專利名稱：納米肝靶向生物降解藥物載體材料的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)用材料領(lǐng)域，特別是涉及一種納米肝靶向生物降解藥物載體材料的制備方法。
背景技術(shù)：
肝癌，尤其是原發(fā)性肝癌，是臨床常見病和多發(fā)病。原發(fā)性肝癌死亡率在惡性腫瘤中居第三位，僅次于胃癌和食管癌。我國是肝癌的高發(fā)地區(qū)，發(fā)病率占全球的50％以上。對肝癌的治療，目前首推肝移植，但是供體難求。抗癌藥物治療(環(huán)磷酰胺，鹽酸阿糖胸苷)由于藥物全身分布，在病灶部位藥物濃度不夠大，但對其他臟器傷害較大，一些病人往往死于化療藥物對其他臟器的傷害。
肝靶向給藥系統(tǒng)(Hepatic targeted drug delivery System，HTDDS)是藥劑學(xué)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一，可將藥物有效地輸送至肝臟的病變部位，提高藥物的治療效果，減輕對其它臟器的損害，減少用藥劑量和給藥次數(shù)，因此，HTDDS對肝臟疾病的治療具有積極的推動作用。在肝靶向研究中，常采用兩種不同的方法1被動靶向(passive targeting)，50～200nm的粒子可以被巨噬細(xì)胞吞噬，部分在肝臟和肺部網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)聚集，有部分肝靶向性；2主動靶向(active targeting)，納米粒子連接有特定的配體，可與肝部靶細(xì)胞上受體結(jié)合，實(shí)現(xiàn)肝靶向治療，因此主動靶向的靶向性明顯，效果更好。
1978年，Paul Ehrlich提出，將抗腫瘤藥物與單克隆抗體共價連接，能使藥物導(dǎo)向腫瘤組織。以單克隆抗體為靶向基團(tuán)，連接藥物、放射性核素、免疫分子和酶類進(jìn)行肝臟疾病的治療，是目前國際上研究肝靶向材料的主要方法。單克隆抗體作為靶向物質(zhì)最大的優(yōu)點(diǎn)是靶向性強(qiáng)，轉(zhuǎn)運(yùn)率高，但目前的抗體主要是鼠源性抗體，安全性成為其首要問題。人源性抗體則由于價格昂貴，難以大規(guī)模應(yīng)用。
國內(nèi)目前肝臟疾病的研究主要集中在將脂質(zhì)體和其他一些合成高分子材料制備為納米粒子包裹藥物或基因方面。但脂質(zhì)體等納米粒子對組織細(xì)胞的特異識別性較低，轉(zhuǎn)運(yùn)率比較低，靶向性不強(qiáng)，在很大程度上制約了如基因、核素治療等方法在肝臟疾病治療中的應(yīng)用。國內(nèi)也有部分課題組采用受體介導(dǎo)設(shè)計(jì)方法，用半乳糖修飾聚合物，制備肝靶向材料。但由于半乳糖對肝臟表面受體特異識別作用不夠強(qiáng)，納米粒子需要磁性物質(zhì)或者抗體修飾，使材料的制造和使用帶來很多不便，成本也很高。
