專利名稱：淫羊藿提取物與葛根素的組合物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于制備抗心腦血管疾病藥物的包括淫羊藿提取物、葛根素的藥物組合物，及其制備方法和應(yīng)用，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
2、背景技術(shù)心腦血管疾病如冠心病、心絞痛等是人類死亡的主要原因之一。目前，治療冠心病、心絞痛等心腦血管疾病的藥物種類繁多，常用的西藥有硝酸甘油、單硝酸異山梨酯、硝苯地平等，但是普遍存在不良反應(yīng)比較多的問題；中藥主要有復(fù)方丹參制劑、地奧心血康等，毒副作用雖然比較少，但是有效成分含量低或半衰期短，服用量較大或次數(shù)過多，用藥很不方便。
淫羊藿為小檗科植物淫羊藿(Epimedium brevicornum Maxin.)、箭葉淫羊藿(Epimediumsagittatum Maxin.)、柔毛淫羊藿(Epimedium pubescens Maxin.)、巫山淫羊藿(Epimediumwushanense T.S.Ying)或朝鮮淫羊藿(Epimedium koreanum Nakai.)的干燥地上部分。淫羊藿入藥始于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品，具有補腎陽、強筋骨、祛風(fēng)濕之功效；《本草綱目》稱其有“益精氣，堅筋骨，被腰膝，強心力”之功效。近年來，為綜合利用淫羊藿屬藥用植物資源，開展了廣泛的研究。現(xiàn)代藥理實驗研究表明，淫羊藿能改善血液流變學(xué)，增加心腦血管血流量，促進造血系統(tǒng)功能等?，F(xiàn)代化學(xué)成分研究顯示，淫羊藿的主要有效成分是淫羊藿總黃酮和淫羊藿多糖。
淫羊藿提取物為淫羊藿經(jīng)提取加工制成的提取物，其主要有效成分為淫羊藿總黃酮，主要含有淫羊藿苷和淫羊藿次苷等。藥理研究發(fā)現(xiàn)，淫羊藿總黃酮是淫羊藿促進免疫功能，增強心血管活動等功能的有效成分。淫羊藿苷具有增加冠脈血流量、增加腦血流量等作用；可用于冠心病、更年期高血壓，胸悶氣短等。
葛根素(Puerarin)為由豆科植物野葛(Pueraria lobata(Wild.)Ohwi)的干燥根中提取分離得到的一種黃酮苷，化學(xué)名為8-β-D葡萄吡喃糖-4′，7-二羥基異黃酮，結(jié)構(gòu)式如下所示。用葛根治療一般疾病，早在我國古代的醫(yī)學(xué)著作《本經(jīng)》、《傷寒雜病記》和《醫(yī)學(xué)大辭典》中就有記載。在國內(nèi)，1974年成功地提取了葛根素，1993年葛根素被衛(wèi)生部批準(zhǔn)用于臨床。藥理及臨床研究發(fā)現(xiàn)，葛根素為血管擴張藥，可以擴張冠狀動脈，緩解血管痙攣，增加冠脈流量，改善冠脈循環(huán)；降低心肌耗氧量，改善缺血心肌的收縮功能；抑制血小板聚集，降低血液粘度，改善血液流變學(xué)和微循環(huán)；改善心臟供血功能，降低腦血管阻力，增加腦血管流量，改善腦微循環(huán)；選擇性阻滯β1受體，減慢心率，降低血壓，抗心律失常；降低兒茶酚胺含量，對抗腎上腺素升糖作用。目前國內(nèi)已經(jīng)上市的主要有原料、水針、粉針、氯化鈉注射液、葡萄糖注射液，主要用于冠心病、心絞痛、心肌梗塞及缺血性腦血管疾病，對視網(wǎng)膜動、靜脈阻塞及突發(fā)性耳聾也有可靠的療效。
目前，利用淫羊藿提取物與葛根素的相互作用，配伍組方，制備治療心腦血管疾病等方面的藥物，尚未見報道。
3、發(fā)明內(nèi)容為了滿足臨床需要，更好的治療心腦血管疾病等，本發(fā)明提供了一種新的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用，制成它所含藥效組分的原料藥包括淫羊藿提取物和葛根素。
經(jīng)過發(fā)明人大量的篩選試驗，證明本發(fā)明藥物組合物中淫羊藿提取物與葛根素的重量配比在1∶0.02～50時有協(xié)同增效的作用，例如可以是1∶0.02、1∶0.05、1∶0.07、1∶0.1、1∶0.2、1∶0.25、1∶0.3、1∶0.4、1∶0.5、1∶0.6、1∶0.7、1∶0.8、1∶0.9、1∶1、1∶1.5、1∶2、1∶2.5、1∶3、1∶3.5、1∶4、1∶4.5、1∶5、1∶6、1∶7、1∶8、1∶9、1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35、1∶40、1∶45、1∶50，優(yōu)選為1∶0.05～20，進一步優(yōu)選為1∶0.1～10，最優(yōu)為1∶0.2～4。
上述藥物組合物中，淫羊藿提取物含淫羊藿總黃酮不低于20％、淫羊藿苷不低于1％；優(yōu)選為含淫羊藿總黃酮不低于50％、淫羊藿苷不低于3％。
本發(fā)明藥物組合物，藥物組分的重量配比是經(jīng)過發(fā)明人進行大量摸索總結(jié)得出的，各組分在上述重量配比范圍內(nèi)都具有較好療效。上述重量配比對于特殊病人，可以相應(yīng)調(diào)整組成的比例。
本發(fā)明還提供了上述藥物組合物在制備抗心腦血管疾病的藥物中的用途。上述藥物組合物，可以擴張冠狀動脈，緩解血管痙攣，增加冠脈流量，改善冠脈循環(huán)；降低心肌耗氧量，改善缺血心肌收縮功能；可以抑制血小板聚集，降低血液粘度，改善血液流變學(xué)和微循環(huán)；改善心臟供血功能，降低腦血管阻力，增加腦血管流量，改善腦微循環(huán)；選擇性阻滯β1受體，減慢心率，降低血壓，抗心律失常等。主要用于制備抗冠心病、心絞痛、心肌梗塞、血虛型心功能不全、缺血性腦血管疾病，以及中風(fēng)及中風(fēng)后遺癥、高脂血癥等的藥物。
藥理實驗表明，上述藥物組合物可使小鼠耳微動脈、微靜脈管徑增大，血流速度加快，顯著改善小鼠耳廓微循環(huán)；可降低兔海馬組織磷脂酶A2活性，改善腦缺血所致內(nèi)環(huán)境紊亂，減輕腦水腫，減小腦梗死面積，對家兔腦缺血再灌注損傷具有顯著的保護作用；可以增加犬的冠脈血流量，增加心肌供血，降低左室舒張末期壓，降低心臟前負荷等，顯著改善犬血液流動力學(xué)；顯著抑制大鼠血小板凝集；顯著延長大鼠實驗性頸動脈血栓形成時間；減小大鼠因結(jié)扎冠狀動脈所致的心電和生化指標(biāo)的異常改變，減小心肌缺血范圍，對結(jié)扎大鼠冠狀動脈所致心肌缺血有顯著保護作用；顯著降低大鼠的收縮壓和舒張壓；有效降低高脂膳食大鼠血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇水平和動脈粥樣硬化指數(shù)的值，具有很好的降血脂作用，同時可以顯著升高血中高密度脂蛋白膽固醇，對預(yù)防動脈粥樣硬化將起到較好的作用；顯著降低飲食性高血脂大鼠的血清膽固醇和甘油三酯水平，具有良好的降血脂功能。
本發(fā)明組合物可與藥學(xué)上可接受的輔料制成任何一種臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型，優(yōu)選注射劑或口服制劑；可以腸胃外或口服給藥等方式施用于需要這種治療的患者。
用于腸胃外給藥時，可制成注射劑。注射劑系指藥物制成的供注入體內(nèi)的溶液、乳液或混懸液及供臨用前配制或稀釋成溶液或混懸液的粉末或濃溶液的無菌制劑，注射劑可分為注射液、注射用無菌粉末與注射用濃溶液。注射液系指藥物制成的供注射入體內(nèi)用的無菌溶液型注射液、乳液型注射液或混懸型注射液，可用于肌內(nèi)注射、靜脈注射、靜脈滴注等；其規(guī)格有1ml、2ml、5ml、10ml、20ml、50ml、100ml、200ml、250ml、500ml等，其中供靜脈滴注用的大體積(一般不小于100ml)注射液也稱靜脈輸液。注射用無菌粉末系指藥物制成的供臨用前用適宜的無菌溶液配制成澄清溶液或均勻混懸液的無菌粉末或無菌塊狀物，可用適宜的注射用溶劑配制后注射，也可用靜脈輸液配制后靜脈滴注；無菌粉末用溶媒結(jié)晶法、噴霧干燥法或冷凍干燥法等制得。注射用濃溶液系指藥物制成的供臨用前稀釋供靜脈滴注用的無菌濃溶液。
