專(zhuān)利名稱(chēng)：一種眼用嵌段聚合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及以由兩種聚合物(A、B)片斷組成的嵌段聚合物的眼用，其中聚合物中A、B片斷分別為親水性聚合物-聚乙二醇甲醚(mPEG)和疏水性聚合物-聚乳酸(PLA)或聚乙醇酸(PGA)或乙交酯-丙交酯聚合物(PLGA)，嵌段聚合物可以是AB型二嵌段聚合物或多嵌段聚合物。這種適合于眼內(nèi)給藥。
背景技術(shù)：
眼內(nèi)給藥是治療眼部疾病的重要給藥方式，眼內(nèi)給藥制劑包括滴眼劑、眼用凝膠劑等。目前，眼用制劑按治療目的不同，可以分為1)應(yīng)透過(guò)角膜進(jìn)入眼內(nèi)的制劑，如鹽酸哌侖西平為M1受體阻滯劑，可以阻止近視眼的進(jìn)一步發(fā)展，其作用部位在眼內(nèi)，故哌侖西平透過(guò)角膜進(jìn)入眼內(nèi)是必須的；2)應(yīng)在眼結(jié)膜、角膜等眼表面作用的制劑，如治療干眼病的環(huán)孢素A等，此類(lèi)制劑應(yīng)在保證在眼內(nèi)滯留而不吸收或被淚液快速清洗。
眼用制劑的低生物利用度一直是困擾眼部給藥的一個(gè)因素。一般來(lái)說(shuō)，藥物的角膜低滲透性、淚液的快速清洗以及吸收進(jìn)入眼結(jié)膜是導(dǎo)致普通滴眼劑眼內(nèi)生物利用度低的原因。提高藥物眼內(nèi)生物利用度的方法可以通過(guò)(1)提高藥物的角膜滲透性；(2)增加制劑在眼內(nèi)的滯留時(shí)間，如制備眼用凝膠劑等；(3)制備具有部位選擇性釋放的制劑；(4)加入角膜滲透促進(jìn)劑。
聚合物膠束是指以?xún)捎H性嵌段聚合物為材料制成的膠束，這種聚合物在水中自行組裝成為一種花冠狀結(jié)構(gòu)，其中親水性嵌段聚集在膠束外表面，形成柵欄狀結(jié)構(gòu)，疏水部分聚集在膠束的內(nèi)核。這種花冠狀結(jié)構(gòu)具有穩(wěn)定的物理性質(zhì)，藥物可以根據(jù)其溶解性能的不同分別包裹于花冠部分或內(nèi)核部分，也可以包裹于花冠和內(nèi)核的界面，例如，親水性藥物可以包裹于花冠部分，疏水性藥物包裹于內(nèi)核部分(Torchilin，V.P.，Structure and design of polymeric surfactant-based drug delivery systems.J ControlRelease，2001.73(2-3)p.137-72)。這種嵌段聚合物與普通表面活性劑相比，具有臨界膠束濃度(Critical Micellar Concentration，CMC)低的特點(diǎn)。這類(lèi)嵌段聚合物作為輔料已經(jīng)用于載運(yùn)疏水性藥物和生物大分子藥物，用于注射途徑的給藥等，例如聚合物中A、B片斷分別為親水性聚合物-聚乙二醇甲醚(mPEG)和疏水性聚合物-聚乳酸(PLA)或聚乙醇酸(PGA)或乙交酯-丙交酯聚合物(PLGA)的聚合物，嵌段聚合物可以是AB型嵌段聚合物或多嵌段聚合物。
兩親性嵌段聚合物可以是AB型或AB的多嵌段型。截至目前，聚合物膠束的研究主要用于注射途徑，用于載運(yùn)疏水性藥物或大分子生物藥物，以達(dá)到靶向治療作用或延長(zhǎng)大分子生物半衰期的作用(Kazunori Kataoka，Atsushi Harada，Yukio Nagasaki，Block copolymer micelles for drug deliverydesign，characterization and biologicalsignificance，Advanced Drug Delivery Reviews 47(2001)113-131)。通過(guò)改變聚合物中A/B的比例，可以改變AB型聚合物的分子量、臨界膠束濃度(CMC)、膠束締合度、膠束粒徑。例如，mPEG-PLA二嵌段聚合物，隨著疏水部分PLA的鏈增長(zhǎng)，聚合物膠束的粒徑變小，內(nèi)核變小，花冠部分變大，當(dāng)A/B的比例大于60/40后，聚合物膠束內(nèi)核的體積逐漸增大，CMC提高，反之，當(dāng)A/B的比例小于50/50后，聚合物膠束的內(nèi)核變小，花冠部分體積增大，膠束較穩(wěn)定。通過(guò)改變嵌段模式，可以改變聚合物的最低溶液溫度(LCST)，例如mPEG-PLA的多嵌段聚合物(Kang Moo Huh，YouHan Bae，Synthesis and characterization of poly(ethylene glycol)/poly(l-lactic acid)alternating multiblock copolymers，Polymer 40(1999)6147-6155)，當(dāng)調(diào)節(jié)聚合方式后，其LCST可以調(diào)節(jié)至30℃左右。
