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注射用復(fù)方苦參制劑的制備方法及其醫(yī)療用途的制作方法

文檔序號:815635閱讀:367來源:國知局
專利名稱:注射用復(fù)方苦參制劑的制備方法及其醫(yī)療用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種自苦參、白土苓制備的注射用制劑及其在用于治療癌癥,特別是對癌性疼痛、癌性出血、改善腫瘤患者生存質(zhì)量中和肝炎治療中的醫(yī)療用途,屬于藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)
復(fù)方苦參注射液由苦參和白土苓組成,具有抗腫瘤,止痛,止血等作用,由于其在腫瘤的臨床治療上療效確切,近年來的銷售額逐年攀升。
復(fù)方苦參注射液是我公司的拳頭產(chǎn)品,于1997年7月16日申請了專利,專利號ZL97112532.5(公告號CN 1062181C)。鑒于本產(chǎn)品實(shí)際生產(chǎn)中出現(xiàn)的一些問題,我們有針對性地對原生產(chǎn)工藝進(jìn)行了系統(tǒng)的創(chuàng)新性提高,追加工藝專利申請,并就藥物的適應(yīng)癥進(jìn)行了擴(kuò)大保護(hù)。
目前,復(fù)方苦參類似名詞的專利有3個(gè)(1)納米復(fù)方苦參制劑藥物及其制備方法,公告號為CN 1368220A。它公開了一種納米復(fù)方苦參制劑藥物,是以納米苦參、納米白土苓為原料,按比例配制,制成新的藥物制劑,其顆粒細(xì)度達(dá)1200-1500目,粒徑為0.1-200nm,其中絕大部分粒徑小于100nm。采用微波萃取、減壓濃縮、超音速射流技術(shù)噴霧干燥等步驟制備。結(jié)論對復(fù)方苦參采用納米處理,與我們申請專利的創(chuàng)新內(nèi)容無關(guān)。(2)獸用復(fù)方苦參注射液,公告號CN 1048406C。它公開了一種獸用復(fù)方苦參注射液,處方由黃芩300-1200克、黃柏200-800克、苦參300-1200克制成1000ml注射液。結(jié)論該專利與我們所申請的復(fù)方苦參的藥物組成不同,不妨礙我們所申請專利的創(chuàng)新性。(3)復(fù)方苦參潔陰沖洗液,公告號CN 1403117A。它公開了一種復(fù)方苦參潔陰沖洗液,其處方組成為苦參、蛇床子、大黃、蒼術(shù)、巴戟、土茯苓、白蘚皮、黃柏、薏苡仁、地膚子、皂刺、紅花、枯礬;適應(yīng)癥為包括老年性陰道炎、滴蟲性陰道炎等婦女生殖系統(tǒng)疾病。結(jié)論該專利與我們申請的復(fù)方苦參的藥物組成不同。
苦參是臨床常用中藥,為豆科槐屬植物苦參(Sophora flavscens Alt.)的干燥根,具有清熱、除濕、殺蟲、利尿等作用;我國廣泛分布,資源豐富,苦參含有生物堿和黃酮類成分,其生物堿成份主要為槐果堿(Sophocarpine),苦參堿(matrine),槐定堿(sophoridine),氧化苦參堿(Oxymatrine),氧化槐果堿(Oxysophocarpine)。藥理實(shí)驗(yàn)和臨床應(yīng)用證明,苦參及其制劑具有廣泛的藥理作用。含苦參及其化學(xué)處方的有關(guān)專利共67個(gè),其中單味苦參的專利9個(gè),苦參化學(xué)成分(苦參堿、氧化苦參堿等)的專利55個(gè),含苦參的中藥復(fù)方專利11個(gè)(包括化合物的復(fù)方)。這些專利主要集中于苦參堿和氧化苦參堿的合成、提取工藝、制劑及其藥理作用上。
白土苓為百合科植物肖菝葜(Heterosmilax japonica Kunth.)或短柱肖菝葜(Heterosmilaxyunnanensis Gagnep.)的干燥根莖,具有除濕,解毒,通利關(guān)節(jié)的作用,用于濕熱淋濁,帶下,癰腫,瘰癘,疥癬,梅毒及汞中毒所致的肢體拘攣,筋骨疼痛等癥;主要分布于廣西、貴州、湖南等地區(qū),是民間習(xí)用藥材,常用于代替土茯苓,但是在原植物上與土茯苓(為百合科植物光葉菝葜Smilax glabra Roxb.的干燥根莖)具有質(zhì)的區(qū)別。其化學(xué)成分研究很少,最近有人對白土苓進(jìn)行了化學(xué)成分的研究,發(fā)現(xiàn)它含有人參皂苷和大黃蒽醌等成分。但是,經(jīng)我們實(shí)際檢測證明該藥材中不含這些成分,推測研究者在原植物種的鑒定上有誤;我們的研究證實(shí)白土苓的主要成分為皂苷(總皂苷約8~9%),化合物的結(jié)構(gòu)在確定中。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種注射用復(fù)方苦參制劑的方法及其醫(yī)療用途,以增加臨床藥用劑型;同時(shí),克服現(xiàn)有注射劑的法定臨床使用劑量不能滿足實(shí)際臨床應(yīng)用需要和注射液制劑不穩(wěn)定的缺點(diǎn)(氧化苦參堿在放置過程中含量降低),達(dá)到提高臨床療效的目的。本發(fā)明的另一目的是提供復(fù)方苦參制劑新的醫(yī)療用途,以滿足患者的需要。
具體實(shí)施例方式
為達(dá)到上述目的,本發(fā)明通過下述技術(shù)方案予以實(shí)施。
1、注射用復(fù)方苦參中間體的制備注射用復(fù)方苦參中間體制備方法的主要技術(shù)特征在于(1)發(fā)明內(nèi)容中的注射用復(fù)方苦參制劑的原料為苦參和白土苓;其中苦參系豆科槐屬植物苦參(Sophora flavscens Alt.)的干燥根;白土苓系百合科植物肖菝葜(Heterosmilaxjaponica Kunth.)或短柱肖菝葜(Heterosmilax yunnanensis Gagnep.)的干燥根莖;苦參和白土苓的比例為5∶2~2∶1,優(yōu)選7∶3。
(2)用苦參和白土苓飲片或粗粉利用提取溶劑進(jìn)行分別單獨(dú)提取后合并或混合提取,得到提取液。所指的提取溶劑為水、0.1%~60%稀酸、1%~80%的醇,優(yōu)選稀酸和水;優(yōu)選先稀酸滲漉后,再以水煎煮提??;稀酸滲漉采用藥學(xué)可使用的有機(jī)酸或無機(jī)酸,其濃度0.1%~60%,在5℃~40℃的條件下浸泡2~60小時(shí)后滲漉;其中滲漉所用的酸優(yōu)選5%~50%的醋酸或鹽酸,滲漉溫度優(yōu)選10℃~30℃,滲漉的浸泡時(shí)間優(yōu)選8~48小時(shí);所指的回流提取條件是以0%~80%的水-醇溶劑進(jìn)行回流提取1~4次,優(yōu)選0%~60%的水醇溶劑,回流提取2次;所指的醇為1~5個(gè)碳的脂肪醇,優(yōu)選甲醇和乙醇。
(3)上述所得到的提取液在≤100℃的溫度下的常壓濃縮或減壓濃縮,得到濃縮物;優(yōu)選30~80℃的減壓濃縮。
(4)濃縮物經(jīng)過多次的醇沉-冷藏-過濾-回收溶劑的過程,得到醇溶物;所指的醇沉-冷藏-過濾-回收溶劑過程,其醇沉條件是利用高濃度的醇加入到藥物濃縮液中。第一次醇沉?xí)r,藥液中的醇濃度達(dá)到30%~80%,優(yōu)選50%~70%,第二次醇沉?xí)r,藥液中的醇濃度達(dá)到50%~90%,優(yōu)選70%~85%,第三次醇沉?xí)r,藥液中的醇濃度達(dá)到80%~95%,優(yōu)選85%~92%,醇沉次數(shù)優(yōu)選為三次;醇沉液的冷藏條件為-20℃~10℃,4~48小時(shí),優(yōu)選-16℃~8℃,8~36小時(shí);過濾條件為板框過濾或離心過濾或膜過濾;過濾后的藥液在減壓條件下,回收溶劑,回收溫度30℃~90℃,優(yōu)選40℃~75℃;每次濃縮浸膏的相對密度為1.02~1.40(60℃),優(yōu)選1.05~1.35(60℃)。
(5)醇溶物以一定比例的注射用水返溶、冷藏、過濾,得到濾液;所指的水返溶條件為加入1∶1~1∶10(藥液∶水液,W/V),優(yōu)選1∶1.5~1∶6(藥液∶水液,W/V);水返溶液冷藏的條件為放置在10℃~-20℃過夜,優(yōu)選5℃~-10℃;冷藏液過濾條件是離心過濾或0.45μm濾膜過濾;濾液的濃縮條件為在45℃~95℃的減壓濃縮;藥物中間體的密度為1.10~1.40(60℃),優(yōu)選1.15~1.35(60℃)。放置中間體冷庫的條件為10℃~-20℃,優(yōu)選5℃~-10℃。
(6)濾液濃縮成一定密度,即制備得到藥物中間體;測定中間體的藥物含量和指紋圖譜,放置于冷庫中。所指藥物中間體的含量為氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總和不低于5mg/ml,優(yōu)選不低于15mg/ml;所指中間體的指紋圖譜中氧化苦參堿為主要峰,并由苦參堿、槐果堿等組成。
2、不同規(guī)格的復(fù)方苦參注射液的制備不同規(guī)格的復(fù)方苦參注射液的制備方法的特征在于(1)利用上述發(fā)明內(nèi)容1制備的藥物中間體,加入注射用溶劑,經(jīng)活性炭脫色、過濾;所指的注射用溶劑包括注射用水或生理鹽水或等滲葡萄糖液,加入0.1%~10%注射用活性炭在40℃~100℃加熱5~30分鐘脫色,優(yōu)選1%~8%注射用活性炭在60℃~100℃加熱5~20分鐘;脫色液的過濾條件是0.22μm超微濾膜過濾。
(2)經(jīng)過2次以上的調(diào)pH-冷藏-過濾過程,得到“注射用藥液”。所指的經(jīng)過2次以上的調(diào)pH-冷藏-過濾過程,為先調(diào)pH至7.0~9.0,優(yōu)選pH7.5~8.8,冷藏,過濾;再調(diào)pH至3.0~6.5,優(yōu)選pH4.0~5.5,冷藏,過濾;再調(diào)pH至4.0~7.5,優(yōu)選pH5.0~7.0,冷藏,過濾;再調(diào)pH至7.5~9.5,優(yōu)選pH7.5~9.0,冷藏,過濾;所指的冷藏條件為放置在10℃~-20℃過夜,優(yōu)選5℃~-10℃;所指的過濾條件是0.10~0.45μm超微濾膜過濾,優(yōu)選0.22μm。
(3)“注射用藥液”測定藥物的含量和指紋圖譜;所指的含量系注射液中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總和不低于2mg/ml,優(yōu)選不低于10mg/ml。所指的指紋圖譜是以氧化苦參堿為主,包含苦參堿、槐果堿等。
(4)注射用藥液經(jīng)精濾;所指的精濾系經(jīng)0.10~0.22μm過濾。
(5)灌裝、封口、滅菌,即得不同規(guī)格的注射液;所指的規(guī)格為1~500ml,優(yōu)選2ml,5ml,10ml,12ml,20ml,25ml,50ml,100ml,250ml和500ml。
3、復(fù)方苦參凍干粉的制備發(fā)明復(fù)方苦參凍干粉的主要特征在于由藥物中間體或“注射用藥液”與骨架材料按照一定配比進(jìn)行配制,灌封,冷干。
