專利名稱：一種藥物組合物在制備治療和預(yù)防高原心肌低氧癥藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種藥物組合物在制備治療和預(yù)防高原心肌低氧癥藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
高原心肌低氧癥(High Altitude Myocardial Hypoxidosis，HAMH)是人體在高原習(xí)服過程中心電圖出現(xiàn)以心肌缺氧缺血性改變?yōu)橹饕卣鞯陌榛虿话槠渌?xí)服不良表現(xiàn)的高原特發(fā)病。在對海拔4500～5072m地區(qū)人群心電圖檢測的研究中發(fā)現(xiàn)，平原居住的人進(jìn)入高海拔地區(qū)后，根據(jù)體力負(fù)荷強(qiáng)度(氧耗)的不同，HAMH的患病率為10.00～30％。嚴(yán)重影響其生產(chǎn)和生活以及高原習(xí)服，并且其中少部分人可發(fā)展成為高原性心臟病。對之的防治是一亟待解決的重大課題。
目前，尚未發(fā)現(xiàn)對于HAMH具有很好改善的藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明主要目的在于提供一種藥物組合物在制備預(yù)防和治療高原心肌低氧癥藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的另一目的在于提供了這一藥物組合物預(yù)防和治療高原心肌低氧癥的機(jī)理，以便于更好地幫助和理解。
本發(fā)明藥物組合物按照重量配比如下丹參 48％～97％三七 2％～50％冰片 0.2％～3％優(yōu)選為(以重量百分含量計(jì))丹參 63.0％～94％
三七4.0％～35.0％冰片0.5％～2.0％進(jìn)一步優(yōu)選為(以重量百分含量計(jì))丹參75.2％～90％三七9％～23.5％冰片0.5％～1.3％最佳為(以重量百分含量計(jì))丹參82.87％三七16.21％冰片0.92％上述藥物組合物的生產(chǎn)方法主要是取經(jīng)粉碎的丹參、三七藥材，沸水煮提，濾過，合并濾液，并將濾液適當(dāng)濃縮；在濃縮液中加入乙醇進(jìn)行醇沉，靜置，上清液回收乙醇，濃縮成浸膏；將所得浸膏與冰片及輔料混和均勻后，制成制劑。
本發(fā)明可以制成任意藥劑學(xué)上可以接受的制劑，其中的滴丸劑型可以按照下述方法進(jìn)行。
具體步驟如下按上述比例稱取經(jīng)粉碎的丹參、三七藥材，加熱提取2～4次，提取溫度為60～100℃，每次加水量為藥材量的4～8倍，煮提液濾過，合并濾液，濾液濃縮至藥液體積與藥材重量比為1升∶0.7～1.3千克；在濃縮液中加入95％乙醇，使醇濃度為50～85％，靜置4～24小時(shí)，上清液濾過，濾液回收乙醇，濃縮為相對密度為1.15～1.45的浸膏；將所得浸膏和上述比例冰片與輔料混和均勻后，制成制劑。
本發(fā)明的藥物制劑可以是任何一種藥劑學(xué)上所說的劑型，其中優(yōu)選劑型為滴丸劑，其形狀為紅棕-棕黑色圓珠狀，大小均勻。
本發(fā)明的藥物的滴丸劑制備方法主要為將上述所得浸膏與冰片及輔料混和均勻后，加熱化料，移入滴丸機(jī)的滴罐，藥液滴至低溫液體石蠟中，除去液體石蠟，選丸。
其中輔料為聚乙二醇-6000，其凝點(diǎn)53～58℃，加入量為浸膏與冰片重量的2～6倍；化料溫度為60～100℃；液體石蠟的溫度為0～10℃(最佳為5～10℃)；丸重為5～50mg/粒，直徑1.95～4.29mm。
下面通過該藥物組合物的滴丸劑(以下稱為“復(fù)方丹參滴丸，DSP”)型對于進(jìn)入高海拔地區(qū)人群的影響，來說明其具有的預(yù)防和治療高原心肌低氧癥的有益效果；并通過其對高原低氧多器官組織病理改變的影響，來進(jìn)一步探討其機(jī)理。
復(fù)方丹參滴丸對于高海拔地區(qū)人群的影響材料與方法1、海拔青藏線格拉段工程施工沿線，海拔4700～5072m，大氣壓為56.40～53.28Kpa，氧分壓為12.03～11.16Kpa，平均海拔500m。
