專利名稱：新的吡啶取代的吡唑并吡啶衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及刺激可溶性鳥苷酸環(huán)化酶的新化合物，其制備及其作為藥物的應(yīng)用，特別是作為治療心血管疾病的藥物的應(yīng)用。
哺乳動(dòng)物中，最重要的細(xì)胞傳遞系統(tǒng)之一是環(huán)鳥苷酸(cGMP)。環(huán)鳥苷酸與從內(nèi)皮釋放的并傳遞激素和機(jī)械信號(hào)的一氧化氮(NO)一起形成NO/cGMP系統(tǒng)。鳥苷酸環(huán)化酶催化由鳥苷三磷酸(GTP)生物合成cGMP。迄今為止已知的該家族代表性成員可根據(jù)結(jié)構(gòu)特征和配體的性質(zhì)分為兩組可通過鈉尿肽刺激的顆粒鳥苷酸環(huán)化酶，和可通過NO刺激的鳥苷酸環(huán)化酶?？扇苄曾B苷酸環(huán)化酶由兩個(gè)亞單位構(gòu)成，并且非常有可能每個(gè)異二聚體含有一個(gè)血紅素，血紅素是調(diào)控中心的一部分。這對(duì)于該激活機(jī)制特別重要。NO可結(jié)合血紅素的鐵原子，并因此顯著提高了該酶的活性。另一方面，不含血紅素的制備物不能被NO刺激。CO還能在血紅素的中央鐵原子上進(jìn)行攻擊，其中，CO的刺激顯著低于NO的刺激作用。
由于形成了cGMP和和由此所得到的調(diào)控磷酸二酯酶、鐵通道和蛋白激酶，鳥苷酸環(huán)化酶在不同的生理過程，特別是平滑肌細(xì)胞的松弛和增殖、血小板聚集和粘著以及神經(jīng)元信號(hào)傳遞，和基于上述過程紊亂的疾病中起關(guān)鍵作用。在病生理狀態(tài)下，NO/cGMP系統(tǒng)可被抑制，從而可導(dǎo)致例如高血壓、血小板激活、細(xì)胞增殖增加、內(nèi)皮機(jī)能障礙、動(dòng)脈粥樣硬化、心絞痛、心臟機(jī)能不全、血栓形成、中風(fēng)和心肌梗塞。
目標(biāo)是影響生物體中cGMP信號(hào)傳導(dǎo)途徑的治療這類疾病的可能獨(dú)立于NO的方法是一種有希望的方法，因?yàn)轭A(yù)計(jì)該方法有高效力和低的副作用。
為了治療性地刺激可溶性鳥苷酸環(huán)化酶，迄今為止僅使用了其作用是基于NO的化合物例如有機(jī)硝酸酯。這是通過生物轉(zhuǎn)化形成的，并通過攻擊血紅素的中央鐵原子來激活可溶性鳥苷酸環(huán)化酶。除了這些副作用以外，該治療方式的缺點(diǎn)包括發(fā)展出耐受性。
近幾年，已經(jīng)有人描述過直接刺激可溶性鳥苷酸環(huán)化酶，即不是在釋放NO之前刺激可溶性鳥苷酸環(huán)化酶的一些物質(zhì)，例如3-(5’-羥基甲基-2’-呋喃基)-1-芐基吲唑(YC-1，Wu等人，Blood 84(1994)，4226；Müllsch等人，Br.J.Pharmacol.120(1997)，681)、脂肪酸(Goldberg等人，J.Biol.Chem.252(1977)，1279)、六氟磷酸二苯基碘鎓(Pettibone等人，Eur.J.Pharmacol.116(1985)，307)、isoliquiritigenin(Yu等人，Brit.J.Pharmacol.114(1995)，1587)和各種取代的吡唑衍生物(WO 98/16223)。
此外，下列文獻(xiàn)中描述了用作可溶性鳥苷酸環(huán)化酶刺激劑的吡唑并吡啶衍生物WO 98/16507、WO 98/23619、WO 00/06567、WO00/06568、WO 00/06569和WO 00/21954。在這些專利申請(qǐng)中，還描述了在3位具有嘧啶基團(tuán)的吡唑并吡啶化合物。在刺激可溶性鳥苷酸環(huán)化酶方面，這類化合物具有非常高的體外活性。然而，這些化合物在其體外性質(zhì)方面，例如有關(guān)其在肝臟中的性質(zhì)、藥理性質(zhì)、其劑量反應(yīng)關(guān)系或其代謝途徑方面具有某些缺點(diǎn)。
因此，本發(fā)明的目的是提供作為可溶性鳥苷酸環(huán)化酶的刺激劑起作用，但是不具有現(xiàn)有技術(shù)化合物的上述缺點(diǎn)的吡唑并吡啶衍生物。
依據(jù)本發(fā)明，權(quán)利要求1的化合物達(dá)到了該目的。這些新的吡唑并吡啶衍生物區(qū)別之處在于在3-位的嘧啶基，該嘧啶基具有一定的取代模式，即在嘧啶環(huán)5-位的吡啶基和在嘧啶環(huán)4-位的氨基。