方法1利用上述發(fā)明內(nèi)容1制備的藥物中間體與骨架材料按照一定配比進(jìn)行配制,經(jīng)活性炭脫色、過濾,經(jīng)過2次以上的調(diào)pH-冷藏-過濾過程,得到注射用藥液,測定藥物的含量和指紋圖譜;再經(jīng)精濾后,灌封于西林瓶中,放入冷凍機(jī)中,按照冷凍曲線冷凍干燥,取出得到的復(fù)方苦參凍干粉,鋁蓋壓口。
(1)藥物中間體與骨架材料的配比范圍為1∶0.5~1∶3(中間體骨架材料,W/W)的配比進(jìn)行配制,優(yōu)選1∶1。
(2)骨架材料是甘露醇或氯化鈉或葡萄糖。
(3)上述所指的各個(gè)制備過程的技術(shù)要求同發(fā)明內(nèi)容2中的(1)~(4)。
方法2利用上述發(fā)明內(nèi)容2制備的“注射用藥液”與骨架材料按照一定配比進(jìn)行配制,經(jīng)精濾后,測定藥物的含量和指紋圖譜;灌封于西林瓶中,放入冷凍機(jī)中,按照冷凍曲線冷凍干燥,取出得到的復(fù)方苦參凍干粉,鋁蓋壓口。
(1)“注射用藥液”與骨架材料的配比范圍為1∶0.5~1∶3(注射用藥液的固形物∶骨架材料,W/W)配比進(jìn)行配制,優(yōu)選1∶1和1∶1.5。
(2)骨架材料是甘露醇或氯化鈉或葡萄糖。
(3)所指的精濾系在100級的GMP車間內(nèi)用0.10~0.45μm超微濾膜過濾,優(yōu)選0.22μm。
方法3利用上述發(fā)明內(nèi)容2制備的“注射用藥液”,灌封于西林瓶中,放入冷凍機(jī)中,按照冷凍曲線冷凍干燥,得到復(fù)方苦參凍干粉。
方法1~3中所指共性技術(shù)特征(1)西林瓶灌裝是每支西林瓶灌裝2ml或5ml或10ml或15ml或20ml,優(yōu)選5ml和10ml;(2)所指的冷凍干燥包括預(yù)凍和升華階段;預(yù)凍階段預(yù)凍溫度-10℃~-60℃,優(yōu)選-20℃~-50℃;升華階段使真空度達(dá)到30Pa以下,按照每小時(shí)0.5~2℃的升溫速度給產(chǎn)品升溫,產(chǎn)品溫度達(dá)到-5℃~-10℃時(shí),以每小時(shí)1~5℃的速度升溫,直至產(chǎn)品的溫度升到21℃~31℃,繼續(xù)保持2~8小時(shí),使制品的溫度與擱板溫度重合(相差1℃以內(nèi)),在100級的GMP車間內(nèi)放入無菌過濾氣體,使箱門能夠打開,開箱,迅速封口,即得復(fù)方苦參凍干粉針。
(3)所指凍干粉針中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量為0.01~0.3g/支,優(yōu)選0.03~0.2g/支。
4、注射用復(fù)方苦參粉針的制備發(fā)明注射用復(fù)方苦參粉針的主要特征在于由“注射用藥液”直接噴霧或與骨架材料按照一定配比進(jìn)行配制后噴霧干燥,分裝制備得到。
方法1利用發(fā)明內(nèi)容2制備的“注射用藥液”調(diào)節(jié)到一定的相對密度后進(jìn)行噴霧干燥,經(jīng)噴霧器噴出的干燥品被送到旋風(fēng)臺使?jié)駳夂透煞鄯蛛x,干粉收于收集器中,在無菌條件下分裝于滅菌注射用西林瓶中,封口,即得到注射用復(fù)方苦參粉針。其主要技術(shù)參數(shù)(1)所指的相對密度為1.01~1.30,優(yōu)選1.05~1.15。
(2)所指的噴霧干燥條件為噴氣壓力調(diào)節(jié)到2~5kg/cm2,抽力4~8kg/cm2,進(jìn)口溫度150~300℃,出口溫度50~100℃。
(3)所指注射用復(fù)方苦參粉針中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量為0.01~0.3g/支,優(yōu)選0.03~0.2g/支。
方法2利用發(fā)明內(nèi)容2制備的“注射用藥液”與骨架材料按照一定配比進(jìn)行配制,經(jīng)精濾后,測定藥物的含量和指紋圖譜;噴霧干燥,經(jīng)噴霧器噴出的干燥品被送到旋風(fēng)臺使?jié)駳夂透煞鄯蛛x,干粉收于收集器中,在無菌條件下分裝于滅菌注射用西林瓶中,封口,即得到注射用復(fù)方苦參粉針。
(1)所指的得到注射用藥液與骨架材料按1∶0.5~1∶3(注射用藥液的固形物骨架材料,W/W)配比進(jìn)行配制,優(yōu)選1∶1;骨架材料為甘露醇或氯化鈉或葡萄糖。
(2)所指的精濾是在100級的GMP車間內(nèi)用0.10~0.45μm超微濾膜過濾,優(yōu)選0.22μm。
(3)所指注射用復(fù)方苦參粉針中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量為0.01~0.3g/支,優(yōu)選0.03~0.2g/支。
5、注射用復(fù)方苦參制劑的新的醫(yī)療用途發(fā)明內(nèi)容1~4中的各藥品具有抗腫瘤作用、對化療藥具有增效減毒作用、鎮(zhèn)痛作用、升白作用、提高免疫作用、抗肝炎作用等。
上述發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和效果在于加強(qiáng)了藥物的穩(wěn)定性,不會產(chǎn)生效價(jià)的降低,更能發(fā)揮藥物應(yīng)有的臨床效果,同時(shí)便于運(yùn)輸、貯備,減少破損率,降低成本,豐富了復(fù)方苦參制劑的劑型。
下面的實(shí)施例用于進(jìn)一步說明本發(fā)明,但它們并非試圖在任何方面限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)驗(yàn)例1處方苦參7000g 白土苓3000g 制成注射用復(fù)方苦參中間體制備方法將苦參和白土苓粉碎成粗粉,混勻,置滲漉缸中,加相當(dāng)于藥量6~8倍的1%醋酸浸漬24小時(shí)(根據(jù)季節(jié)溫度的不同而不同,冬季24小時(shí),夏季8小時(shí)),進(jìn)行滲漉,收集滲漉液,滲漉液減壓濃縮(75℃以下)至900~1200ml[或相對密度1.20(60℃)],另器存放。
藥渣加入6~8倍量注射用水,煎煮2次,每次1小時(shí),濾過,合并煎煮液,減壓濃縮至900~1200ml[或相對密度1.20(60℃)],放冷,過濾,得到上清液。
上清液與上述滲漉液的濃縮液合并,用乙醇醇沉3次。第一次加乙醇使溶液的含醇量達(dá)到60%,靜置過夜或冷藏(0~5℃,24h以上),0.45μm微孔濾膜濾過,上清液減壓回收乙醇,濃縮至相對密度1.20(60℃);再加乙醇使含醇量為80%,同上處理;第三次加乙醇使含醇量為90%,同上處理得到相對密度1.30(60℃)的醇溶物浸膏。
醇溶物浸膏以3000~3500ml的注射用水返溶、在0℃冷藏過夜、0.45μm濾膜過濾,得到濾液。濾液在80℃以下的減壓濃縮至相對1.40(60℃),即得到藥物中間體1000ml;放置于-5℃~5℃的冷庫保存。
藥物中間體相對密度的確定應(yīng)根據(jù)其中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量來確定,要求其含量大于100mg/ml,中間體的指紋圖譜中氧化苦參堿為主要峰,并由苦參堿、槐果堿等組成。
實(shí)驗(yàn)例2處方苦參7000g 白土苓3000g 制成注射用復(fù)方苦參中間體制備方法將苦參粉碎成粗粉,混勻,置滲漉缸中,加相當(dāng)于藥量8~10倍的1%醋酸浸漬24小時(shí)(根據(jù)季節(jié)溫度的不同而不同,冬季24小時(shí),夏季8小時(shí)),進(jìn)行滲漉,收集滲漉液,滲漉液減壓濃縮(75℃以下)至600~700ml[或相對密度1.20(60℃)],另器存放。
藥渣和白土苓粗粉加入6~8倍量注射用水,煎煮2次,每次1小時(shí),濾過,合并煎煮液,減壓濃縮至800~1000ml[或相對密度1.20(60℃)],放冷,過濾,得到上清液。
上清液與苦參滲漉液的濃縮液合并,以乙醇醇沉3次。第一次加乙醇使溶液的含醇量達(dá)到60%,靜置過夜或冷藏(0~5℃,24h以上),0.45μm微孔濾膜濾過,上清液減壓回收乙醇,濃縮至相對密度1.20(60℃);再加乙醇使含醇量為80%,同上處理;第三次加乙醇使含醇量為90%,同上處理得到相對密度1.30(60℃)的醇溶物浸膏。
醇溶物浸膏以2000~3000ml的注射用水返溶、在0℃冷藏過夜、0.45μm濾膜過濾,得到濾液。濾液在80℃以下的減壓濃縮至相對1.40(60℃),即得到藥物中間體1000ml;放置于-5℃~5℃的冷庫保存。
藥物中間體相對密度的確定應(yīng)根據(jù)其中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量來確定,要求其含量大于100mg/ml,中間體的指紋圖譜中氧化苦參堿為主要峰,并由苦參堿、槐果堿等組成。
實(shí)驗(yàn)例3處方苦參7000g 白土苓3000g 制成注射用復(fù)方苦參中間體制備方法將苦參粉碎成粗粉,混勻,置滲漉缸中,加相當(dāng)于藥量8~10倍的0.5%鹽酸浸漬24小時(shí),進(jìn)行滲漉,收集滲漉液,滲漉液減壓濃縮(75℃以下)至600~700ml[或相對密度1.20(60℃)],另器存放。
藥渣和白土苓粗粉加入6~8倍量注射用水,煎煮2次,每次1小時(shí),濾過,合并煎煮液,減壓濃縮至800~1000ml[或相對密度1.20(60℃)],放冷,過濾,得到上清液。
上清液與苦參滲漉液的濃縮液合并,以乙醇醇沉3次。第一次加乙醇使溶液的含醇量達(dá)到60%,靜置過夜或冷藏(0~5℃,24h以上),0.45μm微孔濾膜濾過,上清液減壓回收乙醇,濃縮至相對密度1.25(60℃);再加乙醇使含醇量為80%,同上處理;第三次加乙醇使含醇量為90%,同上處理得到相對密度1.30(60℃)的醇溶物浸膏。
醇溶物浸膏以2000~3000ml的注射用水返溶、在0℃冷藏過夜、0.45μm濾膜過濾,得到濾液。濾液在80℃以下的減壓濃縮至相對1.40(70℃),即得到藥物中間體;放置于-5℃~5℃的冷庫保存。
藥物中間體相對密度的確定應(yīng)根據(jù)其中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量來確定,要求其含量大于300mg/ml,中間體的指紋圖譜中氧化苦參堿為主要峰,并由苦參堿、槐果堿等組成。
實(shí)驗(yàn)例4處方苦參1400g 白土苓600g制備方法
按照實(shí)例1~3的任何一種方法制備成為藥物中間體。藥物中間體中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量大于100mg/ml,中間體的指紋圖譜中應(yīng)以氧化苦參堿為主要峰,并由苦參堿、槐果堿等組成。
合格的藥物中間體加入注射用水至900ml,經(jīng)3%注射用活性炭加熱回流脫色10分鐘、0.22μm超微濾膜過濾。
