專利名稱：制作用于肝膽性疾病和藥物研發(fā)的動(dòng)物模型的方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明為實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)中用于基礎(chǔ)研究和實(shí)驗(yàn)藥理學(xué)以及藥物研發(fā)的一種新型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的制作方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
膽道疾病以發(fā)病率高，并發(fā)癥多，治療復(fù)雜而困擾著人類健康。肝膽疾病其發(fā)生發(fā)展過程中病生理變化復(fù)雜，是其廣大醫(yī)務(wù)工作者十分關(guān)注的問題，認(rèn)識(shí)疾病的發(fā)病機(jī)理和選擇最佳的治療手段，最關(guān)鍵的是利用相似的動(dòng)物模型，進(jìn)行病生理研究和藥效學(xué)研究，以達(dá)到治愈其疾病的目的。目前臨床上膽道疾病發(fā)病率高，并發(fā)癥也高，治療復(fù)雜，而探討其基礎(chǔ)研究時(shí)，現(xiàn)有的動(dòng)物模型有很大的局限性，常采用大批量的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物靠不同時(shí)點(diǎn)成批活殺、收集標(biāo)本的方法，工作量大，費(fèi)用高，且組間動(dòng)物差異難以控制，又不能動(dòng)態(tài)的反映動(dòng)物體內(nèi)的代謝變化，而失去實(shí)驗(yàn)的意義。
綜合上述現(xiàn)存的問題，本發(fā)明人結(jié)合多年來對肝膽疾病綜合指標(biāo)的研究進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的改進(jìn)探索。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是建立一種在體的能動(dòng)態(tài)反映肝膽代謝指標(biāo)的活體動(dòng)物模型，以利于肝膽疾病的病生理研究和肝膽疾病的治療藥物研發(fā)的動(dòng)物模型，以達(dá)到適合于藥理學(xué)、藥效學(xué)觀察的新型膽汁動(dòng)態(tài)觀測的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，提供一種制作用于肝膽性疾病和藥物研發(fā)的動(dòng)物模型的方法及模型應(yīng)用。
本發(fā)明是制作用于肝膽性疾病研究的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的方法及應(yīng)用，其方法包括，選用實(shí)驗(yàn)用鼠、兔、狗、猴，采取常規(guī)的外科手術(shù)方法，采用醫(yī)用高分子材料制成的不同規(guī)格的引流導(dǎo)管，行腹部正中切口，將引流導(dǎo)管的輸出端1，插入膽總管并固定，經(jīng)皮下繞行經(jīng)過動(dòng)物的頸后部再回到腹部的另一側(cè)，輸入端2插入近端空腸，縫合固定于空腸腸壁，形成“背負(fù)式”膽腸循環(huán)引流通道，引流導(dǎo)管的中部形成開放式插接口，其插接口3由相同直徑的金屬管相連，置留在動(dòng)物的頸后部，而形成一種活體置留循環(huán)引流導(dǎo)管的可動(dòng)態(tài)觀察試驗(yàn)指標(biāo)的動(dòng)物模型。
本發(fā)明的引流導(dǎo)管為采用醫(yī)用硅橡膠、醫(yī)用高分子材料制成的不同規(guī)格的引流導(dǎo)管，并配置具有與引流導(dǎo)管內(nèi)徑相同的外徑的金屬管或金屬棒4，連接插接口3。
