專利名稱：3，4－二羥基苯甲醛的藥物應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于已知化學(xué)物質(zhì)的藥物應(yīng)用，特別是3，4-二羥基苯甲醛炎的藥物應(yīng)用。
背景技術(shù)：
3，4-二羥基苯甲醛是一種合成或植物提取的已知化合物，其結(jié)構(gòu)式為 專利文獻(xiàn)EP0395441公開(kāi)了一種由3，4-二羥基苯甲醛與其他物質(zhì)的若干化合物構(gòu)成的骨關(guān)節(jié)炎治療劑，若干化合物的藥理作用是抑制白介素1(IL-1)的產(chǎn)生和釋放，以及抑制前列腺素(PG)的釋放，從而使3，4-二羥基苯甲醛應(yīng)用于藥物。
在申請(qǐng)?zhí)枮?3102749.7發(fā)明專利申請(qǐng)中，本申請(qǐng)人涉及了單體3，4-二羥基苯甲醛應(yīng)用于治療角膜瘢痕等眼科疾患和心血管疾患藥品的應(yīng)用。上述應(yīng)用是基于本申請(qǐng)人首先發(fā)現(xiàn)的3，4-二羥基苯甲醛具有抑制結(jié)締組織增生和抑制膠原合成的藥理作用而提出的。
當(dāng)前世界正受嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥(Severe Acute Respiratory Syndrome，簡(jiǎn)稱SARS)的困擾。根據(jù)我國(guó)臨床實(shí)踐表明SARS病人胸部X線檢查有不同程度片狀、瘢片狀浸潤(rùn)陰影或呈網(wǎng)狀改變，說(shuō)明SARS病人肺泡內(nèi)是干的，而間質(zhì)有水腫。公知抗菌素類藥物治療間質(zhì)水腫無(wú)任何效果，通過(guò)適量的激素免疫抑制劑的應(yīng)用可減輕水腫，但藥物毒副作用大、依賴性強(qiáng)，長(zhǎng)期服用將出現(xiàn)藥源性疾病，并同時(shí)降低病人免疫功能。
來(lái)自香港的資料說(shuō)，部分病情嚴(yán)重的SARS患者在康復(fù)后肺部有明顯瘢痕存在。認(rèn)為患者的肺部有異常區(qū)域，最終將會(huì)形成瘢痕組織，并且認(rèn)為大多數(shù)SARS患者都可能存在不同程度的肺部瘢痕。資料說(shuō)，肺部瘢痕是永久性的，還是長(zhǎng)期的，以及瘢痕形成的原因是由于疾病本身造成的，還是由于在治療SARS的過(guò)程中使用抗病毒藥物利巴韋林和類固醇激素并大量吸氧造成的，目前尚不能夠確定，但肺臟中形成的瘢痕將嚴(yán)重影響肺臟轉(zhuǎn)運(yùn)氧氣的功能而影響正常生活的后果是肯定的。內(nèi)地對(duì)于有關(guān)肺部瘢痕的報(bào)告其基本內(nèi)容與香港的資料大致相同。另外，醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)資料也反映出某些一般肺炎和肺結(jié)核病患者的肺部也有瘢痕形成。因此，尋找一種能夠避免、延緩或有效治療SARS病人肺泡間質(zhì)水腫及肺部瘢痕的藥物，對(duì)于提高中國(guó)內(nèi)地SARS患者的治愈率、降低死亡率的奮斗目標(biāo)具有積極作用。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為了解決當(dāng)前對(duì)于SARS肺炎引起的肺泡間質(zhì)水腫及肺部纖維化尚無(wú)有效的、無(wú)毒副作用藥品的技術(shù)問(wèn)題，而提出一種已知化合物的藥物應(yīng)用，所獲得的藥物制劑對(duì)于上述癥狀具有顯著的積極效果。
本發(fā)明提出的一種已知化合物的藥物應(yīng)用是3，4-二羥基苯甲醛作為有效成分在制備治療或予防肺部纖維化的藥物中的應(yīng)用。
3，4-二羥基苯甲醛作為有效成分在制備治療或予防肺間質(zhì)水腫的藥物中的應(yīng)用。
