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具有抗炎作用的稠合吡咯并咔唑的制作方法

文檔序號(hào):983514閱讀:225來(lái)源:國(guó)知局
專(zhuān)利名稱(chēng):具有抗炎作用的稠合吡咯并咔唑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明一般涉及選定稠合吡咯并咔唑、包含該化合物的藥物組合物和治療相關(guān)疾病的方法。本發(fā)明還涉及制備這些稠合吡咯并咔唑的中間體和方法。
背景技術(shù)
本文中引用的出版物在此均完全引入作為參考。
迄今為止,已經(jīng)開(kāi)發(fā)出了許多具有生物學(xué)活性的有機(jī)合成小分子,它們?cè)诒绢I(lǐng)域被稱(chēng)為“稠合吡咯并咔唑”(參見(jiàn)US5475110;5591855;5594009和5616724)。另外,US5705511公開(kāi)了具有多種藥理學(xué)功能活性的稠合吡咯并咔唑。已公開(kāi)的稠合吡咯并咔唑具有多種應(yīng)用,這包括單獨(dú)或與神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子和/或吲哚并咔唑類(lèi)(indolocarbozoles)聯(lián)用提高神經(jīng)元譜系細(xì)胞的功能和/或存活;提高營(yíng)養(yǎng)因子誘導(dǎo)的活性;抑制蛋白激酶C(PKC)的活性;抑制trk酪氨酸激酶活性;抑制前列腺癌細(xì)胞系的增殖;抑制炎癥作用相關(guān)的細(xì)胞通道;和增強(qiáng)瀕死神經(jīng)元細(xì)胞的存活。
本發(fā)明人發(fā)現(xiàn),與US5705511描述的化合物相比,選自US5705511通式(但未明確公開(kāi))的某些特定稠合吡咯并咔唑具有出人意料的生物活性。
發(fā)明概述因此,本發(fā)明的一個(gè)目的是提供新穎的稠合吡咯并咔唑化合物,其結(jié)構(gòu)式如通式I所示 式I在下文將詳細(xì)地描述式I的構(gòu)成。
優(yōu)選的稠合吡咯并咔唑如式II所示 式II在下文將詳細(xì)地描述式II的構(gòu)成。
本發(fā)明稠合吡咯并咔唑具有多種應(yīng)用,包括抑制血管生成;抗腫瘤劑;單獨(dú)或與神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子和/或吲哚并咔唑類(lèi)聯(lián)用提高神經(jīng)元譜系細(xì)胞的功能和/或存活;提高營(yíng)養(yǎng)因子誘導(dǎo)的活性;抑制激酶;抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(VEGFR)激酶,優(yōu)選VEGFR2;抑制混合譜系激酶(MLK);trk激酶;抑制血小板衍生生長(zhǎng)因子受體(PDGFR)激酶;抑制神經(jīng)生長(zhǎng)因子刺激的trk磷酸化作用;抑制蛋白激酶C(PKC)的活性;抑制trk酪氨酸激酶活性;抑制前列腺癌細(xì)胞系的增殖;抑制炎癥作用相關(guān)的細(xì)胞通道;和增強(qiáng)瀕死神經(jīng)元細(xì)胞的存活。另外,所述稠合吡咯并咔唑還可用于抑制c-met、c-kit、和在近膜域中包含內(nèi)部串聯(lián)重復(fù)的突變Flt-3。這些公開(kāi)的化合物因其多種活性而在許多環(huán)境(包括研究和治療)中表現(xiàn)出實(shí)用性。
本發(fā)明的另一目的是提供包括本發(fā)明稠合吡咯并咔唑的藥物組合物,其中組合物包含可藥用賦形劑或者載體,以及治療有效量的至少一種本發(fā)明化合物或者其藥用鹽或者酯。
本發(fā)明的另一目的是提供治療或者預(yù)防疾病或者病癥的方法,包括將治療或預(yù)防有效量的至少一種本發(fā)明化合物給予需要這種治療或預(yù)防的宿主。
至于本發(fā)明稠合吡咯并咔唑的上述以及其他目的、特征和優(yōu)點(diǎn),將在以下詳細(xì)說(shuō)明中加以描述。
優(yōu)選實(shí)施方案詳述本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案是式I所代表的稠合吡咯并咔唑 式I其中R1和R2相同或者不同,獨(dú)立地選自H,或者OH或者-OR4取代的1-8個(gè)(包含)碳原子的烷基、優(yōu)選為1-4個(gè)(包含)碳原子的烷基,其中R4為1-4個(gè)(包含)碳原子的烷基,芳基、優(yōu)選苯基或萘基,或者除去羧基上的羥基后的氨基酸殘基;和R3為-CH2OH;-CH2OR7;-(CH2)nSR5;-(CH2)nS(O)yR5;-CH2SR5;或者-OH、-OR5、-OR8、-CH2OR7、-S(O)yR6或-SR6取代的1-8個(gè)(包括)碳原子的烷基、優(yōu)選1-4個(gè)(包含)碳原子的烷基;和其中R5為1-4個(gè)(包含)碳原子的烷基或者芳基、優(yōu)選苯基或萘基;
R6為H、1-4個(gè)(包含)碳原子的烷基或者6-10個(gè)碳原子的芳基、優(yōu)選苯基或萘基,或者雜芳基;R7為H或者1-4個(gè)(包含)碳原子的烷基;R8為除去羧基上的羥基后的氨基酸殘基;n是1-4(包含)的整數(shù);和y是1或者2。
在某些優(yōu)選實(shí)施方案中,式I化合物為式II所代表的那些化合物 式II其中R1、R2和R3的定義如式I。
在某些涉及的實(shí)施方案中,R1為-OH或者-OR4取代的1-4個(gè)(包含)碳原子的烷基,其中R4為1-4個(gè)(包含)碳原子的烷基,芳基、優(yōu)選苯基或萘基,或者除去羧基上的羥基后的氨基酸殘基;和R2為H;和R3為-CH2OH;-CH2OR7;-(CH2)nSR5;-(CH2)nS(O)yR5;-CH2SR5;或者-OH、-OR5、-OR8、-CH2OR7、-S(O)yR6或-SR6取代的1-8個(gè)(包括)碳原子的烷基、優(yōu)選為1-4個(gè)(包含)碳原子的烷基;其中R5、R6、R7和R8的定義如式I。
在某些其他優(yōu)選實(shí)施方案中,R1為-CH2CH2CH2OH或者-CH2CH2CH2OCOCH2N(CH3)2;R2為H;和R3為-CH2OR7,其中R7為1-4個(gè)(包含)碳原子的烷基。
在某些更優(yōu)選的實(shí)施方案中,式I和式II的稠合吡咯并咔唑是表I中所代表的那些化合物表I
優(yōu)選的式II稠合吡咯并咔唑的結(jié)構(gòu)如表II所示表II
