專利名稱：1-庚醇在制備治療急性和慢性腦血管痙攣藥品中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物用途發(fā)明領(lǐng)域，尤其是涉及1-庚醇在制備治療急性和慢性腦血管痙攣藥品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
1-庚醇(1-heptanol)(化學(xué)分子式CH3(CH2)6OH，分子量C7H16O＝116.20)為無色液體，有芳香氣味，能與乙醚和乙醇混合，微溶于水。比重0.8187(25/4℃)，熔點-34.6℃，沸點175.8℃，折光率1.4224(25℃)，閃點170°F。
1-庚醇的通常用途有兩種1、有機中間體，溶劑，香料；2、縫隙連接阻斷劑，用于減少細(xì)胞間的物質(zhì)傳導(dǎo)，主要用于心臟、胚胎、腫瘤等研究。
目前缺乏有效治療腦血管痙攣(CVS)的藥物，現(xiàn)有的藥物主要是鈣離子拮抗劑(如尼莫地平等)，該類藥物僅有預(yù)防腦血管痙攣形成的作用，對已形成的腦血管痙攣療效不滿意，尤其對慢性腦血管痙攣沒什么作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供1-庚醇的新用途，即在制備治療急性和慢性腦血管痙攣藥品中的應(yīng)用，它能有效抑制急性和慢性腦血管痙攣。
1-庚醇在治療急性和慢性腦血管痙攣的作用機理為1-庚醇通過降低縫隙連接(GJ)的通透性，或關(guān)閉部分縫隙連接通道，抑制離子流、第二信使分子、電流在細(xì)胞間傳遞，從而減少參與收縮的平滑肌細(xì)胞數(shù)量，抑制平滑肌細(xì)胞收縮。
為了更好地理解本發(fā)明的實質(zhì)，下面以動物實驗和結(jié)果來證明1-庚醇的用途。
(一)材料與方法一、體外實驗1.試劑與儀器氧合血紅蛋白(OxyHb)、1-庚醇(1-heptanol，heptanol)，5-羥色胺(5-HT)購自西格瑪(Sigma)公司，其余試劑為國產(chǎn)分析純。
1-庚醇溶媒為乙醇。文中藥物濃度均指浴槽中的終濃度。張力換能器及生理記錄儀均為國產(chǎn)。
2.離體基底動脈環(huán)的制備新西蘭大白兔(由江西醫(yī)學(xué)院動物部提供)共16只，重2.5～3.0kg，雌雄各半。動脈注射空氣處死動物后，立即斷頭取腦，置入4℃的克氏(Krebs)液中，同時通入混合氣體(95％O2和5％CO2)，在顯微鏡下分離基底動脈，去除周圍的蛛網(wǎng)膜，將其剪成3～4mm的動脈環(huán)，共取64個動脈環(huán)，用隨機數(shù)字表法分組。用穿鋼絲法去除內(nèi)皮，再用直徑0.1mm的不銹鋼絲穿入并懸掛于盛有20ml克氏液的浴槽中，通入混合氣體，溫度維持在37.0±0.5℃，pH值為7.4～7.5。每20min更換一次液體(除加試劑后需連續(xù)觀察變化)。鋼絲下端固定，上端連于張力換能器，用生理記錄儀記錄血管環(huán)張力變化。保持400mg的前負(fù)荷，穩(wěn)定90min后，加入40mol/L氯化鉀(KCl)溶液200μl，取反應(yīng)良好的血管環(huán)用于實驗，每次添加藥物量≤200μl，累計不超過1ml。
3.實驗方法為證實已除內(nèi)皮細(xì)胞，所有血管環(huán)均先用5-羥色胺(10-5mol/L)致其收縮，再加入乙酰膽堿(10-4mol/L)，證實收縮無變化后，方繼續(xù)下列實驗。