具體來說，本發(fā)明涉及式(I)化合物和其鹽、異構(gòu)體和水合物 其中R1代表4-吡啶基或3-吡啶基；R2代表H、NH2或鹵素。
依據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明涉及式(I)化合物和其鹽、異構(gòu)體和水合物，其中R1代表4-吡啶基或3-吡啶基；R2代表H、NH2或Cl。
依據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明涉及式(I)化合物和其鹽、異構(gòu)體和水合物，其中R1代表4-吡啶基或3-吡啶基；R2代表H。
本發(fā)明式(I)化合物還可以以其鹽的形式存在。這里通?？商峒芭c有機(jī)或無(wú)機(jī)堿或酸成的鹽。
在本發(fā)明上下文中，生理可接受鹽是優(yōu)選的。本發(fā)明化合物的生理可接受鹽可以是本發(fā)明化合物與無(wú)機(jī)酸、羧酸或磺酸成的鹽。特別優(yōu)選的鹽是例如與下列酸成的鹽鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、對(duì)甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、檸檬酸、富馬酸、馬來酸或苯甲酸。
生理可接受鹽還可以是具有游離羧基的本發(fā)明化合物的金屬或銨鹽。特別優(yōu)選的是例如鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽或鈣鹽以及衍生自氨或有機(jī)胺例如乙胺、二乙胺、三乙胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二環(huán)己基胺、二甲基氨基乙醇、精氨酸、賴氨酸或乙二胺的銨鹽。
本發(fā)明化合物還可以以互變異構(gòu)形式存在。這是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，并且這類形式同樣包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
本發(fā)明化合物還可以呈其可能的水合物形式。
在本發(fā)明上下文中的鹵素包括氟、氯、溴和碘。
本發(fā)明式(I)化合物可這樣制得A)如果適當(dāng)?shù)脑捲谟袡C(jī)溶劑中，在加熱條件下將式(II)化合物
與式(III)化合物反應(yīng) 其中R1如上所定義；以生成式(I)化合物；或者B)在有機(jī)溶劑中，在加熱條件下將式(II)化合物與式(IV)化合物反應(yīng) 其中R1如上所定義；以生成式(V)化合物
其中R1如上所定義；然后與鹵化劑反應(yīng)以生成式(VI)化合物 其中R1如上所定義；R2代表鹵素；最后與氨水溶液在加熱和高壓條件下反應(yīng)。
式(II)化合物可依據(jù)下述反應(yīng)方案制得
式(II)化合物是在多步驟合成中由氰基丙酮酸乙酯的鈉鹽獲得的，氰基丙酮酸乙酯的鈉鹽是文獻(xiàn)中已知的(Borsche和Manteuffel，Liebigs.Ann.Chem.1934，512，97)。通過將其在惰性溶劑例如二氧雜環(huán)己烷中于加熱和保護(hù)氣氛下與2-氟芐基肼反應(yīng)，獲得了5-氨基-1-(2-氟芐基)吡唑-3-甲酸乙酯，其通過在酸性介質(zhì)中于保護(hù)氣氛下和加熱條件下與二甲基氨基丙烯醛反應(yīng)來環(huán)合，生成了相應(yīng)的吡啶衍生物。通過多步驟反應(yīng)順序?qū)⒃撨拎ぱ苌铩?-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-甲酸乙酯轉(zhuǎn)化成式(II)化合物，該多步驟反應(yīng)順序包括使用氨將該酯轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的酰胺，使用脫水劑例如三氟乙酸酐脫水以生成相應(yīng)的腈衍生物，將該腈衍生物與乙醇鈉反應(yīng)，和最后與氯化銨反應(yīng)。
