專利名稱：乙酰半胱氨酸或其藥用鹽和細(xì)辛腦的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種主要由乙酰半胱氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽和細(xì)辛腦制成的藥物組合物及其制備方法和用途，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
2、背景技術(shù)在我國(guó)人口統(tǒng)計(jì)中，呼吸系統(tǒng)疾病為第二死因，主要包括上呼吸道感染，急、慢性支氣管炎，肺炎等癥，其主要癥狀有咳嗽、咳痰及哮喘等，呼吸系統(tǒng)疾病多發(fā)于冬春季，多先由病毒感染引起，少數(shù)由細(xì)菌直接感染所致。但臨床上可供選擇的藥物并不多且起效較慢。
乙酰半胱氨酸，為N-乙酰基-L-半胱氨酸。乙酰半胱氨酸為粘液溶解劑，具有較強(qiáng)的粘痰溶解作用，其分子中所含巰基(-SH)能使痰中糖蛋白多肽鏈中的二硫鍵(-S-S-)斷裂，降低痰的粘滯性，并使之液化。乙酰半胱氨酸還能使膿性痰中的DNA纖維斷裂，故不僅能溶解白色粘痰而且也能溶解膿性痰。適用于大量粘痰阻塞引起的呼吸困難，如手術(shù)后的咯痰困難、急性和慢性支氣管炎、支氣管擴(kuò)張、肺結(jié)核、肺炎、肺氣腫等引起的痰液粘稠、咯痰困難、痰阻氣管等，尚可用于對(duì)乙酰氨基酚中毒的解毒。乙酰半胱氨酸結(jié)構(gòu)式如下 細(xì)辛腦主要成份為a-細(xì)辛腦，化學(xué)名稱為2，4，5-三甲氧基-1-丙烯基苯，能對(duì)抗組胺、乙酰膽堿，緩解支氣管痙攣起到平喘作用，對(duì)咳嗽中樞也有較強(qiáng)的抑制作用，細(xì)辛腦可引起分泌物增加，使?jié)馓底兿?，降低痰液黏滯，易于咳出；有類似氨茶堿松弛支氣管平滑肌作用；還能提高大腦皮質(zhì)的電刺激閾，抑制電刺激的突觸傳導(dǎo)及癲癇性電的擴(kuò)散。適用于支氣管炎和支氣管哮喘。細(xì)辛腦結(jié)構(gòu)式如下 目前利用乙酰半胱氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽和細(xì)辛腦的相互作用，配伍組方，用于治療肺炎、支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病、伴肺部急性炎癥等方面的藥物，尚未見報(bào)道。
3、發(fā)明內(nèi)容為了滿足臨床需要，更好的治療呼吸系統(tǒng)疾病，提高人民健康水平，本發(fā)明提供了一種藥物組合物及其制備方法，該組合物主要由乙酰半胱氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽和細(xì)辛腦的制備而成，其重量份數(shù)為乙酰半胱氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽20～1200份、細(xì)辛腦1～200份；優(yōu)選為乙酰半胱氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽50～600份、細(xì)辛腦5～120份；進(jìn)一步優(yōu)選為乙酰半胱氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽100～300份、細(xì)辛腦16～60份。
以上組成是按重量份作為配比的，在生產(chǎn)時(shí)可按照相應(yīng)比例增大或減小，如大規(guī)模生產(chǎn)可以千克為單位，或以噸為單位，小規(guī)模生產(chǎn)也可以克為單位，重量可以增大或者減小，但各組成之間重量配比的比例不變。以上組成，若以克為單位，可以制成100～10000次用量的制劑，如作為注射劑，可制成100～10000支，每次用量1～10支。如作為片劑，可制成100～10000片，每次服用1～10片。
以上重量配比的比例是經(jīng)過科學(xué)篩選得到的，對(duì)于特殊病人，可以相應(yīng)調(diào)整組成的比例，增加或者減少不超過100％。
本發(fā)明藥物組分的用量是經(jīng)過發(fā)明人進(jìn)行大量摸索總結(jié)得出的，各組分用量在上述重量份范圍內(nèi)都具有較好療效。
本發(fā)明的藥物組合物，乙酰半胱氨酸藥學(xué)上可接受的鹽可以為有機(jī)氮鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、醋酸鹽、甲磺酸鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、氫溴酸鹽、門冬氨酸鹽。
本發(fā)明還提供了上述藥物組合物用于制備治療肺炎、支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病、伴肺部急性炎癥等疾病的藥物的用途。
本發(fā)明的藥物組合物可以加一種或多種藥學(xué)上可接受的載體，以口服、鼻吸入或腸胃外給藥的方式施用于需要這種治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成常規(guī)的固體制劑，如片劑、膠囊、軟膠囊、分散片、咀嚼片、口崩片、口服液、顆粒、滴丸、緩釋片、緩釋膠囊、控釋片、控釋膠囊，制成液體制劑如水或油懸浮劑或其它液體制劑如糖漿等；用于腸胃外給藥時(shí)，可將其制成注射用的溶液、水或油懸浮劑等，如水針、凍干粉針、無菌粉針、輸液等；還可制成噴霧劑。本組合物的優(yōu)選的劑型是注射劑、口服制劑和噴霧劑。
本發(fā)明的藥物組合物可采用現(xiàn)有制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，需要的時(shí)候可以添加各種藥學(xué)上可接受的載體。所述的載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤(rùn)滑劑等。