2、對象按規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)健康體檢(分別在平原和海拔2800m基地兩次體檢包括心電圖均正常者)后進(jìn)駐現(xiàn)場6個(gè)月內(nèi)的同期施工人員617人，均為男性。排除了心肺疾病、血壓異常史等。依項(xiàng)目部及工種單位序號采取抽簽法選取口服DSP組(服藥組)186人和平行對照組431人。兩組一般情況基線值具有良好的齊同性(表1)。
表1 服藥組和對照組一般情況均衡性檢驗(yàn)※

※海拔、進(jìn)入高原季節(jié)、高原暴露時(shí)間、勞動(dòng)強(qiáng)度及生活條件兩組相同3、方法 服藥服藥組于進(jìn)入現(xiàn)場當(dāng)日開始口服DSP(由天津天士力制藥股份有限公司提供，按照實(shí)施例1所述方法進(jìn)行制備)每次10粒，每日3次到受試結(jié)束；檢測受試人員進(jìn)入現(xiàn)場后分別于1W、2W、1M、3M、6M各期兩組同步檢測復(fù)查。心電圖采用PHILIPSTage Writer 300pi檢測；肘部體表血壓采用臺式水銀柱血壓儀測量；血氧飽和度(SpO2)采用NPB-40儀檢測，全部由專機(jī)專人操作；血清H2S濃度的測定血清中H2S的濃度采用敏感硫電極法測定；HAMH診斷標(biāo)準(zhǔn)符合下列4項(xiàng)中的2項(xiàng)以上①在R波占優(yōu)勢的導(dǎo)聯(lián)上，出現(xiàn)ST段水平型或下垂壓≥0.1mv，②在R波占優(yōu)勢的導(dǎo)聯(lián)上，T波倒置或雙向，③T波兩肢對稱型波型變窄、高尖，④心電圖動(dòng)態(tài)變化。同時(shí)能除外①已明確或疑及慢性高原性心臟病(HACC)者，②上述ST-T的改變主要在右心導(dǎo)聯(lián)上者，③有血脂增高，可疑冠心病，或由于血液電解質(zhì)紊亂導(dǎo)致ST-T的改變者。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)雄性Wistar大鼠14只，體重(200～250)g，由海拔2260m城市動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心運(yùn)至海拔5000m現(xiàn)場，隨機(jī)分為兩組，DSP干預(yù)組7只(另7只為對照組)，DSP以350mg/kg溶于1ml生理鹽水灌胃，每日1次止受試結(jié)束。飼養(yǎng)20天后全部處死，取左室游離壁心肌1mm3置于戊二醛二甲砷酸鈉乳液(PH7.4)中，1％鋨酸固定，脫水環(huán)氧樹脂包埋，超薄切片，在Hitachi-500電鏡下觀察攝片；另取心肌組織甲醛溶液固定后石蠟包埋切片H-E染色作病理常規(guī)形態(tài)學(xué)觀察。
4、統(tǒng)計(jì)處理 采用SPSS of windows 11.0版軟件包完成，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以X±S表示，兩組間采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用卡方檢驗(yàn)，相關(guān)關(guān)系采用偏相關(guān)分析，P＜0.05認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
結(jié)果1、DSP對HAMH心電圖缺血的影響(表2)。
表2 復(fù)方丹參滴丸組與對照組6個(gè)月試驗(yàn)期心電圖缺血率比較●

●受試者在低海拔區(qū)心電圖均為正常者。人數(shù)缺血同一人進(jìn)入海拔5000m地區(qū)1周、2周、1個(gè)月、3個(gè)月及6個(gè)月五個(gè)時(shí)期檢測中，無論那個(gè)時(shí)期及多少次出現(xiàn)心電圖缺血診斷，均只計(jì)1人數(shù)缺血；人次缺血同一人在多次檢測中，每出現(xiàn)一次心電圖缺血診斷，即計(jì)為1人次缺血。
2、DSP對運(yùn)動(dòng)平板心電圖預(yù)測率的干預(yù)作用和對缺血心的恢復(fù)作用結(jié)果顯示DSP對運(yùn)動(dòng)平板篩選出的心肌低氧易感個(gè)體有良好的干預(yù)作用，對已出現(xiàn)心電圖缺血者又有顯著的治療作用(表3)。