這種聚合物膠束的粒徑一般在直徑數(shù)十納米，這提供了一種獲得功能納米顆粒的新途徑。研究表明聚合物膠束具有很好的透過(guò)細(xì)胞膜的作用(Jeffrey A.Hubbell，Science，2003，25 April，595-596)，因此，作為一種攜帶藥物的載體可以有效地促進(jìn)藥物透過(guò)角膜進(jìn)入眼內(nèi)。
美國(guó)專(zhuān)利6,579,519申請(qǐng)了一種載運(yùn)非甾體抗炎藥的眼用聚合物膠束，其中其聚合物為三嵌段隨機(jī)聚合物，通式為(X+Y+Z-)m，m為大于2的整數(shù)，X為可降低眼刺激性的具有膠凝特性的單體，通常為乙烯基化合物，如乙烯吡咯啉酮，Y通常為具有熱敏性的聚合物(其通式為formula R1-R2N-(C＝O)-CH＝CH2，R1＝a proton orCnH2n+1, n為3-6間的數(shù)，R2為碳鏈數(shù)為3-6的烷基)，如聚N-異丙基丙烯酰胺，Z為具有黏膜黏附性及pH敏感性的聚合物，如聚丙烯酸。該專(zhuān)利表明聚合物膠束可以顯著提高藥物的角膜透過(guò)率而無(wú)毒性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供由兩種聚合物片斷組成的嵌段聚合物作為眼藥載體的應(yīng)用，其中兩種聚合物片段分別為A片段和B片斷，它們分別為親水性聚合物片段和疏水性聚合物片段，親水性聚合物片段為聚乙二醇甲醚(mPEG)的片段，疏水性聚合物的片段為聚乳酸(PLA)的片段、聚乙醇酸(PGA)的片段或乙交酯-丙交酯聚合物(PLGA)的片段，分別可以稱(chēng)為mPEG-PLA嵌段聚合物，mPEG-PGA嵌段聚合物，mPEG-PLGA嵌段聚合物，嵌段聚合物可以是AB型二嵌段聚合物或多嵌段聚合物。這類(lèi)具有兩親性部分的嵌段聚合物在水中可以形成聚合物膠束，藥物可以被聚合物膠束載運(yùn)，其中疏水性藥物包于膠束核心(Core)，而親水性藥物存在于膠束的花冠部分(Corolla)，這類(lèi)載藥聚合物膠束也可以稱(chēng)為嵌段聚合物載藥膠束。
本發(fā)明優(yōu)選的嵌段聚合物是mPEG-PLA聚合物，其可以是AB型二嵌段聚合物或多嵌段聚合物。其載藥膠束也可以稱(chēng)為mPEG-PLA二嵌段聚合物載藥膠束和mPEG-PLA多嵌段聚合物載藥膠束。
本發(fā)明的目的是將嵌段聚合物用于適合眼部給藥的藥物的載體。本發(fā)明還提供含有嵌段聚合物的眼用藥物組合物。
本發(fā)明意外的發(fā)現(xiàn)，嵌段聚合物可以使藥物進(jìn)入眼內(nèi)的利用度提高，而通過(guò)調(diào)節(jié)多嵌段物的種類(lèi)和比例，可以改變聚合物的最低溶液溫度(LCST)，使藥物特異地分布于眼內(nèi)不同組織。
本專(zhuān)利所述的嵌段聚合物是已知物質(zhì)，優(yōu)選的mPEG-PLA二嵌段聚合物，記載在文獻(xiàn)Kazunori Kataoka，Atsushi Harada，Yukio Nagasaki，Block copolymer micelles fordrug deliverydesign，characterization and biological significance，Advanced DrugDelivery Reviews 47(2001)113-131中，其通式為 其中m為聚乳酸的聚合度，其數(shù)值為5-100；n為聚乙二醇的聚合度，其數(shù)值為6-50。該聚合物可按文獻(xiàn)方法經(jīng)開(kāi)環(huán)聚合獲得，與表面活性劑相比，mPEG-PLA二嵌段聚合物，臨界膠束濃度(CMC)低，可以載運(yùn)具有親水性和親脂性的藥物，促進(jìn)藥物的角膜透過(guò)性。
