專利名稱：改進(jìn)的放射性金屬配合物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及穩(wěn)定化的锝和錸金屬配合物組合物，包括輻射防護(hù)劑和托烷-四配位基螯合劑綴合物(conjugate)的放射性金屬配合物，其中，所述放射性金屬配合物是中性的。還披露了包括穩(wěn)定化的金屬配合物組合物的放射性藥物，以及用于制備所述放射性藥物的試劑盒。
背景技術(shù)：
用123I，18F，或99mTc標(biāo)記過的托烷是用于腦成像的已知的診斷成像放射性藥物[Morgan and Nowotnik，Drug News Perspect.12(3)，137-145(1999)]。已知托烷靶定腦中的多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，并且多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白與若干種疾病相關(guān)，包括帕金森病，帕金森綜合癥和注意力不集中多動性疾病。
用99mTc標(biāo)記過的托烷是已知的。99mTc-TRODAT-1的開發(fā)業(yè)已由Kung披露[Nucl.Med.Biol.，28，p.505-508(2001)] TRODAT-1還披露于US 5980860和等同方案中。
Meltzer等業(yè)已披露了Technepine[J.Med.Chem.，40，1835-1844(1997)]
Technepine披露于US 6171576和等同方案中。
WO 03/055879披露了螯合劑-托烷綴合物，其中，托烷的6-或7-號位置是官能化的。簡單地披露了試劑盒，不過，沒有披露輻射防護(hù)劑的使用。
業(yè)已報(bào)導(dǎo)了托烷的N2S2二胺二硫醇螯合劑綴合物的多種99mTc配合物(包括TRODAT-1)在制備之后4和24小時具有良好的體外穩(wěn)定性，在放射化學(xué)純度方面少有改變[Meegalla等，J.Med.Chem.，40，p.9-17(1997)]。Fan等[Chin.J.Nucl.Med.，19(3)146-148(1999)]報(bào)導(dǎo)了99mTc-TRODAT-1在室溫下能穩(wěn)定24小時。
業(yè)已披露了用于制備99mTc-TRODAT-1的改進(jìn)的試劑盒配方[Choi等，Nucl.Med.Biol.，26，p.461-466(1999)]。據(jù)Choi等報(bào)導(dǎo)，只要在試劑盒中存在最少10μg(微克)托烷綴合物，放射化學(xué)純度都能達(dá)到高于90％。為了獲得令人滿意的放射化學(xué)純度(RCP)，必須進(jìn)行加熱，并且Choi等使用高壓釜加熱30分鐘。

發(fā)明內(nèi)容
锝-99m(99mTc)是放射性同位素，它的半衰期為6.02小時，可以衰變成锝-99(99Tc)。放射性衰變伴隨著γ射線的發(fā)射，其能量接近于使用的現(xiàn)代γ-照相機(jī)的醫(yī)學(xué)顯像的理想條件。衰變產(chǎn)物99Tc同樣具有放射性，并且通過β-發(fā)射衰變，半衰期為2.1×105年(衰變成穩(wěn)定的同位素99Ru)，不過，來自99Tc的放射性發(fā)射不足以用于醫(yī)學(xué)顯像。常規(guī)99mTc″發(fā)生器″包括放射性同位素99Mo，它衰變的半衰期為66.2小時。大約86％的99Mo衰變導(dǎo)致了99mTc的產(chǎn)生，不過，大約14％的99Mo衰變導(dǎo)致了99Tc的直接產(chǎn)生。因此，如果在預(yù)先洗脫之后99mTc發(fā)生器以非常短的時間洗脫，99mTc的含量將很低，不過，仍然具有大約86％的總的锝含量。隨著時間的流逝，由于所述發(fā)生器的預(yù)先洗脫，99Tc由99Mo并且由99mTc衰變成99Tc產(chǎn)生。因此，隨著發(fā)生器洗脫之間的時間間隔的增加，99Tc/99mTc的比例也增加。99Tc和99mTc锝同位素在化學(xué)上是相同的，因此，任何放射性藥物制劑必須能夠適應(yīng)洗脫液中寬的99Tc化學(xué)含量，以便能夠在所述發(fā)生器的可使用的壽命中有效發(fā)揮作用。用新鮮的99mTc發(fā)生器制備的洗脫液同樣具有較高的放射性濃度，并因此具有較高的放射性自由基的濃度，這種自由基是通過溶劑(水)的輻解作用產(chǎn)生的。因此，有效的99mTc放射性藥物制劑必須能夠提供令人滿意的RCP性能，即使在存在這種活性自由基時也是這樣。99mTc發(fā)生器的披露于大部分放射化學(xué)或核化學(xué)教科書中，并且可以賦予99mTc試劑盒的性能的不同洗脫液特征的問題披露于以下文獻(xiàn)中Saha，G.B.，″Radiopharmaceuticals and Methods ofRadiolabeling″；Chapter 6(pages 80-108)in Fundamentals of NuclearPharmacy(3rd Edn.)，Hung等披露了CardioliteTM[Nucl.Med.Biol.，23，599-603(1996)]。
本發(fā)明提供了改進(jìn)的放射性金屬配合物組合物，它包括托烷-四配位基螯合劑綴合物和锝或錸金屬配合物和輻射防護(hù)劑。所述改進(jìn)的組合物具有可再現(xiàn)性更高的起始放射化學(xué)純度(RCP)和改進(jìn)的重配后穩(wěn)定性，因此在重配6小時之后保持了85-90％的RCP。在放射性水平，放射性濃度，或重配體積的某些條件下放射性金屬托烷綴合物的令人不滿意的RCP問題在現(xiàn)有技術(shù)中尚未得到認(rèn)識。所述條件是在使用商業(yè)化放射性核素發(fā)生器，如99mTc發(fā)生器的條件下可能出現(xiàn)的。本發(fā)明提供了包括輻射防護(hù)劑的組合物，它解決了上述以前沒有解決的問題。
發(fā)明的詳細(xì)說明在第一種實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了穩(wěn)定化的組合物，它包括(i)與綴合物螯合的锝或錸的放射性同位素的金屬配合物，其中，所述綴合物包括與托烷綴合的四配位基螯合劑，并且，所述四配位基螯合劑與所述锝或錸的放射性同位素形成了中性金屬配合物；(ii)至少一種輻射防護(hù)劑。
術(shù)語″托烷″具有它的常規(guī)含義，即具有以下結(jié)構(gòu)式的雙環(huán)胺(示出了環(huán)位置的編號) 其中，位于8號位置上的胺氮可以是仲胺或叔胺。
術(shù)語“金屬配合物”表示锝或錸金屬離子與配體的配位配合物，配體在這里是四配位基螯合劑。所述螯合的金屬配合物是“抗反螯合的”，即不容易與放射性金屬配位位點(diǎn)的其他潛在的競爭配體發(fā)生配體交換。潛在的競爭配體包括托烷部分本身，所述輻射防護(hù)劑或在體外制劑中的其他賦形劑(例如抗微生物防腐劑)，或體內(nèi)內(nèi)源化合物(例如，谷胱甘肽，轉(zhuǎn)鐵蛋白或血漿蛋白)。