表3 復(fù)方丹參滴丸對運(yùn)動(dòng)平板心電圖預(yù)測率的干預(yù)作用和對缺血心電圖的恢復(fù)作用●

●運(yùn)動(dòng)平板陽性人數(shù)為低海拔區(qū)(2800m)試驗(yàn)結(jié)果，高海拔陽性預(yù)測率為運(yùn)動(dòng)平板陽性者在進(jìn)入海拔5000m后的人數(shù)心電圖缺血率；缺血恢復(fù)率在進(jìn)入海拔5000m后已出現(xiàn)心電圖缺血者，服用復(fù)方丹參滴丸而心電圖缺血表現(xiàn)完全恢復(fù)正常者。
3、DSP對血壓、心率、血氧飽和度及血壓-心率乘積的影響 結(jié)果顯示與對比較DSP組的高原高血壓患病率減少5.19％，竇性心動(dòng)過速者減少8.21％，而≥80％SpO2(為該海拔習(xí)服較好者的SpO2均值)者高出7.87％，差異均有顯著或極顯著統(tǒng)計(jì)意義(表4)；DSP組與對照組的血壓-心率乘積分別為10757.38±2351.74與11105.71±2474.49(t＝-2.673，p＝0.008)，提示DSP能減輕心室壁張力減少氧耗。
表4 復(fù)方丹參滴丸組與對照組血壓、心率異常率及血氧飽和度的比較

4、DSP對血清H2S(μmol/l)濃度的影響 DSP組(n＝34)與對照組(n＝65)血清H2S含量分別為51.14±14.99與44.91±13.94(t＝2.058，p＝0.042)，均值提高了13.87％。
5、相關(guān)分析 偏相關(guān)分析結(jié)果顯示組別與心肌缺血、血氧飽和度、心率及H2S有密切相關(guān)性，即心肌缺血率與快心率的減少、血氧飽和度的改善、血清H2S含量的提高均與DSP的干預(yù)密切相關(guān)(表5)。
6、DSP對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物心臟低氧病理形態(tài)學(xué)的影響 心臟病理常規(guī)形態(tài)學(xué)光鏡下對照組心內(nèi)膜和心肌間小血管可見淤血，心肌間隙增寬，并可見小灶狀出血，灶狀心肌纖維水腫，胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒增多，局灶心肌纖維變細(xì)且染色加深，核結(jié)構(gòu)不清(圖1)，服藥組則心肌淤血和小灶狀出血明顯改善(圖2)；心臟超微病理形態(tài)學(xué)電鏡下對照組心肌細(xì)胞水腫，肌原纖維間距增寬，部分肌原纖維壞死崩解呈顆粒狀或溶解消失，可見髓樣小體形成(圖3)，服藥組則心肌變性壞死和肌間血管充血明顯改善(圖4)表5 組別與心電圖缺血、SpO2、HR、sBP、dBP及H2S偏相關(guān)綜合結(jié)果

(Cofficient/D.F/2-tailed significance)討論上述實(shí)驗(yàn)表明1.進(jìn)入海拔5000m高原六個(gè)月高原心肌低氧證心電圖陽性表現(xiàn)率25.99％(人數(shù))-18.76％(人次)，與該海拔以往調(diào)查結(jié)果一致。這一患病率遠(yuǎn)高于久居人群，研究這一問題對保護(hù)初入高海拔勞動(dòng)者意義極為重要。
2.復(fù)方丹參滴丸對初入高原勞動(dòng)者心肌缺血保護(hù)率即相對危險(xiǎn)度降低56.56％(人數(shù))～70.42％(人次)，效果指數(shù)為229.41％(人數(shù))～338.02％(人次)；使運(yùn)動(dòng)平板心電圖預(yù)測中35％預(yù)期發(fā)生心肌缺的人免于發(fā)病；對已發(fā)生心電圖缺血陽性者，服用復(fù)方丹參滴丸后短期內(nèi)恢復(fù)率為48.28％，凈恢復(fù)率為38.94％；提高血氧飽和度與血清H2S含量，降低高原增壓及增率反應(yīng)，明顯降低血壓、心率、血氧飽和度的異常率，提高生理習(xí)服水平；能預(yù)防、改善心肌細(xì)胞的低氧性水腫、變性、壞死、組織的淤血、出血及超微結(jié)構(gòu)的損害。揭示了復(fù)方丹參滴丸預(yù)防高原心肌低氧證具有效果顯著、作用確切、起效迅速、機(jī)制廣泛等特點(diǎn)，同時(shí)還有藥源充足、服用方便、使用安全等優(yōu)點(diǎn)，是符合高原心肌低氧癥發(fā)病機(jī)理、病理生理和防治要求的藥物。有良好的推廣應(yīng)用價(jià)值。