本發(fā)明優(yōu)選的mPEG-PLA多嵌段聚合物，記載在文獻(xiàn)Kang Moo Huh，You Han Bae，Synthesis and characterization of poly(ethylene glycol)/poly(1-lactic acid)alternatingmultiblock copolymers，Polymer 40(1999)6147-6155中，其通式為 其中X、Y分別代表聚合單元中不同的聚乳酸嵌段的聚合度，兩者數(shù)值為5-100；m代表聚合單元中聚乙二醇的聚合度，其數(shù)值為6-50；n代表聚合單元的聚合度，其數(shù)值為2-50。該聚合物的LCST按X，Y，M，N的不同在25-40℃范圍內(nèi)。當(dāng)LCST接近32℃時(shí)，嵌段聚合物在眼睛表面解離，使藥物釋放產(chǎn)生作用，可以用于眼睛表面疾病的治療，如干眼病、結(jié)膜炎、角膜炎的治療等。
本發(fā)明的嵌段聚合物可用于適合眼部給藥的藥物的載體，利用聚合物膠束對(duì)角膜的易透性，使藥物抵達(dá)病灶，達(dá)到治療眼部疾病的目的。
本發(fā)明的嵌段聚合物可用于眼睛表面疾病的治療，延長(zhǎng)藥物在結(jié)膜、角膜的滯留時(shí)間，起到治療作用。
以上所述眼部給藥的藥物，是指任何可以用于眼部給藥的藥物，主要選自抗菌藥物，抗病毒藥物，抗炎藥物，影響免疫系統(tǒng)的藥物，治療近視眼藥物，治療干眼癥藥物，治療青光眼藥物，治療白內(nèi)障藥物等。這些藥物具體可以是抗菌藥物選自鹽酸四環(huán)素、多粘菌素B、兩性霉素B、紅霉素、磺胺醋酰鈉、金霉素、利福平、硫酸鏈霉素、硫酸慶大霉素、鹽酸林可霉素、氯霉素、氧氟沙星、左旋氧氟沙星、環(huán)丙沙星、諾氟沙星；抗病毒藥物選自三氮唑核苷、酞丁安、鹽酸嗎啉胍、阿昔洛韋、更昔洛韋；抗炎藥物選自醋酸潑尼松、醋酸氫化可的松、地塞米松、阿斯匹林、消炎痛、氟聯(lián)苯丙酸、雙氯芬酸、炎痛喜康；影響免疫系統(tǒng)的藥物選自環(huán)孢素A、麥考酚酯、硫唑嘌呤、奈多羅米、洛度沙胺；散瞳藥、睫狀肌麻痹藥、抗近視眼藥物選自甲基硫酸新斯的明、硫酸阿托品、氫溴酸后馬托品、鹽酸哌侖西平；治療干眼癥藥物選自環(huán)孢素A；抗青光眼藥物選自硝酸毛果蕓香堿、氨甲酰膽堿、毒扁豆堿、腎上腺素、地匹福林、可樂(lè)定、溴莫尼定、噻嗎洛爾、乙酰唑胺、二氯磺胺、多唑胺、拉坦前列素、硫酸胍啶；治療白內(nèi)障藥物選自硫普羅寧、谷光甘肽等；本發(fā)明優(yōu)選的是將嵌段聚合物用于近視眼的治療和干眼癥的治療，其中所載藥物優(yōu)選的是哌侖西平或其藥用鹽和環(huán)孢素A。
本發(fā)明發(fā)現(xiàn)嵌段聚合物在作為眼部用藥藥物的載體時(shí)具有優(yōu)越性，可以通過(guò)測(cè)定所載藥物的角膜透過(guò)率加以證實(shí)，所述的角膜透過(guò)率是指藥物透過(guò)角膜的程度。藥物滴入眼瞼后，通過(guò)測(cè)定藥物在眼房水中的濃度而獲得。
本發(fā)明的藥物組合物，其中含有藥物有效量的眼部用藥物和嵌段聚合物。必要時(shí)本發(fā)明的組合物還可加入其他適合的藥物可接受的輔料。眼部用藥物在組合物中的比例可以是1-99％，嵌段聚合物在組合物中的比例可以是1-99％，在含有其他藥物載體時(shí)，比例可以調(diào)整，所述比例為重量百分比。本發(fā)明的藥物組合物，可以是任何一種眼部給藥的劑型，如可以是如下劑型普通滴眼劑、眼膏劑、眼用凝膠劑(包括生物粘附性凝膠、即位凝膠)等。
本發(fā)明的嵌段聚合物可以制成凍干粉或壓制成片劑，用前溶于適宜的溶劑中，再與藥物混合使用。
普通滴眼劑包括眼用溶液劑、混懸劑。眼膏劑是指以凡士林為賦形劑制成的眼用半固體制劑。
生物粘附凝膠劑是指以含有多個(gè)親水基團(tuán)的聚合物為材料制成的與角膜具有粘附力的凝膠劑。這類(lèi)聚合物包括玻璃酸、羥丙甲基纖維素(HPMC)、聚乙烯醇(PVA)、羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)、聚丙烯酸(PAA)。這類(lèi)凝膠劑通常呈非牛頓流體的流變學(xué)特性，即隨著切應(yīng)速度的提高，液體的粘度增加，這有利于制劑在眼內(nèi)的停留，防止藥物被淚液沖洗掉，從而提高藥物透過(guò)角膜的比例。