锝或錸的合適的放射性同位素包括94mTc，99mTc，186Re和188Re。優(yōu)選的放射性同位素是99mTc。
術(shù)語“四配位基”具有它的常規(guī)含義，即所述螯合劑具有四個供體原子，在形成金屬配合物時它們各自與提供金屬的螯合環(huán)配位。所述四配位基螯合劑優(yōu)選連接在托烷的2-，6-，7或8-號位置上，并且最優(yōu)選連接在托烷的2-或8-號位置上，優(yōu)選連接在2-號位置上。
術(shù)語″輻射防護(hù)劑″表示能抑制由放射性發(fā)射(例如，氧化還原反應(yīng))誘導(dǎo)的降解反應(yīng)，這是通過捕獲高度活性的自由基，如由水的輻解作用產(chǎn)生的含氧自由基。本發(fā)明的輻射防護(hù)劑可適當(dāng)?shù)剡x自抗壞血酸，對氨基苯甲酸(即4-氨基苯甲酸)，龍膽酸(即2，5二羥基苯甲酸)，龍膽霉醇和水楊酸，包括其與生物相容性陽離子形成的鹽。優(yōu)選的輻射防護(hù)劑是抗壞血酸和對氨基苯甲酸，或其與生物相容性陽離子形成的鹽。特別的優(yōu)選的輻射防護(hù)劑是抗壞血酸和其與生物相容性陽離子形成的鹽。優(yōu)選的鹽是抗壞血酸鈉。本發(fā)明的輻射防護(hù)劑是可購得的，達(dá)到藥用級規(guī)定。
術(shù)語″生物相容性陽離子″表示帶正電荷的抗衡離子，它能與離子化的，帶負(fù)電荷的基團(tuán)形成鹽，其中，所述帶正電荷的抗衡離子也是無毒的，并因此適合給哺乳動物施用，特別是給人體施用。合適的生物相容性陽離子的例子包括堿金屬鈉或鉀；堿土金屬鈣和鎂；以及銨離子。優(yōu)選的生物相容性陽離子是鈉和鉀，最優(yōu)選鈉。
本發(fā)明的锝和錸金屬配合物是“中性的”，即中央金屬核心上的任何正電荷都是通過四配位基螯合劑的四個金屬供體原子上的負(fù)電荷的總和平衡的，以便得到總體上電中性的金屬配合物。類似的锝核心的例子是O＝Tc+＝O和Tc3+＝O，這兩者都表示處在Tc(V)氧化狀態(tài)的锝。對于錸來說，類似的核心O＝Re+＝O和Re3+＝O是已知的。
本發(fā)明的中性放射性锝或錸配合物適當(dāng)?shù)鼐哂惺絀[{托烷}-(A)n]m-[金屬配合物](I)其中(A)n是接頭基團(tuán)，n是0-10的整數(shù)，并且，m是1，2或3。
″接頭基團(tuán)″(A)n是在下面的式Ia中定義的。式I的金屬配合物來自托烷″綴合物″。本發(fā)明的托烷四配位基螯合劑″綴合物″如式Ia所定義[{托烷}-(A)n]m-[四配位基螯合劑](Ia)其中-(A)n-是接頭基團(tuán)，其中，每一個A獨(dú)立地是-CR2-，-CR＝CR-，-C≡C-，-CR2CO2-，-CO2CR2-，-NRCO-，-CONR-，-NR(C＝O)NR-，-NR(C＝S)NR-，-SO2NR-，-NRSO2-，-CR2OCR2-，-CR2SCR2-，-CR2NRCR2-，C4-5環(huán)雜亞烷基，C4-5環(huán)亞烷基，C5-12亞芳基，或C3-12雜亞芳基；R獨(dú)立地選自H，C1-4烷基，C2-4鏈烯基，C2-4炔基，C1-4烷氧基烷基或C1-4羥基烷基；n是0-10的整數(shù)；并且，m是1，2或3。
在式I和Ia中，m優(yōu)選是1或2，最優(yōu)選是1；而(A)n優(yōu)選是(CR2)n，其中n選自1-3。
構(gòu)成中性金屬配合物的锝和錸的合適的四配位基螯合劑包括，但不局限于(i)N2S2配體，它具有二胺二硫醇供體組，如BAT，酰胺胺二硫醇供體組，如MAMA，苯二胺硫醚硫醇供體組，如PhAT，或二硫代縮氨基脲供體組；(ii)二胺二肟；(iii)具有二酰胺吡啶硫醇供體組的N3S配體，如Pica；(iv)具有酰胺三胺供體組的開鏈或大環(huán)配體，如monoxocyclam。
(v)它具有二胺二酚供體組的N2O2配體。
上述配體特別適合于配合锝，例如，94mTc或99mTc，Jurisson等對它們作了更詳細(xì)的披露[Chem.Rev.，99，2205-2218(1999)]。Arano等披露了N2S2二硫代縮氨基脲螯合劑[Chem.Pharm.Bull.，39，p.104-107(1991)]。McBride等披露了N2S2苯二胺硫醚硫醇螯合劑[J.Med.Chem.，36，p.81-6(1993)]。Turpin等披露了大環(huán)酰胺三胺配體以及它們的托烷綴合物[J.Lab.Comp.Radiopharm.，45，379-393(2002)]。Nanjappan等披露了二胺二肟[Tetrahedron，3，8617-8632(1994)]。Bryson等披露了具有二酰胺吡啶硫醇供體組的N3S配體，如Pica[Inorg.Chem.，29，2948-2951(1990)]。Pillai等披露了具有二胺二酚供體組的N2O2配體[Appl.Rad.Isot.，41，557-561(1990)]。
正如Volkert等所披露的，本發(fā)明的優(yōu)選的99mTc金屬配合物適合穿過血腦屏障(BBB)[Radiochim.Acta，63，p.205-208(1993)]。本發(fā)明的特別優(yōu)選的99mTc金屬配合物是99mTc-TRODAT-l和Technepine。
優(yōu)選的四配位基螯合劑具有式II的N2S2二胺二硫醇或酰胺胺二硫醇供體組 其中E1-E5各自獨(dú)立地是R′基團(tuán)；每一個R′是H或C1-10烷基，C3-10烷芳基，C2-10烷氧基烷基，C1-10羥基烷基，C1-10氟烷基，C2-10羧基烷基或C1-10氨基烷基，或兩個或兩個以上R′基團(tuán)與它們連接的原子構(gòu)成了碳環(huán)、雜環(huán)、飽和的或不飽和的環(huán)，并且，其中一個或多個R′基團(tuán)與托烷綴合；并且Q是具有式-J(CR′2)f-的橋連基；其中f是1或2，并且J是-CR′2-或C＝O；P1和P2獨(dú)立地是H或硫醇保護(hù)基。
術(shù)語″保護(hù)基″表示能抑制或阻止不希望的化學(xué)反應(yīng)的基團(tuán)(例如，將游離的硫醇氧化成相應(yīng)的二硫化物)，不過它被設(shè)計(jì)成具有足夠的活性，它能夠在足夠溫和的條件下從所述硫醇上降解下來，在對所述綴合物進(jìn)行放射性標(biāo)記期間不會改變所述分子的其余部分。硫醇保護(hù)基為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，并且包括，但不局限于三苯甲基，4-甲氧基芐基，芐基，四氫吡喃基，甲基四氫呋喃基(MTHF)，乙酰氨基甲基和乙氧基乙基。其他硫醇保護(hù)基的使用披露于以下文獻(xiàn)中′Protective Groups in Organic Synthesis′，Theorodora W.Greene andPeterG.M.Wuts，(John Wiley&Sons，1991)。在式II中，P1和P2優(yōu)選都是H。