表II中尤其優(yōu)選的化合物包括化合物1、3、4、5、6、7和22,其中最優(yōu)選為化合物3和22。
式I和II代表的以及表I和II描述的化合物在此稱(chēng)為“所述化合物”、“本發(fā)明化合物”、“稠合吡咯并咔唑”、“本發(fā)明稠合吡咯并咔唑”等。
US 5705511中的某些化合物如表Iia所示。
表Iia
在此用于定義R1和R2的術(shù)語(yǔ)“氨基酸”是指同時(shí)包含氨基酸基團(tuán)和羧基的分子。它包括“α-氨基酸”,即通常表示在鄰接羧基的碳上具有氨基官能團(tuán)的羧酸。α-氨基酸可以是天然或非天然來(lái)源的。氨基酸也包括“二肽”,其在此定義為以肽鍵所連接的二個(gè)氨基酸。二肽的組分并不限于α-氨基酸,并且可以是包含氨基和羧基的任何分子。優(yōu)選為α-氨基酸,二肽例如賴(lài)氨酰-β-丙氨酸,和2-8個(gè)碳原子的氨基鏈烷酸,例如3-二甲基氨基丁酸。
本發(fā)明稠合吡咯并咔唑的可藥用鹽也包括于在此公開(kāi)化合物的范圍內(nèi)。在此所用的術(shù)語(yǔ)“可藥用鹽”是指無(wú)機(jī)酸加成鹽,例如鹽酸鹽、硫酸鹽和磷酸鹽,或有機(jī)酸加成鹽例如醋酸鹽、馬來(lái)酸鹽、富馬酸鹽、酒石酸鹽和檸檬酸鹽。可藥用金屬鹽的示例是堿金屬鹽例如鈉鹽和鉀鹽,堿土金屬鹽例如鎂鹽和鈣鹽,鋁鹽和鋅鹽。可藥用銨鹽的示例是銨鹽和四甲銨鹽??伤幱糜袡C(jī)胺加成鹽的示例是與嗎啉和哌啶加成的鹽??伤幱冒被峒映甥}的示例是與賴(lài)氨酸、甘氨酸和苯基丙氨酸加成的鹽。
通過(guò)與無(wú)毒的可藥用賦形劑或載體混合,可將在此提供的化合物配制成藥物組合物。如上所述,可制備供非腸道給藥的組合物,特別是為液體溶液或混懸劑形式;或者制成供口服的組合物,特別是片劑或膠囊形式;或者制成供經(jīng)鼻施用的組合物,特別是粉末、滴鼻劑或氣霧劑形式;或者制成供經(jīng)皮施用的組合物,例如經(jīng)皮施用的貼劑。
因此,本發(fā)明另一方面是包括本發(fā)明化合物的藥物組合物,其中任選與一種或更多可藥用賦形劑或載體混合。優(yōu)選地,該藥物組合物包含式II化合物。更優(yōu)選地,該藥物組合物包含表I或II所示的化合物。
在某些優(yōu)選的藥物組合物中,本組合物可用于抑制一種或更多trk激酶活性、VEGFR激酶活性、PKC或PDGFR活性,其中所述組合物包括式I、式II、表I或表II化合物以及任選一種或更多可藥用載體。在優(yōu)選的其他藥物組合物中,所述組合物可用于增強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)因子或脊索ChAT活性,其中所述組合物包括式I、式II、表I或表II化合物和可藥用載體。
在優(yōu)選的其他藥物組合物中,所述組合物用于治療或預(yù)防血管生成和血管生成病癥,例如實(shí)體瘤癌、子宮內(nèi)膜異位、視網(wǎng)膜病、糖尿病性視網(wǎng)膜病、牛皮癬、成血管細(xì)胞瘤、眼疾或黃斑變性。在優(yōu)選的其他藥物組合物中,所述組合物用于治療或預(yù)防瘤形成、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肺纖維化、骨髓纖維化、傷口愈合異常、動(dòng)脈粥樣硬化或再狹窄。在優(yōu)選的其他藥物組合物,所述組合物用于治療或預(yù)防神經(jīng)變性疾病和病癥,阿爾茨海默病,肌萎縮性側(cè)索硬化,帕金森病,中風(fēng),局部缺血,亨廷頓舞蹈病,AIDS癡呆,癲癇癥,多發(fā)性硬化,周?chē)窠?jīng)病,化學(xué)療法導(dǎo)致的周?chē)窠?jīng)病,AIDS有關(guān)的周?chē)窠?jīng)病或腦或脊索損傷。在優(yōu)選的其他藥物組合物,所述組合物用于治療或預(yù)防前列腺病癥例如前列腺癌或良性的前列腺增生。在優(yōu)選的其它藥物組合物中,所述組合物用于治療或預(yù)防多發(fā)性骨髓瘤和白血病,其中包括但不限于急性粒細(xì)胞白血病,慢性粒細(xì)胞白血病,急性淋巴細(xì)胞性白血病和慢性淋巴細(xì)胞性白血病。
所述組合物可以單位劑型方便地施用,并可采用制藥領(lǐng)域已知的任何方法制備,所述方法例如Remington制藥學(xué)(MackPub.公司,Easton,PA,1980)所述。用于非腸道給藥的制劑可包括常規(guī)賦形劑無(wú)菌水或鹽水、聚亞烷基二醇例如聚乙二醇,油類(lèi)和植物來(lái)源,氫化萘等。特別地,可生物降解的生物相容丙交酯聚合物、丙交酯/乙交酯共聚物,或聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物可用作控制活性物質(zhì)釋放的賦形劑。適于這些活性物質(zhì)的其它可能的有用非腸道給藥系統(tǒng)包括乙烯-醋酸乙烯酯共聚物顆粒劑、滲透泵、植入型輸注系統(tǒng)和脂質(zhì)體。用于吸入給藥的制劑包括賦形劑,例如乳糖,或者是含有如聚氧乙烯-9-月桂基醚、甘氨膽酸鹽和脫氧膽酸鹽的水溶液,或者是以滴鼻劑形式施用的油性溶液,或者是經(jīng)鼻應(yīng)用的凝膠劑。供非腸道給藥的制劑也可能包含用于經(jīng)頰給藥的甘氨膽酸鹽、用于直腸給藥的水楊酸鹽或陰道給藥的檸檬酸。用于經(jīng)皮給藥的貼劑優(yōu)選為親脂性乳劑。
在藥物中,本發(fā)明的化合物可作為單獨(dú)的活性劑使用,也可與其它活性成分組合使用,所述其它活性成分例如可促進(jìn)疾病或病癥中神經(jīng)元存活或軸突再生的其它生長(zhǎng)因子,其它血管生成劑或抗腫瘤劑。
在此所述化合物在治療或藥物組合物中的濃度取決于許多因素,這包括所施用藥物的劑量、所用化合物的化學(xué)特性(例如疏水性)和給藥途徑。通常,本發(fā)明化合物可以在用于非腸道給藥的水性生理緩沖溶液中的形式提供,其中包含約0.1-10%w/v化合物。典型的劑量范圍約為1μg/kg-lg/kg體重/天;優(yōu)選的劑量范圍約為0.01mg/kg-100mg/kg體重/天。所施用藥物的優(yōu)選劑量取決于許多變量,例如疾病或病癥的類(lèi)型和發(fā)展程度、特定病人的總體健康狀態(tài)、所用化合物的相對(duì)生物學(xué)效力、化合物賦形劑的制劑及其給藥途徑。
在其它實(shí)施方案中,本發(fā)明提供用于抑制trk激酶活性的方法,包括提供足以產(chǎn)生有效抑制的量的本發(fā)明化合物。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中,提供了用于治療炎癥的本發(fā)明化合物,所述炎癥例如神經(jīng)炎癥和慢性關(guān)節(jié)炎炎癥。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中,所述trk激酶受體是trkA。