濾液經(jīng)過4次調(diào)pH-冷藏-過濾過程。第一次調(diào)至pH7.8,在0℃左右冷藏過夜,0.22μm超微濾膜過濾;第二次調(diào)至pH5.0,同法處理;第三次調(diào)至pH6.8,同法處理。調(diào)pH用20%NaOH和40%醋酸進(jìn)行。
第四次調(diào)pH至8.8后,加注射用水調(diào)至1000ml,在-5℃左右冷藏過夜,0.22μm超微濾膜過濾。分別灌封成2ml/瓶,5ml/瓶,10ml/瓶,12ml/瓶,20ml/瓶,25ml/瓶。封口、并在105℃滅菌30分鐘,包裝,檢查合格,入庫。
實(shí)驗(yàn)例5處方苦參1400g 白土苓600g 氯化鈉18g制備方法按照實(shí)例1~3的任何一種方法制備成為藥物中間體。藥物中間體中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量大于100mg/ml,中間體的指紋圖譜中應(yīng)以氧化苦參堿為主要峰,并由苦參堿、槐果堿等組成。
氯化鈉用適量的注射用水溶解后,加入合格的藥物中間體,并加入注射用水至900ml,經(jīng)3%注射用活性炭加熱回流脫色10分鐘、0.22μm超微濾膜過濾。
濾液經(jīng)過4次調(diào)pH-冷藏-過濾過程。第一次調(diào)至pH7.8,在0℃左右冷藏過夜,0.22μm超微濾膜過濾;第二次調(diào)至pH5.0,同法處理;第三次調(diào)至pH6.8,同法處理。調(diào)pH用20%NaOH和40%醋酸進(jìn)行。
第四次調(diào)pH至8.8后,加注射用水調(diào)至2000ml,在-5℃左右冷藏過夜,0.22μm超微濾膜過濾。分別灌封成50ml/瓶,100ml/瓶,250ml/瓶,500ml/瓶。封口、并在105℃滅菌30分鐘,包裝,檢查合格,入庫。
實(shí)驗(yàn)例6處方苦參1400g 白土苓600g 葡萄糖100g制備方法
按照實(shí)例1~3的任何一種方法制備成為藥物中間體。藥物中間體中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量大于100mg/ml,中間體的指紋圖譜中應(yīng)以氧化苦參堿為主要峰,并由苦參堿、槐果堿等組成。
葡萄糖用適量的注射用水完全溶解后,加入合格的藥物中間體,并用注射用水至900ml,經(jīng)3%注射用活性炭加熱回流脫色10分鐘、0.22μm超微濾膜過濾。
濾液經(jīng)過4次調(diào)pH-冷藏-過濾過程。第一次調(diào)至pH7.8,在0℃左右冷藏過夜,0.22μm超微濾膜過濾;第二次調(diào)至pH5.0,同法處理;第三次調(diào)至pH6.8,同法處理。調(diào)pH用20%NaOH和40%醋酸進(jìn)行。
第四次調(diào)pH至7.8后,加注射用水用水調(diào)至2000ml,在-5℃左右冷藏過夜,0.22μm超微濾膜過濾。分別灌封成50ml/瓶,100ml/瓶,250ml/瓶,500ml/瓶。封口、并在105℃滅菌30分鐘,包裝,檢查合格,入庫。
實(shí)驗(yàn)例7處方苦參1400g 白土苓600g制備方法按照實(shí)例1~3的任何一種方法制備成為藥物中間體。藥物中間體中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量大于100mg/ml,中間體的指紋圖譜中應(yīng)以氧化苦參堿為主要峰,并由苦參堿、槐果堿等組成。
在100級的GMP車間內(nèi),骨架材料(甘露醇200g)加入適量的注射用水完全溶解后,加入合格藥物中間體200g,加入注射用水至450ml,經(jīng)3g注射用活性炭加熱至80℃并保溫30分鐘,冷至45℃時(shí)脫炭0.22μm超微濾膜過濾。
濾液經(jīng)過4次調(diào)pH-冷藏-過濾過程。第一次調(diào)至pH7.8,在0℃左右冷藏過夜,0.22μm超微濾膜過濾;第二次調(diào)至pH5.0,同法處理;第三次調(diào)至pH6.8,同法處理。調(diào)pH用20%NaOH和40%醋酸進(jìn)行。
第四次調(diào)pH至7.8后,加注射用水調(diào)至500ml,在-5℃左右冷藏過夜,用0.22μm超微濾膜過濾,半成品檢查(測定藥物的含量和指紋圖譜)。灌封于7ml西林瓶中,每瓶裝2ml;或灌封于10ml西林瓶中,每瓶裝5ml;或灌封于20ml西林瓶中,每瓶裝10ml,蓋上丁基橡膠塞,保留出氣孔,放入凍干機(jī)中按照設(shè)計(jì)的凍干曲線進(jìn)行冷凍干燥;當(dāng)干燥箱內(nèi)的真空度與泵口真空度接近并制品溫度與板溫重合時(shí),關(guān)閉冷凍系統(tǒng)和真空系統(tǒng),壓緊瓶塞,放氣,取出樣品,鋁蓋壓口,包裝,檢查合格,入庫;即得復(fù)方苦參凍干粉針劑。
單純的復(fù)方苦參溶液凍干后不能形成堅(jiān)實(shí)的骨架,稍加震動后樣品即成粉末狀,可能影響其復(fù)溶,故需對其與甘露醇或氯化鈉或葡萄糖等以不同的比例進(jìn)行骨架篩選,復(fù)方苦參中間體與甘露醇等骨架材料之比在1∶0.5~3(W/W)范圍之內(nèi),選取1∶1和1∶1.5,凍干后樣品外觀均良好,且易溶解。
凍干曲線包括預(yù)凍和升華兩個(gè)階段預(yù)凍階段本品的共晶點(diǎn)為-15~-20℃,凍干過程一般將樣品溫度降低到共晶點(diǎn)-10℃以下,開始升華;預(yù)凍溫度越低,在升溫、升華過程中樣品不易飛揚(yáng),凍干物的粒子均勻細(xì)膩,溶解速度快。因此,選擇預(yù)凍溫度在-30℃或更低的溫度時(shí)開始升溫、升華較佳。
升華階段在開冷凝器1小時(shí)后使真空度達(dá)到30Pa以下,優(yōu)選9~20Pa,按照每小時(shí)0.5~2℃的升溫速度給產(chǎn)品升溫,產(chǎn)品溫度達(dá)到-5℃~-10℃時(shí),以每小時(shí)1~5℃的速度升溫,直至產(chǎn)品的溫度升到21℃~31℃,繼續(xù)保持2~8小時(shí),使制品的溫度與擱板溫度重合(相差1℃以內(nèi)),放入無菌過濾氣體,使箱門能夠打開,開箱,迅速封口,即得冷干粉針。為使水氣升華完全,凍干品的殘留水分低,升溫及保溫時(shí)間可適當(dāng)延長。
采用復(fù)方苦參凍干粉針劑對家兔的試驗(yàn),結(jié)果表明本品對家兔耳緣靜脈未產(chǎn)生明顯刺激性,通過給豚鼠腹腔注射,結(jié)果表明豚鼠未引起全身過敏性反應(yīng);按常規(guī)溶血試驗(yàn)方法觀察2mg/ml注射,結(jié)果顯示在4小時(shí)內(nèi)對家兔紅細(xì)胞無明顯溶血作用,也未見紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。
本發(fā)明制成的復(fù)方苦參制品骨架疏松,粒子均勻細(xì)膩,震搖不易碎,加水能迅速溶解。凍干粉針中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量為0.01~0.3g/瓶,優(yōu)選0.03~0.2g/瓶。
實(shí)驗(yàn)例8骨架材料選用氯化鈉,按復(fù)方苦參中間體與骨架材料(氯化鈉)之比1∶1.5,余皆同實(shí)施例7。
實(shí)驗(yàn)例9骨架材料選用葡萄糖,按復(fù)方苦參中間體與骨架材料之比1∶1,余皆同實(shí)施例7。
實(shí)驗(yàn)例10
按照實(shí)施例4中制備的合格注射用藥液,直接噴霧(噴氣壓力調(diào)節(jié)到4kg/cm2,抽力6kg/cm2,進(jìn)口溫度180℃,出口溫度80℃),經(jīng)噴霧器噴出的干燥品被送到旋風(fēng)臺使?jié)駳夂透煞鄯蛛x,干粉收于收集器中,在無菌條件下分裝于滅菌注射用西林瓶中,封口,包裝,檢查合格,入庫,即得到注射用復(fù)方苦參粉針。注射用復(fù)方苦參粉針中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量為0.01~0.3g/支,優(yōu)選0.03~0.2g/支。
實(shí)驗(yàn)例11按照實(shí)施例4中制備的合格注射用藥液與骨架材料按照一定配比進(jìn)行配制,0.22μm精濾后,直接噴霧,噴霧條件等其余制備過程同實(shí)施例10。
注射用藥液與骨架材料按1∶0.5~1∶3(注射用藥液的固形物骨架材料,W/W)配比進(jìn)行配制,優(yōu)選1∶1和1∶1.5;骨架材料為甘露醇或氯化鈉或葡萄糖。注射用復(fù)方苦參粉針中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量為0.01~0.3g/支,優(yōu)選0.03~0.2g/支。
實(shí)驗(yàn)例12注射用復(fù)方苦參制劑的鎮(zhèn)痛試驗(yàn)一.用小鼠熱板法測定復(fù)方苦參注射液的鎮(zhèn)痛作用1.靜脈注射復(fù)方苦參注射液對小鼠鎮(zhèn)痛作用的影響小鼠全部用雌性,實(shí)驗(yàn)室溫度保持在20℃,將小鼠置于55℃的恒溫?zé)岚迳?,以舔后足作為痛反?yīng)的指標(biāo),用秒表記錄小白鼠放上熱板至出現(xiàn)舔足的反應(yīng)時(shí)間作為該鼠的痛閾值,挑選出痛閾值5-30秒的小鼠作為實(shí)驗(yàn)對象,第二天復(fù)試,將過敏、遲純或喜歡跳動的動物均剔除不用,小鼠按體重和基礎(chǔ)痛閾值隨機(jī)分為5組,正常對照組(生理鹽水0.2ml/只)、復(fù)方苦參注射液三個(gè)不同劑量組(0.8g/kg、1.6g/kg和3.2g/kg)和陽性對照組(度冷丁25mg/kg)。除度冷丁肌肉注射外,其余各組均尾靜脈注射。給藥后0.5、1、2、3、4小時(shí)分別測定痛閾一次,共5次。計(jì)算對照組和給藥組的痛閾值進(jìn)行組間t檢驗(yàn),用藥后痛閾值超過60秒,為防止?fàn)C傷即予取出,仍以60秒計(jì)算。
從表1看出,復(fù)方苦參注射液三個(gè)劑量0.8g/kg、1.6g/kg和3.2g/kg均能明顯提高痛閾值,給藥后半小時(shí),均顯出鎮(zhèn)痛作用,隨著復(fù)方苦參注射液劑量的增加,其作用持續(xù)時(shí)間也增加,鎮(zhèn)痛強(qiáng)度也隨著劑量的增大而增強(qiáng),高劑量組痛閾值提高率可達(dá)83.74%,鎮(zhèn)痛時(shí)間可持續(xù)三個(gè)小時(shí)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明,復(fù)方苦參注射液對熱刺激引起的疼痛具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。
表1復(fù)方苦參注射液iv對小鼠熱板痛閾值的影響(X±SD)

