專利名稱：甘草酸或其鹽、人參和黃芪的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種主要由甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、人參或其提取物和黃芪或其提取物制成的藥物組合物及其制備方法，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
2、背景技術(shù)肝炎是一種常見(jiàn)病和多發(fā)病，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，我國(guó)肝炎患者和病毒攜帶者占總?cè)丝诘?0％。其中以病毒性肝炎為主，病毒性肝炎又可分為急性肝炎、慢性肝炎、重癥肝炎和膽型肝炎。慢性肝炎又可分為遷延性肝炎和活動(dòng)性肝炎。肝炎是一種傳染性疾病，由于其流行性廣、危害性大、發(fā)病率高，是目前國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的疑難病癥之一，以乙型肝炎為例，治愈率僅為10％，絕大部分轉(zhuǎn)為慢性肝炎，嚴(yán)重的轉(zhuǎn)化為肝腹水、肝癌。其中肝纖維化的形成和發(fā)展是影響預(yù)后和病情轉(zhuǎn)危的關(guān)鍵病理變化之一，也是臨床慢性肝病治療中最為復(fù)雜的疑難問(wèn)題。目前治療慢性乙型肝炎的療法主要有抗病毒藥物療法、免疫調(diào)控藥物療法、改善肝微循環(huán)療法、保護(hù)療法、中醫(yī)辨證論治等。國(guó)內(nèi)外近年來(lái)治療肝炎的藥物雖然有許多，但大多沒(méi)有十分公認(rèn)的療效，并且療效并不理想，另外治療后病情易反復(fù)，且價(jià)格又十分昂貴。至今，市場(chǎng)上仍缺少抗肝炎療效確切又副作用較小的藥物。
甘草酸為豆科植物甘草、光果甘草、脹果甘草的根及根莖的精制提取物。由于甘草精制提取的甘草酸有皮質(zhì)激素樣作用，能提高肝炎病人血清氫化可的松的濃度，降低慢性肝炎患者血清及外周單個(gè)核細(xì)胞中白介素-6和腫瘤壞死因子，減輕免疫病理反應(yīng)，促進(jìn)肝功能恢復(fù)，清除癥狀，縮小肝脾腫大，降酶快，退黃疸顯著。甘草酸單銨和甘草酸二銨為甘草酸的單銨鹽和二銨鹽，甘草酸單銨對(duì)各型急慢性肝炎、肝纖維化，中毒性肝炎、外傷性肝炎以及癌癥有一定的輔助治療作用。甘草酸二銨為20β-羧基-11氧代正齊墩果烷-12-烯-3β基-2-β-D-葡萄吡喃糖苷醛酸基-α-D-葡萄吡喃糖苷醛酸二銨鹽，分子式C42H68N2O16，具有較強(qiáng)的抗炎、保護(hù)肝細(xì)胞膜及改善肝功能的作用，可阻礙可的松與醛固酮的滅活，從而發(fā)揮類固醇樣作用，但無(wú)皮質(zhì)激素的不良反應(yīng)。
人參為五加科植物人參(PanaxginsengC.A.Mey.)的干燥根及根莖，以其根部入藥，具有“大補(bǔ)元?dú)?，固脫生津，安神益智”等良好作用，是著名的珍貴藥材。經(jīng)國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究證實(shí)，人參中含人參總皂苷、人參多糖、人參揮發(fā)油等有效成分，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)及藥理實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)人參具有增強(qiáng)機(jī)體抵抗力，調(diào)整機(jī)體的功能，促進(jìn)物質(zhì)代謝，調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)和內(nèi)分泌等作用，人參還具有加速肝臟排毒的功能，保護(hù)肝臟，抑制肝纖維增生的作用。
黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜莢黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)的干燥根。甘，溫，歸肺、脾經(jīng)，具有補(bǔ)氣固表、利尿脫毒、排膿、斂瘡生肌之功效，主要用于氣虛乏力，食少便溏，中氣下陷，久瀉脫肛，便血崩漏，表虛自汗，氣虛水腫，癰疽難潰，久潰不斂，血虛痿黃，內(nèi)熱消渴；慢性腎炎蛋白病，糖尿病。主要含有黃芪多糖、黃芪總皂苷、黃酮類、生物堿、葡萄糖醛酸及微量元素硒等成分。現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)表明黃芪可促進(jìn)免疫功能，主要有效成分為多糖和皂苷。
目前利用甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、人參或其提取物和黃芪或其提取物的相互作用，配伍組方，用于治療肝臟疾病方面的藥物，尚未見(jiàn)報(bào)道。
3、發(fā)明內(nèi)容為了滿足臨床需要，更好的治療肝臟疾病，提高人民健康水平，本發(fā)明提供了一種藥物組合物及其制備方法，該藥物組合物主要由甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、人參或其提取物和黃芪或其提取物制備而成，在用于制備治療肝炎、防治肝纖維化、肝硬化等方面，產(chǎn)生了意想不到的效果。
本發(fā)明藥物組合物，主要由甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、人參或其提取物和黃芪或其提取物制備而成，其重量份數(shù)為甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽4～800份、人參250～16000份、黃芪5000～80000份；優(yōu)選為甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽10～400份、人參500～8000份、黃芪10000～40000份；最優(yōu)為甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽20～200份、人參1000～4000份、黃芪20000份。
上述藥物組合物中的原藥材可以用適宜的溶劑和方法單提或混提制備得到提取物，總提取物再與甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接受的輔料混合制成任一制劑。組合物中總提取物的主要的有效成分為人參多糖或皂苷、黃芪多糖或皂苷，總提取物中主要有效成分總的含量不低于30％。
上文所述的人參可以用適宜的溶劑經(jīng)過(guò)提取加工得到人參提取物，提取溶劑優(yōu)選水或乙醇，提取方法可以為浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法或連續(xù)提取法，提取物的有效成分為人參總皂苷或人參多糖。
人參的提取方法也可參照文獻(xiàn)方法制備如人參總皂苷可根據(jù)中國(guó)專利申請(qǐng)CN00110418.7制備，人參多糖可根據(jù)中國(guó)專利申請(qǐng)CN200410000209.4制備。
本發(fā)明提供了人參的優(yōu)選提取工藝，具體過(guò)程如下以人參多糖為主要有效成分的優(yōu)選制備工藝如下取人參藥材，切碎，用75％乙醇，回流提取4小時(shí)，濾過(guò)，藥渣晾干，加水煎煮五次，合并煎煮液，加入0.3％活性炭，攪拌30分鐘，靜置過(guò)夜，濾過(guò)，濾液過(guò)樹脂柱，收集流出液，減壓濃縮，加乙醇使含醇量達(dá)95％，冷藏，濾過(guò)，取沉淀用丙酮洗滌，抽干丙酮，取出沉淀于60～80℃干燥，粉碎即得。
通過(guò)本工藝制備的人參多糖得率為0.5～2％，其中人參多糖的含量不低于50％。
人參多糖還可由如下工藝制備，但不僅限于下述方法方法一取人參，切碎，加水回流提取三次，每次2小時(shí)，第一次加水10倍量，二、三次分別為8倍量，合并煎液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.16～1.24，過(guò)大孔樹脂柱，收集流出液，減壓濃縮至稠膏狀，真空干燥，即得。通過(guò)本工藝制備的人參多糖，得率為4～6％，人參多糖的含量不低于40％。
方法二取人參，切碎，用80％乙醇，回流提取3小時(shí)，濾過(guò)，藥渣晾干，加水煎煮三次，每次1.5小時(shí)，加水10倍量，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.15～1.20，過(guò)大孔樹脂，流出液減壓濃縮至稠膏狀，噴霧干燥即得。通過(guò)本工藝制備的人參多糖，得率為2～4％，人參多糖含量不低于45％。
以人參總皂苷為主要有效成分的優(yōu)選制備工藝，具體如下取人參藥材，粉碎成細(xì)粒，加10倍量乙醇回流提取二次，每次3小時(shí)，合并提取液，冷藏，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至稠膏，加水至適量(使每1ml相當(dāng)于原藥材1g)，攪勻，冷藏，濾過(guò)，濾液加于已處理好的大孔樹脂柱上，先用2V～3V柱體積的水進(jìn)行洗脫，棄去水洗液，再用3倍柱體積的80％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并減壓濃縮至相對(duì)密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。
通過(guò)本工藝制備得到的人參總皂苷得率為1～2％，人參總皂苷含量不低于50％，人參皂苷Re、人參皂苷Rg1含量和不低于30％。
人參總皂苷還可由如下工藝制備，但不僅限于下述方法方法一取人參藥材，粉碎成細(xì)粒，加乙醇回流提取二次，每次4小時(shí)，每次加醇10倍量，合并提取液，冷藏，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至稠膏，加水稀釋至相對(duì)密度為1.15～1.20，加1/2倍量水飽和正丁醇提取3次，合并正丁醇液，減壓回收正丁醇至稠膏狀，噴霧干燥即得。通過(guò)本工藝制備的人參總皂苷得率為4～5％，人參總皂苷含量不低于35％，人參皂苷Re、人參皂苷Rg1含量和不低于20％。
方法二取人參藥材，粉碎成細(xì)粒，加乙醇回流提取三次，第一次加醇10倍量，二、三次分別為8倍量，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，回收乙醇并濃縮至稠膏，加水至適量，攪勻，冷藏，濾過(guò)，濾液加1/2倍量水飽和正丁醇提取3次減壓濃縮，合并正丁醇液，減壓回收正丁醇至稠膏狀，噴霧干燥即得。通過(guò)本工藝制備的人參總皂苷得率為3～5％，人參總皂苷含量為不低于40％，人參皂苷Re、人參皂苷Rg1含量和不少于20％。
