結(jié)果合并提取時(shí)，用70％乙醇回流，大黃素、苦參堿的含量最高，同單獨(dú)提取相比較，大黃素、苦參堿的含量沒(méi)有明顯差別，所以從節(jié)約成本及簡(jiǎn)化工藝考慮，我們選擇用乙醇回流法將大黃、苦參合并提取，并采用正交試驗(yàn)來(lái)對(duì)合并提取工藝進(jìn)行考察。
3.大黃、苦參正交試驗(yàn)(1)采用L9(34)正交表，以大黃素、苦參堿含量為考察指標(biāo)，對(duì)乙醇濃度、用量、回流時(shí)間進(jìn)行考察，進(jìn)一步篩選最佳提取工藝。
實(shí)驗(yàn)方法稱取大黃粗粉、苦參粗粉各30g，按L9(34)正交表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，提取2次，合并提取液，過(guò)濾，濾液濃縮定容至50ml(每1ml含0.6g大黃、0.6g苦參)大黃素的測(cè)定與單獨(dú)提取時(shí)測(cè)定方法相同苦參堿的測(cè)定與單獨(dú)提取時(shí)測(cè)定方法相同結(jié)果見表12、13。
表12 大黃苦參正交試驗(yàn)因素水平表

表13 大黃、苦參正交試驗(yàn)表

注大黃、苦參醇提的2個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用綜合評(píng)分進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，大黃素、苦參堿權(quán)重系數(shù)分別為0.5、0.5。
大黃素評(píng)分＝大黃素量/最大大黃素量×0.5×100苦參堿評(píng)分＝苦參堿量/最大苦參堿量×0.5×100綜合評(píng)分＝苦參堿評(píng)分+大黃素評(píng)分正交試驗(yàn)結(jié)果顯示，提取2次時(shí)，A2B2C2為最佳方案，即采用10倍量的70％乙醇，每次提取2小時(shí)，所以還需對(duì)提取次數(shù)作考察。
(2)大黃、苦參提取次數(shù)的考察實(shí)驗(yàn)方法稱取大黃粗粉、苦參粗粉各100g，按上述最佳方案進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，提取4次，將每次的提取液過(guò)濾后，分別濃縮至相同體積，取每次提取液的濃縮液50ml，經(jīng)處理后，按上述方法測(cè)定大黃素、苦參堿的含量，計(jì)算每次的提取率。結(jié)果見表14。
表14 提取次數(shù)考察結(jié)果

結(jié)論提取3次的提取率平均已經(jīng)達(dá)到93.9％，而第4次的提取率僅為5.6～6.7％，所以從節(jié)約成本考慮，選擇提取3次。
所以大黃、苦參的最佳提取工藝為合并回流提取，用10倍量的70％乙醇，提取3次，每次提取2小時(shí)，據(jù)此條件驗(yàn)證三批，結(jié)果見表15。
表15 大黃、苦參正交試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果

結(jié)論驗(yàn)證結(jié)果與正交試驗(yàn)結(jié)果一致，根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定大黃、苦參提取的工藝條件為10倍量70％乙醇回流提取3次，每次2小時(shí)。
4.除雜質(zhì)的研究大黃、苦參用醇提取時(shí)，提取出了方中藥物的有效成分，同時(shí)也將一些糖類、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、果膠等無(wú)效大分子物質(zhì)提取出來(lái)，這些成分若不除去，放置過(guò)程中會(huì)沉淀出來(lái)，就會(huì)影響制劑的穩(wěn)定性，致使乳劑分層，所以必須除去這些雜質(zhì)。醇提液的精制方法有水沉法、超濾法、離心法等。因?yàn)樗练〞?huì)造成有效成分損失較多，而超濾法速度慢，難于適合大生產(chǎn)，因此我們采用高速離心法對(duì)濃縮至不同濃度的提取液進(jìn)行精制。并對(duì)提取液精制前后的外觀情況、有效成分進(jìn)行考察。
實(shí)驗(yàn)方法取大黃粗粉、苦參粗粉各100g，用10倍量70％乙醇回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液、過(guò)濾，濾液均分為3份，分別濃縮到不同濃度(1∶6，1∶5，1∶3)，置于冰箱內(nèi)，冷藏24小時(shí)后，用高速離心機(jī)離心30分鐘，轉(zhuǎn)數(shù)5000轉(zhuǎn)，傾出上清液，于室溫下放置2日，觀察外觀，并測(cè)定精制液中大黃素、苦參堿的含量。結(jié)果見表16。
表16 精制液中大黃素、苦參堿的含量

結(jié)論由上述試驗(yàn)可知，將提取液濃縮至生藥/體積＝1∶6的濃度，常溫離心30分鐘，轉(zhuǎn)數(shù)為5000r/min，即可得到澄清的藥液。并且大黃素、苦參堿的含量沒(méi)有變化。
實(shí)驗(yàn)例6乳劑處方篩選若使制備出的乳劑具有良好的穩(wěn)定性，應(yīng)根據(jù)油相所含主要成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)式及性質(zhì)，選擇HLB值合適的乳化劑，鴉膽子油為方中臣藥，主要成分為亞油酸，分子式為C18H32O2。桉油的分子式為C10H8O，做成水包油型乳劑，所需的HLB值約為13-16，所以應(yīng)選擇HLB值在此范圍內(nèi)的乳化劑。通過(guò)以上的分析，以及初步的處方摸索，我們?cè)O(shè)計(jì)處方如下，并以乳劑的外觀，分層現(xiàn)象，油水分離、含量為指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)。
1.以吐溫-80與司盤-80作乳化劑進(jìn)行的處方篩選
(1)處方及工藝表17 處方設(shè)計(jì)1

工藝①桃兒七提取物過(guò)100目篩后備用，將冰片過(guò)80目篩后備用。
②取處方量的吐溫-80與司盤-80攪拌混合使成透明溶液。
③稱取處方量的鴉膽子油、桉油、冰片、乳化劑置于研缽中，緩慢加入提取的大黃和苦參中藥液，邊加邊研磨約2分鐘。
④稱取處方量的桃兒七提取物分散至其中，研磨2分鐘后加入蒸餾水稀釋至100ml。
(2)處方評(píng)價(jià)以物理外觀、分層現(xiàn)象、油水分離為指標(biāo)對(duì)處方進(jìn)行評(píng)價(jià)。各指標(biāo)的評(píng)價(jià)方法如下①物理外觀目測(cè)手感，要求色澤均勻一致，質(zhì)地細(xì)膩無(wú)粗糙感覺(jué)，易涂布。結(jié)果見表18。
②分層現(xiàn)象在室溫狀態(tài)下，以離心法進(jìn)行測(cè)定。方法為將乳劑置于帶刻度的離心管中，在轉(zhuǎn)速4000r/min下離心15分鐘，不應(yīng)有分層現(xiàn)象。結(jié)果見表18。
③油水分離分別于恒溫55℃放置6小時(shí)與-15℃放置24小時(shí)，應(yīng)無(wú)油水分離。結(jié)果見表18。
表18 處方篩選結(jié)果如下

結(jié)果表明吐溫-80，司盤-80以不同比例混合制成的乳化劑，不能將本品乳化成均一穩(wěn)定的體系，放置過(guò)程中均出現(xiàn)油水分離現(xiàn)象，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，曾嘗試加入少量十六醇、十八醇，卡波普等輔助乳化劑來(lái)改善油水分離現(xiàn)象，但效果不好，所以需進(jìn)一步篩選合適的乳化系統(tǒng)。
2.以單硬脂酸甘油酯、十二烷基硫酸鈉為乳化劑進(jìn)行的處方篩選根據(jù)吐溫-80，司盤-80作乳化劑制備的乳劑出現(xiàn)的結(jié)果可知，HLB值較大時(shí)，油相易分離出來(lái)，HLB值較小時(shí)，水易從乳劑中分離出。所以我們考慮選用HLB值較低的單硬脂酸甘油酯及HLB值較高的十二烷基硫酸鈉以不同比例配比作乳化劑進(jìn)行處方篩選，同時(shí)加入維生素E作為抗氧劑及山梨酸作為防腐劑以增加乳劑的穩(wěn)定性，根據(jù)不同處方對(duì)家兔、豚鼠皮膚刺激性，及小鼠陰道刺激的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，來(lái)調(diào)整處方中不同成份的用量，以篩選出最終的處方。
(1)處方工藝表19 處方設(shè)計(jì)2