以下通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來進(jìn)一步闡述其預(yù)防和治療高原低氧癥的機(jī)理材料與方法1、海拔青藏線唐古拉山區(qū)，海拔5000m，大氣壓為53.9Kkpa，氧分壓為11.3Kpa。
2、實(shí)驗(yàn)對象昆明種雌、雄性Wistar大鼠14只，由海拔2260m城市動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，體重(200～250)g，平均為180±2g，隨機(jī)分為兩組，DSP干預(yù)組7只，另外7只為對照組，DSP以350mg/kg溶于1ml生理鹽水灌胃，每日1次止受試結(jié)束。兩組飼料相同飼養(yǎng)。
3、光鏡、電鏡標(biāo)本的制備及觀察 實(shí)驗(yàn)20天后全部處死，并迅速取出肺、心、肝、腎、腦及脾組織各一小塊，將其切成1mm3置于戊二醛二甲砷酸鈉乳液(PH7.4)中，1％鋨酸固定，脫水環(huán)氧樹脂包埋，超薄切片，在Hitachi-500電鏡下觀察攝片；普通病理標(biāo)本用甲醛溶液固定后石蠟包埋切片H-E染色作病理常規(guī)形態(tài)學(xué)觀察。
平原生活的標(biāo)準(zhǔn)Wistar大鼠14只，體重(200～250)g，運(yùn)入海拔5000高原隨機(jī)分為DSP干預(yù)組7只(DSP以350mg/kg溶于1ml生理鹽水灌胃，每日1次)和對照組7只，實(shí)驗(yàn)20天后全部處死，取出心肝脾肺腎腦用光鏡與電鏡觀察。
結(jié)果1、肺組織病理學(xué)變化 病理常規(guī)形態(tài)學(xué)對照組較多肺泡腔內(nèi)明顯出血，部分有含鐵血黃素沉積，肺泡間隔顯著增寬，毛細(xì)血管及小靜脈明顯擴(kuò)張淤血，局灶肺泡間隔纖維結(jié)締組織輕度增生，有少量非特性慢性炎細(xì)胞浸潤，小支氣管黏膜慢性炎(圖5)；服藥組肺泡間隔增寬，毛細(xì)血管及小靜脈擴(kuò)張淤血，局灶肺泡間隔纖維結(jié)締組織輕度增生，有少量非特異性慢性炎細(xì)胞浸潤。提示用藥可明顯降低肺出血，并改善肺淤血(圖6)。超微病理形態(tài)學(xué)對照組肺泡內(nèi)可見多量蛋白樣物質(zhì)及紅細(xì)胞，肺泡上皮明顯腫脹變性，部分崩解脫落，肺泡壁毛細(xì)血管擴(kuò)張，內(nèi)皮細(xì)胞水腫，部分壞死脫落，部分肺泡間隔斷裂(圖7)；服藥組肺泡內(nèi)未見明顯滲出物，肺泡上皮基本完整，灶狀變性壞死少見可見多量淋巴單核細(xì)胞侵潤，與對照組相比肺淤血、水腫、出血基本消失，肺泡上皮變性壞死明顯改善(圖8)。
2、心肌組織病理學(xué)變化 病理常規(guī)形態(tài)學(xué)對照組心內(nèi)膜和心肌間小血管可見淤血，心肌間隙增寬，并可見小灶狀出血，灶狀心肌纖維水腫，胞漿內(nèi)嗜酸顆粒增多，局灶心肌纖維變細(xì)且染色加深，核結(jié)構(gòu)不清；服藥組局灶心內(nèi)膜和心肌間小血管淤血，小灶狀心肌纖維水腫。提示用藥可改善高原缺氧條件下大鼠的心肌淤血和小灶狀出血。超微病理形態(tài)學(xué)對照組部分心肌纖維排列較亂、線粒體增生、細(xì)胞水腫、肌漿網(wǎng)擴(kuò)張，肌原纖維間距增寬、部分肌原纖維壞死崩解呈顆粒狀或溶解消失，可見髓樣小體形成(圖9)；服藥組心肌細(xì)胞排列規(guī)整，部分心肌細(xì)胞內(nèi)可見線粒體增生、腫脹，少部分心肌細(xì)胞水腫，肌原纖維間距增寬，肌漿網(wǎng)擴(kuò)張，與對照組相比心肌變性壞死和肌間血管充血明顯改善(圖10)。
