專(zhuān)利名稱：含三七二醇皂苷的通痹口服制劑及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于一種治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等痹癥的藥物組合物及其制備方法，更特別的是關(guān)于一種含三七二醇皂苷的通痹口服制劑及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病是一種嚴(yán)重危害人民身體健康的常見(jiàn)疾病，中醫(yī)藥稱之為風(fēng)濕痹癥，發(fā)病率呈逐年升高的趨勢(shì)。為了更好的開(kāi)發(fā)我國(guó)的傳統(tǒng)中藥資源，提高中藥制劑的內(nèi)在質(zhì)量和市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力，對(duì)療效肯定、安全性好的中藥品種進(jìn)行開(kāi)發(fā)，將具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
三七別名田七、人參三七，為五加科人參屬Panaxnotoginseng(Burk)F.H.Chen的根莖，產(chǎn)于云南、廣西。三七為常用中藥之一，中國(guó)藥典記載三七的功效為散瘀、止血、消腫、定鎮(zhèn)。在傳統(tǒng)中藥復(fù)方中三七為一個(gè)治療跌打損傷、消腫止痛的藥。近代研究結(jié)果表明三七具多方面的生物活性，且各有其代表性的活性成份。止血成份是三七止血氨酸、活血成份為三七三醇皂苷、消腫定痛的作用是三七二醇皂苷。藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，三七總皂苷能增加動(dòng)脈血流量、擴(kuò)張血管、降低動(dòng)脈血壓及心肌耗氧量，提高肌體功能及對(duì)缺氧的耐受力，并有抑止血小板聚集、降低血粘度等作用。目前市場(chǎng)上以三七總皂苷為有效成分的“血塞通片”、“血塞通顆粒”、“血塞通膠囊”、“血塞通軟膠囊”和“血塞通注射液”等均為治療心血管疾病的，這些均是對(duì)三七的活血化瘀作用的應(yīng)用，未見(jiàn)報(bào)導(dǎo)單獨(dú)使用三七治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等病癥。
本發(fā)明人經(jīng)多年研究發(fā)現(xiàn)，三七總皂苷中的許多成分對(duì)抗炎、消腫、鎮(zhèn)痛作用不強(qiáng)或且稱為是無(wú)效的，真正有作用的是以人參皂苷Rd1、Rb1為代表的三七二醇皂苷。
在現(xiàn)有技術(shù)中，有關(guān)三七二醇皂苷的性質(zhì)及其抗炎、消腫、鎮(zhèn)痛作用，和用于類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療，均未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，提供一種生物利用度高、給藥劑量準(zhǔn)確、用量小、服用方便的含三七二醇皂苷的通痹口服制劑。
本發(fā)明的目的之二是提供一種能治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等病癥的含三七二醇皂苷的通痹口服制劑的制備方法。
本發(fā)明的這些以及其它目的將通過(guò)在下面的詳細(xì)描述來(lái)進(jìn)一步體現(xiàn)和說(shuō)明。
本發(fā)明的含三七二醇皂苷的通痹口服制劑，由下列成分組成三七二醇皂苷20-100克，淀粉50-150克，微晶纖維素1-5克，制成1000份單服劑量的制劑。
進(jìn)一步的，本發(fā)明的含三七二醇皂苷的通痹口服制劑，由下列成分組成三七二醇皂苷100克，淀粉100克，微晶纖維素1-4克，制成1000份單服劑量的制劑。
可以選擇的是，本發(fā)明的含三七二醇皂苷的通痹口服制劑，由下列成分組成三七二醇皂苷40-60克，淀粉80-110克，微晶纖維素2-3克，制成1000份單服劑量的制劑。
可以采用的是，本發(fā)明的含三七二醇皂苷的通痹口服制劑，由下列成分組成三七二醇皂苷50克，淀粉100克，微晶纖維素2.5克，制成1000份單服劑量的制劑。
在本發(fā)明中所述的制劑可以是膠囊、片劑或丸劑。
本發(fā)明的含三七二醇皂苷的通痹口服制劑的制備方法為按處方量稱取三七二醇皂苷，加至淀粉與微晶纖維素中，混合均勻，逐漸加入稀乙醇(常規(guī)意義濃度)攪勻，然后制粒，真空干燥箱內(nèi)60℃以下干燥，整粒。如果填裝膠囊，每粒膠囊內(nèi)容物150毫克?；驂褐瞥善瑒槿咄ū云?。三七通痹丸的制備方法是采用噴霧制粒制得微粒，再用搪衣鍋，加入三七二醇皂苷，輔料粘合劑漿液，增大為均勻大小的丸劑。
