專(zhuān)利名稱(chēng)：山楂有效部位及提取方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥制藥領(lǐng)域，具體涉及山楂有效部位及提取方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
山楂(Crataegus pinnatifida)屬于薔薇科，是常見(jiàn)的中草藥之一。近年來(lái)對(duì)于山楂屬植物的研究集中在山楂葉方面，與山楂果實(shí)相比，山楂葉具有資源廣泛，收獲量大，有效成分含量高等特點(diǎn)。研究人員通過(guò)對(duì)山楂葉的化學(xué)成分、藥理藥效、臨床應(yīng)用及其制劑的全方位研究，證明了山楂葉具有活血化淤、宣通心肺、理氣舒絡(luò)的功效，臨床用于治療胸悶憋氣、心悖健忘、眩暈耳眠及冠心病心絞痛、高血脂癥及腦動(dòng)脈供血不足等癥，并具有安全無(wú)毒作用的特點(diǎn)。
過(guò)去一直認(rèn)為山楂葉的活性部位為其中的山楂葉總黃酮類(lèi)成分，因此現(xiàn)有產(chǎn)品均以山楂葉總黃酮作為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，如浙江東方制藥有限公司生產(chǎn)的益心酮片及北京第四制藥廠生產(chǎn)的復(fù)心片。
現(xiàn)有技術(shù)提取山楂葉總黃酮的方法一般為使用大孔吸附樹(shù)脂層析方法，黃酮類(lèi)化合物可以吸附在大孔吸附樹(shù)脂柱上，而得到總黃酮，或者進(jìn)一步使用聚酰胺精制，應(yīng)用紫外法測(cè)定總黃酮含量為80％以上(專(zhuān)利號(hào)91111834.9)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于對(duì)山楂葉進(jìn)行進(jìn)一步深入研究，提供一種活性成份含量高，更為合理、有效的山楂有效部位提取物。
本發(fā)明公開(kāi)的山楂有效部位提取物是從山楂葉中提取的含有山楂總黃酮類(lèi)化合物和酚酸類(lèi)化合物的提取物，提取物有效部位含量在80％-99.9％，有效部位中酚酸類(lèi)化合物含量占50～90％，總黃酮類(lèi)化合物含量占10～40％。
所述的山楂總黃酮類(lèi)化合物包括牡荊素葡萄糖苷、牡荊素鼠李糖苷和金絲桃苷等。
所述的山楂酚酸類(lèi)化合物包括咖啡酸，咖啡?？鼘幩?，咖啡酰蘋(píng)果酸、咖啡酰蘇阿糖酸等。
本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問(wèn)題是公開(kāi)上述山楂有效部位提取物的制備方法。本發(fā)明公開(kāi)的山楂有效部位提取物的制備包括下列步驟山楂葉粗粉直接通過(guò)稀醇或稀酮提取，原料與提取液比例為1∶5-1∶20(重量體積比)，提取液40～60℃減壓濃縮，放置沉淀，除去葉綠素等雜質(zhì)，濃縮液上大孔吸附樹(shù)脂柱層析，先用水洗脫，收集水洗液，水液用濃鹽酸調(diào)至pH1～2，此酸性水溶液再上大孔吸附樹(shù)脂柱層析，最后用20％～50％稀醇或稀酮洗脫，該洗脫部液減壓、濃縮，噴霧干燥，得黃色粉末，即得。
制備工藝流程圖見(jiàn)圖1。
本發(fā)明所述的稀醇或稀酮選自稀甲醇、稀乙醇或稀丙酮等，濃度為50％～90％。本發(fā)明所采用的大孔吸附樹(shù)脂可選自D101、D520、D4006、H103、AB-8、ZTC-1或NKA-II等型號(hào)。兩次大孔樹(shù)脂層析所選擇的大孔吸附樹(shù)脂的型號(hào)可以相同或不同，選擇不同型號(hào)的大孔吸附樹(shù)脂效果更好些，如先選擇D101大孔吸附樹(shù)脂層析，再選用AB-8大孔吸附樹(shù)脂層析。