優(yōu)選的Q基團(tuán)如下-CH2CH2-，-CH2CH2CH2-或-(C＝O)CH2-，最優(yōu)選N2S2二胺二硫醇螯合劑，其中Q是-CH2CH2-或-CH2CH2CH2-，特別優(yōu)選的是-CH2CH2-(即BAT型螯合劑)。
E1-E5優(yōu)選選自H，C1-3烷基，C1-3烷氧基烷基，C1-3羥基烷基或C1-3氟烷基。最優(yōu)選的是，每一個E1-E4基團(tuán)是H，并且E5是C1-3烷基。
具有式II的最優(yōu)選的螯合劑是TRODAT-1的N2S2二胺二硫醇螯合劑，即式II的螯合劑，其中Q是-CH2CH2-，E1-E5都是H并且P1＝P2＝H。
具有式II的四配位基螯合劑優(yōu)選通過橋連基Q或E5基團(tuán)連接于托烷。最優(yōu)選的是，托烷是通過E5基團(tuán)連接的。
本發(fā)明的托烷優(yōu)選是具有式III的苯基托烷
其中R1是H，C1-4烷基，C1-4鏈烯基或C1-4氟烷基；R2是CO2R5，CON(R5)2，COR5或C1-4烷基，其中每個R5獨(dú)立地是H或C1-3烷基；R3和R4獨(dú)立地是H，Cl，Br，F(xiàn)，I，CH3，C2H5，CF3，NO2，OCH3或NH2。
R1優(yōu)選是C1-3烷基或C1-3氟烷基.R2優(yōu)選是CO2CH3或C1-2烷基。R3優(yōu)選是4-氯，4-氟，或4-甲基，而R4優(yōu)選是H或CH3。R1最優(yōu)選是CH3。
應(yīng)當(dāng)理解的是，式I的接頭基團(tuán)-(A)n-的作用是使相對較大體積的金屬配合物與托烷隔離，以便托烷與生物學(xué)靶位點(diǎn)(例如，哺乳動物腦中的多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白)的結(jié)合沒有受到破壞。這一目的可以通過靈活的組合實(shí)現(xiàn)(例如，簡單的烷基鏈)，以便所述大體積的基團(tuán)具有使它自身的定位遠(yuǎn)離所述活性位點(diǎn)的自由和/或剛性，如環(huán)烷基或芳基間隔基，它們使所述金屬配合物離開所述活性位點(diǎn)。
還可將所述接頭基團(tuán)的性質(zhì)用于修飾所得到的綴合物的金屬配合物的生物分布。因此，例如，將醚基導(dǎo)入所述接頭，將有助于使血漿蛋白結(jié)合最少。優(yōu)選的接頭基團(tuán)-(A)n-具有連接的原子的主鏈，它組成了2-10個原子，最優(yōu)選2-5個原子的-(A)n-部分，2或3個原子是特別優(yōu)選的。具有2個原子的最小接頭基團(tuán)主鏈具有的優(yōu)點(diǎn)是，所述螯合劑與托烷足夠隔離，以便減少任何相互作用。
諸如亞烷基或亞芳基的非肽接頭基團(tuán)具有的優(yōu)點(diǎn)是，與綴合的托烷沒有顯著的氫鍵結(jié)合相互作用，以便所述接頭不會纏繞在托烷上。優(yōu)選的亞烷基間隔基是-(CH2)q-，其中q是2-5。優(yōu)選的芳基間隔基具有下式
其中a和b獨(dú)立地是0，1或2。
特別優(yōu)選的是，托烷以如下方式結(jié)合在所述金屬配合物上，即所述鍵在血液中不容易發(fā)生代謝，因?yàn)檫@種代謝會導(dǎo)致標(biāo)記過的托烷抑制劑到達(dá)預(yù)期的體內(nèi)靶位點(diǎn)之前所述金屬配合物被裂解掉。因此，托烷優(yōu)選通過不容易代謝的鍵與本發(fā)明的金屬配合物共價結(jié)合。
本發(fā)明的穩(wěn)定化的組合物可以通過處在合適氧化狀態(tài)的放射性金屬的溶液與螯合劑綴合物在存在所述輻射防護(hù)劑的條件下，在合適溶劑的溶液中，在合適的pH條件下與螯合劑綴合物起反應(yīng)。所述輻射防護(hù)劑可以與綴合物一起提供或者與放射性金屬的溶液一起提供。優(yōu)選的是，所述輻射防護(hù)劑是與綴合物預(yù)先混合的，并且，前體組合物隨后與放射性金屬起反應(yīng)，(正如在下面的第二種實(shí)施方案中所披露的)。所述綴合物溶液可優(yōu)選含有配體，它能較弱的但是快速地與放射性金屬，如葡糖酸鹽或檸檬酸鹽配合，即所述放射性金屬配合物是通過配體交換或反螯合制備的。所述條件被用于抑制不希望的副作用，如金屬離子的水解。當(dāng)放射性金屬是錸時，有用的放射性原材料是高錸酸鹽，即ReO4-。當(dāng)放射性金屬是99mTc時，有用的放射性原材料是來自99Mo發(fā)生器的高锝酸鈉。在高錸酸鹽和高锝酸鹽中，金屬(M)是以M(VII)氧化狀態(tài)存在的，它是相對無反應(yīng)性的。因此，較低氧化狀態(tài)的M(I)-M(V)的锝或錸配合物的制備通常需要添加合適的生物相容性還原劑?！迳锵嗳菪赃€原劑″是可以藥用的還原劑，如連二亞硫酸鈉，亞硫酸氫鈉，亞磺酸甲脒，亞錫離子，F(xiàn)e(II)或Cu(I)，以便促進(jìn)配合?？箟难崮芡瑫r起著輻射防護(hù)劑和生物相容性還原劑的作用，因此，可以使用的抗壞血酸的量大于為了促進(jìn)還原而單獨(dú)實(shí)現(xiàn)輻射防護(hù)所需要的量。所述生物相容性還原劑優(yōu)選包括亞錫即Sn(II)，優(yōu)選亞錫離子或鹽。優(yōu)選的亞錫鹽是氯化亞錫，氟化亞錫和酒石酸亞錫。所述亞錫鹽能夠以無水或水合形式使用。
另外，本發(fā)明的穩(wěn)定化的組合物能夠以逐步的方式制備，首先在合適的溶劑中形成放射性金屬配合物，然后添加所述輻射防護(hù)劑。在所述方法中，所述輻射防護(hù)劑應(yīng)當(dāng)在形成放射性金屬配合物之后盡可能快地添加，以便將所述輻射防護(hù)劑的穩(wěn)定作用用于實(shí)現(xiàn)輻解作用和可能的降解的最小化。優(yōu)選這樣的制備方法，其中，所述輻射防護(hù)劑是在形成放射性金屬配合物之前添加的。
用于本發(fā)明的輻射防護(hù)劑的濃度適當(dāng)?shù)貫?.3-5.0毫摩爾，優(yōu)選0.4-4.0毫摩爾，最優(yōu)選1.0-3.5毫摩爾。對于抗壞血酸來說，該濃度相當(dāng)于50-900μg/cm3的合適濃度，優(yōu)選70-800μg/cm3，最優(yōu)選90-700μg/cm3。對于99mTc放射性藥物99mTc-TRODAT-1來說，抗壞血酸或抗壞血酸鹽輻射防護(hù)劑的優(yōu)選濃度為0.5-3.8毫摩爾。
當(dāng)本發(fā)明的放射性金屬配合物要用在放射性藥物組合物中時，制備的優(yōu)選方法是使用在下面的第三和第四種實(shí)施方案中披露的非放射性試劑盒。該試劑盒提供了必需反應(yīng)物在合適濃度下的方便的供應(yīng)，它只需要用高錸酸鹽或高锝酸鹽在鹽水或其他合適的溶劑中重配。