目前尚未開發(fā)出對肝癌同時具有特異靶向性和緩釋給藥治療的藥物體系。通過受體介導(dǎo)，將化療藥物或基因物質(zhì)載于可體內(nèi)降解的高分子載體上，就可將藥物或基因物質(zhì)送至肝細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)肝靶向緩釋給藥治療肝癌的目的。將具有高肝靶向性的小分子物質(zhì)如甘草次酸、甘草酸、膽酸等引入可降解并具有良好生物相容性的多糖和聚氨基酸上的肝靶向材料目前尚未見報(bào)道。本發(fā)明的目的是為了解決以上技術(shù)問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種納米肝靶向生物降解藥物載體材料的制備方法。
采用的技術(shù)路線是將肝靶向化合物修飾到可降解并具有生物相容性的聚合物上，通過離子交聯(lián)或超聲乳化方法制備納米肝靶向生物降解藥物載體材料。
肝靶向化合物是甘草次酸、甘草酸、膽酸中的任意一種，靶向基團(tuán)的取代度為0.5-1mmol/g。聚合物是殼聚糖、聚賴氨酸、葡聚糖、瓊脂、聚谷氨酸芐酯、聚丙氨酸中的任意一種。殼聚糖、瓊脂、葡聚糖的分子量為6000-20000，聚谷氨酸芐酯、聚丙氨酸、聚賴氨酸的分子量為2000～40000。
用離子交聯(lián)方法中的離子交聯(lián)劑為聚蘋果酸鈉，聚蘋果酸或三聚磷酸鈉中的任意一種，聚蘋果酸鈉，聚蘋果酸的分子量為2000～6000。
納米肝靶向生物降解藥物載體材料的制備方法，包括下述步驟1肝靶向化合物修飾到可降解并具有生物相容性的聚合物的制備1.1肝靶向化合物修飾殼聚糖的制備在2～10％的殼聚糖水溶液中，加入肝靶向化合物和EDC(1-乙基-3-(3-二甲氨基異丙基)碳二亞胺)的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)的溶液，在60～100℃反應(yīng)4～6小時，冷卻后，濃縮反應(yīng)液，將濃縮液傾入乙醇中沉淀，過濾，將沉淀干燥，作為肝靶向藥物載體材料；1.2肝靶向化合物修飾聚賴氨酸的制備在2～10％的聚賴氨酸水溶液中，加入肝靶向化合物和EDC的DMF的溶液，在60～100℃反應(yīng)4～6小時，冷卻后，濃縮反應(yīng)液，將濃縮液傾入乙醇中沉淀，過濾，將沉淀干燥，作為肝靶向藥物載體材料；1.3肝靶向化合物修飾瓊脂或葡聚糖的制備在2～10％的瓊脂或葡聚糖的DMF水溶液中，加入肝靶向化合物和4-二甲氨基吡啶(DMAP)的DMF的溶液，加熱至40～80℃反應(yīng)4～6小時，冷卻后，濃縮反應(yīng)液，將濃縮液傾入乙醇中沉淀，過濾，將沉淀干燥，作為肝靶向藥物載體材料；1.4肝靶向化合物修飾聚谷氨酸芐酯或聚丙氨酸的制備將肝靶向化合物溶于四氫呋喃(THF)中，冷卻，加入N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)，攪拌后加入SuOH，在室溫下攪拌反應(yīng)，將反應(yīng)混合物濾去二環(huán)己基脲后所得溶液傾入無水乙醚中，收集白色固體，用少量無水乙醇洗滌，再用無水乙醚洗滌，真空干燥，得活性酯；將活性酯的DMF溶液滴加到大過量的二元胺(乙二胺、己二胺的任意一種)的溶液(乙二胺用DMF做溶劑，己二胺用二甲基亞砜做溶劑)中反應(yīng)，將膽酸、甘草次酸的衍生物傾入水中(甘草酸的衍生物傾入四氫呋喃中)，在3℃放置。將沉淀過濾，用少量乙醇、水、乙醚洗滌，干燥，將所得沉淀在DMF中溶解，用乙醚沉淀，真空干燥，得到胺基修飾的肝靶向化合物；稱取N-羧酸酐(谷氨酸芐酯-N-羧酸酐、丙氨酸-N-羧酸酐)、胺基修飾的肝靶向化合物于反應(yīng)瓶中，加DMF，然后在氮?dú)獗Ｗo(hù)下室溫?cái)嚢璺磻?yīng)，反應(yīng)液在劇烈攪拌下滴加到無水乙醚中沉淀，沉淀過濾，用乙醚洗滌，干燥得白色固體產(chǎn)物，作為靶向藥物載體材料。
