專利名稱：含有β－1,4－甘露二糖的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有β-1，4-甘露二糖(β-1，4-mannobiose)的組合物及其制造方法、含有β-1，4-甘露二糖組合物的飼料用添加劑、以及配合有含有β-1，4-甘露二糖的組合物的飼料，特別是可以抑制沙門氏菌在家畜或家禽的腸內(nèi)附著(定著)的飼料。
背景技術(shù)：
既往已知，在棕櫚仁粉、椰子粉、瓜爾豆(guar)粉等中，大量地存在著以甘露糖為構(gòu)成糖的甘露聚糖，在將酶作用于這些天然原料時(shí)，可以生成甘露糖、甘露寡糖和甘露多糖類物質(zhì)，很多這樣的方法被開(kāi)發(fā)出來(lái)。另外，也知道在飼料中添加這些甘露糖類物質(zhì)，可以抑制有害的沙門氏菌在腸內(nèi)的附著，有使其排出體外的排菌效果(抑制沙門氏菌附著的效果)，很多利用這一效果的技術(shù)也被提出來(lái)。(Poultry Science，68，p.1357，1989)。
例如有報(bào)告指出，用酶分解瓜爾豆粉、椰子粉等含有甘露聚糖的材料，得到配合有以甘露二糖、甘露三糖為主要成分并混有單糖類物質(zhì)的甘露寡糖類物質(zhì)而成的飼料，該飼料可以提高雞蛋的品質(zhì)；同時(shí)，報(bào)道認(rèn)為，甘露寡糖類物質(zhì)很可能對(duì)于防止沙門氏菌在家畜腸內(nèi)的附著是有效的(特開(kāi)平7-236429號(hào)公報(bào))。另外，有報(bào)告認(rèn)為，用甘露糖、甲基-α-甘露糖苷、甘露寡糖、瓜爾豆膠、刺槐豆膠或是由酵母得到的甘露聚糖經(jīng)酶解和/或經(jīng)酸水解得到的甘露糖類物質(zhì)而配制的飼料，對(duì)于預(yù)防沙門氏菌等有害菌的感染是有效的(特開(kāi)平8-38064號(hào)公報(bào))。此外，還有報(bào)告認(rèn)為，由以甘露糖的重復(fù)單元在40-100的多糖為中心(30～80％)并混合有寡糖(5～30％)的甘露糖系的多糖體所配制的家畜用飼料，對(duì)于防止沙門氏菌在家畜腸內(nèi)的附著是有效的(特開(kāi)平8-173055號(hào)公報(bào))。另外，還有報(bào)道分別是關(guān)于由棕櫚仁粉、瓜爾豆粉等含甘露聚糖豐富的原料在酶的作用下分解成的甘露寡糖所配制的飼料；將酶作用于椰子粉而得到的含有甘露糖的飼料；利用棕櫚仁粉制造甘露糖和/或甘露寡糖的方法(國(guó)際公開(kāi)第95/17103號(hào)文本，國(guó)際公開(kāi)第99/08544號(hào)文本，特開(kāi)2001-231591號(hào)公報(bào))。
雖然有以上的種種報(bào)告出來(lái)，現(xiàn)實(shí)是它們對(duì)防止沙門氏菌在腸內(nèi)附著的效果并不理想，需要進(jìn)一步的改善。比如，雖然甘露糖具有抑制沙門氏菌附著的作用，但其自身為單純的糖類，即使作為飼料提供給家畜，大部分也被腸內(nèi)的菌群容易地利用了；另外也可考慮是被家畜自身消化、吸收、排泄掉了。另外，由本發(fā)明者的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，當(dāng)向家畜使用為強(qiáng)化免疫而用的生菌劑的時(shí)候，會(huì)進(jìn)一步增強(qiáng)甘露糖的分解活性，為了排除沙門氏菌而給予的甘露糖大部分會(huì)消失。因此，實(shí)際上為了充分地獲得抑制沙門氏菌附著的效果，必須要給予非常大量的甘露糖。另外，通過(guò)做酵母的凝集試驗(yàn)，得知比甘露二糖分子量大的甘露寡糖及甘露糖系的多糖體對(duì)沙門氏菌附著的抑制效果小。本發(fā)明是在縝密思考眾多現(xiàn)實(shí)狀況后做出的，本發(fā)明提供能有效地抑制動(dòng)物體內(nèi)沙門氏菌的附著并將其排出體外的、含有β-1，4-甘露二糖的組合物及其制造方法、含有含β-1，4-甘露二糖的組合物的飼料用添加劑，配合有含β-1，4-甘露二糖的組合物的飼料。