上文所述的黃芪可以用適宜的溶劑經(jīng)過(guò)提取加工得到黃芪多糖，其中的溶劑優(yōu)選水或乙醇，黃芪的提取方法可以為浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法或連續(xù)提取法。如可通過(guò)水提醇沉制備得到黃芪提取物，還可以通過(guò)根據(jù)文獻(xiàn)方法制備。
本發(fā)明提供了黃芪的優(yōu)選提取工藝，具體過(guò)程如下以黃芪多糖為主要有效成分的優(yōu)選制備工藝，具體如下取黃芪藥材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小時(shí)，棄去提取液，取藥渣加水提取二次，合并提取液，濃縮至提取液體積與生藥材的比例為1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量達(dá)到70％，過(guò)濾，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗滌，再用適量水溶解，過(guò)濾，濾液過(guò)大孔樹脂，用水洗脫，收集水洗液，將水洗液濃縮至藥液體積與藥材比例為1∶2.5，加入乙醇使含醇量達(dá)到70％，得沉淀，將沉淀用95％乙醇和丙酮洗滌脫水，減壓干燥(60℃)，即得。
通過(guò)本工藝制備的黃芪多糖得率為0.5～2％，黃芪多糖的含量不低于50％。
除采用上述方法外，也可通過(guò)以下方法獲得，但不僅限于下述方法
方法一取黃芪藥材，加水回流提取三次，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.15～1.23，加乙醇使含醇量達(dá)80％，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，沉淀加水溶解，濾過(guò)，再加乙醇使含醇量達(dá)85％，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，收集沉淀，真空干燥即得。通過(guò)本工藝制備的黃芪多糖得率為2～4％，黃芪多糖含量不低于40％。
方法二取黃芪藥材，加10倍量80％乙醇提取4小時(shí)，提取液棄去，取藥渣加水提取二次，每次2小時(shí)，每次加水10倍量，提取液合并，過(guò)濾，濾液加乙醇使含醇量達(dá)85％，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至稠膏狀，噴霧干燥即得。通過(guò)本工藝制備的黃芪多糖得率為3～4％，黃芪多糖含量不低于35％。
以黃芪總皂苷為主要有效成分的優(yōu)選制備工藝，具體如下取黃芪，加水煎煮三次，每次1.5小時(shí)，第一次加水10倍量，二、三次均為8倍量，合并煎液，濾過(guò)濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理2次，第一次溶液中含醇量為75％，第二次為85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，加于已處理好的大孔吸附樹脂柱上，先用2倍體積的水沖柱，再用4倍體積的70％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、真空干燥，即得。
通過(guò)本工藝制備的黃芪總皂苷得率為0.5～2％，總皂苷含量不低于50％，黃芪甲苷含量不低于2.0％。
除采用上述方法外，也可通過(guò)以下方法獲得，但不僅限于下述方法方法二取黃芪，加水煎煮三次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理2次，第一次溶液中含乙醇量為60％，第二次為85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，減壓濃縮、真空干燥，即得。通過(guò)本工藝制備的黃芪總皂苷得率為2～4％，總皂苷含量為不低于40％，黃芪甲苷含量不低于1％。
方法二取黃芪，加水煎煮三次，每次1.5小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理1次使含乙醇量為60％，冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，并減壓濃縮、真空干燥，即得。通過(guò)本工藝制備的黃芪總皂苷得率為3～5％，總皂苷含量不低于30％，黃芪甲苷含量不低于1％。
本發(fā)明藥物組合物除可用上述藥材直接投料制得外，還可以由甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽和人參的提取物、黃芪的提取物投料制成，其中人參多糖含量不低于40％，最好不低于50％，或者人參總皂苷含量不低于35％，最好不低于50％，其中的人參皂苷Re、人參皂苷Rg1含量和不低于20％，最好不低于30％；黃芪多糖含量不低于35％，最好不低于50％，或者黃芪總皂苷含量不低于30％，最好不低于50％，其中的黃芪甲苷含量不低于1％，最好不低于2％。按照提取物相對(duì)于藥材的得率計(jì)算，可以有以下四種不同配比，其重量份數(shù)分別為配比1甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽4～800份、人參多糖2～40份、黃芪多糖70～1200份；優(yōu)選為甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽10～400份、人參多糖5～20份、黃芪多糖150～600份；最優(yōu)為甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽20～200份、人參多糖10份、黃芪多糖300份。
配比2甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽4～800份、人參多糖2～40份、黃芪總皂苷50～800份；優(yōu)選為甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽10～400份、人參多糖5～20份、黃芪總皂苷100～400份；最優(yōu)為甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽20～200份、人參多糖10份、黃芪總皂苷200份配比3甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽4～800份、人參總皂苷10～160份、黃芪多糖70～1200份；優(yōu)選為甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽10～400份、人參總皂苷20～80份、黃芪多糖150～600份；最優(yōu)為甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽20～200份、人參總皂苷40份、黃芪多糖300份。
配比4甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽4～800份、人參總皂苷10～160份、黃芪總皂苷50～800份；優(yōu)選為甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽10～400份、人參總皂苷20～80份、黃芪總皂苷100～400份；最優(yōu)為甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽20～200份、人參總皂苷40份、黃芪總皂苷200份。
以上組成是按重量份作為配比的，在生產(chǎn)時(shí)可按照相應(yīng)比例增大或減小，如大規(guī)模生產(chǎn)可以以千克為單位，或以噸為單位，小規(guī)模生產(chǎn)也可以以克為單位，重量可以增大或者減小，但各組成之間重量配比的比例不變。
以上組成，若以克為單位，可以制成100～10000次用量的制劑，如作為注射劑，可制成100～10000支，每次用量1～10支。如作為片劑，可制成100～10000片，每次服用1～10片。
以上重量配比的比例是經(jīng)過(guò)科學(xué)篩選得到的，對(duì)于特殊病人，可以相應(yīng)調(diào)整組成的比例，增加或者減少不超過(guò)100％。
本發(fā)明藥物組分的用量是經(jīng)過(guò)發(fā)明人進(jìn)行大量摸索總結(jié)得出的，各組分用量在上述重量份范圍內(nèi)都具有較好療效。
本發(fā)明藥物組合物，甘草酸藥學(xué)上可接受的鹽為金屬鹽或有機(jī)氮鹽，金屬鹽可以是鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽、鋅鹽，有機(jī)氮鹽優(yōu)選甘草酸單銨和甘草酸二銨。
本發(fā)明提供了一種用于制備治療肝臟疾病方面的藥物。本發(fā)明藥物組合物具有抗肝炎，防治肝纖維化、肝硬化作用，甘草酸能提高肝炎病人血清氫化可的松的濃度，降低慢性肝炎患者血清及外周單個(gè)核細(xì)胞中白介素-6和腫瘤壞死因子，減輕免疫病理反應(yīng)，促進(jìn)肝功能恢復(fù)，清除癥狀，縮小肝脾腫大，降酶快，退黃疸，其衍生的鹽甘草酸單銨對(duì)各型急慢性肝炎、肝纖維化，中毒性肝炎、外傷性肝炎以及癌癥有一定的輔助治療作用，甘草酸二銨具有較強(qiáng)的抗炎、保護(hù)肝細(xì)胞膜及改善肝功能的作用，可阻礙可的松與醛固酮的滅活，從而發(fā)揮類固醇樣作用，但無(wú)皮質(zhì)激素的不良反應(yīng)，人參具有加速肝臟排毒的功能，保護(hù)肝臟，抑制肝纖維增生的作用，黃芪可促進(jìn)免疫功能，提高機(jī)體免疫力，對(duì)肝炎有輔助治療的作用。三藥配伍組方共同發(fā)揮治療肝炎，保護(hù)肝臟等作用，用于治療肝炎，防治肝纖維化、肝硬化方面有意想不到的好效果。
本發(fā)明的藥物組合物可以加一種或多種藥學(xué)上可接受的載體，以口服、鼻吸入或腸胃外給藥的方式施用于需要這種治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成常規(guī)的固體制劑，如片劑、膠囊、軟膠囊、分散片、口服液、顆粒、咀嚼片、口崩片、滴丸、緩釋片、緩釋膠囊、控釋片、控釋膠囊，制成液體制劑如水或油懸浮劑或其它液體制劑如糖漿等；用于腸胃外給藥時(shí)，可將其制成注射用的溶液、水或油懸浮劑等，如水針、凍干粉針、無(wú)菌粉針、輸液等。本組合物優(yōu)選的劑型是注射劑或口服制劑。
本發(fā)明的藥物組合物可采用現(xiàn)有制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，需要的時(shí)候可以添加各種藥學(xué)上可接受的載體。所述的載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤(rùn)滑劑等。