3、腦組織病理學(xué)變化 病理常規(guī)形態(tài)學(xué)對照組蛛網(wǎng)膜下腔血管及腦小血管擴(kuò)張淤血，部分區(qū)域神經(jīng)元較多比例可見嗜酸性壞死(可達(dá)50～80％)，局灶神經(jīng)細(xì)胞水腫；服藥組神經(jīng)元發(fā)生嗜酸性壞死的比例似有降低(40～50％)，局灶神經(jīng)細(xì)胞水腫。提示用藥可較明顯改善高原缺氧條件下大鼠的腦組織淤血和壞死。超微病理形態(tài)學(xué)對照組腦組織內(nèi)細(xì)胞間及細(xì)胞內(nèi)水腫，毛細(xì)血管擴(kuò)張，內(nèi)皮細(xì)胞部分水腫變性，偶見壞死，小血管周圍明顯水腫，部分神經(jīng)細(xì)胞變性，胞漿內(nèi)線粒體明顯腫脹，部分神經(jīng)細(xì)胞高度腫脹崩解(圖11)；服藥組腦組織內(nèi)輕度細(xì)胞間及細(xì)胞內(nèi)水腫，毛細(xì)血管擴(kuò)張，內(nèi)皮細(xì)胞可見水腫變性，神經(jīng)細(xì)胞變性不明顯，與對照組相比腦水腫和神經(jīng)細(xì)胞變性明顯改善(圖12)。
4、肝組織病理學(xué)變化 病理常規(guī)形態(tài)學(xué)；對照組小葉結(jié)構(gòu)存在，肝竇擴(kuò)張，匯管區(qū)小靜脈淤血，部分肝細(xì)胞輕度水腫，局灶肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死，匯管區(qū)有少量淋巴、單核細(xì)胞浸潤；服藥組小葉結(jié)構(gòu)存在，部分肝細(xì)胞輕度水腫，小灶狀肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死，匯管區(qū)少量淋巴、單核細(xì)胞浸潤。提示用藥可較明顯改善高原缺氧條件下大鼠的肝組織淤血。超微病理形態(tài)學(xué)對照組肝細(xì)胞水腫，胞漿疏松網(wǎng)化，線粒體腫脹，溶酶體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)數(shù)量多，部分肝細(xì)胞內(nèi)可見髓樣小體，部分標(biāo)本可見肝細(xì)胞點(diǎn)灶狀溶解壞死(圖13)；服藥組肝細(xì)胞水腫明顯緩解，細(xì)胞內(nèi)溶酶體減少，線粒體仍可見腫脹，糖原增多，肝竇擴(kuò)張減輕，與對照組相比肝細(xì)胞變性和肝竇淤血均明顯改善(圖14)。
5、腎組織病理學(xué)變化 病理常規(guī)形態(tài)學(xué)對照組腎小球毛細(xì)血管明顯淤血，腎球囊腔減小，較多腎小管細(xì)胞水腫，腎間質(zhì)小血管明顯淤血，腎間質(zhì)可見小灶狀出血及少量淋巴細(xì)胞浸潤(圖15)；服藥組腎小球毛細(xì)血管淤血，腎小管細(xì)胞水腫，腎間質(zhì)可見少量淋巴細(xì)胞浸潤。提示用藥可較明顯改善高原缺氧條件下大鼠的腎皮質(zhì)小灶狀出血和淤血水腫(圖12)。超微病理形態(tài)學(xué)對照組腎小球毛細(xì)血管腔明顯擴(kuò)張，充滿多量紅細(xì)胞，上皮細(xì)胞明顯腫脹，部分崩解，系膜區(qū)偶見淋巴細(xì)胞浸潤，腎小管上皮細(xì)胞明顯腫脹，基地部皺褶明顯減少，腔緣微絨毛明顯減少以至部分消失服藥組腎小球毛細(xì)血管腔輕度擴(kuò)張，充滿多量紅細(xì)胞，上皮細(xì)胞腫脹，系膜區(qū)偶見淋巴細(xì)胞浸潤，與對照組相比腎小球淤血、腎小管上皮變性明顯改善。
6、脾組織病理學(xué)變化 病理常規(guī)形態(tài)學(xué)對照組與服藥組相比無明顯變化；超微病理形態(tài)學(xué)對照組紅髓內(nèi)可見大量紅細(xì)胞，竇組織細(xì)胞腫脹；服藥組僅見竇組織細(xì)胞腫脹，余未見明顯病變，與對照組相比脾淤血明顯改善。
討論上述動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明對照組7只大鼠的心、肝、脾、肺、腎、腦均可見高原缺氧性普通和超微病理改變，包括毛細(xì)血管充血、實(shí)質(zhì)細(xì)胞變性以至壞死、亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞。其中以肺臟變化最明顯，其次是心、腦、腎和肝，脾臟變化最輕。DSP干預(yù)組7只大鼠改變則明顯輕微，損害越嚴(yán)重的器官組織改善越明顯。表明DSP能直接預(yù)防、改善高原低氧條件下大鼠心、肝、脾、肺、腎、腦的缺氧性病理損害。
