專利名稱：包括葛根素和山楂葉的藥用組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種主要由葛根素和山楂葉或山楂葉總黃酮制成的藥物組合物及其制備方法和用途，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
2、背景技術(shù)心腦血管疾病是危害人類生命和健康的最主要的疾病，是導(dǎo)致死亡的第一殺手，具有高發(fā)病率、高死亡率、高致殘率、高復(fù)發(fā)率的特點(diǎn)。據(jù)有關(guān)調(diào)查報(bào)告顯示，我國(guó)每年死于心腦血管疾病的患者有300多萬人，占我國(guó)每年總死亡人數(shù)的50％，而患病幸存下來的75％也不同程度地喪失勞動(dòng)能力，4％重殘。特別是其發(fā)病和死亡的年齡日益年輕化，使得如何有效地防治心腦血管疾病成為人們高度關(guān)注的問題。又因心腦血管疾病患者的治療具有重復(fù)、持續(xù)用藥的特點(diǎn)，而化學(xué)藥物的毒副作用大，易產(chǎn)生抗藥性，因此迫切需要研發(fā)療效顯著的中藥新藥。
心腦血管疾病包括冠心病、心絞痛、心肌梗塞、瘀血型肺心病、缺血性腦病、腦血栓、高血壓、高血脂等。這些疾病的主要發(fā)病原因是動(dòng)脈硬化造成管腔狹窄、管道阻塞，從而導(dǎo)致心腦供血不足，引起頭沉、頭暈、頭痛、胸悶等癥狀，嚴(yán)重者可導(dǎo)致腦中風(fēng)及心肌梗塞的發(fā)生。心腦缺血后影響能量代謝，繼發(fā)乳酸堆積、鈣超載、自由基損傷等多種變化。多靶點(diǎn)逆轉(zhuǎn)或改善這些變化，提高綜合療效是藥物治療的重要目標(biāo)。
葛根素是由豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi的干燥根中提取、分離得到的8-β-D-葡萄吡喃糖-4′，7-二羥基異黃酮，已收載入國(guó)家藥典2005年版二部688頁(yè)，其中規(guī)定含C21H20O9不得少于97.0％。葛根素目前已有多家生產(chǎn)上市。用葛根治療一般疾病，早在我國(guó)古代的醫(yī)學(xué)著作《本經(jīng)》、《傷寒雜病記》和《醫(yī)學(xué)大辭典》中就有記載。葛根素用于心血管系統(tǒng)具有增加冠脈血流量，改善心肌供應(yīng)，降低血小板聚集及血液粘度，抗心律失常，降血脂，降血糖等作用，廣泛用于冠心病、心絞痛、肺心病、心肌梗死等的治療。用于腦血管系統(tǒng)具有擴(kuò)張腦血管，增加腦血流量，改善腦循環(huán)等作用，用于腦梗塞、腦缺血、眩暈等的治療。并且，葛根素毒性小、安全范圍廣、療效好，極具臨床應(yīng)用價(jià)值。其結(jié)構(gòu)式如下
山楂葉為薔薇科植物山里紅(Crataegus pinnatifida Bge.var.majorN.E.Br)或山楂(Crataegus pinnatifidaBge.)的干燥葉。山楂葉中的黃酮類化合物如蘆丁、金絲桃苷、槲皮素、牡荊素等，是其主要的有效成分，具有擴(kuò)張血管、增加冠脈血流量以及心肌缺血和腦缺血保護(hù)等多種藥理活性，具有降壓、降血脂和強(qiáng)心作用，能改善心臟活力和興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)等。大量研究表明，山楂葉總黃酮還具有抗氧化功能，對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的氧化損傷具有明顯的保護(hù)作用。研究還表明，黃酮類成分中牡荊素化合物具有良好的抗癌作用。中國(guó)藥典2005年版一部575～576頁(yè)，益心酮片項(xiàng)下，有山楂葉提取物的標(biāo)準(zhǔn)。其中規(guī)定，山楂葉提取物按干燥品計(jì)算，含總黃酮以無水蘆丁(C27H30O16)計(jì)，不得少于80.0％；含金絲桃苷(C21H20O12)，不得少于0.40％。已有益心酮(山楂葉提取物)原料、片、滴丸、軟膠囊上市。
目前，利用葛根素和山楂葉相互作用、配伍組方，用于制備治療心腦血管疾病的藥物，尚未見報(bào)道。
3、發(fā)明內(nèi)容為了滿足臨床需要，擴(kuò)大用藥品種，本發(fā)明提供了一種治療心腦血管疾病的藥物組合物及其制備方法和用途，該發(fā)明組合物主要由葛根素和山楂葉制成，用于心腦血管疾病的治療，效果顯著。
上述藥物組合物，其原料藥的重量份數(shù)為葛根素40～1000份、山楂葉400～10000份；優(yōu)選為葛根素100～400份、山楂葉1000～4000份；進(jìn)一步優(yōu)選為葛根素200份、山楂葉2000份。
上述藥物組合物中的山楂葉可以用適宜的溶劑和方法提取制備得到提取物，提取溶劑優(yōu)選水和乙醇，提取方法可以為浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法或連續(xù)提取法。所得提取物再與葛根素以及藥學(xué)上可接受的輔料混合制成任一制劑。所得提取物的主要有效成分為山楂葉總黃酮，含量不應(yīng)低于50％，最好不低于80％。葛根素為上市化學(xué)原料藥，也可以直接從市場(chǎng)上購(gòu)買。
本發(fā)明提供了一種優(yōu)選的山楂葉提取工藝，具體如下取山楂葉，烘干粉碎，加60％乙醇回流提取三次，每次1小時(shí)，加乙醇8倍量，合并提取液，濾過，濾液減壓回收乙醇至相對(duì)密度為1.04～1.06(60℃)的濃縮液，加等量水稀釋后，用1/2倍量的石油醚(60～90℃)振搖提取，棄去石油醚液，水層用乙酸乙酯振搖提取，提取液減壓回收乙酸乙酯并濃縮至干，再加入適量水溶解，加于已處理好的聚酰胺柱(30～60目，乙醇濕法裝柱，乙醇適量預(yù)洗，再用水洗至無醇味，備用)上，先用2倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，然后分別用3倍柱體積的60％乙醇、75％乙醇、95％乙醇和無水乙醇洗脫，收集各洗脫液，合并，回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度約1.08～1.12的濃縮液，噴霧干燥，得山楂葉提取物。
通過本工藝制備的山楂葉提取物的得率為2.0～2.5％，山楂葉總黃酮的含量不低于80.0％，金絲桃苷的含量不低于0.40％。
山楂葉除采用上述方法提取外，還可以通過以下方法提取制備，但不僅限于下述方法方法一取山楂葉，烘干粉碎，加70％乙醇回流提取二次，第一次加12倍量乙醇，第二次加10倍量乙醇，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.08～1.12，加3倍藥材量的水，靜置24小時(shí)，抽濾，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.05～1.08，加于已處理好的聚酰胺柱(30～60目，乙醇濕法裝柱，乙醇適量預(yù)洗，再用水洗至無醇味，備用)上，先用2倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，再用3倍柱體積的75％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至無醇味，真空干燥，得山楂葉提取物。
