專利名稱：嘧啶并化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新型的下式的嘧啶并化合物 其中R1選自-H，-(CH2)n-雜環(huán)，烷基，環(huán)烷基，鏈烯基，和炔基，其中n是0、1、2或3，并且雜環(huán)、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基和炔基各自獨(dú)立，任選被最多3個(gè)選自下列的基團(tuán)所取代-OR9，-COR10，-CO2R10，-CONR10R11，-SO2NR10R11，-SO2R10和-CN；R2和R3獨(dú)立地選自
-H，-OR9，-鹵素，-COR10，-CO2R10，-(CH2)n-雜環(huán)，-烷基，-環(huán)烷基，-鏈烯基，和-炔基，其中n是0、1、2或3，并且雜環(huán)、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基和炔基各自獨(dú)立，任選被最多3個(gè)選自下列的基團(tuán)所取代-OR9，鹵素，-COR10和-CO2R10；R4、R5、R6、R7和R8各自獨(dú)立地選自-H，-任選可以被羥基或烷氧基取代的低級烷基，-OR12，-鹵素，-COR13，和-CO2R13；R9選自-H，-COR10，任選可以被羥基或烷氧基取代的低級烷基，任選可以被羥基、烷氧基和低級烷基取代的環(huán)烷基，和任選可以被羥基、烷氧基或低級烷基取代的雜環(huán)；R10和R11各自獨(dú)立地選自-H，任選可以被羥基或烷氧基取代的低級烷基，任選可以被羥基、烷氧基或低級烷基取代的環(huán)烷基，和任選可以被羥基、烷氧基或低級烷基取代的雜環(huán)；R12選自-H，低級烷基和-COR13；且R13選自-H和低級烷基；或其可藥用的鹽。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)式I化合物抑制KDR(含激酶插入結(jié)構(gòu)域的受體)和FGFR(成纖維細(xì)胞生長因子受體)激酶。這些化合物和它們的可藥用鹽具有抗增殖活性，可用于治療或控制癌癥，特別是實(shí)體瘤。另外，這些化合物具有有利的生物利用度曲線。本發(fā)明還涉及包含這種化合物的藥物組合物和治療或控制癌癥的方法，最特別的是治療或控制乳房、肺、結(jié)腸和前列腺瘤。
蛋白激酶是一類調(diào)節(jié)多種細(xì)胞功能的蛋白(酶)。這是通過蛋白底物上特定氨基酸的磷酸化，導(dǎo)致底物蛋白的構(gòu)象變化而完成的。構(gòu)象變化調(diào)節(jié)了底物的活性或其和其他結(jié)合伴侶相互作用的能力。蛋白激酶的酶活性指的是激酶將磷酸根基團(tuán)加到底物上的速度。該活性可以通過，例如測定轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物的底物數(shù)量隨時(shí)間的變化情況來測量。底物的磷酸化發(fā)生在蛋白激酶的活性位點(diǎn)。
酪氨酸激酶是催化三磷酸腺苷(ATP)的末端磷酸根向蛋白底物上的酪氨酸殘基轉(zhuǎn)移的蛋白激酶子集。這些激酶在導(dǎo)致細(xì)胞增殖、分化和移動(dòng)的生長因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的傳播中起重要作用。
例如，成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)和脈管內(nèi)皮生長因子(VEGF)已經(jīng)被公認(rèn)是腫瘤促進(jìn)的血管生成的重要介導(dǎo)物。VEGF通過兩種高親和力受體發(fā)出信號激活內(nèi)皮細(xì)胞，上述兩種受體之一是含激酶插入結(jié)構(gòu)域的受體(KDR)。參見Hennequin L.F.等，J.Med.Chem.2002，45(6)，1300頁。FGF通過FGF受體(FGFR)發(fā)出信號激活內(nèi)皮細(xì)胞。實(shí)體瘤依賴于形成新的血管(血管生成)而生長。因此，對受體FGFR和KDR的抑制干擾了生長信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，因而減緩或防止了血管生成，是預(yù)防和治療實(shí)體瘤的有用試劑。參見Klohs W.E.等，Current Opinion in Biotechnology 1999，10，544頁。
已有幾個(gè)蛋白激酶催化活性的小分子抑制劑的實(shí)例。具體而言，小分子抑制劑典型地通過和蛋白激酶ATP結(jié)合位點(diǎn)(或“活性位點(diǎn)”)緊密相互作用而阻斷底物的磷酸化。參見WO 98/24432和Hennequin L.F.等，J.Med.Chem.2002，45(6)，1300頁。這些化合物中有一些抑制多個(gè)靶對象。例如，WO99/61444(Warner-Lambert)公開了如下通式的雙環(huán)嘧啶和雙環(huán)3，4-二氫嘧啶 這些化合物據(jù)稱抑制細(xì)胞周期蛋白依賴型激酶Cdk1、Cdk2和Cdk4以及生長因子受體酪氨酸激酶PDGFR和FGFR。一些化合物還據(jù)稱抑制Cdk6。
美國專利6,150,373(Hoffmann-La Roche Inc.)公開了如下通式的雙環(huán)氮雜環(huán) 這些化合物據(jù)稱抑制T-細(xì)胞酪氨酸激酶p56lck。
WO 01/29041Al和WO 01/29042(F.Hoffmann-La Roche AG)公開了如下通式的烷基氨基取代的雙環(huán)氮雜環(huán) 和
這些化合物據(jù)稱抑制p38介導(dǎo)的細(xì)胞功能，因而是細(xì)胞增殖抑制劑。
WO 01/64679A1(SmithKline Beecham)公開了如下通式的1，5-二取代的-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-D]嘧啶-2-酮化合物 這些化合物據(jù)稱可用于治療CSBP/P38激酶介導(dǎo)的疾病。
對有效抑制蛋白激酶，特別是FGFR和KDR激酶催化活性以治療一種和多種實(shí)體瘤的易合成的小分子化合物有持續(xù)的需求。特別需要提供對FGFR和KDR具有選擇性的小分子抑制劑。這是因?yàn)橐种贫鄠€(gè)靶對象可能存在潛在的伴隨毒性和其他不希望有的并發(fā)癥。優(yōu)選這樣的小分子抑制劑還具有有利的生物利用度曲線。因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供這樣的化合物和包含這些化合物的藥物組合物。
本發(fā)明涉及能夠選擇性抑制KDR和FGFR活性的新型嘧啶并化合物。這些化合物可用于治療或控制癌癥，特別是治療或控制實(shí)體瘤。
具體而言，本發(fā)明涉及下式的化合物
或其可藥用的鹽，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8定義如下。
本發(fā)明還涉及包含治療有效量的一種或多種式I化合物，和/或其可藥用的鹽，以及可藥用載體或賦形劑的藥物組合物。
本發(fā)明還涉及通過將有效量的式I化合物和/或其可藥用鹽向需要這種治療的人患者給藥，治療或控制實(shí)體瘤，特別是治療或控制乳房、肺、結(jié)腸和前列腺瘤，最特別的是治療或控制乳房或結(jié)腸瘤的方法。
本發(fā)明還涉及制備式I化合物的方法，以及可用于制備式I化合物的新型中間體化合物。
此處使用的如下術(shù)語應(yīng)當(dāng)具有如下定義。
“烷基”表示含有1到10個(gè)、優(yōu)選1到6個(gè)、更優(yōu)選1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈飽和脂肪烴。含有1到6個(gè)碳原子的烷基在此也稱作“低級烷基”。典型的低級烷基包括甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，叔丁基，2-丁基，戊基和己基。此處使用的示例名稱C1-4烷基是指含有1到4個(gè)碳原子的烷基。
“鏈烯基”表示含有2到10個(gè)、優(yōu)選2到6個(gè)碳原子，并且至少含有一個(gè)碳-碳雙鍵的直鏈或支鏈脂肪烴，例如乙烯基，2-丁烯基和3-甲基-丁烯基。
“炔基”表示含有2到10個(gè)、優(yōu)選2到6個(gè)碳原子，并且至少含有一個(gè)碳-碳三鍵的直鏈或支鏈脂肪烴，例如乙炔基和2-丁炔基。
“烷氧基”是指通過氧(-OR)連在分子其余部分上的烷基，例如甲氧基，乙氧基。
“環(huán)烷基”是指含有3到10個(gè)、優(yōu)選3到6個(gè)原子的非芳香族的、部分或完全飽和的環(huán)狀脂肪烴基。環(huán)烷基的實(shí)例包括環(huán)丙基，環(huán)戊基和環(huán)己基。
“有效量”或“治療有效量”是指明顯抑制腫瘤細(xì)胞，包括人腫瘤細(xì)胞系增殖的至少一種式I化合物或其可藥用鹽的量。
“鹵素”是指氟，氯，溴或碘，優(yōu)選氯或氟。
“雜原子”是指選自N、O和S的原子，優(yōu)選N。如果雜原子是N，其可以以-NH-或-N-低級烷基-形式存在。如果雜原子是S，則可以以S、SO或SO2形式存在。
“雜環(huán)”或“雜環(huán)基”是指含有1到4個(gè)選自氮、氧或硫的雜原子或者它們的組合的3元到10元飽和或部分不飽和的非芳香族一價(jià)環(huán)狀基。優(yōu)選的雜環(huán)實(shí)例為哌啶，哌嗪，吡咯烷和嗎啉。在雜環(huán)的雜原子是硫的情況下，硫原子可以被一個(gè)或兩個(gè)氧原子取代，即可以是基團(tuán)＞S＝O或＞S(＝O)2。優(yōu)選的含有＞S(＝O)2基的雜環(huán)是1，1-二氧代-四氫噻吩。
“羥基”是表示存在一價(jià)OH基團(tuán)的詞頭。
“IC50”是指抑制50％具體測量活性所需的本發(fā)明特定化合物的濃度。其中如以下實(shí)施例41和42中所述，可以測量IC50。
“可藥用的鹽”是指保持了通式I化合物生物效力和性質(zhì)的常規(guī)酸加成鹽或堿加成鹽，這些鹽是從合適的無毒有機(jī)或無機(jī)酸或者有機(jī)或無機(jī)堿形成的。酸加成鹽的實(shí)例包括那些衍生自無機(jī)酸的鹽，所述無機(jī)酸如鹽酸，氫溴酸，氫碘酸，硫酸，氨基磺酸，磷酸和硝酸，以及衍生自有機(jī)酸的鹽，所述有機(jī)酸如對甲苯磺酸，水楊酸，甲磺酸，草酸，琥珀酸，檸檬酸，蘋果酸，乳酸，富馬酸等。堿加成鹽的實(shí)例包括衍生自銨，鉀，鈉和氫氧化季銨，例如氫氧化四甲基銨的鹽。將藥物化合物(例如藥物)化學(xué)改性成鹽是藥物化學(xué)家熟知的技術(shù)，其目的是獲得改善的物理和化學(xué)穩(wěn)定性，吸濕性，流動(dòng)性和化合物的溶解度。參見例如H.Ansel等，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，(第6版，1995)196和1456-1457頁。
“可藥用的”，例如可藥用的載體、賦形劑等，是指藥學(xué)上可接受的，并且對具體化合物給藥的對象基本上無毒。
“取代的”如在取代的烷基中，是指取代可以發(fā)生在一個(gè)或多個(gè)位置上，并且除非另外聲明，每個(gè)取代位點(diǎn)上的取代基都是獨(dú)立地選自所規(guī)定的選項(xiàng)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及下式的化合物 其中R1選自-H，-(CH2)n-雜環(huán)，烷基，環(huán)烷基，鏈烯基，和炔基，其中n是0、1、2或3，并且雜環(huán)、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基和炔基各自獨(dú)立，任選被最多3個(gè)選自下列的基團(tuán)所取代-OR9，-COR10，-CO2R10，-CONR10R11，-SO2NR10R11，-SO2R10和-CN；R2和R3獨(dú)立地選自
-H，-OR9，-鹵素，-COR10，-CO2R10，-(CH2)n-雜環(huán)，-烷基，-環(huán)烷基，-鏈烯基，和炔基，其中n是0、1、2或3，并且雜環(huán)、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基和炔基各自獨(dú)立，任選被最多3個(gè)選自下列的基團(tuán)所取代-OR9，-鹵素，-COR10和-CO2R10；R4、R5、R6、R7和R8各自獨(dú)立地選自-H，-任選可以被羥基或烷氧基取代的低級烷基，-OR12，-鹵素，-COR13，和-CO2R13；R9選自-H，-COR10，任選可以被羥基或烷氧基取代的低級烷基，任選可以被羥基、烷氧基和低級烷基取代的環(huán)烷基，和任選可以被羥基、烷氧基或低級烷基取代的雜環(huán)；R10和R11各自獨(dú)立地選自-H，任選可以被羥基或烷氧基取代的低級烷基，任選可以被羥基、烷氧基或低級烷基取代的環(huán)烷基，和任選可以被羥基、烷氧基或低級烷基取代的雜環(huán)；R12選自-H，低級烷基和-COR13；且R13選自-H和低級烷基；或其可藥用的鹽。
此處公開的并且為上述式I所涵蓋的化合物可以表現(xiàn)出互變異構(gòu)現(xiàn)象或結(jié)構(gòu)異構(gòu)現(xiàn)象。意指本發(fā)明包括這些化合物的任何互變異構(gòu)或結(jié)構(gòu)異構(gòu)形式，或者這些形式的混合物(例如外消旋混合物)，并且不限于上面式I所述的任何一種互變異構(gòu)或結(jié)構(gòu)異構(gòu)形式。
在式I化合物的優(yōu)選實(shí)施方案中，R1選自環(huán)烷基，-OH取代的環(huán)烷基，雜環(huán)，低級烷基，-OH取代的低級烷基。
在式I化合物的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，R2是-H或-OCH3。
在式I化合物的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，R3是-H、F或-OCH3。
在式I化合物的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，R2和R3都是-H。
在式I化合物的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，R4、R5和R7都是-H。
在式I化合物的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，R6選自O(shè)R12，優(yōu)選-OCH3，低級烷基，優(yōu)選甲基，或者鹵素，優(yōu)選F。
在式I化合物的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，R8是-H或-F。
在式I化合物的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，R9、R10和R11獨(dú)立地選自-H，低級烷基，或者被羥基取代的低級烷基，最優(yōu)選為-H。
在式I化合物的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，R12和R13獨(dú)立地選自-H和低級烷基，最優(yōu)選為-H。
在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式I化合物，其中R1選自-H，被-OH，COR10，-CN，-CONH2取代的-低級烷基，-(CH2)n-雜環(huán)，被-COR10，-CO2R10，(＝O)2取代的-(CH2)n-雜環(huán)，環(huán)烷基，和被-OH取代的環(huán)烷基；R2是H或-OCH3；
R3是H、F或-OCH3；R4、R5和R7是H；R6是-OCH3或低級烷基；R8是H或F，優(yōu)選H；R10是被烷氧基取代的低級烷基；且n是0或1，優(yōu)選0。
如下化合物是依照本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案1-環(huán)己基-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例1e)，3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-1-哌啶-4-基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例2b)，1-(反式-4-羥基-環(huán)己基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例3c)，3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-1-哌啶-3-基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例4b)，1-環(huán)戊基-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例5)，1-(1，1-二氧代-四氫噻吩-3-基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例6)，3-[3-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-7-苯基氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-哌啶-1-甲醛(實(shí)施例7)，3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-1-(四氫-吡喃-4-基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例8)，(±)-1-(反式-3-羥基-環(huán)戊基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例9d)，(±)-順式-1-(3-羥基-環(huán)戊基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例10e)，(R)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-1-(四氫-呋喃-3-基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例11b)，(R)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-1-吡咯烷-3-基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例12)，(±)-7-(4-氟-苯基氨基)-1-(反式-3-羥基-環(huán)戊基)-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例13c)，(±)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-1-(反式-3-羥基-環(huán)戊基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例14d)，(S)-(+)-1-(2-羥基-1-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例15d)，(S)-(+)-7-(4-氟-苯基氨基)-1-(2-羥基-1-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例16)，3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-1-(反式-4-羥基-環(huán)己基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例17d)，3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-1-(反式-4-羥基-環(huán)己基)-7-(3，4-二甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例18)，3-(4-甲氧基-苯基)-1-(反式-4-羥基-環(huán)己基)-7-(3，4-二甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例19c)，3-(4-甲氧基-苯基)-1-(反式-4-羥基-環(huán)己基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例20b)，(S)-(+)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-(4-氟-苯基氨基)-1-(2-羥基-1-甲基-乙基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例21b)，(S)-(+)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-1-(2-羥基-1-甲基-乙基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例22)，(R)-(-)-1-(2-羥基-1-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例23d)，3-(4-甲氧基-苯基)-1-甲基-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例24b)，1-(2-甲氧基-乙氧甲基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例25)，3-[-3-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-丙腈(實(shí)施例26)，(+)-(1R，3R)-1-(3-羥基-環(huán)戊基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例27f)，(R)-1-(2-羥基-丙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例28d)，(-)-(1S，3S)-1-(3-羥基-環(huán)戊基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例29h)，3-[-3-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-丙酰胺(實(shí)施例30)，(S)-(+)-1-(2-羥基-丙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例31d)，1-(順式-3，5-二羥基-環(huán)己基)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-(4-甲氧基苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例32f)，1-(順式-3，5-二羥基-環(huán)己基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例33c)，1-(順式-3，5-二羥基-環(huán)己基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(4-氟-3-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例34f)，1-(順式-3，5-二羥基-環(huán)己基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例35b)，1-(順式-3，5-二羥基-環(huán)己基)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例36b)，1-(順式-3，5-二羥基-環(huán)己基)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-(4-氟-3-甲氧基苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例37b)，(R)-3-(4-乙基-苯基)-7-(4-氟-苯基氨基)-1-(2-羥基-1-甲基-乙基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例38g)，(±)-3-(4-乙基-苯基)-7-(4-氟-苯基氨基)-1-(反式-3-羥基-環(huán)戊基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例39d)，和1-環(huán)丙基甲基-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例40)。
本發(fā)明化合物對FGF和KDR激酶是選擇性的。這些化合物可用于治療或控制癌癥，特別是治療或控制實(shí)體瘤，具體地有乳房、肺、結(jié)腸和前列腺瘤。這些化合物對細(xì)胞膜有高度滲透性，因此具有有利的生物利用度曲線，例如改善的口服生物利用度。
在選擇性的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含至少一種式I化合物，和/或其可藥用的鹽，以及可藥用載體或賦形劑的藥物組合物。
這些藥物組合物可以口服，例如以片劑、包衣片劑、糖錠劑、硬或軟明膠膠囊、溶液劑、乳劑或懸浮劑形式口服。還可以進(jìn)行直腸給藥，例如以栓劑形式，或者可以腸胃外給藥，例如以注射液形式。
可以用本領(lǐng)域已知的方法制造包含式I化合物和/或其可藥用鹽的本發(fā)明藥物組合物，例如通過常規(guī)的混合，膠囊化，溶解，造粒，乳化，包埋，制糖錠或凍干方法。這些藥物制劑可以和治療惰性的無機(jī)或有機(jī)載體配方?？梢允褂萌樘?，玉米淀粉或其衍生物，滑石，硬脂酸或其鹽作為用于片劑、包衣片劑、糖錠劑和硬明膠膠囊的這種載體。軟明膠膠囊的合適載體包括植物油，蠟和脂肪。根據(jù)活性物質(zhì)的性質(zhì)，軟明膠膠囊通常不需要載體。制造溶液或糖漿的合適載體為水，多元醇，蔗糖，轉(zhuǎn)化糖和葡萄糖。注射劑的合適載體為水，醇，多元醇，甘油，植物油，磷脂和表面活性劑。栓劑的合適載體為天然或硬化油，蠟，脂肪和半液體多元醇。
這些藥物制劑還可以包含防腐劑，增溶劑，穩(wěn)定劑，濕潤劑，乳化劑，甜味劑，著色劑，食用香料，用于改變滲透壓的鹽，緩沖劑，包衣材料或抗氧化劑。還可以包含其他有治療價(jià)值的物質(zhì)，包括式I化合物以外的其他活性成分，特別是其他腫瘤藥劑。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本發(fā)明還涉及通過將有效量的式I化合物和/或其鹽向需要這種治療的人患者給藥，用以治療癌癥，特別是乳房、結(jié)腸、肺或前列腺癌的式I化合物的用途。
如上所述，本發(fā)明化合物，包括式I化合物和/或其可藥用鹽，可用于治療或控制細(xì)胞增殖失調(diào)，特別是腫瘤失調(diào)。這些化合物和包含所述化合物的配方在實(shí)體瘤，例如乳房、結(jié)腸、肺和前列腺瘤的治療或控制中特別有用。因此，本發(fā)明還涉及通過將有效量的式I化合物和/或其可藥用鹽向需要這種治療的患者給藥來治療實(shí)體瘤的方法。
依照本發(fā)明的化合物的治療有效量是指有效預(yù)防、減輕或消除疾病癥狀或者延長治療對象生存時(shí)間的化合物的量。治療有效量的確定屬于本領(lǐng)域的技術(shù)范疇。
本發(fā)明化合物的治療有效量或劑量可以在寬的限度內(nèi)變化，并且可以用本領(lǐng)域已知的方法測定。在各個(gè)特定案例中這種劑量將根據(jù)個(gè)體需要而調(diào)整，包括給藥的具體化合物，給藥途徑，治療條件，以及受治患者。通常，對于體重約70-75kg的成年人而言，口服或腸胃外給藥的每日劑量為約10mg到約10,000mg，優(yōu)選約200mg到約1,000mg，最優(yōu)選300mg到600mg應(yīng)當(dāng)是合適的，盡管遵醫(yī)囑可以超過其上限。每日劑量可以單劑量給藥，也可以分劑量給藥，或者對于腸胃外給藥，可以連續(xù)灌輸給藥。
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及制備式I化合物的方法，該方法包括將下式化合物 其中X是Cl或SO2CH3，且R1、R4、R5、R6、R7和R8如此前所定義，和下式的苯胺衍生物反應(yīng) 其中R2和R3如此前所定義，以獲得下式化合物
并且如果需要，將式I化合物轉(zhuǎn)化成可藥用的鹽。
本發(fā)明還涉及可用于合成式I化合物的如下新型中間體4-[3-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-7-苯基氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯(實(shí)施例2a)，1-[反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例3b)，3-[3-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-7-苯基氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯(實(shí)施例4a)，(±)-3-順式-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例10d)，(R)-2-甲硫基-4-(四氫-呋喃-3-基氨基)-嘧啶-5-羧酸乙酯(實(shí)施例11a)，(±)-4-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基氨基]-2-甲硫基-嘧啶-5-甲醛(實(shí)施例13a)，(±)-1-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-甲硫基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例13b)，(±)-[3-反式-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-{5-[(2-氟-4-甲氧基-苯基氨基)-甲基]-2-甲硫基-嘧啶-4-基}-胺(實(shí)施例14b)，(±)-1-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-甲硫基-3，4-二氫-IH-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例14c)，