經(jīng)過(guò)努力的研究，本發(fā)明者得出以下的結(jié)果，β-1，4-甘露二糖具有沙門氏菌的識(shí)別活性，其識(shí)別能力雖然比甘露糖略低，但難以被家畜腸內(nèi)的細(xì)菌利用，因而對(duì)于抑制沙門氏菌的附著，有比甘露糖更有效的作用。因此，本發(fā)明確立了高效地制造含有β-1，4-甘露二糖的組合物的方法，發(fā)現(xiàn)所得到的含有β-1，4-甘露二糖的組合物里有高含量的β-1，4-甘露二糖，從而完成了本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容
也就是說(shuō)，本發(fā)明提供了制造含有β-1，4-甘露二糖的組合物的方法，其特征為，將甘露聚糖分解酶作用于含有甘露聚糖的天然物，使之生成相對(duì)于分解反應(yīng)前的甘露聚糖而言至少是10重量％以上的β-1，4-甘露二糖(權(quán)利要求1)；制造含有β-1，4-甘露二糖的組合物的方法，其特征為，將甘露聚糖分解酶作用于由含甘露聚糖的天然物提取的甘露聚糖，使之生成相對(duì)于分解反應(yīng)前的甘露聚糖而言至少是10重量％以上的β-1，4-甘露二糖(權(quán)利要求2)；如權(quán)利要求1或2所述的制造含有β-1，4-甘露二糖的組合物的方法，其特征為，相對(duì)于100重量份的甘露聚糖，添加50-100重量份的水，用甘露聚糖分解酶進(jìn)行作用(權(quán)利要求3)；如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的制造含有β-1，4-甘露二糖的組合物的方法，其特征為，甘露聚糖酶作用時(shí)的溫度為40℃～55℃(權(quán)利要求4)；如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的制造含有β-1，4-甘露二糖的組合物的方法，其特征為，生成相對(duì)于分解反應(yīng)前的甘露聚糖而言為20-80重量％的β-1，4-甘露二糖(權(quán)利要求5)；如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的制造含有β-1，4-甘露二糖的組合物的方法，其特征為，含有甘露聚糖的天然物為棕櫚仁粉和/或椰子粉(權(quán)利要求6)。
另外，本發(fā)明提供了，含有用上述權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的制造方法得到的含有β-1，4-甘露二糖的組合物的飼料用添加劑(權(quán)利要求7)；飼料，其特征在于，配合有用上述權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的制造方法得到的含有β-1，4-甘露二糖的組合物，可以抑制沙門氏菌在家畜或家禽腸內(nèi)的附著(權(quán)利要求8)；如權(quán)利要求8所述的飼料，其特征為，含有0.001-1重量％的β-1，4-甘露二糖(權(quán)利要求9)；含有β-1，4-甘露二糖的組合物，其特征為，通過(guò)將甘露聚糖分解酶作用于含有甘露聚糖的天然物而得到，用干重?fù)Q算，至少含有3重量％以上的β-1，4-甘露二糖(權(quán)利要求10)；含有β-1，4-甘露二糖的組合物，其特征為，通過(guò)將甘露聚糖酶作用于由含有甘露聚糖的天然物提取的甘露聚糖而得到，用干重?fù)Q算，至少含有10重量％以上的β-1，4-甘露二糖(權(quán)利要求11)；如權(quán)利要求10或11所述的含有β-1，4-甘露二糖的組合物，其特征為，含有甘露聚糖的天然物為棕櫚仁粉和/或瓜爾豆粉(權(quán)利要求12)；飼料用添加劑，其特征為，含有如權(quán)利要求10-12中任一項(xiàng)所述的含有β-1，4-甘露二糖的組合物(權(quán)利要求13)；飼料，其特征為，配合有權(quán)利要求10-12中任一項(xiàng)所述的含有β-1，4-甘露二糖的組合物，可以抑制沙門氏菌在家畜或家禽腸內(nèi)的附著(權(quán)利要求14)；如權(quán)利要求14所述的飼料，其特征為，含有0.001-1重量％的β-1，4-甘露二糖(權(quán)利要求15)。