本發(fā)明人經(jīng)研究后發(fā)現(xiàn)，三七二醇皂苷具有明顯的抗炎、消腫、鎮(zhèn)痛作用，對(duì)佐劑關(guān)節(jié)炎引起的免疫性炎癥也有明顯的抗炎作用。能治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等病癥，中醫(yī)稱之為風(fēng)濕痹癥。
在本發(fā)明中，三七二醇皂苷的提取方法采用同本申請(qǐng)同時(shí)申請(qǐng)的題目為三七二醇皂苷的制備方法所述的提取方法，上述方法在此列入?yún)⒖际褂?。?dāng)然也可以采用市售的三七二醇皂苷。
本發(fā)明采用三七總皂苷中的精華-三七二醇皂苷為主要成分，因此療效較普通采用三七總皂苷的藥物高許多，并且生物利用度高、攜帶及給藥、服用方便和吸收快，據(jù)研究統(tǒng)計(jì)，療效較普通以三七總皂苷為主要成分的中藥高50％以上。
以下結(jié)合實(shí)施例詳述本發(fā)明，但實(shí)施例僅用于說(shuō)明并不能限制本發(fā)明的范圍。
在本發(fā)明中，若非特指，所有的份、百分比均為重量單位，所有的設(shè)備和原材料等均可從市場(chǎng)購(gòu)得或是本行業(yè)常用的。
具體實(shí)施例方式
例1按下列配比稱取混合用原料，并按如下方法步驟來(lái)制備三七二醇皂苷50克，淀粉120克，微晶纖維素1.5克，按處方量稱取三七二醇皂苷，加至淀粉與微晶纖維素中，混合均勻，逐漸加入稀乙醇攪勻，然后制粒，真空干燥箱內(nèi)60℃以下干燥，整粒，填裝膠囊，制成1000粒，每粒膠囊內(nèi)容物150毫克。
例2按下列配比稱取混合用原料，并按如下方法步驟來(lái)制備三七二醇皂苷50克，淀粉88克，微晶纖維素2.5克，糊精12克制成1000片，每片重150毫克。
制備方法同例1，僅是最后充填膠囊改為壓片。
例3按下列配比稱取混合用原料，并按如下方法步驟來(lái)制備三七二醇皂苷50克，淀粉80克，微晶纖維素2.0克，糊精20克，制備方法是采用噴霧制粒制得微粒，再用搪衣鍋，加入三七二醇皂苷，輔料粘合劑漿液，增大為均勻大小的丸劑，控制小丸30毫克重。
例4按下列配比稱取混合用原料，并按如下方法步驟來(lái)制備
三七二醇皂苷100克，淀粉90克，微晶纖維素3.0克，糊精8克制成1000粒三七通舒膠囊。
制備方法同例1。
例5三七二醇皂苷的抗炎和鎮(zhèn)痛作用摘要 三七二醇皂苷口服給藥4-5天，在50毫克/公斤、100毫克/公斤、200毫克/公斤劑量下，對(duì)小鼠巴豆油性耳腫、大鼠角叉菜膠足腫、大鼠棉球肉芽腫和大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎均具有非常顯著的抗炎作用，在部分實(shí)驗(yàn)性炎癥模型上的抗炎作用還呈現(xiàn)出一定的量效關(guān)系。此外，三七二醇皂苷在上述給藥條件下對(duì)小鼠水浴甩尾、大鼠水浴甩尾和小鼠醋酸扭體反應(yīng)也有明顯的鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果表明，該藥具有非甾體抗炎藥的特點(diǎn)，其抗炎鎮(zhèn)痛作用不低于5毫克/公斤劑量的消炎痛，對(duì)慢性炎癥的抗炎作用也不低于10毫克/公斤劑量的可的松。
試驗(yàn)?zāi)康? 三七為一種名貴中藥，具有散瘀止血，消腫定痛的功效，用于治療咯血、吐血、便血、崩漏、外傷出血，胸腹刺痛、跌撲腫痛。近年的研究證明三七的主要化學(xué)成分是皂苷，具有廣泛的藥理作用。有人曾經(jīng)做過(guò)“三七花總皂苷抗炎作用的研究”，因?yàn)槿叩厣喜糠侄荚碥蘸扛?，所以在三七綜合利用的研究中，我們按照三七的功能主治對(duì)三七二醇皂苷的抗炎鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，為將其開(kāi)發(fā)成一個(gè)治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物打下基礎(chǔ)。
受試藥物 三七二醇皂苷由本院植化室提供的淡黃棕色藥粉，批號(hào)940201，含量Rb1＝59.15 Rd＝15.10％。試驗(yàn)前用蒸餾水配制成所需濃度的溶液，供實(shí)驗(yàn)動(dòng)物灌胃給藥。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 用本院動(dòng)物房生產(chǎn)提供的昆明種小鼠(體重19-23克均為雄性)，和Wistar種大鼠(體重120-150克，均為雄性)，飼養(yǎng)在有中央空調(diào)的觀察室中，飼料為中央藥檢所生產(chǎn)的全價(jià)營(yíng)養(yǎng)塊料，飲自來(lái)水，合格證號(hào)津動(dòng)001。