(1)實驗組分處理組和預(yù)處理組1-庚醇處理組(n＝16)先加入10-4mol/L氧合血紅蛋白或60mmol/L K+，使血管環(huán)收縮，記錄兩者最大收縮值，穩(wěn)定2～3min后，從低濃度到高濃度(10-4～10-2mol/L)累積加入1-庚醇，記錄10min內(nèi)各濃度舒張幅度。并將其分別與處理前最大收縮值相除，得到舒張率(R)，繪制濃度-反應(yīng)曲線。
1-庚醇預(yù)處理組(n＝20)先將血管環(huán)用10-4mol/L氧合血紅蛋白或60mmol/L K+作用達(dá)最大值，沖洗并恢復(fù)基線穩(wěn)定1h，再分別用2×10-4、3×10-4、5×10-4mol/L 1-庚醇作用10min，并記錄10min內(nèi)各濃度對血管靜張力的影響。隨后，加入10-4mol/L氧合血紅蛋白或60mmol/L K+記錄最大收縮值。并將3×10-4mol/L濃度的每分鐘收縮值(共5min)與處理前最大收縮值相比，繪制時間-收縮反應(yīng)曲線，與未處理組同時間內(nèi)反應(yīng)曲線相比較，觀察1-庚醇對氧合血紅蛋白引起收縮的時相改變。
(2)對照組分未處理組和溶媒組未處理組(n＝5)僅10-4mol/L氧合血紅蛋白或60mmol/L K+作用于血管環(huán)，不使用1-庚醇處理或預(yù)處理，記錄30min內(nèi)的反應(yīng)曲線。
溶媒對照組(n＝6)方法同實驗組，但僅用溶解1-庚醇所需濃度的等量乙醇處理或預(yù)處理血管環(huán)。
二、體內(nèi)實驗1.材料新西蘭大白兔(由江西醫(yī)學(xué)院動物部提供)共23只，雌雄各半，7-8個月齡，體重2.5-3.0公斤。
2.試劑與儀器1-庚醇購自西格瑪公司，照影劑歐乃派克(OMNIPAQUE)(350mg/ml)為丹麥生產(chǎn)，其余試劑為國產(chǎn)分析純。數(shù)字減影血管造影機(DSA)為日本島津產(chǎn)；5F導(dǎo)管為特魯默(Terumo)(日本)公司生產(chǎn)；高壓注射器馬克(MARK)五型(V PLUS)，為麥德萊德(MEDRAD)(美國)公司生產(chǎn)。
3.兔二次蛛網(wǎng)膜下腔出血模型的建立用3％戊巴比妥鈉麻醉(1ml/kg)后，用6號針行枕大孔穿刺，見清亮腦脊液流出后，緩慢注入自體非抗凝血0.5ml/kg，立即將兔頭低30度，持續(xù)5min。次日，依同法注血，建立二次蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)模型。
4.兔全腦血管造影兔麻醉后仰臥于操作臺上，切開皮膚，分離股動脈，將5F導(dǎo)管插入后，在透視下將其送至主動脈弓左鎖骨下動脈開口處，導(dǎo)管連接高壓注射器，以1ml/s(50PSI的壓力)，推注造影劑8ml，并攝片(6楨/秒)。分別在顯影的基底動脈的兩端、中點及中點與兩端的中點取5處測量血管直徑，求均數(shù)記為基底動脈直徑(D)。
5.實驗分組將兔隨機分為實驗組和對照組。
(1)實驗組又分為A組(n＝7)，即動脈給藥組(處理組)當(dāng)天(Day0)行全腦血管造影，記錄正?；讋用}直徑(D0A)，第一天(Day1)枕大池注血0.5ml/kg，30min后行全腦血管造影，記錄急性期基底動脈痙攣直徑(D1A)。立即動脈給1-庚醇0.2mmol/kg，10min后再次行腦血管造影，記錄急性期藥物處理后血管直徑(D1A’)。第二天(Day2)重復(fù)每一天(Day1)操作(注血、動脈給藥)，但不造影。第七天(Day7)行腦血管造影，記錄藥物處理后慢性期痙攣血管直徑(D7A)。