本發(fā)明的藥物組合物在制成注射劑時(shí)，為了增加其溶解度，可以加入聚山梨酯80等增溶劑。輸液中可以加入用于調(diào)節(jié)滲透壓的等滲調(diào)節(jié)劑，例如，氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、乳酸鈉、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，優(yōu)選氯化鈉或葡萄糖。粉針中可加入賦形劑，例如，甘露醇、葡萄糖等。
本發(fā)明經(jīng)過(guò)藥效動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，由甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、人參或其提取物和黃芪或其提取物制成的藥物，對(duì)四氯化碳(CCl4)中毒致大鼠急性肝損傷有保護(hù)作用，使肝臟的ALT和AST有明顯的恢復(fù)作用；對(duì)四氯化碳(CCl4)中毒小鼠的肝、脾指數(shù)有很好的降低作用；對(duì)鴨感染的DHBV病毒有明顯抑制的作用；對(duì)小鼠肝纖維化后血清生化指標(biāo)有明顯的恢復(fù)作用，使血清ALT、AST、TP含量降低，Alb、A/G明顯升高，有明顯的抗肝纖維化的作用。本發(fā)明實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、人參或其提取物和黃芪或其提取物合并用藥呈協(xié)同作用，藥效明顯增強(qiáng)。
本發(fā)明組合物具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)提供了一種用于治療肝炎的藥物組合物及其制備方法，滿足了臨床急需；(2)首次對(duì)本發(fā)明組合物各配比進(jìn)行了藥效學(xué)研究，得出了本發(fā)明組合物的最優(yōu)配比；(3)對(duì)本發(fā)明組合物的相互作用和配伍組方進(jìn)行了藥效學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)了組合物具有明顯的抗肝炎作用，對(duì)四氯化碳(CCl4)中毒致大鼠急性肝損傷有保護(hù)作用，使肝臟的ALT和AST有明顯的恢復(fù)作用，對(duì)四氯化碳(CCl4)中毒小鼠的肝、脾指數(shù)有很好的降低作用，對(duì)鴨感染的DHBV病毒有明顯抑制的作用，對(duì)小鼠肝纖維化后血清生化指標(biāo)有明顯的恢復(fù)作用，使血清ALT、AST、TP含量降低，Alb、A/G明顯升高，有明顯的抗肝纖維化的作用；上述各實(shí)驗(yàn)組中，組合物實(shí)驗(yàn)組與單用甘草酸二銨或甘草酸單銨組或人參多糖組或人參總皂苷組或黃芪多糖組或黃芪總皂苷組相比，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異均顯著(p＜0.05)，表明甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、人參或其提取物和黃芪或其提取物三藥合用抗肝炎、抗肝纖維化效果顯著，其結(jié)果是本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所意想不到的；(4)本發(fā)明可以以原料或提取物直接投料，制備工藝簡(jiǎn)單，可以使不同批次藥品間質(zhì)量差異小，藥品質(zhì)量更均勻穩(wěn)定；(5)進(jìn)行的急性毒性實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明藥物組合物注射液的最大耐受量相當(dāng)于50kg體重人日最大用量40ml的100倍，表明了本發(fā)明藥物組合物低毒，安全性高；(6)進(jìn)行的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明藥物組合物注射液各項(xiàng)指標(biāo)均比較穩(wěn)定，保證了臨床用藥的安全；(7)本發(fā)明組合物三藥合并用藥療效確切，且減小了相對(duì)用藥劑量，具有廣泛的應(yīng)用前景。
以下通過(guò)實(shí)驗(yàn)例來(lái)進(jìn)一步闡述本發(fā)明所述藥物的有益效果。下列實(shí)驗(yàn)例中甘草酸單銨或二銨、人參多糖和黃芪多糖的組合物以下簡(jiǎn)稱GRH組合物I，甘草酸單銨或二銨、人參多糖和黃芪總皂苷的組合物以下簡(jiǎn)稱GRH組合物Ⅱ，甘草酸單銨或二銨、人參總皂苷和黃芪多糖的組合物以下簡(jiǎn)稱GRH組合物Ⅲ，甘草酸單銨或二銨、人參總皂苷和黃芪總皂苷的組合物以下簡(jiǎn)稱GRH組合物IV。實(shí)驗(yàn)例中所用的人參多糖取自實(shí)施例1，人參總皂苷取自實(shí)施例2，黃芪多糖取自實(shí)施例3，黃芪總皂苷取自實(shí)施例4。
實(shí)驗(yàn)例1 GRH組合物合并用藥藥效研究-對(duì)四氯化碳(CCl4)致大鼠急性肝損傷的保護(hù)作用供試品空白對(duì)照組0.9％生理鹽水注射液，市購(gòu)；模型組CCl4注射液，自制；甘草酸二銨組甘草酸二銨注射液10ml 150mg，自制；人參多糖組人參多糖注射液，自制；人參總皂苷組人參總皂苷注射液，自制；黃芪多糖組黃芪多糖注射液，自制；黃芪總皂苷組黃芪總皂苷注射液，自制；GRH組合物注射液I組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例6)；GRH組合物注射液II組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例6)；GRH組合物注射液III組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例6)；GRH組合物注射液IV組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例6)。
受試動(dòng)物Wistar大鼠，體重200～220g，310只，隨機(jī)分為31組。
試劑盒谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)試劑盒，市購(gòu)，上海生物制品研究所。
實(shí)驗(yàn)方法取大鼠310只，隨機(jī)分為31組，分別為空白對(duì)照組、模型組、甘草酸二銨組、人參多糖組、人參總皂苷組、黃芪多糖組、黃芪總皂苷組、GRH組合物注射液I不同劑量配比組、GRH組合物注射液II不同劑量配比組、GRH組合物注射液III不同劑量配比組、GRH組合物注射液IV不同劑量配比組，每組10只?？瞻讓?duì)照組腹腔注射0.9％生理鹽水10ml/kg，其余各組大鼠連續(xù)給藥三天(腹腔注射)，禁食5.5h，末次給藥2h后分別給予25％CCl4花生油溶液，給藥劑量見(jiàn)表1。給予四氯化碳后大鼠進(jìn)食，于給予四氯化碳24小時(shí)禁食12小時(shí)，頸靜脈取各大鼠血，3000r/min離心10min，分離血清，按ALT，AST測(cè)定說(shuō)明書，進(jìn)行谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 GRH組合物注射液對(duì)四氯化碳(CCl4)致大鼠急性肝損傷的保護(hù)作用
注*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001與空白對(duì)照組相比；#p＜0.05，##p＜0.01，###p＜0.001與模型組相比；&p＜0.05，與甘草酸二銨組相比；p＜0.01，與人參多糖組相比；◆p＜0.01，與人參總皂苷組相比；△p＜0.01，與黃芪多糖組相比；p＜0.01，與黃芪總皂苷組相比。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果模型組與空白對(duì)照組相比有顯著差異(***p＜0.01)，說(shuō)明造模成功。各給藥組都對(duì)四氯化碳(CCl4)中毒致大鼠急性肝損傷有保護(hù)作用，肝臟的ALT和AST有明顯的恢復(fù)作用(#p＜0.05、##p＜0.01和###p＜0.001)。其中GRH組合物注射液I、GRH組合物注射液II、GRH組合物注射液III和GRH組合物注射液IV的不同劑量配比組與單用甘草酸二銨或人參多糖或人參總皂苷或黃芪多糖或黃芪總皂苷相比，差別顯著(&p＜0.05、★p＜0.01、◆p＜0.01、△p＜0.01和p＜0.01)。表明甘草酸二銨、人參和黃芪配聯(lián)合應(yīng)用呈協(xié)同作用，對(duì)四氯化碳中毒致大鼠急性肝損傷有保護(hù)作用，使肝臟的ALT和AST水平恢復(fù)正常，表明恢復(fù)肝功的效果顯著，其療效與組合物的劑量配比有關(guān)，GRH組合物注射液I中甘草酸二銨+人參多糖+黃芪多糖＝150mg+10mg+300mg、GRH組合物注射液II中甘草酸二銨+人參多糖+黃芪總皂苷＝150mg+10mg+200mg、GRH組合物注射液III中甘草酸二銨+人參總皂苷+黃芪多糖＝150mg+40mg+300mg、GRH組合物注射液IV中甘草酸二銨+人參總皂苷+黃芪總皂苷＝150mg+40mg+200mg時(shí)作用最好。
實(shí)驗(yàn)例2 GRH組合物對(duì)四氯化碳(CCl4)中毒所致急性肝損傷小鼠的肝、脾指數(shù)的影響供試品空白對(duì)照組0.9％生理鹽水注射液，市購(gòu)；CCl4模型組CCl4注射液，自制；甘草酸單銨組甘草酸單銨注射液10ml40mg，自制；GRH組合物注射液I組(甘草酸單銨+人參多糖+黃芪多糖＝40mg+10mg+300mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例6)；GRH組合物注射液II組(甘草酸單銨+人參多糖+黃芪總皂苷＝40mg+10mg+200mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例6)；GRH組合物注射液III組(甘草酸單銨+人參總皂苷+黃芪多糖＝40mg+40mg+300mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例6)；GRH組合物注射液IV組(甘草酸單銨+人參總皂苷+黃芪總皂苷＝40mg+40mg+200mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例6)。
受試動(dòng)物健康昆明種小鼠，體重18～22g，150只，隨機(jī)分為15組。