本發(fā)明的藥物組合物在制成注射劑時(shí)，為了增加其溶解度，可以加入聚山梨酯80、聚乙二醇類、丙二醇、丙三醇等助溶劑。輸液中可以加入用于調(diào)節(jié)滲透壓的等滲調(diào)節(jié)劑，例如，氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、乳酸鈉、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，優(yōu)選葡萄糖。粉針中可加入賦形劑，例如，甘露醇、葡萄糖、乳糖、右旋糖酐、山梨醇、蔗糖、甘氨酸、氯化鈉等。
本發(fā)明的藥物組合物在制成口服制劑時(shí)，可選擇的填充劑有淀粉、糖粉、磷酸鈣、硫酸鈣二水物、糊精、微晶纖維素、乳糖、預(yù)膠化淀粉、甘露醇等；可選擇的粘合劑有羧甲基纖維素鈉、PVP-K30、羥丙基纖維素、淀粉漿、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙甲纖維素、膠化淀粉等；可選擇的崩解劑有干淀粉、交聯(lián)聚維酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素等；可選擇的潤(rùn)滑劑有硬脂酸鎂、滑石粉、十二烷基硫酸鈉、微粉硅膠等。
本發(fā)明組合物具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)首次提供了一種乙酰半胱氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽和細(xì)辛腦配伍用于制備治療肺炎、支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病、伴肺部急性炎癥等方面疾病的藥物組合物及其制備方法和用途，滿足了臨床急需。
(2)首次對(duì)本發(fā)明組合物的相互作用和配伍組方進(jìn)行了藥效學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)組合物對(duì)脂多糖所致大鼠急性肺損傷有明顯的防治作用，使肺系數(shù)極顯著降低、肺NF-kB相對(duì)灰度明顯升高、血清NO濃度極明顯降低、血清MDA濃度極明顯降低；使哮喘小鼠肺Clara細(xì)胞中CC16含量極明顯增加、Clara細(xì)胞免疫陽性強(qiáng)度增加；顯著增加家兔呼吸道痰液分泌量；上述各實(shí)驗(yàn)組中，組合物實(shí)驗(yàn)組與單用乙酰半胱氨酸組或細(xì)辛腦組相比，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異均顯著(p＜0.05)，表明乙酰半胱氨酸和細(xì)辛腦兩藥合用治療呼吸系統(tǒng)疾病效果顯著，其結(jié)果是本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所意想不到的。
(3)對(duì)本發(fā)明組合物各配比進(jìn)行了藥效學(xué)研究，得出了本發(fā)明組合物的最優(yōu)配比。
(4)本發(fā)明制備工藝簡(jiǎn)單，藥品質(zhì)量均勻穩(wěn)定。
(5)進(jìn)行的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明藥物組合物注射液各項(xiàng)指標(biāo)均比較穩(wěn)定，保證了臨床用藥的安全。
(6)本發(fā)明組合物合并用藥療效確切，且減小了相對(duì)用藥劑量，具有廣泛的應(yīng)用前景。
以下通過實(shí)驗(yàn)例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明所述藥物的有益效果。下列實(shí)驗(yàn)例中乙酰半胱氨酸、細(xì)辛腦的組合物以下簡(jiǎn)稱乙氨細(xì)辛組合物。
實(shí)驗(yàn)例1 乙氨細(xì)辛組合物藥效研究——對(duì)脂多糖所致大鼠急性肺損傷的防治作用供試品0.9％生理鹽水注射液，市購(gòu)；脂多糖(LPS)；乙酰半胱氨酸(NAC)注射液，規(guī)格20ml4g，自制；細(xì)辛腦注射液，規(guī)格2ml8mg，北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司；乙氨細(xì)辛組合物注射液(不同配比)，自制(制備方法參見實(shí)施例2)。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組健康雄性SD大鼠130只，體重180～250只，隨機(jī)分成13組。分別為空白對(duì)照組、大鼠肺損傷模型組(LPS組)、NAC干預(yù)組(N&L組)、細(xì)辛腦干預(yù)組(細(xì)辛腦&L組)、乙氨細(xì)辛組合物(不同配比)9組(乙酰半胱氨酸&細(xì)辛腦&脂多糖)，每組10只。
實(shí)驗(yàn)方法大鼠急性肺損傷復(fù)制采用大鼠尾靜脈注射LPS(5mg/kg，LPS O55:B5，Sigma)方法建立。注入LPS前1h NAC干預(yù)組(200mg/kg)、細(xì)辛腦干預(yù)組(20mg/kg)和乙氨細(xì)辛組合物不同配比組(20mg/kg)分別腹腔注射NAC、細(xì)辛腦和乙氨細(xì)辛組合物注射液?？瞻讓?duì)照組相應(yīng)予等量生理鹽水。