在第二種實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了可用于制備上述穩(wěn)定化的組合物的前體組合物，它包括(i)如上文所述的式Ia的螯合劑綴合物；(ii)如上文所述的輻射防護(hù)劑。
優(yōu)選的是，所述前體組合物的托烷是具有式III(參見上文)的苯基托烷。用于所述前體組合物的優(yōu)選的和最優(yōu)選的苯基托烷如上文對第一種實(shí)施方案的描述，最優(yōu)選的是，前體組合物的綴合物具有式IV 其中，P1和P2獨(dú)立地是H或硫醇保護(hù)基。
術(shù)語″保護(hù)基″如上面的式II所定義。式IV的優(yōu)選的綴合物是其中，P1和P2都是H。
用于本發(fā)明前體組合物中的綴合物可以通過雙官能螯合物方法制備。因此，制備連接了官能團(tuán)的螯合劑是眾所周知的(″雙官能螯合物″)。業(yè)已連接的官能團(tuán)包括胺，硫氰酸鹽，馬來酰亞胺和活性酯，如N-羥基琥珀酰亞胺或五氟苯酚。所述雙官能螯合物能夠與托烷上的合適的官能團(tuán)起反應(yīng)，以便形成理想的綴合物。托烷上的合適的官能團(tuán)包括羧基(用于與胺-官能化雙官能螯合劑形成酰胺鍵)；胺(用于與羧基-或活性酯-官能化雙官能螯合劑形成酰胺鍵)；鹵素，甲磺酸鹽和甲苯磺酸鹽(用于胺-官能化雙官能螯合劑的N-烷基化)，和硫醇(用于與馬來酰亞胺-官能化雙官能螯合劑)反應(yīng)。有關(guān)雙官能螯合方法的其他細(xì)節(jié)可以參見Arano[Adv.Drug Deliv.Rev.，37，103-120(1999)]。托烷與四配位基螯合劑綴合的其他細(xì)節(jié)披露于以下文獻(xiàn)中Meegalla等[J.Med.Chem.，40，9-17(1997)]用于N2S2二胺二硫醇螯合劑的方法；Meltzer等用于N2S2酰胺胺二硫醇(MAMA)螯合劑的方法[ibid，40，1835-1844(1997)]和Turpin等[J.Lab.Comp.Radiopharm.，45，379-393(2002)]用于monoxocyclam螯合劑的方法。
在第三種實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了放射性藥物，它包括適合給哺乳動物施用形式的本發(fā)明的第一種實(shí)施方案的穩(wěn)定化的組合物與生物相容性載體。″生物相容性載體″是流體，特別是液體，其中，顯像劑可以是懸浮的或溶解的，以便所述組合物在生理學(xué)上是可以耐受的，即可以給哺乳動物體施用，而又沒有毒性或過度的不舒服。生物相容性載體合適的是可注射的載體液體，如用于注射的無菌的，無熱源的水；水溶液，如鹽水(它有利地可以是平衡的，以便用于注射的最終產(chǎn)物是等滲的或非低滲的)；一種或多種滲透壓調(diào)節(jié)物質(zhì)(如血漿陽離子與生物相容性抗衡離子形成的鹽)的水溶液，糖(例如葡萄糖或蔗糖)，糖醇(例如山梨糖醇或甘露糖醇)，乙二醇(例如甘油)，或其他非離子多元醇材料(例如聚乙二醇，丙二醇等)。
本發(fā)明的放射性藥物還可任選地包括抗微生物防腐劑。術(shù)語″抗微生物防腐劑″表示能抑制潛在有害的微生物，如細(xì)菌，酵母或霉菌生長的試劑。所述抗微生物防腐劑根據(jù)其濃度還可能具有某些殺菌特性，本發(fā)明的抗微生物防腐劑的主要作用是抑制任何這樣的微生物在重配之后的放射性藥物，即放射性診斷產(chǎn)物本身中的生長。合適的抗微生物防腐劑包括對羥基苯甲酸酯，即對羥基苯甲酸甲酯，對羥基苯甲酸乙酯，對羥基苯甲酸丙酯或?qū)αu基苯甲酸丁酯或其混合物；苯甲醇；苯酚；甲酚；溴烷銨和硫柳汞。優(yōu)選的抗微生物防腐劑是對羥基苯甲酸酯。
所述放射性藥物適合在容器中提供，該容器具有密封裝置，它適合用皮下注射器針頭進(jìn)行一次或多次穿刺(例如波紋狀的隔膜密封裝置)，同時保持無菌完整性。所述容器可以包括單個或多個患者劑量。優(yōu)選的多劑容器包括單一體積的管形瓶(例如10-30cm3的體積)，它包括多個患者劑量，以便可以將單一的患者劑量吸入臨床級注射器中，在適合臨床應(yīng)用的制劑的有效期期間以不同的時間間隔吸入。將預(yù)先填充的注射器設(shè)計(jì)成容納單個人類劑量，并因此優(yōu)選是適合臨床使用的一次性或其他注射器。所述預(yù)先填充的注射器可任選地具有注射器屏蔽物，以便保護(hù)操作者不會接觸放射性劑量。所述放射性藥物注射器合適的屏蔽物為本領(lǐng)域所公知，并且優(yōu)選包括鉛或鎢。
當(dāng)放射性同位素是99mTc時，適合診斷顯像性放射性藥物的放射性含量為180-1500MBq的99mTc，這取決于要在體內(nèi)顯像的部位，攝取以及靶與本底的比例。99mTc適合SPECT顯像，而94mTc適合PET顯像。
本發(fā)明的放射性藥物包括第一種實(shí)施方案的改進(jìn)的放射性金屬組合物。它所具有的優(yōu)點(diǎn)是抑制了放射性雜質(zhì)。所述放射性雜質(zhì)可能會造成對患者的不必要的輻射劑量，或者可能在某些場合下具有對顯像的不利影響，這是由于降低了信號與本底的比例。
本發(fā)明的放射性藥物可以用試劑盒制備，正如在下面的第四種實(shí)施方案中所披露的。另外，存在于生物相容性載體中的本發(fā)明的放射性金屬配合物可以在無菌生產(chǎn)條件下制備，以便提供理想的無菌制品。所述放射性藥物還可以在非無菌條件下制備，然后進(jìn)行最終的滅菌，例如，使用γ-輻射，高壓滅菌，干燥加熱或化學(xué)處理(例如，使用環(huán)氧乙烷)。優(yōu)選的是，本發(fā)明的放射性藥物是從試劑盒制備的。
在第四種實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于制備本發(fā)明的放射性藥物的試劑盒，它包括(i)具有式(Ia)的綴合物或其與生物相容性抗衡離子形成的鹽；(ii)輻射防護(hù)劑(如上文所述)；(iii)生物相容性還原劑(如上文所述)。
所述試劑盒被設(shè)計(jì)成能提供適合人類施用，如通過直接注射到血液中的無菌放射性藥物產(chǎn)品。對于99mTc來說，所述試劑盒優(yōu)選是冷凍干燥的，并且被設(shè)計(jì)成可以用來自99mTc放射性同位素發(fā)生器的無菌99mTc-高锝酸鹽(TcO4-)重配，以便得到適合人類或哺乳動物施用的溶液，而不進(jìn)行進(jìn)一步的操作。合適的試劑盒包括容器(例如隔膜密封的管形瓶)，它裝有游離堿或酸式鹽形式的綴合物(Ia)，以及生物相容性還原劑?！迳锵嗳菪赃€原劑″如在第一種實(shí)施方案中所定義的(參見上文)。用于所述試劑盒的生物相容性還原劑優(yōu)選是亞錫鹽，如氯化亞錫或酒石酸亞錫。
所述試劑盒的″輻射防護(hù)劑″如上文所述。優(yōu)選的輻射防護(hù)劑相當(dāng)于在第一種實(shí)施方案中的穩(wěn)定化的組合物中所披露的。