(S)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例15c)，1-[反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例17c)，1-[反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例19a)，1-[反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(3，4-二甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例19b)，1-[反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例20a)，(S)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例21a)，(R)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例23c)，3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例24a)，(+)-(1R，3R)-4-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基氨基]-2-甲硫基-嘧啶-5-羧酸乙酯(實(shí)施例27d)，(-)-(1R，3R)-1-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例27e)，(R)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-丙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例28c)，(-)-(1S，3S)-4-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基氨基]-2-甲硫基-嘧啶-5-羧酸乙酯(實(shí)施例29d)，(-)-(1S，3S)-4-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基氨基]-2-甲硫基-嘧啶-5-甲醛(實(shí)施例29e)，(-)-(1S，3S)-1-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-甲硫基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例29f)，(-)-(1S，3S)-1-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例29g)，
(S)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-丙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例31c)，1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例32d)，1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例32e)，1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例33a)，1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例33b)，1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(4-氟-3-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例34e)，1-{順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例35a)，1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例36a)，1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-(4-氟-3-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例37a)，(2，4-二氯-嘧啶-5-基甲基)-(4-乙基-苯基)-胺(實(shí)施例38c)，(R)-3-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基甲基)-1-(4-乙基-苯基)-脲(實(shí)施例38d)，(R)-1-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-乙基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例38e)，(R)-1-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-3-(4-乙基-苯基)-7-(4-氟-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例38f)，(±)-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-{2-氯-5-[(4-乙基-苯基氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-胺(實(shí)施例39a)，
(±)-1-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-7-氯-3-(4-乙基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例39b)，和(±)-1-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-乙基-苯基)-7-(4-氟-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例39c)。
本發(fā)明化合物可以用任何常規(guī)的方式制備。在實(shí)施例中提供了合成這些化合物的合適方法。通常，可以按照下面描述的合成路線來制備式I化合物。
方案1
作為選擇，可以用如下途徑獲得式I化合物方案2 作為選擇，還可以通過如下途徑獲得式I化合物。
方案3 作為選擇，可以通過如下途徑從化合物4獲得化合物6方案4
還可以通過如下途徑從化合物4獲得式I化合物方案5 實(shí)施例如下實(shí)施例舉例說明了本發(fā)明優(yōu)選的合成化合物的方法和配方。
實(shí)施例1實(shí)施例1a5-(羥甲基)-1，3-二氫嘧啶-2，4-二酮 向裝備了機(jī)械攪拌器、溫度計(jì)、冷凝器和氮?dú)馊肟谄鹋萜鞯?L三口燒瓶中加入尿嘧啶(185.0g，1650mmol)(Aldrich)、低聚甲醛(61.50g，2050mmol甲醛)(Aldrich)和氫氧化鉀(86.9％，59.95g，928.5mmol)(Aldrich)的水(1.445L)溶液。將混合物在50-52℃下攪拌68小時(shí)。TLC分析顯示反應(yīng)完全。在60℃/14mmHg下濃縮至約500mL體積后，殘余物用丙酮(500mL)稀釋。將所得到的沉淀物過濾收集，用丙酮洗滌并抽氣干燥，然后在50℃/25mmHg下得到粗制的5-(羥甲基)-1，3-二氫嘧啶-2，4-二酮(250g)白色固體。將合并的母液和洗滌液濃縮至約100mL體積，并且加入鹽酸羥胺(27.52g，396.0mmol，Aldrich)的水(100mL)溶液。將所得到的沉淀物過濾收集，用丙酮洗滌并抽氣干燥，得到第二批粗制的5-(羥甲基)-1，3-二氫嘧啶-2，4-二酮(34g)白色固體。將兩批合并(244g，過重4％)，直接用于下一步。
實(shí)施例1b2，4-二氯-5-(氯甲基)嘧啶
向裝備了機(jī)械攪拌器、加料漏斗、溫度計(jì)和氮?dú)馊肟谄鹋萜鞯?L三口燒瓶中加入粗制的5-(羥甲基)-1，3-二氫嘧啶-2，4-二酮(50.25g，約340mmol)(來自上述實(shí)施例1a)、磷酰氯(164.8mL，1768mmol)(Aldrich)和甲苯(100mL)。在10分鐘內(nèi)向混合物中加入N，N-二異丙基乙胺(184.7mL，1060mmol)(Aldrich)，同時(shí)用水浴將混合物溫度保持在70℃以下。加完后，移走冷卻浴，將混合物加熱回流(113-116℃)1小時(shí)。通過蒸餾除去一些甲苯(約35mL)，以將反應(yīng)混合物溫度升高到120℃，并將混合物在120-123℃下攪拌5小時(shí)。TLC分析顯示反應(yīng)完全。在讓混合物冷卻至室溫過夜后，在67分鐘內(nèi)將混合物小心地加入到攪拌著的水(200mL)和乙酸異丙酯(150mL)的兩相混合物中，同時(shí)用冰-水浴將溫度保持在17℃至21℃之間。使用臨時(shí)的冰-水冷卻浴，在18-21℃下攪拌80分鐘之后，將混合物用甲苯(4×150mL)萃取。將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鈉)，過濾然后減壓濃縮至干，得到粗制的2，4-二氯-5-(氯甲基)嘧啶白色固體，該固體含有極性雜質(zhì)。(產(chǎn)量56.1g，以尿嘧啶計(jì)算的產(chǎn)率為83.6％)。
將粗制的2，4-二氯-5-(氯甲基)嘧啶(70.39g)溶解在二氯甲烷(80mL)中，將所得到的溶液通過TLC級硅膠(100g)墊過濾。然后將硅膠用二氯甲烷∶己烷(1L，7∶3)洗滌，將合并的濾液和洗滌液減壓濃縮至干，得到2，4-二氯-5-(氯甲基)嘧啶白色固體。(產(chǎn)量58.77g，回收率83.5％，以尿嘧啶計(jì)算的總產(chǎn)率為69.8％)。
實(shí)施例1c2，4-二氯-5-(碘甲基)嘧啶 向裝備有磁力攪拌器、冷凝器和氮?dú)馊肟谄鹋萜鞯?00mL圓底燒瓶中裝入碘化鈉(38.5g，256.9mmol)(Aldrich)和丙酮(300mL)。在獲得澄清溶液后，一次性加入2，4-二氯-5-(氯甲基)嘧啶(50.0g，253.2mmol)(來自上述實(shí)施例1b)。在室溫下攪拌20分鐘后，將混合物加熱至回流15分鐘。NMR分析表明轉(zhuǎn)化率為98％。待冷卻到室溫后，用中度燒結(jié)的玻璃漏斗過濾除去所得到的沉淀物(氯化鈉)，并用丙酮洗滌。將合并的濾液和洗滌液濃縮至約重75g。將所得到的2，4-二氯-5-(碘甲基)嘧啶的丙酮濃縮溶液用甲苯(20mL)稀釋。在濃縮至約85g重以除去殘余丙酮后，將該2，4-二氯-5-(碘甲基)嘧啶的甲苯濃縮溶液直接用于下一步驟。
實(shí)施例1d[(2，4-二氯嘧啶-5-基)甲基](4-甲氧基苯基)胺 向裝備有磁力攪拌器、溫度計(jì)和氮?dú)馊肟谄鹋萜鞯?00mL三口燒瓶中裝入得自上一步驟的2，4-二氯-5-(碘甲基)嘧啶(85g，約253.2mmol)(來自上述實(shí)施例1c)的甲苯溶液(13.7mL)和甲苯(96.3mL，即共約110mL甲苯)。在用冰-水浴冷卻后，加入對-茴香胺(31.18g，253.2mmol)(Aldrich)。在攪拌30分鐘后，在8分鐘內(nèi)滴加氫氧化鈉(13.54g，331.7mmol)的水(50mL)溶液，同時(shí)將反應(yīng)混合物溫度保持在10-15℃。加入己烷(55mL)，將混合物在10-15℃下攪拌45分鐘，然后在室溫下攪拌22小時(shí)，得到漿液。上清液的TLC分析表明反應(yīng)完全。將漿液用水(100mL)稀釋，過濾收集固體，用冷水和冷(-50℃)甲醇(100mL)洗滌并抽氣干燥，得到[(2，4-二氯嘧啶-5-基)甲基](4-甲氧基苯基)胺灰白色固體，HPLC分析的純度為97％。(產(chǎn)量59.87g，83.2％)。
實(shí)施例1e1-環(huán)己基-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮
將[(2，4-二氯嘧啶-5-基)甲基](4-甲氧基苯基)胺(200mg，0.70mmol)(來自上述實(shí)施例1d)的無水四氫呋喃溶液(24mL)用正丁基鋰(1.6M己烷溶液，0.53mL，0.84mmol)(Aldrich)在-78℃下進(jìn)行處理。隨后加入異氰酸環(huán)己酯(90μL，88mg，0.70mmol)(Aldrich)。攪拌所得到的混合物并在2小時(shí)內(nèi)緩慢升溫到室溫。然后將反應(yīng)混合物在乙酸乙酯和鹽水之間分配。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，殘余物用硅膠柱色譜法純化，用0-60％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫。將通過該步純化得到的中間體溶解在苯胺中(2mL)(Aldrich)，加入催化量的4-(二甲基氨基)吡啶(Aldrich)，然后將混合物在100℃下加熱。在攪拌過夜后，將混合物冷卻，用硅膠柱色譜法純化，用0-60％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫。將該步純化獲得的固體溶解在四氫呋喃中，然后用過量的戊烷沉淀，得到1-環(huán)己基-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮米色固體。(產(chǎn)量78mg，26％)。C25H27N5O2[M+]的HRMS m/z計(jì)算值429.2165。實(shí)測429.2165。IC50(KDR)＝0.025μM，IC50(FGFR)＝0.049μM。
實(shí)施例2a4-[3-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-7-苯基氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯
在0℃下用20％的光氣的甲苯溶液(1.47mL，2.99mmol)(Fluka)處理1-N-叔丁氧羰基-4-氨基哌啶(300mg，1.49mmol)(Astatech)和三乙胺(840μL，606mg，5.99mmol)(Aldrich)的無水二氯甲烷溶液(10mL)。在攪拌30分鐘后，將混合物在0.5M鹽酸水溶液和二氯甲烷之間分配。然后收集有機(jī)層，用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥并濃縮。將殘余物溶解在乙醚(約6mL)中，將所得到的溶液過濾并濃縮。然后將殘余物溶解在少量無水四氫呋喃(約3mL)中，并通過套管轉(zhuǎn)移到-78℃的[(2，4-二氯嘧啶-5-基)甲基](4-甲氧基苯基)胺(300mg，1.06mmol)(來自上述實(shí)施例1d)和正丁基鋰(2.5M己烷溶液，0.51mL，1.27mmol)的無水四氫呋喃(20mL)溶液中。讓反應(yīng)混合物緩慢升溫到室溫并攪拌4小時(shí)，之后在乙酸乙酯和鹽水之間分配。然后收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，殘余物用硅膠柱色譜純化，用0-60％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫。然后將該步純化得到的產(chǎn)物溶解于苯胺(2mL)(Aldrich)，將所得到的溶液在80℃下加熱12小時(shí)。然后冷卻反應(yīng)混合物，并用硅膠柱色譜純化，用0-70％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫，得到產(chǎn)物。在用過量的戊烷沉淀出THF后，分離出4-[3-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-7-苯基氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯灰白色固體。(產(chǎn)量74mg，13％)。
C29H34N6O4[M+]的HRMS m/z計(jì)算值530.2641。實(shí)測530.2640。
實(shí)施例2b3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-1-哌啶-4-基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮
在0℃下將4-[3-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-7-苯基氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯(70mg，0.13mmol)(來自上述實(shí)施例2a)溶解在含有100μL水的50％的三氟乙酸的二氯甲烷(6mL)溶液中。在攪拌1.5小時(shí)后，將混合物在乙酸乙酯和1N氫氧化鈉水溶液之間分配，通過加入固體氫氧化鈉將水層的pH調(diào)節(jié)到12。然后將有機(jī)層用水洗滌，硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。通過用過量的戊烷沉淀出四氫呋喃將粗制原料純化，得到3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-1-哌啶-4-基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮灰白色固體。(產(chǎn)量42mg，75％)。
C24H27N6O2[(M+H)+]的HRMS m/z計(jì)算值431.2190。實(shí)測431.2190。
實(shí)施例3a反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己胺 向反式-4-氨基環(huán)己醇(5.0g，43.4mmol)(TCI US)的二氯甲烷(100mL)溶液中加入咪唑(14.78g，0.22mol)(Aldrich)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物(19.63g，0.13mol)(Avocardo Research Chemicals)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1天，然后減壓濃縮。將殘余物在乙酸乙酯(100mL)和水(100mL)之間分配。有機(jī)層用1N氫氧化鈉溶液、水和鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過濾并濃縮，得到反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己胺。(產(chǎn)量7.62g，76.5％)。
實(shí)施例3b1-[反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 將反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己胺(350mg，1.53mmol)(來自上述實(shí)施例3a)的二氯甲烷溶液(10mL)用三乙胺(850μL，630mg，6.10mmol)(Aldrich)處理，然后在0℃下用光氣的甲苯(20％，1.49mL，3.05mmol)(Fluka)溶液處理。在攪拌30分鐘后，將反應(yīng)混合物在二氯甲烷和0.5M鹽酸水溶液之間分配。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮。殘余物溶解在乙醚中，將所得到的溶液過濾并濃縮。然后將獲得的殘余物溶解在少量無水四氫呋喃(約3mL)中，并通過套管轉(zhuǎn)移到-78℃的(2，4-二氯-嘧啶-5-基-甲基)-(4-甲氧基-苯基)-胺(340mg，1.19mmol)(來自上述實(shí)施例1d)和正丁基鋰(2.5M的己烷溶液，0.61mL，1.52mmol)(Aldrich)的無水四氫呋喃(25mL)溶液中。讓反應(yīng)混合物緩慢升溫到室溫并攪拌2小時(shí)15分鐘。將混合物在乙酸乙酯和鹽水之間分配。分離有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，殘余物用硅膠柱色譜純化，用0-60％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫。將從該步純化獲得的中間體溶解在苯胺(3mL)(Aldrich)中，并將所得到的溶液在80℃下加熱12小時(shí)。然后將混合物冷卻并用硅膠柱色譜純化，用0-50％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫，得到產(chǎn)物。在將乙醚用過量戊烷沉淀除去后，分離出1-[反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮灰白色固體。(產(chǎn)量139mg，21％)。C31H42N5O3Si[(M+H)+]的HRMS m/z計(jì)算值560.3052。實(shí)測560.3056。
實(shí)施例3c1-(反式-4-羥基-環(huán)己基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 在0℃下將1-[反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(來自上述實(shí)施例3b)(139mg，0.25mmol)溶解在含有水(330μL)的50％的三氟乙酸的二氯甲烷(5mL)溶液中。在攪拌1.5小時(shí)后，將反應(yīng)混合物在乙酸乙酯和1N氫氧化鈉水溶液之間分配，并通過加入固體氫氧化鈉將水層的pH調(diào)節(jié)到12。然后將有機(jī)層用水洗滌，硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，得到粗產(chǎn)物。用硅膠柱色譜純化，0-100％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫，接著用過量戊烷沉淀出四氫呋喃，得到1-(反式-4-羥基-環(huán)己基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮灰白色固體。(產(chǎn)量72mg，65％)。
C25H27N5O3[M+]的HRMS m/z計(jì)算值445.2114。實(shí)測445.2122。
實(shí)施例4a3-[3-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-7-苯基氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯
在0℃下將1-N-叔丁氧羰基-3-氨基哌啶(350mg，1.75mmol)(Astatech)和三乙胺(710mg，970μL，7.00mmol)(Aldrich)在二氯甲烷(10mL)中的混合物用20％的光氣的甲苯溶液(1.7mL，3.47mmol)(Fluka)處理。在攪拌30分鐘后，過濾反應(yīng)混合物，將濾液濃縮至小體積。加入苯(5mL)，再次過濾所得到的混合物并濃縮。將殘余物溶解在少量無水四氫呋喃(約3mL)中，并通過套管轉(zhuǎn)移到-78℃的(2，4-二氯-嘧啶-5-基甲基)-(4-甲氧基苯基)-胺(340mg，1.19mmol)(來自上述實(shí)施例1d)和正丁基鋰(2.5M己烷溶液，0.70mL，1.75mmol)(Aldrich)的無水四氫呋喃(20mL)溶液中。讓所得到的混合物緩慢升溫到室溫并攪拌過夜。次日早上將反應(yīng)混合物在乙酸乙酯和水之間分配。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，殘余物用硅膠柱色譜純化，用0-70％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫。將該步純化的產(chǎn)物溶解在苯胺(3mL)中，并將混合物在80℃下加熱12小時(shí)。然后將混合物冷卻并用硅膠柱色譜純化，使用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液到0-50％四氫呋喃的乙酸乙酯溶液梯度洗脫，得到產(chǎn)物。在用過量戊烷沉淀出THF后，分離出3-[3-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-7-苯基氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯灰白色固體。(產(chǎn)量70mg，10％)。C29H34N6O4[(M+H)+]的HRMS m/z計(jì)算值531.2715。實(shí)測531.2725。
實(shí)施例4b3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-1-哌啶-3-基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮
在0℃下將3-[3-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-7-苯基氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯(70mg，0.13mmol)(來自上述實(shí)施例4a)溶解在含有水(300μL)的50％的三氟乙酸的二氯甲烷溶液(5mL)中。在攪拌1.5小時(shí)后，將反應(yīng)混合物在乙酸乙酯和1N氫氧化鈉水溶液之間分配并通過加入固體氫氧化鈉將水層的pH調(diào)節(jié)到12。然后將有機(jī)層用水洗滌，硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，得到粗產(chǎn)物。將該原料溶解在四氫呋喃中并用過量戊烷沉淀，得到3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-1-哌啶-3-基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮灰白色固體。(產(chǎn)量47mg，84％)。
C24H27N6O2[(M+H)+]的HRMS m/z計(jì)算值431.2190。實(shí)測431.2193IC50(KDR)＝0.107μM，IC50(FGFR)＝0.158μM。
實(shí)施例51-環(huán)戊基-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 將(2，4-二氯-嘧啶-5-基-甲基)-(4-甲氧基苯基)-胺(350mg，1.23mmol)(來自上述實(shí)施例1d)的無水四氫呋喃溶液(30mL)用正丁基鋰(2.5M己烷溶液，590μL，1.48mmol)(Aldrich)在-78℃下進(jìn)行處理，然后加入異氰酸環(huán)戊酯(170μL，164mg，1.48mmol)(Aldrich)，讓溶液緩慢升溫到室溫并攪拌5小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物在乙酸乙酯和鹽水之間分配，收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，將殘余物在硅膠柱上純化，用0-50％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫。將該步純化的中間體溶解在苯胺(3mL)(Aldrich)中，加入催化量的4-(二甲基氨基)吡啶(Aldrich)并將所得到的溶液在100℃下攪拌17小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物冷卻并用硅膠柱色譜純化，用0-50％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫，得到產(chǎn)物。在用過量戊烷沉淀出THF后，分離出1-環(huán)戊基-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮灰白色固體。(產(chǎn)量49mg，9％)。
C24H25N5O2[M+]的HRMS m/z計(jì)算值415.2008。實(shí)測415.2014。
