專利名稱：一種山楂葉總黃酮的提取制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從植物中提取總黃酮的生產(chǎn)工藝，具體地說是一種從山楂葉中提取總黃酮的生產(chǎn)工藝。
背景技術(shù)：
山楂葉是薔薇科山楂屬植物山楂Cratogwp/""加:/ ^Bge.的葉子?，F(xiàn)代藥理試驗表明，從山楂葉中所提取的總黃酮，具有擴張血管、改善冠脈供血、保護心肌、抑制血小板聚集等作用。臨床資料也表明山楂總黃酮對冠心病、心絞痛病人總有效率為94.4%;對降低血脂總效率為85%;對冠心病、心肌炎及心肌并引起的早搏總有效率為62.5%。此外，山楂總黃酮對降低舒張壓、防治心律失常和活血化瘀也有重要作用。山楂總黃酮所具有的顯著藥理活性，已引起醫(yī)藥行業(yè)研究人員的高度關(guān)注。目前，從山楂葉中提取總黃酮通常是在提取過程中，利用乙酸乙酯和正丁醇進行萃取，該方法操作工藝復雜、制造成本高，且藥液中的有機溶劑殘留物不易徹底清除。CN1436785專利公開了一種用大孔樹脂提取山楂葉總黃酮的方法。該方法是選用凈山楂葉，用50%的乙醇控溫55°。提取三次，然后回收乙醇、靜置沉淀、過濾濃縮，過濾液用強堿、強酸清洗后再用大孔樹脂分離、洗脫。該方法提取的總黃酮，其中的鞣質(zhì)不易去除，從而影響了提取物的純度和療效，尤其不宜作為注射劑原料藥使用。另外該方法使用較高濃度的酸洗堿洗會造成一定的環(huán)境污染。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種工藝流程簡單、生產(chǎn)成本低廉、產(chǎn)品純度高、且益于環(huán)境保護的山楂葉總黃酮的提取制備方法。本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的
本發(fā)明方法包括以下步驟
a、取干燥山楂葉粉末，加入山楂葉粉末重量5~10倍量的20%~80%乙醇，在30 80 'C溫度條件下，浸提2~6小時，過濾；將濾渣再加入濾渣重量5 10倍量的20%~80%乙醇，在30 8(TC溫度條件下，浸提2 6小時，過濾；合并兩
3次濾液，減壓濃縮至無乙醇味，再向濾液中加入山楂葉粉末重量3 8倍量的水，混勻，混合液加熱至沸，靜置放冷，冷藏12—36小時后，吸取上清液，下層濾過，濾液與上清液合并，得山植葉提取液；
本步驟中乙醇濃度優(yōu)選60%~80% ，乙醇加入量優(yōu)選山楂葉粉末重量的8~10倍。該優(yōu)選參數(shù)，可進一步提高山楂葉總黃酮的得率。
b、 將上述山楂葉提取液上D101大孔樹脂，用蒸餾水和10%~90%不同濃度的乙醇溶液進行梯度洗脫，收集用鹽酸鎂粉鑒別反應顯陽性反應的乙醇洗脫液，回收乙醇，待溶液無乙醇味時，得濃縮液；
c、 在上述濃縮液中加入濃縮液重量4~10倍量的蒸餾水，靜置，過濾，濾液上聚酰胺層析柱，用蒸餾水和10~80%乙醇分別洗脫，收集加稀醋酸和滴加4 5滴明膠氯化鈉后，無絮狀沉淀產(chǎn)生的乙醇洗脫液；
d、 減壓濃縮干燥c步驟中的乙醇洗脫液，得山楂葉總黃酮提取物。本發(fā)明所制備的山楂葉總黃酮提取物中的主要化學成分為牡荊素鼠李糖苷
和牡荊素葡萄糖苷。
本發(fā)明方法具有以下有益效果