消炎痛 系天津中央制藥二廠贈(zèng)送的粉劑，用1.0％的西黃蓍膠漿配制成1.0毫克/毫升濃度的混懸液，供實(shí)驗(yàn)動(dòng)物灌胃給藥。
試驗(yàn)方法和結(jié)果一、三七二醇皂苷的抗炎作用1、對(duì)鼠耳水腫的影響 本試驗(yàn)使用50只雄性小鼠，隨機(jī)分成5組，每組10只。每天灌胃給藥1次，連續(xù)給藥5天，對(duì)照組給生理鹽水于末次給藥后30分鐘，向每只小鼠左耳殼滴巴豆油致炎劑0.05毫升，2小時(shí)后處死。剪下左右耳，用直徑9毫米打孔器打下同一部位耳片，稱重，以兩耳重量之差作為鼠耳水腫程度。取平均數(shù)與對(duì)照組比較，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)測(cè)驗(yàn)結(jié)果(見(jiàn)表1)發(fā)現(xiàn)三七二醇皂苷口服給藥，對(duì)鼠耳水腫的抑制作用非常顯著，并具有一定的量效關(guān)系，其量效關(guān)系方程y＝0.097x+5.629(r＝0.8834)。
表1 三七二醇皂苷對(duì)鼠耳水腫的抗炎作用 *P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001
2、對(duì)大鼠足腫的影響 本試驗(yàn)使用50只大鼠，隨機(jī)分組，每組10只。每天灌胃給藥1次，連續(xù)給藥4天，對(duì)照組給生理鹽水。于末次給藥后30分鐘，在左后足墊皮下注射1.0％角叉菜膠漿0.05毫升致炎。分別在致炎前和致炎后30、60、120和180分鐘，用投影儀(放大6倍)測(cè)量大鼠致炎肢(右后肢)踝關(guān)節(jié)下方0.5厘米處直徑，用致炎前后的差值作為腫脹度，取平均數(shù)與對(duì)照組比較，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)測(cè)驗(yàn)。結(jié)果(見(jiàn)表2)發(fā)現(xiàn)三七二醇皂苷對(duì)大鼠足腫的抑制作用非常顯著，在這種實(shí)驗(yàn)性炎癥模型上，三七二醇皂苷的抗炎作用不低于5毫克/公斤劑量的消炎痛。
表2 三七二醇皂苷對(duì)大鼠角叉菜膠足腫的影響 *P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.0013、對(duì)大鼠佐劑關(guān)節(jié)炎的影響 本試驗(yàn)使用50只大鼠，隨機(jī)分成5組，每組10只。佐劑的配制系將預(yù)先滅活的卡介苗加入預(yù)先滅菌的不完全福氏佐劑中，研磨配制成10毫克/毫升濃度的佐劑。模型制備采用在每只右后足墊部皮內(nèi)注射0.1毫升佐劑，誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎的發(fā)生。
(1)對(duì)原發(fā)性病變的影響 于致炎前4天開(kāi)始給藥劑量為200毫克/公斤，100毫克/公斤和50毫克/公斤，對(duì)照組給生理鹽水。每天灌胃給藥1次，于末次給藥后30分鐘致炎，觀察致炎后18小時(shí)和第8天佐劑注射側(cè)足腫程度。用投影儀測(cè)量每只大鼠右后肢關(guān)節(jié)下0.5厘米處的直徑(放大6倍)，以致炎前后的差值作腫脹度，取平均數(shù)與對(duì)照組比較，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)測(cè)驗(yàn)，結(jié)果(見(jiàn)表3)表明三七二醇皂苷對(duì)大鼠佐劑關(guān)節(jié)炎原發(fā)性病變的抗炎作用非常顯著，三個(gè)劑量的作用均不小于2.5毫克/公斤劑量的消炎痛。
(2)對(duì)繼發(fā)性病變的影響 于佐劑注射后第8天開(kāi)始灌胃給藥，劑量同上，每天1次，連續(xù)給藥到第30天，觀察三七二醇皂苷對(duì)繼發(fā)性病變的防治作用。自給藥之日起，每隔4-5天，用千分尺側(cè)量大鼠左后足掌厚度(佐劑注射對(duì)側(cè)，用毫米表示)，作為繼發(fā)性病變腫脹度的指標(biāo)，取平均數(shù)與對(duì)照組比較，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)測(cè)驗(yàn)，結(jié)果列于表4之中。從表中的結(jié)果可見(jiàn)三七二醇皂苷對(duì)佐劑注射對(duì)側(cè)足腫的防治作用非常顯著，提示該藥能阻止和減輕大鼠佐劑關(guān)節(jié)炎繼發(fā)性病變的發(fā)生。
表3 三七二醇皂苷對(duì)大鼠佐劑關(guān)節(jié)炎原發(fā)性病變的影響