工藝①桃兒七提取物過(guò)100目篩后備用，將冰片過(guò)80目篩后備用。
②按處方量稱取鴉膽子油、單硬脂酸甘油酯、維生素E、冰片置于250ml燒杯中，60-70℃水浴加熱溶解，作為油相。
③稱取處方量的山梨酸、十二烷基硫酸鈉置于中藥液中，60-70℃水浴加熱，作為水相。
④將處方量的桉油及桃兒七提取物置于油相中，攪拌均勻后，將水相緩慢加入到油相中，邊加邊攪拌至乳化均勻，冷至室溫，將其分裝于8ml的塑料瓶中，即得。
(2)處方評(píng)價(jià)物理外觀、分層現(xiàn)象、油水分離評(píng)價(jià)方法同前，結(jié)果見表20。
④含量用HPLC法測(cè)定乳劑中鬼臼毒素的含量。結(jié)果見表20。
⑤刺激性試驗(yàn)家兔、豚鼠皮膚刺激性試驗(yàn)，及小鼠陰道刺激性試驗(yàn)，結(jié)果見表20。
表20 處方評(píng)價(jià)結(jié)果

結(jié)果表明處方6-1，6-2，6-3不均勻，乳滴較大，出現(xiàn)分層及油水分離現(xiàn)象，處方6-1，6-3較稀。處方7外觀均勻，但不如處方8、9、10均勻細(xì)膩，且處方7、8、9流動(dòng)性好，易于涂布均勻，但處方7、處方9的刺激性大。處方10過(guò)于粘稠，流動(dòng)性不好，不易涂布。綜合分析各方面質(zhì)量的情況，最終選定處方8。
實(shí)驗(yàn)例7小試樣品研究(一)小試樣品的制備按實(shí)驗(yàn)例6的研究結(jié)果，確定出如下的本品處方，制備出500ml的小試樣品。
1.處方、工藝表21 處方

工藝同實(shí)驗(yàn)例6.2.(1)項(xiàng)下。
2.處方、工藝評(píng)價(jià)對(duì)小試樣品的外觀、分層、油水分離等進(jìn)行檢查，結(jié)果見表22。
表22 小試樣品的處方、工藝評(píng)價(jià)結(jié)果

(二)小試樣品穩(wěn)定性影響因素實(shí)驗(yàn)取小試樣品，分別進(jìn)行高溫、光照試驗(yàn)，考察各種因素對(duì)樣品的影響，為選擇適宜的包裝材料及方式提供依據(jù)。
1.高溫試驗(yàn)將小試樣品置于具塞大試管中，密封，于60℃及40℃恒溫干燥箱中放置，分別于5、10天取樣，按照乳劑穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)考察項(xiàng)目檢測(cè)。
2.光照試驗(yàn)將小試樣品置于具塞大試管中，密封，于4500Lx照度的光照柜中放置，分別在5、10天取樣，按照乳劑穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)考察項(xiàng)目檢測(cè)。
3.影響因素實(shí)驗(yàn)考察項(xiàng)目分別在第5天、第10天取樣對(duì)乳劑的性狀、均勻性、分層現(xiàn)象、含量等方面進(jìn)行考察。
4.影響因素實(shí)驗(yàn)考察結(jié)果，考察結(jié)果見表23～25。
表23 小試樣品影響因素(高溫60℃)考察結(jié)果

結(jié)果表明高溫60℃條件下10天后，樣品出現(xiàn)分層現(xiàn)象，含量略有下降，說(shuō)明本品對(duì)熱較不穩(wěn)定。
表24 小試樣品影響因素(高溫40℃)考察結(jié)果

結(jié)果表明高溫40℃條件下10天后，樣品性狀、均勻性、分層現(xiàn)象、含量無(wú)明顯變化，說(shuō)明本品在此條件下比較穩(wěn)定。
表25 小試樣品影響因素(光照)考察結(jié)果

結(jié)果表明光照(4500±500LX)10天后，小試樣品的均勻性、分層現(xiàn)象無(wú)明顯變化，但外觀稍有變黃，含量有所降低，這與本品所含成分的復(fù)雜有關(guān)，說(shuō)明本品需避光保存。
5.影響因素實(shí)驗(yàn)考察結(jié)論根據(jù)影響因素實(shí)驗(yàn)考察結(jié)果，可知本品在各種條件下，均勻性均無(wú)明顯變化；光照條件下乳劑表層變黃、變稠，含量略有下降，說(shuō)明本品對(duì)光不穩(wěn)定；在60℃高溫條件下出現(xiàn)分層現(xiàn)象，含量降低，而在40℃條件下各項(xiàng)指標(biāo)無(wú)明顯變化。說(shuō)明本品對(duì)高熱不穩(wěn)定。
因此，本品須貯存于室溫、避光的環(huán)境中。
6.處方確定根據(jù)處方篩選和影響因素的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，表明此處方、工藝可以達(dá)到2000年版中國(guó)藥典二部附錄制劑通則IO項(xiàng)下乳劑的有關(guān)規(guī)定。證明處方、工藝可行。
實(shí)驗(yàn)例8中試樣品的制備按上述實(shí)驗(yàn)例7確定的處方、工藝進(jìn)行中試放大，每批制備10000ml。
1.處方表26 乳劑放大處方(單位g)

工藝(1).桃兒七用10倍量二氯甲烷，回流提取3次，每次3小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收二氯甲烷，得到固體粉末，將固體粉末40℃真空(-0.1MP)干燥4小時(shí)后，過(guò)100目篩備用。將冰片過(guò)80目篩后備用。
(2).鴉膽子用6倍量石油醚，回流提取2次，每次3小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收石油醚，得到的鴉膽子油，用1％的活性炭精制，即得鴉膽子油精品。
(3).大黃、苦參用10倍量的70％的乙醇回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收乙醇，濃縮到相對(duì)密度為1.016(藥材∶體積＝1∶6)，離心除沉淀，得到精制液。
(4).按處方量取上述鴉膽子油、單硬脂酸甘油酯、維生素E、冰片置于容器中，水浴加熱至60-70℃，攪拌溶解，再將處方量的桉油及上述桃兒七提取物置于油相中，攪拌均勻后，作為油相；稱取處方量的山梨酸、十二烷基硫酸鈉置于中藥液中，水浴加熱至60-70℃，攪拌溶解，作為水相；將水相緩慢加入到油相中，邊加邊攪拌至乳化均勻，冷至室溫，將其分裝于8ml的聚乙烯塑料瓶中，即得。
2.三批樣品的評(píng)價(jià)三批樣品的評(píng)價(jià)結(jié)果見表27。
表27 三批中試樣品的檢驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)例9本發(fā)明乳劑桃兒七的鑒別原理桃兒七的主要成分為鬼臼毒素，鬼臼毒素有紫外吸收，故可采用含量測(cè)定項(xiàng)下的高效液相色譜法，將樣品主峰與對(duì)照品主峰的保留時(shí)間進(jìn)行對(duì)比的方式進(jìn)行鑒別。
方法稱取鬼臼毒素對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成每1ml中含0.15mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取裝量差異項(xiàng)下的樣品適量(約相當(dāng)于鬼臼毒素15mg)，照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件及方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，記錄色譜圖。以不加桃兒七制成的乳劑為空白對(duì)照樣品同法進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果見表28。
表28 桃兒七的HPLC法鑒別結(jié)果

測(cè)定結(jié)果對(duì)照品溶液及供試品溶液主峰保留時(shí)間基本一致，而空白對(duì)照無(wú)干擾。證明HPLC法可以作為本品的鑒別方法。
實(shí)驗(yàn)例10本發(fā)明乳劑大黃的鑒別液相色譜法具有專屬性強(qiáng)，可靠性高的特點(diǎn)。因此本品中的大黃采用液相色譜法鑒別。參照中國(guó)藥典2000年版一部P18大黃含量測(cè)定項(xiàng)下的高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定。經(jīng)過(guò)幾個(gè)液相色譜條件的摸索，確定出采用以下色譜條件來(lái)鑒別本品中的大黃。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸溶液(80∶20)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為440nm。理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。
測(cè)定法稱取乳劑10g，置小燒杯中，加入適量無(wú)水乙醇，超聲破乳后，置冰箱中冷卻20分鐘，過(guò)濾，濾液水浴蒸干，殘?jiān)?ml無(wú)水乙醇溶解后，過(guò)濾，濾液加到3ml的流動(dòng)相中，置冰箱中冷卻20分鐘后用0.45μm的濾膜過(guò)濾至澄清，作為供試品溶液；另取大黃素對(duì)照品，用流動(dòng)相制備成每1ml中約含2μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以不加大黃制成的乳劑為空白對(duì)照樣品同法進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果見表29。
表29 大黃的HPLC法鑒別結(jié)果