制成注射劑時，可采用現(xiàn)有制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，可選用水性溶劑或非水性溶劑。最常用的水性溶劑為注射用水，也可用0.9％氯化鈉溶液或其他適宜的水溶液；常用的非水性溶劑為植物油，主要為供注射用大豆油，其他還有乙醇、丙二醇、聚乙二醇等的水溶液。配制注射劑時，可根據(jù)藥物的性質(zhì)加入適宜的附加劑，如滲透壓調(diào)節(jié)劑、pH值調(diào)節(jié)劑、增溶劑、填充劑、抗氧劑、抑菌劑、乳化劑、助懸劑等。常用的滲透壓調(diào)節(jié)劑包括氯化鈉、葡萄糖、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、山梨醇等，優(yōu)選氯化鈉或葡萄糖；常用的pH值調(diào)節(jié)劑包括醋酸-醋酸鈉、乳酸、枸櫞酸-枸櫞酸鈉、碳酸氫鈉-碳酸鈉等；常用的增溶劑包括聚山梨酯80、丙二醇、卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油等；常用的填充劑包括乳糖、甘露醇、山梨醇、右旋糖酐等；常用的抗氧劑有亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉等；常用抑菌劑為苯酚、甲酚、三氯叔丁醇等。注射劑常用容器有玻璃安瓿、玻璃瓶、塑料安瓿、塑料瓶等。
用于口服時，可制成常規(guī)的固體制劑，如片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑等；也可制成口服液體制劑，如口服溶液劑、口服混懸劑、糖漿劑等。片劑系指藥物與適宜的輔料混勻壓制而成的圓片狀或異形片狀的固體制劑，以口服普通片為主，另有含片、舌下片、口腔貼片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡騰片、緩釋片、控釋片與腸溶片等。膠囊劑系指藥物或加有輔料充填于空心膠囊或密封于軟質(zhì)囊材中的固體制劑，依據(jù)其溶解與釋放特性，可分為硬膠囊(通稱為膠囊)、軟膠囊(膠丸)、緩釋膠囊、控釋膠囊和腸溶膠囊等。丸劑系指藥物與適宜的輔料均勻混合，以適當(dāng)方法制成的球狀或類球狀固體制劑，包括滴丸、糖丸、小丸等。顆粒劑系指藥物與適宜的輔料制成具有一定粒度的干燥顆粒狀制劑，可分為可溶顆粒(通稱為顆粒)、混懸顆粒、泡騰顆粒、腸溶顆粒、緩釋顆粒和控釋顆粒等。口服溶液劑系指藥物溶解于適宜溶劑中制成供口服的澄清液體制劑。口服混懸劑系指難溶性固體藥物，分散在液體介質(zhì)中，制成供口服的混懸液體制劑，也包括干混懸劑或濃混懸液。糖漿劑系指含有藥物的濃蔗糖水溶液。
制成口服制劑時，可以加入適宜的填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑等。常用填充劑包括淀粉、糖粉、磷酸鈣、硫酸鈣二水物、糊精、微晶纖維素、乳糖、預(yù)膠化淀粉、甘露醇等；常用粘合劑包括羧甲基纖維素鈉、PVP-K30、羥丙基纖維素、淀粉漿、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙甲纖維素、膠化淀粉等；常用崩解劑包括干淀粉、交聯(lián)聚維酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素等；常用潤滑劑包括硬脂酸鎂、滑石粉、十二烷基硫酸鈉、微粉硅膠等。
本發(fā)明藥物組合物中，淫羊藿提取物的優(yōu)選制備工藝如下優(yōu)選工藝一取淫羊藿，切成小片，加水煎煮二次，每次1.5小時，每次加水10倍量。合并煎液，冷藏放置過夜，濾過，濾液濃縮至相對密度1.08～1.10的濃縮液，加于已處理好的聚酰胺樹脂柱上，先用3～4倍柱體積的水沖洗，再用2～3倍柱體積的20％乙醇沖洗，棄去洗滌液，再用4～5倍柱體積的95％乙醇進行洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，噴霧干燥，即得。通過本工藝制備的淫羊藿提取物得率為1～3％，其中淫羊藿總黃酮含量不低于80％，淫羊藿苷含量不低于15％。
優(yōu)選工藝二取淫羊藿藥材，粉碎成中粉，加70％～80％乙醇12倍量，浸泡12小時，濾過，濾液備用；藥渣加70％～80％乙醇加熱提取三次，每次1.5小時，濾過，合并濾液，濾液減壓濃縮至適量，上已處理好的聚酰胺柱，先用蒸餾水15L洗脫，再用15％～30％乙醇3L洗脫，最后用70％～80％乙醇20L洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，真空干燥，即得。通過本工藝制備的淫羊藿提取物得率為1～3％，其中淫羊藿總黃酮含量不低于50％，淫羊藿苷含量不低于3％。
優(yōu)選工藝三取淫羊藿藥材，粉碎成中粉，加70％～80％乙醇乙醇12倍量，浸泡12小時，濾過，濾液備用；藥渣加70％～80％乙醇加熱提取三次，每次1.5小時，濾過，合并濾液，濾液減壓濃縮至適量，上已處理好的D101大孔樹脂柱，過柱反復(fù)吸附5次后，先用蒸餾水4L洗脫，再用15％～30％乙醇3L洗脫，最后用70％～80％乙醇15L洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，真空干燥，即得。通過本工藝制備的淫羊藿提取物得率為1～3％，其中淫羊藿總黃酮含量不低于50％，淫羊藿苷含量不低于4％。
上述藥物組合物中，淫羊藿提取物還可以通過下列工藝制備，但不應(yīng)將此理解為上述藥物組合物中淫羊藿提取物僅限于通過上述或下列工藝制備。
工藝一取淫羊藿，切成小片，加80％乙醇煎煮三次，每次1小時，每次加醇10倍量，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，加乙酸乙酯振搖提取至乙酸乙酯層無色，無水硫酸鈉脫水，減壓濃縮，噴霧干燥，即得。通過本工藝制備的淫羊藿提取物得率為1～3％，中淫羊藿總黃酮含量不低于40％，淫羊藿苷含量不低于2％。
工藝二取淫羊藿，切成小片，加70％乙醇煎煮3次，每次30分鐘，每次加醇8倍量，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，噴霧干燥，粉碎，過篩，分裝，即得。通過本工藝制備的淫羊藿提取物得率為2～4％，淫羊藿總黃酮含量不低于30％，淫羊藿苷含量不低于5％。
工藝三取淫羊藿，切成小片，加飽和石灰水煎煮二次，每次1小時，每次加石灰水10倍量，合并提取液，濃縮至相對密度1.00～1.05，加鹽酸調(diào)pH值達7，加乙醇至醇含量達80％，充分攪拌，靜置，濾取上清液，回收乙醇至無醇味，噴霧干燥，即得。通過本工藝制備的淫羊藿提取物得率為2～4％，其中淫羊藿總黃酮含量不低于20％，淫羊藿苷含量不低于1％。
綜上所述，本發(fā)明藥物組合物具有下列優(yōu)點(1)首次提供了淫羊藿提取物和葛根素用于制備抗心腦血管疾病的藥物組合物，并證實二者有協(xié)同增效的作用，優(yōu)于二者單獨用藥。
(2)對本發(fā)明藥物組合物中藥物組份的用量進行了大量摸索研究，通過淫羊藿提取物與葛根素不同配比對小鼠耳廓微循環(huán)、大鼠實驗性頸動脈血栓形成時間、結(jié)扎大鼠冠狀動脈所致心肌缺血的影響，篩選出具有顯著療效的重量配比范圍。
(3)藥理藥效研究表明，本發(fā)明藥物組合物可顯著改善小鼠耳廓微循環(huán)，對家兔腦缺血再灌注損傷具有顯著的保護作用，顯著改善犬血液流動力學(xué)，顯著延長大鼠實驗性頸動脈血栓形成時間，對結(jié)扎大鼠冠狀動脈所致心肌缺血有顯著保護作用；顯著降低大鼠的收縮壓和舒張壓，具有良好的降血脂和預(yù)防動脈粥樣硬化功能。在抗心腦血管疾病方面有顯著效果，是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所意想不到的。
(4)本發(fā)明藥物組合物中，淫羊藿提取物中有效成分含量確切，葛根素結(jié)構(gòu)明確、療效確切，以淫羊藿提取物和葛根素直接投料，制備工藝簡便，避免了由于原藥材質(zhì)量差異造成的制劑質(zhì)量差異較大的缺點，制劑質(zhì)量有很大的提高，雜質(zhì)含量大大減少，安全性更高。