式(III)化合物可由叔丁氧基二(二甲基氨基)甲烷和4-吡啶基乙腈或3-吡啶基乙腈通過將它們反應(yīng)來制得，這些反應(yīng)物可商購(gòu)獲得(例如得自Aldrich)，將這些反應(yīng)物反應(yīng)，優(yōu)選以等摩爾量，優(yōu)選在常壓下反應(yīng)，并將反應(yīng)溶液在升溫下，例如在60-130℃、優(yōu)選80-120℃、特別是100℃攪拌多個(gè)小時(shí)例如2小時(shí)。
式(II)與(III)化合物的生成式(I)化合物的反應(yīng)可這樣進(jìn)行使用等摩爾量的反應(yīng)物，或者式(III)化合物以稍微過量使用，在有機(jī)溶劑，例如烴，優(yōu)選芳烴，特別是二甲苯中，優(yōu)選在0.1-1當(dāng)量、優(yōu)選0.3當(dāng)量路易斯酸例如BF3·Et2O或三氟磺酸三甲基甲硅烷基酯(TMSOTf)存在下，優(yōu)選在常壓下，并將反應(yīng)溶液在升溫下，例如在80-160℃、優(yōu)選100-150℃、特別是140℃攪拌多個(gè)小時(shí)例如12小時(shí)。
式(IV)化合物可商購(gòu)獲得(例如得自Mercachem)或者可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法合成。
將式(II)和(IV)化合物轉(zhuǎn)化成式(V)化合物的反應(yīng)可這樣進(jìn)行使用等摩爾量的反應(yīng)物，或者式(IV)化合物以稍微過量使用，在有機(jī)溶劑，例如烴，優(yōu)選芳烴，尤其是甲苯中，優(yōu)選在常壓下，并將反應(yīng)溶液在升溫下，例如在80-160℃、優(yōu)選100-150℃、尤其是140℃攪拌數(shù)小時(shí)例如12小時(shí)。
將式(V)化合物轉(zhuǎn)化成式(VI)化合物的反應(yīng)可這樣進(jìn)行將式(V)化合物與鹵化劑反應(yīng)，任選在常用于這樣的反應(yīng)的有機(jī)溶劑，例如二甲基甲酰胺(DMF)中，優(yōu)選在常壓下進(jìn)行反應(yīng)，并將反應(yīng)溶液在升溫下，例如在80-160℃、優(yōu)選100-120℃攪拌數(shù)小時(shí)例如3小時(shí)。根據(jù)本發(fā)明POCl3可優(yōu)選用作鹵化劑。
將式(VI)化合物轉(zhuǎn)化成本發(fā)明式(I)化合物的反應(yīng)可通過將式(VI)化合物與氨水溶液優(yōu)選在升壓下反應(yīng)來進(jìn)行，例如在高壓釜中進(jìn)行該反應(yīng)，讓該反應(yīng)在反應(yīng)混合物自身的壓力下進(jìn)行，并將反應(yīng)溶液在升溫下，例如在80-160℃、優(yōu)選100-150℃、尤其是140℃攪拌數(shù)小時(shí)例如12小時(shí)。
本發(fā)明化合物表現(xiàn)出不能預(yù)見的、有價(jià)值的藥理活性譜。
式(I)化合物導(dǎo)致血管舒張，抑制血小板聚集，降低血壓，和增加冠狀血流。這些作用是通過直接刺激可溶性鳥苷酸環(huán)化酶和增加細(xì)胞內(nèi)cGMP來介導(dǎo)的。此外，本發(fā)明式(I)化合物能夠增強(qiáng)提高cGMP水平的物質(zhì)例如EDRF(內(nèi)皮衍生松弛因子)、NO供體、原卟啉IX、花生四烯酸或苯肼衍生物的作用。
此外，本發(fā)明化合物可用于具有下述作用的藥物用于治療心血管疾病，例如用于治療高血壓和心肌機(jī)能不全、穩(wěn)定和不穩(wěn)定的心絞痛、外周和心臟血管疾病、心律失常，用于治療血栓栓塞性疾病和局部缺血例如心肌梗塞、中風(fēng)、暫時(shí)性和缺血性發(fā)作、外周循環(huán)病癥，預(yù)防再狹窄例如血栓形成治療、經(jīng)皮經(jīng)腔血管成形術(shù)(PTA)、經(jīng)皮經(jīng)腔冠狀血管成形術(shù)(PTCA)、心臟旁路后的再狹窄，以及用于治療動(dòng)脈硬化、哮喘病癥和泌尿生殖系統(tǒng)疾病例如前列腺肥大、勃起機(jī)能障礙、女性性機(jī)能障礙、骨質(zhì)疏松、胃輕癱和失禁。