實(shí)驗(yàn)方法取小鼠150只，隨機(jī)分為15組，分別為空白對(duì)照組、CCl4模型組、甘草酸單銨組、GRH組合物注射液I低、中、高三個(gè)劑量組、GRH組合物注射液II低、中、高三個(gè)劑量組、GRH組合物注射液III低、中、高三個(gè)劑量組、GRH組合物注射液IV低、中、高三個(gè)劑量組，每組10只?？瞻讓?duì)照組腹腔注射0.9％生理鹽水10ml/kg，其余各組動(dòng)物均腹腔注射CCl410ml/kg，禁食過(guò)夜。給藥組腹腔注射給藥，每日1次，給藥劑量見(jiàn)表2，連續(xù)10d，對(duì)照組給相應(yīng)體積的生理鹽水，于最后一次給藥后，斷頭處死動(dòng)物，取肝臟和脾臟，吸去血液，剪去脂肪、系膜，精確稱重。結(jié)果見(jiàn)表2。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果各給藥組都能明顯的降低四氯化碳(CCl4)中毒小鼠的肝、脾指數(shù)(#p＜0.05和##p＜0.01)。其中GRH組合物注射液I、GRH組合物注射液II、GRH組合物注射液III和GRH組合物注射液IV與單用甘草酸單銨相比，差別顯著(&p＜0.05)。證明甘草酸單銨、人參和黃芪配伍有顯著降低四氯化碳(CCl4)中毒小鼠的肝、脾指數(shù)的作用，與空白對(duì)照組相比沒(méi)有顯著差異(p＞0.05)。且作用效果與組合物的給藥劑量有關(guān)，高劑量時(shí)作用最好。
表2 GRH組合物對(duì)四氯化碳(CCl4)中毒所致急性肝損傷小鼠的肝、脾指數(shù)的影響(x±SD)
注*p＜0.05，**p＜0.01，與空白對(duì)照組相比；#p＜0.05，##p＜0.01，與CCl4模型組相比；&p＜0.05，與甘草酸單銨組相比。
實(shí)驗(yàn)例3 GRH組合物對(duì)DHBV-DNA的抑制作用供試品空白對(duì)照組0.9％生理鹽水注射液，市購(gòu)；陽(yáng)性對(duì)照組阿昔洛韋(ACV)注射液，自制；甘草酸二銨組甘草酸二銨注射液10ml150mg，自制；GRH組合物注射液I組(甘草酸二銨+人參多糖+黃芪多糖＝150mg+10mg+300mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例6)；GRH組合物注射液II組(甘草酸二銨+人參多糖+黃芪總皂苷＝150mg+10mg+200mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例6)；GRH組合物注射液III組(甘草酸二銨+人參總皂苷+黃芪多糖＝150mg+40mg+300mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例6)；GRH組合物注射液IV組(甘草酸二銨+人參總皂苷+黃芪總皂苷＝150mg+40mg+200mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例6)。
受試動(dòng)物市售1日齡北京鴨。
病毒DHBV陽(yáng)性血清。
實(shí)驗(yàn)方法(1)動(dòng)物模型北京鴨經(jīng)足靜脈注射0.2ml DHBV陽(yáng)性血清，7d后取血，分離血清，-20℃保存檢驗(yàn)。
(2)藥物治療 篩選出感染成功的陽(yáng)性鴨90只，隨機(jī)分為15組，每組6只。分別為空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、甘草酸二銨組、GRH組合物注射液I低、中、高三個(gè)劑量組、GRH組合物注射液II低、中、高三個(gè)劑量組、GRH組合物注射液III低、中、高三個(gè)劑量組、GRH組合物注射液IV低、中、高三個(gè)劑量組。靜脈注射給藥，給藥劑量見(jiàn)表3，給藥2周。分別于藥前、用藥第7天、用藥第14天和停藥后第3天，自鴨腿靜脈抽血，分離血清，-20℃保存待驗(yàn)。
(3)檢測(cè)方法 采用DHBV-DNA Dot Blot法，以雜交斑點(diǎn)吸光度值(A)作為標(biāo)本DHBV-DNA水平值。
(4)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用藥組不同時(shí)間DNA含量與用藥前比較，采用配對(duì)t檢驗(yàn)；用藥組同一時(shí)間DNA含量與病毒對(duì)照組比較，采用t檢驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表4。
表3 GRH組合物對(duì)DHBV-DNA的抑制作用(x±SD)
注*p＜0.05，**p＜0.01，與同組治療前相比；&p＜0.05，&&p＜0.01，與空白對(duì)照組相比；#p 0.05，與甘草酸二銨組相比。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果各給藥組都明顯抑制DHBV病毒(&p＜0.05和&&p＜0.01)。其中GRH組合物注射液I、GRH組合物注射液II、GRH組合物注射液III和GRH組合物注射液IV與單用甘草酸二銨相比，差別顯著(&p＜0.05)，且停藥后無(wú)反跳，與給藥前比較差異顯著(*p＜0.05和**p＜0.01)，而陽(yáng)性對(duì)照組在停藥后與給藥前比較無(wú)顯著差異(p＞0.05)。且作用效果與組合物的給藥劑量有關(guān)，高劑量作用最好。
實(shí)驗(yàn)例4 GRH組合物抗小鼠肝纖維化作用供試品空白對(duì)照組0.9％生理鹽水注射液，市購(gòu)；模型組CCl4注射液，自制；甘草酸二銨組甘草酸二銨注射液10ml150mg，自制；
人參多糖組人參多糖注射液，自制；人參總皂苷組人參總皂苷注射液，自制；GRH組合物注射液I組(甘草酸二銨+人參多糖+黃芪多糖＝150mg+10mg+300mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例6)；GRH組合物注射液II組(甘草酸二銨+人參多糖+黃芪總皂苷＝150mg+10mg+200mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例6)；GRH組合物注射液III組(甘草酸二銨+人參總皂苷+黃芪多糖＝150mg+40mg+300mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例6)；GRH組合物注射液IV組(甘草酸二銨+人參總皂苷+黃芪總皂苷＝150mg+40mg+200mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例6)。
受試動(dòng)物健康昆明種小鼠，體重24～28g，雌雄兼用，170只，隨機(jī)分為17組。
實(shí)驗(yàn)方法取小鼠170只，隨機(jī)分為17組，分別為空白對(duì)照組、模型組、甘草酸二銨組、人參多糖組、人參總皂苷組、GRH組合物注射液I低、中、高三個(gè)劑量組、GRH組合物注射液II低、中、高三個(gè)劑量組、GRH組合物注射液III低、中、高三個(gè)劑量組、GRH組合物注射液IV低、中、高三個(gè)劑量組，每組10只?？瞻讓?duì)照組皮下注射NS 10mg/kg，首劑加倍，5d注射1次，連續(xù)5周，其余各組動(dòng)物均皮下注射40％CCl4花生油10mg/kg，首劑加倍，5d注射1次，連續(xù)5周，除空白對(duì)照組、模型組外的各給藥組皮下注射給藥，給藥劑量見(jiàn)表4，5d注射1次，連續(xù)5周。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中每天觀察各組小鼠進(jìn)食、飲水、活動(dòng)情況及皮毛變化，每周稱重1次，第五周全部停用CCl4，繼續(xù)給藥治療1周，于末次給藥后第2天摘眼球取血，分離血清檢測(cè)血中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總蛋白(TP)、白蛋白(Alb)的含量和A/G(白蛋白/球蛋白)的比值。結(jié)果見(jiàn)表4。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果模型組各項(xiàng)指標(biāo)與空白對(duì)照組相比有極顯著差異(**p＜0.01)，說(shuō)明造模成功。各給藥組都與模型組相比血清ALT、AST、TP有明顯的降低，而Alb、A/G明顯升高，差異顯著(#p＜0.05和##p＜0.01)。其中GRH組合物注射液I、GRH組合物注射液II、GRH組合物注射液III和GRH組合物注射液Ⅳ與單用甘草酸二銨或人參多糖或人參總皂苷相比，差別顯著(&p＜0.05、★p＜0.05和△p＜0.05)。表明甘草酸二銨、人參和黃芪配伍對(duì)小鼠肝纖維化后血清生化指標(biāo)有明顯的恢復(fù)作用，使血清ALT、AST、TP含量降低，Alb、A/G明顯升高，與空白對(duì)照組相比沒(méi)有明顯差異(p＞0.05)。且與組合物的給藥劑量有關(guān)，高劑量作用最好。
表4 GRH組合物注射液對(duì)小鼠肝纖維化后血清生化指標(biāo)的影響(x±SD，n＝10)
注*p＜0.05，**p＜0.01，與空白對(duì)照組相比；#p＜0.05，##p＜0.01，與模型組相比；&p＜0.05，與甘草酸二銨組相比；★p＜0.05，與人參多糖組相比；△p＜0 05，與人參總皂苷組相比。
實(shí)驗(yàn)例5 小鼠注射給藥急性毒性實(shí)驗(yàn)(1)實(shí)驗(yàn)方法供試品GRH組合物注射液I(自制，10ml甘草酸二銨+人參多糖+黃芪多糖＝150mg+10mg+300mg)；(自制，10ml甘草酸單銨+人參多糖+黃芪多糖＝40mg+10mg+300mg)；GRH組合物注射液II(自制，10ml甘草酸二銨+人參多糖+黃芪總皂苷＝150mg+10mg+200mg)；(自制，10ml甘草酸單銨+人參多糖+黃芪總皂苷＝40mg+10mg+200mg)；GRH組合物注射液III(自制，10ml甘草酸二銨+人參總皂苷+黃芪多糖＝150mg+40mg+300mg)；(自制，10ml甘草酸單銨+人參總皂苷+黃芪多糖＝40mg+40mg+300mg)；GRH組合物注射液IV(自制，10ml甘草酸二銨+人參總皂苷+黃芪總皂苷＝150mg+40mg+200mg)；(自制，10ml甘草酸單銨+人參總皂苷+黃芪總皂苷＝40mg+40mg+200mg)。
受試動(dòng)物小鼠，每組雌雄各5只，雄性體重25～28g，雌性體重21～24g。
給藥途徑靜脈注射、腹腔注射。
觀察項(xiàng)目死亡數(shù)、一般狀態(tài)、體重、剖檢、半數(shù)致死量。
(2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果按照急性毒性實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行預(yù)試，腹腔注射及靜脈注射兩給藥途徑皆無(wú)法測(cè)出藥物的半數(shù)致死量，也未見(jiàn)明顯的毒性反應(yīng)，故進(jìn)行一日內(nèi)最大給藥量實(shí)驗(yàn)。給藥劑量尾靜脈注射0.4ml/10g，腹腔注射0.4ml/10g，一日2次。
死亡數(shù)未出現(xiàn)死亡。
一般狀態(tài)未見(jiàn)異常變化。
體重于給藥前1天，給藥日，給藥后1、3、7、14天測(cè)量；未見(jiàn)異常變化。
剖檢心、肝、肺、腎等組織未見(jiàn)異常變化。
