專利名稱：具有抗癌活性的嘧啶并[4,5－d]嘧啶衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及如下通式的新嘧啶并化合物或其藥物上可接受的鹽 R1選自下列基團H；C1-10烷基；被高達3個基團取代的C1-10烷基，所述的基團選自芳基、環(huán)烷基、雜芳基、雜環(huán)、NR10R11、OR12、SR12、鹵素、COR13、CO2R13、CONR13R14、SO2NR13R14、SOR13、SO2R13、CN和NO2，其中芳基、環(huán)烷基、雜芳基和雜環(huán)基團可以各自獨立地被高達3個基團取代，所述的基團選自NR10R11、OR12、SR12、鹵素、COR13、CO2R13、CONR13R14、SO2NR13R14、SOR13、SO2R13、CN和NO2；芳基；被高達3個基團取代的芳基，所述的基團選自低級烷基、NR10R11、OR12、SR12、鹵素、COR13、CO2R13、CONR13R14、SO2NR13R14、SOR13、SO2R13、CN和NO2；雜芳基；
被高達3個基團取代的雜芳基，所述的基團選自低級烷基、NR10R11、OR12、SR12、鹵素、COR13、CO2R13、CONR13R14、SO2NR13R14、SOR13、SO2R13、CN和NO2；雜環(huán)；被高達3個基團取代的雜環(huán)，所述的基團選自低級烷基、NR10R11、OR12、SR12、鹵素、COR13、CO2R13、CONR13R14、SO2NR13R14、SOR13、SO2R13、CN和NO2；C3-10環(huán)烷基；被高達3個基團取代的C3-10環(huán)烷基，所述的基團選自低級烷基、NR10R11、OR12、SR12、鹵素、COR13、CO2R13、CONR13R14、SO2NR13R14、SOR13、SO2R13、CN和NO2；C2-10鏈烯基；被高達3個基團取代的C2-10鏈烯基，所述的基團選自NR10R11、OR12、SR12、鹵素、COR13、CO2R13、CONR13R14、SO2NR13R14、SOR13、SO2R13、CN和NO2；和被高達3個基團取代的C2-10炔基，所述的基團選自NR10R11、OR12、SR12、鹵素、COR13、CO2R13、CONR13R14、SO2NR13R14、SOR13、SO2R13、CN和NO2；R2、R3和R4獨立地選自下列基團組成的組H；鹵素；COR13；CO2R13；CONR13R14；SO2NR13R14；SOR13；SO2R13；CN；和NO2；R5、R6、R7和R8獨立地選自下列基團的組
H；低級烷基；被羥基或烷氧基取代的低級烷基；NR15R16；OH；OR17；鹵素；COR17；CO2R17；CONR17R18；SO2NR17R18；SOR17；SO2R17；和CN；R9選自下列基團的組H； 和COR17；R10和R11獨立地選自下列基團的組H；COR13；CO2R13；CONR13R14；SO2R13；SO2NR13R14；
低級烷基；被羥基、烷氧基或NR15R16取代的低級烷基；環(huán)烷基；被羥基、烷氧基、低級烷基或NR15R16取代的環(huán)烷基；雜環(huán)；和被羥基、烷氧基、低級烷基或NR15R16取代的雜環(huán)；或備選地，NR10R11可以形成具有3-7個原子的環(huán)，所述的環(huán)任選包括一個或多個另外的雜原子且任選被一個或多個低級烷基、OR12、COR13、CO2R13、CONR13R14、SOR13、SO2R13和SO2NR13R14組成的組取代；R12選自下列基團的組H；低級烷基；COR13；CONR13R14；被羥基、烷氧基或NR15R16取代的C2-6烷基；環(huán)烷基；被羥基、烷氧基、低級烷基或NR15R16取代的環(huán)烷基；雜環(huán)；和被羥基、烷氧基、低級烷基或NR15R16取代的雜環(huán)；R13和R14獨立地選自下列基團的組H；低級烷基；被羥基、烷氧基或NR15R16取代的C2-6烷基；環(huán)烷基；被羥基、烷氧基、低級烷基或NR15R16取代的環(huán)烷基；雜環(huán)；和被羥基、烷氧基、低級烷基或NR15R16取代的雜環(huán)；或備選地，NR13R14可以形成具有3-7個原子的環(huán)，所述的環(huán)任選包括一個或多個另外的雜原子且任選被一個或多個低級烷基、OR17、COR17、CO2R17、CONR17R18、SO2R17和SO2NR17R18組成的組取代；
R15選自下列基團的組H；低級烷基；COR17；和CO2R17；且R16、R17和R18獨立地選自下列基團的組H；和低級烷基；或備選地，NR15R16和NR17R18可以各自獨立地形成含有3-7個原子的環(huán)，所述的環(huán)任選包括一個或多個另外的雜原子；R19和R20獨立地選自下列基團的組H；和低級烷基；且R21選自低級烷基；和被羥基、烷氧基或NR15R16取代的C2-6烷基。
這些化合物抑制KDR(含有激酶插入片段結(jié)構(gòu)域的受體)和FGFR(成纖維細胞生長因子受體)激酶且對LCK(T-細胞酪氨酸激酶p56lck)具有選擇性。這些化合物及其藥物上可接受的鹽具有抗增殖活性且用于治療或控制癌癥、特別是實體瘤。此外，這些化合物具有有利的生物利用度分布(profile)。本發(fā)明還涉及含有這類化合物的藥物組合物并涉及治療或控制癌癥、最具體的是治療或控制乳腺、肺、結(jié)腸和前列腺腫瘤的方法。
蛋白激酶是調(diào)節(jié)各種細胞功能的蛋白質(zhì)類型(酶)。該過程通過使蛋白質(zhì)底物上的特定氨基酸磷酸化來進行，使得底物蛋白發(fā)生構(gòu)象改變。這種構(gòu)象改變調(diào)節(jié)底物的活性或其與其它結(jié)合配偶體發(fā)生相互作用的能力。蛋白激酶的酶活性指的是激酶將磷酸基添加到底物上的速率。例如，可以通過測定作為時間函數(shù)的轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物的底物量來確定它。底物磷酸化發(fā)生在蛋白激酶的活性位點上。
酪氨酸激酶是催化蛋白底物上腺苷三磷酸(ATP)的末端磷酸轉(zhuǎn)化成酪氨酸殘基的蛋白激酶亞族。這些激酶在導(dǎo)致細胞增殖、分化和遷移的生長因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)傳播方面起重要作用。
例如，已經(jīng)將成纖維細胞生長因子(FGF)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)確認為腫瘤促進的血管發(fā)生的重要介體。VEGF通過經(jīng)兩種高親和性受體進行信號傳導(dǎo)來活化內(nèi)皮細胞，所述的兩種受體之一為含有激酶插入片段結(jié)構(gòu)域的受體(KDR)。參見Hennequin L.F.等，《藥物化學(xué)雜志》(J.Med.Chem.)2002，45(6)，pp 1300。FGF通過經(jīng)FGF受體(FGFR)進行信號傳導(dǎo)來活化內(nèi)皮細胞。實體瘤依賴新血管的形成(血管發(fā)生)來生長。因此，干擾生長信號轉(zhuǎn)導(dǎo)且由此使血管發(fā)生減慢或防止血管發(fā)生的受體FGFR和KDR抑制劑是預(yù)防和治療實體瘤的有用的活性劑。參見Klohs W.E.等，《最新生物技術(shù)觀點》(Current Opinion in Biotechnology)1999，10，p.544。
存在幾種蛋白激酶催化活性的小分子抑制劑的實例。特別地，小分子抑制劑一般通過與蛋白激酶ATP結(jié)合位點(或″活性位點″)發(fā)生緊密相互作用而阻斷底物磷酸化。參見WO 98/24432和Hennequin L.F.等《藥物化學(xué)雜志》(J.Med.Chem.)2002，45(6)，pp 1300。這些化合物中的幾種抑制多個靶。例如，WO99/61444(Warner-Lambert)公開了如下通式的雙環(huán)嘧啶類和雙環(huán)3，4-二氫嘧啶類 據(jù)稱它們抑制依賴細胞周期蛋白的激酶Cdk1、Cdk2和Cdk4以及生長因子受體酪氨酸激酶PDGFR和FGFR。據(jù)稱某些化合物還抑制Cdk6。
美國專利US 6,150,373(Hoffmann-La Roche Inc.)公開了如下通式的雙環(huán)氮雜環(huán)
認為它們抑制T-細胞酪氨酸激酶p56lck。
WO 01/29041 A1和WO 01/29042(F.Hoffmann-La Roche AG)中公開了如下通式的烷氨基取代的雙環(huán)氮雜環(huán) 和 認為它們抑制p38介導(dǎo)的細胞功能且由此為細胞增殖抑制劑。
WO 01/64679 A1(SmithKline Beecham)中公開了如下通式的1，5-二取代的-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮化合物 和 認為它們用于治療CSBP/P38激酶介導(dǎo)的疾病。
對易于合成的有效抑制蛋白激酶、特別是FGFR和KDR激酶的催化活性以治療一種或多種類型的實體瘤的小分子化合物存在持續(xù)需求。特別需要提供對FGFR和KDR具有選擇性的小分子抑制劑。存在這種需求是因為可能因抑制多個靶而可能伴隨毒性和其它不需要的并發(fā)癥。優(yōu)選這類小分子抑制劑還具有有利的生物利用度分布。由此本發(fā)明的目的是提供這類化合物和含有這些化合物的藥物組合物。
本發(fā)明涉及能夠選擇性抑制KDR和FGFR活性的新嘧啶并化合物。這些化合物用于治療或控制癌癥、特別是治療或控制實體瘤。本發(fā)明特別涉及如下通式的化合物或其藥物上可接受的鹽 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9如下文所定義。
本發(fā)明還涉及包括治療有效量的一種或多種通式I化合物和藥物上可接受的載體或賦形劑的藥物組合物。
本發(fā)明進一步涉及治療或控制實體瘤、特別是治療或控制乳腺、肺、結(jié)腸和前列腺腫瘤、最具體的是乳腺或結(jié)腸腫瘤的方法，通過對需要這類治療的人患者給予有效量的通式I化合物和/或其藥物上可接受的鹽來進行。
本發(fā)明進一步涉及用于制備通式I化合物的新中間體化合物。
本文所用的下列術(shù)語具有如下定義。
″鏈烯基″指的是帶有至少一組碳-碳雙鍵的直鏈或支鏈脂族烴，例如乙烯基、2-丁烯基和3-甲基-2-丁烯基。
″炔基″表示帶有至少一組碳-碳三鍵的直鏈或支鏈脂族烴，例如乙炔基和2-丁炔基。
″烷基″表示帶有1-10個、優(yōu)選1-6個且更優(yōu)選1-4個碳原子的直鏈或支鏈飽和脂族烴。帶有1-6個碳原子的烷基也稱作″低級烷基″。典型的低級烷基包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔丁基、2-丁基、戊基和己基。本文所用的范例名稱C1-4烷基指的是帶有1-4個碳原子的烷基。
″烷氧基″指的是通過氧與剩余部分連接的烷基(RO-)，例如甲氧基、乙氧基。
″芳基″指的是芳族碳環(huán)基，例如6-10元芳族或部分芳族環(huán)系。優(yōu)選的芳基包括、但不限于苯基、萘基、甲苯基和二甲苯基。
″環(huán)烷基″指的是含有3-8個原子的非芳族的部分或完全飽和的環(huán)脂族烴基。環(huán)烷基的實例包括環(huán)丙基、環(huán)戊基和環(huán)己基。
″有效量″或″治療有效量″指的是顯著抑制腫瘤生長的至少一種通式I化合物或其藥物上可接受的鹽的用量。
″鹵素″指的是氟、氯、溴或碘，優(yōu)選氯或氟。
″雜原子″指的是選自N、O和S的原子，優(yōu)選N。如果雜原子為N，那么它可以作為-NH-或-N-低級烷基-存在。如果雜原子為S，那么它可以作為S、SO或SO2存在。
″雜芳基″指的是含有高達兩個環(huán)的芳族雜環(huán)系。優(yōu)選的雜芳基包括、但不限于噻吩基、呋喃基、吲哚基、吡咯基、吡啶基、吡嗪基、噁唑基、噻唑基、喹啉基、嘧啶基、咪唑基和四唑基。
″雜環(huán)″或″雜環(huán)基″指的是帶有1-3個選自氮、氧或硫或其組合的雜原子的3-10元飽和或部分不飽和的非芳族一價環(huán)狀基團。優(yōu)選雜環(huán)的實例為哌啶、哌嗪、吡咯烷和嗎啉。
″羥基″是表示存在一價OH基團的前綴。
″IC50″指的是抑制50％具體測定的活性所需的本發(fā)明特定化合物的濃度。特別可以如下文實施例22中所述測定IC50。
″藥物上可接受的鹽″指的是保留通式I化合物的生物有效性和特性且由適宜的非毒性有機酸或無機酸或有機堿或無機堿形成的常用酸加成鹽或堿加成鹽。酸加成鹽的實例包括那些來源于無機酸的鹽和那些來源于有機酸的鹽，所述的無機酸諸如有鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸，所述的有機酸諸如有對甲苯磺酸、水楊酸、甲磺酸、草酸、琥珀酸、檸檬酸、蘋果酸、乳酸、富馬酸等。堿加成鹽的實例包括那些來源于銨、鉀、鈉的鹽和季銨氫氧化物，諸如氫氧化四甲基銨。將藥物化合物(即藥物)化學(xué)修飾成鹽對藥物化學(xué)家而言是為獲得改善的化合物的物理和化學(xué)穩(wěn)定性、吸濕性、流動性和溶解性的眾所周知技術(shù)。例如，參見H.Ansel等《藥物劑型與藥物傳遞系統(tǒng)》(Pharmaceutical Dosage Formsand DrugDelivery Systems)(6th Ed.1995)pp.196和1456-1457。
″藥物上可接受的″、諸如藥物上可接受的載體、賦形劑等指的是對給予特定化合物的受試者而言是藥理上可接受的且基本上無毒性。
作為取代的烷基中的″取代的″指的是取代可以發(fā)生在一個或多個位置上，且除非另有說明，各取代位置上的取代基獨立地選自特定的選擇。
本發(fā)明在一個實施方案中涉及如下通式的化合物或其藥物上可接受的鹽
其中R1選自下列基團H；C1-10烷基；被高達3個基團取代的C1-10烷基，所述的基團選自芳基、環(huán)烷基、雜芳基、雜環(huán)、NR10R11、OR12、SR12、鹵素、COR13、CO2R13、CONR13R14、SO2NR13R14、SOR13、SO2R13、CN和NO2，其中芳基、環(huán)烷基、雜芳基和雜環(huán)基團可以各自獨立地被高達3個基團取代，所述的基團選自NR10R11、OR12、SR12、鹵素、COR13、CO2R13、CONR13R14、SO2NR13R14、SOR13、SO2R13、CN和NO2；芳基；被高達3個基團取代的芳基，所述的基團選自低級烷基、NR10R11、OR12、SR12、鹵素、COR13、CO2R13、CONR13R14、SO2NR13R14、SOR13、SO2R13、CN和NO2；雜芳基；被高達3個基團取代的雜芳基，所述的基團選自低級烷基、NR10R11、OR12、SR12、鹵素、COR13、CO2R13、CONR13R14、SO2NR13R14、SOR13、SO2R13、CN和NO2；雜環(huán)；被高達3個基團取代的雜環(huán)，所述的基團選自低級烷基、NR10R11、OR12、SR12、鹵素、COR13、CO2R13、CONR13R14、SO2NR13R14、SOR13、SO2R13、CN和NO2；C3-10環(huán)烷基；被高達3個基團取代的C3-10環(huán)烷基，所述的基團選自低級烷基、NR10R11、OR12、SR12、鹵素、COR13、CO2R13、CONR13R14、SO2NR13R14、SOR13、SO2R13、CN和NO2；C2-10鏈烯基；被高達3個基團取代的C2-10鏈烯基，所述的基團選自NR10R11、OR12、SR12、鹵素、COR13、CO2R13、CONR13R14、SO2NR13R14、SOR13、SO2R13、CN和NO2；和被高達3個基團取代的C2-10炔基，所述的基團選自NR10R11、OR12、SR12、鹵素、COR13、CO2R13、CONR13R14、SO2NR13R14、SOR13、SO2R13、CN和NO2；R2、R3和R4獨立地選自下列基團組成的組H；鹵素；COR13；CO2R13；CONR13R14；SO2NR13R14；SOR13；SO2R13；CN；和NO2；R5、R6、R7和R8獨立地選自下列基團的組H；低級烷基；被羥基或烷氧基取代的低級烷基；NR15R16；OH；OR17；SR17；鹵素；COR17；CO2R17；CONR17R18；So2NR17R18;
SOR17；SO2R17；和CN；
R9選自下列基團的組H； 和COR17；R10和R11獨立地選自下列基團的組H；COR13；CO2R13；CONR13R14；SO2R13；SO2NR13R14；低級烷基；被羥基、烷氧基或NR15R16取代的低級烷基；環(huán)烷基；被羥基、烷氧基、低級烷基或NR15R16取代的環(huán)烷基；雜環(huán)；和被羥基、烷氧基、低級烷基或NR15R16取代的雜環(huán)；或備選地，NR10R11可以形成含有3-7個原子的環(huán)，所述的環(huán)任選包括一個或多個另外的雜原子且任選被一個或多個低級烷基、OR12、COR13、CO2R13、CONR13R14、SOR13、SO2R13和SO2NR13R14組成的組取代；R12選自下列基團的組H；低級烷基；COR13；CONR13R14；被羥基、烷氧基或NR15R16取代的C2-6烷基；