圖1是表示對(duì)施用了本發(fā)明的飼料、比較例1的飼料、市售的飼料的產(chǎn)蛋雞新生雄雛接種沙門氏菌后，隨著天數(shù)的推移，其盲腸內(nèi)沙門氏菌量的統(tǒng)計(jì)圖表。
圖2是表示對(duì)施用了本發(fā)明的飼料、比較例2的飼料、市售的飼料的焙烤用雞新生雛接種沙門氏菌后，隨著天數(shù)的推移，其盲腸內(nèi)沙門氏菌量的統(tǒng)計(jì)圖表。
圖3是表示對(duì)施用了本發(fā)明的飼料、比較例2的飼料、市售的飼料的7周齡產(chǎn)蛋雞中雛接種沙門氏菌后，隨著天數(shù)的推移，其盲腸內(nèi)沙門氏菌量的統(tǒng)計(jì)圖表。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的含有β-1，4-甘露二糖的組合物的制造方法，只要是將甘露聚糖分解酶作用于含有甘露聚糖的天然物，通過(guò)含有甘露聚糖的天然物中的甘露聚糖的水解等，生成相對(duì)于分解前的甘露聚糖而言至少為10重量％以上(10-100重量％)的β-1，4-甘露二糖的制造方法或者只要是將甘露聚糖分解酶作用于由含有甘露聚糖的天然物提取的甘露聚糖，生成相對(duì)于分解前的甘露聚糖而言至少為10重量％以上(10-100重量％)的β-1，4-甘露二糖的制造方法即可，沒(méi)有特別的限制，但相對(duì)于分解前的甘露聚糖而言，生成20-80重量％的β-1，4-甘露二糖為優(yōu)選，生成30-80重量％的β-1，4-甘露二糖為更優(yōu)選。
本發(fā)明的含有β-1，4-甘露二糖的組合物，只要是通過(guò)將甘露聚糖分解酶作用于含有甘露聚糖的天然物而得到的、用干重?fù)Q算至少含有3重量％以上的β-1，4-甘露二糖的組合物或者通過(guò)將甘露聚糖分解酶作用于由含有甘露聚糖的天然物提取的甘露聚糖而得到的、用干重?fù)Q算至少含有10重量％以上的β-1，4-甘露二糖的組合物即可，沒(méi)有特別的限制，所述的含有β-1，4-甘露二糖的組合物，例如可以根據(jù)上述含有β-1，4-甘露二糖的組合物的制造方法制造。
本發(fā)明的飼料用添加劑，只要是含有用上述本發(fā)明的含有β-1，4-甘露二糖的組合物的制造方法制成的含有β-1，4-甘露二糖的組合物或者含有上述本發(fā)明的含有β-1，4-甘露二糖的組合物的飼料用添加劑即可，沒(méi)有特別的限制，所述的飼料用添加劑，可以例舉為由這些含有β-1，4-甘露二糖的組合物構(gòu)成的物質(zhì)，也可例舉為將這些含有β-1，4-甘露二糖的組合物與保存劑等其他添加劑成分配合使用的物質(zhì)。
另外，上述含有β-1，4-甘露二糖的組合物或飼料用添加劑的使用方式，可以是酶處理物本身或它的干燥物、也可以是在酶處理后用水等提取出甘露二糖而得的抽取物或它的干燥物等，沒(méi)有特別的限制。
上述含有甘露聚糖的天然物，只要含有以β-1，4結(jié)合的甘露糖即可，沒(méi)有特別的限定，可舉例如，從椰子粉、棕櫚仁粉、瓜爾豆粉等高等植物得來(lái)的甘露聚糖。從容易獲得且甘露聚糖豐富等角度講，椰子粉、棕櫚仁粉是優(yōu)選的。另外，從含有甘露聚糖的天然物中提取不溶于水的成膠狀的甘露聚糖的方法，可示例為用堿性溶液來(lái)提取的方法，比如用5％的冷氫氧化鈉溶液或10％的氫氧化鈉溶液來(lái)提取。
所用的甘露聚糖分解酶，只要是甘露聚糖酶、甘露糖苷酶、半纖維素酶等具有將甘露聚糖分解生成β-1，4-甘露二糖活性的酶或是具有將由甘露聚糖生成的甘露糖合成β-1，4-甘露二糖活性的酶即可，并沒(méi)有特別的限定，但推薦使用來(lái)自Aspergillus niger的酶或是市售的酶，如半纖維素酶GM”アマノ”(天野制藥株式會(huì)社制)、スミチ一ムACH及スミチ一ムACH-L(新日本化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社制)、セルロシンGM5(阪急バイオインダストリ一株式會(huì)社制)等，除了這些之外，可以使用作為木聚糖酶、纖維素酶市售的、具有相應(yīng)的水解活性的酶，如纖維素酶Y·NC(ヤクルト藥品工業(yè)株式會(huì)社制)等也可使用。