(3)結(jié)論本實(shí)驗(yàn)中未出現(xiàn)死亡，推測(cè)GRH各組合物注射液對(duì)雌雄小鼠靜脈和腹腔注射給藥的最大耐受量均為0.8ml/10g，相當(dāng)于50kg體重人日最大用量40ml的100倍。表明本品低毒，安全性高。
實(shí)驗(yàn)例6 GRH組合物注射液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)供試品GRH組合物注射液I(自制，10ml甘草酸二銨+人參多糖+黃芪多糖＝150mg+10mg+300mg)；(自制，10ml甘草酸單銨+人參多糖+黃芪多糖＝40mg+10mg+300mg)；GRH組合物注射液II(自制，10ml甘草酸二銨+人參多糖+黃芪總皂苷＝150mg+10mg+200mg)；(自制，10ml甘草酸單銨+人參多糖+黃芪總皂苷＝40mg+10mg+200mg)；GRH組合物注射液III(自制，10ml甘草酸二銨+人參總皂苷+黃芪多糖＝150mg+40mg+300mg)；(自制，10ml甘草酸單銨+人參總皂苷+黃芪多糖＝40mg+40mg+300mg)；GRH組合物注射液IV(自制，10ml甘草酸二銨+人參總皂苷+黃芪總皂苷＝150mg+40mg+200mg)；(自制，10ml甘草酸單銨+人參總皂苷+黃芪總皂苷＝40mg+40mg+200mg)。
考察項(xiàng)目性狀、pH值、澄明度。
長(zhǎng)期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果將本品各組合物置溫度25℃±2℃、相對(duì)濕度60％±10％的條件下放置6個(gè)月、12個(gè)月，各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)明顯變化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本品組合物注射液長(zhǎng)期放置基本穩(wěn)定。
具體實(shí)施方式
以下通過(guò)實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。以下實(shí)施例中各劑型的輔料可以用藥學(xué)上可接受的輔料替換，或者減少、增加。實(shí)施例5～11中的實(shí)驗(yàn)例中所用的人參多糖取自實(shí)施例1，人參總皂苷取自實(shí)施例2，黃芪多糖取自實(shí)施例3，黃芪總皂苷取自實(shí)施例4。
實(shí)施例1 以多糖為主要有效成分的人參提取物即人參多糖的制備人參多糖制備工藝取人參，切碎，用75％乙醇，回流提取4小時(shí)，濾過(guò)，藥渣晾干，加水煎煮五次，合并煎煮液，加入0.3％活性炭，攪拌30分鐘，靜置過(guò)夜，濾過(guò)，濾液過(guò)樹脂柱，收集流出液，減壓濃縮，加乙醇使含醇量達(dá)95％，冷藏，濾過(guò)，取沉淀用丙酮洗滌，抽干丙酮，取出沉淀于60～80℃干燥，粉碎即得。
人參多糖鑒別實(shí)驗(yàn)(1)取本品約0.2g，加水5ml溶解后，加堿性酒石酸銅試液5滴，加熱即產(chǎn)生紅色沉淀，冷卻，濾過(guò)，取濾液加鹽酸1滴使成酸性，水浴加熱10分鐘，放冷，調(diào)節(jié)PH值至中性，加堿性酒石酸銅試液0.5ml，水浴加熱即產(chǎn)生紅色的氧化亞銅沉淀。
(2)取本品約0.2g，加水2ml溶解后，加5％α-萘酚乙醇溶液0.5ml搖勻，緩緩加入硫酸3ml，兩液面交界處顯紫紅色環(huán)。
人參多糖的含量測(cè)定對(duì)照品溶液的制備 精密稱取60℃真空干燥至恒重的半乳糖醛酸約100mg，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備 精密稱取本品50mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法精密量取對(duì)照品溶液、供試品溶液及水各1ml，分別精密加入0.25mol/L硼砂硫酸溶液6ml，置水浴中加熱30分鐘，放冷，再分別精密加入0.125％咔唑無(wú)水乙醇溶液0.4ml，置水浴中加熱10分鐘，放冷至室溫，照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄V B)實(shí)驗(yàn)，在530nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得。
根據(jù)上述工藝，制得人參多糖三批樣品，其含量和得率見(jiàn)下表。由結(jié)果可以看出，通過(guò)本工藝制備的人參多糖得率為0.5～2％，其中人參多糖的含量不低于50％。
人參多糖含量和得率
實(shí)施例2 以總皂苷為主要有效成分的人參提取物即人參總皂苷的制備人參總皂苷制備工藝取人參藥材，粉碎成細(xì)粒，乙醇回流提取二次，每次3小時(shí)，每次加醇10倍量，合并提取液，冷藏，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至稠膏，加水至適量(使每1ml相當(dāng)于原藥材1g)，攪勻，冷藏，濾過(guò)，濾液加于已處理好的大孔樹脂柱上，先用2V～3V柱體積的水進(jìn)行洗脫，棄去水洗液，再用3倍柱體積的80％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并減壓濃縮至相對(duì)密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。
人參總皂苷的鑒別取本品0.5g，加水0.5ml攪拌潤(rùn)濕，加水飽和正丁醇10ml，超聲處理30分鐘，吸取上清液加3倍量氨試液，搖勻，放置分層，取上層液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取人參皂苷Re、Rg1對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述兩種溶液各2ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
人參總皂苷的含量測(cè)定對(duì)照品溶液制備取人參皂甙Rg1對(duì)照品約10mg，經(jīng)60℃真空干燥2小時(shí)，精密稱定，置100ml量瓶中，用無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得每1ml含Rg1對(duì)照品0.1mg的溶液，即得。
供試品溶液制備精密稱取本品50mg，置50ml量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法 精密量取供試品溶液和對(duì)照品溶液各1ml，分別置10ml具塞試管中，在水浴上蒸干，放冷，加入5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml，再加入高氯酸0.8ml，于60℃保溫15分鐘，冷卻至室溫，加冰醋酸5ml，搖勻；同時(shí)作空白對(duì)照。照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄V B)，在560nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得。
人參皂苷Re、人參皂苷Rg1含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(22∶78)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm。理論板數(shù)按人參皂苷Re峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品、Re對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的混合溶液。
供試品溶液的制備 取本品0.2g，精密稱定，精密加入水飽和正丁醇30ml，密塞，放置過(guò)夜，超聲處理(功率250W，頻率50kHz)30分鐘，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液15ml，置蒸發(fā)皿中蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品和供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。結(jié)果見(jiàn)下表。
根據(jù)上述工藝，制得人參總皂苷三批樣品，其含量和得率見(jiàn)下表。由結(jié)果可以看出，通過(guò)本工藝制備得到的人參總皂苷得率為1～2％，人參總皂苷含量不低于50％，人參皂苷Re、人參皂苷Rg1含量不低于30％。
人參總皂苷含量測(cè)定結(jié)果及得率
實(shí)施例3 以多糖為主要有效成分的黃芪提取物即黃芪多糖的制備黃芪多糖制備工藝取黃芪藥材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小時(shí)，提取液棄去，取藥渣加水提取二次，提取液合并，濃縮至提取體積與生藥材的比例為1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量達(dá)到70％，過(guò)濾，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗滌，再用適量水溶解，過(guò)濾，濾液過(guò)大孔樹脂，用水洗脫，收集水洗液，將水洗液濃縮至藥液體積與藥材比例為1∶2.5，加入乙醇使含醇量達(dá)到70％，得沉淀，將沉淀用95％乙醇和丙酮洗滌脫水，減壓干燥(60℃)，即得。
黃芪多糖的含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 取經(jīng)105℃干燥至恒重的葡萄糖100mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加水溶解，并稀釋至刻度，搖勻。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用。
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪 制精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1ml～0.6ml共6份，分別置25ml量瓶中，加水至2.0ml，并加苯酚溶液(取苯酚300g，鋁片0.3g，碳酸氫鈉0.15g，混合蒸餾，收集182℃餾分，配制成5％水溶液)1.0ml，搖勻，迅速滴加濃硫酸5.0ml，搖勻，放置5min，置水浴中加熱15min，取出，迅速冷卻至室溫，另以2.0ml水同上平行操作作為空白對(duì)照，在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收值，計(jì)算回歸方程。