其中肺部纖維化是由嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥和/或一般肺炎和/或肺結(jié)核病引起的。
其中肺間質(zhì)水腫是由嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥和/或一般肺炎和/或肺結(jié)核病引起的。
(一)本發(fā)明獲得的藥物制劑經(jīng)如下藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)證明其具有顯著效果(1)3，4-二羥基苯甲醛對(duì)鹿角菜(Carrageenan)致大鼠胸膜炎的保護(hù)作用。
方法3，4-二羥基苯甲醛肌注劑量為每日1020mg/Kg、40mg/Kg、80mg/Kg，分兩次注入，第一次在胸腔內(nèi)注角叉菜膠(1％，1ml)前半小時(shí)注入(各5mg/Kg、10mg/Kg、20mg/Kg、40mg/Kg)，第二次在注角叉菜膠后4小時(shí)進(jìn)行，次日殺死觀察以下標(biāo)準(zhǔn)a胸水量(ml)，b胸水中白細(xì)胞數(shù)(108)，c胸水中蛋白含量(mg)，d胸水中β-葡萄糖醛酸酶活性(以水解酚酞葡萄糖醛酸鈉μg/hr)e以氫化考的松10mg/Kg、20mg/Kg、30mg/Kg、為陽(yáng)性對(duì)照。
結(jié)果如下20mg-40mg、80mg組有效，10mg組效果不顯著，見(jiàn)表1-4。
表1，肌注80mg組3，4-二羥基苯甲醛對(duì)照 氫考30mg/kg80mg/kg胸水(ml) 6.98±0.19(9)4.63±0.38(15)**5.28±0.37(14)**WBC(108) 6.20±0.49(9)3.26±0.22(15)**4.33±0.49(14)**蛋白(mg) 400.5±20.77(9) 229.7±18.1(15)**295.1±10.66(14)**β-g(mg/ml) 281.1±16.4(9) 160.9±27.5(15)**209.1±21.53(14)**P＜0.05**P＜0.01表2，肌注40mg組對(duì)照 氫考30mg/kg3，4-二羥基苯甲醛40mg/kg胸水(ml) 3.46±0.34(16) 1.37±0.19(13)**2.51±5.31(14)WBC(108) 3.84±0.26(16) 1.86±0.24(13)**1.74±0.19(14)**
蛋白(mg) 182.97±20.54 56.93±8.26(13)**100.3±13.6(14)**β-g(mg/ml) (22) 104.4±16.86(11)130.4±17.99(14)193.76±18.68**(22)*P＜0.05**P＜0.01表3，肌注20mg組對(duì)照 氫考30mg/kg3，4-二羥基苯甲醛20mg/kg胸水(ml) 3.21±0.31(22) 0.98±0.13(12)**2.23±0.45(11)WBC(108) 3.22±0.23(22) 1.51±0.16(12)**1.84±0.22(11)**蛋白(mg) 182.9±20.5(22) 77.34±3.81(11) 178.22±16.9(11)β-g(mg/ml) 173.7±18.7(22) 84.6±15.18(12)**132.99±43.19(11)*P＜0.05**P＜0.0110mg組各項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)照組比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，氫考10mg組WBC及蛋白質(zhì)減少其它兩項(xiàng)也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