通過本工藝制備的山楂葉提取物得率為2.0～3.0％，山楂葉總黃酮含量不低于60.0％，金絲桃苷含量不低于0.30％。
方法二取山楂葉，切碎，加水煮沸提取二次，每次2小時(shí)，過濾，合并濾液，濾液用高速離心機(jī)離心20min，400rpm。過濾上清液，并加熱濃縮(加熱溫度在70℃左右)至相對(duì)密度為1.05～1.08。濃縮液冷卻后加入等體積乙醇，放入冰箱內(nèi)2h后，5000r/min離心30min。過濾，濾液濃縮(加熱溫度為70℃左右)至無醇味，加于已處理好的大孔樹脂柱(D101型，乙醇濕法裝柱，乙醇適量預(yù)洗，再用水洗至無醇味，備用)上，先用2倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，然后用3倍柱體積的80％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.04～1.06(60℃)的濃縮液，噴霧干燥，得山楂葉提取物。
通過上述工藝制備的山楂葉提取物得率為2.5～3.5％，總黃酮含量不得少于50.0％，金絲桃苷含量不得少于0.20％。
本發(fā)明藥物組合物還可以用山楂葉主題代替山楂葉投料制備，根據(jù)提取物相對(duì)于藥材的得率計(jì)算，本發(fā)明藥物組合物的原料重量份數(shù)為葛根素40～1000份、山楂葉總黃酮5～300份；優(yōu)選為葛根素100～400份、山楂葉總黃酮15～120份；進(jìn)一步優(yōu)選為葛根素200份、山楂葉總黃酮30～60份。
上述藥物組合物中，山楂葉總黃酮中總黃酮的含量不低于50％，最好不低于80％；金絲桃苷的含量不低于0.2％，最好不低于0.4％。
以上組成是按重量份作為配比的，在生產(chǎn)時(shí)可按照相應(yīng)比例增大或減小，如大規(guī)模生產(chǎn)可以千克為單位，或以噸為單位，小規(guī)模生產(chǎn)也可以克為單位，重量可以增大或者減小，但各組成之間的重量配比不變。以上組成，若以克為單位，可以制成100～1000次用量的制劑，如作為注射劑，可制成1000支，每次用量1～10支。如作為片劑，可制成1000片，每次服用1～10片。
以上重量配比是經(jīng)過科學(xué)篩選得到的，對(duì)于特殊病人，可以相應(yīng)調(diào)整組成的比例，增加或者減少不超過100％。
本發(fā)明的另一目的在于提供一種治療心腦血管疾病的藥物組合物，尤其適用于治療冠心病、心絞痛、高血壓、腦血管病、偏頭痛、糖尿病及微血管病變等疾病的治療，效果顯著。
本發(fā)明藥物組合物可以加一種或多種藥學(xué)上可接受的載體，以口服或腸胃外給藥的方式施用于需要這種治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成常規(guī)的固體制劑，如片劑、膠囊、軟膠囊、分散片、咀嚼片、口崩片、口服液、顆粒、滴丸、緩釋片、緩釋膠囊、控釋片、控釋膠囊，制成液體制劑如水或油懸浮劑或其它液體制劑如糖漿等；用于腸胃外給藥時(shí)，可將其制成注射用的溶液、水或油懸浮劑等，如水針、凍干粉針、無菌粉針、輸液等。本發(fā)明藥物組合物優(yōu)選為注射劑和口服制劑。
本發(fā)明藥物組合物可采用現(xiàn)有制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，需要的時(shí)候可以添加各種藥學(xué)上可接受的載體。所述的載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤(rùn)滑劑等。
本發(fā)明藥物組合物在制成口服制劑時(shí)，可選擇的填充劑有淀粉、糖粉、磷酸鈣、硫酸鈣二水物、糊精、微晶纖維素、乳糖、預(yù)膠化淀粉、甘露醇等；可選擇的黏合劑有羥甲基纖維素鈉、PVP-K30、羥丙基纖維素、淀粉漿、甲基纖維素、乙基纖維素、預(yù)化淀粉等；可選擇的崩解劑有干淀粉、交聯(lián)聚維酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、微粉硅膠等。
本發(fā)明藥物組合物在制成注射劑時(shí)，為了增加其溶解度，可以加入聚山梨酯-80等增溶劑。輸液中可以加入用于調(diào)節(jié)滲透壓的等滲調(diào)節(jié)劑，例如，氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、乳酸鈉、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，優(yōu)選氯化鈉或葡萄糖。粉針中可加入賦形劑，例如，甘露醇、葡萄糖等。
本發(fā)明藥物組合物的優(yōu)點(diǎn)在于(1)提供了一種新的用于治療心腦血管疾病的藥物組合物，滿足了臨床急需。
(2)對(duì)本發(fā)明藥物組合物各配比進(jìn)行了藥效學(xué)研究，得出了本發(fā)明藥物組合物的最優(yōu)配比。
(3)本發(fā)明經(jīng)過藥理學(xué)研究和藥效動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明，由葛根素和山楂葉或山楂葉總黃酮制成的藥物，可以增加冠脈血流量，增加心肌供血，降低左室舒張末期壓，降低心臟前負(fù)荷等，明顯改善犬血液流動(dòng)力學(xué)；改善腦血管循環(huán)，減小腦缺血面積；顯著抗血小板聚集；顯著減小心肌梗塞范圍；對(duì)家兔腦缺血再灌注損傷具有明顯的保護(hù)作用。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，葛根素與山楂葉或山楂葉總黃酮合并用藥有協(xié)同作用，藥效明顯增強(qiáng)，其結(jié)果是本技術(shù)領(lǐng)域的普通人員所意想不到的。
(4)可以葛根素和山楂葉總黃酮為原料直接投料，制備工藝簡(jiǎn)單，避免了提取時(shí)造成的藥物損失和由于原藥材質(zhì)量差異造成的不同產(chǎn)品質(zhì)量差異較大的缺點(diǎn)，使藥品純度更高，雜質(zhì)少，安全性高，且不同批次藥品間質(zhì)量差異小，藥品質(zhì)量更均勻穩(wěn)定。
(5)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明藥物組合物注射液各項(xiàng)指標(biāo)均比較穩(wěn)定，保證了臨床用藥的安全性。
(6)對(duì)葛根素和山楂葉或山楂葉總黃酮的相互作用、配伍組方進(jìn)行研究，本發(fā)明藥物組合物的藥效優(yōu)于單獨(dú)使用葛根素、山楂葉或山楂葉總黃酮的藥效，合并用藥呈協(xié)同作用，可相對(duì)減小用藥劑量，具有廣泛的應(yīng)用前景。
以下通過實(shí)驗(yàn)例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明所述藥物組合物的有益效果，這些實(shí)驗(yàn)例包括本發(fā)明藥物組合物的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，葛根素和山楂葉或山楂葉總黃酮的組合物以下簡(jiǎn)稱GS組合物。實(shí)驗(yàn)例所用的山楂葉總黃酮均取自于實(shí)施例1。