本發(fā)明方法提供的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型適用于肝膽疾病基礎(chǔ)性研究，還適用于肝膽性疾病的新藥研發(fā)及試驗(yàn)藥理學(xué)、藥效學(xué)的多項(xiàng)指標(biāo)的研發(fā)的實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物模型的應(yīng)用。
該實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的優(yōu)點(diǎn)在于①該模型動(dòng)物不影響膽汁肝腸循環(huán)，并保持原有肝膽正常生理功能和機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。
②便于長期動(dòng)態(tài)觀察和隨機(jī)收取膽汁。
③在模型基礎(chǔ)上，通過在體外連接引流導(dǎo)管的簡單處理可隨機(jī)建立膽道感染、狹窄、梗阻以及梗阻后再通等多種肝膽疾病實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。
④適合于肝膽性疾病的新藥研發(fā)及試驗(yàn)藥理學(xué)、藥效學(xué)的多項(xiàng)指標(biāo)的研發(fā)。

圖1是動(dòng)物膽道插管和空腸插管局部解剖示意圖；圖2是動(dòng)物在體經(jīng)導(dǎo)管膽腸內(nèi)引流術(shù)示意圖；圖3是動(dòng)物頸背部導(dǎo)管插接口示意圖。
圖中所示1輸出端；2輸入端；3插接口；4金屬管或金屬棒。
具體實(shí)施方式實(shí)施例1本發(fā)明實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的具體制作方法一種適用于肝膽性疾病研究的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的制作方法，選用實(shí)驗(yàn)用鼠、兔、狗、猴，采取常規(guī)的外科手術(shù)方法，采用醫(yī)用高分子材料制成的不同規(guī)格的引流導(dǎo)管，行腹部正中切口，將引流導(dǎo)管的輸出端1，插入膽總管并固定，經(jīng)皮下繞行經(jīng)過動(dòng)物的頸后部再回到腹部的另一側(cè)，輸入端2插入近端空腸，縫合固定于空腸腸壁，形成“背負(fù)式”膽腸循環(huán)引流通道，引流導(dǎo)管的中部形成開放式插接口3，置留在動(dòng)物的體外頸后部，其插接口3由具有與引流導(dǎo)管內(nèi)徑相同的外徑的金屬管或金屬棒4相連，形成體外插接口3，而形成一種活體置留循環(huán)引流導(dǎo)管的可動(dòng)態(tài)觀察試驗(yàn)指標(biāo)的動(dòng)物模型。
本發(fā)明的引流導(dǎo)管為采用醫(yī)用硅橡膠、醫(yī)用高分子材料制成的不同規(guī)格的引流導(dǎo)管，并配置具有與引流導(dǎo)管內(nèi)徑相同的外徑的金屬管或金屬棒4，連接插接口3，插接口留置于動(dòng)物體外。
實(shí)施例2如圖1-3所示，以大鼠為例進(jìn)一步說明本發(fā)明模型的建立[1]Wistar大鼠稱重后以10％水和氯醛(1.5ml/100g體重)腹腔注射麻醉。
(2)皮下隧道的建立頸部背側(cè)剃毛，碘伏消毒，鋪無菌巾，嚴(yán)格無菌操作下用刀片戳空至皮下(兩孔，間距1.0cm)，用直徑0.8mm的導(dǎo)絲經(jīng)頸背側(cè)孔沿皮下竇道至腹側(cè)劍突下，穿出皮膚。將引流導(dǎo)管(外徑0.8mm，內(nèi)徑0.6mm)套在導(dǎo)絲上，在導(dǎo)絲的牽引下經(jīng)皮下竇道分別將導(dǎo)管輸出端1、輸入端2引至腹部切口處。