*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001(3)對(duì)全身性病變的影響 除觀察左后足(佐劑注射對(duì)側(cè))的腫脹度，作為多發(fā)性關(guān)節(jié)炎的指標(biāo)之外，還觀察前肢、耳和尾部病變發(fā)生率與嚴(yán)重程度等全身性病變，按0-4級(jí)評(píng)分法記錄，取平均數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)測(cè)驗(yàn)，結(jié)果(見(jiàn)表4)發(fā)現(xiàn)三七二醇皂苷同樣能夠阻止全身性病變的發(fā)生。
表4 三七二醇皂苷對(duì)大鼠佐劑關(guān)節(jié)炎繼發(fā)性病變的影響

*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001表5 三七二醇皂苷對(duì)大鼠佐劑關(guān)節(jié)炎全身性病變的影響
*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.0014、對(duì)大鼠棉球肉芽腫的影響 本試驗(yàn)使用50只大鼠，隨機(jī)分組，每組10只。預(yù)先給藥4天，每天1次，劑量為200毫克/公斤、100毫克/公斤和50毫克/公斤，對(duì)照組大鼠給生理鹽水。第4次灌胃給藥后30分鐘，用乙醚麻醉大鼠，在腋下接種棉球，然后繼續(xù)給藥7天。于末次給藥后24小時(shí)處死大鼠，剝離棉球肉芽腫，先稱濕重，后在80℃烘箱重干燥，再稱干重，減去棉球重，即得肉芽腫重。取平均數(shù)與對(duì)照組比較，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)測(cè)驗(yàn)，結(jié)果(見(jiàn)表5)發(fā)現(xiàn)三七二醇皂苷對(duì)大鼠棉球肉芽腫的抑制作用顯著，提示該藥對(duì)慢性實(shí)驗(yàn)性炎癥也有明顯的抗炎作用，其作用強(qiáng)度不小于1.0毫克/公斤的可的松。
表5 三七二醇皂苷對(duì)大鼠佐劑關(guān)節(jié)炎全身性病變的影響 *P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001
二、三七二醇皂苷的鎮(zhèn)痛作用1、對(duì)小鼠醋酸扭體反應(yīng)的影響 本試驗(yàn)使用50只小鼠，隨機(jī)分組，每組10只，每天灌胃給藥1次，連續(xù)給藥4天，于末次給藥后30分鐘，腹腔注射0.6％的醋酸溶液0.2毫升/鼠，10分鐘后用計(jì)數(shù)器記錄第二個(gè)10分鐘內(nèi)每只小鼠的扭體次數(shù)。同時(shí)做生理鹽水和消炎痛對(duì)照組，計(jì)算每組小鼠的平均扭體數(shù)，與對(duì)照組比較進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)測(cè)驗(yàn)，結(jié)果(見(jiàn)表6)發(fā)現(xiàn)在這個(gè)模型上三七二醇苷的鎮(zhèn)痛作用非常顯著。
表6 三七二醇皂苷對(duì)小鼠醋酸扭體反應(yīng)的鎮(zhèn)痛作用 *P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.0012、對(duì)小鼠水浴甩尾反應(yīng)的影響 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及其分組和給藥情況同上，于第4天給藥后30、90和120分鐘，分別在55±0.5℃水浴中測(cè)定小鼠甩尾反應(yīng)潛伏期，作為痛閾指標(biāo)，取平均數(shù)與對(duì)照組比較，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)測(cè)驗(yàn)，結(jié)果(見(jiàn)表7)可見(jiàn)三七二醇皂苷口服給藥能非常顯著的提高小鼠水浴甩尾的痛閾值，其鎮(zhèn)痛作用沒(méi)有超過(guò)5毫克/公斤劑量的消炎痛。
3、對(duì)大鼠水浴甩尾反應(yīng)的影響 本試驗(yàn)選用50只大鼠，隨機(jī)分成5組，每組10只。每天灌胃給藥1次，連續(xù)給藥3天，于末次給藥后30、90和120分鐘，分別在55±0.5℃恒溫水浴中測(cè)定大鼠甩尾反應(yīng)潛伏期，作為痛閾指標(biāo)，同時(shí)做生理鹽水和消炎痛對(duì)照組。取平均數(shù)與對(duì)照組比較，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)測(cè)驗(yàn)，結(jié)果(見(jiàn)表7)發(fā)現(xiàn)在這個(gè)模型上三七二醇皂苷也有一定的鎮(zhèn)痛作用。