表4口服組3，4-二羥基苯 3，4-二羥基苯氫考對(duì)照(19) 甲醛(14)甲醛(13)0.5mg/KG(13)50mg/Kg 25mg/KG胸水(ml) 2.39±0.37**5.97±0.31 1.07±0.14**4.16±0.40WBC(108) 2.26±0.2**3.85±0.18 1.00±0.13**3.84±0.25蛋白(mg) 241.8±31.3**581.3±31.48102.1±13.1**402.3±38.6**β-g 1371±256.1±17.3579.2±6.12**210.2±28.04(mg/ml) 16.74***P＜0.05**P＜0.01試驗(yàn)結(jié)果證明3，4-二羥基苯甲醛能對(duì)抗鹿角菜所致大鼠胸膜炎，說(shuō)明3，4-二羥基苯甲醛有抗炎作用。
(2)3，4-二羥基苯甲醛對(duì)博萊霉素-A6(BLM-A6)有致大鼠肺組織中膠原含量的影響。大鼠以氣管內(nèi)注射6mg/Kg BLM-6，隔天給藥組肌注6mg/Kg 3，4-二羥基苯甲醛，隔天一次，共15次，30天后活殺取肺，測(cè)定羥脯氨酸(HP)含量，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5。
表5，3，4-二羥基苯甲醛對(duì)BLM-A6有致大鼠肺組織中膠元量的影響HP(μg/mg干組織)組別 劑量 SD抑制率％平均值正常對(duì)照0.54 0.073BLM組 0.98 0.323，4-二羥基苯 7.5mg/Kg 0.43 0.13 31甲醛
15/Kg 0.57 0.21 3130/Kg 0.68 0.13 4240/Kg 0.68 0.10 56(3)用家兔角膜成纖維細(xì)胞作傳代培養(yǎng)，測(cè)定3，4-二羥基苯甲醛對(duì)成纖維細(xì)胞膠原合成的影響。試驗(yàn)用14C脯氨酸摻入膠原分子，羥化成羥脯氨酸，分離測(cè)定樣品中14C-羥脯氨酸放射性活性。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表6。
表6用藥組(dpm±標(biāo)準(zhǔn)差)對(duì)照組50μg/ml 100μg/ml 200μg/ml2777.798±454.5411600.917±98.203 1256.966±246.849 1062.880±150.159顯著性測(cè)驗(yàn) P＜0.01 P＜0.01P＜0.01備注 每組5個(gè)孔，每孔1.76×105細(xì)胞1μg/孔14C-羥脯氨酸實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明3，4-二羥基苯甲醛能抑制家兔角膜成纖維細(xì)胞的膠原合成，因而能抑制纖維化。
(4)3，4-二羥基苯甲醛對(duì)實(shí)驗(yàn)性小鼠、大鼠肺纖維化的預(yù)防作用注入BLM-A6后第2天開(kāi)始每天肌內(nèi)注射3，4-二羥基苯甲醛(小鼠20-40mg/kg，大鼠40mg/kg)，模型對(duì)照組注射相同體積的生理鹽水。注入后第30天全部處死，作預(yù)防治療動(dòng)物/對(duì)照動(dòng)物的肺系數(shù)(肺重(g)/體重(g)×100)；肺膠原含量肺泡灌流液中表面活性物質(zhì)含量(總脂和卵磷脂)和成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)活性測(cè)定(第3，7天)以及超微病理形態(tài)觀察，結(jié)果見(jiàn)表7-10。
表7，3，4-二羥基苯甲醛對(duì)小鼠肺纖維化肺系數(shù)的影響(預(yù)防作用)系數(shù)組別動(dòng)物數(shù)(x±SD)(肺重/體重×100)對(duì)照組 7 0.43±0.04模型組 9 0.83±0.263，4-二羥基苯甲醛8 0.74±0.24(20mg/Kg)3，4-二羥基苯甲醛7 0.60±0.09*(40mg/Kg)*P＜0.05與模型組比較。
表8，3，4-二羥基苯甲醛對(duì)小鼠肺纖維化羥脯氨酸肺系數(shù)的影響(預(yù)防作用)