實(shí)驗(yàn)例1GS組合物藥效學(xué)研究受試動(dòng)物Wistar大鼠，雄性，體重200～220g，110只，隨機(jī)分為11組，每組10只。
供試品空白對(duì)照組氯化鈉注射液(山東長(zhǎng)富潔晶藥業(yè)有限公司)模型組葛根素組葛根素注射液(煙臺(tái)魯銀藥業(yè)有限公司，2ml0.1g)山楂葉總黃酮組山楂葉總黃酮注射液，自制GS組合物注射液組7個(gè)不同配比組(制備方法參見實(shí)施例3)，自制實(shí)驗(yàn)方法將大鼠隨機(jī)分為11個(gè)組空白對(duì)照組、模型組、葛根素組、山楂葉總黃酮組、GS組合物注射液組葛根素+山楂葉總黃酮(100+15、150+30、200+50、250+60、300+80、350+100、400+120)。各藥物均以生理鹽水稀釋至所需濃度，尾靜脈注射給藥。
大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌梗死模型動(dòng)物戊巴比妥腹腔注射麻醉(45mg/kg)仰位固定。氣管插管，在胸骨左側(cè)作2cm的縱切口，近胸骨側(cè)剪斷第3、第4肋軟骨，打開胸腔后，連接人工呼吸機(jī)(通氣量2ml/100g，50次/min)。剪開心包膜，暴露心臟，冠狀動(dòng)脈左前降支根部穿線以備結(jié)扎，記錄標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)心電圖，穩(wěn)定10分鐘，結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支，關(guān)閉胸腔。用針筒吸出動(dòng)物喉部分泌物，使動(dòng)物恢復(fù)自主呼吸。結(jié)扎冠狀動(dòng)脈15min后，靜脈給藥。結(jié)扎冠狀動(dòng)脈4小時(shí)后，摘取心臟，在結(jié)扎線以下橫切5片，進(jìn)行氯化硝基四氮唑藍(lán)(N-BT)染色，計(jì)算心肌梗死塞區(qū)面積占心室及心臟面積的百分比，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理(t檢驗(yàn))。結(jié)果見表1。
表1組合物對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌梗塞范圍的影響(x±s)
注*p＜0.05，**p＜0.01，與模型組相比；#p＜0.05，與山楂葉總黃酮組相比；×p＜0.05，與葛根素組相比；&p＜0.05，模型組與空白對(duì)照組相比實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。
(1)與空白對(duì)照組相比，模型組的心肌梗塞面積明顯增加(p＜0.05)，說明造模成功。
(2)與模型組相比，葛根素組和山楂葉總黃酮組心肌梗塞面積明顯減小(p＜0.05)，各組合物組心肌梗塞面積均顯著減小(p＜0.01)。
(3)與單用葛根素、山楂葉總黃酮組相比，各組合物配比組的抗心肌梗塞作用優(yōu)于單用山楂葉總黃酮和葛根素(p＜0.05，p＜0.05)。
表明，與單用葛根素、山楂葉總黃酮相比，葛根素和山楂葉總黃酮組成的各配比的組合物均可顯著減小心肌梗塞面積，說明兩藥配伍有協(xié)同增效作用，且作用效果與配比相關(guān)，在配比為200±50時(shí)，效果最好。
實(shí)驗(yàn)例2GS組合物抗血小板聚集作用受試動(dòng)物Wistar大鼠，雄性，體重200～220g，60只，隨機(jī)分為6組，每組10只。
供試品空白對(duì)照組氯化鈉注射液(山東長(zhǎng)富潔晶藥業(yè)有限公司)葛根素組葛根素注射液(煙臺(tái)魯銀藥業(yè)有限公司，2ml0.1g)山楂葉總黃酮組山楂葉總黃酮注射液，自制GS組合物注射液組自制(處方和制備方法參見實(shí)施例3)，分為高、中、低三個(gè)劑量組實(shí)驗(yàn)方法將大鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為空白對(duì)照組，葛根素組，山楂葉總黃酮組，GS組合物注射液高、中、低劑量組。各組動(dòng)物腹腔注射給藥，每日一次，連續(xù)給藥7天，末次給藥后1小時(shí)，動(dòng)物麻醉后自腹主動(dòng)脈取血，抗凝劑采用3.28％枸櫞酸鈉，與血液以1∶9比例混合。將抗凝全血在20℃條件下1500r·min-1離心5min獲得富血小板血漿(PPR)。留取定量PPR后，將剩余PPR再次以3000r·min-1離心10min，獲得自身對(duì)照貧血小板血漿(PPP)。以PPP調(diào)節(jié)PPR濃度，使各PPR濃度相同。將PPR在37℃的恒溫孔中預(yù)熱后，加入ADP(終濃度為3μmol·L-1)引起血小板聚集，記錄最大聚集率。結(jié)果見表2。
表2抗血小板聚集作用(X±SD)
注*p＜0.05，**p＜0.01，與空白對(duì)照組相比；#p＜0.05，與山楂葉總黃酮組相比；×p＜0.05，與葛根素組相比實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。
(1)與空白對(duì)照組相比，葛根素組和山楂葉總黃酮組血小板最大聚集率均明顯降低(p＜0.05)，組合物各劑量組血小板最大聚集率顯著降低(p＜0.01)。
(2)與單用葛根素、山楂葉總黃酮組相比，組合物各劑量組的血小板最大聚集率明顯降低(p＜0.05，p＜0.05)。
表明，與單用葛根素或山楂葉總黃酮相比，組合物各劑量組均都能明顯抑制血小板聚集，表明山楂葉總黃酮與葛根素配伍有很好協(xié)同作用，且作用效果與給藥劑量有關(guān)，高劑量時(shí)效果最好。
實(shí)驗(yàn)例3GS組合物注射液靜脈給藥對(duì)麻醉開胸犬血流動(dòng)力學(xué)的影響受試動(dòng)物雜種犬，30只，體重在11.0～13.0公斤，每組5只。
供試品空白對(duì)照組氯化鈉注射液(山東長(zhǎng)富潔晶藥業(yè)有限公司)葛根素組葛根素注射液(煙臺(tái)魯銀藥業(yè)有限公司，2ml0.1g)山楂葉總黃酮組山楂葉總黃酮注射液，自制GS組合物注射液組自制(處方和制備方法參見實(shí)施例3)，分為高、中、低三個(gè)劑量組給藥劑量空白對(duì)照組、葛根素組、山楂葉總黃酮組、GS組合物注射液高劑量組為20mg/kg，GS組合物注射液中劑量組為15mg/kg，GS組合物注射液低劑量組為10mg/kg。
實(shí)驗(yàn)方法取30只雜種犬，體重在11.0～13.0公斤，每組5只，雌雄兼用，隨機(jī)分為6組，分別為空白對(duì)照組，葛根素組，山楂葉總黃酮組，GS組合物注射液高、中、低劑量組。各給藥組在給藥前用0.9％生理鹽水配制所需濃度藥液。