另外，本發(fā)明還通過探討該藥物組合物對血液生物化學(xué)物質(zhì)的影響，從另一側(cè)面闡述其治療和預(yù)防高原低氧癥的機(jī)制。
復(fù)方丹參滴丸對于高原低氧癥人群生物化學(xué)物質(zhì)的影響材料與方法1、海拔 青藏線格拉段工程施工沿線，海拔4700～5072m，大氣壓為56.40～53.28Kpa，氧分壓為12.03～11.16Kpa，平均海拔500m。
2、對象 按規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)健康體檢(分別在平原和海拔2800m基地兩次體檢包括心電圖均正常者)后進(jìn)駐現(xiàn)場的施工人員131人，均為男性。排除了心肺疾病、血壓異常史等。分組口服DSP組(服藥組，于進(jìn)入現(xiàn)場當(dāng)日開始口服由天津天士力制藥股份有限公司提供的DSP每次0.25g，每日3次至受試結(jié)束)30人和平行對照組101人。兩組在基地體檢結(jié)果一般情況基線值具有良好的齊同性(表6)。
表6 服藥組和對照組一般情況均衡性檢驗(yàn)※


※進(jìn)入高原海拔、季節(jié)、高原暴露時(shí)間、勞動(dòng)強(qiáng)度及生活條件兩組相同3、檢測受試人員進(jìn)入現(xiàn)場后于2M～3M時(shí)早晨空腹采取肘靜脈血兩組同步檢測。內(nèi)源性氣體信號分子測定血清中硫化氫(H2S)采用敏感硫電極法測定，以Na2S作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出血清中H2S的濃度，采用Griess法測定血清一氧化氮(NO)，以亞硝酸鹽作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出血清中NO的含量[2]；無機(jī)鹽與微量元素測定采用電感耦合等離子體發(fā)射光譜法測定血清(Cu)、鐵(Fe)、鋅(Zn)、鈣(Ca)、鎂(Mg)、硒(Se)、鈉(Na)、鉀(K)、錳(Mn)等9種元素水平[3]；五項(xiàng)內(nèi)分泌性激素催乳素(PRL)、卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)、雌二醇(E2)、睪酮(T)采用加拿大BIOCHEMIMMUNOSYSTEMS公司提供的BIOZYME 1型磁酶免儀及試劑測定；瘦素(Lep)采用DFM-96型16管放射免疫γ計(jì)數(shù)器及北京北方所提供的磁酶免試劑盒測定。全部由專機(jī)專人操作。
4、統(tǒng)計(jì)處理 采用SPSS of windows 11.0版軟件包完成，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以X±S表示，兩組間采用t檢驗(yàn)，相關(guān)關(guān)系采用偏相關(guān)分析，P＜0.05認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
結(jié)果1、復(fù)方丹參滴丸對17項(xiàng)生化指標(biāo)的影響 結(jié)果顯示與對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)意義的指標(biāo)為DSP組的血清含量均值H2S、E2、Lep各提高20.43％、47.86％、35.82％，Cu、Fe各減少12.59％、31.37％。提示DSP能影響這幾種化學(xué)物質(zhì)的血清含量(表7)。
2、復(fù)方丹參滴丸對高原習(xí)服水平的影響 結(jié)果顯示與對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)意義的指標(biāo)為DSP組的sBP均值減少8.24mmHg(經(jīng)統(tǒng)計(jì)高原高血壓患病率比對照組減少的10.43％，p＜0.05)，HR均值減少7.48次/分(經(jīng)統(tǒng)計(jì)竇性心動(dòng)過速者減少12.36％，p＜0.01)，心電圖缺血者減少69.22％(DSP組為10.26％，對照組為33.33％，p＜0.01)。表明DSP能提高高原習(xí)服水平(表8)。