在這些酶當(dāng)中，甘露糖苷酶(exo型)活性低及甘露聚糖酶(endo型)活性高的酶為宜，具體地說(shuō)，半纖維素酶GM”アマノ”(天野制藥株式會(huì)社制)、スミチ一ムACH及スミチ一ムACH-L(新日本化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社制)，可以在抑制甘露糖生成的同時(shí)生成大量的甘露二糖，因此很適宜。總之，β-1，4-甘露二糖既可由分解β-1，4-甘露聚糖(β-1，4-Mannan)的方法獲得，也可以用由甘露糖合成的方法獲得，但從原料的資源性及反應(yīng)效率的角度看，分解β-1，4-甘露聚糖的方法更簡(jiǎn)便易行。
本發(fā)明的含有β-1，4-甘露二糖的組合物的制造方法中，將甘露聚糖分解酶作用于含有甘露聚糖的天然物或是由含有甘露聚糖的天然物中提取的甘露聚糖，所用的甘露聚糖分解酶，使其溶解或者分散在水中做成酶溶液的方式使用為佳。為了進(jìn)行高效的反應(yīng)，在含有甘露聚糖的天然物或甘露聚糖、甘露聚糖分解酶及水所形成的反應(yīng)系中，調(diào)整水分的比率是重要的。用于水分調(diào)整的水的添加量，每100重量份的甘露聚糖兌50-10000重量份的水為優(yōu)選，100-1500重量份為更優(yōu)選。當(dāng)水的添加量在上述范圍時(shí)，反應(yīng)系存在充分的水分，甘露聚糖類的纖維質(zhì)可以充分地浸潤(rùn)膨脹，可以容易地與酶溶液接觸，高效地生成β-1，4-甘露二糖。另外，水分在上述范圍內(nèi)時(shí)，可以抑制因水分過(guò)多而導(dǎo)致的與酶濃度稀釋相伴的反應(yīng)效率的低下，同時(shí)，可以抑制在干燥過(guò)程中其消費(fèi)的增加。另外，對(duì)酶的量和反應(yīng)時(shí)間來(lái)說(shuō)，只要生成甘露二糖的量相對(duì)于分解前的甘露聚糖而言至少達(dá)到10重量％即可，并沒(méi)有特別的限定。但在使用甘露聚糖酶(endo型)活性高的酶的情況下，通常具有甘露糖苷酶(exo型)活性的甘露二糖會(huì)被分解，因此反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選不要超過(guò)必要的時(shí)間。另外，反應(yīng)溫度在40℃-65℃比較好，但過(guò)高的溫度會(huì)使甘露糖苷酶的活性增高，增加了甘露糖的生成量，因此，若要抑制甘露糖的生成并且期望生成大量的甘露二糖的時(shí)候，在40℃-55℃、更優(yōu)選在45℃-53℃反應(yīng)為好。
例如，將棕櫚仁粉(甘露聚糖的含量大約為36重量％)作為原料，使它反應(yīng)3-36個(gè)小時(shí)，生成β-1，4-甘露二糖的量，雖然與使用的酶的種類和量及反應(yīng)時(shí)間相關(guān)，但若把原料設(shè)為100重量份，總可得到6-17重量份左右的產(chǎn)物。由本發(fā)明的制備含有β-1，4-甘露二糖的組合物的方法得到的含有β-1，4-甘露二糖的組合物中，用干重?fù)Q算含有至少3重量％以上、優(yōu)選10重量％以上的β-1，4-甘露二糖的祖合物優(yōu)選可以用于飼料用添加劑或是飼料。
本發(fā)明的含有β-1，4-甘露二糖的組合物，可以作為飼料用添加劑，用來(lái)抑制家畜或家禽腸內(nèi)的沙門氏菌的附著，在為增強(qiáng)家畜的免疫而與成雞盲腸內(nèi)容菌等的生菌劑一起使用時(shí)，它很難被菌利用，這是它特別有意義的地方。例如，可將含有β-1，4-甘露二糖的組合物直接用作飼料，也可將其添加于飼料中使用。該含有β-1，4-甘露二糖的組合物，除了甘露二糖外還含有甘露糖、甘露寡糖類物質(zhì)，但沒(méi)有必要特別地只將甘露二糖提取、精制出來(lái)，含有這些物質(zhì)反而更有利。在將含有β-1，4-甘露二糖的組合物添加到飼料中的時(shí)候，優(yōu)選通過(guò)添加使飼料中含有0.001-1重量％的β-1，4-甘露二糖，更優(yōu)選含有0.005-0.1重量％。甘露二糖的含量在上述范圍內(nèi)時(shí)，本發(fā)明的效果會(huì)更奏效。另外，例如將含有β-1，4-甘露二糖的組合物作為飼料添加的用途來(lái)原樣流通、使用的時(shí)候，為了防止霉、菌類等的產(chǎn)生，優(yōu)選用流動(dòng)層干燥、真空干燥等方法進(jìn)行干燥，使水分保持在10重量％以下。