環(huán)烷基；被羥基、烷氧基、低級烷基或NR15R16取代的環(huán)烷基；雜環(huán)；和被羥基、烷氧基、低級烷基或NR15R16取代的雜環(huán)；R13和R14獨立地選自下列基團的組H；低級烷基；被羥基、烷氧基或NR15R16取代的C2-6烷基；環(huán)烷基；被羥基、烷氧基、低級烷基或NR15R16取代的環(huán)烷基；雜環(huán)；和被羥基、烷氧基、低級烷基或NR15R16取代的雜環(huán)；或備選地，NR13R14可以形成含有3-7個原子的環(huán)，所述的環(huán)任選包括一個或多個另外的雜原子且任選被一個或多個低級烷基、OR17、COR17、CO2R17、CONR17R18、SO2R17和SO2NR17R18組成的組取代；R15選自下列基團的組H；低級烷基；COR17；和CO2R17；且R16、R17和R18獨立地選自下列基團的組H；和低級烷基；或備選地，NR15R16和NR17R18可以各自獨立地形成含有3-7個原子的環(huán)，所述的環(huán)任選包括一個或多個另外的雜原子；R19和R20獨立地選自下列基團的組H；和低級烷基；且R21選自低級烷基；和被羥基、烷氧基或NR15R16取代的C2-6烷基。
本文公開且由上述通式I包括的化合物可以表現(xiàn)出互變異構(gòu)或結(jié)構(gòu)同分異構(gòu)現(xiàn)象。本發(fā)明的目的是包括上述通式I中所述的這些化合物的任意互變或結(jié)構(gòu)同分異構(gòu)形式或這類形式的混合物(例如外消旋混合物)且并不限于任意一種互變或結(jié)構(gòu)同分異構(gòu)形式。
當(dāng)通式I的化合物表現(xiàn)出結(jié)構(gòu)同分異構(gòu)現(xiàn)象時，優(yōu)選的旋光異構(gòu)體由如下通式Ia所示 本發(fā)明在優(yōu)選的實施方案中涉及通式I的化合物，其中R1選自芳基和被OR12或CONR13R14取代的芳基。尤其優(yōu)選這類化合物，其中芳基為苯基。
在通式I化合物的另一個優(yōu)選的實施方案中，R1選自低級烷基和被OR12或CONR13R14取代的C2-6烷基。
在通式I化合物的另一個優(yōu)選的實施方案中，R2為H。
在通式I化合物的另一個優(yōu)選的實施方案中，R2和R3為H。
在通式I化合物的另一個優(yōu)選的實施方案中，R2、R3和R4為H。
在通式I化合物的另一個優(yōu)選的實施方案中，R3為鹵素，優(yōu)選F。
在通式I化合物的另一個優(yōu)選的實施方案中，R5、R6和R8為H且R7為O-低級烷基，優(yōu)選O-CH3。
在通式I化合物的另一個優(yōu)選的實施方案中，R5鹵素，優(yōu)選F。
在通式I化合物的另一個優(yōu)選的實施方案中，R9為H。
下列化合物是本發(fā)明優(yōu)選的實施方案(±)-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例1g)；3-(4-甲氧基-苯基)-4-(R)-甲基-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例2)；3-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例3)；(±)-1，3-雙-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例4b)；(±)-3-[3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-7-苯氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-芐腈(實施例5b)；(±)-3-[3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-7-苯氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-苯甲酰胺(實施例6)；(±)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例8d)；(±)-3-[3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-7-苯氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-芐腈(實施例9b)；(±)-3-[3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-7-苯氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-苯甲酰胺(實施例10)；(±)-3-(2-氯-5-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例12c)；1-(2-羥基-1-(S)-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例13d)；1-(2-羥基-1-(R)-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(R)-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例14f)；1-(2-羥基-1-(R)-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例15b)；3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-7-苯氨基-1-[1-(S)-苯基-乙基]-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例18)；(±)-N-[6-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-7-氧代-8-苯基-5，6，7，8-四氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-基]-N-苯基-乙酰胺(實施例19)；(±)-1-(反式-4-羥基-環(huán)己基)-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例20b)；1-[(1r，3R)-3-羥基-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例21a)；1-[(1S，3S)-3-羥基-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例21b)；7-(4-氟-苯氨基)-1-[(1R，3R)-3-羥基-環(huán)戊基)]-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例21c)；7-(4-氟-苯氨基)-1-[(1S，3S)-3-羥基-環(huán)戊基)]-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例21d)；7-(4-氟-苯氨基)-1-(2-羥基-1-(R)-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例21e)；3-(4-氯-苯基)-7-(4-氟-苯氨基)-1-(2-羥基-1-(R)-甲基-乙基)-4-(S)-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例21f)；3-(4-氯-2-氟-苯基)-7-(4-氟-苯氨基)-1-(2-羥基-1-(R)-甲基-乙基)-4-(S)-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例21g)；3-(4-氯-苯基)-1-(2-羥基-1-(R)-甲基-乙基)-4-(S)-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例21h)；3-(4-氯-2-氟-苯基)-1-(2-羥基-1-(R)-甲基-乙基)-4-(S)-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例21i)；3-(4-氯-苯基)-1-(3-羥基-2-(S)-甲基-丙基)-4-(S)-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例21j)；和3-(4-氯-2-氟-苯基)-1-(3-羥基-2-(S)-甲基-丙基)-4-(S)-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例21k)。
本發(fā)明的化合物對FGF和KDR激酶具有選擇性。這些化合物用于治療或控制癌癥，特別是治療或控制實體瘤，特別是乳腺、肺、結(jié)腸和前列腺腫瘤。這些化合物可以大量透入細胞膜且由此具有有利的生物利用度分布，諸如改善的口服生物利用度。
在可選的實施方案中，本發(fā)明涉及包括至少一種通式I化合物或其藥物上可接受鹽或酯的藥物組合物。
例如，可以以片劑、包衣片、錠劑、硬膠囊或軟膠囊、溶液、乳劑或混懸劑形式口服給予這些藥物組合物。還可以例如以栓劑形式經(jīng)直腸或例如以注射液形式經(jīng)非腸道給予它們。
可以按照本領(lǐng)域中公知的方式、例如通過常規(guī)混合、包囊、溶解、制粒、乳化、包埋、制錠或凍干工藝制備包括通式I化合物和/或其鹽的本發(fā)明藥物組合物?？梢允褂弥委熒隙栊缘臒o機或有機載體配制這些藥物制劑。乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其鹽可以用作片劑、包衣片、錠劑和硬膠囊的這類載體。合適的軟膠囊載體包括植物油、蠟和脂肪。隨活性物質(zhì)性質(zhì)的不同，在軟膠囊的情況中一般不需要載體。制備溶液和糖漿劑的適宜載體為水、多元醇類、蔗糖、轉(zhuǎn)化糖和葡萄糖。注射用適宜載體為水、醇類、多元醇類、甘油、植物油、磷脂類和表面活性劑。用于栓劑的適宜載體為天然或硬化油、蠟、脂肪和半液體多元醇類。
藥物制劑還可以含有防腐劑、加溶劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑、乳化劑、增甜劑、著色劑、調(diào)味劑、用于改變滲透壓的鹽、緩沖劑、包衣劑或抗氧化劑。它們還可以含有其它治療上有價值的物質(zhì)，包括其它非通式I的那些活性組分。
本發(fā)明進一步涉及通式I化合物在治療癌癥、特別是乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌和前列腺癌中的應(yīng)用，通過對需要這類治療的人患者給予有效量的通式I化合物和/或其鹽來進行。
如上所述，本發(fā)明的化合物、包括通式I的化合物用于治療或控制細胞增殖疾病，特別是腫瘤疾病。這些化合物和含有所述化合物的制劑特別用于治療或控制實體瘤，諸如乳腺、結(jié)腸、肺和前列腺腫瘤。因此，本發(fā)明進一步涉及治療這類實體瘤的方法，通過對需要這類治療的患者給予有效量的通式I化合物和/或其鹽來進行。
本發(fā)明化合物的治療有效量指的是有效預(yù)防、緩解或改善所治療受試者的疾病癥狀或延長其存活的化合物用量。測定治療有效量屬于本領(lǐng)域技術(shù)人員的范圍。
本發(fā)明化合物的治療有效量或劑量可以在寬限內(nèi)改變且可以按照本領(lǐng)域中公知的方式測定?？梢栽诿糠N特定的情況中根據(jù)個體需要調(diào)整這類劑量，所述的每種特定情況包括給予的具體化合物、給藥途徑、所治療的疾病以及所治療的患者。一般來說，就對體重約為70kg的成年人進行口服給藥或非腸道給藥而言，約10mg-約10,000mg、優(yōu)選約200mg-約1,000mg的每日劑量應(yīng)是合適的，不過，如果指示，可以超過上限。可以將每日劑量作為單劑量或分劑量給藥，或?qū)Ψ悄c道給藥而言，可以將其作為連續(xù)輸注給予。
本發(fā)明在另一個實施方案中涉及制備權(quán)利要求1的通式I化合物的方法，該方法包括下列步驟a)使通式II的化合物與通式III的苯胺衍生物反應(yīng)， 其中R1、R5、R6、R7和R8如權(quán)利要求1中所定義； 其中R2、R3和R4如權(quán)利要求1中所定義；從而得到如下通式的化合物
其中R9為H；且如果需要，b)使通式Ib的化合物與?；u或酸酐反應(yīng)而得到通式I的化合物，其中R9為 或COR17且其中R17、R19、R20和R21如權(quán)利要求1中所定義；和/或c)如果需要，將通式I的化合物轉(zhuǎn)化成藥物上可接受的鹽。
本發(fā)明還涉及下列用于合成通式I化合物的新中間體(±)-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙基]-(4-甲氧基-苯基)-胺(實施例1d)；(±)-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例1e)；(±)-{2-氯-5-[1-(4-甲氧基-苯氨基)-乙基]-嘧啶-4-基}-(4-甲氧基-苯基)-胺(實施例1f)；(±)-7-氯-1，3-雙-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例4a)；(±)-3-[7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-芐腈(實施例5a)；(±)-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙基]-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-胺(實施例8b)；
(±)-7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例8c)；(±)-3-[7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-芐腈(實施例9a)；(±)-(2-氯-5-甲氧基-苯基)-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙基]-胺(實施例12a)；(±)-7-氯-3-(2-氯-5-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例12b)；1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-1-(S)-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例13c)；3-[2-叔丁基-二苯基-硅烷氧基-1-(R)-甲基-乙基]-1-(R)-[1-(2，4-二氯嘧啶-5-基)-乙基]-1-(4-甲氧基苯基)-脲(實施例14c)；3-[2-叔丁基-二苯基-硅烷氧基-1-(R)-甲基-乙基]-1-(S)-[1-(2，4-二氯嘧啶-5-基)-乙基]-1-(4-甲氧基苯基)-脲(實施例14d)；1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-1-(R)-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-(R)-4-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例14e)；1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-1-(R)-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例15a)；1-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙基]-1-(4-甲氧基-苯基)-3-[1-(S)-苯基-乙基]-脲(實施例16)；和7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-[1-(S)-苯基-乙基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例17)。
可以通過任意常規(guī)方式制備本發(fā)明的化合物。實施例中提供了合成這些化合物的合適的方法。一般來說，可以按照下述合成途經(jīng)制備通式I的化合物。
方案1
方案2 方案3 方案4 實施例下列實施例解釋了用于合成本發(fā)明化合物和制劑的優(yōu)選方法。
實施例1實施例1a(±)-1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙醇
193.03按照Ple，N.；Turck，A..；Martin，P.；Barbey，S.；Queguiner，G.在《四面體通訊》(Tet.Lett)，1993(34)，1605-1608中的文獻步驟由2，4-二氯嘧啶(Aldrich)合成(±)-1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙醇。