各組動(dòng)物注射LPS或生理鹽水后4h腹腔注射鹽酸氯胺酮(100mg/kg)麻醉，摘取眼球取血，收集血清置-70℃冰箱保存待測(cè)一氧化氮(nitric oxide，NO)、丙二醛(malondialdehyde，NDA)(NO及NDA測(cè)試試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所)。取血后，腹主動(dòng)脈放血快速處死動(dòng)物，速取肺，觀察并稱肺濕重，計(jì)算肺系數(shù)(肺系數(shù)＝肺濕重(g)÷大鼠體重(g)×100)。取左肺下部固定、包埋，后切片H-E染色觀察肺改變，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)核因子(NF)-kB染色強(qiáng)度按SABC試劑盒說明行ABC染色，一抗用兔抗大鼠NF-kB P65抗體，DAB顯色(SABC、DAB試劑盒、兔抗大鼠NF-kB P65抗體均購(gòu)自武漢博士德公司)，同時(shí)以PBS代替一抗作陰性對(duì)照。然后以多功能真彩病理圖像分析系統(tǒng)測(cè)定各組NF-kB免疫組化片及相應(yīng)陰性對(duì)照片高倍視野下平均灰度值，計(jì)算相對(duì)灰度(相對(duì)灰度＝NF-kB免疫組化片平均灰度值÷相應(yīng)陰性對(duì)照片平均灰度值)，相對(duì)灰度越大，染色強(qiáng)度越小。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)肺組織病理學(xué)檢查 肺大體觀察，空白對(duì)照組肺外觀無明顯異常改變；LPS組肺體積增大，表面暗紅，包膜下點(diǎn)狀、片狀出血，切面疏松，有黃色或淡紅色液體溢出；NAC干預(yù)組與細(xì)辛腦干預(yù)組病變較LPS組明顯減輕，但較空白對(duì)照組仍有顯著差別；乙氨細(xì)辛組合物不同配比組與空白對(duì)照組相比無顯著差異。光鏡下，空白對(duì)照組肺組織結(jié)構(gòu)完整，肺泡隔無水腫、炎癥，肺泡腔清晰；LPS組肺泡隔增寬，部分肺泡內(nèi)見出血，肺間質(zhì)見多量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；NAC干預(yù)組與細(xì)辛腦干預(yù)組肺部炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、滲出、出血較LPS組明顯減輕但較空白對(duì)照組仍有顯著差別；乙氨細(xì)辛組合物不同配比組與LPS組相比差異極其顯著，與NAC干預(yù)組或細(xì)辛腦干預(yù)組比較有顯著差異，與空白照組相比無顯著差異。
(2)肺系數(shù)變化 LPS組與空白對(duì)照組比較，肺系數(shù)明顯增加(p＜0.01)；NAC干預(yù)組或細(xì)辛腦干預(yù)組與LPS組比較明顯降低(p＜0.05)；但與空白對(duì)照組比較仍有顯著差異(p＜0.05)；乙氨細(xì)辛組合物不同配比組與LPS組比較極明顯降低(p＜0.01)，與NAC干預(yù)組或細(xì)辛腦干預(yù)組比較有顯著差異(p＜0.05、p＜0.05)，且與空白對(duì)照組相比無顯著性差異(p＞0.05)，其中以乙酰半胱氨酸+細(xì)辛腦＝100mg+16mg時(shí)作用最好。見表1。
(3)肺組織NF-kB免疫組化檢測(cè) 陽性染色為棕黃色?？瞻讓?duì)照組見胞漿有陽性著色，胞核著色較少；LPS組胞核明顯陽性著色，胞漿亦見陽性著色；NAC干預(yù)組或細(xì)辛腦干預(yù)組胞核著色較LPS組明顯降低，較空白對(duì)照組略高；乙氨細(xì)辛組合物不同配比組與LPS組比較極明顯降低，較空白對(duì)照組無顯著差異。LPS組NF-kB染色相對(duì)灰度值較空白對(duì)照組明顯減小(p＜0.01)，表示LPS組較空白對(duì)照組NF-kB染色強(qiáng)度明顯增加；NAC干預(yù)組或細(xì)辛腦干預(yù)組較LPS組染色強(qiáng)度明顯降低(p＜0.05)；但與空白對(duì)照組比較仍有顯著差異(p＜0.05)；乙氨細(xì)辛組合物不同配比組與LPS組比較極明顯降低(p＜0.01)，與NAC干預(yù)組或細(xì)辛腦干預(yù)組比較有顯著差異(p＜0.05、p＜0.05)，且與空白對(duì)照組相比無顯著性差異(p＞0.05)，其中以乙酰半胱氨酸+細(xì)辛腦＝100mg+16mg時(shí)灰度值最大，染色強(qiáng)度最低。見表1。
(4)血清NO濃度變化 LPS組與空白對(duì)照組比較，血清NO濃度明顯增加(p＜0.01)；NAC干預(yù)組或細(xì)辛腦干預(yù)組與LPS組比較明顯降低(p＜0.05)；但與空白對(duì)照組比較仍有顯著差異(p＜0.05)；乙氨細(xì)辛組合物不同配比組與LPS組比較極明顯降低(p＜0.01)，與NAC干預(yù)組或細(xì)辛腦干預(yù)組比較有顯著差異(p＜0.05、p＜0.05)，且與空白對(duì)照組相比無顯著性差異(p＞0.05)，其中以乙酰半胱氨酸+細(xì)辛腦＝100mg+16mg時(shí)血清NO濃度最小。見表1。
(5)血清MDA濃度變化 LPS組血清MDA濃度較空白對(duì)照組明顯增高(p＜0.01)；NAC干預(yù)組或細(xì)辛腦干預(yù)組與LPS組比較明顯降低(p＜0.05)；但與空白對(duì)照組比較仍有顯著差異(p＜0.05)；乙氨細(xì)辛組合物不同配比組與LPS組比較極明顯降低(p＜0.01)，與NAC干預(yù)組或細(xì)辛腦干預(yù)組比較有顯著差異(p＜0.05、p＜0.05)，且與空白對(duì)照組相比無顯著性差異(p＞0.05)，其中以乙酰半胱氨酸+細(xì)辛腦＝100mg+16mg時(shí)血清MDA濃度最小。見表1。
表1各組大鼠肺系數(shù)、肺NF-kB相對(duì)灰度、血清NO、MDA濃度比較(x±s，n＝10)
注*p＜0.05，**p＜0.01與空白對(duì)照組相比；#p＜0.05，##p＜0.01，與LPS組相比；&p＜0.05，與NAC干預(yù)組相比；△p＜0.05，與細(xì)辛腦干預(yù)組相比。
實(shí)驗(yàn)結(jié)論上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，乙酰半胱氨酸與細(xì)辛腦合并用藥對(duì)脂多糖所致大鼠急性肺損傷的具有明顯的防治作用，使肺系數(shù)極顯著降低、肺NF-kB相對(duì)灰度明顯升高、血清NO濃度極明顯降低、血清MDA濃度極明顯降低。其中以乙酰半胱氨酸+細(xì)辛腦＝100mg+16mg組效果最好。