(3)經(jīng)體外膽腸內(nèi)引流術(shù)將大鼠仰臥固定于手術(shù)臺(tái)，腹部剃毛，碘伏消毒，鋪無菌巾，在無菌操作下行劍突下正中切口，逐層進(jìn)腹。將十二指腸第一段移至切口間，將預(yù)留的導(dǎo)管輸出端1從十二指腸前壁荷包線內(nèi)經(jīng)十二指腸乳頭逆行插至第一肝門膽管內(nèi)，結(jié)扎荷包線。提出近段空腸，于距菜氏韌帶1.5cm處，在腸系膜對側(cè)緣用5-0無損傷縫合線作荷包，腸壁戳空，將硅膠管輸入端2插入空腸遠(yuǎn)端約2.5cm，結(jié)扎荷包固定。近端空腸漿肌層縫合包埋硅膠管約1.0cm。逐層關(guān)腹，將硅膠管埋于皮下，術(shù)畢。即形成符合膽道生理功能的“經(jīng)導(dǎo)管的膽腸內(nèi)引流術(shù)”的動(dòng)物模型；如制作膽道梗阻型動(dòng)物模型，則將插接口3處的金屬管4改為金屬棒，即形成膽道梗阻型動(dòng)物模型。
該實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的優(yōu)點(diǎn)在于⑤模型動(dòng)物不影響膽汁肝腸循環(huán)，并保持原有肝膽正常生理功能和機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。
⑥便于長期動(dòng)態(tài)觀察和隨機(jī)收取膽汁的動(dòng)物模型。
⑦在模型基礎(chǔ)上，通過在體外對導(dǎo)管插接口的簡單處理可隨機(jī)建立膽道感染、狹窄、梗阻以及梗阻后再通等多種肝膽疾病實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。
⑧適合于肝膽性疾病的新藥研發(fā)及試驗(yàn)藥理學(xué)、藥效學(xué)的多項(xiàng)指標(biāo)的研發(fā)。
實(shí)施例3參考附圖再進(jìn)一步說明本發(fā)明的模型，并不局限于本發(fā)明，以實(shí)驗(yàn)家兔為例(1)家兔稱重后以20％氨基甲酸乙脂(1g/kg體重)耳緣靜脈注射麻醉。
(2)皮下隧道的建立頸部背側(cè)剃毛，碘伏消毒，鋪無菌巾，嚴(yán)格無菌操作下用刀片戳空至皮下(兩孔，間距2mm)，用直徑2.0mm的導(dǎo)絲經(jīng)頸背側(cè)孔沿皮下穿隧道至腹側(cè)劍突下，穿出皮膚。將引流導(dǎo)管(外徑2.0mm，內(nèi)徑1.5mm)套在導(dǎo)絲上，在導(dǎo)絲的牽引下穿過皮下竇道，將導(dǎo)管輸出端1、輸入端2引至腹部切口處。
(3)經(jīng)體外膽腸內(nèi)引流術(shù)將兔仰臥固定于手術(shù)臺(tái)，腹部剃毛，碘伏消毒，鋪無菌巾，在無菌操作下行劍突下正中切口，逐層進(jìn)腹。將十二指腸第一段移至切口間，將預(yù)留的導(dǎo)管輸出端1從十二指腸前壁荷包線內(nèi)經(jīng)十二指腸乳頭逆行插至第一肝門膽管內(nèi)，結(jié)扎荷包線。提出近段空腸，于距菜氏韌帶15cm處，在腸系膜對側(cè)緣用3-0無損傷縫合線作荷包，腸壁戳空，將硅膠管另一端插入空腸遠(yuǎn)端約5cm，結(jié)扎荷包固定。近端空腸漿肌層縫合包埋硅膠管約2cm。逐層關(guān)腹，術(shù)畢。
實(shí)施例4、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的具體應(yīng)用標(biāo)本收集術(shù)后1，3，7，14天各時(shí)相點(diǎn)，每日上午經(jīng)兔頸后導(dǎo)管插接口3無菌收取膽汁標(biāo)本2ml，立刻置于-70℃超低溫冰箱凍存待測。手術(shù)中抽取家兔膽管膽汁2ml(-70℃超低溫冰箱凍存待測)作為正常對照。
標(biāo)本檢測及方法
(1)總膽紅素(TB)、游離膽紅素(UCB)重氮試劑法測定[3](南京建成生物工程研究所)，并計(jì)算出游離膽紅素/總膽紅素的比值。
(2)總膽汁酸(TBA)酶比色法測定[4](南京建成生物工程研究所)。
(3)鈣離子(Ca2+)甲基麝香草酚藍(lán)比色法測定[5](由南京建成生物工程研究所)。