在本發(fā)明中描述的式(I)化合物還是用于控制其特征在于NO/cGMP系統(tǒng)紊亂的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的活性化合物。特別是，它們適于改善發(fā)生認(rèn)識(shí)病癥之后的知覺、注意力、學(xué)習(xí)能力或記憶力，例如特別是在病癥/疾病/綜合征中發(fā)生的那些，例如輕度認(rèn)知損傷、與年齡有關(guān)的學(xué)習(xí)和記憶病癥、與年齡有關(guān)的記憶損失、血管性癡呆、顱腦創(chuàng)傷、中風(fēng)、中風(fēng)后發(fā)生的癡呆(中風(fēng)后癡呆)、創(chuàng)傷性顱腦創(chuàng)傷后的癡呆、一般的注意力障礙、具有學(xué)習(xí)和記憶問題的兒童注意力障礙、阿爾茨海默氏病、血管性癡呆、具有雷維小體的癡呆、具有額葉變性的癡呆，包括Pick′s癡呆、帕金森氏病、進(jìn)行性核麻痹、具有皮質(zhì)基質(zhì)變性的癡呆、肌萎縮性硬化(ALS)、亨廷頓氏舞蹈病、多發(fā)性硬化、丘腦變性、Creutzfeld-Jacob癡呆、HIV癡呆、具有癡呆的精神分裂癥或Korsakoff精神病。它們還適于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)病癥例如焦慮癥、緊張和抑郁癥、與中樞神經(jīng)系統(tǒng)有關(guān)的性功能障礙和睡眠障礙，和適于調(diào)節(jié)食品、茶葉、咖啡等和成癮性藥物吸收的病癥。
此外，本發(fā)明活性化合物還適于調(diào)節(jié)腦循環(huán)，因此是控制偏頭痛的有效物質(zhì)。
本發(fā)明化合物還適于預(yù)防和控制腦梗塞(腦中風(fēng))的后發(fā)病，例如中風(fēng)、腦缺血和顱腦創(chuàng)傷。本發(fā)明式(I)化合物還可用于控制疼痛病癥。
此外，本發(fā)明化合物具有抗炎作用，并且因此可用作抗炎劑。
本發(fā)明還包括本發(fā)明式(I)化合物與有機(jī)硝酸酯和NO供體的組合。
在本發(fā)明上下文中，有機(jī)硝酸酯和NO供體一般是通過釋放NO或NO類物質(zhì)來表現(xiàn)出其治療作用的物質(zhì)。硝普鈉、硝酸甘油、硝酸異山梨酯、單硝異山梨酯、嗎多明和SIN-1是優(yōu)選的。
本發(fā)明還包括與抑制環(huán)鳥苷酸(cGMP)分解的化合物的組合。這些化合物特別是磷酸二酯酶1、2和5的抑制劑；命名是依據(jù)Beavo和Reifsynder(1990)TiPS11pp.150-155。通過這些抑制劑，本發(fā)明化合物的作用被加強(qiáng)，并且提高了所需的藥理效果。
生物評(píng)價(jià)體外血管舒張作用通過擊打頸部將兔子打昏，并放血。取出主動(dòng)脈，剝離粘連組織，切成寬1.5mm的環(huán)，并在預(yù)張力下獨(dú)立地轉(zhuǎn)移到5ml器官浴中，所述器官浴含有充了卡波金(carbogen)的組成如下(mM)的Krebs-Henseleit溶液(37℃)NaCl119；KCl4.8；CaCl2×2H2O1；MgSO4×7H2O1.4；KH2PO41.2；NaHCO325；葡萄糖10。使用通過A/D轉(zhuǎn)化器(DAS-1802HC，Keithley Instruments München)放大和數(shù)字化的Statham UC2電池測(cè)定收縮力，并在線性記錄器上平行記錄。為了產(chǎn)生收縮，將脫羥腎上腺素(phenylephrine)以遞增濃度累加到該器官浴中。幾個(gè)對(duì)照循環(huán)后，在每一情況下，以遞增劑量在每個(gè)進(jìn)一步的道(Durchgang)中評(píng)價(jià)測(cè)試物，比較收縮高度與在最后一個(gè)前道中達(dá)到的收縮高度。由此計(jì)算出將對(duì)照值高度減少50％(IC50)所需的濃度。標(biāo)準(zhǔn)給藥體積是5μl，DMSO在浴溶液中的比例相當(dāng)于0.1％。結(jié)果如下表1所示表1體外血管舒張作用
測(cè)定體外肝臟清除率將大鼠麻醉，肝素化，并經(jīng)由門動(dòng)脈在原位灌注肝臟。然后通過膠原酶溶液從肝臟獲得初始大鼠肝細(xì)胞。在每一情況下，將2×106個(gè)肝細(xì)胞/ml與相同濃度的待測(cè)試化合物在37℃培養(yǎng)。對(duì)于每次評(píng)價(jià)，在開始培養(yǎng)后的0-15分鐘內(nèi)，在5個(gè)時(shí)間點(diǎn)通過生物分析法(HPLC/UV，HPLC/熒光或LC/MSMS)測(cè)定隨著時(shí)間的延長(zhǎng)待測(cè)底物的減少。從中通過細(xì)胞計(jì)數(shù)和肝臟重量計(jì)算出清除率。