B組(n＝7)，即池內(nèi)給藥組(預(yù)處理組)當(dāng)天(Day0)行全腦血管造影，記錄正?；讋用}直徑(D0B)，第一天(Day1)枕大池給1-庚醇0.02mmol/kg，10min后枕大池注血0.5ml/kg，30min后行全腦血管造影，記錄預(yù)處理后急性期痙攣基底動脈直徑(D1B’)。第二天(Day2)重復(fù)第一天(Day1)操作，但不造影。第七天(Day7)行腦血管造影，記錄預(yù)處理后慢性期痙攣血管直徑(D7B)。
(2)對照組(n＝9)，即假處理組方法同實驗組，也分動脈給藥和池內(nèi)給藥組，但藥物用生理鹽水代替。記錄動脈給藥組注血前正?；讋用}直徑(D0a)，痙攣急性期血管直徑(D1a)，假處理后急、慢性期基底動脈直徑(D1a’，D7a)。池內(nèi)給藥組注血前正?；讋用}直徑(D0b)，假處理后急、慢性期基底動脈直徑(D1b’，D7b)。
(二)結(jié)果一、體外實驗1.氧合血紅蛋白對基底動脈環(huán)有明顯收縮作用，加入氧合血紅蛋白后，動脈環(huán)立即收縮，在2min內(nèi)即可達(dá)最大收縮值的80％左右，至5～6min時達(dá)到峰值，并可持續(xù)穩(wěn)定30min以上(見圖1a)。
2.60mmol/L K+對動脈環(huán)的收縮作用強烈，1min即可達(dá)最大收縮值，并可持續(xù)穩(wěn)定15min。
3.1-庚醇處理組10-4～10-2mol/L1-庚醇可以阻斷10-4mol/L氧合血紅蛋白和60mmol/L K+引起的動脈環(huán)收縮，其舒張強度呈濃度依賴關(guān)系(見圖2)。1-庚醇在10-4mol/L時即有舒張作用，而10-3～10-2mol/L時舒張作用強烈，可完全逆轉(zhuǎn)氧合血紅蛋白所引起的血管收縮(見圖1b)。另外，相同濃度的1-庚醇對10-4mol/L氧合血紅蛋白和60mmol/L K+的舒張幅度有所差別，對氧合血紅蛋白的阻斷作用更加明顯，當(dāng)濃度為5×10-4～10-3時，兩者差異有顯著意義(P＜0.01，見圖2)。
4.1-庚醇預(yù)處理組5×10-4mol/L 1-庚醇預(yù)處理血管環(huán)后，能明顯抑制10-4mol/L氧合血紅蛋白和60mmol/L K+所引起的血管環(huán)收縮(P＜0.01，表1)。低濃度(≤2×10-4mol/L)1-庚醇則作用不明顯(表1)。介于兩濃度之間的3×10-4mol/L1-庚醇預(yù)處理的血管環(huán)，對高K+引起的收縮無影響，但能抑制氧合血紅蛋白引起的收縮(表1)。該濃度1-庚醇預(yù)處理后的收縮時相顯示，氧合血紅蛋白引起的收縮幅度與未處理組相比有明顯下降，但對整個收縮反應(yīng)過程無影響(見圖3)。
表1 heptanol預(yù)處理組用heptanol預(yù)處理前后動脈環(huán)對OxyHb和K+致痙的張力變化(單位克**表示預(yù)處理前后有差異，p＜0.01hepheptanol)heptanol(mol/L)2×10-43×10-45×10-4K+2.06±0.372.17±0.33 2.06±0.23**hep+K+2.25±0.522.05±0.30 1.53±0.31**OxyHb 1.70±0.331.72±0.43**1.77±0.38**hep+OxyHb 1.80±0.231.17±0.31**0.74±0.30**5.每次實驗經(jīng)充分洗脫后，血管環(huán)的反應(yīng)性可完全恢復(fù)。
6.當(dāng)1-庚醇濃度在5×10-4mol/L以下時，對正常血管環(huán)靜張力無影響。