實施例1b(±)-2，4-二氯-5-(1-氯乙基)-嘧啶 211.48在0℃下向(±)-1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙醇(1.27g，6.60mmol)(來自上文實施例1a)在磷酰氯(5.0mL，53.11mmol)(Aldrich)中的溶液中加入二異丙基乙胺(2.60mL，14.78mmol)(Aldrich)。將該反應(yīng)體系在0℃下攪拌5分鐘、在環(huán)境溫度下攪拌15分鐘且然后在115℃下攪拌3小時。將該反應(yīng)體系冷卻至室溫、用甲苯(10mL)稀釋且然后將該混合物傾入冰(15g)。在攪拌10分鐘后，分離各層并用甲苯回洗水提取物。用無水硫酸鈉干燥合并的有機提取物、過濾并濃縮。通過急驟色譜法純化(Biotage，40M，10∶90-15∶85乙酸乙酯-己烷梯度)而得到(±)-2，4-二氯-5-(1-氯乙基)-嘧啶，為油狀物(產(chǎn)率1.233g；88.3％)。
實施例1c(±)-2，4-二氯-5-(1-溴乙基)-嘧啶
255.93將(±)-1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙醇(0.50g；2.60mmol)(來自上文實施例1a)和二異丙基乙胺(1.10mL；6.25mmol)(Aldrich)在二溴甲烷(0.35mL)中的溶液冷卻至15℃。一次加入三溴氧化磷(0.73g；2.83mmol)。除去冷卻浴并在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物。20分鐘后，用乙酸乙酯和水稀釋該反應(yīng)體系。用鹽水洗滌有機相且然后用無水硫酸鈉干燥、過濾并濃縮至得到(±)-2，4-二氯-5-(1-溴乙基)-嘧啶(0.61g；91.4％)粗品。通過急驟色譜法純化(Biotage，40M，10∶90乙酸乙酯-己烷)而得到純的(±)-2，4-二氯-5-(1-溴乙基)-嘧啶為油狀物，當(dāng)將其儲存在冷藏箱內(nèi)時固化。
備選地，可以如下制備(±)-2，4-二氯-5-(1-溴乙基)-嘧啶。
2-甲酰基丁酸乙酯 將二異丙胺(120.6mL，0.86mol)(Aldrich)在四氫呋喃(370mL)中的溶液冷卻至-30℃。以使反應(yīng)混合物的溫度保持在-30-0℃下的這類速率滴加正丁基鋰(在己烷中2.5M，344.2mL，0.86mol)(Aldrich)。然后在干冰-丙酮浴上將該服用化合物冷卻至-75℃。在28分鐘內(nèi)滴加丁酸乙酯(100g，0.86mol)(Aldrich)在四氫呋喃(170mL)中的溶液并將反應(yīng)溫度保持在-75--70℃。將該混合物在相同溫度下再攪拌30分鐘。然后在25分鐘內(nèi)將甲酸乙酯(125mL，1.55mol)(Aldrich)加入到該混合物中并將溫度維持在-75--70℃。將所得混合物溫至室溫并在室溫下攪拌3小時。通過用冷水浴進行外部冷卻將反應(yīng)溫度保持在低于30℃，加入乙酸(98.55mL，1.72mol)，隨后加入水(430mL)和二氯甲烷(200mL)。在分離各層后，用水(300mL)洗滌有機層。用二氯甲烷(200mL)提取合并的水層。用碳酸氫鈉水溶液(200mL)洗滌合并的有機層。用二氯甲烷(100mL)提取堿性水溶液。然后合并所有的有機層、用硫酸鈉干燥過夜、過濾并蒸餾以除去溶劑，保留下約180mL。(將產(chǎn)物中的某些與四氫呋喃一起蒸餾出。)在65-81℃(23mm Hg)下蒸餾殘余物。在70-81℃(23mm Hg)下蒸餾出級分而得到2-甲?；∷嵋阴?。(產(chǎn)率68.35g，55.1％)。
5-乙基尿嘧啶 在用冰水浴冷卻的同時在20分鐘內(nèi)將脲(19.39g，0.32mol)(J.T.Baker)加入到發(fā)煙硫酸(26-29.5％的游離SO3，135mL，2.65mol)(Aldrich)，將反應(yīng)溫度維持在8-15℃。再攪拌30分鐘后，在18分鐘內(nèi)加入2-甲酰基丁酸乙酯(46.55g，0.32mol)(來自上文實施例1c)，將該反應(yīng)體系保持在相同溫度下。再攪拌30分鐘后，在相同溫度下和10分鐘內(nèi)加入第二部分脲(15.07g，0.25mol)。然后將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌65小時并90-100℃下攪拌2小時(觀察到氣體放出且該反應(yīng)放熱，反應(yīng)溫度升至110℃)。用冰水浴將該混合物冷卻至30℃。緩慢加入冰(270g)以保持溫度低于35℃。然后將該混合物冷卻至5℃并攪拌20分鐘。通過過濾收集形成的固體、用冷水、己烷和二乙醚洗滌并通過抽吸干燥而得到5-乙基尿嘧啶。(產(chǎn)率38.85g，85.9％)。
2，4-二氯-5-乙基嘧啶
在用冷水浴進行外部冷卻的同時將N，N-二異丙基乙胺(195mL，0.86mol)(Aldrich)緩慢加入到5-乙基尿嘧啶(52.3g，0.37mol)(來自上文實施例1c)和磷酰氯(150mL，1.61mol)(Aldrich)的混合物中。將該混合物在回流狀態(tài)下加熱3.8小時并冷卻至室溫。然后將該混合物傾入冰(300g)。加入乙酸乙酯(100mL)并將該混合物在20℃下攪拌30分鐘，同時用冰水浴冷卻。將所得混合物通過Celite_過濾并用乙酸乙酯-己烷(1∶1，3×300mL)提取濾液。用水(250mL)洗滌合并的有機層、用硫酸鈉干燥、過濾并濃縮至干。將該殘余物溶于乙酸乙酯-己烷(1∶1)并通過TLC級硅膠過濾且用相同溶劑洗脫。濃縮濾液至干而得到2，4-二氯-5-乙基-嘧啶。(產(chǎn)率56.3g，85.2％)。
(±)-2，4-二氯-5-(1-溴乙基)-嘧啶 將N-溴琥珀酰亞胺(64.2g，0.35mol)(Aldrich)和2，2′-偶氮-雙-異丁腈(AIBN，1.78g)(Aldrich)加入到2，4-二氯-5-乙基-嘧啶(56.3g，0.32mol)(來自上文實施例1c)在四氯化碳(400mL)中的溶液中。將該混合物在回流狀態(tài)下加熱1.5小時并冷卻至室溫。將該反應(yīng)混合物通過TLC級硅膠過濾且用乙酸乙酯-己烷(1∶8)洗脫。濃縮濾液至干而得到(±)-2，4-二氯-5-(1-溴乙基)-嘧啶。(產(chǎn)率81.3g，100％)。
實施例1d(±)-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙基]-(4-甲氧基-苯基)-胺 298.17
將(±)-2，4-二氯-5-(1-溴乙基)-嘧啶(1.97g；7.70mmol)(來自上文實施例1c)溶于乙腈(21mL)。加入對-茴香胺(0.95g；7.70mmol)(Aldrich)、碳酸鉀(1.17g；8.48mmol)和碘化鉀(0.32g；1.93mmol)并在室溫下攪拌該混合物。16小時后，使該混合物分配在乙酸乙酯與水之間。用水和鹽水洗滌有機相、用無水硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。通過急驟色譜法純化(Biotage 40M，20∶80-25∶75乙酸乙酯-己烷梯度)而得到(±)-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙基]-(4-甲氧基-苯基)-胺。(產(chǎn)率1.82g；76.3％)。
實施例1e(±)-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 380.84向(±)-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙基]-(4-甲氧基-苯基)-胺(0.14g；0.46mmol)(來自上文實施例1c)在甲苯(1mL)中的溶液中加入異氰酸苯酯(50μL；0.46mmol)(Aldrich)。在110℃的油浴中加熱該溶液。1小時后，仍然存在少量原料嘧啶。再加入部分異氰酸苯酯(7.5μL；0.07mmol)并將該混合物再加熱15分鐘。在冷卻至室溫時，濃縮該反應(yīng)體系。將殘余物與己烷一起研磨且然后在高度真空中簡單干燥。
將該固體殘余物(中間體脲)溶于新蒸餾的四氫呋喃(1mL)、冷卻至-3℃并用叔丁醇鉀(在四氫呋喃中1.0M；0.5mL；0.5mmol)(Aldrich)處理。在冷卻下15分鐘后，將該反應(yīng)混合物通過硅膠墊(2.9g二氧化硅)過濾并用1∶1乙酸乙酯-己烷洗滌且然后用乙酸乙酯洗滌。合并濾液并濃縮。通過急驟色譜法純化(Biotage，40S，35∶65-50∶50乙酸乙酯-己烷梯度)而得到
(±)-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮，為固體。(產(chǎn)率0.14g；77.7％)。
實施例1f(±)-{2-氯-5-[1-(4-甲氧基-苯氨基)-乙基]-嘧啶-4-基}-(4-甲氧基-苯基)-胺 384.87將(±)-2，4-二氯-5-(1-氯乙基)-嘧啶(0.41g；1.94mmol)(來自上文實施例1b)溶于乙腈(2mL)。加入對-茴香胺(0.25g；2.03mmol)(Aldrich)、碳酸鉀(0.30g；2.19mmol)和碘化鉀(0.04g；0.23mmol)并在室溫下攪拌該混合物。40小時后，使該混合物分配在乙酸乙酯與水之間。用水和鹽水洗滌有機相、用無水硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。通過急驟色譜法純化(Biotage 40M，20∶80-50∶50乙酸乙酯-己烷梯度)而得到(±)-{2-氯-5-[1-(4-甲氧基-苯氨基)-乙基]-嘧啶-4-基}-(4-甲氧基-苯基)-胺。(產(chǎn)率0.19g；25.9％)。
實施例1g(±)-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮
437.51將(±)-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.13g；0.33mmol)(來自上文實施例1e)與苯胺(100μL；1.10mmol)(Aldrich)合并。將該混合物加熱至110℃。加熱時產(chǎn)生澄清溶液且然后新固體從溶液中沉淀出來。45分鐘后將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫。將殘余物與己烷一起研磨且然后通過急驟色譜法純化(Biotage，40M，40∶60-50∶50乙酸乙酯-己烷梯度)，在從乙酸乙酯-己烷中結(jié)晶后得到(±)-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮，為灰白色固體。(產(chǎn)率21.6mg；14.8％)。大量(±)-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮與硅膠粘合在一起且用50∶50乙酸乙酯-甲醇洗脫。(產(chǎn)率88mg；60％)。熔點222-234℃。
HR-MS(ES+)m/z C26H23N5O2[(M+H)+]計算值438.1925，測定值438.1927實施例23-(4-甲氧基-苯基)-4-(R)-甲基-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 437.51用Chiracel OD柱(1.0×25cm)經(jīng)多次洗脫拆分外消旋(±)-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(來自上文實施例1g)。第一個洗脫峰得到3-(4-甲氧基-苯基)-4-(R)-甲基-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。熔點218-233℃。
實施例33-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 437.51用Chiracel OD柱(1.0×25cm)經(jīng)多次洗脫拆分外消旋(±)-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(來自上文實施例1g)。第二個洗脫峰得到3-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。熔點223-236℃。
實施例4a(±)-7-氯-1，3-雙-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 410.86在冰水浴中冷卻(±)-{2-氯-5-[1-(4-甲氧基-苯氨基)-乙基]-嘧啶-4-基}-(4-甲氧基-苯基)-胺(49.4mg；0.13mmol)(來自上文實施例1f)在二氯甲烷(1.5mL)中的溶液。向該溶液中加入三乙胺(0.18mL；1.29mmol)(Aldrich)，隨后加入光氣溶液(1.89M，0.34mL；0.64mmol)(Fluka)。在冷卻環(huán)境中2小時后，再用二氯甲烷稀釋該反應(yīng)體系且依次用水、稀鹽酸水溶液、稀碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌。然后用無水硫酸鈉干燥有機層并濃縮。通過急驟色譜法純化殘余物(Biotage，12M，40∶60乙酸乙酯-己烷作為溶劑)而得到(±)-7-氯-1，3-雙-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮，為白色固體。(產(chǎn)率42.6mg；79.2％)。
實施例4b(±)-1，3-雙-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 467.53將(±)-7-氯-1，3-雙-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.30g；0.72mmol)(來自上文實施例4a)和苯胺(0.20mL；2.16mmol)(Aldrich)的混合物在100℃下加熱40分鐘。然后將該混合物冷卻至室溫并與己烷一起研磨。將所得固體溶于二氯甲烷、用水和鹽水洗滌、用硫酸鈉干燥并濃縮。通過急驟色譜法純化殘余物(Biotage，12S，二氯甲烷，隨后是30∶70-50∶50乙酸乙酯-己烷梯度)而得到(±)-1，3-雙-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)率0.303g；90.1％)。
將通過色譜法純化的物質(zhì)與來自另一次實驗的相當(dāng)?shù)奈镔|(zhì)合并。使合并的批量從二氯甲烷-乙酸乙酯-己烷中重結(jié)晶而得到(±)-1，3-雙-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮，為灰白色固體。(產(chǎn)率0.39g；91％)。熔點228-234℃。
HR-MS(ES+)m/z C27H25N5O3[(M+H)+]計算值468.2030，測定值468.2032。
實施例5a(±)-3-[7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-芐腈 405.85向(±)-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙基]-(4-甲氧基-苯基)-胺(0.10g；0.34mmol)(來自上文實施例1d)在甲苯(1mL)中的溶液中加入異氰酸3-氰基苯酯(66.6mg；0.46mmol)(Aldrich)。將該混合物在110℃的油浴中加熱2小時。在冷卻至室溫后，在減壓條件下濃縮該反應(yīng)體系。將殘余物與己烷一起研磨并簡單干燥。將固體殘余物(中間體脲)溶于新蒸餾的四氫呋喃(1.5mL)、用冰-鹽水浴冷卻并用叔丁醇鉀(在四氫呋喃中1.0M；370μL；0.37mmol)(Aldrich)。在冷卻環(huán)境中15分鐘后，通過TLC分析完成反應(yīng)并通過硅膠墊(0.5g)過濾且用乙酸乙酯洗滌。濃縮濾液并通過急驟色譜法純化殘余物(Biotage，12M，40∶60乙酸乙酯-己烷)而得到(±)-3-[7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-芐腈，為固體。(產(chǎn)率0.13g；85.6％)。
實施例5b(±)-3-[3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-7-苯氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-芐腈
將(±)-3-[7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-芐腈(0.49g；1.21mmol)(來自上文實施例5a)和苯胺(0.50mL；5.49mmol)(Aldrich)的混合物加熱至110℃下1小時。向該熱混合物中加入甲醇且然后冷卻該溶液。收集從溶液中沉淀出的固體并使其從甲醇中重結(jié)晶而得到(±)-3-[3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-7-苯氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-芐腈，為白色固體。(產(chǎn)率0.35g；62.2％)。熔點224-228℃。