*P＜0.001與模型組比較**P＜0.001與對(duì)照組比較表9，3，4-二羥基苯甲醛對(duì)小鼠肺纖維化中表面活性物質(zhì)含量的影響(預(yù)防作用)TL(x±組別 動(dòng)物數(shù) PC(x±SD) PC/TLSD)對(duì)照組 614.06±3.68 30.37±2.700.46模型組 718.83±5.17 36.26±2.500.523，4-二羥基苯甲醛711.86±3.27*28.26±4.60**0.41(20mg/Kg)3.4-二羥基苯甲醛513.45±2.65*24.80±2.00**0.54(40mg/Kg)TL(mg/g肺)總脂質(zhì)體 PC(mg/g)卵磷脂*P＜0.05與模型組比較**P＜0.01與對(duì)照組比較表10，3，4-二羥基苯甲醛對(duì)大鼠肺泡灌流液中FGF活性的抑制作用(預(yù)防作用)(n＝8)組別3H-Tdr(C/min，x±SD)對(duì)照組2585.8±930.8模型組6616.6±1961.8**3，4-二羥基苯甲醛4242.0±2019.0*(20mg/Kg)*P＜0.05與模型組比較**P＜0.05與對(duì)照組比較(5)3，4-二羥基苯甲醛大鼠實(shí)驗(yàn)性肺纖維化的治療作用BLM-A6注入氣管后第45天，將動(dòng)物分為模型對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)用藥組。每天肌內(nèi)注射3，4-二羥基苯甲醛(49mg/kg)，模型對(duì)照組同一方式注射相同體積生理鹽水。在給予動(dòng)物注射30天后，將動(dòng)物處死，作肺系數(shù)，膠原含量和超微結(jié)構(gòu)觀察，結(jié)果見(jiàn)表11-12。
表11，3.4-二羥基苯甲醛對(duì)大鼠肺纖維化肺系數(shù)的影響(治療作用)組別動(dòng)物數(shù) 肺系數(shù)(x±SD) T對(duì)照組 6 0.64±0.11模型組 121.01±0.04**2.1733，4-二羥基苯甲醛140.72±0.13*治療組*P＜0.001與模型組比較**P＜0.001與對(duì)照組比較表12，3，4-二羥基苯甲醛對(duì)小鼠肺纖維化中羥脯氨酸含量的影響(治療作用)羥脯氨酸含量組別 動(dòng)物數(shù)T(x±SD)
對(duì)照組 6 0.47±0.013，4-二羥基苯甲醛13 0.49±0.125 5.531*治療組模型組 12 0.78±0.160 4.956***P＜0.01與模型組比較**P＜0.001與對(duì)照組比較上述試驗(yàn)資料表明，3，4-二羥基苯甲醛對(duì)肺纖維化具有明顯的預(yù)防和治療作用。
(二)一般藥理作用臨床用3，4-二羥基苯甲醛水溶液的濃度為0.5％，即5mg/ml主藥3，4-二羥基苯甲醛。每次一滴約1/20ml，即0.25mg藥物，全部吸收的話，按體重50Kg折算為0.005mg/KG或5μg/KG的劑量，藥理試驗(yàn)劑量從小到大，至出現(xiàn)反應(yīng)所用劑量均大大高于臨床劑量。
(1)3，4-二羥基苯甲醛對(duì)小鼠神經(jīng)行為的影響昆明小鼠45只分為9個(gè)組，其中1-8組分別靜脈注射1-150mg/KG 3，4-二羥基苯甲醛，第9組注射0.02ml生理鹽水作對(duì)照。注射藥后2小時(shí)觀察小鼠精神及行為反應(yīng)。在劑量75mg/KG以下4個(gè)組，注射后2小時(shí)小鼠精神及行為反應(yīng)均正常，劑量100mg/KG時(shí)小鼠呈現(xiàn)興奮、煩躁不安狀態(tài)，劑量達(dá)150mg/KG時(shí)出現(xiàn)抽搐和休克，反應(yīng)均在5-10分鐘內(nèi)消失，無(wú)一死亡。