表7 三七二醇皂苷對(duì)小鼠水浴甩尾反應(yīng)的鎮(zhèn)痛作用 *P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001本試驗(yàn)使用4種實(shí)驗(yàn)性炎癥模型和2種鎮(zhèn)痛試驗(yàn)?zāi)Ｐ停M(jìn)行主要藥效學(xué)研究，結(jié)果證明三七二醇皂苷灌胃給藥的抗炎鎮(zhèn)痛作用都非常顯著，揭示了三七確有消腫定痛的功效。雖然風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)理尚不十分清楚，但是，我們的試驗(yàn)結(jié)果表明三七二醇皂苷能夠治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等風(fēng)濕性疾病。
三七二醇皂苷抗實(shí)驗(yàn)性水腫性炎癥的作用非常顯著，表現(xiàn)為對(duì)巴豆油所引起的鼠耳水腫的抑制作用較強(qiáng)，并具有明顯的劑量依賴關(guān)系。此外，對(duì)角叉菜膠所致大鼠足腫或關(guān)節(jié)腫脹的抑制作用也非常顯著，在這兩種模型上的抗炎作用均不低于消炎痛。
眾所周知，大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎是一種免疫性炎癥模型，其發(fā)病機(jī)理和病理變化與人的類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎相似。在這個(gè)模型的不同發(fā)病階段，三七二醇皂苷均能出現(xiàn)非常顯著的抗炎作用，其作用強(qiáng)度也不低于消炎痛。
此外，三七二醇皂苷對(duì)慢性炎癥也有明顯的抗炎作用，其表現(xiàn)為對(duì)大鼠棉球肉芽腫的抑制作用與氫化可的松相當(dāng)。
上述結(jié)果證明三七二醇皂苷的抗炎作用強(qiáng)而范圍廣。
三七二醇皂苷口服給藥，對(duì)大鼠和小鼠的鎮(zhèn)痛作用也非常顯著，既能提高溫?zé)岽碳さ耐撮摚帜芙档突瘜W(xué)致痛劑所引起的扭體次數(shù)。在這2種鎮(zhèn)痛試驗(yàn)?zāi)Ｐ蜕希叨荚碥諏?duì)小鼠鎮(zhèn)痛作用不亞于消炎痛，但對(duì)大鼠甩尾反應(yīng)的鎮(zhèn)痛作用卻不如消炎痛，據(jù)分析可能是給藥次數(shù)少的原因。
參照三七的功能主治，圍繞消腫定痛進(jìn)行了主要藥效學(xué)研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)了上述藥理作用特點(diǎn)，為臨床上治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等痹癥提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
例6 三七二醇皂苷對(duì)大鼠的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)摘要 給大鼠口服三七二醇皂苷1.0克/公斤和0.2克/公斤，每天1次，連續(xù)三個(gè)月。觀察一般藥物反應(yīng)，檢測(cè)血液學(xué)、血液生化、尿液生化和病理組織學(xué)指標(biāo)，除發(fā)現(xiàn)凝血時(shí)間縮短和高劑量組部分大鼠的胃腸黏膜出現(xiàn)輕微損傷之外，其余各項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)照組相比均在正常范圍內(nèi)波動(dòng)。試驗(yàn)結(jié)果表明三七二醇皂苷的毒性較小，0.2克/公斤對(duì)大鼠是一個(gè)安全的劑量，為該藥的臨床試驗(yàn)提供了依據(jù)。
試驗(yàn)?zāi)康? 實(shí)驗(yàn)證明三七二醇皂苷為三七消腫定痛的主要有效部分，在將其開(kāi)發(fā)成一個(gè)治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物的過(guò)程中，為了臨床試驗(yàn)的安全著想，我們特此做了該藥對(duì)大鼠的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)，以期找到中毒癥狀、靶器官及可逆性程度。
受試藥物 三七二醇皂苷由本院植化室研制提供，批號(hào)為940201，含Rb1＝59.15％ Rd＝15.10％。于給藥前稱一定量藥粉，加蒸餾水配制成濃度為0.1克/毫升和0.02克/毫升的供試溶液，供大鼠灌胃給藥，給藥體積為1毫升/100克體重。
試驗(yàn)動(dòng)物 Wistar種大鼠由本院動(dòng)物室生產(chǎn)提供，平均體重雄性大鼠為129.57±9.04克和雌性大鼠為118.36±8.37克，隨機(jī)分組，每組20只，雌雄各半。分籠飼養(yǎng)在中央空調(diào)的觀察室中，飲自來(lái)水，飼中央藥檢所動(dòng)物室生產(chǎn)的塊料。