所述肝靶向化合物修飾到可降解并具有生物相容性的聚合物的制備步驟中的物料配比為在1.1肝靶向化合物修飾殼聚糖的制備步驟中，殼聚糖∶肝靶向化合物∶EDC為1∶0.2～0.4∶0.2～0.4，mol/mol；在1.2肝靶向化合物修飾聚賴氨酸的制備步驟中，聚賴氨酸∶肝靶向化合物∶EDC為1∶0.1～0.7∶0.2～0.4，mol/mol；在1.3肝靶向化合物修飾瓊脂或葡聚糖的制備步驟中，瓊脂(或葡聚糖)∶肝靶向化合物∶DMAP為1∶0.5～2.0∶0.2～0.4，mol/mol；在1.4肝靶向化合物修飾聚谷氨酸芐酯或聚丙氨酸的制備步驟中，肝靶向化合物∶DCC∶SuOH為1∶1.0～1.5∶1.0～1.5mol∶mol；活性酯∶二元胺為1∶30～100，mol∶mol；N-羧酸酐∶胺基修飾的肝靶向化合物為50～300∶1mol∶mol；2納米肝靶向生物降解藥物載體材料的制備2.1殼聚糖或聚賴氨酸基藥物載體材料納米粒子的制備將5％肝靶向藥物載體材料的水溶液滴加到含治療肝臟疾病的藥物和離子交聯(lián)劑是三聚磷酸鈉、聚蘋果酸鈉、聚蘋果酸中的任意一種pH值為7.4的磷酸緩沖液中，超聲振蕩，得到分散均勻的納米肝靶向生物降解藥物載體材料；2.2瓊脂或葡聚糖基藥物載體材料納米粒子的制備向含5％肝靶向藥物載體材料的DMF溶液中滴加含治療肝臟疾病的藥物水溶液，超聲振蕩，得到分散均勻的納米肝靶向生物降解藥物載體材料；2.3聚谷氨酸芐酯或聚丙氨酸基藥物載體材料納米粒子的制備向含5％肝靶向藥物載體材料的乙醇、異丙醇、己醇中任意一種醇溶液中滴加含治療肝臟疾病的藥物水溶液，超聲振蕩，得到分散均勻的納米肝靶向生物降解藥物載體材料。
所述肝靶向藥物載體材料納米粒子的制備步驟中的物料配比為在2.1殼聚糖或聚賴氨酸基藥物載體材料納米粒子的制備步驟中，殼聚糖∶離子交聯(lián)劑為100∶1～7，m/m；在2.2瓊脂或葡聚糖基藥物載體材料納米粒子的制備步驟中，瓊脂(或葡聚糖)DMF溶液∶藥物水溶液為1∶1～10，v/v；在2.3聚谷氨酸芐酯或聚丙氨酸基藥物載體材料納米粒子的制備步驟中，靶向藥物載體材料的醇溶液∶藥物水溶液為1∶1～30，v/v。
本發(fā)明的效果用于靜脈注射靶向緩釋治療肝臟疾病，肝靶向納米粒子溶液對肝臟有很好的靶向能力，藥物肝臟富集率達(dá)75％，緩釋給藥可達(dá)15天以上；靶向物質(zhì)是具有明確肝靶向性的小分子化合物，對人體沒有副作用。靶向材料具有良好的血液相容性，高效率的實(shí)現(xiàn)肝臟疾病的靶向緩釋治療，同時具有高的肝靶向性和緩釋給藥的功能，提高治療效果和生存質(zhì)量，降低了治療成本。


圖1、納米肝靶向生物降解藥物載體材料制備過程示意2、納米粒子在大鼠體內(nèi)的分布3、修飾甘草次酸的殼聚糖納米粒子包封5-氟脲嘧啶體外釋放曲線圖附圖標(biāo)記說明圖2A殼聚糖納米粒子 30 min檢測 腎臟代謝肝區(qū)檢測不到B甘草次酸修飾殼聚糖納米粒子 30 min檢測 雙腎14％肝臟積聚≥76％具體實(shí)施方式