實(shí)驗(yàn)例2 乙氨細(xì)辛組合物對(duì)哮喘小鼠Clara細(xì)胞及CC16的影響供試品與材料0.9％生理鹽水注射液，市購(gòu)；卵蛋白(OVA，gradeV)、DAB，美國(guó)Sigma公司；Marker、NBT/BCIP，華舜生物工程有限公司；乙酰半胱氨酸(NAC)注射液，規(guī)格20ml4g，自制；細(xì)辛腦注射液，規(guī)格2ml8mg，北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司；乙氨細(xì)辛組合物注射液(乙酰半胱氨酸+細(xì)辛腦＝100mg+16mg)，自制(制備方法參見實(shí)施例2)；羊抗小鼠CC16多克隆抗體，購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司；生物素標(biāo)記豬抗山羊抗體、堿性磷酸酶標(biāo)記兔抗山羊抗體、辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈酶卵白素，均購(gòu)自北京中山生物技術(shù)有限公司。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)及物6周齡BALB/c小鼠70只，體重15～20g。按隨機(jī)數(shù)字表法將70只小鼠分為以下7組對(duì)照組、哮喘組、NAC干預(yù)組、細(xì)辛腦干預(yù)組、乙氨細(xì)辛組合物低、中、高劑量3組(乙酰半胱氨酸+細(xì)辛腦＝100mg+16mg)，每組各10只。
實(shí)驗(yàn)方法(1)哮喘模型的建立及各組處理 除對(duì)照組外，其余各組小鼠均在第0、7、14天腹腔注射OVA混懸液0.2ml(含20μgOVA，2.6mg氫氧化鋁)致敏，第21～26天鼻腔滴入50μl 2mg/ml OVA生理鹽水溶液激發(fā)。對(duì)照組小鼠以生理鹽水代替OVA，分別腹腔注射及鼻腔滴入。除對(duì)照和哮喘組的各組在第15～26天分別腹腔注射給藥，每天1次，第21～26天在OVA滴鼻前1h進(jìn)行。
(2)處死及標(biāo)本采集 全部小鼠于末次激發(fā)后24h放血處死。經(jīng)氣管插管分3次注入生理鹽水進(jìn)行支氣管肺泡灌洗，每次1ml。BALF離心后，細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)及分類，上清液凍存于-80℃?zhèn)溆?。取整個(gè)肺置于10％中性緩沖甲醛中固定，用于H-E染色和免疫組化。
(3)H-E染色及免疫組化 常規(guī)石蠟包埋切片，H-E染色觀察肺組織病理改變。免疫組化4μm組織切片，脫蠟至水，0.3％H2O2抑制內(nèi)源性過氧化物酶活性，微波修復(fù)抗原，10％豬血清封閉，山羊抗小鼠CC16多克隆抗體(1∶4000)37℃孵育1h，生物素標(biāo)記豬抗山羊抗體(1∶200)37℃孵育30min，辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈酶卵白素(1∶200)37℃孵育30min，DAB顯色。光鏡下觀察，胞質(zhì)內(nèi)棕色顆粒為陽性，計(jì)算陽性細(xì)胞數(shù)。在每只小鼠的終末或呼吸性細(xì)支氣管上任取50個(gè)免疫陽性細(xì)胞，每組共500個(gè)細(xì)胞，按如下標(biāo)準(zhǔn)計(jì)數(shù)不同陽性程度細(xì)胞的個(gè)數(shù)-，細(xì)胞內(nèi)無棕色顆粒沉淀；±，棕色顆粒少量、稀疏；+，胞質(zhì)內(nèi)1/2區(qū)域出現(xiàn)棕色顆粒沉淀；++，胞質(zhì)內(nèi)3/4區(qū)域出現(xiàn)棕色顆粒沉淀；+++，胞質(zhì)內(nèi)全部區(qū)域出現(xiàn)棕色顆粒沉淀。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)肺組織切片H-E染色 哮喘組小鼠支氣管及血管周圍可見大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，以嗜酸粒細(xì)胞(EOS)、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞為主，支氣管上皮細(xì)胞腫脹，且有部分脫落，部分杯狀化生，管壁平滑肌肥大，基底膜增厚。NAC干預(yù)組、細(xì)辛腦干預(yù)組、乙氨細(xì)辛組合物低、中、高劑量3個(gè)組上述炎癥反應(yīng)均減輕。
(2)BALF細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類 哮喘組小鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)及EOS比例較對(duì)照組均明顯增多(p＜0.01)；NAC干預(yù)組、細(xì)辛腦干預(yù)組細(xì)胞總數(shù)及EOS比例較哮喘組均減少(p＜0.05)，與對(duì)照組比較仍有顯著差異(p＜0.05)；乙氨細(xì)辛組合物低、中、高劑量3個(gè)組小鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)及EOS比例與哮喘組相比有極顯著差異(p＜0.01)，與NAC干預(yù)組或細(xì)辛腦干預(yù)組相比有顯著差異(p＜0.05和p＜0.05)，與對(duì)照組相比沒有顯著差異(p＞0.05)。見表2。