HR-MS(ES+)m/z C27H22N6O2([M+H]+)計算值463.1877；測定值463.1883。
實施例6(±)-3-[3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-7-苯氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-苯甲酰胺 480.53用冰水浴冷卻(±)-3-[3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-7-苯氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-芐腈(0.11g；0.22mmol)(來自上文實施例5b)在二甲亞砜(1.5mL)中的溶液。加入氫氧化鈉水溶液(1.0M；0.38mL；0.38mmol)，隨后加入過氧化氫水溶液(30％溶液；70μL；0.69mmol)。添加后除去冷卻浴并將該混合物在室溫下攪拌3小時。收集固體并用水和熱二氯甲烷洗滌。通過急驟色譜法純化粗物質(zhì)(Biotage；12M；99∶1-80∶20乙酸乙酯-甲醇梯度)且純產(chǎn)物在濃縮時從溶液中結(jié)晶出來而得到(±)-3-[3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-7-苯氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-苯甲酰胺，為白色固體。(產(chǎn)率64.6mg；57.9％)。熔點268-273℃(熔化時脫色)。
HR-MS(EI)m/zC27H24N6O3[M+]計算值480.1910；測定值480.1912。
實施例7a(±)-1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-丙-1-醇 207.06將二異丙胺(1.10mL；7.85mmol)(Aldrich)溶于新蒸餾的四氫呋喃(15mL)并冷卻至-78℃。滴加正丁基鋰(在己烷中2.5M，3.10mL；7.75mmol)(Aldrich)并持續(xù)攪拌30分鐘以得到LDA溶液。在12分鐘內(nèi)將2，4-二氯嘧啶(0.50g；3.36mmol)(Aldrich)在四氫呋喃(3mL)中的溶液加入到這種新制備的LDA溶液中。在-78℃下攪拌30分鐘后，在6分鐘內(nèi)加入丙醛(0.48mL；6.65mmol)(Aldrich)且再持續(xù)攪拌35分鐘。通過添加25％氯化銨水溶液(15mL)使反應(yīng)猝滅且然后用乙酸乙酯和水稀釋。用第二部分氯化銨溶液且然后用鹽水洗滌有機相、用無水硫酸鈉干燥并濃縮。通過急驟色譜法純化殘余物(Biotage；40M；15∶85-25∶75乙酸乙酯-己烷梯度)而得到(±)-1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-丙-1-醇。(產(chǎn)率0.260g；37％)。
實施例7b(±)-5-(1-溴丙基)-2，4-二氯-嘧啶
269.96適度冷卻(±)-1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-丙-1-醇(0.26g；1.26mmol)(來自上文實施例7a)在二異丙基乙胺(0.55mL；3.13mmol)(Aldrich)中的溶液(18℃)以有助于抵消反應(yīng)放熱。一次加入凈三溴氧化磷(0.35g；1.36mmol)(Aldrich)。除去冷卻浴并在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物。15分鐘后，用冰和乙酸乙酯稀釋該反應(yīng)混合物。然后用鹽水洗滌有機相、用無水硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。通過急驟色譜法純化(Biotage 12M；5∶95乙酸乙酯-己烷)而得到(±)-5-(1-溴丙基)-2，4-二氯-嘧啶粗品，將其不經(jīng)進一步純化用于下一步。(產(chǎn)量0.23g)。該物質(zhì)在其NMR光譜上顯示出3個嘧啶環(huán)質(zhì)子峰，表明溴取代了環(huán)上的氯。
實施例7c(±)-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-丙基]-(4-甲氧基-苯基)-胺 312.20將(±)-5-(1-溴丙基)-2，4-二氯-嘧啶(0.26g；0.96mmol)(來自上文的實施例7b)溶于乙腈(2.5mL)。加入對-茴香胺(0.12g；0.96mmol)(Aldrich)、碳酸鉀(0.15g；1.05mmol)和碘化鉀(0.04g；0.24mmol)并在室溫下攪拌該混合物。16小時后，使該混合物分配在乙酸乙酯與水之間。用水和鹽水洗滌有機相、用無水硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。通過急驟色譜法純化(Biotage 40S，15∶85至20∶80乙酸乙酯-己烷梯度)而得到(±)-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-丙基]-(4-甲氧基-苯基)-胺粗品。(產(chǎn)率0.19g；64.3％)。該物質(zhì)再次顯示出3個與在原料中觀察到的相同比例的嘧啶環(huán)質(zhì)子的峰。該物質(zhì)不經(jīng)進一步純化而使用。
實施例7d(±)-7-氯-4-乙基-3-(4-甲氧基-苯基)-1-苯基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 394.86向(±)-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-丙基]-(4-甲氧基-苯基)-胺(0.19g；0.59mmol)(來自上文的實施例7c)在甲苯(2mL)中的溶液中加入異氰酸苯酯(83μL；0.76mmol)(Aldrich)。將該溶液在110℃的油浴中加熱1小時。在冷卻至室溫時，濃縮該反應(yīng)體系。將殘余物與己烷一起研磨且然后在高度真空中簡單干燥。將固體殘余物(中間體脲)溶于新蒸餾的四氫呋喃(2mL)、冷卻至-3℃并用叔丁醇鉀(在四氫呋喃中1.0M；0.65mL；0.65mmol)(Aldrich)處理。在冷卻環(huán)境中15分鐘后，將該反應(yīng)混合物通過硅膠墊(1g)過濾并用乙酸乙酯洗滌。濃縮濾液并通過急驟色譜法純化(Biotage，40S，20∶80-40∶60乙酸乙酯-己烷梯度)而得到(±)-7-氯-4-乙基-3-(4-甲氧基-苯基)-1-苯基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮，為固體。(產(chǎn)率0.14g；60.2％)。該物質(zhì)的NMR僅顯示出2個嘧啶質(zhì)子的單峰，表明為所需產(chǎn)物與相應(yīng)的7-溴化合物的混合物。
實施例7e(±)-4-乙基-3-(4-甲氧基-苯基)-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5d]嘧啶-2-酮
451.53將(±)-7-氯-4-乙基-3-(4-甲氧基-苯基)-1-苯基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.13g；0.34mmol)(來自上文的實施例7d)和苯胺(250μL；2.74mmol)(Aldrich)的混合物加熱至110℃下30分鐘。在冷卻時，研磨該混合物并將所得固體溶于二氯甲烷且用水和鹽水洗滌。用無水硫酸鈉干燥有機相、過濾并濃縮。通過急驟色譜法純化粗物質(zhì)(Biotage，12M；35∶65-50∶50乙酸乙酯-己烷梯度)且然后使其從乙酸乙酯-己烷中結(jié)晶而得到(±)-4-乙基-3-(4-甲氧基-苯基)-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5d]嘧啶-2-酮，為白色固體。(產(chǎn)率0.11g；73.6％)。
熔點172-176℃。HR-MS(ES+)m/z C27H25N5O2([M+H]+)452.2081；測定值452.2083。
實施例8a2-氟-4-甲氧基苯胺 將3-氟-4-硝基苯酚(10.17g，64.7mmol)(Aldrich)溶于二甲基甲酰胺(210mL)。加入碳酸鉀(45g，323mmol)和甲基碘(5mL，77.64mmol)(Aldrich)并將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。(薄層色譜法20％在己烷中的乙酸乙酯證實完全轉(zhuǎn)化)。將該反應(yīng)混合物通過Celite_床過濾并在減壓下濃縮。將粗物質(zhì)與乙醚一起研磨并通過過濾除去不溶物。在減壓下濃縮濾液而得到橙色固體。將該物質(zhì)(11.43g)溶于甲醇(150mL)并在有10％鈀/碳(1.5g)(Aldrich)存在下和帕爾儀上以50psi氫化1.5小時。(薄層色譜法20％在己烷中的乙酸乙酯證實完全轉(zhuǎn)化)。將該反應(yīng)混合物通過Celite_過濾、用乙酸乙酯洗滌、然后在減壓下濃縮而得到2-氟-4-甲氧基苯胺，為固體(產(chǎn)率3.81g，26.99mmol)。
實施例8b(±)-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙基]-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-胺 316.16在乙腈(3mL)中合并(±)-2，4-二氯-5-(1-溴乙基)-嘧啶(0.20g；0.79mmol)(來自上文實施例1c)、N，N-二異丙基乙胺(140μL；0.80mmol)(Aldrich)和2-氟-4-甲氧基苯胺(0.11g；0.78mmol)(來自上文實施例16a)的混合物并在室溫下攪拌過夜。發(fā)現(xiàn)反應(yīng)不完全且然后在40-50℃下的油浴中加熱過夜。冷卻時，使該反應(yīng)體系分配在乙酸乙酯與水之間。用鹽水洗滌有機相、用無水硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。通過急驟色譜法純化(Biotage，40S；10∶90-20∶80乙酸乙酯-己烷梯度)而得到(±)-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙基]-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-胺。(產(chǎn)率0.12g；49.1％)。
實施例8c(±)-7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮
398.83在甲苯(5mL)中合并(±)-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙基]-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-胺(0.45g；1.41mmol)(來自上文實施例16b)和異氰酸苯酯(165μL；1.52mmol)(Aldrich)并在110-120℃的油浴中加熱2.5小時且然后在130℃下加熱2.5小時。冷卻后，濃縮該反應(yīng)混合物并與己烷一起研磨。通過急驟色譜法純化固體殘余物(Biotage 40S；30∶70乙酸乙酯-己烷)而得到中間體(±)-1-[1-(2-氯-嘧啶-5-基)-乙基]-1-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-3-苯基-脲。(產(chǎn)率0.27g；43.2％)。
將該脲懸浮于新蒸餾的四氫呋喃(3mL)中并用冰-鹽水浴冷卻。在5分鐘內(nèi)向該混懸液中滴加叔丁醇鉀(在四氫呋喃中1.0M；0.64mL；0.64mmol)(Aldrich)。當(dāng)加入叔丁醇鉀時，固體變成溶液。在冷卻下再攪拌15分鐘后，將該反應(yīng)混合物通過硅膠墊(1.75g)過濾，用1∶1乙酸乙酯-己烷且然后用乙酸乙酯洗脫。通過急驟色譜法純化(Biotage 40S；40∶60-50∶50乙酸乙酯-己烷)而得到(±)-7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)率0.22g；兩步總計為38％)。
實施例8d(±)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮
455.50合并(±)-7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.21g；0.53mmol)(來自上文實施例16c)和苯胺(450μL；4.94mmol)(Aldrich)并在110℃下加熱1小時。冷卻后，將該混合物浴己烷一起研磨。將固體殘余物溶于二氯甲烷并用水和鹽水洗滌、用無水硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。通過急驟色譜法純化(Biotage 12M；40∶60-50∶50乙酸乙酯-己烷梯度)且然后從二氯甲烷-乙醚中結(jié)晶而得到(±)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮，為白色固體。(產(chǎn)率0.20g；81.4％)。
熔點242-250℃。HR-MS(ES+)m/z C26H22FN5O2計算值([M+H]+)456.1831；測定值456.1832。
實施例9a(±)-3-[7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-芐腈 423.84
將(±)-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙基]-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-胺(1.15g；3.63mmol)(來自上文實施例16b)與異氰酸3-氰基苯酯(0.55g；3.81mmol)(Aldrich)在甲苯(10mL)中合并并在110-115℃的油浴中加熱2小時且然后在接下來的3小時內(nèi)加熱至128℃。冷卻至室溫時，濃縮該反應(yīng)體系并與己烷一起研磨。通過急驟色譜法純化粗物質(zhì)(Biotage，40M；50∶50乙酸乙酯-己烷)而得到中間體(±)-1-[1-(2-氯-嘧啶-5-基)-乙基]-3-(3-氰基-苯基)-1-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-脲。(產(chǎn)率1.20g；71.8％)。
將該脲懸浮于新蒸餾的四氫呋喃(10mL)中并用冰-鹽水浴冷卻。在8分鐘內(nèi)向該混懸液中滴加叔丁醇鉀(在四氫呋喃中1.0M；2.70mL；2.70mmol)(Aldrich)。將該反應(yīng)混合物在冷卻下再攪拌15分鐘且然后通過硅膠墊(7-8g)過濾，用1∶1乙酸乙酯-己烷且然后用乙酸乙酯洗脫。通過急驟色譜法純化(Biotage 40M；40∶60-50∶50乙酸乙酯-己烷)而得到(±)-3-[7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-芐腈，為白色固體。(產(chǎn)率1.11g；兩步總計為66.8％)。
實施例9b(±)-3-[3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-7-苯氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-芐腈 480.51將(±)-3-[7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-芐腈(1.03g；2.42mmol)(來自上文實施例17a)與苯胺(1.00mL；10.97mmol)(Aldrich)合并并在110℃下加熱1小時。此時，該反應(yīng)混合物為固體團。加入甲醇(75mL)并將該混合物在110℃下加熱20分鐘，同時劇烈攪拌(固體仍然不溶)。冷卻時，收集固體、用甲醇且然后用乙醚洗滌并在高度真空中干燥至得到(±)-3-[3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-7-苯氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-芐腈。(產(chǎn)率1.00g；85.6％)。使部分該物質(zhì)從二氯甲烷-乙醚-石油醚中重結(jié)晶而用于表征和測試。(產(chǎn)率0.22g)。
熔點223-228℃。HR-MS(ES+)m/z C27H21FN6O2計算值([M+H]+)481.1783；測定值481.1788。