即位凝膠是指滴眼劑本身為可以自由流動(dòng)的液體，受pH、溫度變化，制劑在滴入眼瞼后形成凝膠，從而增加制劑在眼中的駐留，提高角膜透過(guò)率。pH觸變的即位凝膠主要由纖維素醋酸酞酸酯(CAP)、卡波沫等組成，當(dāng)制劑在pH7.4的條件下能迅速變?yōu)槟z劑。溫度觸變的即位凝膠主要由在32-36℃可變?yōu)槟z的聚合物組成，這類(lèi)聚合物包括結(jié)冷膠等組成。
在上述嵌段聚合物眼用制劑中，可以加入適量其它輔料，這些輔料包括等滲調(diào)節(jié)劑、其它角膜吸收促進(jìn)劑、防腐劑等。
等滲調(diào)節(jié)劑主要用于調(diào)節(jié)制劑的滲透壓，使之與淚液的滲透壓相當(dāng)，以降低刺激性。等滲調(diào)節(jié)劑包括氯化鈉、氯化鉀等。
角膜促進(jìn)劑包括依地酸二鈉、陽(yáng)離子型表面活性劑(如苯扎氯銨)、聚山梨酯(如聚山梨酯20、80等)、膽酸鹽(如膽酸鈉、脫氧膽酸鈉等)。
本發(fā)明的藥物組合物可以通過(guò)以下方法制備1、嵌段聚合物載藥膠束的制備嵌段聚合物膠束的制備采用常用的辦法，如熔融法、溶解-溶劑蒸發(fā)法、乳化-溶劑蒸發(fā)法等。以溶解-溶劑蒸發(fā)法為例，分別稱(chēng)取藥物和mPEG-PLA置于燒瓶中，加入有機(jī)溶劑(通常為乙腈或乙醇)，加熱、攪拌至溶解。在真空下加熱緩慢蒸去乙腈(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀)，得到膠狀物，膠狀物用注射用水在60℃下溶解，以0.22mm微孔濾膜濾過(guò)除菌，灌裝入凍干瓶中，凍干。
2、眼用聚合物載藥膠束制劑的制備聚合物膠束可以制備成滴眼液、眼用凝膠劑、眼膏等。
A)稀釋劑將等滲調(diào)節(jié)劑、緩沖鹽及其它物料溶于注射用水中，121℃下滅菌30分鐘作為稀釋劑。
B)取嵌段聚合物載藥膠束凍干品適量，加入稀釋劑中，即可。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)還表現(xiàn)在可以根據(jù)治療要求使藥物在眼內(nèi)不同部位特異地釋放，達(dá)到靶向治療作用。提高藥物在靶部位的利用度，提高療效，降低副作用。
具體實(shí)施例方式下面為本專(zhuān)利的實(shí)施例，但下述實(shí)施例并不限置本專(zhuān)利的權(quán)利范圍。
實(shí)施例1本實(shí)施例為眼用哌侖西平聚合物膠束凝膠劑的制備材料與方法D，L-丙交酯購(gòu)自Sigma公司，用前采用無(wú)水乙酸乙酯在60℃重結(jié)晶三次，室溫下在P2O5中真空干燥24小時(shí)。辛酸亞錫和甲基聚乙二醇(分子量2000)均購(gòu)自Sigma公司。
1.甲基聚乙二醇-聚乳酸(mPEG-PLA)二嵌段聚合物的合成采用開(kāi)環(huán)聚合方法，分別制備質(zhì)量比例為75/25的甲基聚乙二醇-聚乳酸嵌段聚合物。即稱(chēng)取甲基聚乙二醇7.5g和丙交酯2.5g，置于密閉的反應(yīng)器中，在氮?dú)鈿饬飨律郎刂?20-140℃使固體熔化，加入辛酸亞錫50mg，升高溫度至150-180℃C反應(yīng)3-6小時(shí)。冷卻，得白色固體粗品。粗品以二氯甲烷5ml溶解后，在攪拌下加入100ml乙醚中，濾過(guò)，反復(fù)三次，產(chǎn)品真空干燥24小時(shí)，即可。
嵌段聚合物采用凝膠色譜法測(cè)定分子量為8530，核磁共振(1HNMR)證明甲基聚乙二醇-聚乳酸的質(zhì)量比例為75∶25，其CMC為200μg/ml。
2.哌侖西平游離堿的制備取100g鹽酸哌侖西平溶于適量蒸餾水，經(jīng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂交換、以甲醇洗脫，除去甲醇，得哌侖西平游離堿。