(5)本發(fā)明藥物組合物的有效成分明確、含量高，制劑穩(wěn)定性好，便于控制產(chǎn)品質(zhì)量，可以保證臨床用藥安全。
(6)對淫羊藿提取物的質(zhì)量進行控制，規(guī)定淫羊藿提取物含淫羊藿總黃酮不低于20％、淫羊藿苷不低于1％，優(yōu)選為含淫羊藿總黃酮不低于50％、淫羊藿苷不低于3％，并提供了多個優(yōu)選的淫羊藿提取物制備工藝，簡便易行，且質(zhì)量較好，適應(yīng)于工業(yè)化大生產(chǎn)。
以下通過實驗例來進一步闡述本發(fā)明的藥物組合物的有益效果，這些實驗例包括本發(fā)明的新藥物組合物的藥效學(xué)實驗、穩(wěn)定性實驗。本發(fā)明的藥物組合物具有下列有益效果，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明的藥物組合物僅具有下列有益效果。
實驗例1～5中所用的淫羊藿提取物為實施例1制備所得，實驗例6～9中所用的淫羊藿提取物為實施例2制備所得。以下實驗例中用YHG代替淫羊藿提取物和葛根素的藥物組合物。
實驗例1本發(fā)明藥物組合物對小鼠耳廓微循環(huán)的影響實驗受試動物 雄性小鼠，280只，體重25～28g，隨機分為14組，每組20只。
供試品 淫羊藿提取物自制，含淫羊藿總黃酮82.12％，淫羊藿苷17.56％(見實施例1)；葛根素市購，煙臺魯銀藥業(yè)有限公司；葛根素注射液市購，2ml∶100mg，煙臺魯銀藥業(yè)有限公司；淫羊藿提取物與葛根素的不同配比顆粒配比見表1，制備方法參見實施例12；氯化鈉注射液市購，250ml∶2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司。
給藥劑量 見表1。
實驗方法 小鼠灌胃給藥后，用烏拉坦1g/kg腹腔注射麻醉。麻醉后的小鼠置于鋪有棉花的托板上，保持室溫20±2℃。將小鼠右耳置于耳托架上，在右耳上滴少許液體石蠟，將托板置于顯微鏡載物臺上，調(diào)節(jié)冷光源，使照明光線與耳廓平面成45°～60°夾角，并與毛的生長方向相平行。先在低倍鏡下觀察耳廓全貌，選擇適當(dāng)部位，換用高倍鏡進行定點連續(xù)觀察。觀察給藥后20min的微循環(huán)狀態(tài)，測量微動脈、微靜脈的直徑和血流速度。
表1淫羊藿提取物和葛根素合并用藥對小鼠耳廓微循環(huán)的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，n＝20)
*p＜0.05；**p＜0.01，與對照組相比較。
實驗結(jié)果及結(jié)論 實驗結(jié)果見表1。淫羊藿提取物+葛根素給藥組與對照組相比較，耳微動脈、微靜脈管徑顯著增大(p＜0.01)，血流速度顯著加快(p＜0.01)；淫羊藿提取物給藥組、葛根素注射液給藥組與對照組相比較，耳微動脈、微靜脈管徑明顯增大(p＜0.05)，血流速度明顯加快(p＜0.05)。并且，淫羊藿提取物與葛根素各個配比(1∶0.02～50.0)給藥組的作用均強于淫羊藿提取物或葛根素注射液單獨給藥組的效果，提示兩藥有協(xié)同增效作用；淫羊藿提取物與葛根素的重量配比在1∶0.05～20范圍內(nèi)，效果較好；重量配比在1∶0.1～10范圍內(nèi)，效果更為顯著；重量配比在1∶0.25～4范圍內(nèi)，效果最好。
實驗例2本發(fā)明藥物組合物對犬血流動力學(xué)的影響受試動物 雜種犬，36只，雌雄兼用，體重10.0～12.0kg，隨機分為6組，每組6只。
供試品 YHG注射液1自制，5ml∶400mg，含淫羊藿提取物200mg、葛根素200mg；YHG注射液2自制，5ml∶300mg，含淫羊藿提取物100mg、葛根素200mg；YHG注射液3自制，5ml∶240mg，含淫羊藿提取物200mg、葛根素40mg；淫羊藿提取物自制，含淫羊藿總黃酮83.23％，淫羊藿苷18.05％；葛根素注射液市購，2ml∶100mg，煙臺魯銀藥業(yè)有限公司；氯化鈉注射液市購，250ml∶2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司。
給藥劑量 10mg/kg實驗方法犬用3％戊巴比妥鈉1ml/kg前肢靜脈注射麻醉，仰臥位固定于手術(shù)臺上，剪去頸部、胸部和右后肢內(nèi)側(cè)的毛。75％乙醇消毒剪毛區(qū)。分離氣管，并插入氣管插管，備人工呼吸用；分離頸外靜脈，并從頸外靜脈插管經(jīng)上腔靜脈進入右心房并達到心房竇處，用于抽取冠狀靜脈的血液；分離股靜脈，插入靜脈插管，整個實驗過程中緩慢恒速注入10％葡萄糖。分離股動脈，插入動脈插管(管內(nèi)充滿25U/ml的肝素鈉生理鹽水)，接通TP-400T型壓力換能器，由AP-641G型血壓放大器記錄血壓(收縮壓SAP，舒張壓DAP，平均動脈壓MAP)。人工呼吸下，于第4肋間開胸，剪開心包膜，分離升主動脈根部和左冠狀動脈前降支，分別放置適宜內(nèi)徑的電磁血流量計探頭(13,2mm)測量心輸出量(CO)和冠狀動脈血流量(CBF)。將左心室插管(管內(nèi)充滿25U/ml的肝素生理鹽水)經(jīng)左心室心尖部插入左心室內(nèi)，通過TP-400T型壓力換能器，由AP-641G型血壓放大器記錄左室內(nèi)壓(LVP)，通過AD-601G型放大器記錄左室舒張末期壓(LVEDP)將針狀電極插入犬四肢皮下，描記標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)心電圖(ECG)。上述測量信號均輸入RM-6000型八道生理記錄儀記錄，描記。同時將心輸出量、心電、血壓及心室內(nèi)壓的電信號輸入微機的生物醫(yī)學(xué)生理信號處理系統(tǒng)進行處理，并由微機讀出心室內(nèi)壓峰值(LVSP)、舒張末期壓(LVEDP)、心室收縮參數(shù)(+dp/dtmax)、心室舒張參數(shù)(-dp/dtmax)。最后，計算心指數(shù)(CI)、每搏輸出量(SV)、心搏指數(shù)(SI)、每搏功指數(shù)(SWI)、血管總外周阻力等參數(shù)(TPVR)。手術(shù)完成后穩(wěn)定20min，將藥物溶于100ml生理鹽水中，15min內(nèi)經(jīng)股靜脈恒速滴入。
在給藥前、給藥后1h、2h分別抽取左心室及冠狀靜脈血，肝素抗凝，注射于i-STATG3+Cartridges(i-STAT公司G3+型測試片)中，通過血氣分析儀測量動、靜脈血氧分壓。心肌耗氧量由Kanter公式計算而來，其公式是MVO2＝3.25×10×CF(PaO2-PvO2)/Wt。MVO2是指每100g左室心肌的耗氧量，CF為冠脈流量，PaO2、PvO2分別表示動、靜脈血氧分壓，Wt是左心室肌重。
所有數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，根據(jù)用藥前后各組中各個指標(biāo)的變化，采用配對t-檢驗來判斷用藥前后各種指標(biāo)改變的統(tǒng)計學(xué)意義。
實驗結(jié)果 (1)對麻醉犬總外周血管阻力的影響與對照組比較，各配比YHG注射液組均能顯著降低麻醉犬總外周血管阻力(p＜0.01)，葛根素組能明顯降低麻醉犬總外周血管阻力(p＜0.05)，淫羊藿提取物組的作用較葛根素注射液組低(p＜0.05)。
(2)對麻醉犬左室舒張末期壓的影響與對照組比較，各配比YHG注射液組均能顯著降低麻醉犬左室舒張末期壓(p＜0.01)，淫羊藿提取物組以及葛根素注射液組能明顯降低麻醉犬左室舒張末期壓(p＜0.05)。
(3)對麻醉犬冠狀動脈血流量的影響與對照組比較，各配比YHG注射液組均能顯著增加麻醉犬冠狀動脈血流量(p＜0.01)，淫羊藿提取物組以及葛根素注射液組能明顯增加麻醉犬冠狀動脈血流量(p＜0.05)。
(4)對麻醉犬心室收縮參數(shù)的影響與對照組比較，各配比YHG注射液組均能顯著增加麻醉犬心室收縮參數(shù)(p＜0.01)，淫羊藿提取物組以及葛根素注射液組能明顯增加麻醉犬心室收縮參數(shù)(p＜0.05)。
(5)對麻醉犬心室舒張參數(shù)的影響與對照組比較，各配比YHG注射液組均能顯著增加麻醉犬心室舒張參數(shù)(p＜0.01)，淫羊藿提取物組以及葛根素注射液組能明顯增加麻醉犬心室舒張參數(shù)(p＜0.05)。