預(yù)試驗(yàn) 用10只Wistar大鼠，雌雄各半，每天灌胃給藥一次，劑量為2.0克/公斤，藥后5-6天大鼠出現(xiàn)松毛、消瘦、體軟無(wú)力等癥狀，10天發(fā)現(xiàn)1只雄性大鼠死亡，解剖觀察肝有瘀血，肺不正常(除瘀血之外，尚有少量黃白色液狀物)，胸腔有血水，似乎瘀灌藥失當(dāng)有關(guān)。從第15天開(kāi)始將預(yù)試驗(yàn)組大鼠改灌1.0克/公斤劑量，連續(xù)二個(gè)半月，作為高劑量恢復(fù)組進(jìn)行試驗(yàn)。
試驗(yàn)方法 主要藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表明，口服三七二醇皂苷50毫克/公斤、100毫克/公斤、200毫克/公斤和400毫克/公斤劑量的抗炎鎮(zhèn)痛作用非常顯著，其作用強(qiáng)度不亞于5毫克/公斤消炎痛或10毫克/公斤可的松。急性毒性試驗(yàn)結(jié)果表明，小鼠一次腹腔注射給藥的LD50＝371.959毫克/公斤，一次口服給藥的LD50＞5.0克/公斤。根據(jù)上述資料和預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果，按照中藥新藥毒理學(xué)研究指南對(duì)大鼠的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)的規(guī)定，三七二醇皂苷對(duì)大鼠的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)二個(gè)劑量，即0.2克/公斤和1.0克/公斤，對(duì)照灌服蒸餾水。每天上午9時(shí)左右灌胃給藥一次，連續(xù)給藥三個(gè)月，每周稱體重一次，觀察藥物對(duì)大鼠生長(zhǎng)發(fā)育的影響，以便校正給藥劑量。每天觀察記錄動(dòng)物的行為狀態(tài)、飲食、毛色、大、小便和口、鼻、眼、肛門(mén)等黏膜有無(wú)分泌物等一般藥物反應(yīng)。于試驗(yàn)結(jié)束后的第2天，各組動(dòng)物在戊巴妥鈉麻醉的條件下，由血管內(nèi)取血，離心分離血清，用42型自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血液生化指標(biāo)。另外取血測(cè)定血液學(xué)指標(biāo)。解剖取臟器稱重，計(jì)算臟器系數(shù)，此外，在試驗(yàn)后期采用廣州東方化學(xué)應(yīng)用研究所生產(chǎn)的四聯(lián)試紙測(cè)定了各組動(dòng)物的尿液生化指標(biāo)。
觀察指標(biāo)一般藥物反應(yīng) 藥后1-2周給藥組大鼠食欲下降，表現(xiàn)為食料量減少(見(jiàn)表8)。藥后2周高劑量組1/3大鼠出現(xiàn)體軟、消瘦、毛黃疏松無(wú)光澤，于藥后第3周該組雌雄大鼠各死亡1只，發(fā)現(xiàn)時(shí)尸體已被破壞，故死亡原因不明。藥后3周以后給藥組大鼠食欲恢復(fù)正常，每日的進(jìn)食量于對(duì)照組差不多，在整個(gè)試驗(yàn)期間各組動(dòng)物口、鼻、眼、肛門(mén)處均無(wú)分泌物出現(xiàn)，生長(zhǎng)發(fā)育良好，體重變化列于表9之中。結(jié)果表明該藥對(duì)大鼠體重增長(zhǎng)無(wú)明顯影響，各組動(dòng)物體重平均增長(zhǎng)均正常。試驗(yàn)后期高劑量雄性大鼠體重增長(zhǎng)加快。
對(duì)血液學(xué)指標(biāo)的影響 口服給藥三個(gè)月對(duì)大鼠紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板、血紅蛋白、白細(xì)胞分類(lèi)和凝血時(shí)間等血液學(xué)指標(biāo)的影響見(jiàn)表10。除發(fā)現(xiàn)高劑量組雄性大鼠血紅蛋白含量下降和低劑量給藥組大鼠的凝血時(shí)間縮短之外，該藥對(duì)大鼠的其它血液學(xué)指標(biāo)均無(wú)明顯影響。
表8 三七二醇皂苷對(duì)大鼠耗料量的影響(克/只/天)

*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001對(duì)血液生化指標(biāo)的影響 口服給藥三個(gè)月，對(duì)大鼠物質(zhì)代謝和肝腎功能等生化指標(biāo)影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果列于表11之中。從表11中的數(shù)據(jù)可見(jiàn)，高劑量組大鼠血糖含量和雄性大鼠谷草轉(zhuǎn)氨酶活性比對(duì)照組明顯增加，雄性大鼠血清總蛋白和尿素氨含量比對(duì)照組明顯降低，停藥2周后血糖和尿素氨的含量仍未恢復(fù)到對(duì)照組水平。低劑量組雄性大鼠血糖含量升高、尿素氨含量下降和雌性大鼠谷草轉(zhuǎn)氨酶活性降低，也都在正常范圍內(nèi)波動(dòng)。本試驗(yàn)各給藥組動(dòng)物血糖和膽固醇含量明顯比對(duì)照組高，這與對(duì)照組動(dòng)物血糖和膽固醇含量的測(cè)定值偏低有關(guān)。