本發(fā)明所要解決的再一技術(shù)問(wèn)題是公開(kāi)上述山楂有效部位提取物在制備治療用于中風(fēng)后癱瘓、冠心病、高血壓、腦栓塞、高血脂等心腦血管疾病的預(yù)防和治療藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明山楂有效部位提取物可作為藥物的活性成份，制成醫(yī)學(xué)上可接受的各種制劑，用于中風(fēng)后癱瘓、冠心病、高血壓、腦栓塞、高血脂等心腦血管疾病的預(yù)防和治療。
本發(fā)明所述制劑包括注射液，注射用粉針劑，片劑，沖劑、膠囊和滴丸等。
特別是本發(fā)明提取物可用于靜脈注射液的制備。靜脈注射液由以下成分組成(重量/體積比)山楂有效部位提取物0.4～1.0％，藥用堿0.2～1.0％和藥用輔料組成。
其中所述的藥用堿可采用碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀和亞硫酸氫鈉中的一種或者數(shù)種組合。
所述的藥用輔料為氯化鈉、苯甲酸、吐溫-60、土溫-80、山梨醇、甘油和丙二醇中的一種或數(shù)種組合。
用本發(fā)明山楂有效部位提取物制成制劑，進(jìn)行有關(guān)毒性藥理和藥效試驗(yàn)1.急性毒性試驗(yàn)用Wistar健康小鼠，采用口服和尾靜脈注射兩種給藥方式，測(cè)定山楂有效部位的半數(shù)致死量(LD50)口服為1898±117mg/kg，腹腔注射為1225±98mg/kg。
2.對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血的保護(hù)作用采用小鼠斷頸和結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈的方法，復(fù)制急性腦缺血模型。結(jié)果表明山楂有效部位三個(gè)劑量(2、4、8mg/kg)靜注給藥，均可顯著延長(zhǎng)小鼠斷頸后的喘息時(shí)間，分別比空白對(duì)照組延長(zhǎng)了10.21％、12.35％和14.99％，而且三個(gè)劑量組均明顯增加小鼠斷頸后張口呼吸的次數(shù)，分別比空白對(duì)照組增加36.73％、39.25％和37.40％。該有效部位三個(gè)劑量組均能顯著延長(zhǎng)雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎致缺血小鼠的存活時(shí)間，延長(zhǎng)率分別為65.43％、59.78％和70.15％。提示該有效部位對(duì)腦缺血有保護(hù)作用。
3.對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈血栓形成的影響取Wistar大鼠，按體重隨機(jī)分組，每組10只。對(duì)照組大鼠靜脈注射生理鹽水，給藥組靜脈注射該有效部位2、4、8mg/kg。實(shí)驗(yàn)時(shí)腹腔注射20％烏拉坦1g/kg麻醉，仰臥位固定，分離頸總動(dòng)脈，將實(shí)驗(yàn)性體內(nèi)血栓形成儀的刺激電極和溫度探頭掛于頸總動(dòng)脈上，給藥后10min開(kāi)始刺激，刺激強(qiáng)度為2mA，刺激5min后關(guān)閉刺激開(kāi)關(guān)，取下電極，3min后調(diào)節(jié)溫控表至零位，記錄動(dòng)脈血栓形成時(shí)間，結(jié)果表明，大鼠靜注本品2、4、8mg/kg后，與對(duì)照組比較，動(dòng)脈血栓形成時(shí)間分別推遲40.5％(p＜0.001)、59.8％(p＜0.001)、98.2％(p＜0.001)。表明該有效部位能顯著推遲大鼠實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈血栓形成時(shí)間。