測(cè)定結(jié)果對(duì)照品溶液及供試品溶液主峰保留時(shí)間基本一致，而空白對(duì)照無(wú)干擾。證明HPLC法可以作為本品的鑒別方法。
實(shí)驗(yàn)例11本發(fā)明乳劑苦參的鑒別采用薄層色譜法對(duì)乳劑中的苦參進(jìn)行鑒別。
方法1參照中國(guó)藥典2000年版一部P161苦參含量測(cè)定項(xiàng)下的薄層展開條件對(duì)本品中的苦參的鑒別進(jìn)行研究。
試驗(yàn)方法稱取乳劑樣品約5g，加無(wú)水乙醇約10ml超聲破乳后，于4℃冷卻20分鐘，過(guò)濾，濾液水浴蒸干，殘?jiān)?ml水溶解后，加入1滴氨水，輕輕振搖，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用氯仿萃取3次，每次10ml，合并萃取液，轉(zhuǎn)移至蒸發(fā)皿中，水浴揮干，用約5ml無(wú)水乙醇溶解，過(guò)濾，作為供試品溶液；另取苦參堿對(duì)照品，用無(wú)水乙醇制備成每1ml中約含5μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。同法按處方比例制備不含苦參的空白溶液一份。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)測(cè)定，分別吸取對(duì)照品和供試品溶液及空白溶液各5ul，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以苯-丙酮-乙酸乙酯-濃氨試液(2∶3∶4∶0.2)為展開劑，展開，取出，涼干，噴以碘化鉍鉀試液，直到出現(xiàn)斑點(diǎn)。結(jié)果樣品在與對(duì)照品的相同位置出現(xiàn)的斑點(diǎn)模糊，與下面的斑點(diǎn)分不開，重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果仍然不好，所以該方法不能作為本品中苦參的鑒別方法。
方法2供試品溶液的制備同方法1。另取氧化苦參堿對(duì)照品，用無(wú)水乙醇制備成每1ml中約含5μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。同法按處方比例制備不含苦參的空白溶液一份。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VI B)測(cè)定，分別吸取對(duì)照品和供試品溶液及空白溶液各5ul，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-氨水(5∶0.6∶0.2)為展開劑，展開，取出，涼干，噴以碘化鉍鉀試液顯色，樣品與對(duì)照品應(yīng)在相同位置出現(xiàn)橘紅色斑點(diǎn)。
結(jié)果樣品與對(duì)照品的相同位置出現(xiàn)橘紅色斑點(diǎn)，而不含苦參的空白樣品在相同位置未出現(xiàn)斑點(diǎn)，對(duì)鑒別無(wú)干擾。所以該方法可以作為本品中苦參的鑒別方法。
實(shí)驗(yàn)例12本發(fā)明乳劑鴉膽子的鑒別鴉膽子中的脂肪油是主要的藥效成分，亞油酸占脂肪油的大部分，因此以亞油酸為對(duì)照，用薄層層析法來(lái)鑒別本品中的鴉膽子。
方法稱取乳劑樣品約5g，加無(wú)水乙醇約10ml，超聲破乳，趁熱過(guò)濾，濾液水浴蒸干，殘?jiān)?ml石油醚溶解后，過(guò)濾至澄清，取濾液作為供試品溶液。另取亞油酸對(duì)照品，用石油醚制備成每1ml中含約2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。同法按處方比例制備不含鴉膽子的空白溶液一份。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VI B)測(cè)定，分別吸取對(duì)照品和供試品溶液及空白溶液各5ul，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-乙酸(85∶15∶0.1)為展開劑，飽和1小時(shí)，上行展開，取出，涼干，置于碘缸中用碘蒸氣熏約15分鐘，直至出現(xiàn)清晰斑點(diǎn)。樣品與對(duì)照品在相同位置出現(xiàn)棕色斑點(diǎn)。
結(jié)論三批樣品均顯正反應(yīng)，而空白溶液為負(fù)反應(yīng)，不干擾鑒別。證明此鑒別反應(yīng)可作為本品中鴉膽子的鑒別試驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)例13本發(fā)明乳劑冰片、桉油的鑒別冰片、桉油的分子結(jié)構(gòu)相似，極性相近，因此我們分別以冰片、桉油精為對(duì)照，用同一個(gè)薄層層析條件來(lái)鑒別本品中的冰片、桉油。
方法稱取乳劑樣品約5g，加無(wú)水乙醇約10ml，超聲破乳，于4℃冷卻約6-8分鐘，過(guò)濾至澄清，取濾液作為供試品溶液。另取冰片、桉油精對(duì)照品適量，分別加無(wú)水乙醇制備成每1ml中約含5μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。同法按處方比例制備不含冰片、不含桉油的空白溶液各一份。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)測(cè)定，分別吸取對(duì)照品和供試品溶液及空白溶液各5ul，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(9∶0.5)為展開劑，展開，取出，涼干，噴以新配制的1％香草醛硫酸溶液顯色，即可。結(jié)果與冰片對(duì)照品相同位置出現(xiàn)紫紅色斑點(diǎn)，與桉油精相同位置出現(xiàn)紫褐色斑點(diǎn)。
結(jié)論三批樣品均顯正反應(yīng)，而空白溶液為負(fù)反應(yīng)，不干擾鑒別。證明此鑒別反應(yīng)可作為本品中冰片、桉油的鑒別試驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)例14本發(fā)明乳劑含量測(cè)定的方法學(xué)研究1.檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇方法取鬼臼毒素對(duì)照品適量，用流動(dòng)相配制成每1ml中約含50μg的溶液作為供試品溶液。照中國(guó)藥典2000年版一部附錄V A分光光度法，測(cè)定上述供試品溶液的紫外吸收光譜圖。
結(jié)果鬼臼毒素在210nm雖然也有吸收峰，但是由于此處為末端吸收，其它成分易造成干擾，因此不列為特征吸收峰。在291nm處有一特征峰，重現(xiàn)性較好，且與文獻(xiàn)報(bào)道的最大吸收波長(zhǎng)292nm基本一致，因此選擇292nm作為本品的檢測(cè)波長(zhǎng)。
2.專屬性試驗(yàn)空白樣品溶液取空白樣品約10.0g，照含量測(cè)定方法配制溶液，即得。
對(duì)照品溶液稱取本品對(duì)照品15mg，照含量測(cè)定項(xiàng)下的對(duì)照品方法配制溶液，即得。
乳劑樣品取本品約10.0g，照含量測(cè)定方法配制溶液，即得。
分別取上述溶液各20μl，注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，結(jié)果見表30。
表30 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明在所選用的色譜條件下，樣品的雜質(zhì)峰與主峰均能完全分離，空白溶劑與去除桃兒七后制成的空白對(duì)照樣均無(wú)干擾，對(duì)照品及乳劑樣品按鬼臼毒素峰計(jì)算的理論板數(shù)均大于2000，與相鄰峰的分離度大于1.5，符合系統(tǒng)適用性要求。
3.檢測(cè)限將檢測(cè)器靈敏度調(diào)至最大，取對(duì)照品適量，用流動(dòng)相稀釋成每1ml中含4.48′10-5mg的供試液，精密量取一定量注入液相色譜儀，量取峰高，當(dāng)進(jìn)樣量為10ml時(shí)鬼臼毒素峰高約為基線噪音的三倍，故最低檢出限為0.45ng。
4.含量測(cè)定時(shí)樣品處理方法的研究4.1樣品處理方法選擇本品為均一的乳劑，含量測(cè)定時(shí)為充分提取出有效成分，進(jìn)行了樣品處理方法的研究。即分別取樣品10g，采用以下三種方法進(jìn)行破乳處理(1)加無(wú)水乙醇約50ml，超聲處理后，冰浴40分鐘過(guò)濾；(2)直接加流動(dòng)相(63％的甲醇)約50ml超聲溶解后，冰浴40分鐘過(guò)濾；(3)將乳劑加酸(并對(duì)加酸的量進(jìn)行考察)后，再加流動(dòng)相(63％的甲醇)約50ml超聲溶解后，冰浴40分鐘過(guò)濾。
結(jié)果第一種方法處理后的樣品，過(guò)濾后，濾液轉(zhuǎn)移到流動(dòng)相中，又出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象，過(guò)濾多次，仍混濁，無(wú)法進(jìn)樣。第二種方法處理的樣品，雖然已經(jīng)破乳，但仍然很粘稠，難于過(guò)濾。第三種方法處理后的樣品，易于過(guò)濾，濾液澄清，是因?yàn)榧铀岷罄谄迫?，并使有效成分溶于流?dòng)相中，但加酸過(guò)多，考慮可能對(duì)有效成分的穩(wěn)定性有影響，所以為選擇最小的鹽酸用量即可破乳，又對(duì)樣品穩(wěn)定性無(wú)影響，我們作了以下研究。
4.2對(duì)加鹽酸的量進(jìn)行考察方法取樣品10g，精密稱定，分別加入0.1ml、0.13ml、0.16ml的鹽酸來(lái)處理樣品，按含量測(cè)定項(xiàng)下的方法來(lái)測(cè)定含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)加鹽酸的量對(duì)本品的穩(wěn)定性無(wú)影響，但考慮到加酸處理后的樣品pH較低(約為2.5)，對(duì)色譜柱有損害，需要調(diào)pH到3.0～5.0，為方便調(diào)pH值，所以我們選擇加0.1ml的鹽酸來(lái)進(jìn)行樣品的處理。
由于加鹽酸后樣品溶液pH值低，對(duì)色譜柱的使用壽命影響較大，因此用堿將pH值調(diào)節(jié)至色譜柱的正常使用范圍內(nèi)。
4.3對(duì)照品溶液的配制由4.2可知，供試品溶液的pH值為3.0～5.0，為減少含量測(cè)定的誤差，我們將對(duì)照品溶液的pH值也調(diào)為3.0～5.0之間，同時(shí)用不調(diào)pH的對(duì)照品溶液作對(duì)比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)調(diào)pH值的對(duì)照品溶液與不調(diào)pH的對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性無(wú)差別，峰面積幾乎一致。所以為方便操作，對(duì)照品溶液直接用流動(dòng)相配制，即可。
5.進(jìn)樣精密度試驗(yàn)稱取鬼臼毒素對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相制成每1ml中分別約含150μg的溶液，照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄色譜圖，記錄峰面積，計(jì)算RSD％。測(cè)定結(jié)果見表31表31 進(jìn)樣精密度試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)論本品精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果符合要求。
6.線性范圍試驗(yàn)取本品對(duì)照品約38mg，精密稱定，置于50ml量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取3.0、4.0、5.0、6.0、7.0ml，置于25ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試液1、2、3、4、5；吸取上述溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以樣品濃度C(mg/ml)為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，按最小二乘法計(jì)算回歸方程和相關(guān)系數(shù)。結(jié)果見表32及下圖。
表32 線性范圍試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)論鬼臼毒素濃度為0.09～0.21mg/ml時(shí)線性關(guān)系良好。
7.溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)取乳劑樣品，照含量測(cè)定項(xiàng)下方法配制溶液，分別在0、2、4、6、8小時(shí)進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果見表33。
表33 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)論樣品溶液在8小時(shí)內(nèi)峰面積基本穩(wěn)定，測(cè)定誤差在±2％以內(nèi)，故在8小時(shí)內(nèi)測(cè)定對(duì)結(jié)果無(wú)影響。
8.加樣回收率試驗(yàn)取對(duì)照品約15mg，精密稱定，用流動(dòng)相制成每1ml中約含鬼臼毒素0.15mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；分別精密稱取乳劑樣品約5.0g，置100ml錐形瓶中，另取鬼臼毒素對(duì)照品約10mg6份，精密稱定，置于上述100ml錐形瓶中，輕搖使混合后，以下按含量測(cè)定項(xiàng)下方法進(jìn)行試驗(yàn)，計(jì)算回收率。結(jié)果見表34。
表34 回收率試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)論本方法回收率試驗(yàn)較好，符合測(cè)試要求。
9.重復(fù)性試驗(yàn)方法照含量測(cè)定項(xiàng)下方法平行配制供試品溶液6份，在同一實(shí)驗(yàn)室由同一人員，用同一臺(tái)儀器測(cè)定，計(jì)算其含量。結(jié)果見表35。
表35 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