在其它實(shí)施方案中,本發(fā)明提供用于治療或預(yù)防前列腺病癥的方法,包括將治療有效量的本發(fā)明化合物給予需要這種治療或預(yù)防的宿主。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中,所述前列腺病癥是前列腺癌或良性的前列腺增生。
在其它實(shí)施方案中,本發(fā)明提供用于治療或預(yù)防由VEGFR激酶活性引起病理狀況的血管生成病癥的方法,所述方法包括提供足量的本發(fā)明化合物,使血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體與有效抑制量的本發(fā)明化合物接觸。在另一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供用于治療或預(yù)防血管生成病癥的方法,包括將治療有效量的本發(fā)明化合物給予需要這種治療或預(yù)防的宿主。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中,所述血管生成病癥是實(shí)體瘤癌,眼疾,黃斑變性,子宮內(nèi)膜異位,糖尿病性視網(wǎng)膜病,牛皮癬或成血管細(xì)胞瘤。
在其它實(shí)施方案中,本發(fā)明提供用于治療或預(yù)防由PDGFR激酶活性引起病理狀況的病癥的方法,包括提供足量的本發(fā)明化合物,以使血小板衍生生長(zhǎng)因子受體與有效抑制量的本發(fā)明化合物接觸后。在另一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供用于治療或預(yù)防病理病癥的方法,包括將治療有效量的本發(fā)明化合物給予需要這種治療或預(yù)防的宿主。在優(yōu)選實(shí)施方案中,所述病理病癥是瘤形成、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性關(guān)節(jié)炎、肺纖維化、骨髓纖維化、傷口愈合異常、動(dòng)脈粥樣硬化或再狹窄。
在其它實(shí)施方案中,本發(fā)明提供用于治療以營(yíng)養(yǎng)因子應(yīng)答細(xì)胞異?;钚詾樘卣鞯牟“Y的方法,包括提供足量的式I、式II、表I或表II化合物,以使?fàn)I養(yǎng)因子細(xì)胞受體與有效活性誘導(dǎo)量的本發(fā)明化合物接觸。在優(yōu)選實(shí)施方案中,營(yíng)養(yǎng)因子應(yīng)答細(xì)胞的活性是ChAT活性。在另一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供法用于治療或預(yù)防神經(jīng)變性的疾病和病癥、阿爾茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化、帕金森病、中風(fēng)、局部缺血、亨廷頓舞蹈病、AIDS癡呆、癲癇癥、多發(fā)性硬化、周?chē)窠?jīng)病、化學(xué)療法導(dǎo)致的周?chē)窠?jīng)病、AID有關(guān)的周?chē)窠?jīng)病、腦或脊索損傷的方法,包括將治療有效量的式I、式II、表I和表II化合物用于需要這種治療或預(yù)防的宿主。
在此所用的術(shù)語(yǔ)“效應(yīng)”,在修飾術(shù)語(yǔ)“功能“和“存活”時(shí)表示正或負(fù)的變化。正效應(yīng)在此稱(chēng)作“增強(qiáng)作用”或“增強(qiáng)”,而負(fù)效應(yīng)在此是指“抑制作用”或“抑制”。
在此所用術(shù)語(yǔ)“提高”或“提高”,在修飾術(shù)語(yǔ)“功能”或“存活”時(shí)是指與沒(méi)有稠合吡咯并咔唑存在下的細(xì)胞時(shí)相比,稠合吡咯并咔唑?qū)I(yíng)養(yǎng)因子應(yīng)答細(xì)胞的功能和/或存活表現(xiàn)出正效應(yīng)。例如(不作為限制),就膽堿能神經(jīng)元的存活而言,與未與稠合吡咯并咔唑共存的膽堿能神經(jīng)元群落相比,稠合吡咯并咔唑?qū)⒚黠@增強(qiáng)處于瀕死危險(xiǎn)之中的膽堿能神經(jīng)元群落的存活(例如由于損傷、疾病狀況、退化狀況或自然發(fā)展導(dǎo)致的瀕死),如果經(jīng)處理群落的功能期長(zhǎng)于未處理群落的活。再例如(不作為限制),就感覺(jué)神經(jīng)元的功能而言,與未與稠合吡咯并咔唑共存的感覺(jué)神經(jīng)元群落相比,稠合吡咯并咔唑?qū)⒚黠@增強(qiáng)感覺(jué)神經(jīng)元群落的功能(例如軸突擴(kuò)充),如果經(jīng)處理群落的軸突擴(kuò)充大于未處理群落的活。
在此所用的“抑制作用”和“抑制”是指本發(fā)明稠合吡咯并咔唑的存在使某一指定物質(zhì)的特異應(yīng)答(例如酶活性)相對(duì)降低。
在此所用的術(shù)語(yǔ)“神經(jīng)元”、“神經(jīng)元譜系細(xì)胞”和“神經(jīng)元細(xì)胞”包括但不限于具有單或多遞質(zhì)和/或單或多功能神經(jīng)元類(lèi)型的異源群落體,優(yōu)選地,它們是膽堿能和感覺(jué)神經(jīng)元。在此所用的措詞“膽堿能神經(jīng)元”是指中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)和周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)(PNS)的神經(jīng)元,其神經(jīng)遞質(zhì)是乙酰膽堿;其示例是基底前腦和脊髓神經(jīng)元。在此所用的措詞“感覺(jué)神經(jīng)元”包括對(duì)例如來(lái)自皮膚、肌肉和關(guān)節(jié)的環(huán)境因素(例如,溫度和運(yùn)動(dòng))應(yīng)答的神經(jīng)元;其示例是DRG神經(jīng)元。