(6)對麻醉犬心輸出量、每搏輸出量、心指數(shù)以及心搏指數(shù)的影響與對照組比較，各配比YHG注射液組均能顯著增加麻醉犬的心輸出量、每搏輸出量、心指數(shù)、心搏指數(shù)(p＜0.01)，淫羊藿提取物組以及葛根素注射液組能明顯增加麻醉犬的心輸出量、每搏輸出量、心指數(shù)、心搏指數(shù)(p＜0.05)。
結(jié)論 淫羊藿提取物和葛根素合并用藥可通過增加冠狀動脈血流量，使心肌的供血增加，降低左室舒張末期壓，使血液易于從心外膜向心內(nèi)膜下區(qū)域流動，對冠狀動脈血流量進行重新分配；能明顯降低心臟前負荷，對后負荷無明顯影響；能顯著改善心臟的泵血功能；能明顯改善心臟的收縮和舒張功能。淫羊藿提取物和葛根素合并用藥的效果優(yōu)于淫羊藿提取物或葛根素單獨用藥的效果，提示兩藥有協(xié)同增效作用。
實驗例3本發(fā)明藥物組合物對家兔腦缺血灌注損傷的保護作用受試動物 家兔，114只，雌雄兼用，體重2.4～2.8kg，隨機分為缺血再灌注組(18只)、YHG注射液治療組(每一配比18只)、淫羊藿提取物治療組(18只)、葛根素注射液治療組(18只)和假手術(shù)對照組(6只)。
供試品 注射用YHG 1自制，400mg，含淫羊藿提取物200mg、葛根素200mg；注射用YHG 2自制，300mg，含淫羊藿提取物200mg、葛根素100mg；注射用YHG 3自制，240mg，含淫羊藿提取物40mg、葛根素200mg；淫羊藿提取物自制，含淫羊藿總黃酮82.35％，淫羊藿苷17.72％；葛根素注射液市購，2ml∶100mg，煙臺魯銀藥業(yè)有限公司；氯化鈉注射液市購，250ml∶2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司。
供試液的配制 所有供試品均配成15mg/ml的供試液給藥劑量 15mg/kg實驗方法 (1)缺血再灌注組18只，用25％的氨基甲酸乙脂溶液1g/kg耳緣靜脈麻醉，頸部正中切口分離氣管插入氣管套管，暴露兩側(cè)頸總動脈，夾閉兩側(cè)動脈20min，造成腦缺血，分別再灌注1、6和12h，3個時間點各6只。松夾10min后，耳緣靜脈推注生理鹽水5ml/kg。(2)YHG注射液治療組每一配比的YHG注射液為一大組，共3大組，每大組18只，手術(shù)方法同缺血再灌注組，3個時間點各6只。松夾10min后，耳緣靜脈推注YHG注射液15mg/kg。(3)淫羊藿提取物治療組18只，手術(shù)方法同缺血再灌注組，3個時間點各6只。松夾10min后，耳緣靜脈推注淫羊藿提取物供試液15mg/kg。(4)葛根素注射液治療組18只，手術(shù)方法同缺血再灌注組，3個時間點各6只。松夾10min后，耳緣靜脈推注葛根素注射液15mg/kg。(5)假手術(shù)對照組6只，僅行麻醉和動脈分離術(shù)而不夾閉，1h后處死。上述各組實驗結(jié)束后即斷頭，在冰浴中剝出大腦，冰盤上解剖出雙側(cè)海馬區(qū)組織，用錫紙包裹放在4℃冰箱中儲存，備測磷脂酶A2(PLA2)；切取皮層組織測腦梗死面積、腦含水量，選取大腦中動脈供血區(qū)的額頂區(qū)組織標(biāo)本進行病理學(xué)觀察。所有計量資料數(shù)據(jù)均采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，組間比較采用t檢驗。
實驗結(jié)果 (1)對海馬組織PLA2活性的影響缺血再灌注組再灌注1h、6h和12h后，PLA2活性較假手術(shù)對照組明顯增高(p＜0.01)，且隨灌注時間延長，PLA2活性呈遞減趨勢，但各時間點間比較差異不顯著(p＞0.05)；各個配比的YHG注射液治療組(1h、6h、12h)PLA2活性明顯降低，與假手術(shù)對照組和缺血再灌注組各相應(yīng)時間點比較具有顯著性差異(p＜0.01)，且隨再灌時間延長，PLA2活性逐漸恢復(fù)正常水平；淫羊藿提取物治療組和葛根素注射液治療組(1h、6h、12h)PLA2活性降低，與假手術(shù)對照組和缺血再灌注組各相應(yīng)時間點比較具有明顯差異(p＜0.05)，淫羊藿提取物的作用低于葛根素注射液。
(2)對皮層組織含水量(％)和梗死面積(％)的影響缺血再灌注組各時間點腦含水量均增高；各個配比的YHG注射液治療組各時間點腦水含量與缺血再灌注組相比明顯減輕(p＜0.001)，腦梗死面積與缺血再灌注組相比明顯縮小(p＜0.01)；淫羊藿提取物治療組和葛根素注射液治療組各時間點腦水含量與缺血再灌注組相比明顯降低(p＜0.01)，腦梗死面積與缺血再灌注組相比明顯縮小(p＜0.05，p＜0.01)。
(3)腦組織病理改變假手術(shù)對照組無梗死灶，神經(jīng)元結(jié)構(gòu)形態(tài)正常，無間質(zhì)水腫；缺血再灌注組有梗死灶，梗死灶周神經(jīng)元腫脹，細胞輪廓不清，間質(zhì)水腫明顯；各個配比的YHG注射液治療組、淫羊藿提取物治療組、葛根素注射液治療組梗死灶面積均縮小，梗死灶周神經(jīng)元腫脹不明顯，間質(zhì)水腫明顯減輕；YHG注射液治療組作用更明顯。
結(jié)論 上述實驗結(jié)果表明，腦缺血再灌注后，YHG注射液、淫羊藿提取物、葛根素注射液均可降低海馬組織PLA2活性，改善腦缺血所致內(nèi)環(huán)境紊亂，減輕腦水腫，減小腦梗死面積；說明YHG、淫羊藿提取物、葛根素均具有清除自由基，快速切斷自由基連鎖反應(yīng)，抑制脂質(zhì)過氧化，減輕遲發(fā)性腦損傷等腦組織保護作用。各個配比的YHG注射液在各項指標(biāo)中藥效均高于淫羊藿提取物和葛根素注射液單獨用藥的效果，提示兩藥具有協(xié)同增效作用。
實驗例4 本發(fā)明藥物組合物對大鼠血小板凝集作用的影響受試動物 雄性大鼠，40只，體重200～220g，隨機分為4組，每組10只。
供試品 YHG注射液1自制，5ml∶400mg，含淫羊藿提取物200mg、葛根素200mg；氯化鈉注射液市購，250ml∶2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司。
給藥劑量 低、中、高劑量組分別為10、20、30mg/kg。
實驗方法 將大鼠隨機分為4組，每組10只，分別為對照組、YHG注射液1低劑量組、YHG注射液1中劑量組、YHG注射液1高劑量組。各組動物按表4腹腔注射給藥，每日1次，連續(xù)給藥7天，末次給藥后1小時，動物麻醉后自腹主動脈取血，抗凝劑采用3.28％枸櫞酸鈉，與血液以1∶9混合。將抗凝全血在20℃條件下1500rpm離心5min獲得富血小板血漿(PPR)。留取定量PPR后，將剩余PPR再次以3000rpm離心10min，獲得自身對照貧血小板血漿(PPP)。以PPP調(diào)節(jié)PPR濃度，使各PPR濃度相同。將PPR在37℃的恒溫孔中預(yù)熱后，加入ADP(終濃度為3μmol·L-1)引起血小板聚集，記錄最大聚集率。結(jié)果見表3。
表2淫羊藿提取物與葛根素合并用藥對大鼠血小板凝集作用的影響(n＝10)
**p＜0.01，與對照組相比較。
實驗結(jié)果及結(jié)論 實驗結(jié)果見表2。YHG注射液1各劑量組均能明顯抑制血小板聚集(p＜0.01)，表明，淫羊藿提取物與葛根素合并用藥有很好的抗血小板凝集作用，對防治冠心病、血栓性疾病等心腦血管疾病將有良好的療效。
實驗例5 本發(fā)明藥物組合物對高脂血癥大鼠脂質(zhì)代謝的影響受試動物 大鼠，50只，體重200～220g，隨機分為5組，每組10只。
供試品 注射用YHG 1自制，400mg，含淫羊藿提取物200mg、葛根素200mg；氯化鈉注射液市購，250ml∶2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司。