測(cè)定體內(nèi)血漿清除率將待測(cè)試物作為溶液經(jīng)由尾靜脈靜脈內(nèi)施用到大鼠中。在固定的時(shí)間點(diǎn)從大鼠采集血樣，肝素化，并通過常規(guī)方法由其獲得血漿。通過生物分析法定量測(cè)定血漿中的底物。通過用于該測(cè)定的常規(guī)非隔室法，從以該方法確定的血漿濃度-時(shí)間曲線計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。
本發(fā)明包括藥物制劑，其中除了無(wú)毒惰性可藥用載體以外，還含有本發(fā)明式(I)化合物，以及制備這些制劑的方法。
活性化合物還可以任選以微囊化的形式存在于一種或多種上述載體中。
式(I)治療活性化合物應(yīng)當(dāng)以占總混合物重量約0.1-99.5wt％、優(yōu)選約0.5-95wt％的濃度存在于上述藥物制劑中。
除了本發(fā)明式(I)化合物以外，上述藥物制劑還可以含有另外的藥物活性化合物。
一般情況下，已證實(shí)了在人醫(yī)療和獸醫(yī)中以每24小時(shí)約0.01-約700、優(yōu)選0.01-100mg/kg體重的總量施用本發(fā)明活性化合物，如果適當(dāng)?shù)脑捯远鄠€(gè)單獨(dú)劑量的形式施用以達(dá)到所需結(jié)果是有利的。單獨(dú)劑量含有本發(fā)明活性化合物，其含量?jī)?yōu)選為約0.1-約80、特別是0.1-30mg/kg體重。
下面借助于非限制性優(yōu)選的實(shí)施例來更詳細(xì)地描述本發(fā)明。除非另有說明，否則所有定量數(shù)據(jù)都是指重量百分比。
實(shí)施例縮寫RT室溫EE乙酸乙酯MCPBA間氯過氧苯甲酸BABA乙酸正丁酯/正丁醇/冰醋酸/磷酸鹽緩沖液pH6(50∶9∶25.15；有機(jī)相)DMFN，N-二甲基甲酰胺用于薄層色譜的洗脫劑T1 E1甲苯-乙酸乙酯(1∶1)T1 EtOH1甲苯-甲醇(1∶1)C1 E1環(huán)己烷-乙酸乙酯(1∶1)C1 E2環(huán)己烷-乙酸乙酯(1∶2)測(cè)定HPLC保留時(shí)間的方法或分離制備方法方法A＝(LC-MS)
洗脫劑A＝乙腈+0.1％甲酸B＝水+0.1％甲酸流速25ml/分鐘溫度40℃填充材料Symmetry C 18，50×2.1mm，3.5μm。
方法B(制備HPLC)洗脫劑A＝Milli-Q-水+具有1升H2O的0.6g濃鹽酸B＝乙腈流速50ml/分鐘溫度室溫填充材料YMC-Gel ODS-AQS 11μm 250×30mm
原料化合物I.合成4-[(二甲基氨基)亞甲基]-吡啶乙腈(E/Z混合物)
將7.52g(63.7mmol)4-吡啶基乙腈和11.09g(63.7mmol)叔丁氧基二(二甲基氨基)甲烷在100℃攪拌2小時(shí)。在此期間，通過使用真空泵形成的輕微減壓流讓釋放出的二甲基胺和叔丁醇進(jìn)入大氣中。通過快速色譜純化(CH2Cl2/乙酸乙酯50∶1-＞20∶1)，獲得了本標(biāo)題化合物。
產(chǎn)量10.2g(93％)Rf-值0.29(CH2Cl2/EE 20/1)1H-NMR(300MHz，D6-DMSO)，δ＝3.25(s，6H，2xCH3)，7.25(d，2H，Ar-H)，7.80(s，1H，Ar-H)，8.33(d，2H，Ar-H).
MS(ESI pos.)，m/z＝174([M+H]+)II.合成3-[(二甲基氨基)亞甲基]-吡啶乙腈(E/Z混合物) 將3.00g(25.4mmol)3-吡啶基乙腈和4.23g(25.4mmol)叔丁氧基二(二甲基氨基)甲烷在100℃攪拌2小時(shí)。在此期間，通過使用真空泵形成的輕微減壓流讓釋放出的二甲基胺和叔丁醇進(jìn)入大氣中。冷卻后，過濾出沉降的固體，用少量水洗滌，由此獲得了本標(biāo)題化合物。
產(chǎn)量4.23g(96％)
Rf-值 0.27(CH2Cl2/MeOH 40/1)1H-NMR(300MHz，D6-DMSO)，δ＝3.08(s，3H，CH3)，3.25(s，3H，CH3)，7.29(dd，1H，Ar-H)，7.57(s，1H，＝C-H)，7.66(dt，1H，Ar-H)，8.26(d，1H，Ar-H)，8.54(d，1H，Ar-H).