犬用3％戊巴比妥鈉1ml/kg前肢靜脈注射麻醉，仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，剪去頸部、胸部和右后肢內(nèi)側(cè)的毛。75％乙醇消毒剪毛區(qū)。分離氣管，并插入氣管插管，備人工呼吸用；分離頸外靜脈，并從頸外靜脈插管經(jīng)上腔靜脈進(jìn)入右心房并達(dá)到心房竇處，用于抽取冠狀靜脈的血液；分離股靜脈，插入靜脈插管，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中緩慢恒速注入10％葡萄糖。分離股動(dòng)脈，插入動(dòng)脈插管(管內(nèi)充滿25U/ml的肝素鈉生理鹽水)，接通TP-400T型壓力換能器，由AP-641G型血壓放大器記錄血壓(收縮壓SAP，舒張壓DAP，平均動(dòng)脈壓MAP)。人工呼吸下，于第4肋間開胸，剪開心包膜，分離升主動(dòng)脈根部和左冠狀動(dòng)脈前降支，分別放置適宜內(nèi)徑的電磁血流量計(jì)探頭(13，2mm)測(cè)量心輸出量(CO)和冠狀動(dòng)脈血流量(CBF)。將左心室插管(管內(nèi)充滿25U/ml的肝素生理鹽水)經(jīng)左心室心尖部插入左心室內(nèi)，通過TP-400T型壓力換能器，由AP-641G型血壓放大器記錄左室內(nèi)壓(LVP)，通過AD-601G型放大器記錄左室舒張末期壓(LVEDP)將針狀電極插入犬四肢皮下，描記標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)心電圖(ECG)。上述測(cè)量信號(hào)均輸入RM-6000型八道生理記錄儀記錄，描記。同時(shí)將心輸出量、心電、血壓及心室內(nèi)壓的電信號(hào)輸入微機(jī)的生物醫(yī)學(xué)生理信號(hào)處理系統(tǒng)進(jìn)行處理，并由微機(jī)讀出心室內(nèi)壓峰值(LVSP)、舒張末期壓(LVEDP)、心室收縮參數(shù)(+dp/dtmax)、心室舒張參數(shù)(-dp/dtmax)。最后，計(jì)算心指數(shù)(CI)、每搏輸出量(SV)、心搏指數(shù)(SI)、每搏功指數(shù)(SWI)、血管總外周阻力等參數(shù)(TPVR)。手術(shù)完成后穩(wěn)定20min，將藥物溶于100ml生理鹽水中，15min內(nèi)經(jīng)股靜脈恒速滴入。
在給藥前、給藥后1h、2h分別抽取左心室及冠狀靜脈血，肝素抗凝，注射于i-STAT G3+Cartridges(i-STAT公司G3+型測(cè)試片)中，通過血?dú)夥治鰞x測(cè)量動(dòng)、靜脈血氧分壓。心肌耗氧量由Kanter公式計(jì)算而來，其公式是MVO2＝3.25×10×CF(PaO2-PvO2)/Wt。MVO2是指每100g左室心肌的耗氧量，CF為冠脈流量，PaO2、PvO2分別表示動(dòng)、靜脈血氧分壓，Wt是左心室肌重。
所有數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，根據(jù)用藥前后各組中各個(gè)指標(biāo)的變化，采用配對(duì)t-檢驗(yàn)來判斷用藥前后各種指標(biāo)改變的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)對(duì)麻醉犬總外周血管阻力的影響與空白對(duì)照組比較，各劑量GS組合物注射液組均能顯著降低麻醉犬總外周血管阻力(p＜0.01)，葛根素組能明顯降低麻醉犬總外周血管阻力(p＜0.05)，山楂葉總黃酮組的作用較葛根素注射液組低；與單用山楂葉總黃酮、葛根素組相比，各劑量GS組合物注射液組均能明顯降低麻醉犬總外周血管阻力(p＜0.05)。
(2)對(duì)麻醉犬左室舒張末期壓的影響與空白對(duì)照組比較，各劑量GS組合物注射液組均能顯著降低麻醉犬左室舒張末期壓(p＜0.01)，山楂葉總黃酮組以及葛根素注射液組均能明顯降低麻醉犬左室舒張末期壓(p＜0.05)；與單用山楂葉總黃酮、葛根素組相比，各劑量GS組合物注射液組均能明顯降低麻醉犬左室舒張末期壓(p＜0.05)。
(3)對(duì)麻醉犬冠狀動(dòng)脈血流量的影響與空白對(duì)照組比較，各劑量GS組合物注射液組均能顯著增加麻醉犬冠狀動(dòng)脈血流量(p＜0.01)，山楂葉總黃酮組以及葛根素注射液組均能明顯增加麻醉犬冠狀動(dòng)脈血流量(p＜0.05)；與單用山楂葉總黃酮、葛根素組相比，各劑量GS組合物注射液組均能明顯增加麻醉犬冠狀動(dòng)脈血流量(p＜0.05)。
(4)對(duì)麻醉犬心室收縮參數(shù)的影響與空白對(duì)照組比較，各劑量GS組合物注射液組均能顯著增加麻醉犬心室收縮參數(shù)(p＜0.01)，山楂葉總黃酮組以及葛根素注射液組均能明顯增加麻醉犬心室收縮參數(shù)(p＜0.05)；與單用山楂葉總黃酮、葛根素組相比，各劑量GS組合物注射液組均能明顯增加麻醉犬心室收縮參數(shù)(p＜0.05)。
(5)對(duì)麻醉犬心室舒張參數(shù)的影響與空白對(duì)照組比較，各劑量GS組合物注射液組均能顯著增加麻醉犬心室舒張參數(shù)(p＜0.01)，山楂葉總黃酮組以及葛根素注射液組均能明顯增加麻醉犬心室舒張參數(shù)(p＜0.05)；與單用山楂葉總黃酮、葛根素組相比，各劑量GS組合物注射液組均能明顯增加麻醉犬心室舒張參數(shù)(p＜0.05)。
(6)對(duì)麻醉犬心輸出量、每搏輸出量、心指數(shù)以及心搏指數(shù)的影響與空白對(duì)照組比較，各劑量GS組合物注射液組均能顯著增加麻醉犬的心輸出量、每搏輸出量、心指數(shù)、心搏指數(shù)(p＜0.01)，山楂葉總黃酮組以及葛根素注射液組均能明顯增加麻醉犬的心輸出量、每搏輸出量、心指數(shù)、心搏指數(shù)(p＜0.05)；與單用山楂葉總黃酮、葛根素組相比，各劑量GS組合物注射液組均能明顯增加麻醉犬的心輸出量、每搏輸出量、心指數(shù)、心搏指數(shù)(p＜0.05)。
結(jié)論山楂葉總黃酮和葛根素合并用藥可通過增加冠狀動(dòng)脈血流量，使心肌的供血增加，降低左室舒張末期壓，使血液易于從心外膜向心內(nèi)膜下區(qū)域流動(dòng)，對(duì)冠狀動(dòng)脈血流量進(jìn)行重新分配；能明顯降低心臟前負(fù)荷，對(duì)后負(fù)荷無明顯影響；能顯著改善心臟的泵血功能；能明顯改善心臟的收縮和舒張功能。山楂葉總黃酮和葛根素合并用藥的效果優(yōu)于單用山楂葉總黃酮或葛根素，提示兩藥有協(xié)同增效作用。
實(shí)驗(yàn)例4GS組合物對(duì)實(shí)驗(yàn)性犬腦缺血的影響受試動(dòng)物雜種犬，30只，體重在11.0～13.0kg，隨機(jī)分為6組，每組5只。
供試品空白對(duì)照組氯化鈉注射液(山東長(zhǎng)富潔晶藥業(yè)有限公司)葛根素組葛根素注射液(煙臺(tái)魯銀藥業(yè)有限公司，2ml0.1g)山楂葉總黃酮組山楂葉總黃酮注射液，自制GS組合物注射液組自制(處方和制備方法參見實(shí)施例3)，分為高、中、低三個(gè)劑量組實(shí)驗(yàn)方法取30只雜種犬，體重在11.0～13.0公斤，每組5只，雌雄兼用，隨機(jī)分為6組，分別為空白對(duì)照組，葛根素組，山楂葉總黃酮組，GS組合物注射液高、中、低劑量組。各藥物均以生理鹽水稀釋至所需濃度，靜脈注射給藥。