3.哌侖西平聚合物膠束的制備分別稱(chēng)取2g哌侖西平和2g甲基聚乙二醇-聚乳酸嵌段聚合物置于燒瓶中，加入乙腈50ml，加熱、攪拌至溶解。在60℃、真空下緩慢蒸去乙腈(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀)，樣品用水調(diào)整體積至100ml。產(chǎn)品以0.22mm微孔濾膜濾過(guò)除菌，灌裝入凍干瓶中，每瓶2ml，凍干。
4.眼用哌侖西平聚合物膠束凝膠劑的制備A)取羥丙甲基纖維素K100M適量，按2％的比例使溶于注射用水中，加入苯扎氯胺(萬(wàn)分之一)、依地酸二鈉(萬(wàn)分之四)，加氯化鈉適量(約1％)，滴加1N HCl或NaOH調(diào)節(jié)pH7.0，121℃下滅菌30分鐘作為稀釋劑。
B)取哌侖西平聚合物膠束凍干品適量，加入稀釋劑中，使溶解，得哌侖西平的濃度為2％，即可。
實(shí)施例2本實(shí)施例為眼用哌侖西平聚合物膠束凝膠劑的離體角膜透過(guò)實(shí)驗(yàn)取家兔，麻醉致死。摘除眼球置于中。沿距角膜邊緣2mm的鞏膜處做橫切，分離角膜。除去晶狀體、玻璃體等眼球后部組織，剝離虹膜，得帶有2mm鞏膜環(huán)的角膜。處死動(dòng)物后20min內(nèi)開(kāi)始角膜透過(guò)實(shí)驗(yàn)。采用滲透擴(kuò)散裝置，包括供給池和接受池，保持離體角膜的形狀將其固定在兩池之間，使上皮層面向供給池。供給池內(nèi)加入鹽酸哌侖西平溶于實(shí)施例1中稀釋劑得到的凝膠劑2mL或眼用哌侖西平聚合物膠束凝膠劑，接受池為林格溶液，整個(gè)裝置放入(34±0 5)℃恒溫水浴中開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。于試驗(yàn)開(kāi)始后的第5，15，30，45，60，90，120min從接受池取樣1mL并立即補(bǔ)充等體積的空白預(yù)先用95％∶5％O2和CO2混合氣體飽和的34℃林格溶液。樣品用0.22μm的微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液測(cè)定哌侖西平的濃度，按下式計(jì)算各種鹽的角膜透過(guò)系數(shù)。
Papp=ΔQΔt·C0·A·3600]]>
結(jié)果表明哌侖西平有機(jī)酸鹽的角膜透過(guò)系數(shù)顯著提高。
表1眼用哌侖西平聚合物膠束凝膠劑角膜透過(guò)系數(shù)測(cè)定數(shù)據(jù)(n＝6)鹽酸鹽眼用聚合物膠束凝膠劑角膜透過(guò)系數(shù) 1.07±0.082.18±0.29×105(ug/s·cm2)實(shí)施例3哌侖西平聚合物膠束凝膠劑、滴眼劑家兔房水中的藥物動(dòng)力學(xué)40只兔按取樣時(shí)間隨機(jī)分為8組，每組5只兔。每隔兩周更換處方給藥，共2次(分別鹽酸哌侖西平眼用凝膠劑和哌侖西聚合物膠束平眼用凝膠劑)。給藥時(shí)分別在一眼結(jié)膜囊內(nèi)滴配制好的哌侖西平滴眼劑2滴(100μL)，左眼不用藥。于滴眼后的0.5、1、2、4、8、12、24、48h時(shí)，共8個(gè)時(shí)間點(diǎn)，分別抽取右眼的房水0.2ml。取房水0.1mL，加入0.1mL甲醇，漩渦混合，以沉淀蛋白及雜質(zhì)。以16000r/min速度離心10min，取上清液，注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算含量。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)取5只眼，以其平均值作為該時(shí)間點(diǎn)哌侖西平在房水中的濃度。
結(jié)果表明眼用聚合物AUC明顯提高，而其具有一定的緩釋作用，提示哌侖西平自聚合物膠束中緩慢釋放。
表2哌侖西平家兔眼內(nèi)房水中的濃度隨時(shí)間的變化(ng/ml)時(shí)間0.5 124812 24 48鹽酸哌侖西 21.61± 49.08± 60.37± 77.51± 80.23± 34.62± 25.59± 12.34±平凝膠 13.0821.2315.3712.1416.5 10.7611.349.26眼用聚合物17.91± 45.19± 62.33± 99.14± 100.2± 60.32± 28.37± 11.31±膠束凝膠劑 10.1212.8217.3123.1136.1321.3514.2110.24實(shí)施例4本實(shí)施例為眼用環(huán)孢素A聚合物膠束凝膠劑的制備材料與方法L-乳酸、琥珀酸上?；瘜W(xué)試劑公司。N-二甲基氨基吡啶(DMAP)、雙環(huán)己基碳二酰亞胺(DCC)均購(gòu)自Sigma公司。
