心血管疾病標記物palm及利用其的心血管疾病診斷方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及一種對于屯、血管疾病為特異性的診斷標記物，設及一種在屯、血管疾病 患者的組織或血清中特異性增加表達的PALM(paralemmin)及利用其的屯、血管疾病診斷用 試劑盒。
【背景技術】
[0002] 屯、血管類疾病是全球導致死亡最多的疾病，根據(jù)世界保健機構的預測，屯、血管類 疾病今后也將是在全球提供最多死亡原因的疾病。2005年因屯、血管類疾病死亡的人數(shù)為 1750萬，運相當于全球死亡人數(shù)的30%。在運些死亡者中，760萬人死于屯、臟麻搏，57萬 人死于腦中風。在未采取恰當?shù)拇胧┑那闆r下，到2015為止估算每年有2千萬人死于屯、 血管類疾病，其中主要死于屯、臟麻搏與腦中風。屯、血管類疾病是因屯、臟與血管的障礙而引 起，特別是冠狀屯、臟疾病（屯、臟麻搏）、冠狀動脈疾病、血壓上升（高血壓）、末梢動脈疾病、 風濕性屯、臟疾病、先天性屯、臟病及屯、功能不全包含在所述屯、血管類疾病中。在屯、血管疾病 中占據(jù)重要部分的冠狀動脈疾病大致是因動脈硬化而向屯、臟供給血液的冠狀動脈堵塞或 變窄所導致。因動脈硬化導致冠狀動脈完全堵塞而屯、臟肌肉組織死亡的疾病為屯、肌梗塞， 冠狀動脈變窄而感覺到胸部壓迫管或胸痛的疾病為屯、絞痛。
[0003] 確認存在屯、血管疾病發(fā)病危險的個人是用W進一步有效地預防或治療所述疾病 的重要戰(zhàn)略。W往，只有屯、血管疾病發(fā)展到某種程度時方能通過物理方法診斷，從而早期診 斷或預測有限。通常，對于屯、血管疾病，利用造影裝備對屯、臟內部及冠狀動脈進行X射線及 超聲波拍攝而進行診斷，但運種方法僅可在發(fā)病后進行診斷。另外，目前在臨床上使用預測 可從血液樣品測定的屯、血管疾病的若干危險因數(shù)、例如與LDL(LowDensityLipoprotein， 低密度脂蛋白）及皿L化i曲DensityLipoprotein,高密度脂蛋白）膽固醇數(shù)值相關的因 數(shù)，但患有動脈粥樣硬化的許多患者并不具有運種危險因數(shù)。進而，未表現(xiàn)出運種危險因數(shù) 的許多個人也會發(fā)生屯、血管疾病，因此也考慮發(fā)生屯、血管疾病的危險較低的個人。因此，一 直W來要求一種對患者偵測發(fā)生屯、血管疾病的危險的方法。
[0004] 屯、血管相關疾病是毫無征兆地突發(fā)的疾病，因此與人的生命及日常生活的功能限 制具有非常密切的關聯(lián)性。因此，需要事先預測診斷運種已發(fā)展的屯、血管疾病而挽救患者 的生命并提高生活質量。作為迄今為止已知的屯、血管類疾病的生物標記物，有CRP、IL-6、 比-8、MCP-1、IP-10 等。除此之外，申請有與利用MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4、eotaxin、 M-CSF、比-3、IP-10、TNFa、Ang-2、比-5、比-7與IGF-1等的組合的屯、血管類生物標記物相 關的專利扣S2007/0099239)。然而，因各種檢查而醫(yī)療費增加，W所有人為對象進行W篩 查為目的的檢查有限，因此對可簡便地通過一次采血進行診斷的生物標記物的需求日益增 強。
[0005] 因此，本發(fā)明人等為了開發(fā)新穎的特異性屯、血管疾病標記物而進行努力，結果確 認到如下情況而完成了本發(fā)明：與正常組相比，PALM(paralemmin)在屯、血管疾病小鼠及患 者中呈增加的現(xiàn)象，與作為現(xiàn)有的屯、血管疾病標記物的CK-MB及troponin(肌巧蛋白）-T 的表達相似，由此可將所述PALM有效地用作屯、血管疾病標記物。

【發(fā)明內容】

[0006][發(fā)明要解決的問題] 陽007] 本發(fā)明的目的在于提供一種包含特異性地結合到PALM(Paralemmin)的抗體的屯、 血管類疾病診斷用試劑盒及用W提供診斷屯、血管疾病的信息的蛋白質檢測方法。
[000引[解決問題的技術手段]
[0009] 為了達成所述目的，本發(fā)明提供一種包含特異性地結合到PALM(Paralelllmin) 的抗體的屯、血管類疾病診斷用試劑盒。
[0010] 另外，本發(fā)明提供一種用W提供診斷屯、血管疾病的信息的蛋白質檢測方法，其包 含如下步驟： W11] 1)從患者的分離的試料測定PALM的表達量的步驟；及