3、相關(guān)分析 H2S、NO與sBP、dBP均呈正相關(guān)(均p＜0.01)；Lep與NO、Zn、LH、E2均呈正相關(guān)，與Cu、Fe、T均呈負(fù)相關(guān)(p＜0.05或p＜0.01)Cu與Fe呈正相關(guān)(p＜0.05)，與Mg呈負(fù)相關(guān)(p＜0.01)Zn與Ca、Mg、PRL、FSH、SpO2均呈正相關(guān)(均p＜0.05)；組別與H2S、E2、Lep均呈正相關(guān)與Fe、sBP、心電圖缺血、HR均呈負(fù)相關(guān)。表明服藥組血清含量均值H2S、E2、Lep的提高、Fe的減少、sBP、HR及心電圖缺血率的降低與DSP密切相關(guān)；一些生化指標(biāo)間存在著相關(guān)關(guān)系(表4)。
表7服藥組與對照組17項(xiàng)生化指標(biāo)比較

表8 服藥組與對照組在海拔5000m習(xí)服指標(biāo)變化及比較

表9 組別與H2S、Fe、E2、Lep、sBP及心電圖缺血偏相關(guān)分析綜合結(jié)果

(Cofficient/D.F/2-tailed significance)討論上述結(jié)果表明復(fù)方丹參滴丸對血液電解質(zhì)無影響，能下調(diào)公認(rèn)的升壓元素銅和鐵，上調(diào)降壓、擴(kuò)血管、心肌保護(hù)、調(diào)節(jié)氧代謝等多種作用的硫化氫、代謝調(diào)節(jié)及與性激素、微量元素有密切關(guān)系的循環(huán)激素瘦素以及抑制血紅蛋白生成和低氧習(xí)服的重要激素雌二醇。提示復(fù)方丹參滴丸對內(nèi)源性氣體信號分子、部分微量元素、性激素及瘦素具有代謝調(diào)節(jié)作用，這可能是DSP干預(yù)高原低氧性病理生理改變、防治高原性疾病的又一重要作用機(jī)制。


圖1光鏡下對照組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物心臟低氧病理形態(tài)學(xué)的影響；圖2光鏡下復(fù)方丹參滴丸治療組對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物心臟低氧病理形態(tài)學(xué)的影響；圖3電鏡下對照組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物心臟低氧病理形態(tài)學(xué)的影響；圖4電鏡下復(fù)方丹參滴丸治療組對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物心臟低氧病理形態(tài)學(xué)的影響；圖5對照組肺組織病理學(xué)變化；圖6肺組織病理學(xué)變化；圖7對照組超微病理形態(tài)學(xué)變化；圖8復(fù)方丹參滴丸治療組超微病理形態(tài)學(xué)變化；圖9對照組心肌組織病理學(xué)變化；圖10復(fù)方丹參滴丸治療組心肌組織病理學(xué)變化；圖11對照組腦組織病理學(xué)變化；圖12復(fù)方丹參滴丸治療組腦組織病理學(xué)變化；圖13對照組肝組織病理學(xué)變化；圖14復(fù)方丹參滴丸治療組肝組織病理學(xué)變化圖15對照組腎組織病理學(xué)變化；圖16復(fù)方丹參滴丸治療組腎組織病理學(xué)變化；具體實(shí)施方式
下面列舉制備方面的實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明，該實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而對本發(fā)明并沒有限制。