本發(fā)明的可以抑制沙門氏菌附著的飼料，只要是配合有由上述本發(fā)明的制備含有β-1，4-甘露二糖的組合物的方法得到的含有β-1，4-甘露二糖的組合物或者上述含有β-1，4-甘露二糖的組合物的飼料即可，并沒(méi)有特別的限定。本發(fā)明所用的飼料以固體狀或液體狀施用于家畜或家禽后，可以有效地抑制動(dòng)物體內(nèi)沙門氏菌的附著，將沙門氏菌有效地排出體外。β-1，4-甘露二糖，雖然比甘露糖對(duì)沙門氏菌的識(shí)別力略低，但由于它難以被家畜腸內(nèi)的細(xì)菌類利用，在對(duì)沙門氏菌的附著抑制作用方面，比甘露糖更有效，可以有效地將沙門氏菌排出體外，使飼料中甘露糖的含量減少成為可能，使經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)可以大幅度地減輕。
以下，是本發(fā)明的實(shí)施例，及本發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明，但本發(fā)明并不僅限于以下實(shí)施例的范圍。實(shí)施例中的“份”，“％”，只要不做特別說(shuō)明，分別表示為“重量份”，“重量％”。
實(shí)施例1(由棕櫚仁粉制造含有β-1，4-甘露二糖的組合物)將甘露聚糖含量為36％、水分為8.2％的棕櫚仁粉(不二制油株式會(huì)社)100份，用溶解有0.25份半纖維素酶GM“アマノ”(天野制藥株式會(huì)社)的酶溶液150份，在60℃下作用12小時(shí)后，用流動(dòng)層干燥裝置(大河原制造所制)將水分干燥到9.8％，得到102份的干燥粉體。這種干燥粉體中甘露糖的含量及β-1，4-甘露二糖的含量用離子交換色譜分析法測(cè)定的結(jié)果為，生成1.44份的甘露糖、10.58份的β-1，4-甘露二糖(相對(duì)于甘露聚糖為29.4％；干重?fù)Q算為11.5％)。
實(shí)施例2(由椰子粉制造含有β-1，4-甘露二糖的組合物)將椰子粉(甘露聚糖含量30％、水分4.2％)100份，用溶解有0.25份半纖維素酶GM“アマノ”(天野制藥株式會(huì)社)的酶溶液150份，在60℃下作用12小時(shí)后，用流動(dòng)層干燥裝置將水分干燥到9.3％，得到106份的干燥粉體。這種干燥粉體中甘露糖的含量及β-1，4-甘露二糖的含量的測(cè)定結(jié)果為，生成1.36份的甘露糖、12.35份的β-1，4-甘露二糖(相對(duì)于甘露聚糖為41.2％；干重?fù)Q算為12.9％)。
比較例1將棕櫚仁粉(甘露聚糖含量36％、水分8.2％)100份，用溶解有0.3份セルロシンGM5酶(エイチビイアイ株式會(huì)社)的酶溶液100份，在60℃下作用72小時(shí)后，用流動(dòng)層干燥裝置將水分干燥到7.8％，得到100份的干燥粉體。這種干燥粉體中甘露糖的含量及β-1，4-甘露二糖的含量的測(cè)定結(jié)果為，生成11.52份的甘露糖、2.57份的β-1，4-甘露二糖(相對(duì)于甘露聚糖為7.14％；干重?fù)Q算為2.79％)。
實(shí)施例3(沙門氏菌·酵母凝集抑制實(shí)驗(yàn))各種糖類的沙門氏菌的凝集抑制實(shí)驗(yàn)，按以下的方式進(jìn)行。將含腸炎沙門氏菌(由伊藤忠飼料株式會(huì)社分離的Salmonella enteritidis KTE-61株菌數(shù)1×108cfu/ml)的懸濁液0.1ml及蒸餾水0.1ml充分混合，在其中加入酵母キヤンデイダ·アルビカンス(由社團(tuán)法人動(dòng)物用生物學(xué)的制劑協(xié)會(huì)購(gòu)入的Candida albicans KI-102001)懸濁液0.1ml混合。進(jìn)行預(yù)備實(shí)驗(yàn)，即這個(gè)混合液中發(fā)生的凝集反應(yīng)用實(shí)體顯微鏡得到證實(shí)。