與對照組比較,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.0012.腹腔注射復(fù)方苦參注射液對小鼠鎮(zhèn)痛作用的影響實(shí)驗(yàn)方法、數(shù)據(jù)處理同試驗(yàn)1,僅改變給藥途徑為腹腔注射,小鼠分為5組,正常對照組(腹腔給生理鹽水0.2ml/只),復(fù)方苦參注射液三個(gè)不同劑量組(1.6,3.2,6.4g/kg)和陽性對照度冷丁組(25mg/kg),除度冷丁皮下給藥外,其余各組均腹腔注射給藥。
表2復(fù)方苦參注射液ip對小鼠熱板痛閾值的影響(X±SD)

注與對照組比較*P<0.01,**P<0.001結(jié)果見表2,復(fù)方苦參注射液三個(gè)劑量組與對照組比較都有顯著差別,均能明顯提高痛閾,給藥后0.5-2h之間鎮(zhèn)痛作用最強(qiáng),痛閾提高率最高可達(dá)60.29%。隨著時(shí)間的延長鎮(zhèn)痛作用逐漸減弱,鎮(zhèn)痛時(shí)間可持續(xù)3h。藥物鎮(zhèn)痛強(qiáng)度隨著濃度的增大而增強(qiáng),每個(gè)時(shí)間點(diǎn)都明顯的量效關(guān)系,從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看出復(fù)方苦參注射液ip對熱刺激引起的疼痛具有明顯的鎮(zhèn)痛作用,其鎮(zhèn)痛時(shí)間和強(qiáng)度與度冷丁相似。
二.用酸刺激扭體法測定復(fù)方苦參注射液對小鼠的鎮(zhèn)痛作用1.靜脈注射復(fù)方苦參注射液對小鼠鎮(zhèn)痛作用的影響取健康小鼠,雄雌各半,按體重隨機(jī)分為5組正常對照組(尾靜脈給生理鹽水0.2ml/只),復(fù)方苦參注射液三個(gè)不同劑量組(0.8g/kg、1.6g/kg和3.2g/kg)及陽性對照度冷丁組(25mg/kg)。除陽性對照組肌肉注射外,其余各組均尾靜脈注射給藥,半小時(shí)后分別給每只小鼠腹腔注射1.2%醋酸0.2ml,5min后計(jì)算發(fā)生典型的扭體次數(shù)(伸長后肢、腹部收縮和扭曲軀體),記錄各小鼠15min內(nèi)扭體次數(shù),比較各給藥組和對照組的扭體次數(shù),進(jìn)行組間t檢驗(yàn),并計(jì)算給藥組扭體次數(shù)的減少率。