平均含量＝1.49 RSD(％)＝1.05％結(jié)論本法重復(fù)性試驗(yàn)符合規(guī)定。
10.中間精密度試驗(yàn)方法照含量測(cè)定項(xiàng)下方法配制供試品溶液6份，在不同時(shí)間，由不同人員，用不同儀器測(cè)定樣品含量。結(jié)果見表36。
表36 中間精密度試驗(yàn)結(jié)果

平均含量＝1.49 RSD(％)＝1.06％結(jié)論中間精密度試驗(yàn)結(jié)果良好，符合測(cè)試要求。
11.三批樣品含量測(cè)定取三批樣品，按上述含量測(cè)定方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表37。
表37 三批樣品的含量測(cè)定結(jié)果



圖1線性范圍試驗(yàn)結(jié)果圖實(shí)施例1本發(fā)明乳劑桃兒七65g鴉膽子574g 大黃100g 苦參100g桉油10g 冰片10g 維生素E 4g山梨酸1g單硬脂酸甘油酯52g十二烷基硫酸鈉12g；桃兒七用10倍量二氯甲烷，回流提取3次，每次3小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收二氯甲烷，得到固體粉末，將固體粉末40℃真空(-0.1MP)干燥4小時(shí)后，過(guò)100目篩備用；冰片過(guò)80目篩后備用；鴉膽子用6倍量石油醚，回流提取2次，每次3小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收石油醚至無(wú)石油醚味，得到鴉膽子油，加1％活性炭于100℃攪拌15分鐘，趁熱過(guò)濾除炭，濾液備用；大黃、苦參用10倍量的70％乙醇回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收乙醇，濃縮到相對(duì)密度為1.016，離心除沉淀，上清液備用。
按處方量取上述鴉膽子油、單硬脂酸甘油酯、維生素E、冰片置于容器中，水浴加熱至60-70℃，攪拌溶解，再將處方量的桉油及上述桃兒七提取物置于油相中，攪拌均勻后，作為油相；稱取處方量的山梨酸、十二烷基硫酸鈉置于中藥液中，水浴加熱至60-70℃，攪拌溶解，作為水相；將水相緩慢加入到油相中，邊加邊攪拌至乳化均勻，冷至室溫，制成乳劑1000ml。
實(shí)施例2本發(fā)明洗劑稱取桃兒七75g、鴉膽子500g、大黃110g、苦參90g；桃兒七用12倍量二氯甲烷，回流提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收二氯甲烷，得到固體粉末，將固體粉末40℃真空(-0.1MP)干燥4小時(shí)后，過(guò)100目篩，得桃兒七提取物，備用；冰片過(guò)80目篩，備用；鴉膽子用7倍量石油醚，回流提取3次，每次1小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收石油醚至無(wú)石油醚味，得到鴉膽子油，加1％活性炭于100℃攪拌15分鐘，趁熱過(guò)濾除炭，濾液備用，得鴉膽子油精品；大黃、苦參用11倍量的60％乙醇回流提取4次，每次1小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收乙醇，濃縮到相對(duì)密度為1.016，離心除沉淀，上清液備用；取桃兒七提取物、鴉膽子油精品、上清液，加入常規(guī)輔料或賦形劑，制備成洗劑。
實(shí)施例3本發(fā)明凝膠劑稱取桃兒七55g、鴉膽子650g、大黃90g、苦參110g、桉油11g、冰片9g；桃兒七用12倍量二氯甲烷，回流提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收二氯甲烷，得到固體粉末，將固體粉末40℃真空(-0.1MP)干燥4小時(shí)后，過(guò)100目篩，得桃兒七提取物，備用；冰片過(guò)80目篩，備用；鴉膽子用7倍量石油醚，回流提取3次，每次1小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收石油醚至無(wú)石油醚味，得到鴉膽子油，加1％活性炭于100℃攪拌15分鐘，趁熱過(guò)濾除炭，濾液備用，得鴉膽子油精品；大黃、苦參用11倍量的60％乙醇回流提取4次，每次1小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收乙醇，濃縮到相對(duì)密度為1.016，離心除沉淀，上清液備用；取桃兒七提取物、鴉膽子油精品、上清液、桉油、冰片，加入常規(guī)輔料或賦形劑，制備成凝膠劑。
實(shí)施例4本發(fā)明乳劑(提取物)取桃兒七提取物2.78g，鴉膽子油70.0g，大黃、苦參中藥液600ml，桉油10.0g，冰片10.1g，維生素E 4g，山梨酸1.0g，十二烷基硫酸鈉12.0g，單硬脂酸甘油酯52g。桃兒七提取物過(guò)100目篩后備用；將冰片過(guò)80目篩后備用；按處方量稱取鴉膽子油、單硬脂酸甘油酯、維生素E、冰片置于容器中，60-70℃水浴加熱溶解，作為油相；稱取處方量的山梨酸、十二烷基硫酸鈉置于中藥液中，60-70℃水浴加熱，作為水相；將處方量的桉油及桃兒七提取物置于油相中，攪拌均勻后，將水相緩慢加入到油相中，邊加邊攪拌至乳化均勻，冷至室溫，制成乳劑1000ml。
實(shí)施例5桃兒七的質(zhì)量控制方法鑒別取桃兒七粉末約0.5g，加10ml二氯甲烷超聲提取約10分鐘，過(guò)濾，濾液水浴蒸干，加2ml無(wú)水乙醇使溶解，作為供試品溶液；另取鬼臼毒素對(duì)照品10mg，加無(wú)水乙醇2ml使溶解，作為對(duì)照品溶液；取對(duì)照品與供試品溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以9∶1的氯仿∶甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)清晰，則供試品與對(duì)照品應(yīng)在相同位置出現(xiàn)相同斑點(diǎn)。
含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VI D)測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以63∶37的甲醇∶水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為292nm；理論板數(shù)按鬼臼毒素峰計(jì)應(yīng)不低于1500，主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求；取經(jīng)70℃干燥至恒重的鬼臼毒素對(duì)照品適量，用上述流動(dòng)相溶解制成每1ml中約含0.13mg的溶液，即得對(duì)照品溶液；取桃兒七粉末(過(guò)4號(hào)篩)約0.5g[同時(shí)另取本品粉末測(cè)定水分(中國(guó)藥典2000年版一部附錄IXH第一法)]，精密稱定，置燒瓶中，加二氯甲烷80ml，回流提取4小時(shí)，提取液回收二氯甲烷并濃縮至干，殘?jiān)脽o(wú)水乙醇溶解并轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加無(wú)水乙醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得；本品按干燥品計(jì)算，含鬼臼毒素(C22H22O8)不得少于2.0％。
實(shí)施例6本發(fā)明乳劑的質(zhì)量控制方法含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VID)測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(63∶37)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為292nm。理論板數(shù)按鬼臼毒素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000，主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。
測(cè)定法取乳劑約10g，精密稱重，置于100ml的錐形瓶中，加0.1ml鹽酸輕搖，加入約50ml流動(dòng)相，超聲20分鐘(超聲時(shí)上下?lián)u動(dòng)2次)，溶解后冰浴30分鐘，立即減壓過(guò)濾，用流動(dòng)相少量多次洗滌沉淀及濾瓶，將洗滌液及濾液合并置燒杯中，放至室溫，用1mol/L的氫氧化鈉調(diào)pH值3.0～5.0，將此濾液轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，流動(dòng)相加至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取鬼臼毒素對(duì)照品適量，用流動(dòng)相配制成每1ml中約含0.15mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量，即得。