實(shí)施例61-(1，1-二氧代-四氫噻吩-3-基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 在0℃下將1，1-二氧四氫噻吩-3-基胺(200mg，1.48mmol)(Salor)和三乙胺(590mg，820μl，5.9mmol)(Aldrich)在二氯甲烷(9mL)中的混合物用20％的光氣的甲苯溶液(1.80mL，3.70mmol)(Fluka)處理。在30分鐘后，過濾混合物并將濾液濃縮至小體積。加入苯(5mL)，再次過濾混合物，將濾液加入到(2，4-二氯-嘧啶-5-基-甲基)-(4-甲氧基苯基)-胺(230mg，1.43mmol)(來自上述實(shí)施例1d)的苯(5mL)溶液中。將所得到的溶液加熱回流過夜。次日早上減壓蒸發(fā)溶劑，殘余物用硅膠柱色譜純化，用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫。將該步純化分離出的中間體溶解在無水四氫呋喃(15mL)中，在-78℃下將所得到的溶液冷卻并用正丁基鋰(2.5M己烷溶液，330μL，0.82mmol)(Aldrich)處理。讓混合物緩慢升溫到室溫，攪拌5.5小時(shí)，然后在乙酸乙酯和鹽水之間分配。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，并將所得到的殘余物溶解在苯胺(3mL)(Aldrich)中。加入催化量的4-(二甲基氨基)吡啶(Aldrich)并將混合物在75℃下攪拌14小時(shí)。然后將混合物冷卻并用硅膠柱色譜純化，用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫，得到產(chǎn)物。在用過量戊烷沉淀出二氯甲烷后，分離出1-(1，1-二氧代-四氫噻吩-3-基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮灰白色固體。(產(chǎn)量152mg，23％)。
C23H23N5O4S[M+]的HRMS m/z計(jì)算值465.1471。實(shí)測465.1477。IC50(KDR)＝0.075μM，IC50(FGPR)＝0.226μM。
實(shí)施例73-[3-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-7-苯基氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-哌啶-1-甲醛 在室溫下將3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-1-哌啶-3-基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(95mg，0.22mmol)(來自上述實(shí)施例4b)溶解在甲酸甲酯(5mL)(Aldrich)中。攪拌過夜后，將反應(yīng)混合物濃縮成粗產(chǎn)物，將該粗產(chǎn)物用硅膠柱色譜純化，用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液然后是0-20％四氫呋喃的乙酸乙酯溶液梯度洗脫。在用過量戊烷沉淀出二氯甲烷后，分離出3-[3-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-7-苯基氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-哌啶-1-甲醛灰白色固體。(產(chǎn)量90mg，89％)。
C25H26N6O3[M+]的HRMS m/z計(jì)算值458.2066。實(shí)測458.2062。
實(shí)施例83-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-1-(四氫-吡喃-4-基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 在0℃下將4-氨基四氫吡喃(300mg，2.88mmol)(Combi-Blocks)和三乙胺(1.61mL，11.52mmol)(Aldrich)在二氯甲烷(6mL)中的混合物用20％的光氣的甲苯溶液(1.4mL，5.76mmol)(Fluka)處理。攪拌30分鐘后，過濾混合物和將濾液濃縮至小體積。加入苯(5mL)并再次過濾混合物。濃縮濾液，將殘余物溶解在無水四氫呋喃(約3mL)中并通過套管轉(zhuǎn)移到-78℃的(2，4-二氯-嘧啶-5-基-甲基)-(4-甲氧基苯基)-胺(300mg，1.44mmol)(來自上述實(shí)施例1d)和正丁基鋰(2.5M己烷溶液，460μL，1.44mmol)(Aldrich)的四氫呋喃(15mL)溶液中。讓反應(yīng)混合物緩慢升溫到室溫，攪拌過夜，然后在乙酸乙酯和鹽水之間分配。收集乙酸乙酯層，用硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，將殘余物用使用0-70％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫的硅膠柱色譜純化。將該步純化獲得的中間體溶解在苯胺(2mL)(Aldrich)中。加入催化量的4-(二甲基氨基)吡啶，將所得到的溶液在110℃下攪拌11小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物冷卻并用硅膠柱色譜純化，使用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫，得到產(chǎn)物。在用過量戊烷沉淀出二氯甲烷后，分離出3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-1-(四氫吡喃-4-基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮灰白色固體產(chǎn)物。(產(chǎn)量15mg，2％)。
C24H25N5O3[M+]的HRMS m/z計(jì)算值431.1957。實(shí)測431.1948。
實(shí)施例9a
(±)-順式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊醇 將(±)-順式-叔丁基-二甲基-(6-氧雜-雙環(huán)[3.1.0]己-3-基氧基)-硅烷(2.15g，9.99mmol)(按照Hendrie，S.K.，Leonard，J.Tetrahedron，1987，43(14)，3289-3294的方法制備)溶解在乙醇(70mL)中。向該溶液加入10％Pd/C(500mg)(Aldrich)，將混合物在1大氣壓的氫氣下氫化24小時(shí)，再在50psi下氫化24小時(shí)。加入另一部分的10％Pd/C(500mg)，將混合物在55psi下再氫化24小時(shí)。然后過濾氫化的混合物，固體用四氫呋喃(約60mL)洗滌，并將合并的有機(jī)層濃縮。將殘余物用硅膠柱色譜純化，用0-100％乙醚的己烷溶液洗脫，得到(±)-順式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊醇無色粘稠油狀物。(產(chǎn)量1.81g，83％)。
C11H24O2Si[(M+H)+]的HRMS m/z計(jì)算值217.1618。實(shí)測217.1619。
實(shí)施例9b(±)-反式-(3-疊氮基-環(huán)戊基氧基)-叔丁基-二甲基-硅烷 在0℃下向(±)-順式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊醇(1.5g，6.93mmol)(來自上述實(shí)施例9a)和三苯膦(1.99g，7.63mmol)(Aldrich)在無水四氫呋喃(60mL)中的混合物中滴加偶氮二羧酸二乙酯(1.2mL，1.32g，7.63mmol)(Aldrich)。2分鐘后，接著加入二苯基磷?；B氮化物(1.6mL，2.09g，7.63mmol)(Aldrich)，并將所得到的溶液緩慢升溫到室溫。在攪拌過夜后，將反應(yīng)混合物在乙醚和水之間分配。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，將殘余物用硅膠柱色譜純化，使用0-20％的乙醚的己烷溶液梯度洗脫，得到(±)-反式-(3-疊氮基-環(huán)戊基氧基)-叔丁基-二甲基-硅烷無色液體。(產(chǎn)量1.2g，72％)。
實(shí)施例9c(±)-反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊胺 將(±)-反式-(3-疊氮基-環(huán)戊基氧基)-叔丁基-二甲基-硅烷(400mg，1.66mmol)(來自上述實(shí)施例9b)和氧化鉑(38mg，0.17mmol)(Aldrich)在乙醇(6mL)中的混合物在1大氣壓的氫氣下攪拌2小時(shí)。然后過濾反應(yīng)混合物。固體用四氫呋喃(約40mL)洗滌，將合并的有機(jī)層減壓蒸發(fā)，得到(±)-反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊胺無色液體。(產(chǎn)量270mg，76％)。
C11H25NOSi[(M+H)+]的HRMS m/z計(jì)算值216.1778。實(shí)測217.1780。
實(shí)施例9d(±)-1-(反式-3-羥基-環(huán)戊基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 在0℃下將(±)-反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊胺(270mg，1.25mmol)(來自上述實(shí)施例9b)和三乙胺(1.15mL，840mg，8.30mmol)(Aldrich)的二氯甲烷溶液(5mL)用20％的光氣的甲苯溶液(2mL，4.15mmol)(Fluka)處理。在攪拌30分鐘后，過濾混合物并將濾液濃縮至小體積。加入苯(5mL)，再次過濾混合物。濃縮濾液，將殘余物溶解在少量無水四氫呋喃(約3mL)中，然后通過套管轉(zhuǎn)移到-78℃的(2，4-二氯-嘧啶-5-基-甲基)-(4-甲氧基苯基)-胺(180mg，0.63mmol)(來自上述實(shí)施例1d)和正丁基鋰(2.5M己烷溶液，250μL，0.63mmol)(Aldrich)的無水四氫呋喃(15mL)溶液中。讓反應(yīng)混合物緩慢升溫到室溫，攪拌5.5小時(shí)，然后在乙酸乙酯和水之間分配。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，殘余物用0-40％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫的硅膠柱色譜純化。將該步純化獲得的中間體溶解在苯胺(2mL)(Aldrich)中，加入催化量的4-(二甲基氨基)吡啶(Aldrich)，并將所得到的溶液在80℃下攪拌7小時(shí)。然后將混合物冷卻并用硅膠柱色譜純化，使用0-40％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫。將該步純化的產(chǎn)物溶解在乙腈(3mL)中，加入5％氫氟酸水溶液(50μL)，將混合物攪拌21小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物濃縮至小體積并用硅膠柱色譜純化，使用0-100％四氫呋喃的己烷溶液梯度洗脫，得到產(chǎn)物。在用過量戊烷沉淀出二氯甲烷后，分離出(±)-1-(反式-3-羥基-環(huán)戊基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮白色固體產(chǎn)物。(產(chǎn)量23mg，8％)。
C24H25N5O3[(M+H)]+的HRMS m/z計(jì)算值480.1467。實(shí)測480.1471。
實(shí)施例10a(±)-反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊醇 向0℃的1，3-環(huán)戊二醇(5.0g，48.9mmol)(順式/反式混合物，Aldrich)和咪唑(3.3g，48.5mmol)在四氫呋喃(100mL)的混合物中分批(每15分鐘250mg)加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物(5.2g，34.3mmol)(Aldrich)。所有加入完成后，讓反應(yīng)混合物緩慢升溫到室溫。在攪拌過夜后，將混合物在乙酸乙酯和水之間分配。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。將殘余物用硅膠柱色譜純化，用0-20％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫，得到(±)-反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊醇無色粘稠油狀物(產(chǎn)量4.23g，57％)和(±)-順式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊醇(產(chǎn)量420mg，6％)。
C11H24O2Si[M+H]+的HRMS m/z計(jì)算值217.1618。實(shí)測217.1621。
實(shí)施例10b(±)-順式-2-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-異吲哚-1，3-二酮 將(±)-反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊醇(1.1g，5.08mmol)(來自上述實(shí)施例10a)、三苯膦(3.2g，12.20mmol)(Aldrich)和苯鄰二甲酰亞胺(1.8g，12.20mmol)(Aldrich)的無水四氫呋喃(45mL)溶液冷卻到0℃。向其中滴加偶氮二羧酸二乙酯(2.1mL，2.3g，12.20mmol)(Aldrich)，并讓所得到的溶液緩慢升溫到室溫。在攪拌過夜后，將反應(yīng)混合物在乙酸乙酯和水之間分配。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾，濃縮并將殘余物用硅膠柱色譜純化，使用0-35％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫，得到(±)-順式-2-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-異吲哚-1，3-二酮白色固體。(產(chǎn)量1.52g，87％)。
C19H27NO3Si[M-CH3]+的HRMS m/z計(jì)算值330.1525。實(shí)測330.1523。
實(shí)施例10c(±)-順式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊胺
向(±)-順式-2-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-異吲哚-1，3-二酮(1.03g，2.98mmol)(來自上述實(shí)施例10b)在乙醇/四氫呋喃(2∶1，20mL)的混合物中加入無水肼(1.2mL，38.90mmol)(Aldrich)。在攪拌過夜后，過濾反應(yīng)混合物。固體用乙醚(約30mL)洗滌，濃縮合并的濾液。殘余物用乙醚(約30mL)再次處理，并將所得到的混合物過濾和濃縮，得到(±)-順式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊胺無色油狀物。(產(chǎn)量570mg，88％)。
C11H25NOSi[M+H]+的HRMS m/z計(jì)算值216.1778。實(shí)測216.1780。
實(shí)施例10d(±)-3-順式-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 將0℃下的(±)-順式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊胺(500mg，2.32mmol)(來自上述實(shí)施例10c)和三乙胺(1.62mL，1.2g，11.64mmol)(Aldrich)的二氯甲烷溶液(15mL)用20％的光氣的甲苯溶液(2.8mL，5.80mmol)(Fluka)處理。在攪拌30分鐘后，過濾混合物并將濾液濃縮至小體積。加入苯(5mL)，將該混合物再次過濾。然后濃縮濾液，將殘余物溶解在無水四氫呋喃(約3mL)中，然后通過套管轉(zhuǎn)移到-78℃的(2，4-二氯-嘧啶-5-基-甲基)-(4-甲氧基苯基)-胺(330mg，1.16mmol)(來自上述實(shí)施例1d)和正丁基鋰(2.5M己烷溶液，460μL，1.16mmol)(Aldrich)的無水四氫呋喃(25mL)溶液中。讓反應(yīng)混合物緩慢升溫到室溫，攪拌48小時(shí)，然后在乙酸乙酯和水之間分配。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，將殘余物用硅膠柱色譜純化，使用0-30％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫。將該步純化獲得的中間體溶解在苯胺(2mL)(Aldrich)中。加入催化量的4-(二甲基-氨基)吡啶(Aldrich)，并將所得到的溶液在80℃下攪拌8小時(shí)。然后冷卻反應(yīng)混合物并用硅膠柱色譜純化，使用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫，得到(±)-3-順式-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮白色固體。(產(chǎn)量100mg，16％)。
C30H39N5O3Si[M+H]+的HRMS m/z計(jì)算值546.2895。實(shí)測546.2901。
實(shí)施例10e(±)-順式-1-(3-羥基-環(huán)戊基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 向(±)-3-順式-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(100mg，0.18mmol)(來自上述實(shí)施例10d)的乙腈溶液(3mL)中加入5％氫氟酸水溶液(110μL，0.275mmol)。在攪拌過夜后，將反應(yīng)混合物濃縮至小體積(～1mL)并用硅膠柱色譜純化，使用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫。在用過量戊烷沉淀出二氯甲烷后，分離出白色固體產(chǎn)物(±)-順式-1-(3-羥基-環(huán)戊基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量60mg，77％)。
C24H25N5O3[M+H]+的HRMS m/z計(jì)算值432.2030。實(shí)測432.2033。
實(shí)施例11a(R)-2-甲硫基-4-(四氫呋喃-3-基氨基)-嘧啶-5-羧酸乙酯手性 將4-氯-2-甲硫基-5-嘧啶羧酸乙酯(897mg，3.86mmol)(Aldrich)和三乙胺(1.2mL，870mg，8.49mmol)(Aldrich)的二噁烷(20mL)溶液用(R)-3-氨基四氫呋喃對甲苯磺酸鹽(1.0g，3.86mmol)(Fluka)處理。將混合物在回流下攪拌1小時(shí)，然后冷卻并在鹽水和乙酸乙酯之間分配。將有機(jī)層用硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，并將殘余物用硅膠柱色譜純化，使用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫，得到(R)-2-甲硫基-4-(四氫呋喃-3-基氨基)-嘧啶-5-羧酸乙酯無色粘稠油狀物。(產(chǎn)量1.0g，92％)。
C12H17N3O3S[M+]的HRMS m/z計(jì)算值283.0991。實(shí)測283.0989。
實(shí)施例11b(R)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-1-(四氫呋喃-3-基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 向0℃下的(R)-2-甲硫基-4-(四氫呋喃-3-基氨基)-嘧啶-5-羧酸乙酯(1.0g，3.55mmol)(來自上述實(shí)施例11a)的無水四氫呋喃(60mL)溶液中分批加入固體氫化鋁鋰(400mg，10.65mmol)(Aldrich)。讓所得到的漿液緩慢升溫到室溫。攪拌過夜后，將漿液緩慢倒入劇烈攪拌的乙酸乙酯和飽和酒石酸鈉鉀溶液的混合液中。分離有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，得到粗制的還原產(chǎn)物。將該粗制的中間體溶解在二氯甲烷(30mL)中并用二氧化錳(2.9g，34.27mmol)(Aldrich)處理。攪拌2小時(shí)后，過濾固體，用四氫呋喃(約30mL)洗滌，濃縮合并的濾液，并將殘余物溶解在甲苯(40mL)中。然后將該溶液用對-茴香胺(470mg，3.77mmol)(Aldrich)處理，加入催化量的一水合對甲苯磺酸(Aldrich)，并使用Dean-Stark裝置將混合物在回流下加熱3小時(shí)。然后將混合物冷卻并在乙酸乙酯和飽和碳酸鉀水溶液之間分配。收集乙酸乙酯層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，然后將殘余物溶解在四氫呋喃(40mL)中。將所得到的溶液在0℃下用氫化鋁鋰(390mg，10.28mmol)(Aldrich)處理。將漿液緩慢升溫到室溫，攪拌13.5小時(shí)后緩慢倒入劇烈攪拌的乙酸乙酯和飽和酒石酸鈉鉀水溶液的混合液中。分離有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，并將所得到的殘余物用硅膠柱色譜純化，使用0-70％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫。將該步純化分離的中間體溶解在四氫呋喃(50mL)中。加入三乙胺(1mL)(Aldrich)，并將溶液冷卻到0℃。接著滴加20％的光氣的甲苯溶液(1.3mL，2.71mmol)(Fluka)，并在0℃下攪拌1.5小時(shí)。然后將混合物在乙酸乙酯和水之間分配。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，殘余物用0-40％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫的硅膠柱色譜純化。將該步純化分離的中間體溶解在四氫呋喃(50mL)中，在0℃下將所得到的溶液冷卻并用3-氯過氧苯甲酸(75％，1.13g，4.93mmol)(Aldrich)處理。讓反應(yīng)混合物緩慢升溫到室溫，并在攪拌過夜后將其在乙酸乙酯和水之間分配。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。將殘余物溶解在苯胺(10mL)(Aldrich)中，加入催化量的鹽酸苯胺(Aldrich)，將所得到的溶液在95℃下攪拌4.5小時(shí)。然后將混合物冷卻，并用硅膠柱色譜純化，使用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫，得到產(chǎn)物。用戊烷研磨，得到(R)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-1-(四氫呋喃-3-基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮灰白色固體。(產(chǎn)量740mg，50％)。
C23H23N5O3[M+H+]的HRMS m/z計(jì)算值418.1874。實(shí)測418.1877。IC50(KDR)＝0.091μM，IC50(FGFR)＝0.257μM。
實(shí)施例12
(R)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-1-吡咯烷-3-基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 將0℃的(R)-1-N-叔丁氧羰基-3-氨基吡咯烷(350mg，1.88mmol)(AstaTech Inc.)和三乙胺(1.31mL，0.95g，9.4mmol)(Aldrich)的二氯甲烷溶液(6mL)用20％的光氣的甲苯溶液(1.84mL，3.76mmol)(Fluka)處理。在攪拌30分鐘后，過濾反應(yīng)混合物并濃縮至小體積。加入苯(5mL)，再次過濾混合物。將濾液濃縮，溶解在少量無水四氫呋喃(約3mL)中，并通過套管轉(zhuǎn)移到-78℃的(2，4-二氯-嘧啶-5-基-甲基)-(4-甲氧基苯基)-胺(270mg，0.94mmol)(來自上述實(shí)施例1d)和正丁基鋰(2.5M己烷溶液，380μL，0.94mmol)(Aldrich)的無水四氫呋喃(12mL)溶液中。讓反應(yīng)混合物緩慢升溫到室溫，攪拌過夜，然后在乙酸乙酯和水之間分配。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，并將所得到的殘余物用硅膠柱色譜純化，使用0-70％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫。然后將該步純化獲得的中間體溶解在苯胺(2mL)(Aldrich)中，加入催化量的鹽酸苯胺(Aldrich)，并將溶液在85℃下攪拌8小時(shí)。然后冷卻混合物，并用0-70％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫的硅膠柱色譜純化。在0℃下將該步純化的產(chǎn)物溶解在含有水(300μL)的50％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(6mL)中，并攪拌1.5小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物在乙酸乙酯和0.5N氫氧化鈉水溶液之間分配。通過加入固體氫氧化鈉將水層的pH調(diào)節(jié)到12。然后收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮至粗產(chǎn)物，將該粗產(chǎn)物用硅膠柱色譜純化，使用0-100％甲醇的四氫呋喃溶液到0-20％三乙胺的甲醇溶液梯度洗脫。將含有產(chǎn)物的部分濃縮成固體，然后將其溶解在二氯甲烷(約5mL)中。過濾溶液，并用過量戊烷處理，沉淀出(R)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-1-吡咯烷-3-基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮灰白色固體。(產(chǎn)量14mg，2％)。
C23H24N6O2[M+H+]的HRMS m/z計(jì)算值417.2034。實(shí)測417.2038。IC50(KDR)＝0.190μM，IC50(FGFR)＝0.621μM。
實(shí)施例13a(±)-4-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基氨基]-2-甲硫基-嘧啶-5-甲醛外消旋 將4-氯-2-甲硫基-5-嘧啶羧酸鹽(900mg，3.87mmol)(Aldrich)和三乙胺(1.1mL，870mg，7.74mmol)(Aldrich)的二噁烷(50mL)溶液用(±)-反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊胺(840mg，3.87mmol)(來自上述實(shí)施例9c)處理。將混合物在回流下攪拌1小時(shí)，然后冷卻并在鹽水和乙酸乙酯之間分配。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，將殘余物用硅膠柱色譜純化，使用0-20％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫。然后將該步純化分離的產(chǎn)物溶解在無水四氫呋喃(80mL)中，并將所得到的溶液冷卻到0℃。在分批加入氫化鋁鋰(440mg，11.61mmol)(Aldrich)后，讓所得到的混合物升溫至室溫。在攪拌過夜后，將反應(yīng)混合物緩慢倒入劇烈攪拌的乙酸乙酯和飽和酒石酸鈉鉀水溶液的混合液中。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾，并濃縮至灰白色固體。然后將該中間體溶解在二氯甲烷(80mL)中，將所得到的溶液用二氧化錳(3.36g，38.70mmol)(Aldrich)處理。攪拌過夜后，濾出固體，用四氫呋喃(約30mL)洗滌，濃縮合并的有機(jī)層，將殘余物用0-50％乙醚的己烷溶液梯度洗脫的硅膠柱純化，得到(±)-4-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基氨基]-2-甲硫基-嘧啶-5-甲醛粘稠無色油狀物。(產(chǎn)量888mg，62％)。
C17H29N3O2SSi[M+H]+的HRMS m/z計(jì)算值368.1823。實(shí)測368.1826。
實(shí)施例13b(±)-1-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-甲硫基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮外消旋 使用Dean-Stark裝置將(±)-4-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基-氨基]-2-甲硫基-嘧啶-5-甲醛(700mg，1.90mmol)(來自上述實(shí)施例13a)、對-茴香胺(230mg，1.90mmol)(Aldrich)和一水合對甲苯磺酸(50mg)(Aldrich)在苯中的混合物回流6小時(shí)。然后將混合物冷卻并在乙酸乙酯和飽和碳酸鉀水溶液之間分配。收集有機(jī)層，硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。然后將殘余物溶解在無水四氫呋喃(60mL)，并向0℃的該溶液中小量分批加入氫化鋁鋰(216mg，5.70mmol)(Aldrich)。讓形成的漿液緩慢升溫到室溫，在攪拌過夜后，將其緩慢倒入劇烈攪拌的乙酸乙酯和飽和酒石酸鈉鉀水溶液的混合液中。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。將殘余物用HPLC純化，使用50％乙醚的己烷溶液作為洗脫溶劑。將該步純化獲得的中間體溶解在二氯甲烷(100mL)中，接著加入三乙胺(500μL，660mg，6.52mmol)(Aldrich)并冷卻到0℃。然后滴加20％的光氣的甲苯溶液(640μL，1.31mmol)(Fluka)，將所得到的混合物在0℃下攪拌30分鐘，在室溫下攪拌1小時(shí)。然后將混合物在乙酸乙酯和水之間分配。分離有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，殘余物用0-60％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫的硅膠柱色譜純化，得到(±)-1-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-甲硫基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮白色固體。(產(chǎn)量543mg，57％)。