實施例10(±)-3-[3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-7-苯氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-苯甲酰胺 498.52將(±)-3-[3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-7-苯氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-芐腈(0.80g；1.67mmol)(來自上文實施例17b)溶于二甲亞砜(25mL)。大部分物質(zhì)進入溶液。加入氫氧化鈉水溶液(1.0N；3.34mL；3.34mmol)，隨后在室溫下加入過氧化氫(在水中30％；0.51mL，4.99mmol)。攪拌45分鐘后，加入水且白色固體從溶液中沉淀出來。收集固體、用水洗滌并干燥。溶解該固體需要大量二氯甲烷-甲醇-乙腈。然后蒸餾出溶劑混合物至固體開始從溶液中結(jié)晶出來。冷卻并過濾而得到(±)-3-[3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-7-苯氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-苯甲酰胺，為白色固體。(產(chǎn)率0.56g；67.6％)。
熔點282-286℃。HR-MS(ES+)m/z C27H23FN6O3計算值([M+H]+)499.1889；測定值499.1894。
實施例11a(±)-1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-2-甲基-丙-1-醇 221.09將二異丙胺(1.1mL；7.85mmol)(Aldrich)和新蒸餾的四氫呋喃(15mL)的溶液冷卻至-78℃。滴加正丁基鋰(在己烷中2.5M；3.1mL；7.75mmol)(Aldrich)并持續(xù)攪拌40分鐘以制備LDA溶液。然后在15分鐘內(nèi)向這種新制備的LDA溶液中加入在四氫呋喃(3mL)中的2，4-二氯嘧啶(0.50g；3.37mmol)(Aldrich)。攪拌40分鐘后，在6分鐘內(nèi)加入異丁醛(0.61mL；6.72mmol)(Aldrich)并再持續(xù)攪拌30分鐘。通過添加25％的氯化銨水溶液(20mL)使反應(yīng)猝滅且然后用乙酸乙酯和水稀釋。用第二部分氯化銨水溶液且然后用鹽水洗滌有機相、用無水硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。通過急驟色譜法純化殘余物(Biotage 40S；10∶90-15∶85乙酸乙酯-己烷梯度)而得到(±)-1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-2-甲基-丙-1-醇。(產(chǎn)率0.25g；33.4％)。
實施例11b(±)-5-(1-溴-2-甲基-丙基)-2，4-二氯-嘧啶 283.98將(±)-1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-2-甲基-丙-1-醇(0.18g；0.83mmol)(來自上文實施例19a)與N，N-二異丙基-乙胺(0.37mL；2.10mmol)(Aldrich)與少量二溴甲烷(50μL)(Aldrich)合并以有助于溶解該混合物。僅少量物質(zhì)仍然不溶。一次加入凈三溴氧化磷(0.22g；0.85mmol)(Aldrich)。將反應(yīng)混合物攪拌10分鐘且然后使其分配在乙酸乙酯與水之間。用鹽水洗滌有機相、用無水硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。通過急驟色譜法純化(Biotage 12M)而得到(±)-5-(1-溴-2-甲基-丙基)-2，4-二氯-嘧啶，為無色油狀物。(產(chǎn)率79.5mg；33.7％)。
實施例11c(±)-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-2-甲基-丙基]-(4-甲氧基-苯基)-胺 326.23將(±)-5-(1-溴-2-甲基-丙基)-2，4-二氯-嘧啶(88.7mg；0.312mmol)(來自上文實施例19b)與碳酸鉀(47.4mg；0.34mmol)、碘化鉀(14.9mg；0.09mmol)和對-茴香胺(38.7mg；0.31mmol)(Aldrich)合并并在室溫下攪拌過夜。用乙酸乙酯稀釋該反應(yīng)混合物并用水且然后用鹽水洗滌。用無水硫酸鈉干燥有機相、過濾并濃縮。通過急驟色譜法純化(Biotage 12M；10∶90-30∶70乙酸乙酯-己烷梯度)而得到(±)-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-2-甲基-丙基]-(4-甲氧基-苯基)-胺。(產(chǎn)率17.6mg；17.3％)。
實施例11d(±)-7-氯-4-異丙基-3-(4-甲氧基-苯基)-1-苯基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮
408.89將(±)-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-2-甲基-丙基]-(4-甲氧基-苯基)-胺(35.0mg；0.107mmol)(來自上文實施例19c)與異氰酸苯酯(12.8μL；0.12mmol)(Aldrich)在甲苯(0.6mL)中合并、密封并在微波反應(yīng)器中加熱(SmithCreatorTM，160秒達到146℃的最高溫度，然后在160℃下800秒且最終在180℃下600秒)。反應(yīng)不完全且濃縮該混合物并通過急驟色譜法純化(Biotage 12M；20∶80乙酸乙酯-己烷)而得到中間體(±)-1-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-2-甲基-丙基]-1-(4-甲氧基-苯基)-3-苯基-脲。(產(chǎn)率24.0mg)。
將這種中間體脲溶于新蒸餾的四氫呋喃(0.4mL)并在冰-鹽水浴上冷卻所得溶液。加入叔丁醇鉀(在四氫呋喃中1.0M；60μL；0.06mmol)(Aldrich)。將該混合物在冷卻下攪拌15分鐘且然后除去浴并再持續(xù)攪拌5分鐘。將該混合物通過硅膠墊過濾并用乙酸乙酯洗滌。濃縮濾液并干燥至得到(±)-7-氯-4-異丙基-3-(4-甲氧基-苯基)-1-苯基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)率21.5mg；兩步總計為49％)。
實施例11e(±)-4-異丙基-3-(4-甲氧基-苯基)-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮
465.55合并(±)-7-氯-4-異丙基-3-(4-甲氧基-苯基)-1-苯基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(22.0mg；0.054mmol)(來自上文實施例19d)與苯胺(50μL；0.55mmol)(Aldrich)并在100℃的油浴中加熱1小時。冷卻時，將殘余物與己烷一起研磨并筆洗出上清液。將殘余物溶于乙酸乙酯并用水且然后用鹽水洗滌。將有機相與硅膠混合、濃縮且隨后通過急驟色譜法純化(Biotage12M；40∶60乙酸乙酯-己烷)并從二氯甲烷-乙醚-石油醚中結(jié)晶而得到(±)-4-異丙基-3-(4-甲氧基-苯基)-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮，為白色固體。(產(chǎn)率14.8mg；59.1％)。熔點229-235℃HR-MS(ES+)m/z C28H27N5O2計算值([M+H]+)466.2238；測定值466.2243。m/z C28H27N5O2計算值([M+Na]+)488.2057；測定值488.2059。
實施例12a(±)-(2-氯-5-甲氧基-苯基)-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙基]-胺 332.62合并(±)-2，4-二氯-5-(1-溴乙基)-嘧啶(0.20g；0.79mmol)(來自上文實施例1c)、N，N-二異丙基乙胺(0.40mL；2.27mmol)(Aldrich)和2-氯-5-甲氧基苯胺鹽酸鹽(0.15g；0.77mmol)(Aldrich)(凈)并在90℃的油浴中加熱16小時。冷卻時，將該混合物溶于乙酸乙酯并用水且然后用鹽水洗滌。用無水硫酸鈉干燥有機相、過濾并濃縮。通過急驟色譜法純化(Biotage 40M；5∶95-15∶85乙酸乙酯-己烷梯度)而得到(±)-(2-氯-5-甲氧基-苯基)-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙基]-胺。(產(chǎn)率0.12g；45.9％)。
實施例12b(±)-7-氯-3-(2-氯-5-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 415.28將(±)-(2-氯-5-甲氧基-苯基)-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙基]-胺(70mg；0.21mmol)(來自上文實施例20a)與異氰酸苯酯(60μL；0.55mmol)(Aldrich)(凈)合并并在150℃下加熱65分鐘。薄層色譜分析證實仍然存在一定的未反應(yīng)原料。再加入異氰酸酯(20μL；0.18mmol)并將該混合物在150℃下再加熱30分鐘。冷卻時，加入己烷。攪拌后，筆洗出上清液并干燥殘余物而得到中間體(±)-1-(2-氯-5-甲氧基-苯基)-1-[1-(2-氯嘧啶-5-基)-乙基]-3-苯基-脲，通過HPLC證實含有約20％的原料。
將這種中間體脲混合物溶于四氫呋喃(0.5mL)并用冰-鹽水浴冷卻。滴加叔丁醇鉀(在四氫呋喃中1.0M；200μL；0.20mmol)。將該混合物在冷卻下攪拌15分鐘且然后除去浴并再持續(xù)攪拌5分鐘。將該混合物通過硅膠(～1g)床過濾并用乙酸乙酯洗滌。將濾液與來自另一反應(yīng)的物質(zhì)合并、濃縮并通過急驟色譜法純化(Biotage 12M；20∶80-40∶60乙酸乙酯-己烷)而得到(±)-7-氯-3-(2-氯-5-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)率45.8mg；兩次實驗總計40％)。
實施例12c(±)-3-(2-氯-5-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮
471.95將(±)-7-氯-3-(2-氯-5-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.20g；0.49mmol)(來自上文實施例20b)與苯胺(150μL；1.65mmol)(Aldrich)合并并在100℃的油浴中加熱約70分鐘。冷卻時，將殘余物與己烷一起研磨并且然后使其分配在乙酸乙酯與水之間。用鹽水洗滌有機相、用無水硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。通過急驟色譜法純化粗物質(zhì)(Biotage，40M；40∶60乙酸乙酯-己烷)而得到(±)-3-(2-氯-5-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮，為淡黃色固體。(產(chǎn)率0.15g；63.7％)。
HR-MS(ES+)m/z C26H22ClN5O2計算值([M+H]+)472.1535；測定值472.1537。
實施例13a(S)-(+)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-2-甲基丙酸手性 342.51將(S)-(+)-3-羥基-2-甲基丙酸甲酯(1.06g；8.99mmol)(Aldrich)溶于二氯甲烷(10mL，用分子篩干燥)。加入咪唑(0.85g；12.41mmol)(Aldrich)和叔丁基-二苯基甲硅烷基氯(2.30mL；8.85mmol)(Aldrich)并將該混合物在環(huán)境溫度下攪拌3小時。再用另外的二氯甲烷稀釋該反應(yīng)體系、用水和鹽水洗滌、用無水硫酸鈉干燥、過濾并濃縮至得到(S)-(+)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-2-甲基-丙酸甲酯，為油狀物。(產(chǎn)率3.17g；98.8％)。
將這種甲硅烷基-醚(3.15g；8.85mmol)溶于四氫呋喃-甲醇(3∶1)并在環(huán)境溫度下用氫氧化鈉水溶液(1.0N；10.0mL；10.0mmol)皂化過夜。使該反應(yīng)混合物分配在乙酸乙酯與水之間并用0.5N鹽酸酸化至pH～4。用水和鹽水洗滌有機相、用無水硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。通過急驟色譜法純化(Biotage 40M；25∶75乙酸乙酯-己烷)而得到(S)-(+)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-2-甲基丙酸，為白色固體。(產(chǎn)率2.06g；68.1％)。
實施例13b(S)-叔丁基-2-異氰酸根-丙氧基二苯基硅烷手性 311.42在原位產(chǎn)生該物質(zhì)。
將(S)-(+)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-2-甲基丙酸(0.44g；1.20mmol)(來自上文實施例21a)溶于二氯甲烷(3mL，用分子篩干燥)。加入三乙胺(0.36mL；2.58mmol)(Aldrich)并用冰水浴冷卻該溶液。滴加氯甲酸乙酯(0.16mL；1.63mmol)(Aldrich)并將該混合物在冷卻下攪拌1小時。然后再用二氯甲烷稀釋該混合物、用水和鹽水洗滌、用無水硫酸鈉干燥、過濾并濃縮至得到(S)-(+)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-2-甲基丙酰氯。
向上述?；仍诒?4mL)中的溶液中加入疊氮化鈉(0.25g；3.85mmol)在水(4mL)中的溶液。將該混合物攪拌10分鐘且然后用二氯甲烷和水稀釋。用鹽水洗滌有機相、用無水硫酸鎂干燥、過濾并濃縮至得到(S)-(+)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-2-甲基丙酰基氮化物。
將這種疊氮化物溶于甲苯(2mL)并在120℃的油浴中加熱以通過庫爾提斯重排生成所需的(S)-叔丁基-2-異氰酸根-丙氧基-二苯基硅烷。
實施例13c1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-1-(S)-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 601.23用(±)-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙基]-(4-甲氧基-苯基)-胺(0.35g；1.10mmol)(來自上文實施例1d)在甲苯(2mL)中的溶液處理在熱甲苯(2mL；120℃)中的(S)-叔丁基-2-異氰酸根-丙氧基-二苯基硅烷(在原位0.440g、1.20mmol的(S)-(+)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-2-甲基丙酸生成)(來自上文實施例21b)。將所得溶液保持在120℃下30分鐘，然后冷卻至室溫并濃縮。將殘余物溶于無水四氫呋喃(4mL)并用冰-鹽水浴冷卻。滴加叔丁醇鉀(在四氫呋喃中的1.0M；1.2mL；1.20mmol)(Aldrich)并在冷卻下持續(xù)攪拌15分鐘。將該混合物通過硅膠床過濾并用乙酸乙酯洗脫。通過急驟色譜法進一步純化(Biotage 40M；25∶75乙酸乙酯-己烷)而得到1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-1-(S)-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮，為非對映體的混合物。(產(chǎn)率0.31g；46％)。此時未觀察到非對映體分離。
實施例13d1-(2-羥基-1-(S)-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 419.49將1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-1-(S)-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.286g；0.476mmol)(來自上文實施例21c)與苯胺(0.50mL；5.49mmol)(Aldrich)合并并在90℃的油浴中加熱3小時。將該混合物冷卻至室溫并使其分配在乙酸乙酯與水之間。用鹽水洗滌有機相、用無水硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。進行急驟色譜法(Biotage 40L；40∶60乙酸乙酯-己烷)而得到甲硅烷基保護的產(chǎn)物。(產(chǎn)率0.29g；92％)。此時注意到存在部分非對映體的分離。