犬大腦中動(dòng)脈結(jié)扎所致腦缺血模型的制作取犬腹腔注射3％戊巴比妥鈉1.0ml/kg(30mg/kg)麻醉，固定犬于手術(shù)臺(tái)上，然后在犬右外眼角與右耳根部1/2處(中點(diǎn))，用電刀切開皮膚，分離肌肉，用手術(shù)專用顱骨鉆鉆開顱骨，以咬骨鉗擴(kuò)大顱骨孔，切開硬腦膜，找到大腦中動(dòng)脈。先用多譜勒超聲血流探測(cè)儀測(cè)定大腦中動(dòng)脈血流速度，然后立即將大腦中動(dòng)脈結(jié)扎造成腦缺血。大腦中動(dòng)脈結(jié)扎6小時(shí)后，分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈并夾閉之，即刻從右側(cè)頸總動(dòng)脈夾閉處的遠(yuǎn)心端灌注20ml龍膽紫飽和溶液對(duì)腦組織進(jìn)行染色，然后處死動(dòng)物，開顱取出腦組織，稱全腦重，遂切下未染色的腦組織(即缺血區(qū)腦組織)稱重，求出其占全腦重量的百分率，并進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，以判斷其是否屬于腦缺血性損傷，結(jié)果見表3。
表3組合物對(duì)實(shí)驗(yàn)性犬腦缺血的影響(X±SD)
注*p＜0.05，**p＜0.01，與空白對(duì)照組相比；#p＜0.05，與山楂葉總黃酮組相比；×p＜0.05，與葛根素組相比實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。
(1)與空白對(duì)照組相比，葛根素組和山楂葉總黃酮組腦缺血區(qū)均明顯減小(P＜0.05)，組合物各劑量組腦缺血區(qū)顯著降低(P＜0.01)。
(2)與單用葛根素、山楂葉總黃酮組相比，組合物各劑量組的腦缺血區(qū)域明顯降低(p＜0.05，P＜0.05)。
表明，與單用葛根素或山楂葉總黃酮相比，GS組合物注射液的作用強(qiáng)于單用山楂葉總黃酮或葛根素(P＜0.05)，表明山楂葉總黃酮與葛根素配伍的組合物有很好的抗腦缺血作用。
實(shí)驗(yàn)例5GS組合物對(duì)家兔腦缺血灌注損傷的保護(hù)作用受試動(dòng)物家兔，78只，雌雄兼用，體重2.4～2.8kg，隨機(jī)分為缺血再灌注組(18只)、GS組合物注射液治療組(18只)、山楂葉總黃酮治療組(18只)、葛根素注射液治療組(18只)和假手術(shù)對(duì)照組(6只)。
供試品生理鹽水氯化鈉注射液(山東長(zhǎng)富潔晶藥業(yè)有限公司)山楂葉總黃酮組山楂葉總黃酮注射液，自制葛根素組葛根素注射液，自制GS組合物注射液組自制，(處方和制備方法參見實(shí)施例3)供試液的配制所有供試品均配成20mg/ml的供試液給藥劑量空白對(duì)照組、葛根素組、山楂葉總黃酮組、GS組合物注射液高劑量組為20mg/kg，GS組合物注射液中劑量組為15mg/kg，GS組合物注射液低劑量組為10mg/kg。
實(shí)驗(yàn)方法(1)缺血再灌注組18只，用25％的氨基甲酸乙脂溶液1g/kg耳緣靜脈麻醉，頸部正中切口分離氣管插入氣管套管，暴露兩側(cè)頸總動(dòng)脈，夾閉兩側(cè)動(dòng)脈20min，造成腦缺血，分別再灌注1、6和12h，3個(gè)時(shí)間點(diǎn)各6只。松夾10min后，耳緣靜脈推注生理鹽水5ml/kg。(2)GS組合物注射液治療組每一GS組合物注射液劑量組18只，手術(shù)方法同缺血再灌注組，3個(gè)時(shí)間點(diǎn)各6只。松夾10min后，耳緣靜脈推注GS組合物注射液20mg/kg。(3)山楂葉總黃酮治療組18只，手術(shù)方法同缺血再灌注組，3個(gè)時(shí)間點(diǎn)各6只。松夾10min后，耳緣靜脈推注山楂葉總黃酮供試液20mg/kg。(4)葛根素注射液治療組18只，手術(shù)方法同缺血再灌注組，3個(gè)時(shí)間點(diǎn)各6只。松夾10min后，耳緣靜脈推注葛根素注射液20mg/kg。(5)假手術(shù)對(duì)照組6只，僅行麻醉和動(dòng)脈分離術(shù)而不夾閉，1h后處死。上述各組實(shí)驗(yàn)結(jié)束后即斷頭，在冰浴中剝出大腦，冰盤上解剖出雙側(cè)海馬區(qū)組織，用錫紙包裹放在4℃冰箱中儲(chǔ)存，備測(cè)磷脂酶A2(PLA2)；切取皮層組織測(cè)腦梗死面積、腦含水量，選取大腦中動(dòng)脈供血區(qū)的額頂區(qū)組織標(biāo)本進(jìn)行病理學(xué)觀察。所有計(jì)量資料數(shù)據(jù)均采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)對(duì)海馬組織PLA2活性的影響缺血再灌注組再灌注1h、6h和12h后，PLA2活性較假手術(shù)對(duì)照組明顯增高(p＜0.01)，且隨灌注時(shí)間延長(zhǎng)，PLA2活性呈遞減趨勢(shì)，但各時(shí)間點(diǎn)間比較差異不顯著(p＞0.05)；GS組合物注射液治療組(1h、6h、12h)PLA2活性明顯降低，與假手術(shù)對(duì)照組和缺血再灌注組各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較具有顯著性差異(p＜0.01)，且隨再灌時(shí)間延長(zhǎng)，PLA2活性逐漸恢復(fù)正常水平；山楂葉總黃酮治療組和葛根素注射液治療組(1h、6h、12h)PLA2活性降低，與假手術(shù)對(duì)照組和缺血再灌注組各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較具有明顯差異(p＜0.05)，山楂葉總黃酮的作用低于葛根素注射液。
(2)對(duì)皮層組織含水量(％)和梗死面積(％)的影響缺血再灌注組各時(shí)間點(diǎn)腦含水量均增高；GS組合物注射液治療組各時(shí)間點(diǎn)腦水含量與缺血再灌注組相比明顯減輕(p＜0.001)，腦梗死面積與缺血再灌注組相比明顯縮小(p＜0.01)；山楂葉總黃酮治療組和葛根素注射液治療組各時(shí)間點(diǎn)腦水含量與缺血再灌注組相比明顯降低(p＜0.01)，腦梗死面積與缺血再灌注組相比明顯縮小(p＜0.05，p＜0.01)。
(3)腦組織病理改變假手術(shù)對(duì)照組無梗死狀，神經(jīng)元結(jié)構(gòu)形態(tài)正常，無間質(zhì)水腫；缺血再灌注組有梗死狀，梗死狀周神經(jīng)元腫脹，細(xì)胞輪廓不清，間質(zhì)水腫明顯；GS組合物注射液治療組、山楂葉總黃酮治療組、葛根素注射液治療組梗死狀面積均縮小，梗死狀周神經(jīng)元腫脹不明顯，間質(zhì)水腫明顯減輕；GS組合物注射液治療組作用更明顯。
結(jié)論上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，腦缺血再灌注后，GS組合物注射液、山楂葉總黃酮、葛根素注射液均可降低海馬組織PLA2活性，改善腦缺血所致內(nèi)環(huán)境紊亂，減輕腦水腫，減小腦梗死面積；說明GS組合物、山楂葉總黃酮、葛根素均具有清除自由基，快速切斷自由基連鎖反應(yīng)，抑制脂質(zhì)過氧化，減輕遲發(fā)性腦損傷等腦組織保護(hù)作用。GS組合物注射液在各項(xiàng)指標(biāo)中效果均優(yōu)于山楂葉總黃酮和葛根素注射液?jiǎn)为?dú)用藥的效果，提示，兩藥具有協(xié)同增效作用。