4.對(duì)犬冠脈流量和心肌耗氧量的影響犬30只，分為5組，每組6只。冠狀動(dòng)脈左前降支(LAD)阻斷生理鹽水組、LAD阻斷普萘洛爾組和LAD阻斷給藥組(2、4、8mg/kg)。將犬用3％戊巴比妥鈉(30mg/kg)麻醉，固定于手術(shù)臺(tái)上，分離股靜脈，插入靜脈插管，經(jīng)靜脈緩慢輸入生理鹽水，以備給藥，氣管插管行人工呼吸。分離頸總動(dòng)脈插管以測(cè)動(dòng)脈血壓。于左第4～5肋間開(kāi)胸，分離冠狀動(dòng)脈左前降支上部，放置電磁流量計(jì)探頭，記錄血流量。頸總動(dòng)脈插管記錄頸總動(dòng)脈血壓。針狀電極插入犬四肢皮下，用八道生理記錄儀記錄II導(dǎo)聯(lián)ECG，測(cè)量心率。實(shí)驗(yàn)結(jié)束取心臟稱(chēng)重。術(shù)后穩(wěn)定10min后，測(cè)定每搏冠脈流量，經(jīng)股動(dòng)脈抽取動(dòng)脈血，經(jīng)心臟冠脈竇抽取靜脈血，分別做血?dú)夥治觯瑴y(cè)定動(dòng)脈血氧分壓和冠脈竇血氧分壓，給藥后10，30，60，90，120min，重復(fù)測(cè)定上述諸指標(biāo)。計(jì)算冠脈血流量、心肌耗氧量和心肌攝氧率。結(jié)果表明，山楂有效部位中、高劑量組可顯著減少心肌耗氧量和心肌攝氧率(p＜0.01)。
5.降血脂作用鵪鶉喂以高脂飼料同時(shí)灌服山楂有效部位60d后，測(cè)定血脂含量和觀察動(dòng)脈粥樣硬化程度。結(jié)果表明，該部位能明顯降低血清中TC、TG、LDL-C水平和TC/HDL-C比值，也可使主動(dòng)脈斑塊面積和泡沫細(xì)胞減少，肝重量系數(shù)降低，肝脂肪變性程度減輕。表明該部位具有明顯的降血脂和預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的作用。
上述試驗(yàn)證明本發(fā)明山楂有效部位提取物安全、毒性低，對(duì)腦缺血有保護(hù)作用，可顯著推遲大鼠實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈血栓形成的時(shí)間，可顯著減少心肌耗氧量和心肌攝氧率，明顯降低血脂和預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化。
本發(fā)明山楂有效部位提取物與現(xiàn)有山楂提取物相比，具有下述優(yōu)點(diǎn)1.現(xiàn)有技術(shù)有效部位主要特征是山楂葉總黃酮，其制備工藝也主要是針對(duì)黃酮類(lèi)成分，而忽略了其中的另一活性成分酚酸類(lèi)成分(當(dāng)然，現(xiàn)有技術(shù)得到的產(chǎn)品可能含有少量的酚酸類(lèi)成分，但是酚酸類(lèi)成分在其中含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于黃酮類(lèi)成分)。
2.因?yàn)槌煞值牟町?，現(xiàn)有的山楂葉制劑水溶性不好，也不便于制成注射制劑，劑型主要為口服片劑、滴丸等。本發(fā)明則可以制成包括注射劑、凍干粉針、口服等多種劑型。
3.本發(fā)明得到的有效部位在藥理作用方面，對(duì)于中風(fēng)后癱瘓、冠心病、高血壓、腦栓塞、高血脂等心腦血管疾病的預(yù)防和治療效果顯著優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)的產(chǎn)品。


圖1山楂有效部位提取物制備工藝流程2山楂有效部位提取物HPLC圖譜其中各峰分別表示A.咖啡酸B.咖啡?？鼘幩酑.咖啡酰蘋(píng)果酸D.咖啡?？鼘幩嵫苌顴.咖啡酰蘇阿糖酸F.牡荊素葡萄糖苷G.牡荊素鼠李糖苷H.金絲桃苷