7.溶媒對照組和未處理組各反應(yīng)曲線無差異。排除了相應(yīng)濃度的乙醇或克氏液可能對氧合血紅蛋白和高K+引起血管環(huán)收縮的影響。
二、體內(nèi)實驗1.A組、B組和對照組注血前正?；讋用}直徑(D0)三組間無顯著差異(P＞0.05)。
2.成功建立兔二次蛛網(wǎng)膜下腔出血模型(見圖4)。對照組的動脈給藥組中，枕大池注血后30min基底動脈明顯痙攣，D0a與D1a有顯著差異(P＜0.001，表2)；給生理鹽水后基底動脈痙攣無明顯變化，D1a’與D1a無顯著差異(P＞0.05)；第七天基底動脈痙攣更明顯，D7a與D1a有顯著差異(P＜0.01，表2)；對照理組的池內(nèi)給藥組中，枕大池預(yù)先給予生理鹽水后再注血，急性期基底動脈痙攣明顯，D1b’與D0b有顯著差異(P＜0.001，表3)；第7d基底動脈痙攣更明顯，D7b與D1b’有顯著差異(P＜0.01，表3)。
3.動脈內(nèi)注入縫隙連接(GJ)阻斷劑1-庚醇能明顯緩解SAH引起的急性、慢性CVS(見圖5)。在動脈給藥組中，枕大池注血后30min基底動脈明顯痙攣，D1A與D0A有顯著差異(P＜0.001，表2)；動脈給藥后基底動脈明顯擴(kuò)張，D1A’與D1A有顯著差異(P＜0.001，表2)；第七天基底動脈痙攣不明顯，D7A與D0A無顯著差異(P＞0.05)，與注血后30min急性痙攣的基底動脈直徑(D1A)相比有明顯擴(kuò)張，D7A與D1A有顯著差異(P＜0.01，表2)。
表2動脈給藥對急、慢性基底動脈痙攣直徑的影響(單位mm)D0 D1 D1’ D7動脈給藥組0.722±0.094*0.150±0.144*’+’**0.677±0.133+0.622±0.263**對照組(生理鹽水) 0.703±0.159*0.204±0.159*’**0.210±0.135 0.056±0.081***痙攣急性期與正?；讋用}直徑相比有顯著差異(p＜0.001)，+動脈給heptanol后10min與痙攣急性期基底動脈直徑相比有顯著差異(p＜0.001)，**痙攣慢性期與痙攣慢性期基底動脈直徑相比有顯著差異(p＜0.01).D0正?；讋用}直徑，D1急性期基底動脈痙攣直徑，D1’動脈給藥后急性期血管直徑，D7動脈給藥后慢性期血管直徑。
4.1-庚醇池內(nèi)預(yù)處理能顯著抑制二次蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)后急性、慢性腦血管痙攣(CVS)的形成(見圖6)。池內(nèi)給藥組中，枕大池預(yù)先給予1-庚醇后再注血，急性期基底動脈痙攣不明顯，D1B’與D0B無顯著差異(P＞0.05，表3)；次日再次給藥、注血，第七天基底動脈直徑雖稍有縮小，但D7B與D0B或D1B’相比，無顯著差異(P＞0.05，表3)。
表3 池內(nèi)預(yù)處理對急、慢性基底動脈痙攣直徑的影響(單位mm)D0 D1’ D7池內(nèi)預(yù)處理組0.631±0.206+0.555±0.053+0.522±0.184+對照組(生理鹽水)0.703±0.159*0.225±0.143*’**0.056±0.081***假處理后痙攣急性期與正?；讋用}直徑相比有顯著差異(p＜0.001)，**假處理后痙攣慢性期與痙攣慢性期基底動脈直徑相比有顯著差異(p＜0.01)，+池內(nèi)給heptanol后急、慢性期基底動脈直徑與正常基底動脈直徑相比無顯著差異(p＞0.05).D0正?；讋用}直徑，D1’池內(nèi)給藥后急性期血管直徑，D7池內(nèi)給藥后慢性期血管直徑.