C25H36N4O3SSi[M+H]+的HRMS m/z計(jì)算值501.2350。實(shí)測501.2353。
實(shí)施例13c(±)-7-(4-氟-苯基氨基)-1-(反式-3-羥基-環(huán)戊基)-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 將(±)-1-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-甲硫基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(40mg，0.08mmol)(來自上述實(shí)施例13b)的四氫呋喃(6mL)溶液用3-氯過氧苯甲酸(75％，39mg，0.17mmol)(Aldrich)在室溫下進(jìn)行處理。攪拌3小時(shí)后，將反應(yīng)混合物在乙酸乙酯和飽和碳酸鉀水溶液之間分配。分離有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。將殘余物溶解在4-氟苯胺(3mL)(Aldrich)，并攪拌8小時(shí)。然后將混合物冷卻并用硅膠柱色譜純化，使用0-70％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫。在0℃下將該步純化分離的產(chǎn)物溶解在含有水(500μL)的20％的三氟乙酸的二氯甲烷溶液(5mL)中。在攪拌30分鐘后，將反應(yīng)混合物在乙酸乙酯和1N氫氧化鈉水溶液之間分配。通過加入固體氫氧化鈉將水層的pH調(diào)節(jié)到12。分離有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。將殘余物用硅膠柱色譜純化，使用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫，得到產(chǎn)物。在用過量戊烷沉淀出二氯甲烷后，分離出(±)-7-(4-氟-苯基氨基)-1-(反式-3-羥基-環(huán)戊基)-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮白色固體。(產(chǎn)量25mg，69％)。
C24H24FN5O3[M+H]+的HRMS m/z計(jì)算值450.1936。實(shí)測450.1940。
實(shí)施例14a2-氟-4-甲氧基苯胺
將3-氟-4-硝基苯酚(10.17g，64.7mmol)(Aldrich)溶解在二甲基甲酰胺(210mL)中。加入碳酸鉀(45g，323mmol)和甲基碘(5mL，77.64mmol)(Aldrich)，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。(TLC20％乙酸乙酯的己烷溶液顯示轉(zhuǎn)化完全)。將反應(yīng)混合物通過C鹽_墊過濾并減壓濃縮。用乙醚研磨粗制原料，過濾除去不溶物。將濾液減壓濃縮，得到橙色固體。將該原料(11.43g)溶解在甲醇(150mL)中，在Parr儀中，在10％碳載鈀(1.5g)(Aldrich)存在下，在50psi下氫化1.5小時(shí)。(TLC20％乙酸乙酯的己烷溶液顯示完全轉(zhuǎn)化)。將反應(yīng)混合物通過C鹽_過濾，用乙酸乙酯洗滌，然后減壓濃縮，得到2-氟-4-甲氧基苯胺固體。(產(chǎn)量3.81g，26.99mmol)。
實(shí)施例14b(±)-[3-反式-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-{5-[(2-氟-4-甲氧基-苯基氨基)-甲基]-2-甲硫基-嘧啶-4-基}-胺外消旋 將(±)-4-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基-氨基]-2-甲硫基-嘧啶-5-甲醛(171mg，0.46mmol)(來自上述實(shí)施例13a)、一水合對甲苯磺酸(10mg)(Aldrich)和2-氟-4-甲氧基苯胺(79mg，0.56mmol)(來自上述實(shí)施例14a)在苯(30mL)中的混合物在Dean-Stark裝置中回流8小時(shí)。然后將混合物冷卻并在乙酸乙酯和飽和碳酸鉀水溶液之間分配。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。將殘余物溶解在無水四氫呋喃(50mL)中，在0℃下向該溶液小量分批加入氫化鋁鋰(53mg，1.40mmol)(Aldrich)。讓漿液緩慢升溫到室溫，在攪拌過夜后，將其倒入劇烈攪拌的乙酸乙酯和飽和酒石酸鈉鉀水溶液的混合液中。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，殘余物用硅膠柱色譜純化，用0-60％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫，得到(±)-[3-反式-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-{5-[(2-氟-4-甲氧基-苯基氨基)-甲基]-2-甲硫基-嘧啶-4-基}-胺無色粘稠油狀物。(產(chǎn)量187mg，83％)。
C24H37FN4O2SSi[M+H]+的HRMS m/z計(jì)算值493.2464。實(shí)測493.2472。
實(shí)施例14c(±)-1-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-甲硫基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮外消旋 向冷卻到0℃的(±)-[3-反式-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-{5-[(2-氟-4-甲氧基-苯基氨基)-甲基]-2-甲硫基-嘧啶-4-基}-胺(179mg，0.36mmol)(來自上述實(shí)施例14b)和三乙胺(152μL，110mg，1.08mmol)(Aldrich)在二氯甲烷(30mL)中的混合液中滴加20％的光氣的甲苯溶液(265μL，0.54mmol)(Fluka)。讓所得到的混合物緩慢升溫到室溫并攪拌4.5小時(shí)。然后將混合物在乙酸乙酯和水之間分配。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，殘余物用0-10％乙醚的甲苯溶液梯度洗脫的硅膠柱色譜純化，得到(±)-1-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-甲硫基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮灰白色泡沫狀固體。(產(chǎn)量84mg，45％)。
C25H35FN4O3SSi[M+H]+的HRMS m/z計(jì)算值519.2256。實(shí)測519.2263。
實(shí)施例14d(±)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-1-(反式-3-羥基-環(huán)戊基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮外消旋 向(±)-1-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-甲硫基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(80mg，0.15mmol)(來自上述實(shí)施例14c)的二氯甲烷(15mL)溶液中加入酸(75％，75mg，0.32mmol)(Aldrich)。將反應(yīng)混合物攪拌5.5小時(shí)，然后在乙酸乙酯和飽和碳酸鉀水溶液之間分配。分離有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，將所得到的殘余物溶解在苯胺(2mL)(Aldrich)中。在90℃下攪拌該溶液8小時(shí)，然后冷卻并用硅膠柱色譜純化，使用0-50％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫。在0℃下將其溶解在含有水(300μL)的20％的三氟乙酸的二氯甲烷溶液(5mL)中。攪拌25分鐘后，將混合物在乙酸乙酯和0.5N氫氧化鈉水溶液之間分配。通過加入固體氫氧化鈉將水層的pH調(diào)節(jié)到12。然后分離有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮至粗產(chǎn)物。在用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液的硅膠柱色譜純化，并用過量戊烷沉淀出二氯甲烷后，分離出白色固體產(chǎn)物(±)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-1-(反式-3-羥基-環(huán)戊基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量45mg，65％)。C24H24FN5O3[M+H]+的HRMS m/z計(jì)算值450.1935。實(shí)測450.1941。
實(shí)施例15a(S)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-2-甲基丙酸手性 將(S)-(+)-3-羥基-2-甲基丙酸甲酯(1.06g，8.99mmol)(Aldrich)溶解在二氯甲烷(10mL，經(jīng)過分子篩干燥)中。加入咪唑(0.85g，12.41mmol)(Aldrich)和叔丁基二苯基甲硅烷基氯化物(2.30mL，8.85mmol)(Aldrich)，并將混合物在環(huán)境溫度下攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)物用另外的二氯甲烷稀釋，用水和鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥并濃縮，得到(S)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-2-甲基-丙酸甲酯油狀物。(產(chǎn)量3.17g，98.8％)。
將該酯(3.15g，8.85mmol)溶解在3∶1的四氫呋喃-甲醇(30mL)中，在環(huán)境溫度下用氫氧化鈉水溶液(1.0N，10.0mL，10.0mmol)皂化過夜。濃縮后，將殘余物在乙酸乙酯和水之間分配，然后用0.5N鹽酸水溶液酸化(到pH4-5)。將有機(jī)相用水和鹽水洗滌，硫酸鈉干燥并濃縮。用使用Biotage系統(tǒng)運(yùn)行的多個(gè)快速色譜進(jìn)行純化。將每次運(yùn)行獲得的純的部分合并并濃縮，得到(S)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-2-甲基丙酸油狀物，該油狀物冷卻時(shí)凝固成發(fā)粘的白色固體。(產(chǎn)量2.10g，69.2％)。
實(shí)施例15b(S)-叔丁基-2-異氰酸根合-丙氧基二苯基硅烷手性 將(S)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-2-甲基丙酸(0.44g，1.20mmol)(來自上述實(shí)施例15a)溶解在二氯甲烷(3mL，經(jīng)過分子篩干燥)中。加入三乙胺(0.36mL，2.58mmol)(Aldrich)，將溶液在冰-水浴冷卻。滴加氯甲酸乙酯(0.16mL，1.67mmol)(Aldrich)，并將混合物在冷卻條件下攪拌1小時(shí)。然后將混合物用另外的二氯甲烷稀釋，用水和鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗制的混合酸酐。
向混合酸酐中間體的丙酮(4mL)溶液中加入疊氮化鈉(0.25g，3.85mmol)的水(4mL)溶液。將混合物攪拌10分鐘，然后用二氯甲烷和水稀釋。有機(jī)相用鹽水洗滌，硫酸鎂干燥并濃縮，得到(S)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-2-甲基丙酰基疊氮化物。
將該疊氮化物溶解在甲苯(2mL)并在120℃油浴中加熱?？焖賱×业胤懦龅?dú)?，從而通過Curtius重排得到所需的(S)-叔丁基-2-異氰酸根合-丙氧基-二苯基硅烷。
實(shí)施例15c(S)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 將(S)-叔丁基-2-異氰酸根合-丙氧基-二苯基硅烷(從0.55g，1.61mmol的(S)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-2-甲基丙酸(來自上述實(shí)施例15b)在原位生成)在120℃的熱甲苯(2.5mL)溶液中用[(2，4-二氯嘧啶-5-基)甲基](4-甲氧基-苯基)胺(0.41g，1.45mmol)(來自上述實(shí)施例1d)處理。將溶液在120℃下加熱35分鐘，然后冷卻到室溫并濃縮，得到中間體脲。
將該中間體脲溶解在無水四氫呋喃(5mL)中，并在冰-水浴中冷卻。滴加叔丁醇鉀(1.0M的四氫呋喃溶液，1.5mL，1.50mmol)，并在冷卻條件下連續(xù)攪拌15分鐘。通過硅膠墊過濾混合物并用乙酸乙酯洗脫。用快速色譜(Biotage 40M，25∶75乙酸乙酯-己烷)純化，得到(S)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮，還有未環(huán)化的中間體，(S)-3-[2-叔丁基-二苯基-硅烷基氧基-1-甲基-乙基]-1-(2，4-二氯嘧啶-5-基-甲基)-1-(4-甲氧基苯基)-脲，產(chǎn)物和中間體脲的比率為～2∶1。
將該混合物(0.66g)溶解在無水四氫呋喃(5mL)中，并用冰-水浴冷卻。向該溶液中加入叔丁醇鉀(1.0M的四氫呋喃溶液，1.0mL，1.00mmol)。將混合物在冷卻條件下攪拌15分鐘，然后移走浴液，并繼續(xù)攪拌5分鐘。通過硅膠墊過濾混合物并用乙酸乙酯洗脫。用快速色譜(Biotage 40M，40∶60乙酸乙酯-己烷)純化，得到(S)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.38g，40.2％)。
實(shí)施例15d(S)-(+)-1-(2-羥基-1-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 將(S)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.50g，0.85mmol)(來自上述實(shí)施例15c)和苯胺(0.50mL，5.49mmol)(Aldrich)合并，并在85℃的油浴中加熱3小時(shí)。將混合物冷卻到室溫，用乙酸乙酯稀釋并用水和鹽水洗滌。將有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥并濃縮。用快速色譜(Biotage 40S，乙酸乙酯-己烷梯度洗脫[20-40％乙酸乙酯])得到(S)-1-(2-叔丁基-二苯基-硅烷基氧基-1-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.44g，76.1％)。
將該甲硅烷基-保護(hù)的產(chǎn)物(0.43g，0.67mmol)溶解在無水四氫呋喃(5mL)中，用四丁基銨氟化物(1.0M的四氫呋喃溶液，2.70mL，2.70mmol)(Aldrich)在室溫下處理5小時(shí)。然后將反應(yīng)物濃縮。將殘余物再溶解在乙酸乙酯中，并用水和鹽水洗滌。將有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥并濃縮。經(jīng)快速色譜(Biotage 40S，乙酸乙酯-己烷梯度洗脫[75-90％乙酸乙酯])純化，接著在乙酸乙酯-己烷中結(jié)晶，得到(S)-(+)-1-(2-羥基-1-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.209g，77.2％)。熔點(diǎn)140-147℃。
C22H23N5O3[M+H]+的HR-MS(ES+)m/z計(jì)算值406.1874。實(shí)測406.1878。IC50(KDR)＝0.042μM，IC50(FGFR)＝0106μM。
實(shí)施例16(S)-(+)-7-(4-氟-苯基氨基)-1-(2-羥基-1-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 將(S)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.38g，0.64mmol)(來自上述實(shí)施例15c)和4-氟苯胺(0.30mL，3.20mmol)(Aldrich)合并，并在95℃的油浴中加熱4.5小時(shí)。將混合物冷卻到室溫并用己烷研磨。將油狀殘余物溶解在乙酸乙酯中，并用水和鹽水洗滌。有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥并濃縮。用快速色譜(Biotage 40M，乙酸乙酯-己烷梯度洗脫[35-45％乙酸乙酯])純化得到(S)-7-(4-氟-苯基氨基)-1-(2-叔丁基-二苯基-硅烷基氧基-1-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.306g，72.3％)。
將(S)-7-(4-氟-苯基氨基)-1-(2-叔丁基-二苯基-硅烷基氧基-1-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.30g，0.45mmol)溶解在無水四氫呋喃(3.5mL)中，用四丁基銨氟化物(1.0M的四氫呋喃溶液，1.80mL，1.80mmol)(Aldrich)在室溫下處理6小時(shí)。然后濃縮反應(yīng)物。將殘余物再溶解在乙酸乙酯中，并用水和鹽水洗滌。將有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥并濃縮。用快速色譜(Biotage 40S，乙酸乙酯-己烷梯度洗脫[60-100％乙酸乙酯])純化，接著在乙酸乙酯-己烷中結(jié)晶，得到(S)-(+)-1-(2-羥基-1-甲基-乙基)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.13g，66.2％)。熔點(diǎn)188-198℃。C22H22FN5O[M+H]+的HR-MS(ES+)m/z計(jì)算值424.1780。實(shí)測424.1783。
實(shí)施例17a[(2，4-二氯嘧啶-5-基)甲基]-(4-甲氧基苯基)-胺 將2，4-二氯-5-氯甲基-嘧啶(3.70g，18.7mmol)(來自上述實(shí)施例1b)、2-氟-4-甲氧基-苯胺(2.40g，17.0mmol)(來自上述實(shí)施例14a)和碳酸鉀(4.70g，34.0mmol)在丙酮(100mL)中的混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。濾出沉淀物，將溶液減壓濃縮。將殘余物用乙酸乙酯稀釋，并用水和鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。將殘余物用快速色譜純化，用乙酸乙酯-己烷(1∶4)洗脫，得到[(2，4-二氯嘧啶-5-基)甲基]-(4-甲氧基苯基)-胺。(產(chǎn)量3.99g，78％)。
實(shí)施例17b叔丁基-(反式-4-異氰酸根合-環(huán)己基氧基)-二甲基-硅烷
向0℃下的反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己胺(1.0g，4.36mmol)(來自上述實(shí)施例3a)和三乙胺(3.04mL，21.8mmol)(Burdick&Jackson)的二氯甲烷(30mL)溶液中一次性加入光氣(～20％的甲苯溶液，6.4mL，13.1mmol)(Fluka)。將反應(yīng)混合物在0℃下攪拌40分鐘，接著加入0.5N鹽酸水溶液(50mL)。將有機(jī)相用鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。將殘余物用快速色譜純化，用乙酸乙酯-己烷(1∶9)洗脫，得到叔丁基-(反式-4-異氰酸根合-環(huán)己基氧基)-二甲基-硅烷。(產(chǎn)量0.90g，81％)。
實(shí)施例17c1-[反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 向-78℃下的(2，4-二氯-嘧啶-5-基-甲基)-(2-氟-4-甲氧基-苯基)胺(1.1g，3.64mmol)(來自上述實(shí)施例17a)的四氫呋喃(50mL)溶液中加入正丁基鋰(2.5M的己烷溶液，1.75mL，4.37mmol)(Aldrich)。在-78℃下攪拌40分鐘后，加入叔丁基-(反式-4-異氰酸根合-環(huán)己基氧基)-二甲基-硅烷(1.12g，4.37mmol)(來自上述實(shí)施例17b)。將混合物在-70℃下攪拌1小時(shí)，然后在室溫下攪拌3小時(shí)。將其用乙酸乙酯稀釋，鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。將殘余物用快速色譜純化，用乙酸乙酯-己烷(3∶7然后2∶3)洗脫，得到1-[反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.60g，33％)。
實(shí)施例17d3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-1-(反式-4-羥基-環(huán)己基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 將1-[反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.20g，0.38mmol)(來自上述實(shí)施例17c)、對-茴香胺(61.Smg，0.50mmol)(Aldrich)和一水合對甲苯磺酸(95.1mg，0.50mmol)(Aldrich)在2-丙醇(4mL)中的混合物放入微波反應(yīng)器(SmithSynthesizerTM)中。將反應(yīng)混合物在160℃下加熱15分鐘。待冷卻后，將其減壓濃縮并用RP-HPLC(C-18，乙腈-水洗脫)純化，得到3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-1-(反式-4-羥基-環(huán)己基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.12g，61％)。C26H28FN5O4[(M+H)+]的HRMS m/z計(jì)算值494.2198。實(shí)測494.2206。IC50(KDR)＝0.018μM，IC50(FGFR)＝0.050μM。
實(shí)施例183-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-1-(反式-4-羥基-環(huán)己基)-7-(3，4-二甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮
將1-[反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.20g，0.38mmol)(來自上述實(shí)施例17c)、4-氨基-藜蘆醚(76.6mg，0.50mmol)(Aldrich)和一水合對甲苯磺酸(95.1mg，0.50mmol)(Aldrich)在2-丙醇(4mL)中的混合物放入微波反應(yīng)器(SmithSynthesizerTM)中。將反應(yīng)混合物在160℃下加熱15分鐘。待冷卻后，將其減壓濃縮并用RP-HPLC(C-18，乙腈-水洗脫)純化，得到3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-1-(反式-4-羥基-環(huán)己基)-7-(3，4-二甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.13g，63％)。C27H30FN5O5[(M+H)+]的HRMS m/z計(jì)算值524.2304。實(shí)測524.2311。
實(shí)施例19a1-[反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 向-78℃下的[(2，4-二氯嘧啶-5-基)甲基](4-甲氧基-苯基)胺(1.0g，3.52mmol)(來自上述實(shí)施例1d)的四氫呋喃(50mL)溶液中加入正丁基鋰(2.5M己烷溶液，1.7mL，4.22mmol)(Aldrich)。在-78℃下攪拌20分鐘后，加入叔丁基-(反式-4-異氰酸根合-環(huán)己基氧基)-二甲基-硅烷(1.1g，4.22mmol)(來自上述實(shí)施例17b)。將混合物在-70℃下攪拌1小時(shí)，然后在室溫下攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯稀釋，鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。將殘余物用快速色譜純化，用乙酸乙酯-己烷(3∶7然后2∶3)洗脫，得到1-[反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.61g，34％)。
實(shí)施例19b1-[反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(3，4-二甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 將1-[反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.20g，0.40mmol)(來自上述實(shí)施例19a)和4-氨基-藜蘆醚(80.0mg，0.52mmol)(Aldrich)在2-丙醇(4mL)中的混合物放入微波反應(yīng)器(SmithSynthesizerTM)中。將反應(yīng)混合物在160℃下加熱10分鐘。待冷卻后，將其減壓濃縮。將殘余物用快速色譜純化，乙酸乙酯-己烷(3∶7然后2∶3)洗脫，得到1-[反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(3，4-二甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(產(chǎn)量0.09g，36％)。
實(shí)施例19c3-(4-甲氧基-苯基)-1-(反式-4-羥基-環(huán)己基)-7-(3，4-二甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 在0℃下向1-[反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(3，4-二甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(90mg，0.24mmol)(來自上述實(shí)施例19b)的二氯甲烷溶液(5mL)中加入三氟乙酸(2.0mL)(Aldrich)。將混合物在0℃下攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(15mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。將殘余物用乙酸乙酯洗脫的快速色譜純化，得到粗產(chǎn)物，將該粗產(chǎn)物在乙酸乙酯-己烷中重結(jié)晶，得到3-(4-甲氧基-苯基)-1-(反式-4-羥基-環(huán)己基)-7-(3，4-二甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量41mg，59％)。
C27H31N5O5[(M+H)+]的HRMS m/z計(jì)算值506.2398。實(shí)測506.2404。
實(shí)施例20a1-[反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮
將1-[反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.20g，0.40mmol)(來自上述實(shí)施例19a)和對-茴香胺(63.6mg，0.52mmol)(Aldrich)在2-丙醇(4mL)中的混合物放入微波反應(yīng)器(SmithSynthesizerTM)中。將反應(yīng)混合物在160℃下加熱10分鐘。待冷卻后，將其減壓濃縮。將殘余物用快速色譜純化，乙酸乙酯-己烷(3∶7然后2∶3)洗脫，得到1-[反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.14g，58％)。