實驗方法 大鼠隨機分為正常飼料組，高脂飼料組，注射用YHG1低、中、高劑量組；單籠飼養(yǎng)，自由攝食和飲水。正常飼料組喂飼基礎(chǔ)飼料；高脂飼料組在基礎(chǔ)飼料配方基礎(chǔ)上添加10％的豬油和2％的膽固醇及1％的膽鹽；注射用YHG1低、中、高劑量組分別在高脂飼料基礎(chǔ)上補充注射用YHG1，使飼料中補充的注射用YHG1的含量為1、2、3g/kg。營養(yǎng)干預(yù)4周后，股靜脈取血觀察各項分析指標(biāo)的變化。血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)，用生物試劑盒測定。動脈粥樣硬化指數(shù)(AI)，用公式AI＝LDL-C/HDL-C計算。實驗數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，進行單因素方差分析。
實驗結(jié)果 高脂飼料組大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C及AI顯著高于正常飼料組(p＜0.05，p＜0.01)，但LDL-C升高的幅度(215％)遠大于HDL-C(25％)，可見高脂飼料組引起的大鼠血清TC升高主要是由于LDL-C升高所致。注射用YHG1干預(yù)各組大鼠血清TC、TG、LDL-C及AI均顯著低于高脂飼料組(p＜0.01)，注射用YHG1低劑量大鼠血清HDL-C降至正常飼料組水平，中、高劑量組HDL-C水平顯著升高(p＜0.05)。
結(jié)論 本實驗以不同劑量的注射用YHG1干預(yù)高脂大鼠，實驗結(jié)果表明，干預(yù)各組注射用YHG1均能有效降低高脂膳食大鼠血清TC、TG、LDL-C水平和AI的值，以高劑量組的作用最顯著；表明，淫羊藿提取物與葛根素合并用藥具有很好的降血脂作用，同時可以顯著升高血中HDL-C，對預(yù)防動脈粥樣硬化(AS)將起到較好的作用。
實驗例6本發(fā)明藥物組合物對大鼠實驗性頸動脈血栓形成的影響受試動物 雄性大鼠，400只，體重250～280g，隨機分為20組，每組20只。
供試品 淫羊藿提取物自制，含淫羊藿總黃酮56.19％，淫羊藿苷3.37％(見實施例2)；葛根素市購，煙臺魯銀藥業(yè)有限公司；淫羊藿提取物與葛根素不同配比注射液配比見表3，制備方法參見實施例3；淫羊藿提取物注射液自制，制備方法參見實施例3；葛根素注射液自制，制備方法參見實施例3；氯化鈉注射液市購，250ml∶2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司。
給藥劑量 見表3。
實驗方法 大鼠用2.5％戊巴比妥鈉(25mg/kg)腹腔注射麻醉，仰臥位固定，分離右側(cè)頸總動脈，采用電流損傷頸動脈內(nèi)膜法，用BT87-3實驗性體內(nèi)血栓形成儀測定不同組別動物頸動脈血栓形成時間。將刺激電極和溫度探頭掛于頸總動脈上，按表3所示腹腔注射給藥，給藥后10min開始刺激，刺激強度為2mA，刺激5min后關(guān)閉刺激開關(guān)，取下電極，3min后調(diào)節(jié)溫控表至零位，觀察動脈溫度突降時間。記錄電刺激開始至主動脈溫度突降的時間，該時間定為頸動脈血栓形成時間(超過3000秒者以3000秒計)。
表3本發(fā)明藥物組合物對大鼠實驗性頸動脈血栓形成時間的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，n＝20)
*p＜0.05，**p＜0.01，與氯化鈉注射液對照組相比較。
實驗結(jié)果及結(jié)論 實驗結(jié)果見表3。與氯化鈉注射液對照組相比較，淫羊藿提取物與葛根素重量配比為1∶0.05～20時，均極顯著延長大鼠實驗性頸動脈血栓形成時間(p＜0.01)；淫羊藿提取物可顯著延長大鼠實驗性頸動脈血栓形成時間(p＜0.05)；葛根素可極顯著延長大鼠實驗性頸動脈血栓形成時間(p＜0.01)。淫羊藿提取物與葛根素重量配比為1∶0.05～20時，對大鼠實驗性頸動脈血栓形成的延遲作用均優(yōu)于淫羊藿提取物或葛根素單獨給藥的效果，提示淫羊藿提取物與葛根素合并用藥有協(xié)同增效作用；重量配比為1∶0.1～10時，效果較好；重量配比為1∶0.2～4時，效果最好。
實驗例7本發(fā)明藥物組合物對結(jié)扎大鼠冠狀動脈所致心肌缺血的影響受試動物 大鼠，280只，體重250～280g，雌雄兼用，隨機分為14組，每組20只。
供試品 淫羊藿提取物自制，含淫羊藿總黃酮56.19％，淫羊藿苷3.37％(見實施例2)；葛根素市購，煙臺魯銀藥業(yè)有限公司；淫羊藿提取物與葛根素不同配比膠囊配比見表4，制備方法參見實施例8；淫羊藿提取物膠囊自制，制備方法參見實施例8；
葛根素膠囊自制，制備方法參見實施例8；生理鹽水自制。
給藥劑量 見表4。
實驗方法 大鼠用烏拉坦1g/kg腹腔注射麻醉，背位固定，記錄心電，接人工呼吸機進行人工呼吸，打開胸腔，剪開心包，心肌缺血對照組灌胃給藥生理鹽水3ml，各給藥組按表4灌胃給藥，3min后結(jié)扎左側(cè)冠狀動脈前降枝，全程記錄心電30min，結(jié)扎后1h取血，檢測磷酸肌酸激酶(CPK)和乳酸脫氫酶(LDH)。取出大鼠心臟，沿結(jié)扎線將心室肌均勻橫切4片，0.5％氯化硝基四氮唑蘭染色，用求積儀測每片心肌兩面的缺血面積，計算心肌缺血面積占心室面積的百分比。
表4本發(fā)明藥物組合物對結(jié)扎大鼠冠狀動脈所致心肌缺血的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，n＝20)
*p＜0.05，**p＜0.01，與心肌缺血對照組相比較。
實驗結(jié)果及結(jié)論 實驗結(jié)果見表4。結(jié)扎后，心肌缺血對照組大鼠心電的QRS波均突然異常增高、加寬，心肌大范圍缺血，生化檢測表現(xiàn)為CPK和LDH均異常增高。與心肌缺血對照組相比較，淫羊藿提取物與葛根素重量配比為1∶0.1～10時，均能顯著或極顯著減小因結(jié)扎冠狀動脈所致的心電和生化指標(biāo)的異常改變(p＜0.05，p＜0.01)，極顯著減小心肌缺血范圍(p＜0.01)；淫羊藿提取物能顯著減小因結(jié)扎冠狀動脈所致的心電和生化指標(biāo)的異常改變(p＜0.05)，顯著減小心肌缺血范圍(p＜0.05)；葛根素能極顯著減小因結(jié)扎冠狀動脈所致的心電和生化指標(biāo)的異常改變(p＜0.05)，顯著減小心肌缺血范圍(p＜0.05)。淫羊藿提取物與葛根素重量配比為1∶0.1～10時，對結(jié)扎大鼠冠狀動脈所致心肌缺血的保護作用均優(yōu)于淫羊藿提取物或葛根素單獨給藥的效果，提示淫羊藿提取物與葛根素合并用藥有協(xié)同增效作用；重量配比為1∶0.2～4時，效果更好。
實驗例8本發(fā)明藥物組合物對大鼠血壓的影響受試動物 健康雄性大鼠，60只，體重250～280g，隨機分為6組，每組10只。
供試品 YHG注射液7自制，5ml∶300mg，含淫羊藿提取物200mg，葛根素100mg；淫羊藿提取物注射液自制，制備方法參見實施例3；葛根素注射液自制，制備方法參見實施例3；氯化鈉注射液市購，250ml∶2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司。
給藥劑量 見表5。
實驗方法各組大鼠均以2％戊巴比妥鈉45mg/kg腹腔注射麻醉。分離氣管，插入氣管套管；分離右頸總動脈，插管后經(jīng)壓力換能器連接GY-40四道生理記錄儀記錄收縮壓(SAP)、舒張壓(DAP)及平均動脈壓(MAP)；同時記錄肢體II導(dǎo)聯(lián)心電圖。不同的藥物通過WZ-50G微量注射泵以每小時10ml/kg注入股靜脈，對照組給藥氯化鈉注射液，觀察給藥前、給藥后0.5h和1h的外周血壓變化。
表5本發(fā)明藥物組合物對大鼠血壓的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，n＝10)
*p＜0.05，**p＜0.01，與對照組相比較。
實驗結(jié)果及結(jié)論與氯化鈉注射液對照組相比較，YHG注射液7低劑量組，給藥后0.5h時的收縮壓和舒張壓均顯著降低(p＜0.05)，給藥后1h小時的收縮壓和舒張壓均極顯著降低(p＜0.01)；中、高劑量組，給藥1h時和給藥后1h時的收縮壓和舒張壓均顯著降低(p＜0.01)；降壓作用呈劑量依賴性；淫羊藿提取物注射液給藥后0.5h時的收縮壓和舒張壓均降低，但無顯著性差異，給藥后1h時的收縮壓和舒張壓均顯著降低(p＜0.05)；葛根素注射液給藥組，給藥后0.5h時和給藥后1h時的收縮壓和舒張壓均顯著降低(p＜0.05)。YHG注射液7低、中、高劑量組的作用均優(yōu)于淫羊藿提取物或葛根素單獨給藥組的效果，提示淫羊藿提取物與葛根素合并用藥有協(xié)同增效作用，在抗高血壓方面將有顯著療效。