鑒別A.桃兒七的鑒別稱取鬼臼毒素對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成每1ml中含0.15mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；取裝量差異項(xiàng)下的樣品適量(約相當(dāng)于鬼臼毒素15mg)，照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件及方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，記錄色譜圖；以不加桃兒七制成的乳劑為空白對(duì)照樣品同法進(jìn)行試驗(yàn)；對(duì)照品溶液及供試品溶液主峰保留時(shí)間基本一致，而空白對(duì)照無(wú)干擾。
B.大黃的鑒別色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸溶液(80∶20)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為440nm。理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于1500；稱取乳劑10g，置小燒杯中，加入適量無(wú)水乙醇，超聲破乳后，置冰箱中冷卻20分鐘，過(guò)濾，濾液水浴蒸干，殘?jiān)?ml無(wú)水乙醇溶解后，過(guò)濾，濾液加到3ml的流動(dòng)相中，置冰箱中冷卻20分鐘后用0.45μm的濾膜過(guò)濾至澄清，作為供試品溶液；另取大黃素對(duì)照品，用流動(dòng)相制備成每1ml中約含2μg的溶液，作為對(duì)照品溶液；取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；以不加大黃制成的乳劑為空白對(duì)照樣品同法進(jìn)行試驗(yàn)；對(duì)照品溶液及供試品溶液主峰保留時(shí)間基本一致，而空白對(duì)照無(wú)干擾。
C.苦參的鑒別稱取乳劑樣品約5g，加無(wú)水乙醇約10ml超聲破乳后，于4℃冷卻20分鐘，過(guò)濾，濾液水浴蒸干，殘?jiān)?ml水溶解后，加入1滴氨水，輕輕振搖，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用氯仿萃取3次，每次10ml，合并萃取液，轉(zhuǎn)移至蒸發(fā)皿中，水浴揮干，用約5ml無(wú)水乙醇溶解，過(guò)濾，作為供試品溶液；另取氧化苦參堿對(duì)照品，用無(wú)水乙醇制備成每1ml中約含5μg的溶液，作為對(duì)照品溶液；同法按處方比例制備不含苦參的空白溶液一份；照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)測(cè)定，分別吸取對(duì)照品和供試品溶液及空白溶液各5ul，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-氨水(5∶0.6∶0.2)為展開劑，展開，取出，涼干，噴以碘化鉍鉀試液顯色，樣品與對(duì)照品應(yīng)在相同位置出現(xiàn)橘紅色斑點(diǎn)，而不含苦參的空白樣品應(yīng)在相同位置未出現(xiàn)斑點(diǎn)。
D.鴉膽子的鑒別稱取乳劑樣品約5g，加無(wú)水乙醇約10ml，超聲破乳，趁熱過(guò)濾，濾液水浴蒸干，殘?jiān)?ml石油醚溶解后，過(guò)濾至澄清，取濾液作為供試品溶液；另取亞油酸對(duì)照品，用石油醚制備成每1ml中含約2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；同法按處方比例制備不含鴉膽子的空白溶液一份；照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)測(cè)定，分別吸取對(duì)照品和供試品溶液及空白溶液各5ul，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-乙酸(85∶15∶0.1)為展開劑，飽和1小時(shí)，上行展開，取出，涼干，置于碘缸中用碘蒸氣熏約15分鐘，直至出現(xiàn)清晰斑點(diǎn)；樣品與對(duì)照品在相同位置出現(xiàn)棕色斑點(diǎn)。
E、冰片、桉油的鑒別稱取乳劑樣品約5g，加無(wú)水乙醇約10ml，超聲破乳，于4℃冷卻約6-8分鐘，過(guò)濾至澄清，取濾液作為供試品溶液；另取冰片、桉油精對(duì)照品適量，分別加無(wú)水乙醇制備成每1ml中約含5μg的溶液，作為對(duì)照品溶液；同法按處方比例制備不含冰片、不含桉油的空白溶液各一份；照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)測(cè)定，分別吸取對(duì)照品和供試品溶液及空白溶液各5ul，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(9∶0.5)為展開劑，展開，取出，涼干，噴以新配制的1％香草醛硫酸溶液顯色，即可；結(jié)果應(yīng)與冰片對(duì)照品相同位置出現(xiàn)紫紅色斑點(diǎn)，與桉油精相同位置出現(xiàn)紫褐色斑點(diǎn)。
權(quán)利要求
1.一種治療尖銳性濕疣、生殖器皰疹的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由如下重量配比的原料藥制成桃兒七52～78重量份 鴉膽子460～690重量份大黃80～120重量份 苦參80～120重量份。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由如下重量配比的原料藥制成桃兒七65重量份 鴉膽子574重量份大黃100重量份 苦參100重量份。
3.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由如下重量配比的原料藥制成桃兒七55重量份 鴉膽子650重量份大黃90重量份 苦參110重量份。
4.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由如下重量配比的原料藥制成桃兒七75重量份 鴉膽子500重量份大黃110重量份 苦參90重量份。
5.如權(quán)利要求1-4所述的任意一種藥物組合物，其特征在于該藥物組合物原料藥中加入桉油8～12重量份、冰片8～12重量份。
6.如權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物原料藥中桉油與冰片的重量份為桉油10重量份、冰片10重量份，桉油9重量份、冰片11重量份或桉油11重量份、冰片9重量份。
7.如權(quán)利要求1、2、3、4或6所述的藥物組合物，其特征在于取本發(fā)明藥物組合物原料藥，經(jīng)對(duì)各藥的有效成分分別或組合進(jìn)行加工提取后，加入常規(guī)輔料或賦形劑，制備成各種臨床可接受的外用藥物劑型真溶液類劑型、膠體溶液類劑型、乳濁液類劑型、混懸液類劑型或氣體分散體劑型。
8.如權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于取本發(fā)明藥物組合物原料藥，經(jīng)對(duì)各藥的有效成分分別或組合進(jìn)行加工提取后，加入常規(guī)輔料或賦形劑，制備成各種臨床可接受的外用藥物劑型真溶液類劑型、膠體溶液類劑型、乳濁液類劑型、混懸液類劑型或氣體分散體劑型。
9.如權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其特征在于所說(shuō)的真溶液類劑型選自于芳香水劑、溶液劑或醑劑等中的一種；所說(shuō)的膠體溶液類劑型選自于膠漿劑、火棉膠劑或凝膠劑等中的一種；所說(shuō)的乳濁液類劑型選自于O/W型或W/O型乳劑等中的一種；所說(shuō)的混懸液類劑型選自于合劑、洗劑或混懸劑等中的一種；所說(shuō)的氣體分散體劑型選自于噴霧劑等中的一種。
10.如權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其特征在于所說(shuō)的真溶液類劑型選自于芳香水劑、溶液劑或醑劑等中的一種；所說(shuō)的膠體溶液類劑型選自于膠漿劑、火棉膠劑或凝膠劑等中的一種；所說(shuō)的乳濁液類劑型選自于O/W型或W/O型乳劑等中的一種；所說(shuō)的混懸液類劑型選自于合劑、洗劑或混懸劑等中的一種；所說(shuō)的氣體分散體劑型選自于噴霧劑等中的一種。
11.如權(quán)利要求1、2、3、4或6所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為按重量配比稱取原料藥，桃兒七用6～14倍量二氯甲烷，回流提取1～3次，每次1～3小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收二氯甲烷，得到固體粉末，將固體粉末40℃、-0.1MP真空干燥4小時(shí)后，過(guò)100目篩，得桃兒七提取物，備用；冰片過(guò)80目篩，備用；鴉膽子用6～10倍量石油醚，回流提取1～3次，每次1～3小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收石油醚至無(wú)石油醚味，得到鴉膽子油，加1％活性炭于100℃攪拌15分鐘，趁熱過(guò)濾除炭，得鴉膽子油精品；大黃、苦參用8～12倍量的60％～85％乙醇回流提取1～4次，每次1～3小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收乙醇，濃縮到相對(duì)密度為1.016，離心除沉淀，上清液備用；取上述桃兒七提取物、鴉膽子油精品、大黃、苦參合并提取的上清液，或再加入桉油、冰片，加入常規(guī)輔料或賦形劑，制備成各種臨床可接受的藥物劑型真溶液類劑型、膠體溶液類劑型、乳濁液類劑型、混懸液類劑型或氣體分散體劑型。