將上述甲硅烷基保護的產(chǎn)物的非對映體混合物(80mg；0.12mmol)溶于無水四氫呋喃(0.5mL)并在室溫下用氟化四丁基銨(在四氫呋喃中1.0M；0.45mL；0.45mmol)(Aldrich)處理約7小時。濃縮該反應(yīng)混合物并使殘余物分配在乙酸乙酯與水之間。用鹽水洗滌有機相、用無水硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。通過急驟色譜法純化(Biotage 12M；60∶40-75∶25乙酸乙酯-己烷梯度)，隨后從乙酸乙酯-己烷中結(jié)晶而得到1-(2-羥基-1-(S)-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮，為非對映體混合物。(產(chǎn)率38.9mg；79.4％)。
熔點165-180℃。HR-MS(ES+)m/z C23H25N5O3計算值([M+H]+)420.2030；測定值420.2034。
實施例14a(R)-(-)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-2-甲基丙酸手性 342.51將(R)-(-)-3-羥基-2-甲基丙酸甲酯(30.81g；260.8mmol)(Aldrich)溶于二氯甲烷(300mL，用分子篩干燥)。加入咪唑(25.11g；365.1mmol)(Aldrich)和叔丁基-二苯基甲硅烷基氯(68.00mL；261.5mmol)(Aldrich)并將該混合物在室溫下攪拌6小時。再用二氯甲烷(300mL)稀釋該反應(yīng)體系、用水(2×150mL)和鹽水(1×150mL)洗滌、用無水硫酸鈉干燥、過濾并濃縮至得到(R)-(-)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-2-甲基-丙酸甲酯，為油狀物。(產(chǎn)率94.3g)。
將這種粗甲硅烷基-醚(94.3g)溶于四氫呋喃-甲醇(3∶1，875mL))并在室溫下用氫氧化鈉水溶液(1.0N；300.0mL；300.0mmol)皂化46小時。在減壓條件下濃縮該反應(yīng)混合物以除去部分有機溶劑且然后用乙酸乙酯稀釋。用冰-水浴冷卻后，用1N鹽酸水溶液(300mL)酸化混合物。分離各層并用水和鹽水洗滌有機相、用無水硫酸鈉干燥、過濾并濃縮至得到含有少量乙酸乙酯的(R)-(-)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-2-甲基丙酸粗品。通過NMR估計純度為95％。(產(chǎn)率90.4g；96％)。
實施例14b(R)-叔丁基-2-異氰酸根-丙氧基二苯基硅烷手性 311.42在原位產(chǎn)生該物質(zhì)。
將(R)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-2-甲基丙酸(0.508g；1.48mmol)(來自上文實施例22a)溶于二氯甲烷(4mL，用分子篩干燥)。加入三乙胺(0.42mL；2.98mmol)(Aldrich)并用冰水浴冷卻該溶液。滴加氯甲酸乙酯(0.17mL；1.78mmol)(Aldrich)并將該混合物在冷卻下攪拌50分鐘。再用二氯甲烷稀釋該反應(yīng)混合物并用水且然后用鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥有機相并濃縮。
向這種酸酐中間體在丙酮(5mL)中的溶液中加入疊氮化鈉(0.29g；4.41mmol)在水(5mL)中的溶液。將該混合物在室溫下攪拌10分鐘且然后再用二氯甲烷和水稀釋。用鹽水洗滌有機相、用硫酸鎂干燥并濃縮至得到(R)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-2-甲基丙?；?。
將這種疊氮化物溶于甲苯(～5mL；用4A分子篩干燥)并在120℃的油浴中加熱。導(dǎo)致氮氣快速劇烈放出，通過庫爾提斯重排產(chǎn)生所需的(R)-叔丁基-2-異氰酸根-丙氧基-二苯基硅烷。不經(jīng)純化使用該物質(zhì)。
實施例14c3-[2-叔丁基-二苯基-硅烷氧基-1-(R)-甲基-乙基]-1-(R)-[1-(2，4-二氯嘧啶-5-基)-乙基]-1-(4-甲氧基苯基)-脲手性 637.69用(±)-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙基]-(4-甲氧基-苯基)-胺(0.74g；2.38mmol)來自上文實施例1d)的甲苯溶液處理在熱甲苯(4mL)中的(R)-叔丁基-2-異氰酸根-丙氧基-二苯基硅烷(在原位由1.00g、2.861mmol的(R)-3-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-2-甲基丙酸)(來自上文實施例22b生成)。將該溶液在115-120℃下加熱3小時且然后冷卻至室溫。通過急驟色譜法純化該粗反應(yīng)溶液(使用Biotage 40L柱多次洗脫；35∶65乙酸乙酯-己烷)，該步驟成功地分離了兩種非對映體。得到第一種洗脫的非對映體為3-[2-叔丁基-二苯基-硅烷氧基-1-(R)-甲基-乙基]-1-(R)-[1-(2，4-二氯嘧啶-5-基)-乙基]-1-(4-甲氧基苯基)-脲，e.e.為90-95％。(產(chǎn)率0.47g；25.7％)。
實施例14d3-[2-叔丁基-二苯基-硅烷氧基-1-(R)-甲基-乙基]-1-(S)-[1-(2，4-二氯嘧啶-5-基)-乙基]-1-(4-甲氧基苯基)-脲手性
637.69得到第二種洗脫的非對映體(來自上文實施例22c)，3-[2-叔丁基-二苯基-硅烷氧基-1-(R)-甲基-乙基]-1-(S)-[1-(2，4-二氯嘧啶-5-基)-乙基]-1-(4-甲氧基苯基)-脲，e.e.為85-90％。(產(chǎn)率0.44g；24.1％)。
實施例14e1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-1-(R)-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-(R)-4-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 將3-[2-叔丁基-二苯基-硅烷氧基-1-(R)-甲基-乙基]-1-(R)-[1-(2，4-二氯嘧啶-5-基)-乙基]-1-(4-甲氧基苯基)-脲(0.46g，純度96％；0.69mmol)(來自上文實施例22c)溶于無水四氫呋喃(2mL)并用冰-鹽水浴冷卻。在5分鐘內(nèi)滴加叔丁醇鉀(在四氫呋喃中的1.0M；0.85mL；0.85mmol)(Aldrich)。將該混合物在冷卻下攪拌15分鐘且然后除去浴且再持續(xù)攪拌5分鐘。將該反應(yīng)混合物通過硅膠墊過濾并用乙酸乙酯洗脫。通過急驟色譜法純化這種粗產(chǎn)物(Biotage 40M；25∶75乙酸乙酯-己烷)而得到1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-1-(R)-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-(R)-4-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)率0.32g；77.6％)。
實施例14f1-(2-羥基-1-(R)-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(R)-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 419.49將1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-1-(R)-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-(R)-4-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.32g；0.51mmol)(來自上文實施例22e)和苯胺(0.12mL；1.32mmol)(Aldrich)在甲苯(0.25mL，用分子篩干燥)中的溶液在110℃的油浴中加熱1.75小時。用乙酸乙酯稀釋該反應(yīng)體系并用水和鹽水洗滌、用無水硫酸鈉干燥并濃縮。通過急驟色譜法純化粗物質(zhì)(Biotage 40L；40∶60乙酸乙酯-己烷)而得到1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-1-(R)-甲基-乙基]-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(R)-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)率0.30g；81.6％)。該物質(zhì)表現(xiàn)出的e.e.≥95％。
將這種中間體(0.29g；0.41mmol)溶于無水四氫呋喃(1.5mL)并在50℃下用氟化四丁基銨(在四氫呋喃中1.0M；1.3mL；1.30mmol)(Aldrich)處理2小時。將該反應(yīng)體系冷卻至室溫并濃縮。將殘余物溶于乙酸乙酯并用水(2x)和鹽水洗滌、用無水硫酸鈉干燥并濃縮。通過急驟色譜法純化(Biotage 40M；70∶30乙酸乙酯-己烷)，隨后從乙酸乙酯-己烷中結(jié)晶而得到1-(2-羥基-1-(R)-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(R)-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮，為白色固體。(產(chǎn)率0.14g；79.1％)。熔點158-162℃。HR-MS(ES+)m/z C23H25N5O3計算值([M+H]+)420.2030；測定值420.2035[α]＝+53.3(旋光性＝+0.256；濃度＝4.8mg/mL(MeOH)；X＝589nm)。
實施例15a1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-1-(R)-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 將3-[2-叔丁基-二苯基-硅烷氧基-1-(R)-甲基-乙基]-1-(S)-[1-(2，4-二氯嘧啶-5-基)-乙基]-1-(4-甲氧基苯基)-脲(0.44g，96％；66mmol)(來自上文實施例22d)溶于無水四氫呋喃(1.5mL)并用冰-鹽水浴冷卻。在5分鐘內(nèi)滴加叔丁醇鉀(在四氫呋喃中1.0M；0.80mL；0.80mmol)(Aldrich)。將該混合物在冷卻下攪拌15分鐘且然后除去浴并再持續(xù)攪拌5分鐘。將該反應(yīng)混合物通過硅膠墊過濾并用乙酸乙酯洗脫。通過急驟色譜法純化粗產(chǎn)物(Biotage 40M；30∶70乙酸乙酯-己烷)而得到1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-1-(R)-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)率0.29g；72.8％)。
實施例15b1-(2-羥基-1-(R)-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 419.49將1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-1-(R)-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.28g；0.45mmol)(來自上文實施例23a)和苯胺(0.10mL；1.21mmol)(Aldrich)在甲苯(0.25mL，用分子篩干燥)中的溶液在110℃的油浴中加熱2小時。用乙酸乙酯稀釋該反應(yīng)體系并用水和鹽水洗滌、用無水硫酸鈉干燥并濃縮。通過急驟色譜法純化粗物質(zhì)(Biotage 40L；40∶60乙酸乙酯-己烷)而得到1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-1-(R)-甲基-乙基]-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)率0.23g；73.0％)。該物質(zhì)表現(xiàn)出e.e.～95％。
在50℃下將這種中間體(0.23g；0.32mmol)溶于無水四氫呋喃(1.0mL)并用氟化四丁基銨(在四氫呋喃中1.0M；0.9mL；0.90mmol)(Aldrich)處理2小時。將該反應(yīng)體系冷卻至室溫并濃縮。將殘余物溶于乙酸乙酯并用水(2x)和鹽水洗滌、然后用無水硫酸鈉干燥并濃縮。通過急驟色譜法純化(Biotage 40M；含有1％甲醇的7∶11∶2乙酸乙酯-二氯甲烷-己烷)，隨后從乙酸乙酯-己烷中結(jié)晶而得到1-(2-羥基-1-(R)-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮，為白色固體。(產(chǎn)率0.08g；59.3％)。
熔點195-198℃。HR-MS(ES+)m/z C23H25N5O3計算值([M+H]+)420.2030；測定值420.2032。[α]＝-62.8°(旋光性＝-0.201；濃度＝3.2mg/mL(MeOH)；λ＝589nm)。
實施例161-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙基]-1-(4-甲氧基-苯基)-3-[1-(S)-苯基-乙基]-脲 445.352將[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙基]-(4-甲氧基-苯基)-胺(378mg，1.27mmol)(來自上文實施例1d)和(S)-(-)-α-甲基芐基異氰酸酯(205mg，1.39mmol)(Aldrich)在甲苯(5mL)中的混合物在100℃下攪拌16小時。在冷卻至室溫后，借助于通過硅膠并用己烷-乙酸乙酯(1∶1)洗脫來純化該反應(yīng)混合物而得到1-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙基]-1-(4-甲氧基-苯基)-3-[1-(S)-苯基-乙基]-脲，為兩種可分離的非對映體。較低極性的非對映體(使用己烷-乙酸乙酯1∶1進行薄層色譜法)(產(chǎn)率270mg，47.8％)和較高極性的非對映體(產(chǎn)率284mg，50.3％)。
實施例177-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-[1-(S)-苯基-乙基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮
用叔丁醇鉀(在四氫呋喃中1.0M溶液，0.62mL，0.62mmol)處理冷卻至5℃的1-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙基]-1-(4-甲氧基-苯基)-3-[1-(S)-苯基-乙基]-脲(較低極性的非對映體，250mg，0.56mmol)(來自上文實施例24)在四氫呋喃(5mL)中的溶液。在5℃下攪拌15分鐘并在室溫下再攪拌15分鐘后，用乙酸乙酯(20mL)稀釋反應(yīng)混合物并用水(2×10mL)洗滌且用MgSO4干燥。在減壓條件下蒸發(fā)溶劑而得到7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-[1-(S)-苯基-乙基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮粗品，將其直接用于下一步。(308mg，含有一定量溶劑)。
實施例183-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-7-苯氨基-1-[1-(S)-苯基-乙基]-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 465.560將7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-[1-(S)-苯基-乙基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(308mg，來自0.56mmol)(來自上文實施例25)在苯胺(0.195mL)(Aldrich)中的混懸液在100℃下攪拌3小時。然后將反應(yīng)混合物冷卻至室溫、用甲苯(3mL)稀釋并通過柱色譜法純化(硅膠)，用己烷-乙酸乙酯(1∶1)洗脫而得到3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-7-苯氨基-1-[1-(S)-苯基-乙基]-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。(產(chǎn)率140mg，.53.7％)。
實施例19(±)-N-[6-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-7-氧代-8-苯基-5，6，7，8-四氫-嘧啶并-[4，5-d]嘧啶-2-基]-N-苯基-乙酰胺