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行配對t檢驗(yàn)。用Excel軟件繪圖。
結(jié)果模型組膽汁中TB、UCB、UCB/TB的動(dòng)態(tài)變化情況(見表1-1)。模型組膽汁中TB、UCB、UCB/TB術(shù)后各時(shí)相雖然較正常對照略有波動(dòng)(見圖1-1)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
表1-1模型組膽汁TB、UCB、UCB/TB動(dòng)態(tài)變化(x±s)
注各組比較均無顯著性差異(P＞0.05)
權(quán)利要求
1.制作用于肝膽性疾病和藥物研發(fā)的動(dòng)物模型的方法，其特征在于該方法包括，選用實(shí)驗(yàn)用鼠、兔、狗、或猴，采取常規(guī)的外科手術(shù)方法，采用醫(yī)用高分子材料制成的引流導(dǎo)管，行腹部正中切口，將引流導(dǎo)管的一端，插入膽總管并固定，經(jīng)皮下繞行經(jīng)過動(dòng)物的頸后部再回到腹部的另一側(cè)，插入近端空腸，縫合固定于空腸腸壁，形成“背負(fù)式”膽腸循環(huán)引流通道，引流導(dǎo)管的中部形成開放式插接口，其插接口由金屬管相連，置留在動(dòng)物的頸后部，而形成一種活體置留循環(huán)引流導(dǎo)管的可動(dòng)態(tài)觀察試驗(yàn)指標(biāo)的動(dòng)物模型。
2.根據(jù)權(quán)力要求1所述的制作動(dòng)物模型的方法，其特征在于，引流導(dǎo)管為采用醫(yī)用硅橡膠、醫(yī)用高分子材料制成的引流導(dǎo)管，并配置具有與導(dǎo)管內(nèi)徑相同的外徑的金屬管或金屬棒，連接插接口。
3.根據(jù)權(quán)力要求1所述的方法制作的動(dòng)物模型的應(yīng)用，其特征在于，該模型適用于肝膽疾病基礎(chǔ)性研究，還適用于肝膽性疾病的新藥研發(fā)及試驗(yàn)藥理學(xué)、藥效學(xué)的多項(xiàng)指標(biāo)的研發(fā)的實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物模型的應(yīng)用。
全文摘要
制作適合臨床醫(yī)學(xué)、基礎(chǔ)病生理研究、在體的能動(dòng)態(tài)反映肝膽代謝指標(biāo)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的方法及其應(yīng)用。選用實(shí)驗(yàn)用鼠、兔、狗、猴，手術(shù)方法行腹部正中切口，將引流導(dǎo)管的一端，插入膽總管并固定，經(jīng)皮下繞行經(jīng)過動(dòng)物的頸后部再回到腹部的另一側(cè)，插入近端空腸，縫合固定于空腸腸壁，形成“背負(fù)式”膽腸循環(huán)引流通道，引流導(dǎo)管的中部形成開放式插接口，其插接口由金屬管或棒相連，置留在動(dòng)物的頸后部，而形成活體置留循環(huán)引流導(dǎo)管的可動(dòng)態(tài)觀察試驗(yàn)指標(biāo)的動(dòng)物模型。該模型適用于肝膽疾病基礎(chǔ)性研究，還適用于肝膽性疾病的新藥研發(fā)及試驗(yàn)藥理學(xué)、藥效學(xué)的多項(xiàng)指標(biāo)的研發(fā)的實(shí)驗(yàn)性應(yīng)用。該模型動(dòng)物不影響膽汁肝腸循環(huán)，便于長期動(dòng)態(tài)觀察和隨機(jī)收取膽汁。
文檔編號(hào)A61K49/00GK1733315SQ20051001497
公開日2006年2月15日 申請日期2005年9月5日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月5日
發(fā)明者崔乃強(qiáng), 孫百軍, 李東華 申請人:崔乃強(qiáng), 孫百軍, 李東華