12.如權(quán)利要求11所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為按重量配比稱取原料藥，桃兒七用12倍量二氯甲烷，回流提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收二氯甲烷，得到固體粉末，將固體粉末40℃、-0.1MP真空干燥4小時(shí)后，過(guò)100目篩，得桃兒七提取物，備用；冰片過(guò)80目篩，備用；鴉膽子用7倍量石油醚，回流提取3次，每次1小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收石油醚至無(wú)石油醚味，得到鴉膽子油，加1％活性炭于100℃攪拌15分鐘，趁熱過(guò)濾除炭，濾液備用，得鴉膽子油精品；大黃、苦參用11倍量的60％乙醇回流提取4次，每次1小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收乙醇，濃縮到相對(duì)密度為1.016，離心除沉淀，上清液備用；取桃兒七提取物、鴉膽子油精品、上清液，或再加入桉油、冰片，加入常規(guī)輔料或賦形劑，制備成各種臨床可接受的藥物劑型真溶液類劑型、膠體溶液類劑型、乳濁液類劑型、混懸液類劑型或氣體分散體劑型。
13.如權(quán)利要求5所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為按重量配比稱取原料藥，桃兒七用6～14倍量二氯甲烷，回流提取1～3次，每次1～3小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收二氯甲烷，得到固體粉末，將固體粉末40℃、-0.1MP真空干燥4小時(shí)后，過(guò)100目篩，得桃兒七提取物，備用；冰片過(guò)80目篩，備用；鴉膽子用6～10倍量石油醚，回流提取1～3次，每次1～3小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收石油醚至無(wú)石油醚味，得到鴉膽子油，加1％活性炭于100℃攪拌15分鐘，趁熱過(guò)濾除炭，得鴉膽子油精品；大黃、苦參用8～12倍量的60％～85％乙醇回流提取1～4次，每次1～3小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收乙醇，濃縮到相對(duì)密度為1.016，離心除沉淀，上清液備用；取上述桃兒七提取物、鴉膽子油精品、大黃、苦參合并提取的上清液，再加入桉油、冰片，加入常規(guī)輔料或賦形劑，制備成各種臨床可接受的藥物劑型真溶液類劑型、膠體溶液類劑型、乳濁液類劑型、混懸液類劑型或氣體分散體劑型。
14.如權(quán)利要求13所述的藥物組合物制備方法，其特征在于該方法為按重量配比稱取原料藥，桃兒七用12倍量二氯甲烷，回流提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收二氯甲烷，得到固體粉末，將固體粉末40℃、-0.1MP真空干燥4小時(shí)后，過(guò)100目篩，得桃兒七提取物，備用；冰片過(guò)80目篩，備用；鴉膽子用7倍量石油醚，回流提取3次，每次1小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收石油醚至無(wú)石油醚味，得到鴉膽子油，加1％活性炭于100℃攪拌15分鐘，趁熱過(guò)濾除炭，濾液備用，得鴉膽子油精品；大黃、苦參用11倍量的60％乙醇回流提取4次，每次1小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收乙醇，濃縮到相對(duì)密度為1.016，離心除沉淀，上清液備用；取桃兒七提取物、鴉膽子油精品、上清液，再加入桉油、冰片，加入常規(guī)輔料或賦形劑，制備成各種臨床可接受的藥物劑型真溶液類劑型、膠體溶液類劑型、乳濁液類劑型、混懸液類劑型或氣體分散體劑型。
15.一種治療尖銳性濕疣、生殖器皰疹的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由如下重量配比的原料藥制成乳劑桃兒七52～78重量份、鴉膽子460～690重量份、大黃80～120重量份、苦參80～120重量份、桉油8～12重量份、冰片8～12重量份、維生素E 3.2～4.8重量份、山梨酸0.8～1.2重量份、單硬脂酸甘油酯41.6～63.4重量份、十二烷基硫酸鈉9.6～14.4重量份。
16.如權(quán)利要求15所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由如下重量配比的原料藥制成乳劑桃兒七65重量份、鴉膽子574重量份、大黃100重量份、苦參100重量份、桉油10重量份、冰片10重量份、維生素E 4重量份、山梨酸1重量份、單硬脂酸甘油酯52重量份、十二烷基硫酸鈉12重量份。
17.如權(quán)利要求15所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由如下重量配比的原料藥制成乳劑桃兒七55重量份、鴉膽子650重量份、大黃90重量份、苦參110重量份、桉油9重量份、冰片11重量份、維生素E 3.5重量份、山梨酸1.1重量份、單硬脂酸甘油酯45重量份、十二烷基硫酸鈉14重量份。
18.如權(quán)利要求15所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由如下重量配比的原料藥制成乳劑桃兒七75重量份、鴉膽子500重量份、大黃110重量份、苦參90重量份、桉油11重量份、冰片9重量份、維生素E4.5重量份、山梨酸0.9重量份、單硬脂酸甘油酯60重量份、十二烷基硫酸鈉10重量份。
19.如權(quán)利要求15、16、17或18所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為按重量配比稱取原料藥，桃兒七用6～14倍量二氯甲烷，回流提取1～3次，每次1～3小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收二氯甲烷，得到固體粉末，將固體粉末40℃、-0.1MP真空干燥4小時(shí)后，過(guò)100目篩，得桃兒七提取物，備用；冰片過(guò)80目篩，備用；鴉膽子用6～10倍量石油醚，回流提取1～3次，每次1～3小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收石油醚至無(wú)石油醚味，得到鴉膽子油，加1％活性炭于100℃攪拌15分鐘，趁熱過(guò)濾除炭，濾液備用，得鴉膽子油精品；大黃、苦參用8～12倍量的60％～85％乙醇回流提取1～4次，每次1～3小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收乙醇，濃縮到相對(duì)密度為1.016，離心除沉淀，上清液備用；取上述鴉膽子油精品、單硬脂酸甘油酯、維生素E、冰片置于容器中，水浴加熱至60-70℃，攪拌溶解，再將桉油及上述桃兒七提取物置于油相中，攪拌均勻后，作為油相；稱取山梨酸、十二烷基硫酸鈉置于中藥液中，水浴加熱至60-70℃，攪拌溶解，作為水相；將水相緩慢加入到油相中，邊加邊攪拌至乳化均勻，冷至室溫，制成乳劑。
20.如權(quán)利要求19所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為按重量配比稱取原料藥，桃兒七用10倍量二氯甲烷，回流提取3次，每次3小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收二氯甲烷，得到固體粉末，將固體粉末40℃、-0.1MP真空干燥4小時(shí)后，過(guò)100目篩備用；冰片過(guò)80目篩后備用；鴉膽子用6倍量石油醚，回流提取2次，每次3小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收石油醚至無(wú)石油醚味，得到鴉膽子油，加1％活性炭于100℃攪拌15分鐘，趁熱過(guò)濾除炭，濾液備用；大黃、苦參用10倍量的70％乙醇回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濾液回收乙醇，濃縮到相對(duì)密度為1.016，離心除沉淀，上清液備用；取上述鴉膽子油、單硬脂酸甘油酯、維生素E、冰片置于容器中，水浴加熱至60-70℃，攪拌溶解，再將處方量的桉油及上述桃兒七提取物置于油相中，攪拌均勻后，作為油相；稱取處方量的山梨酸、十二烷基硫酸鈉置于中藥液中，水浴加熱至60-70℃，攪拌溶解，作為水相；將水相緩慢加入到油相中，邊加邊攪拌至乳化均勻，冷至室溫，制成乳劑。
21.一種治療尖銳性濕疣、生殖器皰疹的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物直接以桃兒七提取物，鴉膽子油，大黃、苦參中藥液按如下g/ml的重量體積比投料入藥桃兒七提取物2.78重量份，鴉膽子油70重量份，大黃、苦參中藥液600體積比，桉油10重量份，冰片10重量份，維生素E 4重量份，山梨酸1重量份，十二烷基硫酸鈉12重量份，單硬脂酸甘油酯52重量份，加水至1000重量份制成乳劑。