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1取山楂葉100kg，粉碎成粗粉，用80％乙醇2000升滲濾提取，合并提取液，提取液40～60℃減壓濃縮至約100升，室溫放置24h，離心除去葉綠素等雜質(zhì)。上清液在已預(yù)處理過(guò)的80kg D101大孔吸附樹(shù)脂上吸附層析，先用約500升水洗脫，水洗液用6N鹽酸(HCl)酸化至pH＝1，將該水溶液再次經(jīng)AB-8大孔吸附樹(shù)脂層析，水洗脫至弱酸性，再用約200升20％丙酮-水洗脫。20％丙酮洗脫部分低溫減壓濃縮至約50升，噴霧干燥，得到黃色粉末，即為有效部位。得量為0.8公斤，得率為0.8％(以山楂葉原料計(jì))。經(jīng)HPLC定量分析，總酚酸含量為63.5％，總黃酮含量為21.3％。
實(shí)施例2取山楂葉100kg，粉碎成粗粉，用50％乙醇2000升分3次回流提取，合并提取液，提取液40～60℃減壓濃縮至約100升，室溫放置24h，離心除去葉綠素等雜質(zhì)。上清液在已預(yù)處理過(guò)的80kgZTC-1大孔吸附樹(shù)脂上吸附層析，先用約650升水洗脫，水洗液用6N鹽酸(HCl)酸化至pH＝2，將該水溶液再次經(jīng)D101大孔吸附樹(shù)脂層析，水洗脫至弱酸性，再用約300升50％乙醇-水洗脫。50％乙醇洗脫部分低溫減壓濃縮至約30升，用堿調(diào)節(jié)pH為近中性，噴霧干燥，得到黃色粉末，即為有效部位(鹽)。得量為0.95公斤，得率為0.95(以山楂葉原料計(jì))。經(jīng)HPLC定量分析，總酚酸含量為73.8％，總黃酮含量為15.9％。
實(shí)施例3 片劑制備將本發(fā)明有效部位100g(實(shí)施例1方法制得)，淀粉80g，糊精5g混合均勻，加入10％淀粉漿制軟材，用14目尼龍篩網(wǎng)制粒，60～70℃通風(fēng)干燥，16目篩整粒，加硬脂酸鎂1.5g，羧甲基淀粉鈉5g混勻，壓制成1000片，包衣即得。每片含有效部位100mg。成人口服每日2～5次，每次1～10片。
實(shí)施例4 膠囊制備取本發(fā)明有效部位100g(實(shí)施例2方法制得)，加入淀粉78g，硬脂酸鎂2g混勻，直接用全自動(dòng)膠囊填充機(jī)填充成1000粒，拋光即得。成人口服每日2～5次，每次1～10片。
實(shí)施例5 滴丸制備取本發(fā)明有效部位10g(實(shí)施例1方法制得)，投入32g加熱熔融的聚乙二醇6000中，攪拌至溶解，轉(zhuǎn)移至貯液瓶中，密閉并保溫在80～90℃，調(diào)節(jié)滴丸機(jī)液滴定量閥門(mén)，由上往下滴入10～15℃的液體石蠟中，共制1000粒，將形成的滴丸瀝干并擦除液體石蠟，干燥即得。每粒含有效部位10mg。成人口服每日2～5次，每次5～20粒。
實(shí)施例6口服液制備取本發(fā)明有效部位20g(實(shí)施例1方法制得)，與蜂蜜300g、蔗糖50g、苯甲酸鈉2g及蒸餾水300ml混合，加熱至85～90℃，攪拌使溶解，保溫30min，濾過(guò)，濾液加水稀釋至1000ml，攪勻，灌封(每支10ml)，滅菌即得。成人口服每日2～5次，每次1～5支。
實(shí)施例7顆粒劑制備取本發(fā)明有效部位10g(實(shí)施例2方法制得)、糊精20g、蔗糖100g及乙醇適量，混勻，過(guò)10目篩制成顆粒，于60～70℃干燥，整粒，分裝即得，每包重5g，成人口服每日2～5次，每次1～5包。
實(shí)施例8 注射液制備取本發(fā)明有效部位100g(實(shí)施例2方法制得)，加注射用水適量使溶解，加配制量的0.02％的活性炭攪拌5～10min，濾過(guò)，濾液稀釋至10升左右，加氯化鈉調(diào)節(jié)滲透壓至等滲，調(diào)節(jié)pH7.5～8.0，超濾，灌封成1000支(10ml/支)。100℃30min滅菌即得。成人靜脈或肌肉注射給藥，每日1～2次，每次1～5支。
實(shí)施例9 粉針劑制備取本發(fā)明有效部位100g(實(shí)施例2方法制得)，加注射用水及稀氫氧化鈉適量使溶解，加配制量的0.02％的活性炭攪拌5～10min，濾過(guò)，濾液稀釋至1升，調(diào)節(jié)pH6.5～7.8，超濾，噴霧干燥，干粉無(wú)菌分裝即得。每支100mg，臨用前加注射用水適量使溶解，用氯化鈉輸液250～500ml稀釋后緩慢靜脈滴注。成人每日1～2次，每次1～5支。