實(shí)施例一1.配方用量丹參41.06g三七8.03g冰片0.46g輔料聚乙二醇-6000 18g制成1000粒滴丸2.丹參、三七的提取取經(jīng)粗粉碎的丹參、三七藥材至提取罐中，加5倍量水，煎煮2小時(shí)，濾過，濾渣進(jìn)行第二次提取，加入4倍量水，煎煮1小時(shí)，濾過，濾渣棄去，合并濾液。濾液減壓濃縮至藥液體積(L)與藥材重量(Kg)比為1∶0.9～1.1，緩緩加入95％的乙醇，使藥液含醇濃度在69～71％，靜置12小時(shí)。取醇沉后藥液的上清液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮為相對密度為1.32～1.40的浸膏。
3.產(chǎn)品的制備取上述浸膏和冰片，與聚乙二醇-6000 18g混和均勻，加熱至溫度85～90℃，化料20～120分鐘后，移至罐溫保持在85～90℃的滴丸機(jī)滴罐中。藥液滴至7～8℃液體石蠟中，取出滴丸，除油，篩網(wǎng)選丸，即得。
產(chǎn)品的特征產(chǎn)品性狀為紅棕-棕黑色圓珠狀，大小均勻、色澤一致，氣香、味苦。
產(chǎn)品丸重為25mg±15％/粒，直徑3.34±15％mm。
實(shí)施例二1.配方用量丹參31.12g三七9.21g冰片0.50g輔料聚乙二醇-6000 20g制成1000粒滴丸2.丹參三七的提取、產(chǎn)品的制備和特征同實(shí)施例一。
實(shí)施例三1.配方用量丹參59.36g三七6.38g冰片0.34g輔料聚乙二醇-6000 21g制成1000粒滴丸2.丹參三七的提取、產(chǎn)品的制備和特征同實(shí)施例一。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物在制備治療和預(yù)防高原心肌低氧癥藥物中的應(yīng)用，其中該藥物組合物按照重量配比如下丹參48％～97％，三七2％～50％，冰片0.2％～3％。
2.權(quán)利要求1所述的用途，其中所述的藥物組合物按照重量配比如下丹參63.0％～94％，三七4.0％～35.0％，冰片0.5％～2.0％。
3.權(quán)利要求1所述的用途，其中所述的藥物組合物按照重量配比如下丹參75.2％～90％，三七9％～23.5％，冰片0.5％～1.3％。
4.權(quán)利要求1所述的用途，其中所述的藥物組合物按照重量配比如下丹參82.87％，三七16.21％，冰片0.92％。
5.一種藥物組合物在制備治療和預(yù)防高原心肌低氧癥引起的冠心病心絞痛藥物中的應(yīng)用，其中該藥物組合物按照重量配比如下丹參48％～97％，三七2％～50％，冰片0.2％～3％。
6.權(quán)利要求5所述的用途，其中所述的藥物組合物按照重量配比如下丹參63.0％～94％，三七4.0％～35.0％，冰片0.5％～2.0％。
7.權(quán)利要求5所述的用途，其中所述的藥物組合物按照重量配比如下丹參75.2％～90％，三七9％～23.5％，冰片0.5％～1.3％。
8.權(quán)利要求5所述的用途，其中所述的藥物組合物按照重量配比如下丹參82.87％，三七16.21％，冰片0.92％。
9.一種藥物組合物在制備治療和預(yù)防高原心肌低氧癥引起的腦病藥物中的應(yīng)用，其中該藥物組合物按照重量配比如下丹參48％～97％，三七2％～50％，冰片0.2％～3％。
10.權(quán)利要求9所述的用途，其中所述的藥物組合物按照重量配比如下丹參63.0％～94％，三七4.0％～35.0％，冰片0.5％～2.0％。
11.權(quán)利要求9所述的用途，其中所述的藥物組合物按照重量配比如下丹參75.2％～90％，三七9％～23.5％，冰片0.5％～1.3％。
12.權(quán)利要求9所述的用途，其中所述的藥物組合物按照重量配比如下丹參82.87％，三七16.21％，冰片0.92％。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種藥物組合物在制備治療和預(yù)防高原心肌低氧癥藥物中的應(yīng)用，該組合物是由丹參、三七、冰片組成。
文檔編號A61K31/045GK1919234SQ20051001483
公開日2007年2月28日 申請日期2005年8月24日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月24日
發(fā)明者張雪峰, 宋科, 董維亞, 裴志偉, 韓玲, 張莉, 閆希軍, 郭治昕, 鄭軍, 趙娜 申請人:天津天士力制藥股份有限公司