實驗例9本發(fā)明藥物組合物對大鼠實驗性高血脂癥的影響受試動物 健康雄性大鼠，50只，體重200～240g，隨機分為5組，每組10只。
供試品 YHG膠囊2自制，400mg，含淫羊藿提取物300mg，葛根素100mg；淫羊藿提取物膠囊自制，制備方法參見實施例8；葛根素膠囊自制，制備方法參見實施例8；生理鹽水自制。
給藥劑量 見表6和表7。
實驗方法 各組大鼠測藥前膽固醇及甘油三酯水平后，建高脂模型。除空白對照組給予普通飼料外，其余各組均給予高脂飼料(配方為普通飼料86.8％、膽固醇3％、豬油10％、丙硫氧嘧淀0.2％)，連續(xù)喂飼10天后，測血清膽固醇及甘油三酯水平，確定高脂模型建成。模型建成后繼續(xù)飼高脂飼料?？瞻讓φ战M和高脂模型組分別灌胃給藥生理鹽水，給藥組分別按表6和表7所示劑量灌胃給藥，每日給藥1次，連續(xù)給藥20天后，再取血測膽固醇及甘油三酯水平。
表6本發(fā)明藥物組合物對飲食性高血脂大鼠血清膽固醇的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，n＝10)
*p＜0.05，**p＜0.01，與高脂模型組相比較；▲▲▲p＜0.001，與空白對照組相比較。
表7本發(fā)明藥物組合物對飲食性高血脂大鼠血清甘油三酯的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，n＝10)
*p＜0.05，**p＜0.01，與高脂模型組相比較；▲▲p＜0.01，與空白對照組相比較。
實驗結(jié)果及結(jié)論 實驗結(jié)果見表6和表7。與氯化鈉注射液對照組相比較，高脂模型組大鼠血清膽固醇和甘油三酯均極顯著升高(p＜0.01，p＜0.001)，說明造模成功。與高脂模型組相比較，YHG膠囊2低劑量組可顯著降低飲食性高血脂大鼠的血清膽固醇和甘油三酯水平(p＜0.05)；中劑量組和高劑量組可極顯著降低飲食性高血脂大鼠的血清膽固醇和甘油三酯水平(p＜0.01)。結(jié)果表明，淫羊藿提取物與葛根素藥物組合物具有良好的降血脂功能，在治療高血脂癥方面將有顯著療效。
實驗例10本發(fā)明藥物組合物注射液的穩(wěn)定性研究供試品 YHG注射液1自制，5ml∶400mg，含淫羊藿提取物200mg、葛根素200mg；YHG注射液2自制，5ml∶300mg，含淫羊藿提取物100mg、葛根素200mg；YHG注射液3自制，5ml∶240mg，含淫羊藿提取物200mg、葛根素40mg；YHG注射液4自制，5ml∶220mg，含淫羊藿提取物200mg、葛根素20mg；YHG注射液5自制，5ml∶210mg，含淫羊藿提取物10mg、葛根素200mg；YHG注射液6自制，5ml∶255mg，含淫羊藿提取物5mg、葛根素250mg；YHG注射液7自制，5ml∶300mg，含淫羊藿提取物200mg，葛根素100mg；YHG注射液8自制，5ml∶250mg，含淫羊藿提取物200mg、葛根素50mg。
考察項目 性狀、pH值、澄明度、有關(guān)物質(zhì)、標(biāo)示含量。
長期試驗 置溫度25℃±2℃、相對濕度60％±10％的條件下放置12個月。分別于第3個月、6個月、9個月、12個月，比較外觀后，測試各項指標(biāo)，將結(jié)果與0個月比較；12個月末增加無菌和熱原檢查。
試驗結(jié)果 溫度25℃±2℃、相對濕度60％±10％的條件下放置12個月，各項指標(biāo)均無明顯變化；長期試驗12個月末，熱原、無菌檢查均符合規(guī)定。
結(jié)論 上述考察結(jié)果表明，YHG注射液的各項指標(biāo)均比較穩(wěn)定，可以長期儲存，適應(yīng)于工業(yè)大生產(chǎn)。
具體實施方式
以下通過實施例形式的具體實施方式
，對本發(fā)明的上述內(nèi)容作進一步的詳細說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。以下實施例中各劑型的制備中的輔料可以用藥學(xué)上可接受的輔料替換，或者減少、增加。
實施例1淫羊藿提取物的制備以及鑒別和含量測定(一)淫羊藿提取物的制備取淫羊藿1000g，切成小片，加水煎煮2次，每次1.5小時，每次加水為10L。合并煎液，冷藏放置過夜，濾過，濾液濃縮至相對密度1.08～1.10的濃縮液，加于已處理好的聚酰胺樹脂柱上，先用3～4倍柱體積的水沖洗，再用2～3倍柱體積的20％乙醇沖洗，棄去洗滌液，再用4～5倍柱體積的95％乙醇進行洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，噴霧干燥，即得。
按照上述方法分別制備三批淫羊藿提取物，得率見表8。
淫羊藿提取物的鑒別取淫羊藿提取物0.1g，加乙醇10ml，溫浸30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作為對照品溶液。薄層色譜法實驗，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以乙酸乙脂-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)作為展開劑，展開，取出，涼干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的暗紅色斑點；噴以三氯化鋁試液，再置紫外光燈(365nm)下檢視，顯相同的橙紅色熒光斑點。
對上述制備的三批淫羊藿提取物進行鑒別實驗，均符合要求。
淫羊藿提取物的含量測定淫羊藿總黃酮的含量測定——紫外-可見分光光度法測定法 精密稱取淫羊藿提取物0.01g，置50ml量瓶中，加甲醇25ml超聲處理30分鐘，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取淫羊藿苷對照品，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，作為對照品溶液。分別取供試品溶液和對照品溶液，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在270nm波長處測定吸光度，計算，即得。
淫羊藿苷的含量測定——高效液相色譜法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以乙睛-水(30∶70)為流動相；檢測波長為270nm。理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計算不低于1500。
對照品溶液得制備 精密稱取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 淫羊藿提取物20mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加稀乙醇適量使溶解，并用稀乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
對上述制備的三批淫羊藿提取物分別進行含量測定，測定結(jié)果見表8。
表8淫羊藿提取物的含量測定結(jié)果和得率
實施例2淫羊藿提取物的制備以及鑒別和含量測定(二)淫羊藿提取物的制備取淫羊藿藥材1000g，粉碎成中粉，加70％乙醇12倍量，浸泡12小時，濾過，濾液備用；藥渣加70％乙醇加熱提取三次，每次1.5小時，濾過，合并濾液，濾液減壓濃縮至1000ml，上已處理好的聚酰胺柱，先用蒸餾水15L洗脫，再用15％乙醇3L洗脫，最后用70％乙醇20L洗脫，收集70％乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，真空干燥，即得。
按照上述方法分別制備三批淫羊藿提取物，得率見表9。
淫羊藿提取物的鑒別按照實施例1中的鑒別方法，分別對上述制備的三批淫羊藿提取物進行鑒別實驗，均符合要求。
淫羊藿提取物的含量測定按照實施例1中的含量測定方法，分別對上述制備的三批淫羊藿提取物分別進行含量測定，測定結(jié)果見表9。