(2)3，4-二羥基苯甲醛對(duì)貓血壓、呼吸及心電的影響給體重2-5Kg貓腹腔注射2％戊巴比妥鈉1.5ml/KG，待肌肉松弛完全后，氣管插管，頸總動(dòng)脈插管導(dǎo)入血壓傳感器，設(shè)予置壓120mmHg，股靜脈插管接三通管，聯(lián)接拉力式呼吸傳感器和心電圖肢導(dǎo)聯(lián)鐘式電極并聯(lián)接記錄儀。待穩(wěn)定1小時(shí)后給藥。給藥前描記正常值，給藥后立即記錄并觀察15分鐘，待基線平穩(wěn)后再給下一個(gè)藥物。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果靜注500，1000和2000μg/KG 3，4-二羥基苯甲醛對(duì)麻醉貓血壓，呼吸和心率及心電均無(wú)明顯影響。
(三)毒理試驗(yàn)(1)靜注3，4-二羥基苯甲醛對(duì)小鼠急性毒性試驗(yàn)動(dòng)物選用18-22g昆明小鼠，雌雄各半，隨機(jī)分組。3，4-二羥基苯甲醛用生理鹽水配成1％濃度，0.1N NaOH調(diào)整PH值至6.8。小鼠尾靜脈注射0.7-0.8ml 3，4-二羥基苯甲醛，觀察其毒性反應(yīng)，統(tǒng)計(jì)7天內(nèi)死亡動(dòng)物數(shù)，如有注射24小時(shí)后死亡者即作尸檢及鏡檢。各組存活動(dòng)物靜注3，4-二羥基苯甲醛后均在3-5分鐘出現(xiàn)呼吸急促，豎毛、顫抖、焦躁不安等癥狀，30分鐘后恢復(fù)正常，給藥24小時(shí)至第7天無(wú)一動(dòng)物死亡。
按寇氏法計(jì)算3，4-二羥基苯甲醛靜脈注射的LD50＝375.638mg/Kg，其95％可信限為372.30-379.05mg/Kg。
(2)小鼠腹腔注射“3，4-二羥基苯甲醛”急性毒性試驗(yàn)動(dòng)物選用18-22g昆明小鼠，雌雄各半，隨機(jī)分組。3，4-二羥基苯甲醛用生理鹽水配成1.2％濃度，0.1N NaOH調(diào)整PH值至6.8。小鼠腹腔注射0.4-0.8ml 3，4-二羥基苯甲醛生理鹽水溶液，觀察其毒性反應(yīng)，統(tǒng)計(jì)給藥后7天內(nèi)死亡動(dòng)物數(shù)，如有注射24小時(shí)后死亡者即作尸檢及鏡檢。各組存活動(dòng)物在腹腔注射3，4-二羥基苯甲醛后均在10分鐘出現(xiàn)呼吸急促，顫抖、焦躁不安等癥狀，30-60分鐘后恢復(fù)正常，給藥24小時(shí)至第7天無(wú)一動(dòng)物死亡。
按寇氏法計(jì)算3，4-二羥基苯甲醛腹腔注射的LD50＝428.2mg/Kg，其95％可信限為400.7-455.7mg/Kg(3)3，4-二羥基苯甲醛慢性毒性試驗(yàn)體重110～150g Wistar大鼠80只，隨機(jī)分成4組，每組20～23只，雌雄各半。每組分別每日腹腔注射下列藥物I組 3，4-二羥基苯甲醛100mg/KgII組 3，4-二羥基苯甲醛50mg/KgIII組3，4-二羥基苯甲醛5mg/KgIV組 磷酸緩沖液 1ml/100g連續(xù)注射三個(gè)月，三個(gè)月后一半動(dòng)物進(jìn)行血常規(guī)、生化指標(biāo)及病理各項(xiàng)檢查，其余動(dòng)物繼續(xù)飼養(yǎng)觀察三個(gè)月，再進(jìn)行上述各項(xiàng)指標(biāo)檢查。
A、三個(gè)月慢性毒性1.體重增長(zhǎng)情況各組雄性動(dòng)物體重增長(zhǎng)均比同組雌性動(dòng)物快。同一性別動(dòng)物在給藥組中，I組體重增長(zhǎng)比IV組慢，II，III組與IV組則無(wú)差別。
2.死亡率各組死亡的動(dòng)物經(jīng)尸檢發(fā)現(xiàn)，II，III、IV組均系感染致死。I組除個(gè)別動(dòng)物感染致死外，其他均嚴(yán)重營(yíng)養(yǎng)不良致死的。因此，可以認(rèn)為II，III兩組動(dòng)物的死亡與藥物無(wú)關(guān)。
3.血常規(guī)檢查血細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)、白細(xì)胞分類、肝功能、腎功能(血清尿素氮)、骨髓象。