LCMS 保留時(shí)間0.33分鐘(柱Symmetry，C-18，3.5μm，50×2.1mm，流速0.5ml/分鐘，40℃，梯度水(+0.1％甲酸)∶乙腈(+0.1％甲酸)，第0分鐘是90∶10，第7.5分鐘是10∶90))；MS(ESI pos.)，m/z＝174([M+H]+)III.合成1-(2-氟芐基)1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-甲脒IIIA)5-氨基-1-(2-氟芐基)-吡唑-3-甲酸乙酯 在2.5升二氧雜環(huán)己烷中，在氬氣氛下，在良好的攪拌下，于室溫將100g(0.613mol)氰基丙酮酸乙酯的鈉鹽(按照類似于Borsche和Manteuffel，Liebigs Ann.1934，512，97的方法制得的)用111.75g(75ml，0.98mol)三氟乙酸混合，并將該混合物攪拌10分鐘，大部分原料變成了溶液。然后加入85.93g(0.613mol)2-氟芐基肼，并將該混合物煮沸過夜。冷卻后，抽濾出沉降的三氟乙酸鈉晶體，用二氧雜環(huán)己烷洗滌，并將該溶液以粗產(chǎn)物的形式進(jìn)一步反應(yīng)。
IIIB)1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-甲酸乙酯
將得自3A)的溶液用61.25ml(60.77g，0.613mol)二甲基氨基丙烯醛和56.28ml(83.88g，0.736mol)三氟乙酸混合，并在氬氣氛下煮沸3天。然后將溶劑真空蒸發(fā)，將殘余物加到2升水中，將該混合物用乙酸乙酯萃取3次(每次用1升)。使用硫酸鎂將合并的有機(jī)相干燥，并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮。用2.5g硅膠色譜純化殘余物，用甲苯/甲苯-乙酸乙酯＝4∶1梯度進(jìn)行洗脫。產(chǎn)量91.6g(兩步的產(chǎn)率是理論值的49.9％)。
M.p.85℃。
Rf(SiO2，T1E1)0.83IIIC)1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-甲酰胺 將10.18g(34mmol)在實(shí)施例3B)中獲得的酯置于在0-10℃用氨飽和的甲醇中。將該混合物在室溫?cái)嚢?天，然后真空濃縮。
Rf(SiO2，T1E1)0.33
IIID)3-氰基-1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶 將36.1g(133mmol)得自實(shí)施例3C)的1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-甲酰胺溶解在330ml THF中，并用27g(341mmol)吡啶混合。用10分鐘加入47.76ml(71.66g，341mmol)三氟乙酸酐，將溫度升至40℃。將該混合物在室溫?cái)嚢柽^夜。然后將該反應(yīng)混合物加到1升水中，用乙酸乙酯萃取3次(每次用0.5升)。將有機(jī)相用飽和碳酸氫鈉溶液和1N HCl洗滌，用MgSO4干燥，并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮。
產(chǎn)量33.7g(產(chǎn)率為理論值的100％)M.p81℃Rf(SiO2，T1E1)0.74IIIE)(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-甲亞胺酸甲酯
將30.37g(562mmol)甲醇鈉溶解在1.5升甲醇中，加入36.45g(144.5mmol)3-氰基-1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶(得自實(shí)施例3D)。將該混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，所獲得的溶液直接用于下一步驟。
IIIF)1-(2-氟芐基)1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-甲脒 將得自實(shí)施例2E)的(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-甲亞胺酸甲酯在甲醇中的溶液用33.76g(32.19ml，562mmol)冰醋酸和9.28g(173mmol)氯化銨混合，并在回流狀態(tài)下攪拌過夜。將溶劑真空蒸發(fā)，用丙酮良好地研磨殘余物，抽濾出生成的固體。
1H-NMR(d6-DMSO，200MHz)δ＝5.93(s，2H)；7.1-7.5(m，4H)；7.55(dd，1H)；8.12(dd，1H)；8.30(dd，1H)；9.5(bs，4H-可交換的)ppm.
MS(EI)m/z＝270.2(M-HCl)IV.合成2-[1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-5-(4-吡啶基)-4，6-嘧啶二醇
將3.27g(12.1mmol)得自實(shí)施例III的1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-甲酰胺懸浮在40ml甲苯中，與2.88g(12.1mmol)2-(4-吡啶基)丙二酸二乙酯(由Mercachem商購(gòu)獲得)混合，并在140℃攪拌過夜。為了后處理，抽濾出生成的固體，并在高度真空下干燥。
產(chǎn)量2.43g(43％)LC-MSRt＝2.69分鐘(方法A).