由實(shí)施例1得到的干燥粉體0.5g與5ml水混合成懸濁液后，以10000rpm離心分離5分鐘，將它的離心上清用高速液體色譜分析(日本分光社制)法，分取出約10mg的β-1，4-甘露二糖。然后，用上述預(yù)備實(shí)驗(yàn)同樣的方法，將上述分取出的β-1，4-甘露二糖及使用甘露糖藥品的糖水溶液(和光純藥社制；D-Mannose)，分別變化其濃度，得到阻止混合液凝集的最低濃度(凝集抑制最低濃度)。表1中，表示了阻止混合液凝集的實(shí)際的凝集抑制最低濃度，以及將甘露糖的凝集抑制最低濃度設(shè)為1時(shí)的相對(duì)濃度(濃度比)。由表1可表明，為阻止沙門氏菌引起的凝集，β-1，4-甘露二糖需要甘露糖的2倍多的量。
(表1)

實(shí)施例4(代謝實(shí)驗(yàn))在由實(shí)施例1、實(shí)施例2及比較例1得來(lái)的干燥粉體里，加入水形成10倍量的懸濁液。另外，準(zhǔn)備甘露糖藥品的1％的水溶液。在以上4種懸濁液或水溶液中，接種雞盲腸內(nèi)容構(gòu)成菌的培養(yǎng)物インテクリ一ン(伊藤忠飼料株式會(huì)社)，調(diào)查了在37℃溫度下甘露糖、β-1，4-甘露二糖的代謝。對(duì)培養(yǎng)開(kāi)始時(shí)及20小時(shí)培養(yǎng)后的懸濁液或溶液進(jìn)行取樣，以10000rpm離心分離10分鐘后，將它們的上清用離子交換色譜分析法，分別測(cè)出它們的含有量(mg/g)。其結(jié)果在表2中示出。如表2所表明的，比較例1的甘露糖減少了66％，甘露糖藥品也減少了69％，可知甘露糖非常容易被腸內(nèi)細(xì)菌代謝掉。與此相對(duì)，實(shí)施例1中的β-1，4-甘露二糖的減少量為16％，實(shí)施例2中的β-1，4-甘露二糖的減少量為17％，可知與甘露糖相比其代謝率明顯為低。
(表2)

由上述凝集實(shí)驗(yàn)及代謝實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可知，與甘露糖相比，β-1，4-甘露二糖對(duì)沙門氏菌的識(shí)別能力雖然略低，但因?yàn)殡y于被家畜腸內(nèi)的細(xì)菌所利用，對(duì)于抑制沙門氏菌的附著，比甘露糖更有效，可有效地將沙門氏菌排出體外。另外，由代謝實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可知，由于β-1，4-甘露二糖難以被利用，為了增強(qiáng)家畜的免疫，在并用成雞盲腸內(nèi)容菌等的生菌劑的時(shí)候，特別有用。
實(shí)施例5(動(dòng)物實(shí)驗(yàn))
將150只商業(yè)市售的產(chǎn)蛋雞新生雄雞雛分三份，其中，給50只喂商業(yè)市售的嫩雞用飼料(商品名アマタケS，無(wú)藥劑添加/伊藤忠飼料株式會(huì)社制)做對(duì)照組，在相同的配合飼料中添加實(shí)施例2中得到的干燥粉體0.1％，用此得到的飼料喂50只雞為一組，以及添加由比較例1中得到的干燥粉體0.1％，用此得到的飼料喂50只雞為一組，如此共設(shè)置三組，不斷給食，自由飲水地進(jìn)行喂養(yǎng)。在3日齡時(shí)，經(jīng)口接種沙門氏菌(Salmonella enteritidis KTE-61株)，在沙門氏菌接種后5日、10日、17日時(shí)，對(duì)各組盲腸內(nèi)容物中沙門氏菌數(shù)(對(duì)數(shù))進(jìn)行了檢測(cè)。其結(jié)果在表3中示出，其用圖表示的為第1圖。
(表3)

如表3及圖1所表明的，喂以添加由實(shí)施例2得來(lái)的干燥粉體的飼料的組，及喂以添加由比較例1得來(lái)的干燥粉體的飼料的組，兩者在實(shí)驗(yàn)的全程中，都比對(duì)照組的菌數(shù)要少，可知能有效地減少沙門氏菌，特別是可表明，喂以添加由實(shí)施例2得來(lái)的干燥粉體的飼料的組，比喂以添加由比較例1得來(lái)的干燥粉體的飼料的組，顯示更少的菌數(shù)，有更顯著的效果。