實(shí)驗(yàn)例6GS組合物注射液小鼠注射給藥急性毒性實(shí)驗(yàn)(1)實(shí)驗(yàn)方法供試品GS組合物注射液組自制(處方和制備方法參見實(shí)施例3，2ml含山楂葉總黃酮47.6mg、含葛根素200mg)受試動(dòng)物小鼠，每組雌雄各60只，雄性體重25～28g，雌性體重21～24g給藥途徑靜脈注射、腹腔注射。
觀察專案死亡數(shù)、一般狀態(tài)、體重、剖檢、半數(shù)致死劑量。
(2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果按照急性毒性實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行預(yù)試，腹腔注射及靜脈注射兩種給藥途徑皆無法測(cè)出藥物的半數(shù)致死量，也未見明顯的毒性反應(yīng)，故進(jìn)行日最大給藥量實(shí)驗(yàn)。給藥劑量尾靜脈注射0.1ml/10g，腹腔注射0.1ml/10g，一日1次。
死亡數(shù)未出現(xiàn)死亡。
一般狀態(tài)未見異常變化。
體重于給藥前1天，給藥日，給藥后2、4、6、8、10、12、14天測(cè)量；未見異常變化。
剖檢心、肝、肺、腎等組織未見異常變化。
(3)結(jié)論本實(shí)驗(yàn)中未出現(xiàn)死亡，GS注射液對(duì)雌雄小鼠靜脈和腹腔注射給藥的最大耐受量為0.1ml/10g，相當(dāng)于60kg體重人日最大用量6ml的100倍。表明本品低毒，安全性高。
實(shí)驗(yàn)例7GS組合物注射液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)樣品GS組合物注射液(處方和制備方法參見實(shí)施例3)考察項(xiàng)目性狀、pH值、澄明度、含量、有關(guān)物質(zhì)長(zhǎng)期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果將本品置溫度25℃±2℃、相對(duì)濕度60％±10％的條件下放置6個(gè)月、12個(gè)月，各項(xiàng)指標(biāo)均無明顯變化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明組合物注射液長(zhǎng)期放置基本穩(wěn)定。
具體實(shí)施方式
以下通過實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。以下實(shí)施例中各劑型的輔料可以用藥學(xué)上可接受的輔料代替，或者減少、增加。實(shí)施例2～9所用的山楂葉總黃酮均取自于實(shí)施例1。
實(shí)施例1山楂葉總黃酮的制備取山楂葉，烘干粉碎，加60％乙醇回流提取三次，每次1小時(shí)，加乙醇8倍量，合并提取液，濾過，濾液減壓回收乙醇至相對(duì)密度為1.04～1.06(60℃)的濃縮液，加等量水稀釋后，用1/2倍量的石油醚(60～90℃)振搖提取，棄去石油醚液，水層用乙酸乙酯振搖提取，提取液減壓回收乙酸乙酯并濃縮至干，再加入適量水溶解，加于已處理好的聚酰胺柱(30～60目，乙醇濕法裝柱，乙醇適量預(yù)洗，再用水洗至無醇味，備用)上，先用2倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，然后分別用3倍柱體積的60％乙醇、75％乙醇、95％乙醇和無水乙醇洗脫，收集各洗脫液，合并，回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度約1.08～1.12的濃縮液，噴霧干燥，得山楂葉總黃酮。
山楂葉總黃酮的鑒別實(shí)驗(yàn)取山楂葉總黃酮研細(xì)，取0.1g，加乙醇5ml，搖勻，超聲處理5分鐘，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取蘆丁對(duì)照品、金絲桃苷對(duì)照品，分別加乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述三種溶液各1μl，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以乙醇-丙醇-水(7∶5∶6)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，吹干，放置1小時(shí)后，置紫外光燈下(365nm)下，檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
山楂葉總黃酮的含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密稱取蘆丁對(duì)照品200mg，置于100ml容量瓶中，加入乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取此溶液10ml置100ml容量瓶中，加乙醇定容至刻度，搖勻即得(每1ml含無水蘆丁0.2mg)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.01、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml分別置25ml容量瓶中，各加乙醇至6ml，加10％亞硝酸鈉溶液1.0ml，混勻，放置6min，加10％硝酸鋁溶液1.0ml，放置6min，加氫氧化鈉試液10.0ml，最后用乙醇稀釋至刻度。搖勻，以第1瓶為空白，照紫外分光光度法，在510nm處測(cè)定吸收度。
供試品的制備精密稱定提取物1.0g，置索氏提取器中，加乙醇回流至無色，提取液于蒸發(fā)皿中，水浴濃縮至干，用50ml熱水溶解并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入水飽和正丁醇液萃取3次，每次10ml，合并萃取液于蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，再加乙醇使溶解，并濾入50ml容量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻。精密吸取5ml于25ml容量瓶中。加乙醇至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法按標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備操作測(cè)定供試品溶液的吸收度，帶入回歸方程，計(jì)算，即得。