在此所用的“營(yíng)養(yǎng)因子”是指直接或間接地影響營(yíng)養(yǎng)因子應(yīng)答細(xì)胞的存活或功能的分子。示例性營(yíng)養(yǎng)因子包括睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CNTF),堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF),胰島素和胰島素樣生長(zhǎng)因子(例如,IGF-I、IGF-II、IGF-III),干擾素,白介素,細(xì)胞因子,以及神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)蛋白包括神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)蛋白-3(NT-3)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)蛋白-4/5(NT-4/5)和腦衍生神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)。
在此定義的“營(yíng)養(yǎng)因子應(yīng)答細(xì)胞”是指包括能與營(yíng)養(yǎng)因子特異性結(jié)合的受體的細(xì)胞;其示例包括神經(jīng)元(例如,膽堿能和感覺(jué)神經(jīng)元)和非神經(jīng)元細(xì)胞(例如,單核細(xì)胞和贅生性細(xì)胞)。
在此所用的“營(yíng)養(yǎng)因子活性”和“營(yíng)養(yǎng)因子誘導(dǎo)的活性”定義為因營(yíng)養(yǎng)因子(例如NGF)與包括營(yíng)養(yǎng)因子受體的細(xì)胞(例如,包括trk的神經(jīng)元)結(jié)合而直接或間接導(dǎo)致的任何應(yīng)答。在NGF與trk結(jié)合的情況下,示例性應(yīng)答包括可導(dǎo)致ChAT活性增強(qiáng)(導(dǎo)致神經(jīng)元存活和/或功能提高)的trk酪氨酸殘基自身磷酸化。
如措詞“營(yíng)養(yǎng)因子活性”和“營(yíng)養(yǎng)因子誘導(dǎo)的活性”中所使用的術(shù)語(yǔ)“營(yíng)養(yǎng)因子”包括內(nèi)源和外源營(yíng)養(yǎng)因子,其中“內(nèi)源”是指天然存在的營(yíng)養(yǎng)因子,“外源”是指被加到系統(tǒng)中的營(yíng)養(yǎng)因子。根據(jù)這種定義,“營(yíng)養(yǎng)因子誘導(dǎo)活性”包括由(1)內(nèi)源營(yíng)養(yǎng)因子;(2)外源營(yíng)養(yǎng)因子;和(3)內(nèi)源和外源營(yíng)養(yǎng)因子組合誘導(dǎo)的活性。
在此所用的術(shù)語(yǔ)“trk”是指高親合力的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體家族,目前包括載trkA、trkB和trkC,以及可與神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)蛋白結(jié)合的其他膜相關(guān)蛋白質(zhì)。
在此所用的涉及術(shù)語(yǔ)“細(xì)胞”的措詞“過(guò)度增殖狀態(tài)”是指這樣的細(xì)胞,其未經(jīng)調(diào)節(jié)的和/或異常的生長(zhǎng)可導(dǎo)致不希望狀況的發(fā)展,例如癌狀況或牛皮癬狀況。
在此所用的“癌”和“癌性的”是指哺乳動(dòng)物細(xì)胞的任何惡性增殖。示例包括前列腺、良性的前列腺增生、卵巢、乳房及其他確認(rèn)的癌。在此所用的術(shù)語(yǔ)“牛皮癬”和“牛皮癬狀況”是指包括角化細(xì)胞過(guò)度增殖、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和細(xì)胞因子變化的病癥。
在此所用的涉及生物試樣(例如,細(xì)胞例如神經(jīng)元)的措詞“處于瀕死危險(xiǎn)”,是指對(duì)生物試樣產(chǎn)生負(fù)面影響并由此增加生物試樣瀕死可能性的狀態(tài)或狀況。例如,在此公開(kāi)的化合物能“援救”或提高in ovo程序性細(xì)胞死亡模型中天然地處于瀕死危險(xiǎn)之中運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的存活。同樣地,例如,神經(jīng)元可因自然老化(引起神經(jīng)元死亡)而處于瀕死危險(xiǎn)之中,或者因可造成對(duì)神經(jīng)元和/或神經(jīng)膠質(zhì)沖擊的損傷(例如頭創(chuàng)傷)影響而處于瀕死危險(xiǎn)之中。此外,例如,神經(jīng)元可因疾病狀態(tài)或狀況而處于瀕死危險(xiǎn)之中,就像疾病ALS使神經(jīng)元處于瀕死危險(xiǎn)之中一樣。因此,使用本發(fā)明化合物提高了處于瀕死危險(xiǎn)之中細(xì)胞的存活,是指這種化合物能降低或預(yù)防細(xì)胞死亡的風(fēng)險(xiǎn)。
在此所用的術(shù)語(yǔ)“接觸”是指直接或間接地使各部分放置在一起,這樣使各部分直接或間接地處于物理相互關(guān)聯(lián)的狀態(tài),并在此達(dá)到所需的結(jié)果。因此,在此所述的化合物可與靶細(xì)胞“接觸”,未必是化合物與細(xì)胞必須物理連接在一起(例如,在配體與受體物理結(jié)合的情況下),只要能達(dá)到所需的結(jié)果(例如增強(qiáng)細(xì)胞的存活)即可。因此,接觸包括例如將各部分置于容器中的行為(例如,將在此公開(kāi)的化合物加到含有細(xì)胞的體外試驗(yàn)容器中),以及將所述化合物施用于目標(biāo)實(shí)體(例如,將此公開(kāi)的化合物注入供體內(nèi)試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中,或給予治療目的的人)。
在此所用的“前藥”意在包括任何共價(jià)鍵合的載體,當(dāng)將這樣的前藥給予哺乳動(dòng)物受試者時(shí),所述載體可在體內(nèi)釋放出本發(fā)明化合物的活性母體藥物。由于已知前藥可提高藥物的多種所需性質(zhì)(例如溶解性、生物利用度和制造等),因此,本發(fā)明化合物也可以前藥形式給藥。因此,本發(fā)明涉及本發(fā)明化合物的前藥、包含前藥的組合物以及用這樣的前藥治療疾病和病癥的方法。通過(guò)修飾化合物官能團(tuán),可制得本發(fā)明化合物(例如式I)的前藥,這種修飾可經(jīng)常規(guī)處理或在體內(nèi)分解成母體化合物。因此,前藥包括其羥基、氨基或羧基被任何下述基團(tuán)結(jié)合的本發(fā)明化合物,將該前藥給予哺乳動(dòng)物受試者后,這種基團(tuán)會(huì)分別分解形成游離羥基、游離氨基或羧酸。示例包括但不限于除去羧基上的羥基后的氨基酸殘基,醇和胺官能團(tuán)的醋酸、甲酸和苯甲酸衍生物;和烷基、碳環(huán)、芳基和烷基芳基酯例如甲酯、乙酯、丙酯、異丙酯、丁酯、異丁酯、仲丁酯、叔丁酯、環(huán)丙酯、苯酯、苯甲酯和苯乙酯等。