測(cè)定方法 取黃芪提取物0.5g置25ml量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項(xiàng)下的方法自“加水至2.0ml”起，依法測(cè)定吸收值，依回歸方程計(jì)算多糖的含量。
黃芪多糖的鑒別(1)取本品約0.2g，加水5ml溶解后，加堿性酒石酸銅試液5滴，加熱即產(chǎn)生紅色沉淀，冷卻，濾過(guò)，取濾液加鹽酸1滴使成酸性，水浴加熱10分鐘，放冷，調(diào)節(jié)PH值至中性，加堿性酒石酸銅試液0.5ml，水浴加熱即產(chǎn)生紅色的氧化亞銅沉淀。
(2)取本品約0.2g，加水2ml溶解后，加5％α-萘酚乙醇溶液0.5ml搖勻，緩緩加入硫酸3ml，兩液面交界處顯紫紅色環(huán)。
根據(jù)上述工藝，制得黃芪多糖三批樣品，其含量和得率見(jiàn)下表。由結(jié)果可以看出，通過(guò)本工藝制備的黃芪多糖的含量不低于50％，得率為0.5～2％。
黃芪多糖的含量和得率
實(shí)施例4以總皂苷為主要有效成分的黃芪提取物即黃芪總皂苷的制備黃芪總皂苷制備工藝取黃芪，加水煎煮三次，每次1.5小時(shí)，第一次加水10倍量，二、三次均為8倍量，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理2次，第一次溶液中含醇量為75％，第二次為85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，加于已處理好的大孔吸附樹脂柱上，先用2倍體積的水沖柱，再用4倍體積的70％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、真空干燥，即得。
黃芪總皂苷鑒別實(shí)驗(yàn)鑒別實(shí)驗(yàn)一 取本品0.01g，加甲醇20ml，加熱回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液加于中性氧化鋁柱(100～120目，5g，內(nèi)徑10～15mm)上，用40％甲醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液；用水洗滌2次，每次20ml；棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述兩種溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，涼干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同的棕褐色斑點(diǎn)；紫外光燈(365nm)下顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)。
鑒別實(shí)驗(yàn)二 取本品0.01g，加乙醇30ml，加熱回流20分鐘，濾過(guò)，濾液加0.3％氫氧化鈉溶液15 ml使溶解，濾過(guò)，濾液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至5～6，用乙酸乙酯15ml振搖提取，分取乙酸乙酯液，用鋪有無(wú)水硫酸鈉的濾紙濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴?ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪對(duì)照藥材2g，同法制成對(duì)照藥材溶液。吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(10∶1)作為展開劑，展開，取出，涼干，置氨蒸氣中熏后置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)。
黃芪總皂苷含量測(cè)定總皂苷的含量測(cè)定對(duì)照品溶液的制備 精密稱取于105℃干燥至恒重的黃芪甲苷對(duì)照品約10mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml含黃芪甲苷0.1mg)。
供試品溶液的制備 取本品0.1g，精密稱定，加水25ml使溶解，移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌兩次，每次10ml，棄去水液，正丁醇至水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，移?5ml量瓶中，并加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
測(cè)定法精密量取對(duì)照品溶液、供試品溶液各1ml，置25ml鈉氏比色管，置水浴中蒸干，放冷，加新鮮配制的5％香草醛-冰醋酸溶液0.4ml，高氯酸1.6ml，搖勻，放置5分鐘，置沸水浴中顯色15分鐘，取出，立即置冰浴中冷卻至室溫，加入8ml冰醋酸，搖勻，在538nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算，即得。
黃芪甲苷的含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以乙睛-水(32∶68)為流動(dòng)相；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。理論板數(shù)以黃芪甲苷峰計(jì)算不低于4000。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 精密稱取本品0.04g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇40ml，冷浸過(guò)夜，再加甲醇適量，加熱回流4小時(shí)，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，放冷，通過(guò)D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)12cm)，以水50ml洗脫，棄去水液，再用40％乙醇30ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70％乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液10μl、20μl與供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，以外標(biāo)兩點(diǎn)對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得。
根據(jù)上述工藝，制得黃芪總皂苷三批樣品，其含量和得率見(jiàn)下表。由結(jié)果可以看出，通過(guò)本工藝制備的黃芪總皂苷得率為0.5～2％，總皂苷含量不低于50％，黃芪甲苷含量不低于2.0％。
黃芪總皂苷和黃芪甲苷的含量及得率
實(shí)施例5 GRH組合物粉針劑的制備1、處方GRH組合物I處方1甘草酸單銨40g；人參多糖10g；黃芪多糖300g；甘氨酸400g；鹽酸半胱氨酸20g；聚山梨酯80 20g；甘露醇400g；無(wú)菌注射用水3000ml，共制備1000支。
GRH組合物I處方2甘草酸二銨150g；人參多糖10g；黃芪多糖300g；聚山梨酯80 20g；甘露醇400g；無(wú)菌注射用水3000ml，共制備1000支。
GRH組合物II處方1甘草酸單銨40g；人參多糖10g；黃芪總皂苷200g；甘氨酸400g；鹽酸半胱氨酸20g；聚山梨酯8020g；甘露醇400g；無(wú)菌注射用水加至3000ml，共制備1000支。
GRH組合物II處方2甘草酸二銨150g；人參多糖10g；黃芪總皂苷200g；聚山梨酯80 20g；甘露醇400g；無(wú)菌注射用水加至3000ml，共制備1000支。
GRH組合物III處方1甘草酸單銨40g；人參總皂苷40g；黃芪多糖300g；甘氨酸400g；鹽酸半胱氨酸20g；聚山梨酯8020g；甘露醇400g；無(wú)菌注射用水加至3000ml，共制備1000支。
GRH組合物III處方2甘草酸二銨150g；人參總皂苷40g；黃芪多糖300g；聚山梨酯80 20g；甘露醇400g；無(wú)菌注射用水加至3000ml，共制備1000支。
GRH組合物IV處方1甘草酸單銨40g；人參總皂苷40g；黃芪總皂苷200g；甘氨酸400g；鹽酸半胱氨酸20g；聚山梨酯80 20g；甘露醇400g；無(wú)菌注射用水加至3000ml，共制備1000支。
GRH組合物IV處方2甘草酸二銨150g；人參總皂苷40g；黃芪總皂苷200g；聚山梨酯80 20g；甘露醇400g；無(wú)菌注射用水加至3000ml，共制備1000支。
2、具體步驟1)首先將配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，膠塞等進(jìn)行無(wú)菌處理。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)取配液量40％的無(wú)菌注射用水，將甘草酸單銨(或甘草酸二銨)、人參多糖(或人參總皂苷)、黃芪多糖(或黃芪總皂苷)加入少量注射用水，根據(jù)處方需要加入氨基酸，加入處方量的聚山梨酯80加熱攪拌溶解。合并上述溶液，補(bǔ)加無(wú)菌注射用水至3000ml。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過(guò)濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.22μm的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)分裝于抗生素玻璃瓶中，半壓塞。將樣品放入凍干機(jī)中冷凍干燥。預(yù)凍-45℃5小時(shí)，低溫真空干燥-45℃～0℃20小時(shí)，然后升溫至25℃真空干燥3小時(shí)。
9)凍干結(jié)束，壓塞，軋蓋。
10)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例6 GRH組合物水針劑的制備1、處方GRH組合物I處方1甘草酸單銨40g；人參多糖10g；黃芪多糖300g；甘氨酸400g；鹽酸半胱氨酸20g；聚山梨酯80 50g；注射用水加至10000ml，共制備1000支。
GRH組合物I處方2甘草酸二銨150g；人參多糖10g；黃芪多糖300g；聚山梨酯80 50g；注射用水加至10000ml，共制備1000支。
GRH組合物II處方1甘草酸單銨40g；人參多糖10g；黃芪總皂苷200g；甘氨酸400g；鹽酸半胱氨酸20g；聚山梨酯8050g；注射用水加至10000ml，共制備1000支。
GRH組合物II處方2甘草酸二銨150g；人參多糖10g；黃芪總皂苷200g；聚山梨酯80 50g；注射用水加至10000 ml，共制備1000支。
GRH組合物III處方1甘草酸單銨40g；人參總皂苷40g；黃芪多糖300g；甘氨酸400g；鹽酸半胱氨酸20g；聚山梨酯8050g；注射用水加至10000ml，共制備1000支。