實(shí)施例20b3-(4-甲氧基-苯基)-1-(反式-4-羥基-環(huán)己基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 在0℃下向1-[反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.14g，0.15mmol)(來自上述實(shí)施例20a)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入三氟乙酸(2.5mL)。將混合物在0℃下攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(15mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。將殘余物用快速色譜純化，乙酸乙酯洗脫，得到粗產(chǎn)物，將該粗產(chǎn)物在乙酸乙酯-己烷中重結(jié)晶得到3-(4-甲氧基-苯基)-1-(反式-4-羥基-環(huán)己基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量61mg，55％)。
C26H29N5O4[(M+H)+]的HRMS m/z計(jì)算值476.2293。實(shí)測476.2299。IC50(KDR)＝0.041μM，IC50(FGFR)＝0.023μM。
實(shí)施例21a(S)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 將120℃下的(S)-叔丁基-2-異氰酸根合-丙氧基-二苯基硅烷[從1.05g，3.07mmol的(S)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-2-甲基丙酸(來自上述實(shí)施例15b)在原位產(chǎn)生]的熱甲苯(5mL)溶液用(2，4-二氯-嘧啶-5-基甲基)-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-胺(0.84g，2.77mmol)(來自上述實(shí)施例17a)處理。將該溶液在120℃下加熱40分鐘，然后冷卻到室溫并濃縮，得到粗制的(S)-3-[2-叔丁基-二苯基-硅烷基氧基-1-甲基-乙基]-1-(2，4-二氯嘧啶-5-基-甲基)-1-(2-氟-4-甲氧基苯基)-脲。將該脲溶解在無水四氫呋喃(10mL)中并用冰-水浴冷卻。滴加叔丁醇鉀(1.0M的四氫呋喃溶液，3.2mL，3.20mmol)(Aldrich)。將混合物在冷卻條件下攪拌15分鐘，然后移走浴液，并繼續(xù)攪拌5分鐘。將混合物通過硅膠墊過濾，用乙酸乙酯洗脫。粗產(chǎn)物的NMR顯示產(chǎn)物和未環(huán)化的中間體的比率為～2∶1，所述未環(huán)化的中間體為(S)-3-[2-叔丁基-二苯基-硅烷基氧基-1-甲基-乙基]-1-(2，4-二氯嘧啶-5-基-甲基)-1-(2-氟-4-甲氧基苯基)-脲。
將粗混合物再溶解在無水四氫呋喃(10mL)中，并用冰-水浴冷卻。加入叔丁醇鉀(1.0M的四氫呋喃溶液，1.5mL，1.50mmol)(Aldrich)，將混合物在冷卻條件下攪拌15分鐘。移走冷卻浴，并繼續(xù)攪拌5分鐘。將混合物通過硅膠墊過濾，用乙酸乙酯洗脫。經(jīng)快速色譜(Biotage 40S，乙酸乙酯-己烷梯度洗脫[25-38％乙酸乙酯])純化，得到(S)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.53g，31.7％)。
部分(S)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮仍然含有約20％的中間體脲。將該原料通過用叔丁醇鉀(1.0M的四氫呋喃溶液，0.65mL，0.65mmol)再次處理循環(huán)利用，得到(S)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.19g，11.2％)。
實(shí)施例21b(S)-(+)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-(4-氟-苯基氨基)-1-(2-羥基-1-甲基-乙基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 將(S)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.40g，0.66mmol)(來自上述實(shí)施例21a)和4-氟苯胺(0.50mL，5.28mmol)(Aldrich)合并，并在105℃的油浴中加熱2小時(shí)。將混合物冷卻到室溫，用己烷研磨。然后將不溶殘余物置于乙酸乙酯中，濾出鹽酸苯胺。將濾液用快速色譜(Biotage 40S，30∶70乙酸乙酯-己烷)純化。將不純部分通過另一快速色譜再循環(huán)利用。這樣純化的材料仍然被少量4-氟苯胺所污染。將該污染物通過再用己烷研磨而除去，得到(S)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-(4-氟-苯基氨基)-1-(2-叔丁基-二苯基-硅烷基氧基-1-甲基-乙基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.34g，71.8％)。
將(S)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-(4-氟-苯基氨基)-1-(2-叔丁基-二苯基-硅烷基氧基-1-甲基-乙基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.33g，0.46mmol)溶解在無水四氫呋喃(3.5mL)中，并用四丁基銨氟化物(1.0M的四氫呋喃溶液，1.90mL，1.90mmol)(Aldrich)處理。將反應(yīng)物在保持在25-35℃范圍內(nèi)的水浴中攪拌。4小時(shí)后反應(yīng)完全，將反應(yīng)物濃縮。將殘余物再溶解在乙酸乙酯中，并用水和鹽水洗滌。將有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥并濃縮。用快速色譜(Biotage 40S，75∶25乙酸乙酯-己烷)純化，接著在乙酸乙酯-己烷中結(jié)晶，得到(S)-(+)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-(4-氟-苯基氨基)-1-(2-羥基-1-甲基-乙基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮白色固體。(產(chǎn)量0.18g，83.5％)。熔點(diǎn)173-177℃。
C22H21F2N5O3[M+H]+的HR-MS(ES+)m/z計(jì)算值442.1685。實(shí)測442.1691。
實(shí)施例22(S)-(+)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-1-(2-羥基-1-甲基-乙基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 將(S)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.30g，0.50mmol)(來自上述實(shí)施例21a)溶解在甲苯(0.5mL)中，并在105℃的油浴中用對-茴香胺(0.15g，1.19mmol)處理。2小時(shí)后，仍存在相當(dāng)數(shù)量的原材料。加入另外的對-茴香胺(0.11g，0.92mmol)，并再繼續(xù)加熱2小時(shí)。然后將混合物冷卻到室溫，并用己烷研磨，以除去過量的對-茴香胺。將不溶殘余物用快速色譜(Biotage 40M，乙酸乙酯-己烷梯度洗脫[25-40％乙酸乙酯])純化。該純化材料仍被少量對-茴香胺污染。將該污染物通過用己烷再次研磨除去，得到(S)-3-(2-氟-4-甲氧基苯基)-1-(2-叔丁基-二苯基-硅烷基氧基-1-甲基-乙基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.26g，72.2％)。
將(S)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-1-(2-叔丁基-二苯基-硅烷基氧基-1-甲基-乙基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.25g，0.35mmol)溶解在無水四氫呋喃(2.5mL)中，并用四丁基銨氟化物(1.0M的四氫呋喃溶液，1.40mL，1.400mmol)處理。將反應(yīng)物在保持在30-40℃范圍內(nèi)的水浴中攪拌。4小時(shí)后反應(yīng)完全，將反應(yīng)物濃縮。將殘余物再溶解在乙酸乙酯中，并用水和鹽水洗滌。將有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥并濃縮，然后用快速色譜(Biotage 40S，75∶25乙酸乙酯-己烷)純化，得到(S)-(+)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-1-(2-羥基-1-甲基-乙基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮淺黃色泡沫。(產(chǎn)量0.14g，85.1％)。
C23H24FN5O4[M+H]+的HR-MS(ES+)m/z計(jì)算值454.1885。實(shí)測454.1890。
IC50(KDR)＝0.045μM，IC50(FGFR)＝0.111μM。
實(shí)施例23a(R)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-2-甲基丙酸手性 將(R)-(-)-3-羥基-2-甲基丙酸甲酯(0.82g，6.92mmol)(Aldrich)溶解在二氯甲烷(8mL，經(jīng)過分子篩干燥)中。加入咪唑(0.67g，9.68mmol)(Aldrich)。當(dāng)全都溶解時(shí)，加入叔丁基二苯基甲硅烷基氯化物(1.80mL，6.92mmol)(Aldrich)，并將混合物在環(huán)境溫度下攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)物用另外的二氯甲烷稀釋，用水和鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥并濃縮，得到(R)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-2-甲基-丙酸甲酯油狀物。(產(chǎn)量2.42g，98％)。
將(R)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-2-甲基-丙酸甲酯(2.42g，7.05mmol)溶解在3∶1的四氫呋喃-甲醇(24mL)中，用氫氧化鈉水溶液(1.0N，7.9mL，7.90mmol)在40℃下皂化3小時(shí)，然后在環(huán)境溫度下過夜。濃縮反應(yīng)混合物。將殘余物溶解在乙酸乙酯中，然后用1.0N鹽酸水溶液(～8mL)酸化。將有機(jī)相用鹽水(3x)洗滌，用無水硫酸鈉干燥并濃縮。經(jīng)過快速色譜(Biotage 40L，20∶80乙酸乙酯-己烷)純化，得到(R)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-2-甲基丙酸油狀物，該油狀物凝固成粘稠的白色固體。(產(chǎn)量1.60g，67.6％)。
實(shí)施例23b(R)-叔丁基-2-異氰酸根合-丙氧基二苯基硅烷手性 將(R)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-2-甲基丙酸(0.51g，1.48mmol)(來自上述實(shí)施例23a)溶解在二氯甲烷(4mL，經(jīng)過分子篩干燥)中。加入三乙胺(0.42mL，2.98mmol)(Aldrich)，并將溶液在冰-水浴中冷卻。滴加氯甲酸乙酯(0.17mL，1.78mmol)(Aldrich)，將混合物在冷卻條件下攪拌50分鐘。將反應(yīng)混合物另加二氯甲烷稀釋，并用水然后是鹽水洗滌。將有機(jī)相用硫酸鈉干燥并濃縮，得到混合酸酐。
向該混合酸酐的丙酮(5mL)溶液中加入疊氮化鈉(0.29g，4.41mmol)(Aldrich)的水(5mL)溶液。將混合物在室溫下攪拌10分鐘，然后另加二氯甲烷和水稀釋。有機(jī)相用鹽水洗滌，硫酸鎂干燥并濃縮，得到(R)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-2-甲基丙酰基疊氮化物。
將(R)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-2-甲基丙?；B氮化物溶解在甲苯(～5mL，用4A分子篩干燥)，并在120℃的油浴中加熱。劇烈的氮?dú)饪焖俜懦觯瑢?dǎo)致通過Curtius重排得到(R)-叔丁基-2-異氰酸根合-丙氧基-二苯基硅烷。將該混合物不經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。
實(shí)施例23c(R)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 將120℃的(R)-叔丁基-2-異氰酸根合-丙氧基-二苯基硅烷[從0.51g，1.48mmol的(R)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-2-甲基丙酸]在原位生成]的熱甲苯(～5mL)溶液(來自上述實(shí)施例23b)用[(2，4-二氯嘧啶-5-基)甲基](4-甲氧基苯基)胺(0.38g，1.34mmol)(來自上述實(shí)施例1d)處理。將溶液在120℃下加熱45-50分鐘，然后冷卻到室溫并濃縮，得到中間體脲。
將粗制的脲中間體溶解在無水四氫呋喃(5mL)中，并用冰-水浴冷卻。在約5分鐘內(nèi)滴加叔丁醇鉀(1.0M的四氫呋喃溶液，1.4mL，1.4mmol)(Aldrich)。將混合物在冷卻條件下攪拌15分鐘，然后除去冷卻浴，再繼續(xù)攪拌3-4分鐘。將混合物通過硅膠塞過濾，用乙酸乙酯洗脫。粗產(chǎn)物用快速色譜(Biotage 40M，乙酸乙酯-己烷梯度洗脫[30-40％乙酸乙酯])純化，得到(R)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮泡沫。(產(chǎn)量0.57g，62.4％)。
實(shí)施例23d(R)-(-)-1-(2-羥基-1-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性
將1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.56g，0.92mmol)(來自上述實(shí)施例23c)和苯胺(0.50mL，5.49mmol)(Aldrich)合并，并在110℃的油浴中加熱1.5小時(shí)。將混合物冷卻到室溫，并在己烷中研磨。將殘余物溶解在乙酸乙酯中，過濾除去不溶的鹽酸苯胺。將濾液用快速色譜(Biotage 40M，40∶60乙酸乙酯-己烷)純化。產(chǎn)物仍被少量苯胺污染。將該污染物再用己烷研磨除去，得到(R)-1-(2-叔丁基-二苯基-硅烷基氧基-1-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.55g，89.1％)。
將(R)-1-(2-叔丁基-二苯基-硅烷基氧基-1-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.55g，0.80mmol)溶解在無水四氫呋喃(6mL)中，并用四丁基銨氟化物(1.0M的四氫呋喃溶液，3.2mL，3.20mmol)(Aldrich)在40℃下處理3小時(shí)，然后在室溫下處理2小時(shí)。濃縮反應(yīng)物。將殘余物再溶解在乙酸乙酯中，并用水和鹽水洗滌。將有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥并濃縮。用快速色譜(Biotage 40M，乙酸乙酯-己烷梯度洗脫[75-85％乙酸乙酯])純化，接著在乙酸乙酯-己烷中結(jié)晶，得到(R)-(-)-1-(2-羥基-1-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮白色固體。(產(chǎn)量0.26g，79.9％)。熔點(diǎn)156-163℃。
C22H23N5O3[M+H]+的HR-MS(ES+)m/z計(jì)算值406.1874。實(shí)測406.1878。
實(shí)施例24a3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 向[(2，4-二氯嘧啶-5-基)甲基](4-甲氧基-苯基)胺(2.84g，10.0mmol)(來自上述實(shí)施例1d)在叔丁基甲基醚(30mL)中的懸浮液中加入異氰酸苯甲酰酯(90％，1.80g，11.0mmol)(Aldrich)，將反應(yīng)混合物在回流條件下加熱過夜。將反應(yīng)混合物減壓濃縮，得到粗制的脲衍生物，將該脲衍生物溶解在無水四氫呋喃(20mL)中，并將溶液冷卻到0℃。向溶液中加入叔丁醇鉀(1.0M的四氫呋喃溶液，10mL，10.0mmol)(Aldrich)，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌4小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(150mL)稀釋，用飽和氯化銨水溶液(50mL)、水(30mL)和鹽水(30mL)依次洗滌，用無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮。將殘余物用快速柱純化，得到一氯化物白色固體。(產(chǎn)量1.15g，29.1％，兩步)。
將該一氯化物(0.40g，1.0mmol)和苯胺(0.28g，3.0mmol)(Aldrich)的混合物在120℃下加熱10分鐘。然后將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(50mL)和水(30mL)稀釋。過濾這樣獲得的懸浮液并收集固體，用丙酮、乙酸乙酯和乙醚洗滌，得到3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮白色固體。(產(chǎn)量201mg，57.9％)。將濾液在減壓條件下部分濃縮并過濾，得到1-苯甲酰基-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮白色固體。(產(chǎn)量86.0mg，19.0％)。
實(shí)施例24b3-(4-甲氧基-苯基)-1-甲基-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 方法A向3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(34.7mg，0.1mmol)(來自上述實(shí)施例24a)在四氫呋喃(5mL)中的懸浮液中加入氫化鈉(60％，10mg，0.25mmol)(Aldrich)，接著一次性加入甲基碘(0.032mL，0.5mmol)(Aldriich)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜，然后在回流下加熱5小時(shí)。然后用飽和氯化銨水溶液淬滅反應(yīng)，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。過濾合并的有機(jī)萃取物，得到3-(4-甲氧基-苯基)-1-甲基-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮白色固體。(產(chǎn)量20.9mg，57.9％)。
方法B向[(2，4-二氯嘧啶-5-基)甲基](4-甲氧基-苯基)胺(198mg，0.7mmol)(來自上述實(shí)施例1d)的正丁醇(5mL)溶液中加入甲胺(20％的甲醇溶液，0.7mL，1.4mmol)(Aldrich)，接著一次加入N，N-二異丙基乙胺(130mg)(Aldrich)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜，然后用水淬滅，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物依次用水(10mL)和鹽水(10mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮，得到粗制的一氯化物無色油狀物，該油狀物不經(jīng)進(jìn)一步純化直接用于下一步。
向該粗制一氯化物(195mg，0.7mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入三乙胺(0.3mL，2.1mmol)(Aldrich)，接著滴加光氣的甲苯溶液(20％溶液，0.5mL，0.98mmol)(Fluka)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌15分鐘。然后將反應(yīng)混合物倒入冰-冷的水(50mL)中，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物依次用水(10mL)和鹽水(10mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮，得到粗制的中間體，將該中間體再溶解在二氯甲烷(5mL)中，并在4-(二甲基氨基)吡啶(20mg)(Aldrich)存在下加熱回流過夜。將反應(yīng)混合物用水淬滅，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物依次用水(10mL)和鹽水(10mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物，將該粗產(chǎn)物用制備型薄層色譜純化，得到7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-1-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量79mg，37％，3步)。
將7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-1-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(65mg，0.21mmol)的苯胺(1.0mL)(Aldrich)混合物加熱到120℃1小時(shí)。待冷卻后，將反應(yīng)混合物用己烷(100mL×4)洗滌，在乙酸乙酯-己烷中重結(jié)晶粗產(chǎn)物，得到3-(4-甲氧基-苯基)-1-甲基-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮灰白色固體。(產(chǎn)量76.0mg，98.7％)。
實(shí)施例251-(2-甲氧基-乙氧甲基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 向3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(70mg，0.2mmol)(來自上述實(shí)施例24a)的四氫呋喃(10mL)懸浮液中加入氫化鈉(60％，20mg，0.5mmol)(Aldrich)，接著一次加入2-甲氧基乙氧基甲基氯化物(0.032mL，2.4mmol)(Aldrich)。將反應(yīng)混合物在回流下加熱5小時(shí)，得到黃色溶液。然后用飽和氯化銨水溶液淬滅反應(yīng)，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。過濾合并的有機(jī)萃取物，得到原材料，為白色固體(33.1mg，47.1％)，將濾液依次用水(10mL)和鹽水(10mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物，將該粗產(chǎn)物用制備型薄層色譜純化，得到1-(2-甲氧基-乙氧甲基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮白色無定形固體。(產(chǎn)量30.5mg，35.0％)。
實(shí)施例263-[-3-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-丙腈
向[(2，4-二氯嘧啶-5-基)甲基](4-甲氧基苯基)胺(198mg，0.7mmol)(來自上述實(shí)施例1d)的正丁醇(5mL)溶液中加入3-氨基丙腈(98mg，1.4mmol)(Fluorochem Ltd.)，接著一次加入N，N-二異丙基乙胺(0.13mL)(Aldrich)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜，然后用水淬滅，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物依次用水(10mL)和鹽水(10mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮，得到粗制的一氯化物無色油狀物(產(chǎn)量220mg)，將該一氯化物不經(jīng)進(jìn)一步純化地用于下一步驟。
向0℃下的該粗制一氯化物(212mg)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入三乙胺(0.29mL，2.1mmol)(Aldrich)，接著滴加光氣的甲苯溶液(20％溶液，1.44mL，2.94mmol)(Fluka)。將反應(yīng)混合物在0℃下攪拌10分鐘，然后在室溫下攪拌1.5小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物倒入冰-冷的水(50mL)中，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物依次用水(10mL)和鹽水(10mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮，得到粗制中間體。將該中間體溶解在二氯甲烷(5mL)中，并在4-(二甲基氨基)吡啶(120mg，0.98mmol)(Aldrich)存在下加熱回流1.5小時(shí)。將反應(yīng)混合物用水淬滅，用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物依次用水(10mL)和鹽水(10mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物，將該粗產(chǎn)物用制備型薄層色譜純化，得到7-氯-1-環(huán)丙基甲基-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量104mg，43.2％，3步)。
將7-氯-1-環(huán)丙基甲基-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(104mg，0.30mmol)在苯胺(2.0mL)(Aldrich)中的混合物加熱到120℃1.5小時(shí)。待冷卻后，將反應(yīng)混合物用己烷(4×100mL)洗滌，粗產(chǎn)物通過在甲醇-乙酸乙酯中重結(jié)晶純化，得到3-[-3-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-丙腈白色固體。(產(chǎn)量111mg，91.7％)。
實(shí)施例27a(-)-(1R，4S)-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊-2-烯醇
向(1R，3S)-(+)-4-環(huán)戊烯-1，3-二醇1-乙酸酯(1.0g，7.03mmol)(Aldrich)和咪唑(960mg，14.06mmol)(Aldriich)的四氫呋喃(35mL)溶液中加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物(1.27g，8.44mmol)(Aldrich)。讓混合物緩慢升溫至室溫，攪拌過夜，然后在乙酸乙酯和水之間分配。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，將殘余物溶解在甲醇(45mL)中。向該溶液中加入碳酸鉀(1.17g，8.44mmol)，并將混合物攪拌過夜。次日早上將反應(yīng)混合物在乙酸乙酯和水之間分配。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，殘余物用硅膠柱色譜純化，用0-30％乙醚的己烷溶液梯度洗脫，得到(-)-(1R，4S)-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊-2-烯醇無色油狀物。(產(chǎn)量1.29g，85％)。
C11H22O2Si[M+Na]+的HRMS m/z計(jì)算值237.1281。實(shí)測237.1284。
實(shí)施例27b(-)-(1S，3R)-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊醇 將(-)-(1R，4S)-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊-2-烯醇(1.2g，5.6mmol)(來自上述實(shí)施例27a)和Wilkinson催化劑(520mg，0.56mmol)(Aldrich)的甲苯(30ml)溶液在大氣壓下氫化16小時(shí)。將反應(yīng)混合物過濾，并在乙酸乙酯和水之間分配。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。所得到的殘余物用硅膠柱色譜純化，使用0-30％乙醚的己烷溶液梯度洗脫，得到(-)-(1S，3R)-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊醇無色油狀物。(產(chǎn)量790mg，65％).