本發(fā)明稠合吡咯并咔唑具有重要的實(shí)用藥理學(xué)活性,適用于多種環(huán)境(包括研究和治療環(huán)境)。為了便于介紹且不限定這些化合物的適用范圍,我們通常可如下描述本發(fā)明稠合吡咯并咔唑的活性6.抑制酶的活性6.對(duì)營(yíng)養(yǎng)因子應(yīng)答細(xì)胞的功能和/或存活影響6.抑制炎癥相關(guān)的反應(yīng)6.抑制與過(guò)度增殖狀態(tài)有關(guān)的細(xì)胞生長(zhǎng)6.抑制發(fā)展地程序性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元死亡可采用例如VEGFR抑制(例如,VEGFR2抑制)、MLK抑制(例如,MLK1、MLK2或MLK3抑制)、PDGFR激酶抑制、NGF-刺激的trk磷酸化作用、PKC抑制或trk酪氨酸激酶抑制試驗(yàn),測(cè)定對(duì)酶活性的抑制。使用以下任一試驗(yàn),可測(cè)定對(duì)營(yíng)養(yǎng)因子應(yīng)答細(xì)胞(例如神經(jīng)元譜系細(xì)胞)的功能和/或存活的影響(1)培養(yǎng)的脊髓膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)試驗(yàn);(2)培養(yǎng)脊神經(jīng)后根神經(jīng)節(jié)(DRG)軸突擴(kuò)充試驗(yàn);(3)培養(yǎng)的基底前腦神經(jīng)元(BFN)ChAT活性試驗(yàn)。采用吲哚胺2,3-加雙氧酶(IDO)mRNA試驗(yàn),可測(cè)定對(duì)炎癥相關(guān)應(yīng)答的抑制。通過(guò)測(cè)定所研究細(xì)胞系(如前列腺癌中的AT2系)的生長(zhǎng),可測(cè)定對(duì)與過(guò)度增殖有關(guān)的細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制。至于對(duì)發(fā)展地程序性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元死亡的抑制,可inovo采用雞胚的體運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元來(lái)評(píng)價(jià),所述細(xì)胞在胚胎的6-10天期間自然死亡,并測(cè)定在此公開(kāi)化合物介導(dǎo)的對(duì)這種自然細(xì)胞死亡的抑制。
采用例如以下分析方法,可測(cè)定本發(fā)明稠合吡咯并咔唑化合物對(duì)酶活性的抑制VEGFR抑制分析法MLK抑制分析法PKC活性抑制分析法trkA酪氨酸激酶活性抑制分析法在全細(xì)胞制劑中NGF-刺激的trk磷酸化作用的抑制血小板衍生生長(zhǎng)因子受體(PDGFR)抑制分析法對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(VEGFR)的抑制,在血管生成起重要作用的疾病中具有實(shí)用性,所述疾病例如實(shí)體瘤癌、子宮內(nèi)膜異位、糖尿病性視網(wǎng)膜病、牛皮癬、成血管細(xì)胞瘤、以及其他眼疾和癌。對(duì)MLK的抑制,在治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病方面具有實(shí)用性。對(duì)trk的抑制,在治療前列腺疾病例如前列腺癌和良性的前列腺增生和炎癥性疼痛中具有實(shí)用性。對(duì)血小板衍生生長(zhǎng)因子受體(PDGFR)的抑制,在治療各種形式的瘤形成、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肺纖維化、骨髓纖維化、傷口愈合異常、伴有心血管終點(diǎn)的疾病例如動(dòng)脈粥樣硬化、再狹窄、血管成形術(shù)后再狹窄等方面具有實(shí)用性。
所述稠合吡咯并咔唑還提高神經(jīng)元的存活,從而對(duì)營(yíng)養(yǎng)因子應(yīng)答細(xì)胞的功能和存活表現(xiàn)出正效應(yīng)。關(guān)于膽堿能神經(jīng)元的存活,與未與所述化合物共存的膽堿能神經(jīng)元群落相比,化合物可保持處于瀕死(例如由于損傷、疾病、退化狀態(tài)或者自然發(fā)展所致)危險(xiǎn)之中的膽堿能神經(jīng)元群落的存活,如果經(jīng)處理群落的功能期長(zhǎng)于未處理群落的活。
許多神經(jīng)系統(tǒng)紊亂的特征在于神經(jīng)元細(xì)胞處于瀕死、受損傷的、功能上損害、軸突退化狀態(tài),而處于瀕死危險(xiǎn)之中。這些病癥包括但不限于神經(jīng)系統(tǒng)疾病和病癥、阿爾茨海默??;運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病癥(例如肌萎縮性側(cè)索硬化);帕金森??;腦血管病癥(例如中風(fēng),局部缺血);亨廷頓舞蹈?。籄IDS癡呆;癲癇癥;多發(fā)性硬化;周?chē)窠?jīng)病(例如影響DRG神經(jīng)元的與化學(xué)療法相關(guān)的周?chē)窠?jīng)病)包括糖尿病性神經(jīng)病變和AIDS有關(guān)的周?chē)窠?jīng)病;興奮性氨基酸所導(dǎo)致的病癥;和與腦或脊髓的震動(dòng)性或貫通性損傷有關(guān)的病癥。
所述化合物不僅可用于提高營(yíng)養(yǎng)應(yīng)答細(xì)胞(例如膽堿能神經(jīng)元)的營(yíng)養(yǎng)因子誘導(dǎo)的活性,而且還可用作其他神經(jīng)元細(xì)胞類(lèi)型(例如多巴胺能或者谷氨酸能)的存活增進(jìn)劑。生長(zhǎng)因子通過(guò)給小GTP結(jié)合蛋白ras、rac和cdc42的級(jí)聯(lián)下游發(fā)信號(hào),而調(diào)節(jié)神經(jīng)元的存活(Denhardt,D.T.,Biochem.J.1996,318,729)。具體地說(shuō),ras的活化引起了胞外受體活化的激酶(ERK)的磷酸化和活化,這與生物生長(zhǎng)和分化作用有關(guān)。