表9 三七二醇皂苷對(duì)大鼠體重增長(zhǎng)的影響


*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001表10 三七二醇皂苷對(duì)大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響


*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001表11 三七二醇皂苷對(duì)大鼠血液生化的影響

*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001對(duì)尿液生化指標(biāo)的影響 在試驗(yàn)后期，用四聯(lián)試紙測(cè)定部分大鼠尿液生化指標(biāo)。我們將一號(hào)定為0、±號(hào)定為1、+號(hào)定為2，取各項(xiàng)指標(biāo)的平均值，與對(duì)照組比較，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)測(cè)驗(yàn)。結(jié)果(見(jiàn)表12)表明該藥長(zhǎng)期口服給藥除高劑量組大鼠尿蛋白比對(duì)照組明顯升高外，對(duì)大鼠其它尿液生化指標(biāo)無(wú)明顯影響。
表12 三七二醇皂苷對(duì)大鼠尿液生化的影響n＝6 *P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001對(duì)主要臟器系數(shù)的影響 口服給藥三個(gè)月，在麻醉的條件下解剖取臟器、標(biāo)重、計(jì)算藥物對(duì)大鼠臟器系數(shù)的影響，結(jié)果(見(jiàn)表13)發(fā)現(xiàn)高劑量組雌性大鼠腦、雄性大鼠肺和雌雄性大鼠脾系數(shù)降低，停藥2周除肺之外，其余均恢復(fù)正常。此外，還發(fā)現(xiàn)低劑量組雌性大鼠在給藥過(guò)程中，腎上腺系數(shù)下降，與主要藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果一致。
表13 三七二醇皂苷對(duì)大鼠臟器系數(shù)的影響(克/克×10-3)

*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001病理組織學(xué)檢查 于實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的第2天和停藥2周后，在戊巴比妥鈉麻醉的條件下解剖，發(fā)現(xiàn)各組大鼠胸腔和腹腔光滑無(wú)積液，對(duì)照組和給藥組都有1-2只動(dòng)物肺不正常(肺不張或瘀血)和腎臟被膜表面粗糙，高劑量組有1只動(dòng)物胃和十二指腸呈淡黃色，其它臟器肉眼觀察均無(wú)明顯變化。各臟器在福爾馬林中固定，做石蠟切片，HE染色，在顯微鏡下作病理組織學(xué)檢查，發(fā)現(xiàn)高劑量組有6只大鼠胃粘膜頂部上皮細(xì)胞脫落或胃腺體部腺細(xì)胞脫落，4只大鼠十二指腸粘膜上皮細(xì)胞局部脫落，其中有2只動(dòng)物的腸腺脫落，1只動(dòng)物局部損傷達(dá)到肌層。此外，還發(fā)現(xiàn)該組有1只大鼠腎臟被膜下腎小管上皮細(xì)胞水腫，髓質(zhì)部腎小管上皮細(xì)胞空泡變性和部分胞核淡等輕度損傷。其余臟器如心、腦、肝、脾、肺、腎上腺、睪丸、卵巢、子宮、前列腺、胸腺、甲狀腺等均未見(jiàn)明顯病變，低劑量組動(dòng)物各臟器病理組織學(xué)檢查結(jié)果與對(duì)照組基本相同。停藥2周恢復(fù)組與對(duì)照組病理組織學(xué)檢查結(jié)果也基本相同。證明該藥大劑量(1.0克/公斤)長(zhǎng)期灌胃給藥，對(duì)大鼠胃腸損傷，停藥后能夠恢復(fù)正常，是可逆性的。
試驗(yàn)結(jié)論 三七二醇皂苷1.0克/公斤、0.2克/公斤劑量灌胃給藥三個(gè)月，高劑量組大鼠血糖含量增加，其中雄性大鼠血紅蛋白、總蛋白、尿素氮含量降低，谷草轉(zhuǎn)氨酶活性升高和尿蛋白含量升高。停藥二周后上述指標(biāo)除血糖和尿素氮，其它指標(biāo)已恢復(fù)到對(duì)照組的水平?；謴?fù)組大鼠血糖、總膽固醇含量升高，尿素氮含量降低，其中雄性大鼠網(wǎng)狀紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)升高、凝血時(shí)間縮短、雌性大鼠肌酐含量降低。雖然都在正常范圍波動(dòng)，但與對(duì)照組相比均有顯著差異。其中有些指標(biāo)的變化卻反應(yīng)出了三七的藥理作用。