1.甲基聚乙二醇-聚乳酸多嵌段聚合物(PEO/PLA)的合成1.1二羧基PLA的合成取100g L-乳酸與5g琥珀酸置于雙頸瓶中，充入氮?dú)?，油浴中加熱?90-200℃，24小時(shí)后，停止充氮?dú)?，在真空下保?天。產(chǎn)物溶于丙酮，用蒸餾水沉淀，過(guò)濾，白色產(chǎn)物在真空下干燥過(guò)夜。
1.2甲基聚乙二醇-聚乳酸多嵌段聚合物(PEO/PLA)的縮合取等摩爾的聚乙二醇2000(5mmol)與上述獲得的二羧基PLA溶于70ml無(wú)水二氯甲烷。加入1.3mmolDMAP作為催化劑，13mmol DCC作為偶聯(lián)劑，室溫下充氮?dú)鈹嚢璺磻?yīng)12小時(shí)，過(guò)濾除去副產(chǎn)物二環(huán)己基脲。濾液經(jīng)減壓濃縮，攪拌下加入100ml冰乙醚，得到大量白色沉淀。濾取沉淀，用二氯甲烷溶解、乙醚沉淀，反復(fù)三次。
2.眼用環(huán)孢素A聚合物膠束凝膠劑的制備分別稱(chēng)取50mg環(huán)孢素A和200mgPEO/PLA聚合物置于燒瓶中，加入乙腈50ml，加熱、攪拌至溶解。在60℃、真空下緩慢蒸去乙腈(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀)，樣品用生理鹽水調(diào)整體積至100ml。產(chǎn)品以0.22mm微孔濾膜濾過(guò)除菌，灌裝入凍干瓶中，每瓶2ml，凍干。
取羥丙甲基纖維素K100M適量，按2％的比例使溶于注射用水中，加入苯扎氯胺(萬(wàn)分之一)，滴加1N HCl或NaOH調(diào)節(jié)pH7.0，121℃下滅菌30分鐘作為稀釋劑。
取環(huán)孢素A聚合物膠束凍干品適量，加入稀釋劑中，使溶解，得環(huán)孢素A的濃度為0.05％，即得眼用環(huán)孢素A聚合物膠束。
實(shí)施例5本實(shí)施例為眼用環(huán)孢素A聚合物膠束凝膠劑的刺激性試驗(yàn)試驗(yàn)動(dòng)物取健康家兔，體重2.1-2.4kg，10只，隨機(jī)分為2組，每組5只，即眼用環(huán)孢素A花生油(0.05％)組，眼用環(huán)孢素A聚合物膠束凝膠劑(0.05％)組。采用同體左右側(cè)自身對(duì)比法，左側(cè)給藥，右側(cè)給生理鹽水。
給藥方法每只眼睛滴入0.1ml受試物，然后輕合眼瞼約10秒，每日3次，連續(xù)7天。
眼部觀察單次給藥眼刺激試驗(yàn)，在給藥后1、24、48和72小時(shí)對(duì)眼部進(jìn)行檢查；多次給藥眼刺激試驗(yàn)，每天給藥前以及最后一次給藥后1、24、48和72小時(shí)對(duì)眼部進(jìn)行檢查。結(jié)果表明眼用環(huán)孢素A聚合物膠束凝膠劑幾乎未見(jiàn)刺激性，而眼用環(huán)孢素花生油溶液有明顯的刺激性。
實(shí)施例6眼用環(huán)孢素A聚合物膠束凝膠劑家兔眼內(nèi)藥物分布取健康家兔5只。同體左右側(cè)自身對(duì)比法，左側(cè)給環(huán)孢素A花生油(0.05％)，右側(cè)給環(huán)孢素A聚合物膠束(0.05％)。每日三次，兩天后麻醉處死家兔，取眼房水0.1ml，分離眼球，取結(jié)膜，分離眼邊緣組織、角膜，精密稱(chēng)重，置于-20℃冷凍48小時(shí)，組織取出后在室溫下與0.2mL甲醇渦漩混合5分鐘，16000r/min速度離心10min，取上清液，進(jìn)行液質(zhì)聯(lián)用分析計(jì)算含量。
結(jié)果表明眼用聚合物膠束與油溶液相比，兩者在眼表面的藥物相當(dāng)。