479.54向(±)-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(500mg，1.14mmol)(來自上文實施例1g)在吡啶(1mL)(Fisher)中的混懸液中加入乙酐(1.0mL)，隨后一次加入4-(二甲氨基)吡啶(25mg)(Aldrich)。將該反應(yīng)混合物加熱至90℃下5小時，直到通過TLC分析沒有檢測到原料為止。用水使該反應(yīng)混合物猝滅并用乙酸乙酯(3×50mL)提取。用水(10mL)和鹽水(10mL)依次洗滌合并的有機提取物、用無水硫酸鈉干燥、過濾并在減壓下濃縮至得到粗產(chǎn)物，將其通過急驟色譜法純化而得到(±)-N-[6-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-7-氧代-8-苯基-5，6，7，8-四氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-基]-N-苯基-乙酰胺。(產(chǎn)率373mg，68.0％)。
實施例20a反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-環(huán)己胺 向反式-4-氨基環(huán)己醇(5.0g，43.4mmol)(TCI US)在二氯甲烷(100mL)中的溶液中加入咪唑(14.78g，0.22mol)(Aldrich)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯(19.63g，0.13mol)(Avocardo Research Chemicals)。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1天。將其在減壓下濃縮并用乙酸乙酯(100mL)和水(100mL)稀釋殘余物。用1N氫氧化鈉水溶液、水和鹽水洗滌有機層、干燥(MgSO4)、過濾并濃縮至得到反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-環(huán)己胺粗品，將其不經(jīng)進一步純化用于下一步。(產(chǎn)率7.62g，76.5％)。
實施例20b(±)-1-(反式-4-羥基-環(huán)己基)-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮 459.5404在0℃下向反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-環(huán)己胺(500mg，2.20mmol)(來自上文實施例28aa)和三乙胺(1.52mL，10.90mmol)(Aldrich)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中加入20％在甲苯中的光氣溶液(3.2mL，6.50mmol)(Fluka)。將所得混合物攪拌15分鐘，然后過濾并濃縮濾液至得到殘余物，使用庫格爾若蒸餾器將其在110℃下和高度真空中蒸餾而得到反式-4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-環(huán)己基異氰酸酯(485mg)，為無色液體。
將這種中間體異氰酸酯(223mg，0.87mmol)溶于無水四氫呋喃(約3mL)并在-78℃下通過套管加入到(±)-1-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙基]-(4-甲氧基苯基)-胺(204mg，0.67mmol)(來自上文實施例1d)和正丁基鋰(在己烷中2.5M，295μL，0.74mmol)在無水四氫呋喃(15mL)中的溶液中。將所得反應(yīng)混合物攪拌并在2.25小時內(nèi)溫至室溫且然后使其分配在乙酸乙酯與水之間。除去乙酸乙酯層、用硫酸鈉干燥、過濾并濃縮至得到殘余物，將其通過使用硅膠柱和0-40％在己烷中的乙酸乙酯梯度的色譜法純化而得到淡棕色泡沫。然后將該中間體溶于苯胺(3mL)(Aldrich)并將所得溶液在90℃下加熱8小時。冷卻后，將反應(yīng)混合物直接上硅膠柱并通過色譜法純化，其中使用0-50％在己烷中的乙酸乙酯梯度。然后在0℃下將這種純化的中間體溶于20％三氟乙酸在二氯甲烷(5mL)和水(300μL)中的溶液。在0℃下攪拌30分鐘后，使該混合物分配在乙酸乙酯與0.5N氫氧化鈉水溶液之間。通過添加氫氧化鈉固體將水層的pH調(diào)節(jié)至13。然后分離有機相、用硫酸鈉干燥、過濾并濃縮且通過使用0-100％在己烷中的乙酸乙酯的硅膠柱純化所得殘余物而得到產(chǎn)物。將這種純化的產(chǎn)物溶于二氯甲烷并用過量戊烷沉淀而得到(±)-1-(反式-4-羥基-環(huán)己基)-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮，為白色固體。(產(chǎn)率121mg，9％)。HRMS m/z C26H29N5O3計算值([M+H]+)460.2343.測定值460.2347。
實施例21可以通過與本文上述公開類似的方法制備下列化合物實施例21a1-[(1R，3R)-3-羥基-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 實施例21b1-[(1S，3S)-3-羥基-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 實施例21c7-(4-氟-苯氨基)-1-[(1R，3R)-3-羥基-環(huán)戊基)]-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 實施例21d7-(4-氟-苯氨基)-1-[(1S，3S)-3-羥基-環(huán)戊基)]-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性
實施例21f7-(4-氟-苯氨基)-1-(2-羥基-1-(R)-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基苯基)-4-(S)-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 實施例21g3-(4-氯-苯基)-7-(4-氟-苯氨基)-1-(2-羥基-1-(R)-甲基-乙基)-4-(S)-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 實施例21h3-(4-氯-2-氟-苯基)-7-(4-氟-苯氨基)-1-(2-羥基-1-(R)-甲基-乙基)-4-(S)-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 實施例21i3-(4-氯-苯基)-1-(2-羥基-1-(R)-甲基-乙基)-4-(S)-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 實施例21j3-(4-氯-2-氟-苯基)-1-(2-羥基-1-(R)-甲基-乙基)-4-(S)-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 實施例21k3-(4-氯-苯基)-1-(3-羥基-2-(S)-甲基-丙基)-4-(S)-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮手性 抗增殖活性在下面的實施例22和23中證實本發(fā)明化合物的抗增殖活性。這些活性表明本發(fā)明的化合物用于治療癌癥、特別是實體瘤，諸如乳腺、肺、前列腺和結(jié)腸腫瘤，更具體的說為乳腺和結(jié)腸腫瘤。
實施例22激酶試驗為了測定對KDR、FGFR、EGFR和PDGFR活性的抑制作用，使用HTRF(Homogeneous Time Resolved Fluorescence)測定法進行激酶試驗。該測定法描述在A.J.Kolb等的《今日藥物發(fā)現(xiàn)》(Drug Discovery Today)1998，3(7)，p 333中。
在激酶反應(yīng)前，在有活化緩沖液(50mM HEPES，pH7.4、1mM DTT、10％甘油、150mM NaCl、0.1mM EDTA、26mM MgCl2和4mM ATP)存在下活化重組EEE-標記的KDR。將該酶在4℃下保溫1小時。
在96-孔聚丙烯平板(Falcon)中進行激酶活性試驗，其中各孔中總體積為90μL。各孔中含有1μM KDR底物(生物素-EEEEYFELVAKKKK)、1nM活化的KDR和100μM-128μM(1∶5連續(xù)稀釋)范圍內(nèi)的8個試驗濃度之一的測試化合物。在有100mM HEPES，pH7.4、1mM DTT、0.1mMNa2VO4、25mM MgCl2、50mM NaCl(來自KDR儲備溶液)、1％DMSO(來自化合物)、0.3mM ATP(在Km濃度下)和0.02％BSA存在下進行激酶活性試驗。將該反應(yīng)體系在37℃下保溫30分鐘。為了終止KDR反應(yīng)，將72μL反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)入含有18μL展開緩沖液(20mM EDTA、50mM HEPES，pH7.4、0.02％BSA、10nM Eu-標記的抗-pY抗體(終濃度2nM)和100nM鏈霉抗生物素(終濃度20nM))的STOP平板。混合后，將35μL的溶液轉(zhuǎn)入384-孔黑平板(Costar)的兩個孔中并用Wallac Victor5讀出器在615/665nm處讀取。
如上述對KDR活性試驗所述進行FGFR、EGFR和PDGFR活性試驗，但有如下區(qū)別。在室溫下和下列活化緩沖液中將GST-標記的FGFR酶活化1小時100mM HEPES，pH7.4、50mM NaCl、20mM MgCl2和4mMATP。在總體積為90μL的100mM HEPES、1mM DTT、0.4mM MgCl2、0.4mM MnCl2、50mM NaCl、1％DMSO、10μM ATP(對FGFR而言Km＝8.5μM)、0.1mM Na2VO4和0.02％BSA存在下使用1μM底物(生物素-EEEEYFELV)、1.5nM活化的FGFR和測試化合物進行激酶活性試驗。按照與KDR試驗相同的方式進行試驗的剩部分。
使用1μM底物(生物素-EEEEYFELV)、1.5nM EGFR、測試化合物、100mM HEPES，pH7.4、1mM DTT、5mM MgCl2、2mM MnCl2、1％DMSO、0.5μM ATP(EGFR的Km)、0.1mM Na2VO4和0.02％BSA進行EGFR激酶活性試驗。按照與KDR試驗相同的方式進行試驗的剩部分。
使用1μM底物(生物素-EEEEYFELV)、1.0nM PDGFR、測試化合物、100mM HEPES，pH7.4、1mM DTT、5mM MgCl2、2mM MnCl2、1％DMSO、2.3μM ATP(PDGFR的Km)、0.1mM Na2VO4和0.02％BSA進行PDGFR激酶活性試驗。按照與KDR試驗相同的方式進行試驗的剩部分。
根據(jù)一式兩份的數(shù)據(jù)組測定化合物的IC50值并通過使用Excel和與等式Y(jié)＝[(a-b)/{1+(X/c)d]+b的擬合數(shù)據(jù)進行計算，其中a和b為分別在沒有測試抑制劑存在和有無窮大測試抑制劑存在下的酶活性，c為IC50且d為化合物反應(yīng)的希爾常數(shù)。IC50值是在所述測試條件下將酶的活性降低50％的測試化合物濃度。
將上述體外實驗結(jié)果、包括IC50值列在下面的表1中。
表1IC50(μM)-酶抑制試驗
實施例31VEGF和FGF-刺激的HUVBC增殖試驗通過BrdU試驗、使用BrdU試劑盒(Roche Biochemicals 1-647-229)評價本發(fā)明測試化合物在基于細胞的試驗中的抗增殖活性。將人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC，Clonetics CC-2519)在EGM-2(Clonetics CC-3162)培養(yǎng)基中培養(yǎng)并以10000個細胞/孔在96-孔平底平板(Costar 3595)中體積為200μL的EGM-2(Clonetics CC-3162)培養(yǎng)基中接種過夜。在37℃和5％CO2下生長24小時后，通過抽吸緩慢除去保溫培養(yǎng)基并用含有50μg/mL慶大霉素和50ng/mL兩性霉素-B(Clonetics CC-4083)的300μL預(yù)溫?zé)岬腅BM-2(Clonetics CC-3156)洗滌各孔中的內(nèi)含物。隨后再次抽吸剩余的培養(yǎng)基并用160μL/孔缺血清的培養(yǎng)基(補充了1％加熱失活的FBS(CloneticsCC-4102)、50μg/mL慶大霉素和50ng/mL兩性霉素-B(Clonetics CC-4083)、10個單位/mL Wyeth-Ayerst肝素(NDC0641-0391-25)和2mM L-谷氨酰胺(GIBCO 25030-081)的EBM-2)替代。在對細胞進行缺血清24小時后，將20μL在含有2.5％DMSO的缺血清培養(yǎng)基中10X測試濃度的測試化合物加入到適宜的孔中。對照孔含有20μL含有2.5％DMSO的缺血清培養(yǎng)基。將平板放回培養(yǎng)箱內(nèi)2小時。在將細胞與測試化合物一起預(yù)保溫2小時后，加入在缺血清培養(yǎng)基中10X稀釋的測試濃度的20μL生長因子、50ng/mL的FGF或200ng/mL的VEGF(R & D systems 293-VE)。本試驗中FGF的終濃度為5ng/mL且本試驗中VEGF的終濃度為20ng/mL。不含生長因子的對照孔中含有20μL/孔缺血清培養(yǎng)基和與含有生長因子的孔中相同量的BSA。將平板再放回培養(yǎng)箱內(nèi)22小時。
BrdU ELISA在接觸測試化合物24小時后，通過加入已經(jīng)在缺血清培養(yǎng)基中稀釋(1∶100)的20μL/孔的BrdU標記試劑而用BrdU(Roche Biochemicals1-647-229)標記細胞。然后將平板放回到培養(yǎng)箱內(nèi)4小時。通過在紙巾上吸干培養(yǎng)基除去標記培養(yǎng)基。通過將200μL固定/變性溶液加入到各孔中并在室溫下保溫45分鐘固定細胞并使DNA變性。在紙巾上吸干固定/變性溶液并向各孔中加入100μL抗-BrdU-POD且在室溫下將各孔保溫2小時。除去抗體溶液并用300μL PBS將孔各自洗滌3-4次。向各孔中加入100μL TMB底物溶液并將各孔在室溫下保溫5-8分鐘。然后通過加入100μL/孔的1M磷酸終止反應(yīng)。在450nm處與650nm對照波長處讀取平板。通過下列步驟計算各測試化合物的抑制百分比從所有孔中扣除空白(不含細胞)孔的吸光度，然后從1中減去一式兩份的每次測試的平均吸光度除以對照平均值。隨后將終產(chǎn)物乘以100(％抑制＝(1-一式兩份測試的平均吸光度/對照平均值)100)。IC50值為抑制50％BrdU標記的測試化合物濃度且為抑制細胞增殖的測定值。根據(jù)對濃度與抑制百分比的關(guān)系圖的線性回歸確定IC50。IC50值如下表2中所示。
表2VEGF和FGF-刺激的HUVEC增殖試驗的IC50(μM)
實施例24片劑制劑
*化合物A表示本發(fā)明的一種化合物。
制備步驟1.在適宜的混合器中將1、2和3項混合15分鐘。
2.用20％聚乙烯吡咯烷酮K30溶液(第4項)對來自步驟1的粉末混合物制粒。
3.在50℃下干燥來自步驟2的顆粒。
4.使來自步驟3的顆粒通過適宜的研磨設(shè)備。
5.將第5項加入到研磨的制粒步驟4中并混合3分鐘。
6.在適宜的壓片機上壓制來自步驟5的顆粒。
實施例25膠囊劑
*化合物A表示本發(fā)明的化合物。
制備步驟1.在適宜的混合器中將1、2和3項混合15分鐘。
2.加入第4和5項并混合3分鐘。
3.填充入適宜的膠囊。
實施例26注射液/乳劑制劑
*化合物A表示本發(fā)明的化合物。
制備步驟1.溶解第1項于第2項中。
2.將第3、4和5項加入到第6項中并混合至分散，然后勻化。
3.將來自步驟1的溶液加入到來自步驟2的混合物中并勻化至分散液變半透明。
4.使無菌過濾物通過0.2μm濾膜并裝入小瓶。
實施例27注射液/乳劑制劑
*化合物A表示本發(fā)明的化合物。
制備步驟1.溶解第1項于第2項中。
2.將第3、4和5項加入到第6項中并混合至分散，然后勻化。
3.將來自步驟1的溶液加入到來自步驟2的混合物中并勻化至分散液變半透明。
4.使無菌過濾物通過0.2μm濾膜并裝入小瓶。
盡管參照具體和優(yōu)選實施方案解釋了本發(fā)明，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解可以通過常規(guī)實驗和實施本發(fā)明進行改變和修改。因此，本發(fā)明并不限于上述描述，而由待批權(quán)利要求及其等同技術(shù)方案定義。
權(quán)利要求