對(duì)rac/cdc42的刺激可導(dǎo)致JNK和p38活化、與應(yīng)激、細(xì)胞程序死亡和炎癥有關(guān)的應(yīng)答的增加,盡管生長(zhǎng)因子應(yīng)答主要通過(guò)ERK途徑實(shí)現(xiàn)的,影響這些后續(xù)進(jìn)程可導(dǎo)致神經(jīng)元存活的另一種機(jī)制,它會(huì)模擬生長(zhǎng)因子增強(qiáng)存活的性質(zhì)(Xia等,Science,1995,270,1326)。本發(fā)明化合物也可起到神經(jīng)元和非神經(jīng)元細(xì)胞存活促進(jìn)劑的作用,這可通過(guò)與生長(zhǎng)因子介導(dǎo)的存活有關(guān)的機(jī)制實(shí)現(xiàn)(但有一定區(qū)別),例如抑制JNK和p38 MAPK途徑,這些途徑可通過(guò)抑制編程性細(xì)胞死亡進(jìn)程而使其存活。
本發(fā)明化合物還可用來(lái)治療與ChAT活性減少或者死亡、脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元損傷有關(guān)的病癥,也可用于治療與中樞和周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)中編程性細(xì)胞死亡有關(guān)的疾病,和炎性疾病。ChAT可催化神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿的合成,因此被認(rèn)為是功能性膽堿能神經(jīng)元的酶標(biāo)記物。功能性神經(jīng)元也具有存活能力。通過(guò)定量活性神經(jīng)元對(duì)染料(例如鈣黃綠素AM)的特異的吸收和酶促轉(zhuǎn)化,可分析神經(jīng)元的存活。另外,在此描述的化合物還可用來(lái)治療涉及惡性細(xì)胞增殖的疾病狀態(tài),例如多種癌癥。
由于其各種各樣的實(shí)用性,也可開(kāi)發(fā)所述異構(gòu)的稠合吡咯并咔唑以及異吲哚酮在其他方面(例如研究)的特性。例如,該化合物可用于神經(jīng)元細(xì)胞存活、功能化、識(shí)別的體外模型開(kāi)發(fā),或者用于篩選其他合成化合物(具有類(lèi)似于所述異構(gòu)的稠合吡咯并咔唑和異吲哚酮化合物的活性)。因此,在藥物研究過(guò)程中,本發(fā)明化合物可用作確定物質(zhì)活性的試驗(yàn)或分析中的標(biāo)準(zhǔn)或參考化合物。
所述化合物也可用于研究、定義和確定與功能應(yīng)答有關(guān)的靶分子。例如,通過(guò)對(duì)與特定細(xì)胞功能(例如有絲分裂)有關(guān)的異構(gòu)稠合吡咯并咔唑或者異吲哚酮化合物進(jìn)行放射性標(biāo)記,可以確認(rèn)、分離和純化與衍生物結(jié)合的靶分子,并進(jìn)行表征。此外,化合物也可用于開(kāi)發(fā)分析和模型方法,以進(jìn)一步增加對(duì)抑制絲氨酸/蘇氨酸或酪氨酸蛋白激酶(例如,PKC、trk酪氨酸激酶)在與病癥和疾病相關(guān)的機(jī)制方面所起作用的認(rèn)識(shí)。因此,本發(fā)明化合物可在診斷分析(例如在此描述分析方法)中用作診斷劑。
下面將給出VEGFR和MLK分析法所得的結(jié)果。也對(duì)其他分析方法做了比較詳細(xì)的描述。這些描述不應(yīng)理解為是對(duì)所公開(kāi)范圍的限定。某些縮寫(xiě)定義如下“μg”表示微克,“mg”表示毫克,“g”表示克,“μL”表示微升,“mL”表示毫升,“L”表示升,“nM″”表示毫微摩爾,“μM”表示微摩爾,“mM”表示毫摩爾,“M”表示摩爾和“nm”表示納米。
合成本發(fā)明還提供用于制備本發(fā)明稠合吡咯并咔唑的方法??刹捎帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員熟知的多種路線(xiàn)制備本發(fā)明化合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員能理解,可采用例如下述合成路線(xiàn)描述的方法及其變化方法來(lái)合成所述化合物。對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言,進(jìn)行適當(dāng)?shù)男揎椇吞鎿Q是顯而易見(jiàn)的,這也可從科學(xué)文獻(xiàn)中獲知。所公開(kāi)的與本發(fā)明有關(guān)的所用方法均可以任何規(guī)模應(yīng)用,這包括毫克、克、若干克、千克、若干千克或者商業(yè)化工業(yè)規(guī)模。
可以理解的是,本發(fā)明化合物可包含一種或更多不對(duì)稱(chēng)地取代的碳原子,也可以光學(xué)活性或外消旋體的形式分離。因此,也指所述結(jié)構(gòu)的所有手性、非對(duì)映體、外消旋形式以及所有幾何異構(gòu)形式,除非特別指明了具體的立體化學(xué)或異構(gòu)形式。本領(lǐng)域已知如何制備這類(lèi)光學(xué)活性體。例如,可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)分離立體異構(gòu)體混合物,所述標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)包括但不限于外消旋形式的拆分,正或反相和手性色譜,優(yōu)先鹽形成,重結(jié)晶等,或者從活性起始物料進(jìn)行手性合成,或者設(shè)計(jì)手性合成目標(biāo)中心來(lái)進(jìn)行手性合成。
很容易理解的是,本發(fā)明化合物上的官能團(tuán)可包含保護(hù)基。例如,化合物上的氨基酸側(cè)鏈取代基可用保護(hù)基(例如芐氧羰基或叔丁氧羰基)取代。保護(hù)基本身已知是化學(xué)官能團(tuán),它可選擇性地附加到功能基團(tuán)例如羥基和羧基上,也可從功能基團(tuán)上除去。化合物上的這些基團(tuán)使這類(lèi)功能基團(tuán)對(duì)化合物所接觸的化學(xué)反應(yīng)條件表現(xiàn)為惰性。本發(fā)明可采用各種不同的保護(hù)基。優(yōu)選的保護(hù)基包括芐氧羰基(Cbz;Z)和叔丁氧羰基(Boc)。本發(fā)明的其他優(yōu)選保護(hù)基參見(jiàn)Greene,T.W.和Wuts,P.G.M.,“有機(jī)合成中的保護(hù)基”,第2版,Wiley & Sons,1991。路線(xiàn)1 路線(xiàn)2 路線(xiàn)3 路線(xiàn)4 路線(xiàn)5 路線(xiàn)6 路線(xiàn)7