式(Ia)的綴合物包括胺，它構(gòu)成了托烷環(huán)的8-號位置，加上四配位基螯合劑的其他可能的胺供體原子。因此，綴合物可任選地用于所述試劑盒中，作為″其與生物相容性抗衡離子形成的鹽″，即所述綴合物的酸式鹽。所述合適的鹽包括，但不局限于鹽酸鹽，三氟乙酸鹽，磺酸鹽，酒石酸鹽，草酸鹽和磺基水楊酸鹽。當(dāng)綴合物具有式IV時，優(yōu)選的鹽是三氟乙酸鹽或鹽酸鹽，特別是三氟乙酸鹽。
非放射性試劑盒還可以任選包括其他成分，如一種或多種反螯合劑，抗微生物防腐劑，pH-調(diào)節(jié)劑或填料。″反螯合劑″包括一種或多種化合物，它們能迅速起反應(yīng)，以便與锝形成弱配合物，然后被所述配體取代。這降低了由于高锝酸鹽與锝配合的快速減少而導(dǎo)致的形成還原性水解锝(RHT)的風(fēng)險(xiǎn)。所述合適的反螯合劑是弱有機(jī)酸鹽，即pKa在3-7范圍內(nèi)的有機(jī)酸與生物相容性陽離子形成的鹽。所述合適的弱有機(jī)酸是乙酸，檸檬酸，酒石酸，葡糖酸，葡庚糖酸，苯甲酸，苯酚或膦酸，或氨基羧酸，如乙二胺四乙酸(EDTA)，亞氨基二乙酸(IDA)和次氮基三乙酸(NTA)。因此，合適的鹽是乙酸鹽，檸檬酸鹽，酒石酸鹽，葡糖酸鹽，葡庚糖酸鹽，苯甲酸鹽，酚鹽，磷酸鹽或乙二胺四乙酸鹽。所述優(yōu)選的鹽是乙二胺四乙酸鹽，葡糖酸鹽，葡庚糖酸鹽，苯甲酸鹽，或磷酸鹽，最優(yōu)選的是乙二胺四乙酸鹽，葡糖酸鹽，葡庚糖酸鹽或磷酸鹽，最特別優(yōu)選的是葡糖酸鹽，葡庚糖酸鹽或乙二胺四乙酸鹽。優(yōu)選的乙二胺四乙酸鹽是乙二胺四乙酸二鈉或乙二胺四乙酸鈣。優(yōu)選的反螯合劑是生物相容性陽離子的葡糖酸鹽或葡庚糖酸鹽。
當(dāng)所述試劑盒包括二胺二硫醇N2S2四配位基螯合劑時，所述反螯合劑優(yōu)選包括葡糖酸鹽或葡庚糖酸鹽與乙二胺四乙酸鹽的組合。
“抗微生物防腐劑”如放射性藥物(即第三種)實(shí)施方案(參見上文)所定義。對于試劑盒來說，添加抗微生物防腐劑意味著一旦重配，能夠抑制潛在的有害微生物在該制劑中的生長。
術(shù)語“pH-調(diào)節(jié)劑”表示能確保重配的試劑盒的pH在供人或哺乳動物施用的可接受范圍(大約pH 4.0-10.5)的化合物或化合物的混合物。所述合適的pH-調(diào)節(jié)劑包括可以藥用的緩沖物，如tricine，磷酸鹽或TRIS[即三(羥甲基)氨基甲烷]，和可以藥用的堿，如碳酸鈉，碳酸氫鈉或其混合物。當(dāng)所述綴合物以酸式鹽的形式使用時，所述pH調(diào)節(jié)劑可任選在獨(dú)立的管形瓶或容器中提供，以便該試劑盒的使用者可以調(diào)節(jié)pH，作為多步驟程序的一部分。
術(shù)語″填料″表示可以藥用的填充劑，它可能有利于在生產(chǎn)和冷凍干燥期間的材料處理。合適的填料包括無機(jī)鹽，如氯化鈉，以及水溶性糖或糖醇，如蔗糖，麥芽糖，甘露糖醇或海藻糖，優(yōu)選的填料是甘露糖醇。
對于99mTc來說，所述試劑盒優(yōu)選是冷凍干燥的，并且優(yōu)選被設(shè)計(jì)成可以用來自99mTc放射性同位素發(fā)生器的99mTc-高锝酸鹽(TcO4-)的無菌溶液重配，以便提供適合人類或哺乳動物施用的溶液，只需要很少的進(jìn)一步操作。在理想場合下，所述理想的放射性藥物產(chǎn)品是在室溫下，在幾分鐘之內(nèi)直接用99mTc發(fā)生器洗脫液制成的，即一個步驟的制備。另一種可能性是多個步驟的方法，其中，必須向所述試劑盒中添加兩種或兩種以上溶液(例如洗脫液和緩沖溶液)。在某些場合下，會發(fā)現(xiàn)在室溫下的反應(yīng)時間太長。這可以通過本領(lǐng)域所公知的RCP測定以一定時間間隔確定。因此，可能需要加熱，以便促進(jìn)放射性標(biāo)記反應(yīng)能夠在較短時間內(nèi)完成。在必須加熱時，加熱過程可以采用任何合適的方法，例如熱流體浴，如水或高沸點(diǎn)油(例如硅烷)??；加熱組件；熱板或微波輻射；只要可以獲得需要的溫度控制就行。在加熱完成之后，讓反應(yīng)混合物冷卻到室溫，或者可以主動冷卻(例如在諸如氣體或水的冷卻流體流中冷卻)或通過具有集成感應(yīng)冷卻的加熱塊冷卻。
本發(fā)明的優(yōu)選試劑盒包括(i)具有式(Ia)的綴合物或其與生物相容性抗衡離子形成的鹽；
(ii)輻射防護(hù)劑，選自抗壞血酸，對氨基苯甲酸和，龍膽酸或它的生物相容性鹽；(iii)包括亞錫的生物相容性還原劑。
最優(yōu)選的試劑盒包括抗壞血酸或它的生物相容性鹽作為還原劑。亞錫還原劑如在第一種實(shí)施方案中所披露的(參見上文)。
當(dāng)式(Ia)的綴合物包括N2S2二胺二硫醇螯合劑時，本發(fā)明的優(yōu)選的試劑盒還包括(i)式(Ia)的綴合物，其中四配位基螯合劑包括具有式II的N2S2二胺二硫醇，或它的生物相容性鹽；(ii)輻射防護(hù)劑，它選自抗壞血酸，對氨基苯甲酸，龍膽酸或它的生物相容性鹽；(iii)包括亞錫的生物相容性還原劑；(iv)反螯合劑，選自葡糖酸，葡庚糖酸EDTA和它的生物相容性鹽及其組合。
當(dāng)N2S2二胺二硫醇螯合劑形成TRODAT-1的一部分時，所述反螯合劑優(yōu)選包括乙二胺四乙酸(EDTA)，和它的生物相容性鹽與葡糖酸或葡庚糖酸鹽的組合。當(dāng)托烷-四配位基螯合劑綴合物是TRODAT-1時，本發(fā)明的試劑盒優(yōu)選包括(i)具有式(IV)的綴合物或它的生物相容性鹽；(ii)輻射防護(hù)劑，它選自抗壞血酸或它的生物相容性鹽；(iii)包括亞錫的生物相容性還原劑；(iv)反螯合劑，選自葡糖酸或葡庚糖酸和它的生物相容性鹽；(v)乙二胺四乙酸(EDTA)和它的生物相容性鹽。
優(yōu)選的TRODAT-1試劑盒包括抗壞血酸或抗壞血酸鈉作為所述輻射防護(hù)劑，以及葡糖酸鈉和乙二胺四乙酸二鈉的組合作為反螯合劑。最優(yōu)選的TRODAT-1試劑盒配方是在實(shí)施例1中作為配方P提供的。
在第五種實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了制備本發(fā)明的放射性藥物的方法，該方法包括在適合哺乳動物施用的形式的生物相容性載體中制備托烷螯合劑綴合物的金屬配合物，通過以下方法進(jìn)行(i)讓锝或錸的放射性同位素與第二種實(shí)施方案的前體組合物在適合哺乳動物施用的形式的生物相容性載體中反應(yīng)；或(ii)在適合哺乳動物施用的形式的生物相容性載體中制備第一種實(shí)施方案的金屬配合物，然后順序添加有效量的至少一種輻射防護(hù)劑。
在第六種實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了第三種實(shí)施方案的放射性藥物在哺乳動物腦的診斷性顯像方法中的用途。