為了進(jìn)一步了解本發(fā)明的內(nèi)容、特點(diǎn)及功效，并配合附圖1、2、3詳細(xì)說明如下實(shí)施例1 修飾甘草次酸的殼聚糖納米肝靶向生物降解藥物載體材料的制備1.1甘草次酸修飾殼聚糖的制備稱取2g甘草次酸和1g EDC置于200mL燒杯內(nèi)，向瓶內(nèi)加入70mL DMF，磁力攪拌溶解。
在將500mL三口瓶內(nèi)加入5g殼聚糖，加入100mL蒸餾水磁力攪拌至溶解。然后將上邊配制好的甘草次酸溶液倒入殼聚糖溶液中，繼續(xù)攪拌，加熱至60℃反應(yīng)6小時。將反應(yīng)液冷卻至40℃，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至50mL左右。將濃縮液傾入盛有800mL乙醇的燒杯中沉淀，過濾，沉淀分別用50mL乙醇、50mL乙醚洗滌，真空干燥(40℃，5mmHg)24小時，產(chǎn)物含甘草次酸5％。
1.2甘草次酸修飾殼聚糖水溶液和離子交聯(lián)劑水溶液的配制將1.0g修飾甘草次酸的殼聚糖溶解在50mL二次蒸餾水中，備用。將0.3g離子交聯(lián)劑(聚蘋果酸鈉，聚蘋果酸，三聚磷酸鈉)溶解在30mL二次蒸餾水中，備用。
1.3甘草次酸修飾殼聚糖肝靶向納米粒子溶液的制備1.3.1于10mL修飾甘草次酸的殼聚糖溶液中加入2mL聚蘋果酸鈉溶液，超聲振蕩30min，得到含靶向基團(tuán)的納米粒子溶液。
1.3.2于10mL修飾甘草次酸的殼聚糖溶液中加入2mL聚蘋果酸溶液，超聲振蕩30min，得到含靶向基團(tuán)的納米粒子溶液。
1.3.3于10mL修飾甘草次酸的殼聚糖溶液中加入2mL三聚磷酸鈉溶液，超聲振蕩30min，得到含靶向基團(tuán)的納米粒子溶液。
實(shí)施例2修飾甘草次酸的聚賴氨酸納米肝靶向生物降解藥物載體材料的制備2.1甘草次酸修飾聚賴氨酸的制備稱取2g甘草次酸和1gEDC置于200mL燒杯內(nèi)，向瓶內(nèi)加入70mLDMF，磁力攪拌溶解。
在將500mL三口瓶內(nèi)加入5g聚賴氨酸，加入100mL蒸餾水磁力攪拌至溶解。然后將上邊配制好的甘草次酸溶液倒入聚賴氨酸溶液中，繼續(xù)攪拌，加熱至60℃反應(yīng)6小時。將反應(yīng)液冷卻至40℃，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至50mL左右。將濃縮液傾入盛有800mL乙醇的燒杯中沉淀，過濾，沉淀分別用50mL乙醇、50mL乙醚洗滌，真空干燥(40℃，5mmHg)24小時，產(chǎn)物含甘草次酸8％。
2.2甘草次酸修飾聚賴氨酸水溶液和離子交聯(lián)劑水溶液的配制將1.0g修飾甘草次酸的聚賴氨酸溶解在50mL二次蒸餾水中，備用。將0.3g離子交聯(lián)劑(聚蘋果酸鈉，聚蘋果酸，三聚磷酸鈉)溶解在30mL二次蒸餾水中，備用。
2.3甘草次酸修飾聚賴氨酸肝靶向納米粒子溶液的制備2.3.1于10mL修飾甘草次酸的聚賴氨酸溶液中加入2mL聚蘋果酸鈉溶液，超聲振蕩30min，得到含靶向基團(tuán)的納米粒子溶液。
2.3.2于10mL修飾甘草次酸的聚賴氨酸溶液中加入2mL聚蘋果酸溶液，超聲振蕩30min，得到含靶向基團(tuán)的納米粒子溶液。