(3)免疫組化結(jié)果 所有切片的免疫組化陽性染色均集中于細(xì)支氣管上皮的無纖毛細(xì)胞(Clara細(xì)胞)上，主要分布于終末及呼吸性細(xì)支氣管。哮喘小鼠終末及呼吸性細(xì)支氣管上皮Clara細(xì)胞占上皮細(xì)胞的(58.05±3.75)％和(63.70±1.79)％，明顯少于對(duì)照組的(74.54±5.81)％和(78.46±1.68)％，而NAC組分別為(62.74±1.72)％和(67.47±3.53)％，細(xì)辛腦干預(yù)組分別為(65.56±1.99)％和(68.69±3.69)％，較哮喘組有所增加(p＜0.05)，乙氨細(xì)辛組合物低、中、高劑量3個(gè)組分別為(71.56±4.25)％和(75.35±2.43)％、(72.65±4.81)％和(76.94±4.65)％、(73.48±4.67)％和(78.06±2.32)％，較哮喘組極顯著增加(p＜0.01)。哮喘組Clara細(xì)胞免疫陽性強(qiáng)度與對(duì)照組有顯著差異(p＜0.01)，而NAC組或細(xì)辛腦干預(yù)組與哮喘組有顯著差異(p＜0.05)，乙氨細(xì)辛組合物低、中、高劑量3個(gè)組與哮喘組有極顯著差異(p＜0.01)，與NAC組或細(xì)辛腦干預(yù)組比較有顯著差異(p＜0.05)，與對(duì)照組比較無顯著差異(p＞0.05)，見表3。這表明哮喘小鼠CC16含量較對(duì)照組明顯減少(p＜0.01)，而NAC組或細(xì)辛腦干預(yù)組CC16含量較哮喘組明顯增多(p＜0.05)，乙氨細(xì)辛組合物低、中、高劑量3個(gè)組較哮喘組極顯著增多(p＜0.01)。
表2各組小鼠BALF中白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類(x±s，n＝10)
注*p＜0.05，**p＜0.01，與對(duì)照組相比#p＜0.05，##p＜0.01，與哮喘組相比；&p＜0.05，與NAC干預(yù)組相比；△p＜0.05，與細(xì)辛腦干預(yù)組相比。
表3各組小鼠Clara細(xì)胞免疫陽性強(qiáng)度
實(shí)驗(yàn)結(jié)論上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，乙氨細(xì)辛組合物可使哮喘小鼠肺Clara細(xì)胞中CC16含量極明顯增加、Clara細(xì)胞免疫陽性強(qiáng)度增加，且效果與給藥劑量相關(guān)，高劑量組效果最好，呈劑量依賴性。乙氨細(xì)辛組合物的效果優(yōu)于單用乙酰半胱氨酸和細(xì)辛腦的效果；提示，兩者具有協(xié)同增效作用。
實(shí)驗(yàn)例3 乙氨細(xì)辛組合物對(duì)家兔痰液分泌的影響供試品與材料0.9％生理鹽水注射液，市購(gòu)；乙酰半胱氨酸(NAC)注射液，規(guī)格20ml4g，自制；細(xì)辛腦注射液，規(guī)格2ml8mg，北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司；乙氨細(xì)辛組合物注射液(乙酰半胱氨酸+細(xì)辛腦＝100mg+16mg)，自制(制備方法參見實(shí)施例2)。
實(shí)驗(yàn)方法將家兔60只，隨機(jī)分成6組，每組10只，分別為空白對(duì)照組、乙酰半胱氨酸組、細(xì)辛腦組、乙氨細(xì)辛組合物低、中、高三個(gè)劑量組。動(dòng)物用烏拉坦耳緣靜脈麻醉，插上氣管導(dǎo)管，與一個(gè)恒定提供預(yù)熱(37℃)和恒溫(80％)呼吸空氣的裝置連接，在十字形氣管插管的下端連接一個(gè)固定好的刻度量筒，用于收集分泌物。為防止產(chǎn)生冷凝水，采用一個(gè)用棉花隔開的裝置，所有的動(dòng)物均自由呼吸并保證其所需的呼吸空氣量。經(jīng)過2小時(shí)的穩(wěn)定觀察，將實(shí)驗(yàn)藥物經(jīng)腹腔注射給藥，給藥劑量見下表。給藥后立即連續(xù)收集3個(gè)小時(shí)分泌物，測(cè)定分泌量。計(jì)算出痰液分泌的變化率。變化率＝(各實(shí)驗(yàn)組痰液量均值-生理鹽水組痰液量均值)/生理鹽水組痰液量均值×100％實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，各給藥組均能增加家兔呼吸道痰液分泌量，與空白對(duì)照組相比，乙酰半胱氨酸組、細(xì)辛腦組的分泌量變化率顯著(p＜0.05)，乙氨細(xì)辛組合物低、中、高三個(gè)劑量組的分泌量變化率極其顯著(p＜0.01)，且與乙酰半胱氨酸組或細(xì)辛腦組比較，差別亦顯著(p＜0.05、p＜0.05)。
表4乙氨細(xì)辛組合物對(duì)家兔痰液分泌的影響(x±s，n＝10)
注*p＜0.05，**p＜0.01，與空白對(duì)照組相比；&p＜0.05，與乙酰半胱氨酸組相比；△p＜0.05，與細(xì)辛腦組相比。
實(shí)驗(yàn)結(jié)論上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，乙氨細(xì)辛組合物可顯著增加家兔呼吸道痰液分泌量，且效果與給藥劑量相關(guān)，高劑量組效果最好，呈劑量依賴性。乙氨細(xì)辛組合物的效果優(yōu)于單用乙酰半胱氨酸和細(xì)辛腦的效果；提示，兩者具有協(xié)同增效作用。
實(shí)驗(yàn)例4 小鼠注射給藥急性毒性實(shí)驗(yàn)(1)實(shí)驗(yàn)方法供試品乙氨細(xì)辛組合物注射液(自制，5ml，乙酰半胱氨酸+細(xì)辛腦＝100mg+16mg)。
受試動(dòng)物小鼠，每組雌雄各5只，雄性體重25～28g，雌性體重21～24g。
給藥途徑靜脈注射、腹腔注射。
觀察項(xiàng)目死亡數(shù)、一般狀態(tài)、體重、剖檢、半數(shù)致死量。
(2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果按照急性毒性實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行預(yù)試，腹腔注射及靜脈注射兩給藥途徑皆無法測(cè)出藥物的半數(shù)致死量，也未見明顯的毒性反應(yīng)，故進(jìn)行一日內(nèi)最大給藥量實(shí)驗(yàn)。給藥劑量尾靜脈注射0.3ml/10g，腹腔注射0.3ml/10g，一日2次。