在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了哺乳動物腦的診斷性顯像方法，它包括對事先業(yè)已施用了第三種實(shí)施方案的放射性藥物的哺乳動物進(jìn)行顯像。在本實(shí)施方案中，將所述放射性藥物用于顯像方法，或顯像處理，其中，術(shù)語“事先業(yè)已施用了”表示業(yè)已執(zhí)行了需要由醫(yī)學(xué)資質(zhì)的人員給患者施用制劑的任何步驟。
通過以下非限定性實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行了說明。實(shí)施例1描述了用于在隨后的實(shí)施例中披露的比較研究的材料和方法。因此，本發(fā)明的配方(配方P)與現(xiàn)有技術(shù)的配方(配方Q)進(jìn)行比較。實(shí)施例2披露了放射性標(biāo)記方法和所采用的質(zhì)量控制方法。
實(shí)施例3研究了不同的99mTc發(fā)生器洗脫特征對試劑盒配方P和Q的性能的影響。99mTc發(fā)生器被設(shè)計(jì)成使用幾天時間，并且取決于發(fā)生器的老化，以及從最后一次洗脫開始計(jì)算的時間，獲得了來自洗脫的洗脫液的多種特征。商業(yè)化試劑盒必須能夠在消費(fèi)者所采用的多種保存和洗脫條件下提供令人滿意的RCP制劑。實(shí)施例3研究了四組洗脫條件(″洗脫條件1-4)。結(jié)果表明，這兩種配方在′最佳場合′發(fā)生器洗脫條件下(″洗脫條件1″)提供可接受的起始RCPs(對于P和Q來說分別為92％和88％)。配方P在制備之后3.5小時具有90％的RCP，而對于配方Q(現(xiàn)有技術(shù))來說，在相同時間內(nèi)RCP銳減到77％。以上結(jié)果表明，配方P具有改進(jìn)的起始RCP和改進(jìn)的制備后穩(wěn)定性。
在發(fā)生器洗脫條件2下，配方P在制備之后不久具有92％的RCP，而在4小時為90％。對于配方Q來說起始RCP為88％，但是在3.5小時再次顯著降低到77％。以上結(jié)果證實(shí)了即使是在它的有用的貨架壽命末期的發(fā)生器洗脫液，配方P也具有改進(jìn)的起始RCP，以及比現(xiàn)有配方Q更高的制備后穩(wěn)定性。
在發(fā)生器洗脫條件3下，盡管在發(fā)生器洗脫間具有長的時間間隔，這兩種制劑都提供了可接受的起始RCPs(對于P和Q來說分別為91和88％)。在制備后4小時，配方P的制備后RCP仍然高達(dá)88％，而配方Q的RCP在僅僅2個小時之后降低到73％。
在發(fā)生器洗脫條件4下，配方P在1.5小時之后表現(xiàn)出90％的RCP，在制備后3.5小時表現(xiàn)出89％的RCP。在接受這種最具挑戰(zhàn)性的洗脫條件時，現(xiàn)有技術(shù)的配方Q的RCP在1.5小時僅為76％，在3.5小時降低到71％。
實(shí)施例4表明p-ABA同樣是99mTc-TRODAT-1制劑的有效的輻射防護(hù)劑。添加p-ABA，會導(dǎo)致RCP的顯著提高。將p-ABA的水平從200提高到500μg，可進(jìn)一步提高起始和4小時的穩(wěn)定性。
實(shí)施例5研究了用于重配試劑盒管形瓶的99mTc-高锝酸鹽的體積(″重配體積″)在相同的洗脫液放射性濃度(0.75GBq/ml)下對RCP的影響。在標(biāo)準(zhǔn)的2ml重配體積下，配方P試劑盒比配方Q(現(xiàn)有技術(shù))表現(xiàn)更好。配方P試劑盒即使在用3GBq在4ml體積中仍然能很好地放射性標(biāo)記，但是當(dāng)試劑盒用4.5GBq在6ml體積中重配時RCP顯著降低。以上結(jié)果證實(shí)，這兩種配方的RCP受重配體積的影響。這種影響可能是由于溶劑輻解作用的延長了的通道長度效應(yīng)。在配方P中添加輻射防護(hù)劑抗壞血酸鹽，與現(xiàn)有技術(shù)配方(Q)相比能抑制體積效應(yīng)，不過不能完全消除。
實(shí)施例6研究了用高壓釜加熱循環(huán)(121℃，30分鐘)作為放射性標(biāo)記方法的一部分的影響，因?yàn)镃hoi等[Nucl.Med.Biol.，26，p.461-466(1999)]采用了管形瓶加熱方法。本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)通常是通過煮沸的水浴加熱進(jìn)行的，因?yàn)槭褂酶邏焊鳛橹苽浞椒ǖ囊徊糠謱τ谏虡I(yè)化產(chǎn)品來說不是有吸引力的選擇。因此，進(jìn)行了對照研究，以便確定不同的加熱方法是否會造成觀察到的配方P和Q的RCP差異。實(shí)施例6證實(shí)了使用高壓釜加熱循環(huán)對兩種配方的RCP都具有有害作用。在兩個分析時間點(diǎn)上都觀察到了兩種配方的低的RCP，并且在放射性HPLC層析圖上觀察到了高水平的親水性雜質(zhì)。因此，現(xiàn)有技術(shù)Choi等99mTc-TRODAT-1制劑的報(bào)導(dǎo)的穩(wěn)定性不能歸結(jié)為高壓釜的使用。
實(shí)施例7證實(shí)了99mTc-TRODAT-1的有用的區(qū)域性腦生物分布特性在存在輻射防護(hù)劑抗壞血酸鈉的條件下得到了保持。
實(shí)施例8證實(shí)了本發(fā)明的99mTc試劑盒配方在使用三種不同的商業(yè)化99mTc發(fā)生器時在多種洗脫條件下提供了令人滿意的RCP。
實(shí)施例9證實(shí)了本發(fā)明的配方P試劑盒可以在室溫下使用兩個步驟的方法成功地重配。首先加入放射性，然后添加pH 7.4的緩沖溶液。所述緩沖液提高了反應(yīng)混合物的pH，并且驅(qū)動放射性標(biāo)記的完成。
實(shí)驗(yàn)業(yè)已進(jìn)行了一系列對照實(shí)驗(yàn)，以便產(chǎn)生有關(guān)本發(fā)明的輻射防護(hù)劑配方與在現(xiàn)有技術(shù)中披露的對99mTc-TRODAT-1進(jìn)行優(yōu)化相比的放射性標(biāo)記數(shù)據(jù)。本發(fā)明的配方與現(xiàn)有技術(shù)公開的TRODAT-1配方相比表現(xiàn)出明顯的優(yōu)點(diǎn)[Choi等，Nucl.Med.Biol.，26，p.461-466(1999)]。
實(shí)施例1材料和方法所有研究都是用冷凍干燥的試劑盒配方進(jìn)行的。試劑盒管形瓶是在相同條件下制備的，但是，加入不同的配方，即本發(fā)明的配方(配方P)和Choi等的現(xiàn)有技術(shù)的配方(配方Q)。所有管形瓶都是在遮光條件下在-20℃下直立保存的，直到需要使用。99mTc-高锝酸鹽洗脫液是從AmertecIITM發(fā)生器中(實(shí)施例3-7)，DrytecTM發(fā)生器(實(shí)施例8和9)以及UltraTechnekowTM和ElutecTM發(fā)生器(實(shí)施例8)獲得的。試劑盒配方在表1中提供表1本發(fā)明的試劑盒配方(P)與現(xiàn)有技術(shù)的配方(Q)。