2.3.3于10mL修飾甘草次酸的聚賴氨酸溶液中加入2mL三聚磷酸鈉溶液，超聲振蕩30min，得到含靶向基團(tuán)的納米粒子溶液。
實(shí)施例3修飾甘草次酸的瓊脂納米肝靶向生物降解藥物載體材料的制備3.1甘草次酸修飾瓊脂的制備稱取2g甘草次酸和1gEDC置于200mL燒杯內(nèi)，向瓶內(nèi)加入70mLDMF，磁力攪拌溶解。
在500mL三口瓶內(nèi)加入7g瓊脂，加入100mLDMF磁力攪拌至溶解。然后將上邊配制好的甘草次酸溶液倒入瓊脂溶液中，繼續(xù)攪拌，加熱至60℃反應(yīng)6小時。將反應(yīng)液冷卻至40℃，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至50mL左右。將濃縮液傾入盛有800mL乙醇的燒杯中沉淀，過濾，沉淀分別用50mL乙醇、50mL乙醚洗滌，真空干燥(40℃，5mmHg)24小時，產(chǎn)物含甘草次酸4％。
3.2甘草次酸修飾瓊脂肝靶向納米粒子溶液的制備向含5％靶向藥物載體材料的DMF溶液中滴加含治療肝臟疾病的藥物水溶液，超聲振蕩，得到分散均勻的納米肝靶向生物降解藥物載體材料。
實(shí)施例4由N-羧酸酐制備納米肝靶向生物降解藥物載體材料4.1將2mmol甘草次酸溶于四氫呋喃中，冷卻至-10℃，加入DCC2.54g(12.3mmol)，攪拌30min后，加入SuOH1.42g(12.3mmol)，繼續(xù)攪拌3小時，在室溫下攪拌8～18h，將反應(yīng)混合物濾去二環(huán)己基脲后所得溶液傾入無水乙醚中，收集白色固體，用少量無水乙醇洗滌，再用無水乙醚洗滌，真空干燥，得活性酯。
4.2將活性酯的DMF溶液滴加到70mL的乙二胺的溶液中，于30～60℃反應(yīng)5～10h。將膽酸和甘草次酸的衍生物傾入水中(甘草酸的衍生物傾入四氫呋喃中)，在3℃放置24h。將沉淀過濾，用少量乙醇，水，乙醚洗滌，干燥。將所得沉淀在DMF中溶解，用乙醚沉淀，真空干燥，得到胺基修飾的肝靶向化合物。
4.3胺基修飾的肝靶向化合物引發(fā)谷氨酸芐酯-N-羧酸酐聚合制備靶向材料稱取谷氨酸芐酯-N-羧酸酐100mmol、胺基修飾的肝靶向化合物1mmol于反應(yīng)瓶中，加80～100mL DMF，然后在氮?dú)獗Ｗo(hù)下室溫?cái)嚢璺磻?yīng)48h。反應(yīng)液在劇烈攪拌下滴加到過量的無水乙醚中沉淀。沉淀過濾，用乙醚洗滌，干燥得白色固體產(chǎn)物，作為肝靶向藥物載體材料。
4.4聚谷氨酸芐酯藥物載體材料納米粒子的制備于10mL聚谷氨酸芐酯醇溶液中滴加入2mL含鹽酸阿糖胸苷的水溶液，超聲振蕩30min，得到含靶向基團(tuán)的納米粒子溶液。
實(shí)施例5修飾甘草次酸的殼聚糖納米肝靶向生物降解藥物載體材料的大鼠體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)利用放射性元素標(biāo)記結(jié)合SPECT技術(shù)檢測納米粒子在動物體內(nèi)的分布是一種快速準(zhǔn)確定量的分析檢測方法。我們采用這種方法研究了修飾甘草次酸的殼聚糖納米肝靶向生物降解藥物載體材料在大鼠體內(nèi)的分布。
5.1納米粒子的配制殼聚糖和修飾甘草次酸的殼聚糖的納米粒子溶液配制同1-3。