4.主要臟器病理切片檢查I、II、III三組均未見(jiàn)到與藥物作用有關(guān)的病理改變，與對(duì)照組的第IV組無(wú)差別。
結(jié)論上述學(xué)常規(guī)、肝、腎功能指標(biāo)各組數(shù)值均在正常范圍內(nèi)，骨髓象均屬正常，病理切片檢查未發(fā)現(xiàn)與藥物作用有過(guò)的病理改變。動(dòng)物體重增長(zhǎng)減慢，分析死亡原因可能是長(zhǎng)期大量腹腔注射藥物后對(duì)腹腔直接刺激抑制進(jìn)食及影響消化功能引起的。
B、六個(gè)月慢性毒性方法，觀察指標(biāo)同上。
結(jié)論從體重增加來(lái)看，I組＞II、III組，原來(lái)第三個(gè)月體重小的I組增長(zhǎng)較快，這是因?yàn)橥Ｋ幒髣?dòng)物進(jìn)食及消化功能恢復(fù)正常，且在這期間各組動(dòng)物無(wú)一死亡，各項(xiàng)檢查用藥各組均與對(duì)照組無(wú)差別，基本均在正常范圍內(nèi)。
3，4-二羥基苯甲醛大劑量長(zhǎng)期腹腔給藥可引起直接刺激影響動(dòng)物進(jìn)食及消化功能，造成體重下降，甚至死亡。停藥后即可恢復(fù)。
各項(xiàng)檢查包括血常規(guī)、肝功能、腎功能、骨髓以及各臟器病理切片檢查，均未發(fā)現(xiàn)與藥物有關(guān)毒性反應(yīng)及病理改變。證明3，4-二羥基苯甲醛是安全的。
C、3，4-二羥基苯甲醛對(duì)犬長(zhǎng)期毒性驗(yàn)的毒理學(xué)觀察將3，4-二羥基苯甲醛用生理鹽水配制成133mg/10ml的溶液，采用靜脈注射途徑給藥，每日一次，每周給藥5天，上午9點(diǎn)定時(shí)給藥。實(shí)驗(yàn)分三組同時(shí)進(jìn)行，即對(duì)照組4只，雌雄各半，停藥次日各處死1只。低劑量組4只，雌雄各半，停藥次日全部處死。高劑量組6只，雌雄各半，停藥次日各處死2只。對(duì)照組及高劑量組剩余動(dòng)物留作恢復(fù)期觀察。
結(jié)果①癥狀和體征給藥期間實(shí)驗(yàn)犬精神好，活躍，反應(yīng)敏捷，鼻部濕潤(rùn)油亮。各組犬之毛發(fā)光澤，無(wú)皮毛紊亂現(xiàn)象。但低劑量組一條雌犬在給藥20次前后，出現(xiàn)片狀脫毛，直至給藥結(jié)束未愈，留取患處皮膚送檢，病理報(bào)告為；未見(jiàn)嗜伊紅細(xì)胞浸潤(rùn)及霉菌感染，可見(jiàn)少量炎細(xì)胞，毛根未壞可再生。食欲好，二便正常。3，4-二羥基苯甲醛對(duì)靜脈無(wú)刺激性，未見(jiàn)血栓性靜脈炎形成，后肢注射給藥所用的小隱靜脈一直通暢。
②體重變化對(duì)照組，低劑量組和高劑量組給藥結(jié)束時(shí)平均體重比給藥前分別增加1.1，1.2和1.3公斤。
③血液學(xué)檢查給藥前、中、后血常規(guī)(白細(xì)胞、血色素和白細(xì)胞分類)和血小板檢查均在正常范圍內(nèi)波動(dòng)。同期比較，各組間無(wú)明顯差異。給藥前，三組動(dòng)物白細(xì)胞計(jì)數(shù)組間值接近，但都比正常值稍低，因系采用機(jī)器計(jì)數(shù)，推測(cè)儀器引起誤差的可能性大。尿常規(guī)觀察尿中蛋白，白細(xì)胞，紅細(xì)胞，上皮和管型的出現(xiàn)情況。除高劑量組一條犬(♂3)給藥結(jié)束后尿中蛋白呈現(xiàn)(+)外，其他動(dòng)物各期觀察指標(biāo)均屬正常。肝功能觀察給藥前、中、后谷丙轉(zhuǎn)氨酶(SFPT)，麝香草酚濁度試驗(yàn)(TTT)和黃疸指數(shù)(II)指標(biāo)的改變。正常值分別是7-24u，5u以下和5以下。對(duì)照組，低劑量組犬三次檢查各項(xiàng)指標(biāo)都在正常范圍，高劑量組TTT和II亦是，但該組SGPT值在給藥半程時(shí)3條犬的測(cè)定值稍高，組平均值為25.5±6.1u，至給藥結(jié)束時(shí)6條犬全部超過(guò)正常值，平均值為34.7±7.6u，說(shuō)明隨著總劑量的加大，肝細(xì)胞損傷有所加重。高劑量組給藥中期與給藥結(jié)束時(shí)的SGPT組均值與對(duì)照組和低劑量組比較，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05或P＜0.01)。