表3 環(huán)孢素A家兔眼組織分布情況(ng/g)結(jié)膜邊緣組織角膜 房水眼用油溶液 0.13±0.08 0.45±0.32 35.23±12.25 43.25±22.18眼用聚合物膠束3.35±1.15 1.00±0.23 32.14±10.38 21.33±13.24凝膠劑實(shí)施例7本實(shí)施例為眼用氯霉素聚合物膠束滴眼液的制備分別稱(chēng)取2g氯霉素和2g mPEG-PLA(50/50)置于燒瓶中，加入乙腈50ml，加熱、攪拌至溶解。在60℃、真空下緩慢蒸去乙腈(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀)，樣品用水調(diào)整體積至100ml。產(chǎn)品以0.22mm微孔濾膜濾過(guò)除菌，灌裝入凍干瓶中，每瓶2ml，凍干，得氯霉素聚合物膠束。
取氯化鈉適量(約1％)，加入苯扎氯胺(萬(wàn)分之一)、依地酸二鈉(萬(wàn)分之四)，滴加1N HCl或NaOH調(diào)節(jié)pH6.5，121℃下滅菌30分鐘作為稀釋劑。
取氯霉素聚合物膠束適量，加入稀釋劑中，使溶解，得氯霉素的濃度為2％，即可。
實(shí)施例8本實(shí)施例為眼用阿昔洛韋聚合物膠束滴眼液的制備分別稱(chēng)取0.2g阿昔洛韋和1g mPEG-PLA(60/40)置于燒瓶中，加入乙腈30ml，加熱、攪拌至溶解。在60℃、真空下緩慢蒸去乙腈(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀)，樣品用水調(diào)整體積至100ml。產(chǎn)品以0.22mm微孔濾膜濾過(guò)除菌，灌裝入凍干瓶中，每瓶2ml，凍干，得阿昔洛韋聚合物膠束。
取氯化鈉適量(約0.9％)，加入苯扎氯胺(萬(wàn)分之一)，滴加1N HCl或NaOH調(diào)節(jié)pH7.2，121℃下滅菌30分鐘作為稀釋劑。
取阿昔洛韋聚合物膠束適量，加入稀釋劑中，使溶解，得阿昔洛韋的濃度為0.2％，即可。
實(shí)施例9本實(shí)施例為眼用地塞米松聚合物膠束滴眼液的制備分別稱(chēng)取0.1g地塞米松和0.5g mPEG-PLA(60/40)置于燒瓶中，加入乙醇20ml，加熱、攪拌至溶解。在60℃、真空下緩慢蒸去乙腈(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀)，樣品用水調(diào)整體積至100ml。產(chǎn)品以0.22mm微孔濾膜濾過(guò)除菌，灌裝入凍干瓶中，每瓶2ml，凍干，得地塞米松聚合物膠束。
取氯化鈉適量(約0.9％)，加入苯扎氯胺(萬(wàn)分之一)，滴加1N HCl或NaOH調(diào)節(jié)pH7.0，121℃下滅菌30分鐘作為稀釋劑。
取地塞米松聚合物膠束適量，加入稀釋劑中，使溶解，得地塞米松的濃度為0.1％，即可。
實(shí)施例10本實(shí)施例為眼用氟聯(lián)苯丙酸聚合物膠束滴眼液的制備分別稱(chēng)取0.3g氟聯(lián)苯丙酸和1g mPEG-PLA(60/40)置于燒瓶中，加入乙醇30ml，加熱、攪拌至溶解。在60℃、真空下緩慢蒸去乙腈(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀)，樣品用水調(diào)整體積至100ml。產(chǎn)品以0.22mm微孔濾膜濾過(guò)除菌，灌裝入凍干瓶中，每瓶2ml，凍干，得氟聯(lián)苯丙酸聚合物膠束。
取氯化鈉適量(約0.9％)，加入苯扎氯胺(萬(wàn)分之一)，滴加1N HCl或NaOH調(diào)節(jié)pH7.4，121℃下滅菌30分鐘作為稀釋劑。
取氟聯(lián)苯丙酸聚合物膠束適量，加入稀釋劑中，使溶解，得氟聯(lián)苯丙酸的濃度為0.3％，即可。
實(shí)施例11本實(shí)施例為眼用毛果蕓香堿聚合物膠束滴眼液的制備分別稱(chēng)取0.1g毛果蕓香堿(游離堿)和0.5g mPEG-PLA(75/25)置于燒瓶中，加入乙腈30ml，加熱、攪拌至溶解。在60℃、真空下緩慢蒸去乙腈(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀)，樣品用水調(diào)整體積至100ml。產(chǎn)品以0.22mm微孔濾膜濾過(guò)除菌，灌裝入凍干瓶中，每瓶2ml，凍干，得毛果蕓香堿聚合物膠束。
取氯化鈉適量(約0.9％)，加入苯扎氯胺(萬(wàn)分之一)，滴加1N HCl或NaOH調(diào)節(jié)pH6.0，121℃下滅菌30分鐘作為稀釋劑。