MS(ESI pos.)，m/z＝415([M+H]+)。
V.合成3-[4，6-二氯-5-(4-吡啶基)-2-嘧啶基]-1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶
將2.39g(5.77mmol)得自實(shí)施例IV的2-[1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-5-(4-吡啶基)-4，6-嘧啶二醇溶解在10ml三氯氧化磷中，向其中滴加3滴DMF，將其在回流狀態(tài)下攪拌3小時(shí)。為了后處理，將該反應(yīng)溶液濃縮，并在高度真空下干燥。
產(chǎn)量0.67g(24％)LC-MSRt＝4.34分鐘(方法A)MS(ESI pos.)，m/z＝451([M+H]+，Cl1)。
實(shí)施例1.2-[1-[(2-氟苯基)甲基]-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-5-(4-吡啶基)-4-嘧啶胺
將0.50g(1.9mmol)得自實(shí)施例III的1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-甲酰胺和得自實(shí)施例I的[(二甲基氨基)亞甲基]-吡啶乙腈(0.32g，1.9mmol)懸浮在二甲苯中，并用BF3*OEt2(71μl，79mg，0.56mmol，0.3當(dāng)量)混合。在140℃反應(yīng)19小時(shí)后，將該混合物冷卻至室溫，并真空濃縮。通過快速硅膠色譜(CH2Cl2∶MeOH20∶1)，然后通過在乙腈中攪拌來純化本標(biāo)題化合物。
產(chǎn)量0.24g(33％)Rf0.17(EE/MeOH 20∶1)B.p254℃保留時(shí)間2.7分鐘(柱Symmetry，C-18，3.5μm，50×2.1mm，流速0.5ml/分鐘，40℃，梯度水(+0.1％甲酸)∶乙腈(+0.1％甲酸)，第0分鐘是90∶10，第7.5分鐘是10∶90))1H-NMR (300MHz，D6-DMSO)，δ＝5.81(s，2H，CH2)，7.0-7.6(m，9H，Ar-H，NH2)，8.64(mc，3H，Ar-H)，9.05(d，1H，Ar-H)MS (ESI pos.)，m/z＝398([M+H]+)，(ESI neg.)，m/z＝396([M-H]+)2.2-[1-[(2-氟苯基)甲基]-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-5-(4-吡啶基)-4-嘧啶胺
將4.00g(14.9mmol)得自實(shí)施例III的1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-甲酰胺和得自實(shí)施例II的3-[(二甲基氨基)亞甲基]-吡啶乙腈(2.57g，14.9mmol)懸浮在二甲苯中。在120℃反應(yīng)12小時(shí)后，讓該混合物冷卻至室溫，過濾出沉降的沉淀。通過制備HPLC純化母液(柱Cromsil 120 ODS，C-18，10μm，250×30mm，流速50ml/分鐘，室溫，梯度水∶乙腈，在第0分鐘是90∶10，在第28分鐘是5∶95)。必須重復(fù)該純化操作。
產(chǎn)量0.024g(0.4％)Rf0.17(EE/MeOH 20∶1)1H-NMR(200MHz，D6-DMSO)，δ＝5.81(s，2H，OCH2)，6.95-7.6(m，8H，Ar-H，NH2)，7.92(dt，1H，Ar-H)，8.21(S，1H，Ar-H)，8.6-8.75(m，2H，Ar-H)，9.03(dd，1H，Ar-H).
LCMS 保留時(shí)間2.66分鐘(柱Symmetry，C-18，3.5μm，50×2.1mm，流速0.5ml/分鐘，40℃，梯度水(+0.1％甲酸)∶乙腈(+0.1％甲酸)，第0分鐘是90∶10，第7.5分鐘是10∶90))；MS(ESI pos.)，m/z＝398([M+H]+)，(ESIneg.)，m/z＝396([M-H]+)3.6-氯-2-[1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-5-(4-吡啶基)-4-嘧啶基胺 將200mg(0.443mmol)得自實(shí)施例V的3-[4，6-二氯-5-(4-吡啶基)-2-嘧啶基]-1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶懸浮在5ml25％氨水溶液中，并在高壓釜中、在該反應(yīng)溶液自身的壓力下于140℃攪拌過夜。用二氯甲烷將混合物萃取3次，用硫酸鎂將合并的萃取液干燥，并蒸發(fā)至干。通過硅膠色譜純化殘余物，用二氯甲烷/甲醇30∶1洗脫。為了進(jìn)一步純化，通過制備HPLC(方法B)純化該粗產(chǎn)物。
產(chǎn)量34mg(15％)Rf0.45(CH2Cl2/MeOH 20∶1)1H-NMR(300MHz，D6-DMSO)，δ＝5.85(s，2H，CH2)，7.10-7.48(m，9H，7Ar-H和NH2)，8.61-8.75(m，3H，Ar-H)，8.99(dd，1H，Ar-H).
LC-MS Rt＝3.55min(方法A).
MS(ESI pos.)，m/z＝432.3([M+H]+)，885.2([2M+Na]+).