表9淫羊藿提取物的含量測定結(jié)果和得率
實施例3本發(fā)明藥物組合物注射液的制備1、處方處方1淫羊藿提取物200g葛根素 200g丙二醇 700ml注射用水加至5000ml共制備 1000支處方2淫羊藿提取物100g葛根素 200g丙二醇 700ml注射用水加至5000ml共制備 1000支處方3淫羊藿提取物200g葛根素 40g丙二醇 700ml注射用水加至5000ml共制備 1000支處方4淫羊藿提取物200g葛根素 20g丙二醇 700ml注射用水加至5000ml共制備 1000支處方5淫羊藿提取物10g葛根素 200g丙二醇 700ml注射用水加至5000ml共制備 1000支處方6淫羊藿提取物5g葛根素 250g丙二醇 700ml注射用水加至5000ml共制備 1000支處方7淫羊藿提取物200g葛根素 100g丙二醇 1000ml注射用水加至5000ml共制備 1000支處方8淫羊藿提取物200g葛根素 50g丙二醇 1000ml注射用水加至5000ml共制備 1000支
2、具體步驟(1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗；(2)將淫羊霍提取物加入配液量20％的注射用水中加熱攪拌溶解完全，葛根素加入丙二醇中加熱攪拌溶解完全；(3)補加注射用水至全量；(4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘；(5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭，測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值；(6)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾；(7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗；(8)將溶液熔封于玻璃安瓿中；(9)100℃流通蒸汽滅菌30分鐘；(10)趁熱將樣品放入0.01％的亞甲藍溶液中檢漏；(11)燈檢；成品全檢，包裝入庫。
實施例4本發(fā)明藥物組合物粉針的制備1、處方處方1淫羊藿提取物200g葛根素 200g聚山梨酯80 100g甘露醇 300g無菌注射用水加至3000ml共制備 1000支處方2淫羊藿提取物200g葛根素 100g聚山梨酯80 50g甘露醇 300g無菌注射用水加至3000ml共制備 1000支處方3淫羊藿提取物40g葛根素 200g聚山梨酯80 100g甘露醇 300g無菌注射用水加至3000ml共制備 1000支處方4淫羊藿提取物20g葛根素 200g聚山梨酯80 200g甘露醇 300g無菌注射用水加至3000ml共制備 1000支處方5淫羊藿提取物200g葛根素 10g聚山梨酯80 10g甘露醇 300g無菌注射用水加至3000ml共制備 1000支處方6淫羊藿提取物400g葛根素 10g聚山梨酯80 10g甘露醇 300g無菌注射用水加至3000ml共制備 1000支處方7淫羊藿提取物100g葛根素 400g聚山梨酯80 10g甘露醇 200g無菌注射用水加至3000ml共制備 1000支處方8淫羊藿提取物250g葛根素 100g聚山梨酯80 50g甘露醇 200g無菌注射用水加至3000ml共制備 1000支2、具體步驟(1)首先將配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，膠塞等進行無菌處理；(2)按照處方量稱取原輔料；(3)將淫羊霍提取物加入配液量30％無菌注射用水中加熱溶解完全；甘露醇加配液量30％的無菌注射用水加熱攪拌溶解完全；聚山梨酯80加20％的無菌注射用水后制成水溶液，加入葛根素加熱溶解；合并上述溶液，補加無菌注射用水至全量；
(4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘；(5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值；(6)經(jīng)0.22μm的微孔濾膜精濾；(7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗；(8)分裝于抗生素玻璃瓶中，半壓塞；將樣品放入凍干機中冷凍干燥；-45℃預(yù)凍5小時，低溫真空干燥-45℃～0℃20小時，然后升溫至25℃真空干燥3小時；(9)凍干結(jié)束，壓塞，軋蓋；(10)成品全檢，包裝入庫。
實施例5本發(fā)明藥物組合物氯化鈉注射液的制備1、處方處方1淫羊藿提取物200g葛根素 200g聚山梨酯80 100g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方2淫羊藿提取物500g葛根素 100g聚山梨酯80 200g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方3淫羊藿提取物100g葛根素 400g聚山梨酯80 100g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶2、具體步驟(1)前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗；(2)將淫羊霍提取物加入配液量20％注射用水加熱攪拌溶解完全；將氯化鈉用配液量20％的注射用水溶解完全；聚山梨酯80加20％的無菌注射用水后制成水溶液，加入葛根素加熱溶解；
(3)合并兩溶液，補加注射用水至全量；(4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘；(5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值；(6)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾；(7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗；(8)灌裝于100ml的輸液瓶中；(9)115℃熱壓滅菌30分鐘；(10)燈檢；成品全檢，包裝入庫。
實施例6本發(fā)明藥物組合物葡萄糖注射液的制備1、處方處方1淫羊藿提取物200g葛根素 200g聚山梨酯80 100g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方2淫羊藿提取物400g葛根素 40g聚山梨酯80 100g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方3淫羊藿提取物40g葛根素 400g聚山梨酯80 100g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶2、具體步驟(1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗；(2)將淫羊霍提取物加入配液量20％注射用水中加熱攪拌溶解完全；將葡萄糖用配液量20％的注射用水溶解完全，加熱煮沸15分鐘；聚山梨酯80加20％的無菌注射用水后制成水溶液，加入葛根素加熱溶解；
(3)合并兩溶液，補加注射用水至全量；(4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘；(5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值；(6)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾；(7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗；(8)灌裝于100ml的輸液瓶中；(9)115℃熱壓滅菌30分鐘；(10)燈檢；成品全檢，包裝入庫。