C11H24O2Si[M+Na]+的HRMS m/z計(jì)算值239.1438。實(shí)測239.1441。
實(shí)施例27c(-)-(1R，3R)-(3-疊氮基-環(huán)戊基氧基)-叔丁基-二甲基-硅烷 向在0℃下冷卻的(-)-(1S，3R)-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊醇(670mg，3.09mmol)(來自上述實(shí)施例27b)和三苯膦(1.06g，4.02mmol)(Aldrich)在無水四氫呋喃(60mL)中的混合物中滴加偶氮二羧酸二乙酯(640μL，0.70g，4.02mmol)(Aldrich)。2到3分鐘后，接著滴加二苯基磷?；B氮化物(860μL，1.1g，4.02mmol)(Aldrich)。讓混合物緩慢升溫到室溫，在攪拌過夜后，在乙酸乙酯和水之間分配。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，殘余物用硅膠柱色譜純化，使用0-20％乙醚的己烷溶液梯度洗脫，得到(-)-(1R，3R)-(3-疊氮基-環(huán)戊基氧基)-叔丁基-二甲基-硅烷無色液體。(產(chǎn)量540mg，72％)。
實(shí)施例27d(+)-(1R，3R)-4-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基氨基]-2-甲硫基-嘧啶-5-羧酸乙酯
向(-)-(1R，3R)-(3-疊氮基-環(huán)戊基氧基)-叔丁基-二甲基-硅烷(540mg，2.24mmol)(來自上述實(shí)施例27c)的乙醇(30mL)溶液中加入氧化鉑(51mg，0.22mmol)(Aldrich)，將混合物在1大氣壓的氫氣下氫化過夜。然后過濾混合物，固體用四氫呋喃(約25mL)洗滌，濃縮合并的濾液，將殘余物溶解在二噁烷(50mL)中。向該溶液中加入三乙胺(620μL，450mg，4.48mmol)(Aldrich)和4-氯-2-甲硫基-5-嘧啶羧酸乙酯(520mg，2.24mmol)(Aldrich)，并將混合物在回流下攪拌1小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物冷卻，并在乙酸乙酯和水之間分配。收集乙酸乙酯層，用硫酸鈉干燥并濃縮，殘余物用0-20％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫的硅膠柱色譜純化，得到(+)-(1R，3R)-4-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基氨基]-2-甲硫基-嘧啶-5-羧酸乙酯無色粘稠油狀物。(產(chǎn)量710mg，77％)。
實(shí)施例27e(-)-(1R，3R)-1-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 向0℃下的(+)-(1R，3R)-4-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基氨基]-2-甲硫基-嘧啶-5-羧酸乙酯(710mg，1.73mmol)(來自上述實(shí)施例27d)在無水四氫呋喃(50mL)中的混合物中分批加入氫化鋁鋰(196mg，5.19mmol)(Aldrich)。讓所得到的漿液緩慢升溫到室溫，在攪拌5.5小時(shí)后，分批倒入劇烈攪拌的乙酸乙酯和飽和酒石酸鈉鉀水溶液的混合液中。然后收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮至固體殘余物，將其溶解在二氯甲烷(50mL)中。向該溶液中加入二氧化錳(1.5g，17.30mmol)(Aldrich)，將所得到的漿液攪拌3.5小時(shí)，然后過濾。固體用四氫呋喃(約30mL)洗滌，濃縮合并的濾液，并將殘余物溶解在苯(60mL)中。將該溶液用對-茴香胺(180mg，1.49mmol)(Aldrich)和一水合對甲苯磺酸(25mg)(Aldrich)處理，使用Dean Stark裝置回流過夜。然后將混合物冷卻，在乙酸乙酯和水之間分配，收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。將殘余物溶解在無水四氫呋喃(50mL)中，將所得到的溶液在0℃下冷卻。向該溶液中少量多次加入氫化鋁鋰(150mg，4.08mmol)，并讓形成的漿液緩慢升溫到室溫。在攪拌過夜后，將漿液分批倒入乙酸乙酯和飽和酒石酸鈉鉀水溶液的混合液中。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，殘余物用硅膠柱色譜純化，用0-30％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫。然后將該步純化獲得的中間體溶解在二氯甲烷(80mL)中，將該溶液用三乙胺(490μL，0.35g，3.47mmol)(Aldrich)處理，并在0℃下冷卻。接著滴加20％的光氣的甲苯溶液(570μL，1.16mmol)(Fluka)。將反應(yīng)混合物在0℃下攪拌20分鐘，在室溫下攪拌1小時(shí)，然后在乙酸乙酯和水之間分配。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。殘余物用0-30％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫的硅膠柱色譜純化。將該步純化的中間體溶解在四氫呋喃(50mL)中。然后將該溶液用3-氯過氧-苯甲酸(75％，320mg，1.43mmol)(Aldrich)處理，攪拌過夜，并在乙酸乙酯和飽和碳酸鉀水溶液之間分配。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮至固體殘余物。將該殘余物溶解在苯胺(3mL)(Aldrich)中，并在75℃下攪拌16.5小時(shí)。然后將混合物冷卻，用硅膠柱色譜純化，用0-20％乙醚的甲苯溶液梯度洗脫，得到(-)-(1R，3R)-1-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮灰白色固體。(產(chǎn)量152mg，68％)。
C30H39N5O3Si[M+H]+的HRMS m/z計(jì)算值546.2895。實(shí)測546.2901。
實(shí)施例27f(+)-(1R，3R)-1-(3-羥基-環(huán)戊基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 在0℃下將(-)-(1R，3R)-1-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(148mg，0.27mmol)(來自上述實(shí)施例27e)溶解在含有水(300μL)的25％的三氟乙酸的二氯甲烷(5mL)溶液中。在攪拌30分鐘后，將反應(yīng)混合物在乙酸乙酯和0.5N氫氧化鈉水溶液之間分配。通過加入固體氫氧化鈉將水層的pH調(diào)節(jié)到12。然后收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，得到粗產(chǎn)物。用硅膠柱色譜純化，使用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液到0-40％四氫呋喃的乙酸乙酯溶液梯度洗脫，接著用過量戊烷沉淀出二氯甲烷，得到(+)-(1R，3R)-1-(3-羥基-環(huán)戊基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮白色固體。(產(chǎn)量92mg，86％)。
C24H25N5O3[M+H]+的HRMS m/z計(jì)算值432.2030。實(shí)測432.2035。IC50(KDR)＝0.013μM，IC50(FGFR)＝0.035μM。
實(shí)施例28a(R)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-丁酸 將(R)-(-)-3-羥基丁酸甲酯(0.31g，2.61mmol)(Aldrich)溶解在二氯甲烷(3.5mL，經(jīng)過分子篩干燥)中。加入咪唑(0.25g，3.66mmol)(Aldrich)。當(dāng)全都溶解時(shí)，滴加叔丁基二苯基甲硅烷基氯化物(0.69mL，2.63mmol)(Aldrich)，并將混合物在室溫下攪拌4.5小時(shí)。將反應(yīng)混合物另加二氯甲烷稀釋，用水(2×)和鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。用快速色譜(Biotage 40M，5∶95乙酸乙酯-己烷)純化，得到(R)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-丁酸甲酯。(產(chǎn)量0.85g，91.2％)。
將被保護(hù)的酯(0.84g，2.36mmol)溶解在3∶1四氫呋喃-甲醇中，用氫氧化鈉水溶液(1.0N，3.0mL，3.00mmol)在～42℃處理過夜。濃縮反應(yīng)物。將殘余物在乙酸乙酯和水之間分配，并用1N鹽酸水溶液酸化。有機(jī)相用鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。用快速色譜(Biotage 40M，20∶80乙酸乙酯-己烷)純化，得到(R)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-丁酸。(產(chǎn)量0.63g，69.9％)。
實(shí)施例28b(R)-叔丁基-(2-異氰酸根合-1-甲基-乙氧基)-二苯基-硅烷 將(R)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-丁酸(0.81g，2.25mmol)(來自上述實(shí)施例28a)溶解在二氯甲烷(8mL，經(jīng)過分子篩干燥)中。加入三乙胺(0.63mL，4.52mmol)(Aldrich)，將所得到的溶液在冰-水浴中冷卻。然后滴加氯甲酸乙酯(0.26mL，2.72mmol)(Aldrich)，將混合物在冷卻條件下攪拌50分鐘。將反應(yīng)混合物另加二氯甲烷稀釋，用水和鹽水洗滌。將有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，得到中間體混合酸酐。
將該中間體混合酸酐溶解在丙酮(8mL)中，用疊氮化鈉溶液(0.44g，6.76mmol)(Aldrich)處理。在室溫下攪拌10分鐘后，將反應(yīng)物用二氯甲烷和水稀釋。有機(jī)相用鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過濾并濃縮，得到(R)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-丁酰疊氮化物。將該粗制的疊氮化物溶解在甲苯(6mL)中，在120℃的油浴中加熱。劇烈的氮?dú)饪焖俜懦?，?dǎo)致通過Curtius重排得到所需的(R)-叔丁基-(2-異氰酸根合-1-甲基-乙氧基)-二苯基-硅烷。該原料原樣用于下一步驟中。
實(shí)施例28c(R)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-丙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 將(R)-叔丁基-(2-異氰酸根合-1-甲基-乙氧基)-二苯基-硅烷(從0.81g，2.25mmol的(R)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-丁酸在原位產(chǎn)生)(來自上述實(shí)施例28b)的熱甲苯(6mL)溶液用[(2，4-二氯嘧啶-5-基)甲基](4-甲氧基苯基)胺(0.57g，2.02mmol)(來自上述實(shí)施例1d)處理。將溶液在120℃加熱45分鐘，然后冷卻到室溫并濃縮，得到中間體脲。
將該脲溶解在無水四氫呋喃(7.5mL)中，并在冰-鹽水浴中冷卻。滴加叔丁醇鉀(1.0N的四氫呋喃溶液，2.15mL，2.15mmol)(Aldrich)。將混合物在冷卻條件下攪拌15分鐘，然后移走浴液，再繼續(xù)攪拌5分鐘。將反應(yīng)混合物通過硅膠墊過濾，用乙酸乙酯洗脫。經(jīng)快速色譜(Biotage 40M，乙酸乙酯-己烷梯度洗脫[20-40％乙酸乙酯])純化，得到所需的中間體，該中間體被未環(huán)化的脲中間體所污染。
將純化的混合物(1.02g)溶解在無水四氫呋喃(6mL)中，并如上再用叔丁醇鉀(1.4mL，1.40mmol)處理。(Biotage 40M，乙酸乙酯-己烷梯度洗脫(30-40％乙酸乙酯)純化得到(R)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-丙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.78g，65.0％)。
實(shí)施例28d
(R)-1-(2-羥基-丙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 將(R)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-丙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.71g，1.15mmol)(來自上述實(shí)施例28c)和苯胺(1.00mL，10.97mmol)(Aldrich)合并，在110℃的油浴中加熱75分鐘。待冷卻到室溫后，將殘余物用己烷研磨。丟棄上清液，將殘余物溶解在乙酸乙酯中，用水和鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。用快速色譜(Biotage 40M，乙酸乙酯-己烷梯度洗脫[20-40％乙酸乙酯])純化，得到中間體(R)-1-(2-叔丁基-二苯基-硅烷基氧基-丙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.73g，91.9％)。
將(R)-1-(2-叔丁基-二苯基-硅烷基氧基-丙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮溶解在無水四氫呋喃(7mL)中，用四丁基銨氟化物(1.0M的四氫呋喃溶液，4.2mL，4.20mmol)(Aldrich)在45℃的油浴中處理過夜。濃縮反應(yīng)混合物，將殘余物溶解在乙酸乙酯中，并用水和鹽水洗滌。將有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。粗制原料用快速色譜(Biotage 40M，80∶20乙酸乙酯-己烷)純化，在乙酸乙酯-己烷中結(jié)晶，得到(R)-(-)-1-(2-羥基-丙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.25g，58.9％)。
熔點(diǎn)189-193℃。
C22H23N5O3[M+H]+的HR-MS(ES+)m/z計(jì)算值406.1874。實(shí)測406.1878。
實(shí)施例29a(+)-(1S，4R)-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊-2-烯醇
向0℃下的(1R，4S)-4-乙酰氧基-2-環(huán)戊烯-1-醇(1.0g，7.03mmol)(Fluka)和咪唑(960mg，14.06mmol)(Aldrich)的四氫呋喃(65mL)溶液中加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物(1.27g，8.44mmol)(Aldrich)。讓混合物緩慢升溫至室溫，攪拌過夜，然后在乙酸乙酯和水之間分配。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，將殘余物溶解在甲醇(約45mL)中。向該溶液中加入碳酸鉀(1.17g，8.44mmol)，將混合物攪拌過夜。然后將反應(yīng)混合物在乙酸乙酯和水之間分配。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，殘余物用0-30％乙醚的己烷溶液梯度洗脫的硅膠柱色譜純化，得到(+)-(1S，4R)-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊-2-烯醇無色油狀物。(產(chǎn)量1.43g，95％)。
實(shí)施例29b(+)-(1R，3S)-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊醇 對(+)-(1S，4R)-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊-2-烯醇(1.43g，6.67mmol)(來自上述實(shí)施例29a)和威爾金森催化劑(Wilkinson′s catalyst)(1.23g，1.33mmol)(Aldrich)的甲苯(55mL)溶液進(jìn)行常壓氫化16.5小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物過濾，濃縮至小體積，用硅膠柱色譜純化，用0-25％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫，得到(+)-(1R，3S)-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊醇無色油狀物。(產(chǎn)量745mg，61％)。
實(shí)施例29c(+)-(1S，3S)-(3-疊氮基-環(huán)戊基氧基)-叔丁基-二甲基-硅烷 向0℃的(+)-(1R，3S)-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊醇(745mg，3.44mmol)(來自上述實(shí)施例29b)和三苯膦(1.17g，4.47mmol)(Aldrich)的無水四氫呋喃(60mL)溶液中滴加偶氮二羧酸二乙酯(710μL，780mg，4.47mmol)(Aldrich)。2到3分鐘后，滴加二苯基磷?；B氮化物(950μL，1.23g，4.47mmol)(Aldrich)。讓混合物緩慢升溫到室溫，攪拌過夜，然后在乙酸乙酯和水之間分配。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，將所得到的殘余物進(jìn)行硅膠柱色譜，用0-20％乙醚的己烷溶液梯度洗脫，得到(+)-(1S，3S)-(3-疊氮基-環(huán)戊基氧基)-叔丁基-二甲基-硅烷無色液體。(產(chǎn)量589mg，70％)。
C11H23N3OSi[M]+的HRMS m/z計(jì)算值241.1610。實(shí)測241.1613。
實(shí)施例29d(-)-(1S，3S)-4-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基氨基]-2-甲硫基-嘧啶-5-羧酸乙酯 向(+)-(1S，3S)-(3-疊氮基-環(huán)戊基氧基)-叔丁基-二甲基-硅烷(580mg，2.40mmol)(來自上述實(shí)施例29c)的乙醇(30mL)溶液中加入氧化鉑(55mg，0.24mmol)(Aldrich)。將混合物在1個(gè)大氣壓的氫氣下氫化過夜。然后將反應(yīng)混合物過濾，固體用四氫呋喃(約30mL)洗滌，濃縮合并的濾液，并將殘余物溶解在二噁烷(50mL)中。向該溶液中加入三乙胺(970μL，705mg，6.96mmol)(Aldrich)和4-氯-2-甲硫基-5-嘧啶羧酸乙酯(594mg，2.55mmol)(Aldrich)，將混合物加熱回流45分鐘，然后冷卻并在乙酸乙酯和水之間分配。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，殘余物用硅膠柱色譜純化，0-20％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫，得到(-)-(1S，3S)-4-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基氨基]-2-甲硫基-嘧啶-5-羧酸乙酯無色粘稠油狀物。(產(chǎn)量910mg，95％)。
C19H33N3O3SSi[M+H]+的HRMS m/z計(jì)算值412.2085。實(shí)測412.2088。
實(shí)施例29e(-)-(1S，3S)-4-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基氨基]-2-甲硫基-嘧啶-5-甲醛手性 向0℃下的(-)-(1S，3S)-4-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基氨基]-2-甲硫基-嘧啶-5-羧酸乙酯(910mg，2.21mmol)(來自上述實(shí)施例29d)的四氫呋喃(55mL)溶液中分批加入氫化鋁鋰(250mg，6.63mmol)(Aldrich)。讓反應(yīng)混合物緩慢升溫到室溫。在攪拌過夜后，將反應(yīng)混合物分批倒入劇烈攪拌的乙酸乙酯和飽和酒石酸鈉鉀水溶液的混合液中。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮至固體，然后將固體溶解在二氯甲烷(55mL)中。向該溶液中加入二氧化錳(1.92g，22.11mmol)(Aldrich)，將混合物攪拌過夜。過濾漿液，固體用四氫呋喃(約25mL)洗滌，蒸發(fā)合并的有機(jī)層，殘余物用硅膠柱色譜純化，0-50％乙醚的己烷溶液梯度洗脫，得到(-)-(1S，3S)-4-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基氨基]-2-甲硫基-嘧啶-5-甲醛粘稠無色油狀物。(產(chǎn)量615mg，76％)。
C17H29N3O2SSi[M+H]+的HRMS m/z計(jì)算值368.1823。實(shí)測368.1825。
實(shí)施例29f(-)-(1S，3S)-1-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-甲硫基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 將(-)-(1S，3S)-4-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基氨基]-2-甲硫基-嘧啶-5-甲醛(596mg，1.62mmol)(來自上述實(shí)施例29e)、對-茴香胺(210mg，1.70mmol)(Aldrich)和催化量的一水合對甲苯磺酸(25mg)(Aldrich)的混合物使用Dean Stark裝置加熱回流16小時(shí)。然后將混合物冷卻，并在乙酸乙酯和水之間分配。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。將殘余物溶解在無水四氫呋喃(60mL)中，將所得到的溶液冷卻到0℃。接著分批加入氫化鋁鋰(184mg，4.87mmol)，讓形成的漿液緩慢升溫到室溫。在攪拌過夜后，將反應(yīng)混合物分批加入到劇烈攪拌的乙酸乙酯和飽和酒石酸鈉鉀水溶液的混合液中。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，和將殘余物用硅膠柱色譜純化，用0-30％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫。將該步純化的產(chǎn)物溶解在二氯甲烷(50mL)中。向該溶液中加入三乙胺(910μL，0.66g，6.54mmol)(Aldrich)，將混合物冷卻到0℃。隨后滴加20％的光氣的甲苯溶液(670μL，1.37mmol)(Fluka)。在0℃下攪拌20分鐘后，在室溫下攪拌1小時(shí)，將反應(yīng)混合物在乙酸乙酯和水之間分配。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，殘余物用硅膠柱色譜純化，0-30％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫，得到(-)-(1S，3S)-1-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-甲硫基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮灰白色泡沫狀固體。(產(chǎn)量620mg，76％)。
C25H36N4O3SSi[M+H]+的HRMS m/z計(jì)算值501.2350。實(shí)測501.2358。
實(shí)施例29g(-)-(1S，3S)-1-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 將(-)-(1S，3S)-1-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-甲硫基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(610mg，1.22mmol)(來自上述實(shí)施例29f)的二氯甲烷(50mL)溶液用3-氯過氧苯甲酸(75％，590mg，2.56mmol)(Aldrich)處理。在攪拌過夜后，將混合物在乙酸乙酯和飽和碳酸鉀水溶液之間分配。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮至固體，將固體溶解在苯胺(7mL)(Aldrich)中。將該溶液在95℃下攪拌6小時(shí)，然后冷卻并進(jìn)行硅膠柱色譜，用0-20％乙醚的甲苯溶液梯度洗脫，得到(-)-(1S，3S)-1-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮白色固體。(產(chǎn)量450mg，68％)。
C30H39N5O3Si[M+H]+的HRMS m/z計(jì)算值546.2895。實(shí)測546.2902。
實(shí)施例29h(-)-(1S，3S)-1-(3-羥基-環(huán)戊基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮
在0℃下將(-)-(1S，3S)-1-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(445mg，0.82mmol)(來自上述實(shí)施例29g)溶解在25％的三氟乙酸的二氯甲烷溶液(5mL)和水(300μL)中。在攪拌30分鐘后，將混合物在乙酸乙酯和1N氫氧化鈉水溶液之間分配，并通過加入固體氫氧化鈉將水層的pH調(diào)節(jié)到12。收集有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，殘余物用硅膠柱色譜純化，0-100乙酸乙酯的己烷溶液到0-40％四氫呋喃的乙酸乙酯溶液梯度洗脫，得到(-)-(1S，3S)-1-(3-羥基-環(huán)戊基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮白色固體。(產(chǎn)量307mg，86％)。
C24H25N5O3[M+H]+的HRMS m/z計(jì)算值432.2030。實(shí)測432.2036。
實(shí)施例303-[-3-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-丙酰胺 向0℃下的3-[-3-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-丙腈(60mg，0.15mmol)(來自上述實(shí)施例26)的二甲亞砜(2mL)溶液中加入1.0N氫氧化鈉水溶液(0.42mL，0.42mmol)，接著加入35％過氧化氫水溶液(0.35mL)(Fisher)。將反應(yīng)混合物在0℃下攪拌2小時(shí)，然后在室溫下攪拌過夜。將反應(yīng)物用乙酸乙酯(50mL)稀釋，用水(3×20mL)洗滌。將有機(jī)層用鹽水(10mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮，得到粗制的固體(71mg)，將該固體在己烷-乙酸乙酯中重結(jié)晶，得到3-[-3-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-丙酰胺灰色固體。(產(chǎn)量28.3mg，45.1％)。
實(shí)施例31a(S)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-丁酸 將(S)-(+)-3-羥基丁酸甲酯(0.48g，4.04mmol)(Aldrich)溶解在二氯甲烷(6mL，經(jīng)過分子篩干燥)中。加入咪唑(0.39g，5.65mmol)(Aldrich)。當(dāng)全都溶解時(shí)，滴加叔丁基二苯基甲硅烷基氯化物(1.05mL，4.04mmol)，將混合物在室溫下攪拌4.5小時(shí)。將反應(yīng)混合物另加二氯甲烷稀釋，用水(2×)和鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。經(jīng)快速色譜(Biotage 40M，5∶95乙酸乙酯-己烷)純化得到(S)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-丁酸甲酯。(產(chǎn)量1.33g，92.4％)。
將該甲酯(1.33g，3.73mmol)溶解在3∶1的四氫呋喃-甲醇(12mL)中，用氫氧化鈉水溶液(1N，4.3mL，4.30mmol)在45℃下處理過夜。17小時(shí)后濃縮反應(yīng)混合物。將殘余物在乙酸乙酯和水之間分配，用1N鹽酸水溶液酸化。有機(jī)相用鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥并濃縮。經(jīng)快速色譜(Biotage 40M，20∶80乙酸乙酯-己烷)純化得到(S)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-丁酸。(產(chǎn)量0.89g，62.2％)。
實(shí)施例31b(S)-叔丁基-(2-異氰酸根合-1-甲基-乙氧基)-二苯基-硅烷
將(S)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-丁酸(0.88g，2.51mmol)(來自上述實(shí)施例31a)溶解在二氯甲烷(8mL，經(jīng)過分子篩干燥)中。加入三乙胺(0.71mL，5.06mmol)(Aldrich)，將所得到的溶液在冰-水浴中冷卻。滴加氯甲酸乙酯(0.29mL，3.03mmol)(Aldrich)，將混合物在冷卻條件下攪拌50分鐘。將反應(yīng)混合物另加二氯甲烷稀釋，并用水和鹽水洗滌。將有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，得到粗制的混合酸酐。
將中間體混合酸酐溶解在丙酮(10mL)中，用疊氮化鈉溶液(0.50g，7.53mmol)(Aldrich)處理。在室溫下攪拌15分鐘后，將反應(yīng)物用二氯甲烷和水稀釋。有機(jī)相用鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，并在高真空下簡短干燥，得到(S)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-丁?；B氮化物。
將粗制的疊氮化物溶解在甲苯(7mL)中，在115-120℃的油浴中加熱70分鐘。劇烈的氮?dú)饪焖俜懦?，?dǎo)致通過Curtius重排得到(S)-叔丁基-(2-異氰酸根合-1-甲基-乙氧基)-二苯基-硅烷。將該原料不經(jīng)進(jìn)一步純化地用于下一步。
實(shí)施例31c(S)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-丙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮
將(S)-叔丁基-(2-異氰酸根合-1-甲基-乙氧基)-二苯基-硅烷(從0.88g，2.51mmol(S)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-丁酸在原位產(chǎn)生)(來自上述實(shí)施例31b)的熱甲苯(7mL)溶液用[(2，4-二氯嘧啶-5-基)甲基](4-甲氧基苯基)胺(0.63g，2.23mmol)(來自上述實(shí)施例1d)處理。將溶液在120℃下加熱50分鐘，然后冷卻到室溫。將反應(yīng)混合物用快速色譜(Biotage 40M，30∶70乙酸乙酯-己烷)純化，得到脲中間體。
將純化的脲中間體(1.32g)溶解在無水四氫呋喃(5mL)中，在冰-鹽水浴中冷卻，并用叔丁醇鉀(1.0M的四氫呋喃溶液，2.1mL，2.1mmol)(Aldrich)處理。將混合物在冷卻條件下攪拌15分鐘，然后移走浴液，再繼續(xù)攪拌5分鐘。通過硅膠墊過濾混合物，用乙酸乙酯洗脫。[Biotage 40M，乙酸乙酯-己烷梯度洗脫(30-35％乙酸乙酯)]純化得到(S)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-丙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.97g，59.4％)。
實(shí)施例31d(S)-(+)-1-(2-羥基-丙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 將(S)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-丙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.97g，1.65mmol)(來自上述實(shí)施例31c)和苯胺(1.00mL，10.97mmol)(Aldrich)合并，在110℃的油浴中加熱。75分鐘后，將反應(yīng)混合物冷卻到室溫，用乙酸乙酯稀釋，并用水和鹽水洗滌。將有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。將粗制原料和另一實(shí)驗(yàn)的原料合并。合并后，用快速色譜(Biotage 40M，乙酸乙酯-己烷梯度洗脫[20-35％乙酸乙酯])純化，然后在乙酸乙酯-己烷中結(jié)晶，得到中間體(S)-1-(2-叔丁基-二苯基-硅烷基氧基-丙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.70g，59.1％)。
將中間體(S)-1-(2-叔丁基-二苯基-硅烷基氧基-丙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.69g，1.08mmol)溶解在無水四氫呋喃(7mL)中。加入四丁基銨氟化物(1.0M的四氫呋喃溶液，4.3mL，4.30mmol)(Aldrich)，將反應(yīng)混合物在43-50℃的油浴中加熱過夜。待冷卻到室溫后，濃縮反應(yīng)物。然后將殘余物置于乙酸乙酯中，并用水和鹽水洗滌。有機(jī)相用無水乙酸鈉干燥。將該原料用快速色譜(Biotage 40M，80∶20乙酸乙酯-己烷)純化，在乙酸乙酯-己烷中結(jié)晶。產(chǎn)物還是被極性更大的雜質(zhì)所污染。將該原料和從另一反應(yīng)獲得的可比原料合并，在乙酸乙酯中重結(jié)晶，得到(s)-(+)-1-(2-羥基-丙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮白色固體。(產(chǎn)量0.19g，28.1％)。熔點(diǎn)188-193℃。
C22H23N5O3[M+H]+的HR-MS(ES+)m/z計(jì)算值406.1874。實(shí)測406.1878。IC50(KDR)＝0.137μM，IC50(FGFR)＝0.612μM。