4.2-[1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基]-5-(4-吡啶基)-4，6-嘧啶二胺
將200mg(0.443mmol)得自實(shí)施例V的3-[4，6-二氯-5-(4-吡啶基)-2-嘧啶基]-1-(2-氟芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶懸浮在5ml25％氨水溶液中，并在高壓釜中、在該反應(yīng)溶液自身的壓力下于140℃攪拌過夜。用二氯甲烷將混合物萃取3次，用硫酸鎂將合并的萃取液干燥，并蒸發(fā)至干。通過硅膠色譜純化殘余物，用二氯甲烷/甲醇30∶1洗脫。為了進(jìn)一步純化，通過制備HPLC(方法B)純化該粗產(chǎn)物。
產(chǎn)量45mg(20％)Rf0.30(CH2Cl2/MeOH 20∶1)1H-NMR(300MHz，D6-DMSO)，δ＝5.82(s，2H，CH2)，6.02(br.s，4H，NH2)，7.08-7.48(m，7H，Ar-H)，8.57-8.68(m，3H，Ar-H)，9.13(dd，1H，Ar-H).
LC-MS Rt＝2.55min(方法A).
MS(ESI pos.)，m/z＝413.3([M+H]+)，847.8([2M+Na]+).
權(quán)利要求
1.式(I)化合物和其鹽、異構(gòu)體和水合物 其中R1代表4-吡啶基或3-吡啶基；R2代表H、NH2或鹵素。
2.權(quán)利要求1的化合物和其鹽、異構(gòu)體和水合物，其中R1代表4-吡啶基或3-吡啶基；R2代表H、NH2或Cl。
3.權(quán)利要求1的化合物和其鹽、異構(gòu)體和水合物，其中R1代表4-吡啶基或3-吡啶基；R2代表H。
4.制備式I化合物的方法，包括A)如果適當(dāng)?shù)脑捲谟袡C(jī)溶劑中，在加熱條件下將式(II)化合物 與式(III)化合物反應(yīng) 其中R1如上所定義；以生成式(I)化合物；或者B)在有機(jī)溶劑中，在加熱條件下將式(II)化合物與式(IV)化合物反應(yīng) 其中R1如上所定義；以生成式(V)化合物 其中R1如上所定義；然后與鹵化劑反應(yīng)以生成式(VI)化合物 其中R1如上所定義；R2代表鹵素；最后與氨水溶液在加熱和高壓條件下反應(yīng)。
5.用于治療疾病的式(I)化合物。
6.藥物，其中包含至少一種權(quán)利要求1的式(I)化合物。
7.制備藥物的方法，其特征在于，任選地使用常規(guī)助劑和添加劑，將權(quán)利要求1的式(I)化合物制成合適的施用形式。
8.藥物，其中包含權(quán)利要求1的式(I)化合物和有機(jī)硝酸酯或NO供體。
9.藥物，其中包含權(quán)利要求1的式(I)化合物和抑制環(huán)鳥苷酸(cGMP)分解的化合物。
10.權(quán)利要求1的式(I)化合物在制備用于治療心血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
11.權(quán)利要求1的式(I)化合物在制備用于治療高血壓的藥物中的應(yīng)用。
12.權(quán)利要求1的式(I)化合物在制備用于治療血栓栓塞性病癥和局部缺血的藥物中的應(yīng)用。
13.權(quán)利要求1的式(I)化合物在制備用于治療性機(jī)能障礙的藥物中的應(yīng)用。
14.權(quán)利要求1的式(I)化合物在制備具有抗炎性質(zhì)的藥物中的應(yīng)用。
15.權(quán)利要求1的式(I)化合物在制備用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)病癥的藥物中的應(yīng)用。
16.權(quán)利要求8-13任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中權(quán)利要求1的式(I)化合物與有機(jī)硝酸酯或NO供體聯(lián)合使用或者與抑制環(huán)鳥苷酸(cGMP)分解的化合物聯(lián)合使用。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的式(I)吡唑并吡啶衍生物及其鹽、異構(gòu)體和水合物，其中R
文檔編號(hào)A61P9/00GK1555374SQ01822206
公開日2004年12月15日 申請(qǐng)日期2001年11月9日 優(yōu)先權(quán)日2000年11月22日
發(fā)明者J·-P·斯塔施, A·福伊雷爾, S·維甘德, E·施塔爾, D·弗盧巴赫爾, C·阿隆索－阿利亞, F·翁德, D·朗, K·德姆波夫斯基, A·施特勞布, E·佩茨博恩, ∷ 阿利亞, J -P 斯塔施, 乩筒, 凡ǚ蛩夠, 實(shí), 晾錐, 牟┒, 禿斬 申請(qǐng)人:拜爾公司