實(shí)施例6(制造由椰子粉得來(lái)的含有β-1，4-甘露二糖的組合物)用溶解有0.25份スミチ一ムACH(新日本化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社制)的酶溶液125份，將椰子粉100份在50℃下作用22小時(shí)后，用流動(dòng)層干燥裝置將水分干燥到7.1％，得到103份的干燥粉體。可生成1.17份的甘露糖，14.18份的甘露二糖(對(duì)于甘露聚糖為47.3％)。
比較例2將椰子粉100份，用溶解有0.3份セルロシンGM5酶(エイチビイアイ株式會(huì)社制)的酶溶液150份，在60℃下作用72小時(shí)后，用流動(dòng)層干燥裝置將水分干燥到6.4％，得到100份的干燥粉體。在這種干燥粉體中，生成13.72份的甘露糖，0.64份的甘露二糖(相對(duì)于甘露聚糖為2.13％)實(shí)施例7(動(dòng)物實(shí)驗(yàn)2，在焙烤用雛雞中的效果)將45只商業(yè)市售的焙烤用新生雞雛分三份，給15只施用商業(yè)市售的焙烤用雞用飼料(商品名アマタケS，無(wú)藥劑添加/伊藤忠飼料株式會(huì)社制)做對(duì)照組，在相同的配合飼料中添加實(shí)施例6中得到的干燥粉體0.1％，被施用以如此得到的飼料的15只雞為一組，以及添加由比較例2中得到的干燥粉體0.1％，被施用以如此得到的飼料喂的15只雞為一組，如此共設(shè)置三組，不斷給食，自由飲水地進(jìn)行一周預(yù)備喂養(yǎng)。在一周齡時(shí)，經(jīng)口接種沙門氏菌(Salmonella enteritidis HY-1株)2.27×107cfu/只，在沙門氏菌接種后1周、2周、3周后，分別將各組中的5只解剖，對(duì)各組盲腸內(nèi)容物中沙門氏菌數(shù)(對(duì)數(shù))進(jìn)行了檢測(cè)。
其結(jié)果在表4中示出，其用圖表示的為第2圖。
(表4)

被施用以添加有由實(shí)施例6得來(lái)的干燥粉體的飼料的組，及被施用以添加有由比較例2得來(lái)的干燥粉體的飼料的組，兩者在SE接種后第3周時(shí)，都比對(duì)照組的菌數(shù)要少，可知能減少沙門氏菌，特別是可表明，與被施用以添加有由比較例2得來(lái)的干燥粉體的飼料的組相比，被施用以添加有由實(shí)施例6得來(lái)的干燥粉體的飼料的組顯示更少的菌數(shù)，有更顯著的效果。
實(shí)施例8(動(dòng)物實(shí)驗(yàn)3，在產(chǎn)蛋雞中雛雞中的效果)將30只7周齡的產(chǎn)蛋雞中雛雞分三份，給10只施用商業(yè)市售的焙烤用雞用配合飼料(商品名アマタケS，無(wú)藥劑添加/伊藤忠飼料株式會(huì)社制)做對(duì)照組，在相同的配合飼料中添加實(shí)施例6中得到的干燥粉體0.1％，被施用以如此得到的飼料的10只雞為一組，以及添加由比較例2中得到的干燥粉體0.1％，被施用以如此得到的飼料的10只雞為一組，如此共設(shè)置三組，不斷給食，自由飲水地進(jìn)行一周預(yù)備喂養(yǎng)。然后，經(jīng)口接種沙門氏菌(Salmonella enteritidis HY-1株)1.13×108cfu/只，在沙門氏菌接種后1周、2周、3周、4周后，采集盲腸便，對(duì)各組盲腸中沙門氏菌數(shù)(對(duì)數(shù))進(jìn)行了檢測(cè)。
其結(jié)果在表5中示出，其用圖表示的為第3圖。
(表5)

被施用以添加有由實(shí)施例6得來(lái)的干燥粉體的飼料的組，及被施用以添加有由比較例2得來(lái)的干燥粉體的飼料的組，兩者在SE接種后第1周第2周時(shí)，都比對(duì)照組的菌數(shù)要少，可知能減少沙門氏菌，特別是可表明，與被施用以添加有由比較例2得來(lái)的干燥粉體的飼料的組相比，被施用以添加有由實(shí)施例6得來(lái)的干燥粉體的飼料的組在實(shí)驗(yàn)全程顯示更少的菌數(shù)，有更顯著的效果。
產(chǎn)業(yè)上的應(yīng)用性通過(guò)本發(fā)明，可以提供能夠抑制動(dòng)物體內(nèi)沙門氏菌附著并將沙門氏菌有效地排出體外的含有β-1，4-甘露二糖的組合物及它的制造方法，還提供包含含有β-1，4-甘露二糖的組合物的飼料用添加劑、配有含有β-1，4-甘露二糖組合物的飼料。