病理組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)，各組動(dòng)物(包括對(duì)照組)心、肺、腎毛細(xì)血管內(nèi)紅細(xì)胞充盈。脾臟紅髓中巨噬細(xì)胞活躍，細(xì)胞內(nèi)見(jiàn)少量含鐵血黃素，其中檢出率為對(duì)照組1只，高劑量組8只，低劑量組5只和恢復(fù)組1只。高劑量組部分大鼠胃和十二指腸粘膜損傷和1只大鼠腎小管上皮細(xì)胞輕度水腫和空泡變性及部分胞核淡染，在對(duì)照組和其它組中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)，大概是由藥物毒性所致，停藥后可恢復(fù)正常。0.2克/公斤劑量組動(dòng)物各項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)照組基本相同，證明該劑量(約為擬定臨床試驗(yàn)用量的50倍)長(zhǎng)期口服給藥，對(duì)大鼠是一個(gè)安全的劑量，為該藥臨床試驗(yàn)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
權(quán)利要求
1.一種含三七二醇皂苷的通痹口服制劑，其特征在于由下列成分組成三七二醇皂苷 20-100克，淀粉50-150克，微晶纖維素 1-5克，制成1000份單服劑量的制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含三七二醇皂苷的通痹口服制劑，其特征在于由下列成分組成三七二醇皂苷 100克，淀粉100克，微晶纖維素 1-4克，制成1000份單服劑量的制劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含三七二醇皂苷的通痹口服制劑，其特征在于由下列成分組成三七二醇皂苷 40-60克，淀粉80-110克，微晶纖維素 2-3克，制成1000份單服劑量的制劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含三七二醇皂苷的通痹口服制劑，其特征在于由下列成分組成三七二醇皂苷 50克，淀粉100克，微晶纖維素 2.5克，制成1000份單服劑量的制劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4之一所述的含三七二醇皂苷的通痹口服制劑，其特征在于所述的制劑可以是膠囊、片劑或丸劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4之一所述的含三七二醇皂苷的通痹口服制劑的制備方法，其特征在于按處方量稱取三七二醇皂苷，加至淀粉與微晶纖維素中，混合均勻，逐漸加入稀乙醇攪勻，然后制粒，真空干燥箱內(nèi)60℃以下干燥，整粒。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的含三七二醇皂苷的通痹口服制劑的制備方法，其特征在于填裝膠囊，每粒膠囊內(nèi)容物150毫克，含三七二醇皂苷50毫克。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-4之一所述的含三七二醇皂苷的通痹口服制劑的制備方法，其特征在于采用噴霧制粒制得微粒，再用搪衣鍋，加入三七二醇皂苷，輔料粘合劑漿液，增大為均勻大小的丸劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-4之一所述的含三七二醇皂苷的通痹口服制劑的應(yīng)用，其特征在于可以治療和預(yù)防類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種含三七二醇皂苷的通痹口服制劑及其制備方法和應(yīng)用，由下列成分組成三七二醇皂苷20－100克，淀粉50－15 克，微晶纖維素1－5克，制成1000份單服劑量的制劑。本發(fā)明的含三七二醇皂苷的通痹口服制劑可以制成三七通痹膠囊、片劑和丸劑，具有顯著的抗炎、消腫、鎮(zhèn)痛作用，尤其是對(duì)佐劑關(guān)節(jié)炎的病理模型各個(gè)發(fā)病階段均有良好的抗炎作用，具有散瘀消腫定痛，治療風(fēng)濕痹癥的作用。
文檔編號(hào)A61K31/704GK1706396SQ200510075038
公開(kāi)日2005年12月14日 申請(qǐng)日期2005年6月8日 優(yōu)先權(quán)日2004年8月4日
發(fā)明者李明勁 申請(qǐng)人:李明勁