5.2納米粒子的cDTPA偶聯(lián)分別取4mL 0.1g/L殼聚糖(CTS)和修飾甘草次酸的殼聚糖(GA-CTS)納米粒子溶液與80mg二乙烯三胺五乙酸二環(huán)酐(cDTPA)混合，在室溫下反應(yīng)1 h完成偶聯(lián)?；旌弦河肧ephadex G75常規(guī)凝膠色譜分離，去除游離的二乙烯三胺五乙酸(DTPA)，淋洗液為蒸餾水，紫外檢測甘草次酸基團(tuán)的含量，得到CTS-DTPA和GA-CTS-DTPA的納米粒子溶液。
5.3納米粒子的標(biāo)記取上述化合物(CTS-DTPA和GA-CTS-DTPA，1mg/1mL)的納米粒子溶液1mL，亞甲基二磷酸錫鹽(MDP-Sn)試劑盒加入1mL生理鹽水，每個樣品取100μL，分別加入1mCi99mTc和50μL MDP溶液反應(yīng)10min。標(biāo)記好的溶液用生理鹽水稀釋到3mL供小鼠體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)使用。
5.4大鼠動物體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)結(jié)果，見圖2。
實(shí)施例6藥物體外釋放特征6.1載5-氟脲嘧啶納米粒子的制備室溫磁力攪拌下滴加2.5mg/mL三聚磷酸鈉溶液8mL于含不同濃度5-氟脲嘧啶的5mg/mL修飾甘草次酸的殼聚糖溶液20mL中，保持超聲振蕩10min。
6.2納米粒載5-氟脲嘧啶率和包封率的計(jì)算于4℃條件下，16000r/min高速離心分離載5-氟脲嘧啶納米粒30min，在紫外可見分光光度計(jì)上于波長266nm處檢測上清液中5-氟脲嘧啶含量。納米粒子冷凍干燥稱重后置于真空干燥器中低溫保存?zhèn)溆谩＜{米粒載5-氟脲嘧啶率(LC)和包封率(EE)的計(jì)算公式分別如式(1)，式(2)所示 修飾甘草次酸的殼聚糖納米粒子載5-氟脲嘧啶率(LC)達(dá)37％，包封率(EE)達(dá)82％。
6.3納米粒子體外控釋5-氟脲嘧啶性能4mL載5-氟脲嘧啶納米粒子懸浮液置于透析袋中，透析袋放于20mL PBS(pH＝7.4)溶液中，37℃保溫磁攪拌。每隔一定時間間隔取2mLPBS溶液分析其中5-氟脲嘧啶含量，補(bǔ)加2mL新鮮PBS溶液。
制備的載5-氟脲嘧啶納米粒子無明顯突釋，體外緩釋可達(dá)15天以上，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果見附圖3。
權(quán)利要求
1.一種納米肝靶向生物降解藥物載體材料的制備方法，其特征在于將肝靶向化合物修飾到可降解并具有生物相容性的聚合物上，通過離子交聯(lián)或超聲乳化方法制備納米肝靶向生物降解藥物載體材料。
2.按照權(quán)利要求1所述的納米肝靶向生物降解藥物載體材料的制備方法，其特征在于所述的肝靶向化合物是甘草次酸、甘草酸、膽酸中的任意一種，靶向基團(tuán)的取代度為0.5-1mmol/g。
3.按照權(quán)利要求1所述的納米肝靶向生物降解藥物載體材料的制備方法，其特征在于所述的聚合物是殼聚糖、聚賴氨酸、葡聚糖、瓊脂、聚谷氨酸芐酯、聚丙氨酸中的任意一種。
4.按照權(quán)利要求3所述的納米肝靶向生物降解藥物載體材料的制備方法，其特征在于所述的殼聚糖、瓊脂、葡聚糖的分子量為6000-20000，聚谷氨酸芐酯、聚丙氨酸、聚賴氨酸的分子量為2000～40000。