22.如權(quán)利要求21所述藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為桃兒七提取物過(guò)100目篩后備用；將冰片過(guò)80目篩后備用；按處方量稱取鴉膽子油、單硬脂酸甘油酯、維生素E、冰片置于容器中，于60-70℃水浴中加熱溶解，作為油相；稱取處方量的山梨酸、十二烷基硫酸鈉加入中藥液中，60-70℃水浴加熱攪拌溶解，作為水相；將處方量的桉油及桃兒七提取物加入到油相中，攪拌均勻后，將水相緩慢加入到油相中，邊加邊攪拌至乳化均勻，冷至室溫，將其分裝于適宜的瓶中，即得。
23.如權(quán)利要求1、2、3、4、6、15、16、17或18所述藥物組合物中桃兒七藥材的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括下述鑒別和/或含量測(cè)定方法中的一種或兩種鑒別取桃兒七粉末0.5g，加10ml二氯甲烷超聲提取10分鐘，過(guò)濾，濾液水浴蒸干，加2ml無(wú)水乙醇使溶解，作為供試品溶液；另取鬼臼毒素對(duì)照品10mg，加無(wú)水乙醇2ml使溶解，作為對(duì)照品溶液；取對(duì)照品與供試品溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以10～8∶1的氯仿-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)清晰，供試品與對(duì)照品應(yīng)在相同位置出現(xiàn)相同斑點(diǎn)；含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以60～65∶40～35的甲醇-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為292nm；理論板數(shù)按鬼臼毒素峰計(jì)應(yīng)不低于1500，主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)為1.5以上；取經(jīng)70℃干燥至恒重的鬼臼毒素對(duì)照品，用上述流動(dòng)相溶解制成每1ml中含0.13mg的溶液，即得對(duì)照品溶液；取桃兒七粉末0.5g，過(guò)4號(hào)篩，稱定，置燒瓶中，加二氯甲烷80ml，回流提取4小時(shí)，提取液回收二氯甲烷并濃縮至干，殘?jiān)脽o(wú)水乙醇溶解并轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加無(wú)水乙醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得；本品按干燥品計(jì)算，含鬼臼毒素不得少于2.0％。
24.如權(quán)利要求23所述桃兒七藥材的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括下述鑒別和/或含量測(cè)定方法中的一種或幾種鑒別取桃兒七粉末0.5g，加10ml二氯甲烷超聲提取10分鐘，過(guò)濾，濾液水浴蒸干，加2ml無(wú)水乙醇使溶解，作為供試品溶液；另取鬼臼毒素對(duì)照品10mg，加無(wú)水乙醇2ml使溶解，作為對(duì)照品溶液；取對(duì)照品與供試品溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以9∶1的氯仿-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)清晰，供試品與對(duì)照品應(yīng)在相同位置出現(xiàn)相同斑點(diǎn)；含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以63∶37的甲醇-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為292nm；理論板數(shù)按鬼臼毒素峰計(jì)應(yīng)不低于1500，主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)為1.5以上；取經(jīng)70℃干燥至恒重的鬼臼毒素對(duì)照品，用上述流動(dòng)相溶解制成每1ml中含0.13mg的溶液，即得對(duì)照品溶液；取桃兒七粉末0.5g，過(guò)4號(hào)篩，稱定，置燒瓶中，加二氯甲烷80ml，回流提取4小時(shí)，提取液回收二氯甲烷并濃縮至干，殘?jiān)脽o(wú)水乙醇溶解并轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加無(wú)水乙醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得；本品按干燥品計(jì)算，含鬼臼毒素不得少于2.0％。
25.如權(quán)利要求15、16、17或18所述本發(fā)明藥物組合物乳劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括下述含量測(cè)定和/或鑒別方法中的一種或幾種含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以60～65∶40～35的甲醇-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為292nm；理論板數(shù)按鬼臼毒素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000，主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求；測(cè)定法，取乳劑10g，稱重，置于100ml的錐形瓶中，加0.1ml鹽酸輕搖，加入50ml流動(dòng)相，超聲20分鐘，溶解后冰浴30分鐘，立即減壓過(guò)濾，用流動(dòng)相少量多次洗滌沉淀及濾瓶，將洗滌液及濾液合并置燒杯中，放至室溫，用1mol/L的氫氧化鈉調(diào)pH值3.0～5.0，將此濾液轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，流動(dòng)相加至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取鬼臼毒素對(duì)照品，用流動(dòng)相配制成每1ml中含0.15mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量，即得；鑒別A.桃兒七的鑒別稱取鬼臼毒素對(duì)照品，加上述含量測(cè)定項(xiàng)下的流動(dòng)相制成每1ml中含0.15mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；取裝量差異項(xiàng)下的樣品，相當(dāng)于鬼臼毒素15mg，照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件及方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，記錄色譜圖，對(duì)照品溶液及供試品溶液主峰保留時(shí)間應(yīng)一致；B.大黃的鑒別色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，75～85∶25～15的甲醇-0.1％磷酸溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為440nm；理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于1500；稱取乳劑10g，置小燒杯中，加入無(wú)水乙醇，超聲破乳后，置冰箱中冷卻20分鐘，過(guò)濾，濾液水浴蒸干，殘?jiān)?ml無(wú)水乙醇溶解后，過(guò)濾，濾液加到3ml的流動(dòng)相中，置冰箱中冷卻20分鐘后用0.45μm的濾膜過(guò)濾至澄清，作為供試品溶液；另取大黃素對(duì)照品，用流動(dòng)相制備成每1ml中含2μg的溶液，作為對(duì)照品溶液；取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，對(duì)照品溶液及供試品溶液主峰保留時(shí)間應(yīng)一致；C.苦參的鑒別稱取乳劑樣品5g，加無(wú)水乙醇10ml超聲破乳后，于4℃冷卻20分鐘，過(guò)濾，濾液水浴蒸干，殘?jiān)?ml水溶解后，加入1滴氨水，輕輕振搖，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用氯仿萃取3次，每次10ml，合并萃取液，轉(zhuǎn)移至蒸發(fā)皿中，水浴揮干，用5ml無(wú)水乙醇溶解，過(guò)濾，作為供試品溶液；另取氧化苦參堿對(duì)照品，用無(wú)水乙醇制備成每1ml中含5μg的溶液，作為對(duì)照品溶液；同法按處方比例制備不含苦參的空白溶液一份；照薄層色譜法測(cè)定，分別吸取對(duì)照品和供試品溶液及空白溶液各5ul，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以4～6∶0.6∶0.2的氯仿-甲醇-氨水為展開劑，展開，取出，涼干，噴以碘化鉍鉀試液顯色，樣品與對(duì)照品應(yīng)在相同位置出現(xiàn)橘紅色斑點(diǎn)，而不含苦參的空白樣品應(yīng)在相同位置未出現(xiàn)斑點(diǎn)；D.