表3復(fù)方苦參注射液iv對小鼠扭體反應(yīng)的影響(X±SD)

與對照組比較*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001由表3可知,小鼠注射復(fù)方苦參注射液后,可以明顯降低用醋酸引起扭體的發(fā)生率,三個(gè)不同劑量組的扭體減少率分別達(dá)到38.29%、54.63%、60.52%,其減少率隨著藥物劑量的增大而增大。
2.肌肉注射復(fù)方苦參注射液對小鼠鎮(zhèn)痛作用的影響實(shí)驗(yàn)方法,數(shù)據(jù)處理同“2.1”,僅改變給藥途徑為肌肉注射,小鼠分為5組正常對照組給生理鹽水0.2ml/只,復(fù)方苦參注射液三個(gè)不同劑量組(2.4、4.8、9.6g/kg)及陽性對照度冷丁組(25mg/kg)。除陽性對照組皮下注射外,其余各組均肌肉注射給藥。
表4復(fù)方苦參注射液im對小鼠扭體反應(yīng)的影響(X±SD)

結(jié)果見表4,復(fù)方苦參注射液組與對照組相比較能明顯降低因醋酸引起的扭體發(fā)生率,三個(gè)不同劑量組的減少率分別為50.00%,57.91%和89.55%其抑制作用隨著藥物濃度增大而增強(qiáng),與對照組比較具有非常顯著的差異,說明復(fù)方苦參注射液對醋酸刺激引起的疼痛具有明顯的鎮(zhèn)痛作用,復(fù)方苦參注射大劑量組扭體次數(shù)減少率與度冷丁相比,在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無顯著性差異。
實(shí)驗(yàn)例13抗腫瘤作用的研究1.復(fù)方苦參注射液對小鼠S180實(shí)體瘤生長的影響小鼠40只,每只在右腋部皮下接種S180腹水瘤0.1(含104個(gè)細(xì)胞)轉(zhuǎn)為實(shí)體瘤。第二天將動物隨機(jī)分為5組,對照組iv生理鹽水0.2ml/只陽性藥物組ip環(huán)磷酰胺35mg/kg;另三組給復(fù)方苦參注射液,分別ip 3.2,6.4,12.8g/kg,陽性藥隔日給藥一次,其余各組每天給藥一次,共計(jì)給藥11天,停藥次日解剖動物,取出腫瘤并稱重,各組與對照組比較瘤重,進(jìn)行組間t檢驗(yàn),計(jì)算瘤重抑制率。

表5復(fù)方苦參注射液對小鼠腫瘤S180生長的影響(X±SD)

與對照組比較*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001結(jié)果見表5,復(fù)方苦參注射液小、中、大三個(gè)劑量組,瘤重抑制率分別為38.9%、40.9%、58.5%,與對照組比較有顯著性差異,說明復(fù)方苦參注射液有明顯抑制S180腫瘤生長的作用。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三批,結(jié)果相似。
2.復(fù)方苦參對小鼠肝癌H22實(shí)體瘤生長的影響瘤源用H22代替S180,其它方法包括動物、分組、藥物劑量、觀察指標(biāo)等與本試驗(yàn)1相同。
表6復(fù)方苦參注射液對小鼠肝癌H22生長的影響(X±SD)