實(shí)施例32a順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己烷羧酸甲酯 向順式-3，5-二羥基-環(huán)己烷羧酸甲酯(1.0g，5.74mmol)(按照J(rèn).C.Pascal等，U.S.P 6191292，2001年2月20日制備)的二甲基甲酰胺(5mL)溶液中加入咪唑(1.02g，14.92mmol)(Aldrich)和叔丁基-二苯基甲硅烷基氯化物(3.58mL，13.8mmol)(Hüls America)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1天，然后用乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)稀釋。水相用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。將合并的乙酸乙酯層用水和鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。將殘余物用快速色譜純化，乙酸乙酯-己烷(5∶95)洗脫，得到順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己烷羧酸甲酯。(產(chǎn)量3.75g，100％)。
實(shí)施例32b順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己烷羧酸 將順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己烷羧酸甲酯(2.65g，4.07mmol)(來自上述實(shí)施例32a)溶解在甲醇(13mL)、四氫呋喃(13mL)和水(4mL)的混合液中。加入氫氧化鈉水溶液(2.5N，1.8mL，4.5mmol)。將混合物在室溫下攪拌3天，然后減壓濃縮。將殘余物用水和二氯甲烷稀釋。將水相用濃鹽酸酸化到pH2，并用二氯甲烷(2×20mL)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮，得到順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己烷羧酸。(產(chǎn)量2.54g，98％)。
實(shí)施例32c順式-1，3-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-5-異氰酸根合-環(huán)己烷 向0℃下的順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己烷羧酸(1.06g，1.66mmol)(來自上述實(shí)施例32b)的丙酮(10mL)溶液中加入三乙胺(0.28mL，2.0mmol)(Burdick & Jackson)和氯甲酸乙酯(0.19mL，2.00mmol)(Aldrich)。在0℃下將混合物攪拌40分鐘后，加入疊氮化鈉(1.06g，1.66mmol)(Aldrich)的水(5mL)溶液。將混合物在0℃下攪拌1小時(shí)，然后倒入冰-水(50mL)中。將其用乙酸乙酯(3×30mL)萃取，將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。將殘余物溶解在甲苯中，在110℃下加熱4小時(shí)并減壓濃縮，得到順式-1，3-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-5-異氰酸根合-環(huán)己烷。(產(chǎn)量0.91g，87％)。
實(shí)施例32d1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 將(2，4-二氯-嘧啶-5-基-甲基)-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-胺(0.24g，0.73mmol)(來自上述實(shí)施例17a)和順式-1，3-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-5-異氰酸根合-環(huán)己烷(0.46g，0.73mmol)(來自上述實(shí)施例32c)在甲苯(10mL)中的混合物在110℃下加熱過夜。減壓濃縮。將殘余物溶解在四氫呋喃(5mL)中，并冷卻到-30℃。加入叔丁醇鉀(0.9mL，1M的四氫呋喃溶液，0.9mmol)(Aldrich)。將混合物在室溫下攪拌過夜。將其通過硅膠過濾并減壓濃縮。將殘余物用快速色譜純化，乙酸乙酯-己烷(1∶4)洗脫，得到1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.21g，29％)。
實(shí)施例32e1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 將1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.10g，0.11mmol)(來自上述實(shí)施例32d)和對-茴香胺(17.7mg，0.14mmol)(Aldrich)在2-丙醇(4mL)中的混合物放入微波反應(yīng)器(SmithSynthesizerTM)中。將反應(yīng)混合物在160℃下加熱10分鐘。待冷卻后，將其減壓濃縮。將殘余物用快速色譜純化，乙酸乙酯-二氯甲烷(5∶95)洗脫，得到1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.09g，60％)。
實(shí)施例32f1-(順式-3，5-二羥基-環(huán)己基)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-(4-甲氧基苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮
將1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.40g，0.041mmol)(來自上述實(shí)施例32e)和四丁基銨氟化物(0.12mL，1.0M的四氫呋喃溶液，0.12mmol)(Aldrich)的四氫呋喃(5mL)溶液在回流下加熱3小時(shí)。待冷卻后，將其減壓濃縮。將殘余物用快速色譜純化，乙酸乙酯-二氯甲烷(5∶95)洗脫，得到1-(順式-3，5-二羥基-環(huán)己基)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-(4-甲氧基苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量10.0mg，48％)。
實(shí)施例33a1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 將[(2，4-二氯嘧啶-5-基)甲基](4-甲氧基苯基)胺(0.21g，0.75mmol)(來自上述實(shí)施例1d)和順式-1，3-雙-叔丁基-(5-異氰酸根合-環(huán)己基氧基)-二苯基-硅烷(0.45g，0.68mmol)(來自上述實(shí)施例32c)在甲苯(10mL)中的混合物加熱到110℃過夜。將其減壓濃縮。將殘余物溶解在四氫呋喃(5mL)中，并冷卻到-30℃。加入叔丁醇鉀(0.9mL，1M的四氫呋喃溶液，0.9mmol)(Aldrich)。將混合物在室溫下攪拌過夜。將其通過硅膠過濾并減壓濃縮。將殘余物用快速色譜純化，乙酸乙酯-己烷(1∶4)洗脫，得到1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.29g，44％)。
實(shí)施例33b1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 將1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.15g，0.16mmol)(來自上述實(shí)施例33a)和對-茴香胺(25.9mg，0.21mmol)(Aldrich)在2-丙醇(4mL)中的混合物放入微波反應(yīng)器(SmithSynthesizerTM)中。將反應(yīng)混合物在160℃下加熱10分鐘。待冷卻后，將其減壓濃縮。將殘余物用快速色譜純化，乙酸乙酯-己烷(3∶7然后2∶3)洗脫，得到1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.09g，60％)。
實(shí)施例33c1-(順式-3，5-二羥基-環(huán)己基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 將1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.09g，0.09mmol)(來自上述實(shí)施例33b)和四丁基銨氟化物(0.28mL，1.0M的四氫呋喃溶液，0.28mmol)(Aldrich)的四氫呋喃(5mL)溶液在回流下加熱3小時(shí)。待冷卻后，將其減壓濃縮。將殘余物用快速色譜純化，乙酸乙酯-二氯甲烷(5∶95)洗脫，得到1-(順式-3，5-二羥基-環(huán)己基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量18.0mg，39％)。
實(shí)施例34a4-氟-3-甲氧基苯甲酸甲酯 將4-氟-3-羥基苯甲酸(4.33g，27.7mmol)(Aldrich)溶解在無水二甲基甲酰胺(Aldrich)中。在室溫下依次加入碳酸鉀(38.3g，277mmol)和甲基碘(8.6mL，138.5mmol)(Aldrich)，并將混合物攪拌過夜。過濾后，將溶液用水洗滌，并用乙酸乙酯萃取。分離各層，將有機(jī)層用水、1N氫氧化鈉水溶液、水和鹽水依次洗滌。將有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥和減壓濃縮，得到4-氟-3-甲氧基苯甲酸甲酯淺黃色油狀物，該油狀物放置后凝固。(產(chǎn)量4.72g，92％)。
實(shí)施例34b4-氟-3-甲氧基苯甲酸 將4-氟-3-甲氧基苯甲酸甲酯(2.55g，13.85mmol)(來自上述實(shí)施例34a)溶解在四氫呋喃(140mL)和水(70mL)的混合液中。加入一水合氫氧化鋰(5.8g，138.5mmol)，并將混合物加熱回流3.5小時(shí)。在用1N鹽酸水溶液(150mL)淬滅后，用二氯甲烷萃取溶液。分離各相，將有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥。減壓濃縮得到4-氟-3-甲氧基苯甲酸灰白色固體。(產(chǎn)量2.26g，96％)。
實(shí)施例34c(叔丁氧基)-N-(4-氟-3-甲氧基苯基)甲酰胺 將4-氟-3-甲氧基苯甲酸(1.00g，5.87mmol)(來自上述實(shí)施例34b)溶解在甲苯(30mL)中。在室溫下依次加入三乙胺(3.2mL，23.48mmol)(Fisher)，二苯基磷?；B氮化物(2.5mL，11.74mmol)(Aldrich)和叔丁醇(6mL)(Fisher)。將反應(yīng)混合物在回流下加熱2小時(shí)，然后用1N鹽酸水溶液(20mL)在室溫下淬滅。用乙酸乙酯萃取混合物，分離各層。將有機(jī)層用飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥并過濾。將減壓濃縮得到的黃色油狀物用快速色譜(20％乙酸乙酯的己烷溶液)純化，得到(叔丁氧基)-N-(4-氟-3-甲氧基苯基)甲酰胺白色固體。(產(chǎn)量0.98g，70％)。
實(shí)施例34d4-氟-3-甲氧基苯胺鹽酸鹽 將(叔丁氧基)-N-(4-氟-3-甲氧基苯基)甲酰胺(0.98g，4.06mmol)(來自上述實(shí)施例34c)用4N鹽酸的二噁烷溶液(20mL)(Aldrich)在室溫下處理過夜。過濾收集所得到的沉淀物，用干燥乙醚洗滌，得到4-氟-3-甲氧基苯胺鹽酸鹽白色結(jié)晶固體。(產(chǎn)量512mg，71％)。
實(shí)施例34e1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(4-氟-3-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮
將1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.20g，0.23mmol)(來自上述實(shí)施例33a)和4-氟-3-甲氧基-苯胺鹽酸鹽(51mg，0.29mmol)(來自上述實(shí)施例34d)的2-丙醇(4mL)溶液放入微波反應(yīng)器(SmithSynthesizerTM)中。將反應(yīng)混合物在160℃下加熱10分鐘。待冷卻后，將其減壓濃縮。將殘余物用快速色譜純化，乙酸乙酯-己烷(3∶7然后2∶3)洗脫，得到1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(4-氟-3-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.08g，35％)。
實(shí)施例34f1-(順式-3，5-二羥基-環(huán)己基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(4-氟-3-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 將1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(4-氟-3-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.08g，0.08mmol)(來自上述實(shí)施例34e)和四丁基銨氟化物(0.24mL，1.0M的四氫呋喃溶液，0.24mmol)(Aldrich)的四氫呋喃(5mL)溶液在回流下加熱3小時(shí)。待冷卻后，將其減壓濃縮。將殘余物用快速色譜純化，乙酸乙酯-二氯甲烷(5∶95)洗脫，得到1-(順式-3，5-二羥基-環(huán)己基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(4-氟-3-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量18.0mg，78％)。
實(shí)施例35a1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 將1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.20g，0.23mmol)(來自上述實(shí)施例33a)和苯胺(0.03mL，0.29mmol)(Aldrich)在2-丙醇(4mL)中的混合物放入微波反應(yīng)器(SmithSynthesizerTM)中。將反應(yīng)混合物在160℃下加熱10分鐘。待冷卻后，將其減壓濃縮。將殘余物用快速色譜純化，乙酸乙酯-己烷(3∶7然后2∶3)洗脫，得到1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.14g，64％)。
實(shí)施例35b1-(順式-3，5-二羥基-環(huán)己基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮
將1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.14g，0.15mmol)(來自上述實(shí)施例35a)和四丁基銨氟化物(0.44mL，1.0M的四氫呋喃溶液，0.44mmol)(Aldrich)的四氫呋喃(5mL)溶液在回流下加熱3小時(shí)。待冷卻后，將其減壓濃縮。將殘余物用快速色譜純化，乙酸乙酯-二氯甲烷(5∶95)洗脫，得到1-(順式-3，5-二羥基-環(huán)己基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量42.0mg，61％)。IC50(KDR)＝0.075μM，IC50(FGFR)＝0.263μM。
實(shí)施例36a1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 將1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.21g，0.23mmol)(來自上述實(shí)施例32d)和苯胺(0.03mL，0.30mmol)(Aldrich)在2-丙醇(4mL)中的混合物放入微波反應(yīng)器(SmithSynthesizerTM)中。將反應(yīng)混合物在160℃下加熱10分鐘。待冷卻后，將其減壓濃縮。將殘余物用快速色譜純化，乙酸乙酯-二氯甲烷(5∶95)洗脫，得到1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.21g，35％)。
實(shí)施例36b1-(順式-3，5-二羥基-環(huán)己基)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 將1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.21g，0.22mmol)(來自上述實(shí)施例36a)和四丁基銨氟化物(0.66mL，1.0M的四氫呋喃溶液，0.66mmol)(Aldrich)的四氫呋喃(5mL)溶液在回流下加熱3小時(shí)。待冷卻后，將其減壓濃縮。將殘余物用快速色譜純化，乙酸乙酯-二氯甲烷(5∶95)洗脫，得到1-(順式-3，5-二羥基-環(huán)己基)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量82.0mg，78％)。
實(shí)施例37a1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-(4-氟-3-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 將1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.22g，0.24mmol)(來自上述實(shí)施例32d)和4-氟-3-甲氧基-苯胺鹽酸鹽(56.3mg，0.32mmol)(來自上述實(shí)施例34d)在2-丙醇(4mL)中的混合物放入微波反應(yīng)器(SmithSynthesizerTM)中。將反應(yīng)混合物在160℃下加熱10分鐘。待冷卻后，將其減壓濃縮。將殘余物用快速色譜純化，乙酸乙酯-己烷(3∶7然后2∶3)洗脫，得到1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-(4-氟-3-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量0.15g，63％)。
實(shí)施例37b1-(順式-3，5-二羥基-環(huán)己基)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-(4-氟-3-甲氧基苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 將1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-(4-氟-3-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.15g，0.15mmol)(來自上述實(shí)施例37a)和四丁基銨氟化物(0.45mL，1.0M四氫呋喃溶液，0.45mmol)(Aldrich)的四氫呋喃(5mL)溶液在回流下加熱3小時(shí)。待冷卻后，將其減壓濃縮。將殘余物用快速色譜純化，乙酸乙酯-二氯甲烷(5∶95)洗脫，得到1-(順式-3，5-二羥基-環(huán)己基)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-(4-氟-3-甲氧基苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量35.0mg，44％)。
實(shí)施例38a(R)-2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙胺手性 將D-阿蘭醇鹽酸鹽(500mg，6.66mmol)(Aldrich)溶解在無水二甲基甲酰胺(10mL)(Aldrich)中。在室溫下依次加入咪唑(544mg，8mmol)(Aldrich)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物(1.05g，7mmol)(Aldrich)。將該混合物在室溫下攪拌2小時(shí)，用水-飽和碳酸氫鈉水溶液(5∶1，15mL)的溶液淬滅，并用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)層用水和鹽水洗滌，硫酸鈉干燥并減壓濃縮，得到(R)-2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙胺無色油狀物。(產(chǎn)量852mg，68％)。
實(shí)施例38b(R)-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-氨基甲酸4-硝基-苯基酯
將(R)-2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙胺(693mg，3，66mmol)(來自上述實(shí)施例38a)和三乙胺(0.77mL，5.5mmol)(Allied Signal)在二氯甲烷中的混合物用氯甲酸4-硝基苯酯(885mg，4.39mmol)(Aldrich)在室溫下處理30分鐘。用1N鹽酸水溶液淬滅反應(yīng)，然后用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層用飽和碳酸氫鈉水溶液然后是鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮。粗產(chǎn)物用快速色譜(15％乙酸乙酯的己烷溶液)純化，得到(R)-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-氨基甲酸4-硝基-苯基酯無色油狀物，該油狀物放置后凝固。(產(chǎn)量0.49g，38％)。
實(shí)施例38c(2，4-二氯-嘧啶-5-基甲基)-(4-乙基-苯基)-胺 將2，4-二氯-5-(碘甲基)嘧啶(31.07g，107.3mmol)(來自上述實(shí)施例1c)和碳酸鉀(74g，536.5mmol)在丙酮(535mL)中的多相混合物用4-乙基苯胺(13.3mL，107.3mmol)(Aldrich)處理。將混合物在室溫下攪拌過夜，然后用水(500mL)稀釋并用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層依次用1N鹽酸水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮。將粗制的混合物用快速色譜(20％乙酸乙酯的己烷溶液)純化，得到(2，4-二氯-嘧啶-5-基-甲基)-(4-乙基-苯基)-胺米色固體。(產(chǎn)量21.4g，70％)。
實(shí)施例38d(R)-3-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基甲基)-1-(4-乙基-苯基)-脲
將(2，4-二氯-嘧啶-5-基-甲基)-(4-乙基-苯基)胺(620mg，2.19mmol)(來自上述實(shí)施例38c)、(R)-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-氨基甲酸4-硝基-苯基酯(778mg，2.19mmol)(來自上述實(shí)施例38b)和三乙胺(0.93mL，6.6mmol)(Allied Signal)的甲苯(20mL)溶液在回流下加熱48小時(shí)。將反應(yīng)混合物在室溫下用1N鹽酸水溶液淬滅，然后用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層依次用1N氫氧化鈉水溶液和鹽水洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮。將殘余物用快速色譜(30％乙酸乙酯的己烷溶液)純化，得到(R)-3-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基-甲基)-1-(4-乙基-苯基)-脲。(產(chǎn)量383mg，36％)。
實(shí)施例38e(R)-1-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-乙基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 將(R)-3-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基-甲基)-1-(4-乙基-苯基)-脲(380mg，0.76mmol)(來自上述實(shí)施例38d)的四氫呋喃(10mL)溶液在室溫下用叔丁醇鉀(160mg，1.14mmol)(Aldrich)處理。將混合物在室溫下攪拌1.5小時(shí)。將反應(yīng)混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液淬滅，并用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮。將殘余物(395mg，黃色油狀物)用快速色譜純化，得到(R)-1-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-乙基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮無色油狀物。(產(chǎn)量102mg，30％)。
實(shí)施例38f(R)-1-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-3-(4-乙基-苯基)-7-(4-氟-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 將(R)-1-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-乙基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(100mg，0.21mmol)(來自上述實(shí)施例38e)懸浮在2-丙醇(2mL)(Fisher)中。加入4-氟苯胺(0.03mL，0.32mmol)(Aldrich)，將混合物在微波反應(yīng)器(SmithSynthesizerTM)中加熱到160℃30分鐘。待冷卻到室溫后，將多相反應(yīng)混合物用二氯甲烷稀釋。所得到的溶液用1N鹽酸水溶液洗滌。分離各層，將有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾，然后減壓濃縮，得到(R)-1-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-3-(4-乙基-苯基)-7-(4-氟-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮淺黃色固體。(產(chǎn)量107mg，91％)。
實(shí)施例38g(R)-3-(4-乙基-苯基)-7-(4-氟-苯基氨基)-1-(2-羥基-1-甲基-乙基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 將(R)-1-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-3-(4-乙基-苯基)-7-(4-氟-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(100mg，0.18mmol)(來自上述實(shí)施例38f)的吡啶(1.5mL)(Fisher)溶液在室溫下用氟化氫-吡啶(0.6mL)(Aldrich)處理15分鐘。將反應(yīng)混合物用1N鹽酸水溶液在0℃下淬滅，然后用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮。將殘余物用快速色譜(50％乙酸乙酯的己烷溶液)純化，得到(R)-3-(4-乙基-苯基)-7-(4-氟-苯基氨基)-1-(2-羥基-1-甲基-乙基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮無色粘稠油狀物。(產(chǎn)量45mg，61％)。IC50(KDR)＝0.208μM，IC50(FGFR)＝0.329μM。
實(shí)施例39a(±)-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-{2-氯-5-[(4-乙基-苯基氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-胺外消旋 將(2，4-二氯-嘧啶-5-基-甲基)-(4-乙基-苯基)-胺(200mg，0.71mmol)(來自上述實(shí)施例38c)溶解在熱正丁醇(2mL)(Aldrich)中。待冷卻到室溫后，依次加入三乙胺(0.20mL，0.92mmol)(Allied Signal)和(±)-反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊胺(198mg，0.91mmol)(來自上述實(shí)施例9c)，將混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。將混合物減壓濃縮，用快速色譜(20％乙酸乙酯的己烷溶液)純化，得到(±)-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-{2-氯-5-[(4-乙基-苯基氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-胺粘稠油狀物。(產(chǎn)量272mg，84％)。
實(shí)施例39b(±)-1-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-7-氯-3-(4-乙基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮外消旋 將(±)-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-{2-氯-5-[(4-乙基-苯基氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-胺(270mg，0.58mmol)(來自上述實(shí)施例39a)和三乙胺(0.25mL，1.76mmol)(Allied Signal)在二氯甲烷(6mL)中的混合物冷卻到0℃。滴加20％的光氣的甲苯溶液(0.32mL，0.61mmol)(Fluka)，將混合物在0℃下攪拌1小時(shí)。讓混合物升溫至室溫，加入4-(二甲基氨基)吡啶(15mg，0.12mmol)(Aldrich)。將反應(yīng)物在室溫下攪拌過夜，在回流下加熱4小時(shí)，然后濃縮至干。將黃色殘余物用快速色譜(20％乙酸乙酯的己烷溶液)純化，得到(±)-1-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-7-氯-3-(4-乙基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量213mg，75％)。
實(shí)施例39c(±)-1-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-乙基-苯基)-7-(4-氟-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮外消旋 將(±)-1-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-7-氯-3-(4-乙基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(125mg，0.25mmol)(來自上述實(shí)施例39b)懸浮在2-丙醇(3mL)(Fisher)中。加入4-氟苯胺(0.036mL，0.38mmol)(Aldrich)和一水合對甲苯磺酸(12.5mg，0.05mmol)(Aldrich)，將混合物在微波合成器(SmithSynthesizerTM)中加熱到160℃30分鐘。待冷卻到室溫后，將多相反應(yīng)混合物用二氯甲烷稀釋。所得到的溶液用1N鹽酸水溶液洗滌。分離各層，將有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾，然后減壓濃縮，得到(±)-1-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-乙基-苯基)-7-(4-氟-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮淡綠色固體。(產(chǎn)量123mg，85％)。
實(shí)施例39d(±)-3-(4-乙基-苯基)-7-(4-氟-苯基氨基)-1-(反式-3-羥基-環(huán)戊基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮外消旋 將(±)-1-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-乙基-苯基)-7-(4-氟-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(47mg，0.08mmol)的吡啶(1mL)(Fisher)溶液在室溫下用氟化氫-吡啶(0.6mL)(Aldrich)處理20分鐘。將反應(yīng)混合物用1N鹽酸水溶液在0℃淬滅，然后用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮。將殘余物用快速色譜(50％乙酸乙酯的己烷溶液)純化，得到(±)-3-(4-乙基-苯基)-7-(4-氟-苯基氨基)-1-(反式-3-羥基-環(huán)戊基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮白色固體。(產(chǎn)量32mg，87％)。
實(shí)施例401-環(huán)丙基甲基-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 向[(2，4-二氯嘧啶-5-基)甲基](4-甲氧基-苯基)胺(198mg，0.7mmol)(來自上述實(shí)施例1d)的正丁醇(5mL)溶液中加入環(huán)丙烷甲胺(0.12mL，1.4mmol)(Aldrich)和N，N-二異丙基乙胺(10.13mL)(Aldrich)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜，然后用水淬滅，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物依次用水(10mL)和鹽水(10mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮，得到粗制的一氯化物無色油狀物(產(chǎn)量220mg)，將該產(chǎn)物不經(jīng)進(jìn)一步純化被用于下一步。