④腎功能血尿素氮(BUN)的正常值為6-22mg％，各組動(dòng)物除高劑量一條犬(♂3)在給藥結(jié)束后BUN升至25mg％外，余均波動(dòng)在正常范圍。
⑤心電圖檢查三組實(shí)驗(yàn)犬給藥前和末次給藥后測(cè)定心電圖，顯示心律和心電圖波形均屬正常。
⑥理學(xué)檢查大體在停藥后次日處死的10條犬中，僅在高劑量組一條雄犬(♂5)睪丸有異常，左側(cè)正常大小(12克)而右側(cè)睪丸只及左側(cè)體積、重量的1/3(4克)；位置居高，接近小腹部，但其外形正常，可能屬于未能下將之隱睪。心、肝、脾、腎、腎上腺、卵巢、睪丸重量與體重之比在正常范圍。
鏡下睪丸高劑量組雄性犬睪丸切片見(jiàn)精子生成呈現(xiàn)中度或高度障礙，曲精管上皮細(xì)胞層次減少，低劑量組顯輕度障礙。卵巢5條雌犬卵巢切片均可見(jiàn)到各級(jí)卵泡發(fā)育及黃體形成，未受藥物影響。肝肝細(xì)胞有濁腫，灶性肉芽腫性肝炎。胃高低劑量組各有一犬胃粘膜腺上皮壁細(xì)胞比例增高。心、脾、小腸、胰、腎上腺、大腦、淋巴腺未見(jiàn)病理學(xué)改變。
結(jié)論3，4-二羥基苯甲醛對(duì)犬長(zhǎng)期毒性結(jié)果表明，在劑量和用藥時(shí)間比療程長(zhǎng)6-9倍的條件下，其毒性靶器官按損傷程度依次為睪丸、肝臟和腎臟，其它組織器官未受藥物影響。受累器官損傷輕重與劑量呈正相關(guān)。除睪丸精子生成受到明顯抑制作用外，肝腎的損傷程度較輕。根據(jù)我們對(duì)多種藥物測(cè)試的經(jīng)驗(yàn)，上述改變是可逆的，在停藥后的30天觀察期內(nèi)，應(yīng)可部分或全部的恢復(fù)正常。
3，4-二羥基苯甲醛慢性毒性試驗(yàn)的全過(guò)程，還證實(shí)了該藥具有量效關(guān)系以及停藥后組織損傷的可逆性過(guò)程。
(四)致突試驗(yàn)(1)鼠傷寒沙門氏菌致突變?cè)囼?yàn)菌株TA97，TA98為移碼型突變株，TA100，TA102為堿基置換型突變株。3，4-二羥基苯甲醛配成4％的溶液冰箱備用。試驗(yàn)前再稀釋成1000μg/01ml板，800μg/01ml板，400μg/01ml板，200μg/01ml板，100μg/01ml板。每次現(xiàn)用現(xiàn)配。
結(jié)果試驗(yàn)中所選擇的五個(gè)測(cè)試濃度，當(dāng)加大到1000μg/皿時(shí)，TA97菌株已出現(xiàn)有明顯的抑菌現(xiàn)象，TA100也有弱的抑制現(xiàn)象。在本實(shí)驗(yàn)的條件下，除最大劑量有抑菌外，其它四個(gè)被檢濃度，所測(cè)試四個(gè)菌株未發(fā)現(xiàn)有致突變作用。
(2)哺乳動(dòng)物培養(yǎng)細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組染色體畸變率無(wú)差別。實(shí)驗(yàn)組與陽(yáng)性對(duì)照組染色體畸變率差別顯著。苯并芘(BaP)經(jīng)S9活化之后能引起染色體畸變率明顯增加，而3，4-二羥基苯甲醛對(duì)染色體畸變率無(wú)影響。結(jié)論3，4-二羥基苯甲醛對(duì)家兔角膜成纖維細(xì)胞染色體無(wú)影響。