注與對照組比,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001結(jié)果見表6,復(fù)方苦參注射液小、中、大三個(gè)劑量組,瘤重抑制率分別為50.0%,51.4%,51.2%,與對照組比較有顯著性差異,說明復(fù)方苦參注射液有明顯抑制H22腫瘤生長的作用。重復(fù)實(shí)驗(yàn),結(jié)果相似。
實(shí)驗(yàn)例14對免疫功能的作用研究1、對荷瘤小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響方法BALB/C雄性小鼠54只,體重18-20g,隨機(jī)分為6組,每組9只,II事先在小鼠右腋/皮下接種S180腹水瘤0.1ml(含106個(gè)瘤細(xì)胞),第二天開始給藥,正常對照組,荷瘤組ip生理鹽水0.2ml/20g。陽性藥物組為po青春寶0.4ml/20g,復(fù)方苦參注射液三組分別ip3.2、6.4、12.8g/kg(體積均為0.2ml/20g)。連續(xù)給藥12天,停藥后24小時(shí)斷頭放血處死小鼠,在無菌條件下取出脾臟,用1640培養(yǎng)液(含10%小牛血清)制成脾細(xì)胞懸液,并將小鼠脾細(xì)胞調(diào)整到5×106細(xì)胞/ml,加到96孔培養(yǎng)板中,每孔100μl,每個(gè)脾加雙份(即一個(gè)加ConA,一個(gè)不加ConA)。ConA 20μl(濃度為100μg/ml),1640培養(yǎng)液80μl,使每孔至200μl體積,于5% CO237℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)72小時(shí),終止培養(yǎng)前24小時(shí),每孔加3H-TdR 3.7×109(iucr)。用細(xì)胞收集器(TITERTEK CELL HARVESTER 550)收集細(xì)胞于49型玻璃纖維濾紙上,依次用蒸餾水、5%三氨醋酸、無水乙醇洗滌,將濾紙片置60℃溫箱烘干,加到含5ml閃爍液的杯內(nèi),經(jīng)液閃儀(BECKMEN LS 9800)測參入放射性活度(cpm),然后計(jì)算刺激指數(shù)(SI),即

表7復(fù)方苦參注射液對荷瘤小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響(X±SD)

與荷瘤對照組比,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001結(jié)果見表7,小鼠接種瘤細(xì)胞后,刺激指數(shù)明顯低于正常組(P≤0.05)。在給青春寶和復(fù)方苦參注射液小、中、大三個(gè)劑量后,刺激指數(shù)明顯上升,與荷瘤對照組比較有顯著性差異,P<0.05。結(jié)果提示復(fù)方苦參注射液對COnA刺激荷瘤小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化有促進(jìn)作用,即對T淋巴細(xì)胞免疫功能有增強(qiáng)作用。
2.對溶血空斑(PFC)形成的影響分組、給藥同“三.1”淋轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn),于第8天給藥10分鐘后,用2×108/ml SRBC致敬小鼠,每鼠iv0.1ml。5天后解剖取脾,制備脾細(xì)胞懸液及計(jì)數(shù)同淋轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)。取試管若干去,每管依次加入脾細(xì)胞0.2%SRBC、1∶10豚鼠血清各0.5ml,混勻,置30℃水浴中溫育1小時(shí),3000rpm離心5分鐘后取上清液,在UV-754分光光度計(jì)413nm波長下記錄吸收度。
表8復(fù)方苦參注射液對荷瘤小鼠PFC的影響(X±SD)

與荷瘤對照組比*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001結(jié)果見表8,小鼠接種瘤細(xì)胞后,光密度明顯低于正常組(P<0.05)。在給了青春寶和復(fù)方苦參注射液小、中、大三個(gè)劑量后,光密度明顯上升,與荷瘤對照組比較都有顯著性差異,P<0.05。結(jié)果提示復(fù)方苦參注射液對荷瘤小鼠脾淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗錦羊紅細(xì)胞抗體溶血素有促進(jìn)作用,即對B淋巴細(xì)胞體液免疫功能有增強(qiáng)作用。
實(shí)驗(yàn)例15止血作用的研究1、對小鼠凝血時(shí)間的影響將健康小鼠體重平均分為5組,分別為正常對照組、陽性對照組和復(fù)方苦參注射液的三個(gè)不同劑量組,正常對照組小鼠ip與試驗(yàn)組體積相同的生理鹽水,陽性對照組小鼠ip0.75g/kg止血敏。試驗(yàn)組分別ip1.5、3.0、6.0g/kg復(fù)方苦參注射液,連續(xù)給藥三天,末次給藥30min后,用內(nèi)徑為1mm的玻璃毛細(xì)管從小鼠眼眶采血,至血液充滿毛細(xì)管,并開始記時(shí),每隔30s折斷毛細(xì)管一小段,檢查有無出現(xiàn)血凝絲。計(jì)算從毛細(xì)管充滿血液到出現(xiàn)血凝絲的時(shí)間,為凝血時(shí)間,與生理鹽水對照組比較,以判藥效。
表9復(fù)方苦參注射液對小鼠凝血時(shí)間的影響(X±SD)

結(jié)果見表9,小鼠ip不同劑量的復(fù)方苦參注射液后,其凝血時(shí)間與正常對照組相比,均有顯著性差異,這表明了復(fù)方苦參注射液能縮短小鼠的凝血時(shí)間。
2.對小鼠出血時(shí)間的影響出血時(shí)間的測定,經(jīng)出血自然停止作為測試出血時(shí)間指標(biāo),取18-20g健康雄性小鼠,按體重平均分為正常對照組、陽性對照組和復(fù)方苦參注射液三個(gè)不同的劑量組,正常對照組小鼠ip與試驗(yàn)組體積相同的生理鹽水。陽性對照組小鼠ip 0.75g/kg止血敏,試驗(yàn)組分別ip 1.5,3.0,6.0g/kg復(fù)方苦參注射液,給藥30min后,分別以利剪將小鼠尾尖3mm處橫斷,待血液自行溢出時(shí)開始記時(shí),每隔30s用濾紙吸去血滴一次,直到濾紙吸時(shí)無血為止,為出血時(shí)間,將所得數(shù)據(jù)進(jìn)行時(shí)間t檢驗(yàn)。
表10復(fù)方苦參注射液對小鼠出血時(shí)間的影響(X±SD)

結(jié)果見表10,小鼠腹腔注射不同劑量的復(fù)方苦參注射液后,大劑量和中劑量組出血時(shí)間與正常對照組相比,具有顯著性差異,小劑量組的小鼠出血時(shí)間與正常對照組無明顯差異,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明復(fù)方苦參注射液能縮短小鼠的出血時(shí)間。
實(shí)驗(yàn)例16復(fù)方苦參注射液對環(huán)磷酰胺化療的增效和減毒作用1.復(fù)方苦參注射液對環(huán)磷酰胺的增效作用小鼠40只,體重22.3±1.3g接種瘤細(xì)胞,取已生長一周的S180腹水瘤瘤源,用生理鹽水(N.S)1∶4稀釋(計(jì)數(shù)為3×104/mm3)接種0.1ml于每只小鼠右腋皮下,24小時(shí)后分組,共分成4組。第1組為對照組,給N.S組合Cy 20mg/kg;3組為Cy 20mg/kg+復(fù)方苦參注射液6.4g/kg;4組為Cy 20mg/kg+復(fù)方苦參注射液12.8g/kg;以上各組均為腹腔注射給藥,其中復(fù)方苦參注射液每天1次連續(xù)9天,環(huán)磷酰胺隔天1次共4次,第10于全部斷頸椎處死取瘤,用電子天平稱重,結(jié)果見表11。
由表11可見,Cy 20mg/kg和35mg/kg均能抑制瘤重,與對照組比分別給N.S;2組為Cy 100mg/kg分別加復(fù)方苦參注射液6.4、12.8g/kg兩劑量后,有抑制瘤重的增效作用,分別P<0.05,P<0.001。
2.復(fù)方苦參注射液對化療減毒的作用小鼠51只,體重19.4±0.78g,隨機(jī)分成5組。第1組為對照組給N.S;2組為Cy100mg/kg;3組為Cy 100mg/kg+復(fù)方苦參注射液12.8g/kg;4組為Cy 100mg/kg+復(fù)方苦參注射液6.4g/kg;5組為Cy 100mg/kg+復(fù)方苦參注射液3.2g/kg。以上各組均為腹腔注射給藥,其中復(fù)方苦參注射液每天1次連續(xù)7天,Cy均于每6、7天各給藥1次,第8天從眼眶取血和股骨取骨髓用血細(xì)胞自動計(jì)數(shù)儀沒WBC,骨髓有核細(xì)胞。結(jié)果見表12。
由表12可見,Cy 100mg/kg使WBC、骨髓有核細(xì)胞均降低,在加用復(fù)方苦參注射液后,骨髓有核細(xì)胞有明顯的增加,在加用復(fù)方苦參注射液3.2g/kg后,WBC明顯上升,均P<0.05,其中復(fù)方苦參注射液6.4g/kg、3.2g/kg兩組與單純Cy組比較P<0.05。
表11復(fù)方苦參注射液對環(huán)磷酰胺的增效作用(X±SD)