死亡數(shù)未出現(xiàn)死亡。
一般狀態(tài)未見異常變化。
體重于給藥前1天、給藥日、給藥后1、3、7、14天測(cè)量；未見異常變化。
剖檢心、肝、肺、腎等組織未見異常變化。
(3)結(jié)論本實(shí)驗(yàn)中未出現(xiàn)死亡，推測(cè)乙氨細(xì)辛組合物注射液對(duì)雌雄小鼠靜脈和腹腔注射給藥的最大耐受量均為0.6ml/10g，相當(dāng)于60kg體重人日最大用量30ml的120倍。表明本品低毒，安全性高。
實(shí)驗(yàn)例5 乙氨細(xì)辛組合物注射液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)供試品乙氨細(xì)辛組合物注射液(自制，5ml，乙酰半胱氨酸+細(xì)辛腦＝100mg+16mg)。
考察項(xiàng)目性狀、pH值、澄明度。
長(zhǎng)期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果將本品各組合物置溫度25℃±2℃、相對(duì)濕度60％±10％的條件下放置6個(gè)月、12個(gè)月，各項(xiàng)指標(biāo)均無明顯變化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本品組合物注射液長(zhǎng)期放置基本穩(wěn)定。
具體實(shí)施方式
以下通過實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。以下實(shí)施例中各劑型的輔料可以用藥學(xué)上可接受的輔料替換，或者減少、增加。
實(shí)施例1 乙氨細(xì)辛組合物粉針劑的制備1、處方乙氨細(xì)辛組合物處方1乙酰半胱氨酸100g細(xì)辛腦 16g聚山梨酯80 80g甘露醇 300g無菌注射用水加至3000ml共制備 1000支乙氨細(xì)辛組合物處方2乙酰半胱氨酸200g細(xì)辛腦 24g聚山梨酯80 120g甘露醇 500g無菌注射用水加至5000ml共制備 1000支2、具體步驟1)首先將配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，膠塞等進(jìn)行無菌處理。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)取配液量80％的無菌注射用水，再加入甘露醇和聚山梨酯80加熱攪拌溶解完全，將乙酰半胱氨酸和細(xì)辛腦加入加熱攪拌溶解完全，補(bǔ)加無菌注射用水至全量。
4)加入配液量0.05％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)過濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.22μm的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)分裝于抗生素玻璃瓶中，半壓塞。將樣品放入凍干機(jī)中冷凍干燥。預(yù)凍-40℃5小時(shí)，低溫真空干燥-40℃～0℃35小時(shí)，然后升溫至25℃真空干燥4小時(shí)。
9)凍干結(jié)束，壓塞，軋蓋。
10)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例2 乙氨細(xì)辛組合物水針劑的制備1、處方乙氨細(xì)辛組合物處方1乙酰半胱氨酸100g細(xì)辛腦 16g乙醇100ml聚乙二醇400 100ml注射用水加至5000ml共制備 1000支乙氨細(xì)辛組合物處方2乙酰半胱氨酸300g細(xì)辛腦 60g乙醇200ml聚乙二醇400 200ml注射用水加至10000ml共制備 1000支
2、具體步驟1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)取處方量的乙醇加等量的水混勻，將細(xì)辛腦溶解，加入40％的注射用水加聚乙二醇400將乙酰半胱氨酸溶解，兩者混合，補(bǔ)加注射用水至全量。
3)加入配液量0.05％的針用活性炭，40℃攪拌15分鐘。
4)過濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
5)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾。
6)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
7)將溶液罐裝熔封于玻璃安瓿中。
8)100℃流通蒸汽滅菌30分鐘。
9)趁熱將樣品放入0.01％的亞甲藍(lán)溶液中檢漏。
10)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例3 乙氨細(xì)辛組合物氯化鈉輸液的制備1、處方乙氨細(xì)辛組合物處方1乙酰半胱氨酸100g細(xì)辛腦 16g聚山梨酯80 100g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶乙氨細(xì)辛組合物處方2乙酰半胱氨酸250g細(xì)辛腦 40g聚山梨酯80 200g氯化鈉 2250g注射用水加至250000ml共制備 1000瓶2、具體步驟1)前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)將聚山梨酯80用注射用水配成20％的溶液，將乙酰半胱氨酸和細(xì)辛腦加入加熱攪拌溶解完全，將氯化鈉用配液量40％的注射用水溶解完全。合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
3)加入配液量0.05％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
4)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