山楂葉總黃酮中金絲桃苷的含量測(cè)定色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-四氫呋喃-水-甲酸(55∶45∶400∶1.5)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為255nm；柱溫為25℃；流速為1ml/min。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥24h的金絲桃苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml中含20μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取山楂葉總黃酮約0.4g，精密稱定，加入70％丙酮溶液超聲提取，共3次，每次使用溶液30ml，超聲10min，濾過，最后使用少量70％丙酮溶液反復(fù)洗滌3～4次，合并濾液，水浴揮干，殘?jiān)蛹状既芙?，并稀釋?0ml，搖勻，過微孔濾膜，得供試品。
測(cè)定法分別精密吸取上述對(duì)照品溶液和供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
按照上述方法制備三批山楂葉總黃酮，總黃酮的含量和得率見表4。從結(jié)果可以看出，通過本工藝得到的山楂葉總黃酮的得率為2.0～2.5％，總黃酮含量不低于80％，金絲桃苷含量不低于0.4％。
表4山楂葉提取物的含量測(cè)定結(jié)果和得率
實(shí)施例2GS組合物粉針劑的制備處方山楂葉總黃酮47.6g(相當(dāng)于山楂葉約2000g)葛根素 200g聚山梨酯80 80g甘露醇 300g山梨醇 50g無菌注射用水加至3000ml共制備 1000支制備工藝(1)首先將配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，膠塞等進(jìn)行無菌處理。
(2)按照處方量稱取原輔料。
(3)將山楂葉總黃酮加入配液量30％無菌注射用水中加熱溶解完全。甘露醇、山梨醇加配液量30％的無菌注射用水加熱攪拌溶解完全，聚山梨酯80加20％的無菌注射用水后制成水溶液加入葛根素加熱溶解，合并上述溶液，補(bǔ)加無菌注射用水至全量。
(4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
(5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
(6)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾。
(7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
(8)分裝于抗生素玻璃瓶中，半壓塞。將樣品放入凍干機(jī)中冷凍干燥。預(yù)凍-45℃5小時(shí)，低溫真空干燥-45℃～0℃20小時(shí)，然后升溫至25℃真空干燥3小時(shí)。
(9)凍干結(jié)束，壓塞，軋蓋。
(10)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例3GS組合物水針劑的制備處方山楂葉總黃酮47.6g(相當(dāng)于山楂葉約2000g)葛根素 200g聚乙二醇400 200ml乙醇200ml注射用水加至2000ml共制備 1000支制備工藝(1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
(2)將乙醇與等量的水混合，加入山楂葉總黃酮使溶解；將聚乙二醇400用50％的水溶解，再加入葛根素?cái)嚢枞芙狻?br> (3)合并上述兩溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
(4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
(5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
(6)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾。
(7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
(8)將溶液熔封于玻璃安瓿中。
(9)100℃流通蒸汽滅菌30分鐘。
(10)趁熱將樣品放入0.01％的亞甲藍(lán)溶液中檢漏。
(11)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例4GS組合物氯化鈉輸液的制備處方山楂葉總黃酮47.6g(相當(dāng)于山楂葉約2000g)葛根素 200g聚山梨酯80 100g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶制備工藝(1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
(2)將山楂葉總黃酮加入配液量20％注射用水加熱攪拌溶解完全，將氯化鈉用配液量20％的注射用水溶解完全。聚山梨酯80加20％的無菌注射用水后制成水溶液加入葛根素加熱溶解。
(3)合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
(4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
(5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
(6)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾。
(7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
(8)灌裝于100ml的輸液瓶中。
(9)115℃熱壓滅菌30分鐘。
(10)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例5GS組合物葡萄糖輸液的制備處方山楂葉總黃酮 47.6g(相當(dāng)于山楂葉約2000g)葛根素200g聚山梨酯8050g葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml共制備1000瓶制備工藝(1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
(2)將山楂葉總黃酮加入配液量20％注射用水中加熱攪拌溶解完全，將葡萄糖用配液量20％的注射用水溶解完全，加熱煮沸15分鐘。聚山梨酯80加20％的無菌注射用水后制成水溶液加入葛根素加熱溶解。
(3)合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
(4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
(5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
(6)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾。
(7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
(8)灌裝于100ml的輸液瓶中。
(9)115℃熱壓滅菌30分鐘。