5.按照權(quán)利要求1所述的納米肝靶向生物降解藥物載體材料的制備方法，其特征在于所述的離子交聯(lián)方法中的離子交聯(lián)劑為聚蘋果酸鈉，聚蘋果酸或三聚磷酸鈉中的任意一種，聚蘋果酸鈉，聚蘋果酸的分子量為2000～6000。
6.按照權(quán)利要求1所述的納米肝靶向生物降解藥物載體材料的制備方法，其特征在于肝靶向化合物修飾到可降解并具有生物相容性的聚合物的制備，包括下述制備步驟6.1肝靶向化合物修飾殼聚糖的制備在2～10％的殼聚糖水溶液中，加入肝靶向化合物和EDC(1-乙基-3-(3-二甲氨基異丙基)碳二亞胺)的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)的溶液，在60～100℃反應(yīng)4～6小時，冷卻后，濃縮反應(yīng)液，將濃縮液傾入乙醇中沉淀，過濾，將沉淀干燥，作為肝靶向藥物載體材料；6.2肝靶向化合物修飾聚賴氨酸的制備在2～10％的聚賴氨酸水溶液中，加入肝靶向化合物和EDC的DMF的溶液，在60～100℃反應(yīng)4～6小時，冷卻后，濃縮反應(yīng)液，將濃縮液傾入乙醇中沉淀，過濾，將沉淀干燥，作為肝靶向藥物載體材料；6.3肝靶向化合物修飾瓊脂或葡聚糖的制備在2～10％的瓊脂或葡聚糖的DMF水溶液中，加入肝靶向化合物和4-二甲氨基吡啶(DMAP)的DMF的溶液，加熱至40～80℃反應(yīng)4～6小時，冷卻后，濃縮反應(yīng)液，將濃縮液傾入乙醇中沉淀，過濾，將沉淀干燥，作為肝靶向藥物載體材料；6.4肝靶向化合物修飾聚谷氨酸芐酯或聚丙氨酸的制備將肝靶向化合物溶于四氫呋喃(THF)中，冷卻，加入N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)，攪拌后加入SuOH，在室溫下攪拌反應(yīng)，將反應(yīng)混合物濾去二環(huán)己基脲后所得溶液傾入無水乙醚中，收集白色固體，用少量無水乙醇洗滌，再用無水乙醚洗滌，真空干燥，得活性酯；將活性酯的DMF溶液滴加到大過量的二元胺(乙二胺、己二胺的任意一種)的溶液(乙二胺用DMF做溶劑，己二胺用二甲基亞砜做溶劑)中反應(yīng)，將膽酸、甘草次酸的衍生物傾入水中(甘草酸的衍生物傾入四氫呋喃中)，在3℃放置。將沉淀過濾，用少量乙醇、水、乙醚洗滌，干燥，將所得沉淀在DMF中溶解，用乙醚沉淀，真空干燥，得到胺基修飾的肝靶向化合物；稱取N-羧酸酐(谷氨酸芐酯-N-羧酸酐、丙氨酸-N-羧酸酐)、胺基修飾的肝靶向化合物于反應(yīng)瓶中，加DMF，然后在氮?dú)獗Ｗo(hù)下室溫?cái)嚢璺磻?yīng)，反應(yīng)液在劇烈攪拌下滴加到無水乙醚中沉淀，沉淀過濾，用乙醚洗滌，干燥得白色固體產(chǎn)物，作為靶向藥物載體材料。