(1)與對照組比較^P<0.05(2)與Cy比較*P<0.05,**P<0.001表12復(fù)方苦參注射液對化療減毒作用(X±SD)

(1)與對照組比較^P<0.001(2)與Cy比較*P<0.05實(shí)驗(yàn)例17復(fù)方苦參注射液治療慢性乙型肝炎臨床研究1.病例選擇 431例慢性乙型肝炎診斷符合國家標(biāo)準(zhǔn)?;颊逪BV感染超過半年,肝功能ALT及AST異常超過3個(gè)月,有不同程度的乏力、納差等,血清ALT(142±106)U/L,AST(110±97)U/L,血清總膽紅素(51±39)μmol/L,HBeAg陽性,血清白蛋白在正常范圍,臨床上排除肝硬化及其他病毒性肝炎。431例患者隨機(jī)分為復(fù)方苦參注射液+干擾素組和干擾素組。復(fù)方苦參注射液+干擾素組222例,男122例,女100例;干擾素組209例,男119例,女90例。兩組患者一般情況差別無顯著性。
2.治療方法 復(fù)方苦參注射液+干擾素組給予60ml+10%葡萄糖液250mL靜脈滴注,每天1次共3個(gè)月,α-2b干擾素50μg肌注,每天1次共10d,以后50μg肌注,隔日1次共90次;干擾素組單用α-2b干擾素治療,其劑量、用法、療程與治療組一致。兩組患者同時(shí)使用強(qiáng)力寧或甘利欣、古拉丁等護(hù)肝藥物治療。
3.結(jié)果3.1治療前后ALT及AST變化 兩組患者治療前及治療3周,6周,12周及24周時(shí),其ALT及AST的變化,包括下降幅度,恢復(fù)的時(shí)間似乎有區(qū)別,但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異均無顯著意義。見表13。
3.2兩組患者治療前后血清中HBeAg、抗HBe及HBV-DNA的變化 復(fù)方苦參注射液+干擾素組的患者治療結(jié)束時(shí),血清中HBV-DNA,HBeAg的轉(zhuǎn)陰率分別為73%及68%,抗HBe陽轉(zhuǎn)率為61%,單用干擾素組治療結(jié)束時(shí),上述指標(biāo)分別為46%,43%及36%,治療組的療效明顯優(yōu)于對照組,見表14。
表13治療前后ALT及AST變化X±SD,U/L