GRH組合物III處方2甘草酸二銨150g；人參總皂苷40g；黃芪多糖300g；聚山梨酯80 50g；注射用水加至10000ml，共制備1000支。
GRH組合物IV處方1甘草酸單銨40g；人參總皂苷40g；黃芪總皂苷200g；甘氨酸400g；鹽酸半胱氨酸20g；聚山梨酯8050g；注射用水加至10000ml，共制備1000支。
GRH組合物IV處方2甘草酸二銨150g；人參總皂苷40g；黃芪總皂苷200g；聚山梨酯80 50g；注射用水加至10000 ml，共制備1000支。
2、具體步驟1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)取配液量40％的注射用水，將甘草酸單銨(或甘草酸二銨)、人參多糖(或人參總皂苷)、黃芪多糖(或黃芪總皂苷)加入少量注射用水，根據(jù)處方需要加入氨基酸，加入處方量的聚山梨酯80加熱攪拌溶解，合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至10000ml。
3)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
4)經(jīng)砂濾棒過(guò)濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
5)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾。
6)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
7)將溶液熔封于玻璃安瓿中。
8)100℃流通蒸汽滅菌30分鐘。
9)趁熱將樣品放入0.01％的亞甲藍(lán)溶液中檢漏。
10)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例7 GRH組合物氯化鈉輸液的制備1、處方GRH組合物I處方1甘草酸單銨40g；人參多糖10g；黃芪多糖300g；甘氨酸400g；鹽酸半胱氨酸20g；聚山梨酯80 20g；氯化鈉900g；注射用水加至100000ml，共制備1000瓶。
GRH組合物I處方2甘草酸二銨150g；人參多糖10g；黃芪多糖300g；聚山梨酯80 20g；氯化鈉900g；注射用水加至100000ml，共制備1000瓶。
GRH組合物II處方1甘草酸單銨40g；人參多糖10g；黃芪總皂苷200g；甘氨酸400g；鹽酸半胱氨酸20g；聚山梨酯8020g；氯化鈉900g；注射用水加至100000ml，共制備1000瓶。
GRH組合物II處方2甘草酸二銨150g；人參多糖10g；黃芪總皂苷200g；聚山梨酯80 20g；氯化鈉900g；注射用水加至100000ml，共制備1000瓶。
GRH組合物III處方1甘草酸單銨40g；人參總皂苷40g；黃芪多糖300g；甘氨酸400g；鹽酸半胱氨酸20g；聚山梨酯8020g；氯化鈉900g；注射用水加至100000ml，共制備1000瓶。
GRH組合物III處方2甘草酸二銨150g；人參總皂苷40g；黃芪多糖300g；聚山梨酯80 20g；氯化鈉900g；注射用水加至100000ml，共制備1000瓶。
GRH組合物IV處方1甘草酸單銨40g；人參總皂苷40g；黃芪總皂苷200g；甘氨酸400g；鹽酸半胱氨酸20g；聚山梨酯80 20g；氯化鈉900g；注射用水加至100000ml，共制備1000瓶。
GRH組合物IV處方2甘草酸二銨150g；人參總皂苷40g；黃芪總皂苷200g；聚山梨酯80 20g；氯化鈉900g；注射用水加至100000ml，共制備1000瓶。
2、具體步驟1)前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)取配液量40％的注射用水，將甘草酸單銨(或甘草酸二銨)、人參多糖(或人參總皂苷)、黃芪多糖(或黃芪總皂苷)加入少量注射用水，根據(jù)處方需要加入氨基酸，加入處方量的聚山梨酯80加熱攪拌溶解。將氯化鈉用適量注射用水溶解完全，合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
3)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
4)經(jīng)砂濾棒過(guò)濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
5)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾。
6)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
7)灌裝于100ml的輸液瓶中。
8)115℃熱壓滅菌30分鐘。
9)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例8 GRH組合物葡萄糖輸液的制備1、處方GRH組合物I處方1甘草酸單銨40g；人參多糖10g；黃芪多糖300g；甘氨酸400g；鹽酸半胱氨酸20g；聚山梨酯80 20g；葡萄糖5000g；注射用水加至100000ml，共制備1000瓶。
GRH組合物I處方2甘草酸二銨150g；人參多糖10g；黃芪多糖300g；聚山梨酯80 20g；葡萄糖5000g；注射用水加至100000ml，共制備1000瓶。
GRH組合物II處方1甘草酸單銨40g；人參多糖10g；黃芪總皂苷200g；甘氨酸400g；鹽酸半胱氨酸20g；聚山梨酯8020g；葡萄糖5000g；注射用水加至100000ml，共制備1000瓶。
GRH組合物II處方2甘草酸二銨150g；人參多糖10g；黃芪總皂苷200g；聚山梨酯80 20g；葡萄糖5000g；注射用水加至100000ml，共制備1000瓶。
GRH組合物III處方1
甘草酸單銨40g；人參總皂苷40g；黃芪多糖300g；甘氨酸400g；鹽酸半胱氨酸20g；聚山梨酯8020g；葡萄糖5000g；注射用水加至100000ml，共制備1000瓶。
GRH組合物III處方2甘草酸二銨150g；人參總皂苷40g；黃芪多糖300g；聚山梨酯80 20g；葡萄糖5000g；注射用水加至100000ml，共制備1000瓶。
GRH組合物IV處方1甘草酸單銨40g；人參總皂苷40g；黃芪總皂苷200g；甘氨酸400g；鹽酸半胱氨酸20g；聚山梨酯80 20g；葡萄糖5000g；注射用水加至100000ml，共制備1000瓶。
GRH組合物IV處方2甘草酸二銨150g；人參總皂苷40g；黃芪總皂苷200g；聚山梨酯80 20g；葡萄糖5000g；注射用水加至100000ml，共制備1000瓶。
2、具體步驟1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)取配液量40％的注射用水，將甘草酸單銨(或甘草酸二銨)、人參多糖(或人參總皂苷)、黃芪多糖(或黃芪總皂苷)加入少量注射用水，根據(jù)處方需要加入氨基酸，加入處方量的聚山梨酯80加熱攪拌溶解。合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。將葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全，加熱煮沸15分鐘。
3)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
4)經(jīng)砂濾棒過(guò)濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
5)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾。
6)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
7)灌裝于100ml的輸液瓶中。
8)115℃熱壓滅菌30分鐘。
9)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例9 GRH組合物片劑的制備1、處方GRH組合物I處方1甘草酸單銨40g；人參多糖10g；黃芪多糖300g；蛋氨酸40g；甘氨酸40g；淀粉40g；微晶纖維素40g；2％HPMC水溶液適量；硬脂酸鎂5.0g；羧甲淀粉鈉10.0g，共制備1000片。
GRH組合物I處方2甘草酸二銨150g；人參多糖10g；黃芪多糖300g；淀粉40g；微晶纖維素40g；2％HPMC水溶液適量；硬脂酸鎂5.0g；羧甲淀粉鈉10.0g，共制備1000片。
GRH組合物II處方1甘草酸單銨40g；人參多糖10g；黃芪總皂苷200g；蛋氨酸40g；甘氨酸40g；淀粉40g；微晶纖維素40g；2％HPMC水溶液適量；硬脂酸鎂5.0g；羧甲淀粉鈉10.0g，共制備1000片。
GRH組合物II處方2甘草酸二銨150g；人參多糖10g；黃芪總皂苷200g；淀粉40g；微晶纖維素40g；2％HPMC水溶液適量；硬脂酸鎂5.0g；羧甲淀粉鈉10.0g，共制備1000片。
GRH組合物III處方1甘草酸單銨40g；人參總皂苷40g；黃芪多糖300g；蛋氨酸40g；甘氨酸40g；淀粉40g；微晶纖維素40g；2％HPMC水溶液適量；硬脂酸鎂5.0g；羧甲淀粉鈉10.0g，共制備1000片。
GRH組合物III處方2甘草酸二銨150g；人參總皂苷40g；黃芪多糖300g；淀粉40g；微晶纖維素40g；2％HPMC水溶液適量；硬脂酸鎂5.0g；羧甲淀粉鈉10.0g，共制備1000片。
GRH組合物IV處方1甘草酸單銨40g；人參總皂苷40g；黃芪總皂苷200g；蛋氨酸40g；甘氨酸40g；淀粉40g；微晶纖維素40g；2％HPMC水溶液適量；硬脂酸鎂5.0g；羧甲淀粉鈉10.0g，共制備1000片。
GRH組合物IV處方2甘草酸二銨150g；人參總皂苷40g；黃芪總皂苷200g；淀粉40g；微晶纖維素40g；2％HPMC水溶液適量；硬脂酸鎂5.0g；羧甲淀粉鈉10.0g，共制備1000片。
2、具體步驟1)將甘草酸單銨(或甘草酸二銨)、人參多糖(或人參總皂苷)、黃芪多糖(或黃芪總皂苷)粉碎過(guò)100目篩備用。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
4)將甘草酸單銨(或甘草酸二銨)、人參多糖(或人參總皂苷)、黃芪多糖(或黃芪總皂苷)、淀粉、微晶纖維素混合均勻，根據(jù)處方需要加入氨基酸，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
5)過(guò)20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘干。
7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂和羧甲淀粉鈉，過(guò)18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗(yàn)。
9)按照化驗(yàn)確定的片重壓片。