權(quán)利要求
1.含有β-1，4-甘露二糖的組合物的制造方法，其特征為，將甘露聚糖分解酶作用于含有甘露聚糖的天然物，使之生成相對(duì)于分解前的甘露聚糖而言至少為10重量％以上的β-1，4-甘露二糖。
2.含有β-1，4-甘露二糖的組合物的制造方法，其特征為，將甘露聚糖分解酶作用于由含有甘露聚糖的天然物中提取出來(lái)的甘露聚糖，使之生成相對(duì)于分解前的甘露聚糖而言至少為10重量％以上的β-1，4-甘露二糖。
3.如權(quán)利要求1或2所述的含有β-1，4-甘露二糖的組合物的制造方法，其特征為，相對(duì)于100重量份的甘露聚糖，添加50～10000重量份的水，用甘露聚糖分解酶作用于它。
4.如權(quán)利要求1～3中任一項(xiàng)所述的含有β-1，4-甘露二糖的組合物的制造方法，其特征為，甘露聚糖分解酶的作用溫度為，40℃～55℃。
5.如權(quán)利要求1～4中任一項(xiàng)所述的含有β-1，4-甘露二糖的組合物的制造方法，其特征為，使之生成相對(duì)于分解前的甘露聚糖而言為20％～80重量％的β-1，4-甘露二糖。
6.如權(quán)利要求1～5中任一項(xiàng)所述的含有β-1，4-甘露二糖的組合物的制造方法，其特征為，含有甘露聚糖的天然物為棕櫚仁粉和/或椰子粉。
7.飼料用添加劑，其特征在于，含有由權(quán)利要求1～6中任一項(xiàng)所述的制造方法得來(lái)的含有β-1，4-甘露二糖的組合物。
8.飼料，其特征為，配合有由權(quán)利要求1～7中任一項(xiàng)所述的制造方法得來(lái)的含有β-1，4-甘露二糖的組合物，可以抑制家畜或家禽腸內(nèi)沙門氏菌的附著。
9.如權(quán)利要求8所述的飼料，其特征為，β-1，4-甘露二糖的含量為0.001～1重量％。
10.含有β-1，4-甘露二糖的組合物，其是由甘露聚糖分解酶作用于含有甘露聚糖的天然物得到的，其特征為，以干重?fù)Q算，至少含有3重量％以上的β-1，4-甘露二糖。
11.含有β-1，4-甘露二糖的組合物，其是由甘露聚糖分解酶作用于從含有甘露聚糖的天然物中提取的甘露聚糖得到的，其特征為，以干重?fù)Q算，至少含有10重量％以上的β-1，4-甘露二糖。
12.如權(quán)利要求10或11所述的含有β-1，4-甘露二糖的組合物，其特征為，含有甘露聚糖的天然物為棕櫚仁粉和/或椰子粉。
13.飼料用添加劑，其特征為，含有如權(quán)利要求10～12中任一項(xiàng)所述的含有β-1，4-甘露二糖的組合物。
14.飼料，其特征為，配合有權(quán)利要求10～12中任一項(xiàng)所述的含有β-1，4-甘露二糖的組合物，可以抑制家畜或家禽腸內(nèi)沙門氏菌的附著。
15.如權(quán)利要求14所述的飼料，其特征為，β-1，4-甘露二糖的含量為0.001～1重量％。
全文摘要
本發(fā)明提供了能夠抑制動(dòng)物體內(nèi)沙門氏菌的附著、將沙門氏菌高效地排出體外的含有β－1，4－甘露二糖的組合物以及它的制造方法，還提供了包含含有β－1，4－甘露二糖的組合物的飼料用添加劑、配有含有β－1，4－甘露二糖的組合物的飼料。即含有β－1，4－甘露二糖的組合物的制造方法，其特征為，將甘露聚糖分解酶作用于含有甘露聚糖的天然物，使之生成相對(duì)于分解前的甘露聚糖而言至少10重量％以上的β－1，4－甘露二糖；含有β－1，4－甘露二糖的組合物，其特征為，由甘露聚糖分解酶作用于含有甘露聚糖的天然物所得到，含有用干重?fù)Q算至少10重量％以上的β－1，4－甘露二糖；包含含有β－1，4－甘露二糖的組合物的飼料用添加劑；配有含有β－1，4－甘露二糖的組合物的飼料。
文檔編號(hào)A61P31/00GK1717494SQ20038010413
公開(kāi)日2006年1月4日 申請(qǐng)日期2003年11月26日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月26日
發(fā)明者森腰俊亨, 橫溝太 申請(qǐng)人:不二制油株式會(huì)社