(1) 本發(fā)明工藝中的山楂葉提取液經(jīng)大孔樹脂柱分離后，直接使用聚酰胺柱層析分離，從而改變了現(xiàn)有技術(shù)中采用乙酸乙酯和正丁醇等有機溶劑進行萃取的工藝步驟。它一方面簡化了工藝過程，降低了生產(chǎn)成本，同時也從根本上解除了提取物中有機溶劑殘留物的存在。
(2) 本發(fā)明工藝采用大孔樹脂柱和聚酰胺柱聯(lián)用分離，有效去除了鞣質(zhì)，提高了提取物的純度。其所含總黃酮以牡荊素鼠李糖苷計>85%;山楂葉總黃酮中牡荊素鼠李糖苷與牡荊素葡萄糖苷HPLC色普圖峰面積之比可控制在1.2 2.5: 1。該方法所提取的山楂葉總黃酮可以直接作為山楂葉注射液的原料藥使用。
本發(fā)明方法所提取的山楂葉總黃酮在用于制備山楂葉注射劑時，可以制成粉針劑，也可以制成水針劑。注射液每毫升溶液所含總黃酮以牡荊素鼠李糖苷計，可為0.2—30mg。在臨床應用時，水針劑可以直接加入生理鹽水或5—10%的葡萄糖溶液中靜脈滴注；粉針劑可以先加入少量注射用水或生理鹽水溶解后再加入到生理鹽水或5—10%的葡萄糖溶液中靜脈滴注。
本發(fā)明方法所提取的山楂葉總黃酮經(jīng)急性毒性以及長期毒性實驗表明，其無
4毒副作用。
具體實施例方式
下面通過實施例的方式進一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制于此。實施例1
(1) 山楂葉提取液的制備
采集山西晉城的山楂屬植物山楂Cratoegw / /""加y^/a Bge.的新鮮山楂葉于室溫陰干后，稱取500g粉碎成山楂葉粉末，以加入醇濃度為20。/。的乙醇2500g于30 'C浸提2小時，過濾，將濾渣再加入醇濃度為20%的乙醇3000 g于30 °C浸提2小時，過濾；合并兩次濾液，減壓濃縮至無乙醇味。再向濾液中加入1500g的水，混勻，靜置，加熱至沸，靜置放冷，冷藏過夜后，吸取上清液，下層濾過，濾液與上清液合并得山楂葉提取液；
(2) 山楂葉總黃酮的制備
將上述山楂葉提取液上D101大孔樹脂，用蒸餾水和10%~90%不同濃度乙醇溶液分別洗脫，收集鹽酸鎂粉顯陽性反應的乙醇洗脫液，回收乙醇，待溶液無乙醇味時，加濃縮液4倍量的蒸餾水，靜置，過濾，濾液上聚酰胺層析柱，用蒸餾水和10~80%乙醇分別洗脫。收集加稀醋酸和滴加4 5滴明膠氯化鈉，無絮狀沉淀產(chǎn)生的乙醇洗脫液；洗脫液減壓濃縮干燥成棕紅色粉末狀，得含量為86.5%的山楂葉總黃酮。實施例2
(1) 山楂葉提取液的制備
稱取干燥山楂葉750 g粉碎成粉末，以8倍量的50%乙醇于6(TC浸提4小時，過濾，將濾渣再以8倍量的50。/。乙醇于6(TC浸提4小時，過濾，合并兩次濾液，減壓濃縮至無乙醇味。再向濾液中加入山楂葉重量5倍量的水，混勻，加熱至沸，靜置放冷，冷藏24小時后，吸取上清液，下層濾過，濾液與上清液合并得山楂葉提取液。
(2) 山楂葉總黃酮的制備
將上述山楂葉提取液上DIOI大孔樹脂，用蒸餾水和10%~90%不同濃度乙醇溶液分別洗脫，收集鹽酸鎂粉顯陽性反應的乙醇洗脫液，回收乙醇，待溶液無乙醇味時，加濃縮液8倍量的蒸餾水，靜置，過濾，濾液上聚酰胺層析柱，
5用蒸餾水和10 80%乙醇分別洗脫。收集加稀醋酸和滴加4 5滴明膠氯化鈉，無絮狀沉淀產(chǎn)生的乙醇洗脫液，減壓濃縮干燥成棕紅色粉末狀，即得含量為88.8%的山楂葉總黃酮。實施例3:
(1) 山楂葉提取液的制備
稱取干燥山楂葉750 g粉碎成粉末，以10倍量的80%乙醇于8(TC浸提6小時，過濾，將濾渣再以10倍量的80。/o乙醇于8(TC浸提6小時，過濾，合并兩次濾液，減壓濃縮至無乙醇味。再向濾液中加藥材重量8倍量水混懸，加熱至沸，靜置放冷，冷藏過夜后，吸取上清液，下層濾過，濾液與上清液合并得山楂葉提取液。
(2) 山楂葉總黃酮的制備
將上述山楂葉提取液上D101大孔樹脂，用蒸餾水和10% 90%不同濃度乙醇溶液分別洗脫，收集鹽酸鎂粉顯陽性反應的乙醇洗脫液，回收乙醇，待溶液無乙醇味時，加濃縮液IO倍量的蒸餾水，靜置，過濾，濾液上聚酰胺層析柱，用蒸餾水和10~80%乙醇分別洗脫。收集加稀醋酸和滴加4 5滴明膠氯化鈉，無絮狀沉淀產(chǎn)生的乙醇洗脫液，減壓濃縮干燥成棕紅色粉末狀，即得含量為87.6%的山楂葉總黃酮。
權(quán)利要求
1、一種山楂葉總黃酮的提取制備方法，其特征在于它包括以下步驟a、取干燥山楂葉粉末，加入山楂葉粉末重量5～10倍量的20％～80％乙醇，在30～80℃溫度條件下，浸提2～6小時，過濾；將濾渣再加入濾渣重量5～10倍量的20％～80％乙醇，在30～80℃溫度條件下，浸提2～6小時，過濾；合并兩次濾液，減壓濃縮至無乙醇味，再向濾液中加入山楂葉粉末重量3～8倍量的水，混勻，混合液加熱至沸，靜置放冷，冷藏12—36小時后，吸取上清液，下層濾過，濾液與上清液合并，得山楂葉提取液；b、將上述山楂葉提取液上D101大孔樹脂，用蒸餾水和10％～90％不同濃度的乙醇溶液進行梯度洗脫，收集用鹽酸鎂粉鑒別反應顯陽性反應的乙醇洗脫液，回收乙醇，待溶液無乙醇味時，得濃縮液；c、在上述濃縮液中加入濃縮液重量4～10倍量的蒸餾水，靜置，過濾，濾液上聚酰胺層析柱，用蒸餾水和10～80％乙醇分別洗脫，收集加稀醋酸和滴加4～5滴明膠氯化鈉后，無絮狀沉淀產(chǎn)生的乙醇洗脫液；d、減壓濃縮干燥c步驟中的乙醇洗脫液，得山楂葉總黃酮。
2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的山楂葉總黃酮的提取制備方法，其特征在于a步 驟中所說的乙醇濃度為60% 80% ,加入量是山楂葉粉末重量的8 10倍。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種山楂葉總黃酮的提取制備方法，它主要包括以下工藝a.取干燥山楂葉粉末，加入山楂葉粉末重量5～10倍量的20％～80％乙醇，在30～80℃溫度條件下，浸提2～6小時；浸提兩次；濾液減壓濃縮加入3～8倍量的水加熱、靜置放冷，得山楂葉提取液；b.山楂葉提取液上D101大孔樹脂，用蒸餾水和乙醇溶液進行梯度洗脫；濾液上聚酰胺層析柱，洗脫液減壓濃縮干燥。本發(fā)明方法工藝流程簡單、生產(chǎn)成本低廉、產(chǎn)品純度高、且有益于環(huán)境保護。
文檔編號C07D311/22GK101463025SQ20071018545
公開日2009年6月24日 申請日期2007年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月20日
發(fā)明者李振江 申請人:神威藥業(yè)有限公司