[0012] 2)篩選所述步驟1)的蛋白質的表達量高于正常對照組的個體的步驟。 陽〇1引[發(fā)明效果]
[0014] 本發(fā)明設及一種作為屯、血管疾病診斷用生物標記物的PALM(paralemmin)，所述 PALM在屯、血管疾病小鼠及患者中呈增加的現(xiàn)象，與作為現(xiàn)有的屯、血管疾病標記物的CK-MB 及troponin-T的表達相似，因此可實現(xiàn)可通過簡單的采血而簡便地進行屯、血管類診斷或 判斷發(fā)展程度的效果，因此可有效地用作屯、血管疾病標記物。
【附圖說明】
[0015] 圖1是關于通過LAD (Xeft Anterior Descending,左前降支）結扎而構建屯、血管 疾病小鼠模型的圖。
[0016] 圖2是利用從屯、血管疾病小鼠模型獲得的組織或血清對在加載到凝膠后表達的 蛋白質進行染色的圖。
[0017] 圖3是使用利用從屯、血管疾病小鼠模型獲得的組織或血清的樣品進行質量分析 的結果。
[0018] 圖4是在屯、血管疾病小鼠中利用免疫印跡法對PALM(Paralemlllin)蛋白圖案進 行分析的圖。
[0019] 圖5是在屯、血管疾病患者中利用免疫印跡法對PALM蛋白圖案進行分析的圖。 陽020] 圖6是從屯、血管疾病患者的血清分析作為現(xiàn)有標記物的CK-MB及化oponin-T的 蛋白質圖案的圖。 陽021] 圖7是從屯、血管疾病患者的血清分析作為現(xiàn)有標記物的CK-MB及化oponin-T蛋 白質圖案的圖。 陽02引圖8是根據(jù)屯、血管疾病患者的血清而與現(xiàn)有標記物比較分析PALM(Paralemmin)蛋白圖案的圖。
【具體實施方式】
[0023] W下，詳細地對本發(fā)明進行說明。
[0024] 本發(fā)明提供一種包含特異性地結合到PALM(Paralemmin)的抗體的屯、血管類疾病 診斷用試劑盒。
[00巧]所述屯、血管類疾病診斷用試劑盒的特征在于，所述PALM在屯、血管類疾病患者中 增加表達量。
[00%] 所述抗PALM抗體均可使用通過注入PALM蛋白而制作的抗PALM抗體或市售的 抗PALM抗體，所述PALM優(yōu)選為人PALM,更優(yōu)選為具有記載為序列1的PALM氨基酸序列的PALM。另外，所述抗體包含可與多克隆抗體、單克隆抗體及表位（epitope)結合的片段等。
[0027] 多克隆抗體可通過向動物注射所述PALM蛋白并從所述動物進行采血而獲得包含 抗體的血清的W往的方法來生產(chǎn)。運種多克隆抗體可通過本技術領域人員所熟知的任一方 法純化，可從山羊、兔子、老鼠、大鼠、雞、綿羊、猴子、馬、豬、牛、狗等任意的動物宿主制造， 優(yōu)選為W兔子為宿主，但并不限定于此。
[0028] 單克隆抗體可使用通過連續(xù)細胞株的培養(yǎng)生成抗體分子的任一技術來制造。作為 運種技術，包含融合瘤技術、人鼠B-細胞融合瘤技術及邸V巧psteinBarrvirus,埃-己 二氏病毒）-融合瘤技術，但并不限定于此化ohlerGetal.,化1:ure256:495-497, 1975; KozborDetal.,JImmunolMethods81;31-42, 1985;CoteRJetal.'Proc化tlAcad sci80:2026-2030,1983;及ColeSPetal.，MolCellBiol62:109-120,1984)。
[0029] 另外，可制造含有對所述PALM蛋白的特定結合位點的抗體片段。例如，可將抗體 分子分解成胃蛋白酶而制造F(油'）2片段，可通過還原F(油'）2片段的二硫橋鍵而制造F油 片段，但并不限定于此。作為其他方法，可使F油表達庫變小而迅速且簡便地鑒定所需的具 有特異性的單克隆F油片段（HuseWDetal.，Science254:1275-1281，1989)。
[0030] 為了使清洗或復合體的分離等后續(xù)步驟變容易，所述抗體可結合到固體基質 (solidsubstrate)。固體基質例如有合成樹脂、硝化纖維素、玻璃基板、金屬基板、玻璃纖 維、微細球體及微珠等。另外，在所述合成樹脂中，有聚醋、聚氯乙締、聚苯乙締、聚丙締、 PVDF任olyvinylideneFluoride,聚偏二氣乙締）及尼龍等。
[0031] 所述抗體可結合顯色酶、顯色物質、或巧光分子，可結合到配位體。所述顯色 酶優(yōu)選為HRP化orseradishperoxidase,辣根過氧化酶）或堿性憐酸酶（a化aline phosphatase)。另外，所述顯色物