1.如下通式的化合物或其藥物上可接受的鹽 其中R1選自下列基團H；C1-10烷基；被高達3個基團取代的C1-10烷基，所述的基團選自芳基、環(huán)烷基、雜芳基、雜環(huán)、NR10R11、OR12、SR12、鹵素、COR13、CO2R13、CONR13R14、SO2NR13R14、SOR13、SO2R13、CN和NO2，其中芳基、環(huán)烷基、雜芳基和雜環(huán)基團可以各自獨立地被高達3個基團取代，所述的基團選自NR10R11、OR12、SR12、鹵素、COR13、CO2R13、CONR13R14、SO2NR13R14、SOR13、SO2R13、CN和NO2；芳基；被高達3個基團取代的芳基，所述的基團選自低級烷基、NR10R11、OR12、SR12、鹵素、COR13、CO2R13、CONR13R14、SO2NR13R14、SOR13、SO2R13、CN和NO2；雜芳基；被高達3個基團取代的雜芳基，所述的基團選自低級烷基、NR10R11、OR12、SR12、鹵素、COR13、CO2R13、CONR13R14、SO2NR13R14、SOR13、SO2R13、CN和NO2；雜環(huán)；被高達3個基團取代的雜環(huán)，所述的基團選自低級烷基、NR10R11、OR12、SR12、鹵素、COR13、CO2R13、CONR13R14、SO2NR13R14、SOR13、SO2R13、CN和NO2；C3-10環(huán)烷基；被高達3個基團取代的C3-10環(huán)烷基，所述的基團選自低級烷基、NR10R11、OR12、SR12、鹵素、COR13、CO2R13、CONR13R14、SO2NR13R14、SOR13、SO2R13、CN和NO2；C2-10鏈烯基；被高達3個基團取代的C2-10鏈烯基，所述的基團選自NR10R11、OR12、SR12、鹵素、COR13、CO2R13、CONR13R14、SO2NR13R14、SOR13、SO2R13、CN和NO2；和被高達3個基團取代的C2-10炔基，所述的基團選自NR10R11、OR12、SR12、鹵素、COR13、CO2R13、CONR13R14、SO2NR13R14、SOR13、SO2R13、CN和NO2；R2、R3和R4獨立地選自下列基團組成的組H；鹵素；COR13；CO2R13；CONR13R14；SO2NR13R14；SOR13；SO2R13；CN；和NO2；R5、R6、R7和R8獨立地選自下列基團的組H；低級烷基；被羥基或烷氧基取代的低級烷基；NR15R16；OH；OR17；SR17；鹵素；COR17；CO2R17；CONR17R18；SO2NR17R18；SOR17；SO2R17；和CN；R9選自下列基團的組H； 和COR17；R10和R11獨立地選自下列基團的組H；COR13；CO2R13；CONR13R14；SO2R13；SO2NR13R14；低級烷基；被羥基、烷氧基或NR15R16取代的低級烷基；環(huán)烷基；被羥基、烷氧基、低級烷基或NR15R16取代的環(huán)烷基；雜環(huán)；和被羥基、烷氧基、低級烷基或NR15R16取代的雜環(huán)；或備選地，NR10R11可以形成具有3-7個原子的環(huán)，所述的環(huán)任選包括一個或多個另外的雜原子且任選被一個或多個低級烷基、OR12、COR13、CO2R13、CONR13R14、SOR13、SO2R13和SO2NR13R14組成的組取代；R12選自下列基團的組H；低級烷基；COR13；CONR13R14；被羥基、烷氧基或NR15R16取代的C2-6烷基；環(huán)烷基；被羥基、烷氧基、低級烷基或NR15R16取代的環(huán)烷基；雜環(huán)；和被羥基、烷氧基、低級烷基或NR15R16取代的雜環(huán)；R13和R14獨立地選自下列基團的組H；低級烷基；被羥基、烷氧基或NR15R16取代的C2-6烷基；環(huán)烷基；被羥基、烷氧基、低級烷基或NR15R16取代的環(huán)烷基；雜環(huán)；和被羥基、烷氧基、低級烷基或NR15R16取代的雜環(huán)；或備選地，NR13R14可以形成具有3-7個原子的環(huán)，所述的環(huán)任選包括一個或多個另外的雜原子且任選被一個或多個低級烷基、OR17、COR17、CO2R17、CONR17R18、SO2R17和SO2NR17R18組成的組取代；R15選自下列基團的組H；低級烷基；COR17；和CO2R17；且R16、R17和R18獨立地選自下列基團的組H；和低級烷基；或備選地，NR15R16和NR17R18可以各自獨立地形成含有3-7個原子的環(huán)，所述的環(huán)任選包括一個或多個另外的雜原子；R19和R20獨立地選自下列基團的組H；和低級烷基；且R21選自低級烷基；和被羥基、烷氧基或NR15R16取代的C2-6烷基。
2.權(quán)利要求1所述的通式I的化合物，其中R1選自芳基和被OR12或CONR13R14取代的芳基。
3.權(quán)利要求1或2所述的通式I的化合物，其中R1選自苯基和被OR12或CONR13R14取代的苯基。
4.權(quán)利要求1所述的通式I的化合物，其中R1選自低級烷基和被OR12或CONR13R14取代的C2-6烷基。
5.權(quán)利要求1-4中任意一項所述的通式I的化合物，其中R2為H。
6.權(quán)利要求1-5中任意一項所述的通式I的化合物，其中R3為H。
7.權(quán)利要求1-7中任意一項所述的通式I的化合物，其中R2、R3和R4為H。
8.權(quán)利要求1-5中任意一項所述的通式I的化合物，其中R3為鹵素。
9.權(quán)利要求1-8中任意一項所述的通式I的化合物，其中R9為H。
10.權(quán)利要求1所述的具有如下通式的通式I化合物
11.權(quán)利要求1所述的通式I的化合物，其選自下列化合物的組(±)-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；3-(4-甲氧基-苯基)-4-(R)-甲基-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；3-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；(±)-1，3-雙-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；(±)-3-[3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-7-苯氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-芐腈；和(±)-3-[3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-7-苯氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-苯甲酰胺。
12.權(quán)利要求1的通式I的化合物，其選自下列化合物的組(±)-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；(±)-3-[3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-7-苯氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-芐腈；(±)-3-[3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-7-苯氨基-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-苯甲酰胺；(±)-3-(2-氯-5-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；和1-(2-羥基-1-(S)-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。
13.權(quán)利要求1的通式I的化合物，其選自下列化合物的組1-(2-羥基-1-(R)-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(R)-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；1-(2-羥基-1-(R)-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-7-苯氨基-1-[1-(S)-苯基-乙基]-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；(±)-N-[6-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-7-氧代-8-苯基-5，6，7，8-四氫-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-基]-N-苯基-乙酰胺；和(±)-1-(反式-4-羥基-環(huán)己基)-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。
14.權(quán)利要求1的通式I的化合物，其選自下列化合物的組1-[(1R，3R)-3-羥基-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；1-[(1S，3S)-3-羥基-環(huán)戊基]-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；7-(4-氟-苯氨基)-1-[(1R，3R)-3-羥基-環(huán)戊基)]-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；7-(4-氟-苯氨基)-1-[(1S，3S)-3-羥基-環(huán)戊基)]-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；7-(4-氟-苯氨基)-1-(2-羥基-1-(R)-甲基-乙基)-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；3-(4-氯-苯基)-7-(4-氟-苯氨基)-1-(2-羥基-1-(R)-甲基-乙基)-4-(S)-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；3-(4-氯-2-氟-苯基)-7-(4-氟-苯氨基)-1-(2-羥基-1-(R)-甲基-乙基)-4-(S)-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；3-(4-氯-苯基)-1-(2-羥基-1-(R)-甲基-乙基)-4-(S)-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；3-(4-氯-2-氟-苯基)-1-(2-羥基-1-(R)-甲基-乙基)-4-(S)-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；3-(4-氯-苯基)-1-(3-羥基-2-(S)-甲基-丙基)-4-(S)-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；和3-(4-氯-2-氟-苯基)-1-(3-羥基-2-(S)-甲基-丙基)-4-(S)-甲基-7-苯氨基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮。
15.一種藥物組合物，其包括治療有效量的權(quán)利要求1-14中任意一項的化合物和藥物上可接受的載體或賦形劑。
16.權(quán)利要求15所述的藥物組合物，其中所述的化合物適合于對患有癌癥的患者給藥。
17.權(quán)利要求1-14中任意一項的化合物，用作藥物。
18.權(quán)利要求1-14中任意一項的化合物在制備用于治療和控制癌癥的藥物中的應(yīng)用。
19.權(quán)利要求18所述的應(yīng)用，用于治療和控制乳腺癌、肺癌、結(jié)腸癌或前列腺癌。
20.權(quán)利要求18所述的應(yīng)用，其中所述的癌癥為乳腺癌或結(jié)腸癌。
21.制備權(quán)利要求1的通式I化合物的方法，該方法包括下列步驟a)使通式II的化合物與通式III的苯胺衍生物反應(yīng)， 其中R1、R5、R6、R7和R8如權(quán)利要求1中所定義； 其中R2、R3和R4如權(quán)利要求1中所定義；從而得到如下通式的化合物 其中R9為H；且如果需要，b)使通式Ib的化合物與?；u或酸酐反應(yīng)而得到通式I的化合物，其中R9為 或COR17且其中R17、R19、R20和R21如權(quán)利要求1中所定義；和/或c)如果需要，將通式I的化合物轉(zhuǎn)化成藥物上可接受的鹽。
22.權(quán)利要求21的方法制備的權(quán)利要求1-14中任意一項的化合物。
23.選自下組的化合物(±)-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙基]-(4-甲氧基-苯基)-胺；(±)-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；(±)-{2-氯-5-[1-(4-甲氧基-苯氨基)-乙基]-嘧啶-4-基}-(4-甲氧基-苯基)-胺；(±)-7-氯-1，3-雙-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；(±)-3-[7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-芐腈；(±)-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙基]-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-胺；(±)-7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；(±)-3-[7-氯-3-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-4-甲基-2-氧代-3，4-二氫-2H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-1-基]-芐腈；和(±)-(2-氯-5-甲氧基-苯基)-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙基]-胺。
24.選自下組的化合物(±)-7-氯-3-(2-氯-5-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-苯基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-1-(S)-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；3-[2-叔丁基-二苯基-硅烷氧基-1-(R)-甲基-乙基]-1-(R)-[1-(2，4-二氯嘧啶-5-基)-乙基]-1-(4-甲氧基苯基)-脲；3-[2-叔丁基-二苯基-硅烷氧基-1-(R)-甲基-乙基]-1-(S)-[1-(2，4-二氯嘧啶-5-基)-乙基]-1-(4-甲氧基苯基)-脲；1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-1-(R)-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-(R)-4-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；1-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-1-(R)-甲基-乙基]-7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-4-(S)-甲基-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮；1-[1-(2，4-二氯-嘧啶-5-基)-乙基]-1-(4-甲氧基-苯基)-3-[1-(S)-苯基-乙基]-脲；和7-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-1-[1-(S)-苯基-乙基)-3，4-二氫-1H-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(實施例17)。
25.如上文所述的新化合物、藥物組合物、方法和應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了屬于KDR和FGFR激酶的選擇性抑制劑且對LCK具有選擇性的通式(I)的新嘧啶并化合物，其中R
文檔編號A61P35/00GK1711264SQ200380102848
公開日2005年12月21日 申請日期2003年10月27日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月4日
發(fā)明者A·德爾馬塔克思, M·M·卡巴特, 羅金川, P·L·羅斯曼, 蘇松塞 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司