取毛果蕓香堿聚合物膠束適量，加入稀釋劑中，使溶解，得毛果蕓香堿的濃度為0.1％，即可。
實(shí)施例12本實(shí)施例為眼用噻嗎洛爾聚合物膠束滴眼液的制備分別稱(chēng)取0.25g噻嗎洛爾(游離堿)和0.25g mPEG-PLA(80/20)置于燒瓶中，加入乙腈30ml，加熱、攪拌至溶解。在60℃、真空下緩慢蒸去乙腈(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀)，樣品用水調(diào)整體積至100ml。產(chǎn)品以0.22mm微孔濾膜濾過(guò)除菌，灌裝入凍干瓶中，每瓶2ml，凍干，得噻嗎洛爾聚合物膠束。
取氯化鈉適量(約0.9％)，加入苯扎氯胺(萬(wàn)分之一)，滴加1N HCl或NaOH調(diào)節(jié)pH6.2，121℃下滅菌30分鐘作為稀釋劑。
取噻嗎洛爾聚合物膠束適量，加入稀釋劑中，使溶解，得噻嗎洛爾的濃度為0.25％，即可。
實(shí)施例13本實(shí)施例為眼用硫普羅寧聚合物膠束滴眼液的制備分別稱(chēng)取0.05g硫普羅寧和0.5g mPEG-PLA(80/20)置于燒瓶中，加入乙腈10ml，加熱、攪拌至溶解。在60℃、真空下緩慢蒸去乙腈(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀)，樣品用水調(diào)整體積至100ml。產(chǎn)品以0.22mm微孔濾膜濾過(guò)除菌，灌裝入凍干瓶中，每瓶2ml，凍干，得硫普羅寧聚合物膠束。
取氯化鈉適量(約0.9％)，加入苯扎氯胺(萬(wàn)分之一)、依地酸二鈉(萬(wàn)分之四)，滴加1N HCl或NaOH調(diào)節(jié)pH7.2，121℃下滅菌30分鐘作為稀釋劑。
取硫普羅寧聚合物膠束適量，加入稀釋劑中，使溶解，得硫普羅寧的濃度為0.05％，即可。
權(quán)利要求
1.由兩種聚合物片斷組成的嵌段聚合物作為眼用藥物載體的應(yīng)用。
2.權(quán)利要求1的應(yīng)用，所述嵌段聚合物選自mPEG-PLA嵌段聚合物，mPEG-PGA嵌段聚合物，mPEG-PLGA嵌段聚合物，嵌段聚合物是二嵌段聚合物或多嵌段聚合物。
3.權(quán)利要求2的應(yīng)用，其中所述mPEG-PLA嵌段聚合物是mPEG-PLA二嵌段聚合物或mPEG-PLA多嵌段聚合物。
4.權(quán)利要求1的應(yīng)用，所述作為藥物載體的應(yīng)用是作為適合眼部給藥的藥物載體的應(yīng)用。
5.一種藥物組合物，含有有效量的藥物活性成分和由兩種聚合物片斷組成的嵌段聚合物。
6.權(quán)利要求5的組合物，所述藥物活性成分選自，抗菌藥物，抗病毒藥物，抗炎藥物，影響免疫系統(tǒng)的藥物，治療近視眼藥物，治療干眼癥藥物，治療青光眼藥物，治療白內(nèi)障藥物，所述由兩種聚合物片斷組成的嵌段聚合物是mPEG-PLA嵌段聚合物，mPEG-PGA嵌段聚合物，mPEG-PLGA嵌段聚合物。
7.權(quán)利要求5的組合物，所述治療近視眼藥物為哌侖西平或其藥用鹽、治療干眼癥藥物為環(huán)孢素A，嵌段聚合物是mPEG-PLA嵌段聚合物。
8.權(quán)利要求7的組合物，所述mPEG-PLA嵌段聚合物是mPEG-PLA二嵌段聚合物或mPEG-PLA多嵌段聚合物。
9.權(quán)利要求5的組合物，其中還含有其他適合制備眼藥的藥物可接受的輔料。
10.權(quán)利要求5的組合物，是任何一種眼部給藥的制劑形式。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種眼用嵌段聚合物，該聚合物可以作為眼用藥物載體，該聚合物由兩種聚合物(A、B)片斷組成，其中聚合物A、B片斷分別為親水性聚合物－聚乙二醇甲醚(mPEG)和疏水性聚合物－聚乳酸(PLA)或聚乙醇酸(PGA)或乙交酯－丙交酯聚合物(PLGA)，嵌段聚合物可以是AB型二嵌段聚合物或多嵌段聚合物。
文檔編號(hào)A61P27/00GK1644215SQ200510002209
公開(kāi)日2005年7月27日 申請(qǐng)日期2005年1月17日 優(yōu)先權(quán)日2005年1月17日
發(fā)明者涂家生, 吳建梅 申請(qǐng)人:涂家生, 吳建梅