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述肝靶向化合物修飾到可降解并具有生物相容性的聚合物的制備，其特征在于物料配比為在6.1肝靶向化合物修飾殼聚糖的制備權(quán)利要求中，殼聚糖∶肝靶向化合物∶EDC為1∶0.2～0.4∶0.2～0.4，mol/mol；在6.2肝靶向化合物修飾聚賴氨酸的制備權(quán)利要求中，聚賴氨酸∶肝靶向化合物∶EDC為1∶0.1～0.7∶0.2～0.4，mol/mol；在6.3肝靶向化合物修飾瓊脂或葡聚糖的制備權(quán)利要求中，瓊脂(或葡聚糖)∶肝靶向化合物∶DMAP為1∶0.5～2.0∶0.2～0.4，mol/mol；在6.4肝靶向化合物修飾聚谷氨酸芐酯或聚丙氨酸的制備權(quán)利要求中，肝靶向化合物∶DCC∶SuOH為1∶1.0～1.5∶1.0～1.5mol∶mol；活性酯∶二元胺為1∶30～100，mol∶mol；N-羧酸酐∶胺基修飾的肝靶向化合物為50～300∶1mol∶mol。
8.按照權(quán)利要求1所述的納米肝靶向生物降解藥物載體材料的制備方法，其特征在于肝靶向藥物載體材料納米粒子的制備，包括下述制備步驟8.1殼聚糖或聚賴氨酸基藥物載體材料納米粒子的制備將5％肝靶向藥物載體材料的水溶液滴加到含治療肝臟疾病的藥物和離子交聯(lián)劑是三聚磷酸鈉、聚蘋果酸鈉、聚蘋果酸中的任意一種pH值為7.4的磷酸緩沖液中，超聲振蕩，得到分散均勻的納米肝靶向生物降解藥物載體材料；8.2瓊脂或葡聚糖基藥物載體材料納米粒子的制備向含5％肝靶向藥物載體材料的DMF溶液中滴加含治療肝臟疾病的藥物水溶液，超聲振蕩，得到分散均勻的納米肝靶向生物降解藥物載體材料；8.3聚谷氨酸芐酯或聚丙氨酸基藥物載體材料納米粒子的制備向含5％肝靶向藥物載體材料的乙醇、異丙醇、己醇中任意一種醇溶液中滴加含治療肝臟疾病的藥物水溶液，超聲振蕩，得到分散均勻的納米肝靶向生物降解藥物載體材料。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述肝靶向藥物載體材料納米粒子的制備方法，其特征在于物料配比為在8.1殼聚糖或聚賴氨酸基藥物載體材料納米粒子的制備權(quán)利要求中，殼聚糖∶離子交聯(lián)劑為100∶1～7，m/m；在8.2瓊脂或葡聚糖基藥物載體材料納米粒子的制備權(quán)利要求中，瓊脂(或葡聚糖)DMF溶液∶藥物水溶液為1∶1～10，v/v；在8.3聚谷氨酸芐酯或聚丙氨酸基藥物載體材料納米粒子的制備權(quán)利要求中，靶向藥物載體材料的醇溶液∶藥物水溶液為1∶1～30，v/v。
全文摘要
一種納米肝靶向生物降解藥物載體材料的制備方法發(fā)明屬于生物醫(yī)用材料領(lǐng)域，將肝靶向化合物修飾到可降解并具有生物相容性的聚合物(殼聚糖，聚賴氨酸，葡聚糖，瓊脂，聚谷氨酸芐酯，聚丙氨酸)，通過離子交聯(lián)或超聲乳化方法制備的納米肝靶向生物降解藥物載體材料。肝靶向納米粒子溶液對肝臟有很好的靶向能力，藥物肝臟富集率達(dá)75％，緩釋給藥可達(dá)15天以上；靶向物質(zhì)是具有明確肝靶向性的小分子化合物，對人體沒有副作用；靶向材料具有良好的血液相容性，高效率的實(shí)現(xiàn)肝臟疾病的靶向緩釋治療；同時具有高的肝靶向性和緩釋給藥的功能，提高治療效果和生存質(zhì)量，降低了治療成本。
文檔編號A61K47/48GK1743008SQ20051001517
公開日2006年3月8日 申請日期2005年9月23日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月23日
發(fā)明者袁直, 查瑞濤, 杜田, 趙建新 申請人:南開大學(xué)