*作為三氟乙酸鹽配制最明顯的差別是，配方P包括輻射防護(hù)劑(抗壞血酸鈉)，而配方Q沒有。
實(shí)施例2放射標(biāo)記方法和純度測定。
除非另有說明，所有檢測物都是用相同的方法進(jìn)行放射性標(biāo)記和分析的。因此，一旦平衡至環(huán)境溫度，每一個試劑盒用2ml的99Tc-高锝酸鈉溶液重配，所述溶液含有1.5GBq(10％)的放射性(1.5GBq相當(dāng)于740MBq兩位患者的劑量)，在煮沸的水浴中加熱20分鐘，然后冷卻10分鐘，再通過HPLC和ITLC進(jìn)行RCP分析。分析時間報(bào)道為‘制備后’。
RCP測定HPLC柱XterraRP183.5μm 3.0×50mm。
環(huán)大小50μL，移動相60％50mM乙酸銨pH 740％乙腈流速0.5ml/分鐘ITLC將Pall ITLC-SG片(部件編號61886)切割成20mm×200mm的條，并且用50％1M乙酸銨50％丙酮洗脫RCP計(jì)算RCP＝(A+B)*((100-RHT)/100)A＝來自HPLC的物質(zhì)A，B＝來自HPLC的物質(zhì)B，RHT＝還原的水解的锝，來自ITLC的物質(zhì)。
物質(zhì)A和物質(zhì)B是99mTc-TRODAT-1的非對映異構(gòu)體，參見Meegalla等[J.Med.Chem.，41，428-436(1998)]的描述。
實(shí)施例3不同發(fā)生器洗脫條件的比較性試劑盒性能重配了配方P和Q的試劑盒(參見實(shí)施例1)，按照與實(shí)施例2完成相同的方法加熱和分析。研究了四種發(fā)生器洗脫條件發(fā)生器洗脫條件(1-4)1.新鮮洗脫液洗脫間隔24小時，＜2小時舊的洗脫液；2.老化洗脫液洗脫間隔24小時，＞6小時舊的洗脫液-高水平輻解作用產(chǎn)物；3.新鮮洗脫液洗脫間隔72小時，＜2小時舊的洗脫液-低99mTc/99Tc比例)；4.老化洗脫液洗脫間隔72小時，＞6小時舊的洗脫液-低99mTc/99Tc比例，和高水平的輻解作用產(chǎn)物。
RCP測定是在兩個制備后時間點(diǎn)進(jìn)行的，結(jié)果如表2所示表2在四種不同的發(fā)生器洗脫條件下對配方P和Q進(jìn)行放射性標(biāo)記。

實(shí)施例4對氨基苯甲酸鈉輻射防護(hù)劑的作用將新制備的，氮?dú)獯祾叩膒-ABA鈉(對氨基苯甲酸鈉)溶液添加到配方Q試劑盒中。所述試劑盒的放射性標(biāo)記是通過以下方法進(jìn)行的，首先添加所述輻射防護(hù)劑(0.2ml)，然后馬上添加高锝酸鹽溶液(1GBq，在1.8ml中)。然后按實(shí)施例2所述方法對該試劑盒進(jìn)行加熱。結(jié)果如表3所示
表3添加p-ABA輻射防護(hù)劑的作用

實(shí)施例5重配體積的影響。
對重配體積對P和Q配方的放射性標(biāo)記性能的影響進(jìn)行了比較。重配了這兩種配方的試劑盒，按實(shí)施例1和2所述方法進(jìn)行加熱和分析。用于重配所述試劑盒的洗脫液放射性濃度對每一個測試項(xiàng)目保持穩(wěn)定在1.5GBq/ml，并且對2，4和6ml的洗脫液重配體積進(jìn)行了研究。
表4重配體積對配方P和Q的RCP的影響。

實(shí)施例6采用高壓釜加熱的作用的研究。
配方P和Q的各自兩個管形瓶是按照標(biāo)準(zhǔn)方法用2ml的高锝酸鈉溶液進(jìn)行重配的，該溶液含有1.5GBq的放射性。對所述管形瓶進(jìn)行121℃，25分鐘的高壓滅菌循環(huán)。循環(huán)的總時間(加熱和冷卻)為大約120分鐘。結(jié)果，最早的RCP分析時間點(diǎn)的為重配后2小時20分鐘。分析時間作為重配后(與制備后相對)時間點(diǎn)報(bào)道在表5中表5在高壓釜加熱循環(huán)(121℃，25分鐘)之后配方P和Q的比較性RCP。

實(shí)施例7添加的輻射防護(hù)劑對99mTc-TRODAT-1的生物分布的影響的研究重配試劑盒配方P，以便提供實(shí)施例1和2所述的99mTc-TRODAT-1，它是測試的項(xiàng)目。所述測試項(xiàng)目的放射化學(xué)純度(RCP)在注射之前為92％，在注射后的時間點(diǎn)上降低到91％。在注射之前和分析之后的分析時間點(diǎn)上，具有低百分比的親脂性(大約2％)和親水性(大約6％)放射性標(biāo)記物質(zhì)的存在。A和非對映異構(gòu)體的比例(46∶54)在注射前和注射后的時間點(diǎn)上保持穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)是在正常雄性Wistar大鼠(180-220g)中測試項(xiàng)目的注射之后(p.i.)的6個預(yù)定時間點(diǎn)(2分鐘和20分鐘，1，2，4和7小時)進(jìn)行的。用氟烷(6％，存在于氧氣中)對動物進(jìn)行麻醉，注射0.1ml(500MBq/ml)測試物品，處死，解剖并且對樣品進(jìn)行放射性分析。用相當(dāng)于配方P的99mTc-TRODAT-1試劑盒制劑進(jìn)行對照研究，不過它缺少抗壞血酸鹽輻射防護(hù)劑。
在注射后的所有時間點(diǎn)上存在于血液中的注射劑量的百分比都比配方P低大約3倍。對于兩種配方來說，除了注射之后20分鐘的時間點(diǎn)之外，進(jìn)入腦中的放射性的攝取和保留都相似。在施用輻射防護(hù)劑配方之后，到注射之后20分鐘時，有大約0.45％的注射劑量(id)保留在腦內(nèi)，與之對應(yīng)的是，施用未穩(wěn)定化的配方為0.29％id。這種在腦攝取的差異反映在以每克腦部位表示時，在注射之后20分鐘時存在于腦部位中的升高的百分注射劑量。
所觀察到的主要差別是在施用所述輻射防護(hù)劑配方之后在為紋狀體中較高的選擇性保留，在注射之后2小時之后峰值達(dá)到2.31±0.31，并且在該峰值水平上保持到注射之后4小時(2.42±0.80)。比較而言，在施用未穩(wěn)定化的配方之后，在紋狀體中的選擇性保留量到注射之后2小時為1.74±0.96，而到注射之后4小時為0.76±0.30。
實(shí)施例8本發(fā)明試劑盒配方與商業(yè)化99mTc發(fā)生器的相容性研究。
用來自3個不同European99mTc發(fā)生器的2GBq的99mTc在2.5ml的洗脫液中重配本發(fā)明的配方P的試劑盒，按照實(shí)施例2的方法加熱和冷卻，然后在5℃或25℃下保存，并且在制備之后0，4和6小時分析。測試是在用來自99mTc-發(fā)生器的新鮮和老化洗脫液重配的試劑盒進(jìn)行的。結(jié)果如表7所示(參見下頁)實(shí)施例9用于本發(fā)明試劑盒配方的其他室溫重配條件。