5)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾。
6)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
7)灌裝于相應(yīng)容積的輸液瓶中。
8)115℃熱壓滅菌30分鐘。
9)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例4 乙氨細(xì)辛組合物葡萄糖輸液的制備1、處方乙氨細(xì)辛組合物處方1乙酰半胱氨酸100g細(xì)辛腦 16g聚山梨酯80 100g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶乙氨細(xì)辛組合物處方2乙酰半胱氨酸50g細(xì)辛腦 8g聚山梨酯80 50g葡萄糖 2500g注射用水加至50000ml共制備 1000瓶2、具體步驟1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)將聚山梨酯80用注射用水配成20％的溶液，將乙酰半胱氨酸和細(xì)辛腦加入加熱攪拌溶解完全，將葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全。合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
3)加入配液量0.05％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
4)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
5)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾。
6)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
7)灌裝于相應(yīng)容積的輸液瓶中。
8)115℃熱壓滅菌30分鐘。
9)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例5 乙氨細(xì)辛組合物片劑的制備1、處方乙氨細(xì)辛組合物處方1乙酰半胱氨酸200g細(xì)辛腦 30g預(yù)膠化淀粉 80g低取代羥丙基纖維素 40g微晶纖維素 40g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂4.0g羧甲淀粉鈉 15g共制備 1000片乙氨細(xì)辛組合物處方2乙酰半胱氨酸200g細(xì)辛腦 60g預(yù)膠化淀粉 80g低取代羥丙基纖維素 40g微晶纖維素 40g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂4.0g羧甲淀粉鈉 15g共制備 1000片2、具體步驟1)將乙酰半胱氨酸和細(xì)辛腦粉碎過100目篩備用。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
4)將乙酰半胱氨酸、細(xì)辛腦、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
5)過20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘干。
7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂和羧甲淀粉鈉，過18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗(yàn)。
9)按照化驗(yàn)確定的片重壓片。
10)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例6 乙氨細(xì)辛組合物膠囊劑的制備1、處方乙氨細(xì)辛組合物處方1乙酰半胱氨酸100g細(xì)辛腦 60g預(yù)膠化淀粉 60.0g微晶纖維素 20.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂2.0g微粉硅膠4.0g共制備 1000粒乙氨細(xì)辛組合物處方2乙酰半胱氨酸200g細(xì)辛腦 30g預(yù)膠化淀粉 60.0g微晶纖維素 20.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂2.0g微粉硅膠4.0g共制備 1000粒2、具體步驟1)將乙酰半胱氨酸和細(xì)辛腦粉碎過100目篩備用。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
4)將乙酰半胱氨酸、細(xì)辛腦、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
5)過20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘干。
7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂和微粉硅膠，過18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗(yàn)。
9)按照化驗(yàn)確定的裝量裝入膠囊。
10)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例7 乙氨細(xì)辛組合物顆粒劑的制備1、處方乙氨細(xì)辛組合物處方1乙酰半胱氨酸 100g細(xì)辛腦 30g糖粉2000.0g甜菊素 10g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包乙氨細(xì)辛組合物處方2乙酰半胱氨酸200g細(xì)辛腦 30g糖粉2000.0g甜菊素 10g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包2、具體步驟1)將蔗糖粉碎過100目篩備用。將乙酰半胱氨酸和細(xì)辛腦粉碎過100目篩備用。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將乙酰半胱氨酸和細(xì)辛腦與糖粉、甜菊素以等量遞加的方法混合均勻，加入2％HPMC50％乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