鴉膽子的鑒別稱取乳劑樣品5g，加無(wú)水乙醇10ml，超聲破乳，趁熱過(guò)濾，濾液水浴蒸干，殘?jiān)?ml石油醚溶解后，過(guò)濾至澄清，取濾液作為供試品溶液；另取亞油酸對(duì)照品，用石油醚制備成每1ml中含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法測(cè)定，分別吸取對(duì)照品和供試品溶液各5ul，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以80～90∶20～10∶0.1的60～90℃石油醚-乙酸乙酯-乙酸為展開劑，飽和1小時(shí)，上行展開，取出，涼干，置于碘缸中用碘蒸氣熏15分鐘，直至出現(xiàn)清晰斑點(diǎn)；樣品與對(duì)照品在相同位置出現(xiàn)棕色斑點(diǎn)；E、冰片、桉油的鑒別稱取乳劑樣品5g，加無(wú)水乙醇10ml，超聲破乳，于4℃冷卻6-8分鐘，過(guò)濾至澄清，取濾液作為供試品溶液；另取冰片、桉油精對(duì)照品，分別加無(wú)水乙醇制備成每1ml中含5μg的溶液，作為對(duì)照品溶液；同法按處方比例制備不含冰片、不含桉油的空白溶液各一份；照薄層色譜法測(cè)定，分別吸取對(duì)照品和供試品溶液及空白溶液各5ul，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以9-9.5∶1-0.5的環(huán)己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，涼干，噴以新配制的1％香草醛硫酸溶液顯色，即可；結(jié)果應(yīng)與冰片對(duì)照品相同位置出現(xiàn)紫紅色斑點(diǎn)，與桉油精相同位置出現(xiàn)紫褐色斑點(diǎn)。
26.如權(quán)利要求25所述本發(fā)明藥物組合物乳劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該乳劑的質(zhì)量控制方法包括下述含量測(cè)定和/或鑒別方法中的一種或幾種含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以63∶37的甲醇-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為292nm；理論板數(shù)按鬼臼毒素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000，主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求；測(cè)定法取乳劑10g，稱重，置于100ml的錐形瓶中，加0.1ml鹽酸輕搖，加入50ml流動(dòng)相，超聲20分鐘，溶解后冰浴30分鐘，立即減壓過(guò)濾，用流動(dòng)相少量多次洗滌沉淀及濾瓶，將洗滌液及濾液合并置燒杯中，放至室溫，用1mol/L的氫氧化鈉調(diào)pH值3.0～5.0，將此濾液轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，流動(dòng)相加至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取鬼臼毒素對(duì)照品，用流動(dòng)相配制成每1ml中含0.15mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量，即得；鑒別A.桃兒七的鑒別稱取鬼臼毒素對(duì)照品，加流動(dòng)相制成每1ml中含0.15mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；取裝量差異項(xiàng)下的樣品，相當(dāng)于鬼臼毒素15mg，照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件及方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，記錄色譜圖；以不加桃兒七制成的乳劑為空白對(duì)照樣品同法進(jìn)行試驗(yàn)；對(duì)照品溶液及供試品溶液主峰保留時(shí)間基本一致，而空白對(duì)照無(wú)干擾；B.大黃的鑒別色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以比例為80∶20的甲醇-0.1％磷酸溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為440nm；理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于1500；稱取乳劑10g，置小燒杯中，加入無(wú)水乙醇，超聲破乳后，置冰箱中冷卻20分鐘，過(guò)濾，濾液水浴蒸干，殘?jiān)?ml無(wú)水乙醇溶解后，過(guò)濾，濾液加到3ml的流動(dòng)相中，置冰箱中冷卻20分鐘后用0.45μm的濾膜過(guò)濾至澄清，作為供試品溶液；另取大黃素對(duì)照品，用流動(dòng)相制備成每1ml中含2μg的溶液，作為對(duì)照品溶液；取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；以不加大黃制成的乳劑為空白對(duì)照樣品同法進(jìn)行試驗(yàn)；對(duì)照品溶液及供試品溶液主峰保留時(shí)間基本一致，而空白對(duì)照無(wú)干擾；C.苦參的鑒別稱取乳劑樣品5g，加無(wú)水乙醇10ml超聲破乳后，于4℃冷卻20分鐘，過(guò)濾，濾液水浴蒸干，殘?jiān)?ml水溶解后，加入1滴氨水，輕輕振搖，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用氯仿萃取3次，每次10ml，合并萃取液，轉(zhuǎn)移至蒸發(fā)皿中，水浴揮干，用5ml無(wú)水乙醇溶解，過(guò)濾，作為供試品溶液；另取氧化苦參堿對(duì)照品，用無(wú)水乙醇制備成每1ml中含5μg的溶液，作為對(duì)照品溶液；同法按處方比例制備不含苦參的空白溶液一份；照薄層色譜法測(cè)定，分別吸取對(duì)照品和供試品溶液及空白溶液各5ul，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以比例為5∶0.6∶0.2的氯仿-甲醇-氨水為展開劑，展開，取出，涼干，噴以碘化鉍鉀試液顯色，樣品與對(duì)照品應(yīng)在相同位置出現(xiàn)橘紅色斑點(diǎn)，而不含苦參的空白樣品應(yīng)在相同位置未出現(xiàn)斑點(diǎn)；D.鴉膽子的鑒別稱取乳劑樣品5g，加無(wú)水乙醇10ml，超聲破乳，趁熱過(guò)濾，濾液水浴蒸干，殘?jiān)?ml石油醚溶解后，過(guò)濾至澄清，取濾液作為供試品溶液；另取亞油酸對(duì)照品，用石油醚制備成每1ml中含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；同法按處方比例制備不含鴉膽子的空白溶液一份；照薄層色譜法測(cè)定，分別吸取對(duì)照品和供試品溶液及空白溶液各5ul，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以比例為85∶15∶0.1的60～90℃石油醚-乙酸乙酯-乙酸為展開劑，飽和1小時(shí)，上行展開，取出，涼干，置于碘缸中用碘蒸氣熏15分鐘，直至出現(xiàn)清晰斑點(diǎn)；樣品與對(duì)照品在相同位置出現(xiàn)棕色斑點(diǎn)；E、冰片、桉油的鑒別稱取乳劑樣品5g，加無(wú)水乙醇10ml，超聲破乳，于4℃冷卻6-8分鐘，過(guò)濾至澄清，取濾液作為供試品溶液；另取冰片、桉油精對(duì)照品，分別加無(wú)水乙醇制備成每1ml中含5μg的溶液，作為對(duì)照品溶液；同法按處方比例制備不含冰片、不含桉油的空白溶液各一份；照薄層色譜法測(cè)定，分別吸取對(duì)照品和供試品溶液及空白溶液各5ul，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以比例為9∶0.5的環(huán)己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，涼干，噴以新配制的1％香草醛硫酸溶液顯色，即可；結(jié)果應(yīng)與冰片對(duì)照品相同位置出現(xiàn)紫紅色斑點(diǎn)，與桉油精相同位置出現(xiàn)紫褐色斑點(diǎn)。
27.如權(quán)利要求1、2、3、4、6、15、16、17或18所述的藥物組合物在制備治療尖銳濕疣藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療尖銳性濕疣、生殖器皰疹的藥物組合物，該藥物組合物是由如下重量配比的原料藥制成桃兒七52～78重量份、鴉膽子460～690重量份、大黃80～120重量份、苦參80～120重量份。本發(fā)明藥物組合物中還可加入桉油，冰片；本發(fā)明藥物組合物還可直接以桃兒七提取物，鴉膽子油，大黃、苦參中藥液投料入藥。本發(fā)明還公開了本發(fā)明藥物組合物乳劑的質(zhì)量控制方法，包括鑒別和/或含量測(cè)定方法。
文檔編號(hào)A61P31/14GK1895374SQ200510083950
公開日2007年1月17日 申請(qǐng)日期2005年7月14日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月14日
發(fā)明者盧培鑫 申請(qǐng)人:北京漢方金典醫(yī)藥科技有限公司