實施例7本發(fā)明藥物組合物片的制備1、處方處方1淫羊藿提取物200g葛根素 200g淀粉100.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂2.0g羧甲淀粉鈉 4.0g共制備 1000片處方2淫羊藿提取物400g葛根素 200g淀粉100.0g微晶纖維素 60.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂2.0g羧甲淀粉鈉 4.0g共制備 1000片2、具體步驟(1)將淫羊藿提取物和葛根素粉碎過100目篩備用；(2)按照處方量稱取原輔料；(3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用；(4)將淫羊藿提取物、葛根素、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材；(5)過20目篩制顆粒；
(6)顆粒在60℃的條件下烘干；(7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂和羧甲淀粉鈉，過18目篩整粒，混合均勻；(8)取樣，半成品化驗；(9)按照化驗確定的片重壓片；(10)成品全檢，包裝入庫。
實施例8本發(fā)明藥物組合物膠囊的制備1、處方處方1淫羊藿提取物200g葛根素 200g淀粉50.0g微晶纖維素 20.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂4.0g共制備 1000粒處方2淫羊藿提取物300g葛根素 100g淀粉100.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂4.0g共制備 1000粒2、具體步驟(1)將淫羊藿提取物和葛根素粉碎過100目篩備用；(2)按照處方量稱取原輔料；(3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用；(4)將淫羊藿提取物、葛根素、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材；(5)過20目篩制顆粒；(6)顆粒在60℃的條件下烘干；(7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂，過18目篩整粒，混合均勻；(8)取樣，半成品化驗；(9)按照化驗確定的裝量裝入膠囊；(10)成品全檢，包裝入庫。
實施例9本發(fā)明藥物組合物滴丸的制備1、處方淫羊藿提取物200g葛根素 200g聚乙二醇6000550g2、具體步驟(1)聚乙二醇6000在水浴中加熱熔融；(2)聚乙二醇6000全部熔融后加入淫羊藿提取物和葛根素，攪拌溶解；(3)過60目篩過濾；(4)保持60℃滴入冷至10℃以下的液體石蠟中制成丸；(5)成品全檢，包裝入庫。
實施例10本發(fā)明藥物組合物軟膠囊的制備1、處方處方1淫羊藿提取物200g葛根素 200g大豆油 400g大豆磷脂20g蜂蠟12g共制備 1000粒處方2淫羊藿提取物200g葛根素 100g大豆油 400g大豆磷脂20g蜂蠟12g共制備 1000粒2、具體步驟(1)處方量的大豆油和大豆磷脂、蜂蠟加熱熔融，混勻，放冷；(2)加入淫羊藿提取物和葛根素，混勻，過膠體磨；(3)取樣，半成品化驗；(4)壓制成軟膠囊；(5)成品全檢，包裝入庫。
實施例11本發(fā)明藥物組合物口服液制備
1、處方處方1淫羊藿提取物200g葛根素 200g丙二醇 2000ml苯甲酸鈉15g甜菊甙 10g純化水 加至10000ml共制備 1000支處方2淫羊藿提取物300g葛根素 200g丙二醇 2000ml苯甲酸鈉20g甜菊甙 10g純化水 加至10000ml共制備 1000支2、具體步驟(1)將淫羊霍提取物加入配液量50％的純化水中加熱攪拌溶解完全；葛根素加入丙二醇加熱攪拌溶解完全；(2)將苯甲酸鈉和甜菊甙用配液量20％的水溶解完全；(3)合并上述兩個溶液，補加水至全量；(4)過0.8μm的微孔濾膜過濾；(5)半成品化驗；(6)灌裝；成品全檢，包裝入庫。
實施例12本發(fā)明藥物組合物顆粒的制備1、處方處方1淫羊藿提取物200g葛根素 200g糖粉1700.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包處方2淫羊藿提取物250g葛根素 200g糖粉1600.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包處方3淫羊藿提取物25g葛根素 400g糖粉1600.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包2、具體步驟(1)將蔗糖粉碎過100目篩備用；將淫羊藿提取物和葛根素粉碎過100目篩備用；(2)按照處方量稱取原輔料；(3)將淫羊藿提取物、葛根素與糖粉以等量遞加的方法混合均勻，加2％HPMC50％乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材；(4)過20目篩制顆粒；(5)顆粒在60℃的條件下烘干；(6)干顆粒過18目篩整粒；(7)取樣，半成品化驗顆粒中主藥的含量，確定裝量；(8)包裝；成品全檢，包裝入庫。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其特征在于它包括淫羊藿提取物、葛根素。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述的淫羊藿提取物與葛根素的重量配比為1∶0.02～50。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于所述的淫羊藿提取物與葛根素的重量配比為1∶0.05～20。
4.如權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其特征在于所述的淫羊藿提取物與葛根素的重量配比為1∶0.1～10。
5.如權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征在于所述的淫羊藿提取物與葛根素的重量配比為1∶0.2～4。
6.如權(quán)利要求1～5所述的任一藥物組合物，其特征在于所述的淫羊藿提取物含淫羊藿總黃酮不低于20％、淫羊藿苷不低于1％。
7.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于所述的淫羊藿提取物含淫羊藿總黃酮不低于50％、淫羊藿苷不低于3％。
8.如權(quán)利要求1～5所述的任一藥物組合物，在制備治療心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
9.如權(quán)利要求1～5所述的任一藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物可制成任一種臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型。
10.如權(quán)利要求9所述的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物可制成口服制劑或注射劑。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種新的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用，包括淫羊藿提取物與葛根素，其重量配比范圍為1∶0.02～50。以淫羊藿提取物和葛根素直接投料，制備工藝簡便，可制成各種臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型，優(yōu)選為注射劑或口服制劑；兩藥協(xié)同作用，共同發(fā)揮改善冠脈循環(huán)、腦微循環(huán)、微循環(huán)和血液流變學(xué)，降壓、降血脂、抗心律失常等作用，藥效增強，療效確切，不良反應(yīng)減少，主要用于制備抗心腦血管疾病的藥物。
文檔編號A61P9/00GK1927247SQ200610125859
公開日2007年3月14日 申請日期2006年8月30日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月31日
發(fā)明者蔡軍 申請人:蔡軍