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1從天然植物丹參提取，提取方法將丹參水煮，后用酒精提取，純化，獲得微細(xì)薄片狀3，4-二羥基苯甲醛，物理化學(xué)參數(shù)如下1.元素分析C 60.88％ H 4.35％ O 34.77％，2.分子量1383.UV λmax231，280，31244.熔點(diǎn)mp154-155.5℃5.IR υcm 3334，3250，2878，2824，1650，1602，1539，1149，1300，1194用生理鹽水按常規(guī)方法配制成水針劑，為無(wú)色或微黃色的澄明液體，含量范圍40mg/10ml，pH3.5-5.0。采用靜脈滴注途徑給藥，劑量100～500毫克/每天。
實(shí)施例2人工合成3，4-二羥基苯甲醛，胡椒醛與五氯化磷反應(yīng)后獲得白色或淺黃色晶體。物理化學(xué)參數(shù)如下1.元素分析C 60.88％ H 4.35％ O 34.77％，2.分子量1383.UV λmax231，280，31244.熔點(diǎn)mp154-155.5℃5.IR υcm 3334，3250，2878，2824，1650，1602，1539，1149，1300，1194用生理鹽水按常規(guī)方法配制成水針劑，為無(wú)色或微黃色的澄明液體，含量范圍40mg/10ml，pH3.5-5.0。采用靜脈滴注途徑給藥，劑量100～500毫克/每天。
權(quán)利要求
1.3，4-二羥基苯甲醛的藥物應(yīng)用，其特征在于3，4-二羥基苯甲醛作為有效成分在制備治療或予防肺部纖維化的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中肺部纖維化是由嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥和/或一般肺炎和/或肺結(jié)核病引起的。
3.3，4-二羥基苯甲醛的藥物應(yīng)用，其特征在于3，4-二羥基苯甲醛作為有效成分在制備治療或予防肺間質(zhì)水腫的藥物中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的用途，其中肺間質(zhì)水腫是由嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥和/或一般肺炎和/或肺結(jié)核病引起的。
全文摘要
本發(fā)明屬于已知化學(xué)物質(zhì)的藥物應(yīng)用，特別是3，4－二羥基苯甲醛的藥物應(yīng)用，具體是3，4－二羥基苯甲醛作為有效成分在制備治療或預(yù)防肺部纖維化和治療或預(yù)防肺間質(zhì)水腫的藥物中的應(yīng)用，肺部纖維化和肺間質(zhì)水腫是由嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥和/或一般肺炎和/或肺結(jié)核病引起的。經(jīng)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)、藥理作用實(shí)驗(yàn)、毒理試驗(yàn)等動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明3，4－二羥基苯甲醛對(duì)肺部纖維化和肺間質(zhì)水腫具有顯著的治療和預(yù)防效果，并且無(wú)毒副作用、無(wú)致突反應(yīng)。
文檔編號(hào)A61P31/00GK1565431SQ03130020
公開(kāi)日2005年1月19日 申請(qǐng)日期2003年6月12日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月12日
發(fā)明者楊純正, 邵曉楓, 王彩云, 劉述文, 熊冬生, 彭暉, 齊靜, 許元富, 楊銘, 范冬梅, 王金宏 申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液學(xué)研究所