5.動脈給藥組及預(yù)處理組治療后，急性、慢性期基底動脈直徑間無顯著差異，與對照組比較，有顯著差異。動脈給藥組與對照組二次蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)后30min治療前急性期基底動脈直徑(D1)間無差異，D1A與D1a間差異無顯著性(P＞0.05)；動脈給藥組較池內(nèi)預(yù)處理組治療后急性期血管直徑(D1’)擴(kuò)張明顯，但差異無顯著性(P＞0.05)；池內(nèi)預(yù)處理組D1B’與假處理組D1b’有顯著差異(P＜0.001)；SAH后第七天慢性期基底動脈直徑D7間有差異，假處理組D7a與動脈給藥組D7A和假處理組D7b與預(yù)處理組D7B差異有顯著性(P＜0.001)，但預(yù)處理組D7B與動脈給藥組D7A差異無顯著性(P＞0.05)。
綜上所述，本發(fā)明經(jīng)體外實驗證實，縫隙連接阻斷劑1-庚醇能顯著抑制氧合血紅蛋白引起的動脈環(huán)持續(xù)收縮；體內(nèi)實驗證實，動脈注入1-庚醇對實驗動物的急、慢性腦血管痙攣有顯著治療作用，池內(nèi)預(yù)先注入1-庚醇能有效抑制急、慢性腦血管痙攣的形成。


圖1a為對照組，氧合血紅蛋白對血管環(huán)的致痙作用紀(jì)錄原圖；圖1b為處理組，不同濃度1-庚醇對氧合血紅蛋白致痙的抑制作用紀(jì)錄原圖；
圖2為1-庚醇處理組，不同濃度1-庚醇對氧合血紅蛋白和K+致痙的抑制作用；圖3為1-庚醇預(yù)處理組，氧合血紅蛋白引起血管環(huán)的收縮-反應(yīng)曲線圖；圖4為對照組腦血管造影片(箭頭所示為基底動脈)。A正?；讋用}B注血后30min急性期痙攣基底動脈CDay7慢性期痙攣基底動脈圖5為動脈給藥組腦血管造影片(箭頭所示為基底動脈)。A正?；讋用}B注血后30min急性期痙攣基底動脈C動脈給藥后急性期基底動脈DDay7動脈給藥后慢性期基底動脈圖6為池內(nèi)預(yù)處理組腦血管造影片(箭頭所示為基底動脈)。A正?；讋用}B池內(nèi)預(yù)處理后急性期基底動脈CDay7池內(nèi)預(yù)處理后慢性期基底動脈。
具體實施例方式
下面結(jié)合實施例并對照附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
實施例用本技術(shù)領(lǐng)域公知的方法，以乙醇為溶媒，制成1-庚醇注射液。
權(quán)利要求
1.1-庚醇在制備治療急慢性腦血管痙攣藥品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及1－庚醇在制藥領(lǐng)域中的新用途，即1－庚醇在制備治療急慢性腦血管痙攣藥品中的用途。通過動物實驗證實了1－庚醇在治療急性和慢性腦血管痙攣都有效。該物質(zhì)通過降低縫隙連接的通透性，或關(guān)閉部分縫隙連接通道，抑制離子流、第二信使分子、電流在細(xì)胞間傳遞，從而減少參與收縮的平滑肌細(xì)胞數(shù)量，抑制平滑肌細(xì)胞收縮。
文檔編號A61K31/045GK1486688SQ03129308
公開日2004年4月7日 申請日期2003年6月12日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月12日
發(fā)明者洪濤, 汪陽, 蔣麗萍, 高子云, 江志群, 辜斌, 遲海波, 洪 濤 申請人:洪濤, 洪 濤