路線(xiàn)8 合成描述采用DMF中的NaH,用2-溴乙基芐醚(A)或3-溴丙基芐醚(B),進(jìn)行吲哚I的烷基化,制備化合物A和B,然后按US5705511方法進(jìn)行脫芐基作用(Pd(OH)2/H2)。將B與Boc-亮氨酸偶合,然后用有機(jī)合成技術(shù)領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)Boc脫保護(hù),制得參考化合物C。用還原劑例如LiBH4還原酯IV,然后除去二苯基甲醇保護(hù)基,制得化合物B。制備芐醚和硫醚的路線(xiàn)如合成路線(xiàn)1所示。兩種方法可由于制備3-羥甲基中間體28-30、33-35。合成路線(xiàn)1(方法A)為羰基化路線(xiàn),而合成路線(xiàn)2(方法B)采用了甲?;椒?。在合成路線(xiàn)1中,I與丙烯酸乙酯和堿(如DBU)進(jìn)行Michael反應(yīng),制得II,然后用二甲氧基二苯基甲醇進(jìn)行內(nèi)酰胺氮保護(hù),得到III。用還原劑例如硼氫化鋰還原乙酯,然后用N-溴代琥珀酰亞胺溴化,得到高總收率的中間體V。在甲氧乙醇中,對(duì)V進(jìn)行鈀催化的羰基化,得到甲氧基乙氧基酯VI。脫保護(hù)成VII后,可用還原劑例如二異丁基氫化鋁(DIBAL-H)將酯還原成二醇29。采用TFA中的HMTA或α,α-二氯甲基甲醚和Lewis酸,對(duì)羥甲基化合物(方法B,合成路線(xiàn)2)進(jìn)行甲酰化處理。用還原劑例如硼氫化鈉或異丁基氫化鋁將醛還原成羥甲基化合物。采用合成路線(xiàn)4所示的通用方法,可制備甲醚或者硫醚示例。在一種方法中,用三氟醋酐和堿例如三乙胺,可將二醇轉(zhuǎn)化成三-三氟醋酸酯中間體,然后用適當(dāng)?shù)耐榛蓟蛲榛虼继幚碓撝虚g體,可直接得到芐醚(1-25、27、31、32、36-40)。在某些情況下,可分離出伯醇的三氟醋酸酯。在這些實(shí)施例中,用堿例如氫氧化鋰處理三氟醋酸酯,可分離出醇。在另一方法中,在二氯甲烷、甲苯或1,2-二氯乙烷等溶劑中,用二醇(例如28或29)與醇和酸催化劑(例如,對(duì)甲苯磺酸或樟腦磺酸)反應(yīng),可制得醚和硫醚。
醇33-35可用于制備醚實(shí)施例10-13、15、16和36。如合成路線(xiàn)3所示,可由酮XI和XII制得實(shí)施例33-35。用前述以及合成路線(xiàn)4所示的方法,可制得醚和硫醚。
實(shí)施例7的制備如合成路線(xiàn)5所示。用甲磺酰基縮水甘油對(duì)實(shí)施例31烷基化,得到化合物XIII。用THF中的三乙基硼氫化物還原,得到實(shí)施例仲醇7。在二氯甲烷/甲醇中,用碳酸銫和乙醛處理化合物XIV,得到實(shí)施例14(合成路線(xiàn)6)。實(shí)施例40的制備如合成路線(xiàn)7所示。用低聚甲醛和Triton B/吡啶對(duì)Di-TBS保護(hù)的XVIII進(jìn)行烷基化,然后用TMSC1脫保護(hù),得到實(shí)施例40。采用有機(jī)合成領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)偶聯(lián)反應(yīng),由實(shí)施例3和相應(yīng)的羧酸制得氨基酸酯實(shí)施例18-23。
至于本發(fā)明其他特征,可很容易地從下面對(duì)示例性實(shí)施方案的描述中得出。這些實(shí)施例僅僅是示例性的,對(duì)本發(fā)明范疇并無(wú)限定。
于0℃、氮?dú)庀拢騎HF(50mL)中的化合物X(2.37g,0.005mol)懸浮液中加入硼氫化鋰(10eq)。淺棕色混合物于室溫下攪拌3.5小時(shí),之后經(jīng)HPLC檢測(cè)起始物料消失?;旌衔锢鋮s至0℃,然后非常慢地加入甲醇,至沒(méi)有氣體放出?;旌衔镒兂删啵缓箝_(kāi)始形成沉淀?;旌衔镎婵障聺饪s,得到淺黃色固體,該固體用水研磨,經(jīng)過(guò)濾收集,得到產(chǎn)物2.0g(96%收率)。制備化合物VIII于0℃、氮?dú)庀拢蚨燃淄?30mL)中的化合物29(1.13mmol,1eq)的懸浮液中加入三氟乙酸酐(3eq)。然后加入三乙胺(3eq)。反應(yīng)混合物逐漸變成均相,并于0℃攪拌1小時(shí),然后加溫至室溫過(guò)夜。混合物用二氯甲烷稀釋?zhuān)⒂盟望}水洗滌。有機(jī)相經(jīng)硫酸鎂干燥,過(guò)濾并真空下濃縮成固體。該物質(zhì)不需純化。用于醚形成的通用方法(通式結(jié)構(gòu)IX)將VIII溶于適當(dāng)?shù)拇?0.025M)中,并于油浴中加熱到80℃。監(jiān)測(cè)反應(yīng)混合物中起始物料的消失。混合物冷卻至室溫,并于真空下除去溶劑得到固體。所得固體用醚研磨并過(guò)濾收集。在某些情況下,產(chǎn)物需采用色譜技術(shù)進(jìn)一步純化。
按照上述通用方法制備以下化合物實(shí)施例1R5=Oet,18%純化的收率;MS(m/z)427(M++1);1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)1.148(t,3H),1.94(m,2H),3.46-3.52(m,4H),4.53(s,2H),4.60(s,2H),4.73(m,2H),4.91(s,2H),7.36(m,3H),7.48(d,1H),7,64(m,2H),7.90(s,1H),8.55(s,1H),9.47(d,1H)。
實(shí)施例2R5=Ome,95%收率;MS(m/z)413(M++1),435(M++Na);1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)1.99(m,2H),3.36(s,3H),3.54(m,2H),4.58(s,2H),4.66(s,2H),4.79(m,2H),4.96(s,2H),7.40-7.49(m,2H),7.52(d,1H),7.65-7.84(m,2H),7.98(s,1H),8.60(s,1H),9.51(d,1H)。
實(shí)施例3R5=OiPr,31%收率;MS(m/z)441(M++1);1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)1.15(d,6H,1.92(m,2H),3.45(m,2H),3.67(m,1H),4.52(s,2H),4.61(s,2H),4.73(m,2H),4.89(s,2H),7.3-7.39(m,2H),7.47(d,1H),7.62-7.69(m,2H),7.89(s,1H),8.54(s,1H),9.47(d,1H)。