用兩個步驟重配配方P的試劑盒。首先將1.5ml的99mTc高锝酸鈉溶液添加到試劑盒管形瓶中，所述溶液含有2GBq的放射性。然后馬上添加pH 7.4(1ml)的磷酸緩沖液，并且在添加高锝酸鹽溶液之后30分鐘測定RCP。結(jié)果如表6所示表6通過兩個步驟的室溫方法重配的試劑盒的RCP。

表7用來自3個European99mTc-發(fā)生器的新鮮的和老化洗脫液重配的配方P試劑盒的RCP。

權(quán)利要求
1.穩(wěn)定化的組合物，它包括(i)與綴合物螯合的锝或錸的放射性同位素的金屬配合物，其中，所述綴合物包括與托烷綴合的四配位基螯合劑，并且，所述四配位基螯合劑與所述锝或錸的放射性同位素形成了中性金屬配合物；(ii)至少一種輻射防護(hù)劑。
2.如權(quán)利要求1的穩(wěn)定化的組合物，其中，所述綴合物具有Ia[{托烷}-(A)n]m-[四配位基螯合劑](Ia)其中-(A)n-是接頭基團(tuán)，其中，每一個A獨(dú)立地是-CR2-，-CR＝CR-，-C≡C-，-CR2CO2-，-CO2CR2-，-NRCO-，-CONR-，-NR(C＝O)NR-，-NR(C＝S)NR-，-SO2NR-，-NRSO2-，-CR2OCR2-，-CR2SCR2-，-CR2NRCR2-，C4-8環(huán)雜亞烷基，C4-8環(huán)亞烷基，C5-12亞芳基，或C3-12雜亞芳基；R獨(dú)立地選自H，C1-4烷基，C2-4鏈烯基，C2-4炔基，C1-4烷氧基烷基或C1-4羥基烷基；n是0-10的整數(shù)；并且，m是1，2或3。
3.如權(quán)利要求1或2的穩(wěn)定化的組合物，其中，所述托烷是具有式III的苯基托烷 其中R1是H，C1-4烷基，C1-4鏈烯基或C1-4氟烷基；R2是CO2R5，CON(R5)2，COR5或C1-4烷基，其中每個R5獨(dú)立地是H或C1-3烷基；R3和R4獨(dú)立地是H，Cl，Br，F(xiàn)，I，CH3，CF3，NO2，OCH3或NH2。
4.如權(quán)利要求1-3的穩(wěn)定化的組合物，其中，所述锝的放射性同位素是99mTc。
5.如權(quán)利要求1-4的穩(wěn)定化的組合物，其中，所述四配位基螯合劑與托烷的2-或8-號位置綴合。
6.如權(quán)利要求5的穩(wěn)定化的組合物，其中，所述四配位基螯合劑與托烷的2-號位置綴合。
7.如權(quán)利要求1-6的穩(wěn)定化的組合物，其中，所述四配位基螯合劑具有選自下組的供體組(i)N2S2；(ii)N3S；(iii)二胺二肟，或(iv)酰胺三胺。
8.如權(quán)利要求1-7的穩(wěn)定化的組合物，其中，所述四配位基螯合劑具有N2S2二胺二硫醇供體組。
9.如權(quán)利要求1-8的穩(wěn)定化的組合物，其中，所述輻射防護(hù)劑包括抗壞血酸，對氨基苯甲酸或龍膽酸，或其與生物相容性陽離子形成的鹽。
10.如權(quán)利要求9的穩(wěn)定化的組合物，其中，所述輻射防護(hù)劑包括抗壞血酸或其與生物相容性陽離子形成的鹽。
11.如權(quán)利要求10的穩(wěn)定化的組合物，其中，所述輻射防護(hù)劑包括抗壞血酸或抗壞血酸鈉。
12.如權(quán)利要求1-11的穩(wěn)定化的組合物，其中，所述金屬配合物包括放射性锝同位素99mTc；所述四配位基螯合劑具有N2S2二胺二硫醇供體組，并且與具有權(quán)利要求3的式III的苯基托烷的2-號位置綴合；并且所述輻射防護(hù)劑包括抗壞血酸或其與生物相容性陽離子形成的鹽。
13.如權(quán)利要求12的穩(wěn)定化的組合物，其中，所述金屬配合物具有下式
14.用于制備如權(quán)利要求1-13的穩(wěn)定化的組合物的前體組合物，所述前體組合物包括(i)如權(quán)利要求2所述的式1a的綴合物；(ii)如權(quán)利要求1和權(quán)利要求9-11的輻射防護(hù)劑。
15.如權(quán)利要求14的前體組合物，其中，所述具有式Ia的綴合物的托烷是具有權(quán)利要求3所述的式III的苯基托烷。
16.如權(quán)利要求14或15的前體組合物，其中，所述螯合劑綴合物具有式IV 其中，P1和P2獨(dú)立地是H或硫醇保護(hù)基。
17.如權(quán)利要求16的前體組合物，其中，P1和P2都是H。
18.一種放射性藥物，它包括權(quán)利要求1-13的穩(wěn)定化的組合物和適合哺乳動物施用的形式的生物相容性載體。
19.如權(quán)利要求18的前體組合物，其中，所述放射性藥物是在注射器中提供的。
20.如權(quán)利要求18的前體組合物，其中，所述放射性藥物是在裝有封閉物的管形瓶中提供的，其中，所述封閉物適合在用針頭穿刺時保持無菌的完整性。
21.一種用于制備權(quán)利要求18-20的放射性藥物的試劑盒，它包括(i)如權(quán)利要求2的具有式(Ia)的綴合物，或所述綴合物與生物相容性抗衡離子形成的鹽；(ii)如權(quán)利要求1所述的輻射防護(hù)劑；(iii)生物相容性還原劑。
22.如權(quán)利要求21的試劑盒，其中，所述輻射防護(hù)劑如權(quán)利要求9-11所定義。
23.如權(quán)利要求21或22的試劑盒，其中，所述生物相容性還原劑包括亞錫。
24.制備權(quán)利要求18-20的放射性藥物的方法，包括通過下列任意方法在適合哺乳動物施用的形式的生物相容性載體中形成權(quán)利要求1-8的金屬配合物(i)使锝或錸的放射性同位素與權(quán)利要求14-17的前體組合物在適合哺乳動物施用的形式的生物相容性載體中反應(yīng)；或(ii)在適合哺乳動物施用的形式的生物相容性載體中形成權(quán)利要求1-8的金屬配合物，然后添加有效量的至少一種輻射防護(hù)劑。
25.如權(quán)利要求24的方法，其中，所述金屬配合物包括如權(quán)利要求2的式1a的綴合物。
26.如權(quán)利要求24或25的方法，其中，所述輻射防護(hù)劑是如權(quán)利要求9-11所定義的。
27.權(quán)利要求18-20的放射性藥物在哺乳動物體的診斷性顯像的方法中的用途。
28.對哺乳動物體進(jìn)行診斷性顯像的方法，它包括對事先業(yè)已施用了權(quán)利要求18-20的放射性藥物的哺乳動物進(jìn)行顯像。
全文摘要
本發(fā)明涉及穩(wěn)定化的锝和錸金屬配合物組合物，包括輻射防護(hù)劑和托烷－四配位基螯合劑綴合物的放射性金屬配合物，其中，所述放射性金屬配合物是中性的。還披露了包括穩(wěn)定化的金屬配合物組合物的放射性藥物，以及用于制備所述放射性藥物的試劑盒。
文檔編號A61K49/00GK1767859SQ200480009164
公開日2006年5月3日 申請日期2004年2月9日 優(yōu)先權(quán)日2003年2月7日
發(fā)明者D·麥吉爾, I·亨里克森 申請人:通用電氣健康護(hù)理有限公司