向0℃下的粗制一氯化物(220mg)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入三乙胺(0.3mL，2.1mmol)(Aldrich)，接著滴加20％的光氣的甲苯溶液(0.5mL，0.98mmol)(Fluka)。將該混合物在室溫下攪拌15分鐘。然后將反應(yīng)混合物倒入冰-水(50mL)中，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物依次用水(10mL)和鹽水(10mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮，得到粗制的中間體，將該中間體再次溶解在二氯甲烷(5mL)中，在4-(二甲基氨基)吡啶(20mg)(Aldrich)存在下加熱回流過夜。將反應(yīng)混合物用水淬滅，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物依次用水(10mL)和鹽水(10mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物，然后用制備型薄層色譜分離，得到7-氯-1-環(huán)丙基甲基-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)量259mg，74.8％，3步)。
將7-氯-1-環(huán)丙基甲基-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(129mg，0.37mmol)在苯胺(1.0mL)(Aldrich)中的混合物加熱到120℃5.5小時(shí)。待冷卻后，將反應(yīng)混合物用己烷(4×100mL)洗滌，粗產(chǎn)物用制備型薄層色譜純化，得到1-環(huán)丙基甲基-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮灰白色固體。(產(chǎn)量20.6mg，13.7％)。
抗增殖活性本發(fā)明化合物的抗增殖活性是用如下實(shí)施例41和42證實(shí)的。這些活性表明本發(fā)明化合物可用于治療癌癥，特別是實(shí)體瘤，例如乳腺，肺，前列腺和結(jié)腸瘤，更特別的是乳腺和結(jié)腸瘤。
實(shí)施例41激酶試驗(yàn)為了測定對KDR、FGFR、EGFR和PDGFR活性的抑制作用，使用HTRF(均勻時(shí)間分辯的熒光)試驗(yàn)進(jìn)行激酶試驗(yàn)。該試驗(yàn)描述于A.J.Kolb等，Drug Discovery Today，1998，3(7)，333頁。
在激酶反應(yīng)前，將重組EEE-標(biāo)記的KDR在活化緩沖液(50mM HEPES，pH7.4，1mM DTT，10％甘油，150mM NaCl，0.1mM EDTA，26mM MgCl2和4mMATP)存在下活化。將該酶在4℃下溫育1小時(shí)。
激酶活性試驗(yàn)是在96孔聚丙烯板(Falcon)上進(jìn)行的，每個(gè)孔的總體積為90μL。每個(gè)孔中含有1μM KDR底物(生物素-EEEEYFELVAKKKK)，1nM活化KDR，以及從100μM到128pM(1∶5依次稀釋)的8種試驗(yàn)濃度之一的測試化合物。激酶活性試驗(yàn)是在100mM HEPES，pH7.4，1mM DTT，0.1mM Na2VO4，25mM MgCl2，50mM NaCl(來自KDR儲液)，1％DMSO(來自化合物)，0.3mM ATP(Km濃度)和0.02％BSA存在下進(jìn)行的。將反應(yīng)物在37℃下溫育30分鐘。為了終止KDR反應(yīng)，將72μL反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到含有18μL展示緩沖液(20mM EDTA，50mM HEPES，pH7.4，0.02％BSA，10nM Eu-標(biāo)記的抗pY抗體(終濃度2nM)，以及100nM鏈霉抗生物素(終濃度20nM))的STOP板中。在混合后，將35μL溶液轉(zhuǎn)移到384孔黑板(blackplate)(Costar)的兩個(gè)相同孔中，在Wallac Victor 5讀數(shù)器上于615/665nm處讀數(shù)。
如上述KDR活性試驗(yàn)所述地進(jìn)行FGFR、EGFR和PDGFR活性試驗(yàn)，但是有如下不同之處。在如下活化緩沖液中將GST-標(biāo)記的FGFR酶在室溫下活化1小時(shí)100mM HEPES，pH7.4，50mM NaCl，20mM MgCl2和4mMATP。激酶活性試驗(yàn)是用1μM底物(生物素-EEEEYFELV)，1.5nM活化FGFR和測試混合物在如下物質(zhì)存在下進(jìn)行的100mM HEPES，1mM DTT，0.4mM MgCl2，0.4mM MnCl2，50mM NaCl，1％DMSO，10μMATP(FGFR的Km＝8.5μM)，0.1mM Na2VO4和0.02％BSA，總體積90μL。試驗(yàn)其余部分是用和KDR試驗(yàn)相同的方式進(jìn)行的。
EGFR激酶活性試驗(yàn)是用1μM底物(生物素-EEEEYFELV)，1.5nMEGFR，測試混合物，100mM HEPES，pH7.4，1mM DTT，5mM MgCl2，2mMMnCl2，1％ DMSO，0.5μM ATP(EGFR的Km)，0.1mM Na2VO4和0.02％BSA進(jìn)行的。試驗(yàn)其余部分是用和KDR試驗(yàn)相同的方式進(jìn)行的。
PDGFR激酶活性試驗(yàn)是用1μM底物(生物素-EEEEYFELV)，1.0nMPDGFR，測試混合物，100mM HEPES，pH7.4，1mM DTT，5mM MgCl2，2mMMnCl2，1％DMSO，2.3μMATP(PDGFR的Km)，0.1mM Na2VO4和0.02％BSA進(jìn)行的。試驗(yàn)其余部分是用和KDR試驗(yàn)相同的方式進(jìn)行的。
化合物IC50值是由成雙數(shù)據(jù)組確定的，通過使用Excel并將數(shù)據(jù)擬合成方程式Y(jié)＝[(a-b)/1+(X/c)d]+b而計(jì)算的，其中a和b分別是沒有測試抑制劑化合物和無限量的抑制劑測試化合物存在時(shí)的酶活性，c是IC50，而d是化合物響應(yīng)的hill常數(shù)。IC50值是在所述測試條件下使酶活性降低50％的測試化合物的濃度。
本發(fā)明化合物上述酶抑制試驗(yàn)值的IC50值如下KDR小于0.50μM；FGFR小于2μM。
實(shí)施例42VEGF和FGF-刺激的HUVEC增殖試驗(yàn)細(xì)胞-基試驗(yàn)中本發(fā)明測試化合物的抗增殖活性是通過BrdU試驗(yàn)使用BrdU試劑盒(Roche Biochemicals 1-647-229)進(jìn)行評估的。將人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Clonetics CC-2519)培養(yǎng)于EGM-2(Clonetics CC-3162)培養(yǎng)基中，以每孔10000細(xì)胞、200μL EGM-2(Clonetics CC-3162)培養(yǎng)基接種在96孔平底板(Costar 3595)上過夜。在37℃、5％CO2條件下生長24小時(shí)后，通過吸氣緩慢除去培養(yǎng)基，將每個(gè)孔的內(nèi)容物用含有50μg/mL慶大霉素和50ng/mL兩性霉素-B(Clonetics CC-4083)的300μL預(yù)溫的EBM-2(Clonetics CC-3156)沖洗。接著，再次吸出剩余培養(yǎng)基，代替以160μL/孔的血清缺乏培養(yǎng)基(EBM-2，補(bǔ)充有1％熱滅活的FBS(Clonetics CC-4102)，50μg/mL慶大霉素和50ng/mL兩性霉素-B(Clonetics CC-4083)，10單位/mL的Wyeth-Ayerst肝素(NDC0641-0391-25)，以及2mM 1-谷氨酰胺(GIBCO25030-081))。在讓細(xì)胞血清缺乏24小時(shí)后，將20μL以10×測試濃度包含在含有2.5％DMSO的血清缺乏培養(yǎng)基中的測試化合物加到合適的孔中。對照孔含有20μL含有2.5％DMSO的血清缺乏培養(yǎng)基。將該板送回培育器2小時(shí)。在細(xì)胞和測試化合物預(yù)先培育2小時(shí)后，加入20μL以10×試驗(yàn)濃度稀釋于血清缺乏培養(yǎng)基中的生長因子，50ng/mL的FGF，或者200ng/mL的VEGF(R&D體系293-VE)。試驗(yàn)中FGF的終濃度為5ng/mL，而VEGF在試驗(yàn)中的終濃度為20ng/mL。不含生長因子的對照孔含20μL/孔的血清缺乏培養(yǎng)基，其中含有和生長因子孔等量的BSA。將該板送回培育器，再培育22小時(shí)。
BrdU ELISA在暴露于測試化合物24小時(shí)后，通過加入20μL/孔的已經(jīng)稀釋于血清缺乏培養(yǎng)基(1∶100)的BrdU標(biāo)記試劑，將細(xì)胞用BrdU(Roche Biochemicals1-647-229)標(biāo)記。然后將該板放回培育器培育4小時(shí)。通過將培養(yǎng)基吸到紙巾上來除去標(biāo)記培養(yǎng)基。向每孔中加入200μL固定/變性溶液并在室溫下培育45分鐘，將細(xì)胞固定并使DNA變性。將固定/變性溶液吸到紙巾上，向每孔中加入100μL抗BrdU-POD，并在室溫下將孔培育2小時(shí)。除去抗體溶液，每孔用300μL PBS沖洗3-4次。向每孔中加入100μL TMB底物溶液，并將孔在室溫下培育5-8分鐘。然后加入100μL/孔的1M磷酸終止反應(yīng)。將該板在450nm處讀數(shù)，以650nm為參比波長。每個(gè)測試化合物的抑制百分比是這樣計(jì)算的從所有孔中減去空白(無細(xì)胞)孔的吸光度值，然后用1減去每一對測試樣品平均吸光度除以對照組平均值的得數(shù)，最后乘以100(抑制％＝(1-每對測試樣品平均吸光度/對照組平均值)×100)。IC50值是抑制50％BrdU標(biāo)記的測試化合物的濃度，用于測量對細(xì)胞增殖的抑制作用。IC50值是通過濃度-抑制百分比的對數(shù)圖的線性回歸而測定的。
用如上所述方法測量的本發(fā)明化合物的VEGF和FGF-刺激的HUVEC增殖試驗(yàn)的IC50值如下HUVEC/VEFG小于1.00μM；HUVEC/bFGF小于1.00μM。
實(shí)施例43片劑配方
*化合物A表示本發(fā)明的化合物制造方法在合適的混合器中將1、2和3項(xiàng)混合15分鐘。
用20％聚乙烯吡咯烷酮K30溶液(4項(xiàng))將步驟1的粉末混合物造粒。
將步驟2的顆粒在50℃下干燥。
讓步驟3的顆粒通過合適的磨碎設(shè)備。
將5項(xiàng)加入到步驟4的磨碎的顆粒中，并混合3分鐘。
在合適的壓力機(jī)上壓縮步驟5的顆粒。
實(shí)施例44膠囊配方
*化合物A表示本發(fā)明的化合物制造方法在合適的混合器中將1、2和3項(xiàng)混合15分鐘。
加入4和5項(xiàng)并混合3分鐘。
裝入合適的膠囊中。
實(shí)施例45注射液/乳劑
*化合物A表示本發(fā)明的化合物制造方法將1項(xiàng)溶解在2項(xiàng)中。
將3、4和5項(xiàng)加入到6項(xiàng)中，并且混合直至分散，然后勻質(zhì)化。
將步驟1的溶液加入到步驟2的混合物中，并勻質(zhì)化直至分散體透明。
用0.2μm過濾器無菌過濾，并裝到小瓶中。
實(shí)施例46注射液/乳劑
*化合物A表示本發(fā)明的化合物制造方法將1項(xiàng)溶解在2項(xiàng)中。
將3、4和5項(xiàng)加入到6項(xiàng)中，并且混合直至分散，然后勻質(zhì)化。
將步驟1的溶液加入到步驟2的混合物中，并勻質(zhì)化直至分散體透明。
用0.2μm過濾器無菌過濾，并裝到小瓶中。
盡管本發(fā)明已經(jīng)參照具體和優(yōu)選的實(shí)施方案進(jìn)行了說明，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解，可以通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行變更和修改并實(shí)施本發(fā)明。因此，本發(fā)明不受上述描述限制，而是由所附權(quán)利要求和它們的同等物所限定的。
權(quán)利要求
1.下式的化合物 其中R1選自-H，-(CH2)n-雜環(huán)，烷基，環(huán)烷基，鏈烯基，和炔基，其中n是0、1、2或3，并且雜環(huán)、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基和炔基各自獨(dú)立，任選被最多3個(gè)選自下列的基團(tuán)所取代-OR9，-COR10，-CO2R10，-CONR10R11，-SO2NR10R11，-SO2R10和-CN；R2和R3獨(dú)立地選自-H，-OR9，-鹵素，-COR10，-CO2R10，-(CH2)n-雜環(huán)，-烷基，-環(huán)烷基，-鏈烯基，和-炔基，其中n是0、1、2或3，并且雜環(huán)、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基和炔基各自獨(dú)立，任選被最多3個(gè)選自下列的基團(tuán)所取代-OR9，-鹵素，-COR10和-CO2R10；R4、R5、R6、R7和R8各自獨(dú)立地選自-H，-任選可以被羥基或烷氧基取代的低級烷基，-OR12，-鹵素，-COR13，和-CO2R13；R9選自-H，-COR10，任選可以被羥基或烷氧基取代的低級烷基，任選可以被羥基、烷氧基和低級烷基取代的環(huán)烷基，和任選可以被羥基、烷氧基或低級烷基取代的雜環(huán)；R10和R11各自獨(dú)立地選自-H，任選可以被羥基或烷氧基取代的低級烷基，任選可以被羥基、烷氧基或低級烷基取代的環(huán)烷基，和任選可以被羥基、烷氧基或低級烷基取代的雜環(huán)；R12選自-H，低級烷基和-COR13；且R13選自-H和低級烷基；或其可藥用的鹽。
2.權(quán)利要求1的式I化合物，其中R1選自環(huán)烷基；-OH取代的環(huán)烷基；雜環(huán)；低級烷基；和-OH取代的低級烷基。
3.權(quán)利要求1的式I化合物，其中R2是-H或-OCH3。
4.權(quán)利要求1的式I化合物，其中R3是-H、F或-OCH3。
5.權(quán)利要求1的式I化合物，其中R2和R3都是-H。
6.權(quán)利要求1的式I化合物，其中R4、R5和R7都是-H。
7.權(quán)利要求1的式I化合物，其中R6是鹵素或-OR12。
8.權(quán)利要求7的式I化合物，其中R6是-OCH3。
9.權(quán)利要求1的式I化合物，其中R8是-H或-F。
10.權(quán)利要求1的式I化合物，其中R9是-H，低級烷基，或者被羥基取代的低級烷基。
11.權(quán)利要求10的式I化合物，其中R9是-H。
12.權(quán)利要求1的式I化合物，其中R10是-H，低級烷基，或者被羥基取代的低級烷基。
13.權(quán)利要求12的式I化合物，其中R10是-H。
14.權(quán)利要求1的式I化合物，其中R11是-H，低級烷基，或者被羥基取代的低級烷基。
15.權(quán)利要求14的式I化合物，其中R11是-H。
16.權(quán)利要求1的式I化合物，其中R12是-H或低級烷基。
17.權(quán)利要求16的式I化合物，其中R12是-H。
18.權(quán)利要求1的式I化合物，其中R13是-H或低級烷基。
19.權(quán)利要求18的式I化合物，其中R13是-H。
20.權(quán)利要求1的式I化合物，選自1-環(huán)己基-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例1e)，3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-1-哌啶-4-基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例2b)，1-(反式-4-羥基-環(huán)己基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例3c)，3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-1-哌啶-3-基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例4b)，1-環(huán)戊基-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例5)，1-(1，1-二氧代-四氫噻吩-3-基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例6)，3-[3-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-7-苯基氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-哌啶-1-甲醛(實(shí)施例7)，3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-1-(四氫-吡喃-4-基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例8)，(±)-1-(反式-3-羥基-環(huán)戊基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例9d)，和(±)-順式-1-(3-羥基-環(huán)戊基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例10e)。
21.權(quán)利要求1的式I化合物，選自(R)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-1-(四氫-呋喃-3-基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例11b)，(R)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-1-吡咯烷-3-基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例12)，(±)-7-(4-氟-苯基氨基)-1-(反式-3-羥基-環(huán)戊基)-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例13c)，(±)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-1-(反式-3-羥基-環(huán)戊基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例14d)，(S)-(+)-1-(2-羥基-1-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例15d)，(S)-(+)-7-(4-氟-苯基氨基)-1-(2-羥基-1-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例16)，3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-1-(反式-4-羥基-環(huán)己基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例17d)，3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-1-(反式-4-羥基-環(huán)己基)-7-(3，4-二甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例18)，3-(4-甲氧基-苯基)-1-(反式-4-羥基-環(huán)己基)-7-(3，4-二甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例19c)，3-(4-甲氧基-苯基)-1-(反式-4-羥基-環(huán)己基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例20b)，和(S)-(+)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-(4-氟-苯基氨基)-1-(2-羥基-1-甲基-乙基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例21b)。
22.權(quán)利要求1的式I化合物，選自(S)-(+)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-1-(2-羥基-1-甲基-乙基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例22)，(R)-(-)-1-(2-羥基-1-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例23d)，3-(4-甲氧基-苯基)-1-甲基-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例24b)，1-(2-甲氧基-乙氧甲基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例25)，3-[-3-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-丙腈(實(shí)施例26)，(+)-(1R，3R)-1-(3-羥基-環(huán)戊基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例27f)，(R)-1-(2-羥基-丙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例28d)，(-)-(1S，3S)-1-(3-羥基-環(huán)戊基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例29h)，3-[-3-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-丙酰胺(實(shí)施例30)，和(S)-(+)-1-(2-羥基-丙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例31d)。
23.權(quán)利要求1的式I化合物，選自1-(順式-3，5-二羥基-環(huán)己基)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-(4-甲氧基苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例32f)，1-(順式-3，5-二羥基-環(huán)己基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例33c)，1-(順式-3，5-二羥基-環(huán)己基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(4-氟-3-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例34f)，1-(順式-3，5-二羥基-環(huán)己基)-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例35b)，1-(順式-3，5-二羥基-環(huán)己基)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例36b)，1-(順式-3，5-二羥基-環(huán)己基)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-(4-氟-3-甲氧基苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例37b)，(R)-3-(4-乙基-苯基)-7-(4-氟-苯基氨基)-1-(2-羥基-1-甲基-乙基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例38g)，(±)-3-(4-乙基-苯基)-7-(4-氟-苯基氨基)-1-(反式-3-羥基-環(huán)戊基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例39d)，和1-環(huán)丙基甲基-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例40)。
24.具有如下化學(xué)式的權(quán)利要求1的式I化合物 其中R1選自-H，被-OH，COR10，-CN或-CONH2取代的低級烷基，-(CH2)n-雜環(huán)，被-COR10或-CO2R10取代的-(CH2)n-雜環(huán)，環(huán)烷基，被-OH取代的環(huán)烷基；R2是H或-OCH3；R3是H、F或-OCH3；R4、R5和R7都是H；R6是-OCH3或低級烷基；R8是H或F；R10是被烷氧基取代的低級烷基；且n是0或1。
25.一種藥物組合物，該組合物包含治療有效量的權(quán)利要求1到24任何一項(xiàng)的式I化合物和可藥用載體或賦形劑。
26.權(quán)利要求25的藥物組合物，其中所述化合物適合向癌癥患者給藥。
27.用作藥物的權(quán)利要求1到24任何一項(xiàng)的式I化合物。
28.權(quán)利要求1到24任何一項(xiàng)的式I化合物用于制備治療和控制癌癥的藥物的用途。
29.用于治療和控制乳腺，肺，結(jié)腸或前列腺癌的權(quán)利要求28的用途。
30.權(quán)利要求28的用途，其中所述癌癥是乳腺癌或結(jié)腸癌。
31.權(quán)利要求1的式I化合物的制備方法，該方法包括將下式的化合物 其中X是Cl或SO2CH3，且R1、R4、R5、R6、R7和R8如權(quán)利要求1所定義，和下式的苯胺衍生物反應(yīng) 其中R2和R3如權(quán)利要求1所定義，以獲得下式的化合物 并且如果需要，將式I化合物轉(zhuǎn)化成可藥用的鹽。
32.用依照權(quán)利要求31的方法制備的權(quán)利要求1到24任何一項(xiàng)的式I化合物。
33.一種中間體化合物，選自4-[3-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-7-苯基氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯(實(shí)施例2a)，1-[反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例3b)，3-[3-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-7-苯基氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯(實(shí)施例4a)，(±)-3-順式-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例10d)，(R)-2-甲硫基-4-(四氫-呋喃-3-基氨基)-嘧啶-5-羧酸乙酯(實(shí)施例11a)，(±)-4-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基氨基]-2-甲硫基-嘧啶-5-甲醛(實(shí)施例13a)，(±)-1-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-甲硫基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例13b)，(±)-[3-反式-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-{5-[(2-氟-4-甲氧基-苯基氨基)-甲基]-2-甲硫基-嘧啶-4-基}-胺(實(shí)施例14b)，(±)-1-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-甲硫基-3，4-二氫-IH-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例14c)，(S)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例15c)，1-[反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例17c)，1-[反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例19a)，1-[反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(3，4-二甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例19b)，1-[反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例20a)，(S)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例21a)，(R)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例23c)，3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例24a)，(+)-(1R，3R)-4-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基氨基]-2-甲硫基-嘧啶-5-羧酸乙酯(實(shí)施例27d)，(-)-(1R，3R)-1-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例27e)，(R)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-丙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例28c)，(-)-(1S，3S)-4-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基氨基]-2-甲硫基-嘧啶-5-羧酸乙酯(實(shí)施例29d)，(-)-(1S，3S)-4-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基氨基]-2-甲硫基-嘧啶-5-甲醛(實(shí)施例29e)，(-)-(1S，3S)-1-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-甲硫基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例29f)，(-)-(1S，3S)-1-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例29g)，(S)-1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-丙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例31c)，1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例32d)，1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例32e)，1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例33a)，1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(4-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例33b)，1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-(4-氟-3-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例34e)，1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例35a)，1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-苯基氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例36a)，1-[順式-3，5-雙-(叔丁基-二苯基-硅烷基氧基)-環(huán)己基]-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-(4-氟-3-甲氧基-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例37a)，(2，4-二氯-嘧啶-5-基甲基)-(4-乙基-苯基)-胺(實(shí)施例38c)，(R)-3-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基甲基)-1-(4-乙基-苯基)-脲(實(shí)施例38d)，(R)-1-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-乙基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例38e)，(R)-1-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-1-甲基-乙基]-3-(4-乙基-苯基)-7-(4-氟-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例38f)，(±)-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-{2-氯-5-[(4-乙基-苯基氨基)-甲基]-嘧啶-4-基}-胺(實(shí)施例39a)，(±)-1-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-7-氯-3-(4-乙基-苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例39b)，和(±)-1-[反式-3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-環(huán)戊基]-3-(4-乙基-苯基)-7-(4-氟-苯基氨基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實(shí)施例39c)。
34.此前所述的新型化合物，藥物組合物，方法和用途。
全文摘要
本發(fā)明公開的是新型的式(I)的嘧啶并化合物，所述化合物是KDR和FGFR激酶的選擇性抑制劑。這些化合物和它們的可藥用鹽是抗增殖劑，可用于治療或控制實(shí)體瘤，特別是乳腺，結(jié)腸，肺和前列腺瘤。還公開了包含這些化合物的藥物組合物以及治療癌癥的用途。
文檔編號A61K31/519GK1809569SQ200480009513
公開日2006年7月26日 申請日期2004年4月1日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月10日
發(fā)明者陳奕, A·德爾馬塔基斯, 劉進(jìn)軍, 陸建春, C·米舒, P·L·羅斯曼 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司