權(quán)利要求
1.一種山楂有效部位提取物，其特征在于該提取物是從山楂葉中提取的含有山楂總黃酮類(lèi)化合物和酚酸類(lèi)化合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山楂有效部位提取物，其特征在于其中所述的有效部位含量在80％-99.9％，有效部位中酚酸類(lèi)化合物含量占50～90％，總黃酮類(lèi)化合物含量占10～40％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的山楂有效部位提取物，其特征在于其中所述的總黃酮類(lèi)化合物包括牡荊素葡萄糖苷、牡荊素鼠李糖苷和金絲桃苷。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的山楂有效部位提取物，其特征在于其中所述的酚酸類(lèi)化合物包括咖啡酸，咖啡?？鼘幩?，咖啡酰蘋(píng)果酸和咖啡酰蘇阿糖酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山楂有效部位提取物的制備方法，其特征在于該方法包括下列步驟山楂葉粗粉直接通過(guò)稀醇或稀酮提取，原料與提取液重量體積比為1∶5-1∶20，提取液40～60℃減壓濃縮，放置沉淀，除去葉綠素等雜質(zhì)，濃縮液上大孔吸附樹(shù)脂柱層析，先用水洗脫，收集水洗液，水液用濃鹽酸調(diào)至pH1～2，此酸性水溶液再上大孔吸附樹(shù)脂柱層析，最后用20％～50％稀醇或稀酮洗脫，該洗脫部液減壓、濃縮，噴霧干燥，即得黃色粉末。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的山楂有效部位提取物的制備方法，其特征在于其中所述的稀醇或稀酮選自稀甲醇、稀乙醇或稀丙酮等，濃度為50％～90％。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的山楂有效部位提取物的制備方法，其特征在于其中所述的大孔吸附樹(shù)脂選自D101、D520、D4006、H103、AB-8、ZTC-1或NKA-II。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的山楂有效部位提取物的制備方法，其特征在于其中所述的兩次大孔樹(shù)脂層析所選擇的大孔吸附樹(shù)脂的型號(hào)為相同或不同。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山楂有效部位提取物在制備治療用于中風(fēng)后癱瘓、冠心病、高血壓、腦栓塞、高血脂等心腦血管疾病的預(yù)防和治療藥物中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于其中所述的藥物的劑型包括注射液，注射用粉針劑，片劑，沖劑、膠囊或滴丸。
全文摘要
本發(fā)明涉及山楂有效部位及提取和應(yīng)用。該山楂有效部位提取物是從山楂葉中提取的含有山楂總黃酮類(lèi)化合物和酚酸類(lèi)化合物的提取物。所述的提取物是將山楂葉粗粉用稀醇或稀酮提取，提取液濃縮，經(jīng)兩次大孔吸附樹(shù)脂柱層析純化后獲得。本發(fā)明山楂有效部位提取物活性成分純度高，采用HPLC定性、定量檢測(cè)，可用于中風(fēng)后癱瘓、冠心病、高血壓、腦栓塞、高血脂等心腦血管疾病的預(yù)防和治療。
文檔編號(hào)A61K9/20GK1565464SQ0312942
公開(kāi)日2005年1月19日 申請(qǐng)日期2003年6月20日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月20日
發(fā)明者薛秀芳 申請(qǐng)人:薛秀芳