表14治療前后HBeAg抗HBe及HBV-DNA的變化

實(shí)驗(yàn)例18毒副作用本品經(jīng)過2588例的臨床觀察中,未發(fā)現(xiàn)任何毒副作用,且大部病例在接受治療后,精神、食欲、睡眠等一般狀況也隨之改善,全身體力狀態(tài)評分上升,提高患者的生存質(zhì)量。因而,無論患者一般狀況如何,均可安全的使用,可廣泛的適用于中晚期癌的治療。
權(quán)利要求
1.一種注射用復(fù)方苦參制劑,其特征在于其原料為苦參和白土苓;主要含有氧化苦參堿、苦參堿、槐果堿、槐定堿、白土苓皂苷等。其特征在于(1)藥物經(jīng)過一定的制備工藝,得到藥物中間體;(2)藥物中間體經(jīng)過一定的制備方法,得到不同規(guī)格的復(fù)方苦參注射液;(3)藥物中間體經(jīng)過一定的制備方法,得到復(fù)方苦參凍干粉;(4)藥物中間體經(jīng)過一定的制備方法,得到注射用復(fù)方苦參粉針。
2.權(quán)利要求1中的中間體,其特征在于利用下述方法制備而成(1)一定比例的苦參和白土苓用溶劑按照一定的制備方法進(jìn)行提??;(2)提取液濃縮,得到濃縮物;(3)濃縮物經(jīng)過多次的醇沉-冷藏-過濾-回收溶劑的過程,得到醇溶物;(4)醇溶物以一定比例的注射用水返溶、冷藏、過濾,得到濾液;(5)濾液濃縮成一定密度,即得藥物中間體;(6)測定中間體的藥物含量和指紋圖譜,放置于冷庫中。
3.權(quán)利要求1中的復(fù)方苦參注射液,其特征在于是利用下述方法制備而成(1)利用權(quán)利1和2制備的藥物中間體,加入注射用溶劑,經(jīng)活性炭脫色、過濾;(2)經(jīng)過2次以上的調(diào)pH-冷藏-過濾過程,得到注射用藥液;(3)測定藥物的含量和指紋圖譜;(4)注射用藥液經(jīng)精濾;(5)灌裝;(6)封口、滅菌,即得不同規(guī)格的注射液。
4.權(quán)利要求1中的復(fù)方苦參凍干粉,其特征在于是利用下述方法制備而成(1)利用權(quán)利要求1,2和3(1)~3(4)制備的注射用藥液,灌封于西林瓶中,放入冷凍機(jī)中,按照冷凍曲線冷凍干燥,得到復(fù)方苦參凍干粉。(2)利用權(quán)利要求1、2制備的藥物中間體與骨架材料按照一定配比進(jìn)行配制,經(jīng)活性炭脫色、過濾,經(jīng)過2次以上的調(diào)pH-冷藏-過濾過程,得到注射用藥液,測定藥物的含量和指紋圖譜;再經(jīng)精濾后,灌封于西林瓶中,放入冷凍機(jī)中,按照冷凍曲線冷凍干燥,得到復(fù)方苦參凍干粉。(3)利用權(quán)利要求1、2和3(1)~3(2)制備的注射用藥液與骨架材料按照一定配比進(jìn)行配制,經(jīng)精濾后,測定藥物的含量和指紋圖譜;灌封于西林瓶中,放入冷凍機(jī)中,按照冷凍曲線冷凍干燥,得到復(fù)方苦參凍干粉。
5.權(quán)利要求1中的注射用復(fù)方苦參粉針,其特征在于是利用下述方法制備而成(1)利用權(quán)利要求1、2和3(1)~3(4)制備的注射用藥液調(diào)節(jié)到一定的相對密度后進(jìn)行噴霧干燥,經(jīng)噴霧器噴出的干燥品被送到旋風(fēng)臺使?jié)駳夂透煞鄯蛛x,干粉收于收集器中,在無菌條件下分裝于滅菌注射用西林瓶中,封口,即得到注射用復(fù)方苦參粉針。(2)利用權(quán)利要求1、2和3(1)~3(2)制備的注射用藥液與骨架材料按照一定配比進(jìn)行配制,經(jīng)精濾后,測定藥物的含量和指紋圖譜;噴霧干燥,經(jīng)噴霧器噴出的干燥品被送到旋風(fēng)臺使?jié)駳夂透煞鄯蛛x,干粉收于收集器中,在無菌條件下分裝于滅菌注射用西林瓶中,封口,即得到注射用復(fù)方苦參粉針。
6.權(quán)利要求1~2中的中間體制備方法的技術(shù)特征在于(1)原料苦參和白土苓的比例為5∶2~2∶1,優(yōu)選7∶3;(2)所指的提取溶劑為水、0.1%~60%稀酸、1%~80%的醇,優(yōu)選稀酸和水;(3)所述的提取方法是藥物飲片或粗粉利用滲漉提取和回流提取方法進(jìn)行單獨(dú)提取后合并或混合提取,優(yōu)選先稀酸滲漉后,再以水煎煮提?。幌∷釢B漉條件為藥學(xué)可使用的有機(jī)酸或無機(jī)酸,濃度0.1%~60%,5℃~40℃,2~60小時(shí),優(yōu)選5%~50%的醋酸或鹽酸,10℃~30℃,8~48小時(shí);回流提取條件為以0%~80%的水-醇溶劑進(jìn)行回流提取1~4次,優(yōu)選0%~60%的水醇溶劑,回流提取2次;所指的醇為1~5個(gè)碳的脂肪醇,優(yōu)選甲醇和乙醇;(4)所指的濃縮是在≤100℃的溫度下的常壓濃縮或減壓濃縮,優(yōu)選30~80℃的減壓濃縮;(5)所指的醇沉-冷藏-過濾-回收溶劑過程,其醇沉條件是利用高濃度的醇加入到藥物濃縮液中,第一次醇沉?xí)r,藥液中的醇濃度達(dá)到30%~80%,優(yōu)選50%~70%,第二次醇沉?xí)r,藥液中的醇濃度達(dá)到50%~90%,優(yōu)選70%~85%,第三次醇沉?xí)r,藥液中的醇濃度達(dá)到80%~95%,優(yōu)選85%~92%,醇沉次數(shù)優(yōu)選為三次;醇沉液的冷藏條件為-20℃~10℃,4~48小時(shí),優(yōu)選-16℃~8℃,8~36小時(shí);過濾條件為板框過濾或離心過濾或膜過濾;過濾后的藥液在減壓條件下,回收溶劑,回收溫度30℃~90℃,優(yōu)選40℃~75℃;每次回收溶劑后浸膏的相對密度為1.02~1.40(60℃),優(yōu)選1.05~1.35(60℃)。(6)所指的水返溶條件為加入1∶1~1∶10(藥液∶水液,W/V),優(yōu)選1∶1.5~1∶6(藥液∶水液,W/V);水返溶液冷藏的條件為放置在10℃~-20℃過夜,優(yōu)選5℃~-10℃;冷藏液過濾條件是離心過濾或0.45μm濾膜過濾;濾液的濃縮條件為在45℃~95℃的減壓濃縮;藥物中間體的密度為1.10~1.40(60℃),優(yōu)選1.15~1.35(60℃)。放置中間體冷庫的條件為10℃~-20℃,優(yōu)選5℃~-10℃。(7)所指藥物中間體的含量為氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總和不低于5mg/ml,優(yōu)選不低于15mg/ml。(8)所指中間體的指紋圖譜中氧化苦參堿為主要峰,并由苦參堿、槐果堿等組成。
7.權(quán)利要求1~3中的復(fù)方苦參注射液制備方法的技術(shù)特征在于(1)合格的藥物中間體加入計(jì)算量的注射用水或生理鹽水或等滲葡萄糖液,加入0.1%~10%注射用活性炭在40℃~100℃加熱5~30分鐘脫色,優(yōu)選1%~8%注射用活性炭在60℃~100℃加熱5~20分鐘;脫色液的過濾條件是0.22μm超微濾膜過濾。(2)所指的經(jīng)過2次以上的調(diào)pH-冷藏-過濾過程,為先調(diào)pH至7.0~9.0,優(yōu)選pH7.5~8.8,冷藏,過濾;再調(diào)pH至3.0~6.5,優(yōu)選pH4.0~5.5,冷藏,過濾;再調(diào)pH至4.0~7.5,優(yōu)選pH5.0~7.0,冷藏,過濾;再調(diào)pH至7.5~9.5,優(yōu)選pH7.5~9.0,冷藏,過濾;所指的冷藏條件為放置在10℃~-20℃過夜,優(yōu)選5℃~-10℃;所指的過濾條件是0.10~0.45μm超微濾膜過濾,優(yōu)選0.22μm。(3)上述過濾液即為注射用藥液,測定藥物的含量和指紋圖譜;(4)注射用藥液再經(jīng)0.10~0.22μm精濾后,灌封,滅菌,即得不同規(guī)格的注射液。(5)注射液的規(guī)格為1~500ml,優(yōu)選2ml,5ml,10ml,12ml,20ml,25ml,50ml,100ml,250ml和500ml。(6)注射液中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量不低于2mg/ml,優(yōu)選5~80mg/ml。
8.權(quán)利要求1~4中的復(fù)方苦參凍干粉制備方法的技術(shù)特征在于(1)利用權(quán)利要求6和7(1)~7(3)得到注射用藥液經(jīng)0.10~0.22μm精濾后,灌封于西林瓶中,塞孔;放入冷凍機(jī)中,按照冷凍曲線冷凍干燥,取出得到的復(fù)方苦參凍干粉,鋁蓋壓口。(2)權(quán)利要求4(2)所指的藥物中間體與骨架材料按照1∶0.5~1∶3(中間體∶骨架材料,W/W)的配比進(jìn)行配制,優(yōu)選1∶1;骨架材料為甘露醇或氯化鈉或葡萄糖;(3)權(quán)利要求4(2)所指的活性炭脫色、過濾、調(diào)pH-冷藏-過濾環(huán)節(jié)的技術(shù)要求同權(quán)利要求7(1)和7(2);(4)權(quán)利要求4(3)所指的得到注射用藥液與骨架材料按1∶0.5~1∶3(注射用藥液的固形物∶骨架材料,W/W)配比進(jìn)行配制,優(yōu)選1∶1;骨架材料為甘露醇或氯化鈉或葡萄糖;所指的精濾在100級的GMP車間內(nèi)用0.10~0.45μm超微濾膜過濾,優(yōu)選0.22μm。(5)凍干粉中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量為0.01~0.3g/支,優(yōu)選0.03~0.2g/支。
9.權(quán)利要求1~3和5中的注射用復(fù)方苦參粉針噴霧干燥工藝制備方法的技術(shù)特征在于(1)所指的相對密度為1.01~1.30,優(yōu)選1.05~1.15;(2)所指的噴霧干燥條件為噴氣壓力調(diào)節(jié)到2~5kg/cm2,抽力4~8kg/cm2,進(jìn)口溫度150~300℃,出口溫度50~100℃;(3)所指的得到注射用藥液與骨架材料按1∶0.5~1∶3(注射用藥液的固形物∶骨架材料,W/W)配比進(jìn)行配制,優(yōu)選1∶1;骨架材料為甘露醇或氯化鈉或葡萄糖;(4)所指的精濾是在100級的GMP車間內(nèi)用0.10~0.45μm超微濾膜過濾,優(yōu)選0.22μm。(5)粉針中的氧化苦參堿、苦參堿和槐果堿的總量為0.01~0.3g/支,優(yōu)選0.03~0.2g/支。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的復(fù)方苦參凍干粉的凍干制備方法,其技術(shù)特征在于(1)每支西林瓶灌裝2ml或5ml或10ml或15ml或20ml,優(yōu)選5ml和10ml;(2)預(yù)凍溫度-10℃~-60℃,優(yōu)選-20℃~-50℃;(3)升華階段使真空度達(dá)到30Pa以下,按照每小時(shí)0.5~2℃的升溫速度給產(chǎn)品升溫,產(chǎn)品溫度達(dá)到-5℃~-10℃時(shí),以每小時(shí)1~5℃的速度升溫,直至產(chǎn)品的溫度升到21℃~31℃,繼續(xù)保持2~8小時(shí),使制品的溫度與擱板溫度重合(相差1℃以內(nèi)),放入無菌過濾氣體,使箱門能夠打開,開箱,迅速封口,即得冷干粉針。
11.根據(jù)權(quán)利要求1~10制備的產(chǎn)品具有抗腫瘤作用,其特征在于(1)具有抗腫瘤作用;(2)對化療藥具有增效減毒作用;
12.根據(jù)權(quán)利要求1~10制備的產(chǎn)品具有鎮(zhèn)痛作用。
13.根據(jù)權(quán)利要求1~10制備的產(chǎn)品具有升白和提高免疫功能的作用。
14.根據(jù)權(quán)利要求1~10制備的產(chǎn)品具有抗肝炎作用。
15.根據(jù)權(quán)利要求1~10制備的產(chǎn)品沒有發(fā)現(xiàn)毒副作用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種注射用復(fù)方苦參制劑的制備方法及其在腫瘤和肝炎臨床治療中的用途。其配方是以苦參和白土苓為原料,可以是單獨(dú)提取后混合或混合提取。提取方法以水或稀酸或稀醇提取、濃縮,再經(jīng)多次醇沉-過濾-濃縮、水返溶、脫色、調(diào)pH得到注射用藥液,它可直接灌封為不同規(guī)格注射液,或加入分散劑經(jīng)冷凍干燥得到凍干粉,或經(jīng)噴霧干燥得到注射用粉末進(jìn)行分裝而制備得到。該制劑的特點(diǎn)是以氧化苦參堿、苦參堿、槐果堿等為主要有效成分。該制劑具有抗腫瘤、緩解癌腫疼痛、對腫瘤的化療藥物具有增效解毒作用,同時(shí)還具有免疫增強(qiáng)作用,抗肝炎作用,可用于腫瘤和肝炎的臨床治療。
文檔編號A61K9/14GK1876016SQ20051007484
公開日2006年12月13日 申請日期2005年6月7日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月7日
發(fā)明者王智民, 李安平 申請人:北京振東光明藥物研究院, 山西振東金晶制藥有限公司
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