10)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施10 GRH組合物膠囊劑的制備1、處方GRH組合物I處方1甘草酸單銨40g；人參多糖10g；黃芪多糖300g；蛋氨酸40g；甘氨酸40g；淀粉20.0g；微晶纖維素60.0g；2％HPMC水溶液適量；硬脂酸鎂5.0g，共制備1000粒。
GRH組合物I處方2甘草酸二銨150g；人參多糖10g；黃芪多糖300g；淀粉20.0g；微晶纖維素60.0g；2％HPMC水溶液適量；硬脂酸鎂5.0g，共制備1000粒。
GRH組合物II處方1甘草酸單銨40g；人參多糖10g；黃芪總皂苷200g；蛋氨酸40g；甘氨酸40g；淀粉20.0g；微晶纖維素60.0g；2％HPMC水溶液適量；硬脂酸鎂5.0g，共制備1000粒。
GRH組合物II處方2甘草酸二銨150g；人參多糖10g；黃芪總皂苷200g；淀粉20.0g；微晶纖維素60.0g；2％HPMC水溶液適量；硬脂酸鎂5.0g，共制備1000粒。
GRH組合物III處方1甘草酸單銨40g；人參總皂苷40g；黃芪多糖300g；蛋氨酸40g；甘氨酸40g；淀粉20.0g；微晶纖維素60.0g；2％HPMC水溶液適量；硬脂酸鎂5.0g，共制備1000粒。
GRH組合物III處方2甘草酸二銨150g；人參總皂苷40g；黃芪多糖300g；淀粉20.0g；微晶纖維素60.0g；2％HPMC水溶液適量；硬脂酸鎂5.0g，共制備1000粒。
GRH組合物IV處方1甘草酸單銨40g；人參總皂苷40g；黃芪總皂苷200g；蛋氨酸40g；甘氨酸40g；淀粉20.0g；微晶纖維素60.0g；2％HPMC水溶液適量；硬脂酸鎂5.0g，共制備1000粒。
GRH組合物IV處方2甘草酸二銨150g；人參總皂苷40g；黃芪總皂苷200g；淀粉20.0g；微晶纖維素60.0g；2％HPMC水溶液適量；硬脂酸鎂5.0g，共制備1000粒。
2、具體步驟1)將甘草酸單銨(或甘草酸二銨)、人參多糖(或人參總皂苷)、黃芪多糖(或黃芪總皂苷)粉碎過(guò)100目篩備用。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
4)將甘草酸單銨(或甘草酸二銨)、人參多糖(或人參總皂苷)、黃芪多糖(或黃芪總皂苷)、淀粉、微晶纖維素混合均勻，根據(jù)處方需要加入氨基酸，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
5)過(guò)20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘干。
7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂，過(guò)18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗(yàn)。
9)按照化驗(yàn)確定的裝量裝入膠囊。
10)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例11 GRH組合物顆粒劑的制備1、處方GRH組合物I處方1甘草酸單銨40g；人參多糖10g；黃芪多糖300g；蛋氨酸40g；甘氨酸40g；糖粉2000.0g；2％HPMC50％乙醇溶液適量，共制備1000包。
GRH組合物I處方2甘草酸二銨150g；人參多糖10g；黃芪多糖300g；糖粉2000.0g；2％HPMC50％乙醇溶液適量，共制備1000包。
GRH組合物II處方1甘草酸單銨40g；人參多糖10g；黃芪總皂苷200g；蛋氨酸40g；甘氨酸40g；糖粉2000.0g；2％HPMC50％乙醇溶液適量，共制備1000包。
GRH組合物II處方2甘草酸二銨150g；人參多糖10g；黃芪總皂苷200g；糖粉2000.0g；2％HPMC50％乙醇溶液適量，共制備1000包。
GRH組合物III處方1甘草酸單銨40g；人參總皂苷40g；黃芪多糖300g；蛋氨酸40g；甘氨酸40g；糖粉2000.0g；2％HPMC50％乙醇溶液適量，共制備1000包。
GRH組合物III處方2甘草酸二銨150g；人參總皂苷40g；黃芪多糖300g；糖粉2000.0g；2％HPMC50％乙醇溶液適量，共制備1000包。
GRH組合物IV處方1甘草酸單銨40g；人參總皂苷40g；黃芪總皂苷200g；蛋氨酸40g；甘氨酸40g；糖粉2000.0g；2％HPMC50％乙醇溶液適量，共制備1000包。
GRH組合物IV處方2甘草酸二銨150g；人參總皂苷40g；黃芪總皂苷200g；糖粉2000.0g；2％HPMC50％乙醇溶液適量，共制備1000包。
2、具體步驟1)將蔗糖粉碎過(guò)100目篩備用。將甘草酸單銨(或甘草酸二銨)、人參多糖(或人參總皂苷)、黃芪多糖(或黃芪總皂苷)粉碎過(guò)100目篩備用。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將甘草酸單銨(或甘草酸二銨)、人參多糖(或人參總皂苷)、黃芪多糖(或黃芪總皂苷)與糖粉以等量遞加的方法混合均勻，根據(jù)處方需要加入氨基酸，加入2％HPMC50％乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
4)過(guò)20目篩制顆粒。
5)顆粒在60℃的條件下烘干。
6)干顆粒過(guò)18目篩整粒。
7)取樣，半成品化驗(yàn)顆粒中主藥的含量，確定裝量。
8)包裝，成品全檢，包裝入庫(kù)。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其特征在于該組合物主要由下列重量份的原料藥制成甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽4～800份、人參250～16000份、黃芪5000～80000份。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于各原料藥的重量份數(shù)為甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽10～400份、人參500～8000份、黃芪10000～40000份。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于各原料藥的重量份數(shù)為甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽20～200份、人參1000～4000份、黃芪20000份。
4.如權(quán)利要求1～3所述的任一藥物組合物的制備方法，其特征在于，所述的人參、黃芪可以用適宜的溶劑和方法單提或混提制備得到提取物，總提取物再與甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接受的輔料混合制成任一制劑。
5.如權(quán)利要求4所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于，總提取物中所含的主要有效成分為人參多糖或人參總皂苷、黃芪多糖或黃芪總皂苷，總提取物中主要有效成分的總含量不低于30％。
6.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物還可以由下列原料藥制成甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、人參多糖或人參總皂苷和黃芪多糖或黃芪總皂苷，其重量配比為甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽4～800份、人參多糖2～40份、黃芪多糖70～1200份或者為甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽4～800份、人參多糖2～40份、黃芪總皂苷50～800份或者為甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽4～800份、人參總皂苷10～160份、黃芪多糖70～1200份；或者為甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽4～800份、人參總皂苷10～160份、黃芪總皂苷50～800份。
7.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，其原料藥的重量配比為甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽10～400份、人參多糖5～20份、黃芪多糖150～600份；或者為甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽10～400份、人參多糖5～20份、黃芪總皂苷100～400份；或者為甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽10～400份、人參總皂苷20～80份、黃芪多糖150～600份；甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽10～400份、人參總皂苷20～80份、黃芪總皂苷100～400份。
8.如權(quán)利要求6、7所述的任一藥物組合物，其特征在于，所述的人參多糖含量不低于40％，人參總皂苷含量不低于35％，其中的人參皂苷Re、人參皂苷Rg1含量和不低于20％，黃芪多糖含量不低于35％，黃芪總皂苷含量不低于30％，其中的黃芪甲苷含量不低于1％。
9.如權(quán)利要求1、2、3、6、7所述的任一藥物組合物，其特征在于，所述的甘草酸藥學(xué)上可接受的鹽為甘草酸單銨或甘草酸二銨。
10.如權(quán)利要求1、2、3、6、7所述的任一藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物可以與藥學(xué)上可接受的輔料混合制成任何一種臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種用于抗肝炎的藥物組合物及其制備方法和用途，該組合物主要由下列重量份的原料藥制成甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽4～800份、人參250～16000份、黃芪5000～80000份，也可由甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽和人參、黃芪的提取物投料，可制成各種藥學(xué)上可接受的劑型；該組合物具有協(xié)同增效作用，穩(wěn)定性好，比單用同劑量的甘草酸單銨或甘草酸二銨或人參或黃芪的效果大大提高，產(chǎn)生了意想不到的效果，具有廣泛的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)A61P1/16GK1985873SQ20051004537
公開日2007年6月27日 申請(qǐng)日期2005年12月19日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月19日
發(fā)明者黃振華 申請(qǐng)人:黃振華