(10)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例6GS組合物片劑的制備處方山楂葉總黃酮47.6g(相當(dāng)于山楂葉約2000g)葛根素 200g預(yù)膠化淀粉 120.0g微晶纖維素 40.0g低取代羥丙纖維素40g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂6.0g羧甲淀粉鈉 12.0g共制備 1000片制備工藝(1)將葛根素和山楂葉總黃酮粉碎過100目篩備用。
(2)按照處方量稱取原輔料。
(3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
(4)將山楂葉總黃酮、葛根素、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素、低取代羥丙纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
(5)過20目篩制顆粒。
(6)顆粒在60℃的條件下烘干。
(7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂和羧甲淀粉鈉，過18目篩整粒，混合均勻。
(8)取樣，半成品化驗(yàn)。
(9)按照化驗(yàn)確定的片重壓片。
(10)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例7GS組合物膠囊劑的制備處方山楂葉總黃酮 47.6g(相當(dāng)于山楂葉約2000g)葛根素200g預(yù)膠化淀粉120.0g微晶纖維素50.0g低取代羥丙纖維素 30g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 6.0g共制備1000粒制備工藝(1)將葛根素和山楂葉總黃酮粉碎過100目篩備用。
(2)按照處方量稱取原輔料。
(3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
(4)將山楂葉總黃酮、葛根素、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素、低取代羥丙纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
(5)過20目篩制顆粒。
(6)顆粒在60℃的條件下烘干。
(7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂，過18目篩整粒，混合均勻。
(8)取樣，半成品化驗(yàn)。
(9)按照化驗(yàn)確定的裝量裝入膠囊。
(10)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例8GS組合物顆粒劑的制備處方山楂葉總黃酮 47.6g(相當(dāng)于山楂葉約2000g)葛根素200g糖粉 2000.0g甜菊素15g檸檬香精 適量2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備1000包制備工藝(1)將蔗糖粉碎過80目篩備用；將葛根素和山楂葉總黃酮粉碎過100目篩備用。
(2)按照處方量稱取原輔料。
(3)將葛根素、山楂葉總黃酮與糖粉、甜菊素以等量遞加的方法混合均勻，加入2％HPMC50％乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材，(4)過20目篩制顆粒。
(5)顆粒在60℃的條件下烘干。
(6)干顆粒過18目篩整粒，噴入適量檸檬香精。
(7)取樣，半成品化驗(yàn)顆粒中主藥的含量，確定裝量。
(8)包裝，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例9GS組合物口服液的制備處方山楂葉總黃酮 47.6g(相當(dāng)于山楂葉約2000g)葛根素200g丙二醇1000ml苯甲酸鈉 15g甜菊甙10g純化水加至10000ml共制備1000支制備工藝(1)將山楂葉總黃酮加入配液量50％的純化水中加熱攪拌溶解完全；葛根素加入丙二醇加熱攪拌溶解完全。
(2)將苯甲酸鈉和甜菊甙用配液量20％的水溶解完全。
(3)合并上述溶液，補(bǔ)加純化水至全量。
(4)過0.8μm的微孔濾膜過濾。
(5)半成品化驗(yàn)。
(6)灌裝。成品全檢，包裝入庫(kù)。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物主要由下列重量份的原料藥制成葛根素40～1000份、山楂葉400～10000份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物主要由下列重量份的原料藥制成葛根素100～400份、山楂葉1000～4000份。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物主要由以下重量份的原料藥制成葛根素200份、山楂葉2000份。
4.根據(jù)權(quán)利要求1～3所述的任一藥物組合物的制備方法，其特征在于，所述的山楂葉可以用適宜的溶劑和方法提取制備得到提取物，提取物再與葛根素以及藥學(xué)上可接收的輔料混合制成任一制劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于，所得提取物的主要有效成分為山楂葉總黃酮，主要有效成分的含量不低于50％。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物也可以由下列重量份的原料藥制成葛根素40～1000份、山楂葉總黃酮5～300份。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物可以由下列重量份的原料藥制成葛根素100～400份、山楂葉總黃酮15～120份。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物可以由下列重量份的原料藥制成葛根素200份、山楂葉總黃酮30～60份。
9.根據(jù)權(quán)利要求6～8所述的任一藥物組合物，其特征在于，山楂葉總黃酮中總黃酮的含量不低于50％，金絲桃苷的含量不低于0.2％。
10.根據(jù)權(quán)利要求1～3、6～8所述的任一藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物可以與藥學(xué)上可接受的輔料混合制成任何一種臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種治療心腦血管疾病的藥物組合物及其制備方法和用途。該組合物主要由葛根素和山楂葉或山楂葉總黃酮制成，其中葛根素40～1000份、山楂葉400～10000份或山楂葉總黃酮5～300份。該組合物可制成臨床或藥學(xué)上可接受的任一劑型，優(yōu)選注射劑或口服制劑。該藥物組合物可用于治療冠心病、心絞痛、高血壓、腦血管病、偏頭痛、糖尿病及微血管病變等疾病，效果顯著。
文檔編號(hào)A61P3/06GK101049356SQ20061004350
公開日2007年10月10日 申請(qǐng)日期2006年4月7日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月7日
發(fā)明者黃振華 申請(qǐng)人:黃振華