4)過20目篩制顆粒。
5)顆粒在60℃的條件下烘干。
6)干顆粒過18目篩整粒。
7)取樣，半成品化驗(yàn)顆粒中主藥的含量，確定裝量。
8)包裝，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例8 乙氨細(xì)辛組合物噴霧劑的制備1、處方乙酰半胱氨酸10g細(xì)辛腦 1.6g聚乙二醇400 10g聚山梨酯80 100ml氯化鈉 6.5g尼泊金甲酯 0.05g尼泊金乙酯 0.05g純化水 加至1000ml共制備 100瓶
2、具體步驟1、按照處方量稱取原料和輔料。
2、將細(xì)辛腦加入處方量的聚乙二醇400中加熱溶解完全，加入聚山梨酯80攪拌完全，邊攪拌邊加入純化水，至500ml，得澄明液體。
3、將乙酰半胱氨酸和氯化鈉、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯加入純化水200ml中，加熱攪拌溶解完全，與上述溶液混合均勻。
4、測(cè)定溶液得pH值，用1mol/L得氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液得PH值在6.0左右。
5、補(bǔ)充純化水至1000ml，攪拌均勻。
6、溶液過0.8微米的濾膜精濾，半成品化驗(yàn)。
7、分裝入噴霧劑瓶中，擰蓋。
8、成品全檢，包裝入庫(kù)。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其特征在于該組合物主要由下列重量份的原料藥制成乙酰半胱氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽20～1200份、細(xì)辛腦1～200份。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述的原料藥的重量份數(shù)為乙酰半胱氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽50～600份、細(xì)辛腦5～120份。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于所述的原料藥的重量份數(shù)為乙酰半胱氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽100～300份、細(xì)辛腦16～60份。
4.如權(quán)利要求1～3所述的任一藥物組合物，其特征在于所述的乙酰半胱氨酸藥學(xué)上可接受的鹽為有機(jī)氮鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、醋酸鹽、甲磺酸鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、氫溴酸鹽、門冬氨酸鹽。
5.如權(quán)利要求1～3所述的任一藥物組合物，其特征在于所述的藥物組合物在用于制備治療肺炎、支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病、伴肺部急性炎癥等方面的應(yīng)用。
6.如權(quán)利要求1～3所述的任一藥物組合物，其特征在于所述的藥物組合物可以與藥學(xué)上可接受的輔料混合制成任何一種臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型。
7.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于所述的臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型為注射劑。
8.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于所述的臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型為口服制劑。
9.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于所述的臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型為噴霧劑。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種主要由乙酰半胱氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽和細(xì)辛腦制成的藥物組合物及其制備方法，該組合物主要由下列重量份的原料藥制成乙酰半胱氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽20～1200份、細(xì)辛腦1～200份，該組合物可制成各種藥學(xué)上可接受的劑型；組合物在用于制備治療肺炎、支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病、伴肺部急性炎癥等方面具有協(xié)同增效作用，且穩(wěn)定性好，比單用同劑量的乙酰半胱氨酸或細(xì)辛腦的效果大大提高，產(chǎn)生了意想不到的效果，具有廣泛的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)A61K9/12GK101049293SQ20061004350
公開日2007年10月10日 申請(qǐng)日期2006年4月7日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月7日
發(fā)明者黃振華 申請(qǐng)人:黃振華