實(shí)施例4R5=OCH(CH3)CH2CH3,25%收率;MS(m/z)455(M++1);1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)0.98(t,3H),1.26(d,3H),1.65(m,2H),2.03(m,2H),3.56(m,2H),4.095(m,1H),4.24(s,2H),4.57(m,2H),4.70(m,2H),4.71(s,2H),6.12(s,1H),7.33(t,1H),7.42-7.58(m,4H),7.75(s,1H),9.48(d,1H)。
實(shí)施例5R5=-OCH(CH3)CH2CH3,61%收率;MS(m/z)455(M++1);1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)0.98(t,3H),1.26(d,3H),1.65(m,2H),2.03(m,2H),3.56(m,2H),4.095(m,1H),4.24(s,2H),4.57(m,2H),4.70(m,2H),4.71(s,2H),6.12(s,1H),7.33(t,1H),7.42-7.58(m,4H),7.75(s,1H),9.48(d,1H)。
實(shí)施例6R5=(S)-OCH(CH3)CH2CH3,93%收率;MS(m/z)455(M++1);1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)0.98(t,3H),1.26(d,3H),1.65(m,2H),2.03(m,2H),3.56(m,2H),4.095(m,1H),4.24(s,2H),4.57(m,2H),4.70(m,3H),4.71(s,2H),6.12(s,1H),7.33(t,1H),7.42-7.58(m,4H),7.75(s,1H),9.48(d,1H)。
實(shí)施例8R5=O-nPr,62%收率;MS(m/z)441(M++1),462(M++Na);1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)0.88(t,3H),1.55(m,2H),1.933(m,2H),3.36-3.58(m,4H),4.53(s,2H),4.61(s,2H),4.73(m,3H),4.90(s,2H),7.33-7.39(m,2H),7.47(d,1H),7.62-7.70(m,2H),8.54(s,1H),9.47(d,1H)。
實(shí)施例9R5=O-nBu,92%收率;MS(m/z)455(M++1);1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)0.854(t,3H),1.34(m,2H),1.52(m,2H),1.93(m,2H),3.48(m,2H),4.52(s,2H),4.60(s,2H),4.73(m,3H),4.89(s,2H),7.30-7.42(m,2H),7.47(d,1H),7.62-7.70(m,2H),7.89(s,1H),8.54(s,1H),9.47(d,1H)。
實(shí)施例17R5=O-tBu,35%收率;MS(m/z)455(M++1),477(M++Na);1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)1.28(s,9H),1.97(m,2H),3.62(m,2H),4.56(s,2H),4.52(s,2H),4.77(m,3H),4.94(s,2H),7.35-7.72(3m,3H),7.72(m,2H),7.90(s,1H),8.8.57(s,1H),9.50(d,1H)。
實(shí)施例25R6=Set,96%收率;MS(m/z)443(M++1);1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)1.17(t,3H),1.93(m,2H),2.42(q,2H),3.48(m,2H),3.93(s,2H),4.52(s,2H),4.72(m,3H),4.89(s,2H),7.33-7.49(m,3H),7.65(m,2H),7.88(s,1H),8.56(s,1H),9.46(d,1H)。
實(shí)施例26R6=SOCH(CH3)2,MS(m/z)494(M++Na);1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)1.21(dd,6H),1.93(m,2H),2.82(m,1H),3.49(m,2H),4.12(d,1H),4.23(d,1H),2.52(s,2H),4.75(m,3H),4.88(s,2H),7.33-7.45(m,2H),7.55(d,1H),7.65(d,1H),7.71(d,1H),7.94(s,1H),8.58(s,1H),9.47(d,1H)。
實(shí)施例27R6=SCH(CH3)2,MS(m/z)457(M++1),479(M++Na);1HNMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)1.31(d,6H),2.34(m,2H),2.86(m,1H),3.98(s,2H),4.29(s,2H),4.45(m,1H),4.74(m,2H),4.92(s,2H),6.07(s,1H),7.39(m,2H),7.51(m,2H),7.57(m,1H),7.80(s,1H),9.53(d,1H)。
實(shí)施例37R6=nPrS(三氟醋酸酯),66%收率;1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ0.92(t,3H),1.58(q,2H),2.29(m,2H),2.44(t,2H),3.95(s,2H),4.53(m,4H),4.82(m,2H),4.93(s,2H),7.41(m,2H),7.52(d,1H),7.60(d,1H),7.72(d,1H),7.93(s,1H),8.62(s,1H),9.51(d,1H)。
實(shí)施例38R6=S(C5H4N),51%收率;MS(ESI)m/e 514(M++Na);1H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ1.014(m,2H),3.45(m,2H),4.51(s,2H),4.60(s,2H),4.72(m,3H),4.85(s,2H),7.11(m,1H),7.30-7.41(m,3H),7.54-7.67(m,4H),8.02(s,1H),8.48(d,1H,J=3.97),8.55(s,1H),9.46(d,1H,J=7.36)。
實(shí)施例39R6=S(C4H3N2),52%收率;MS(m/z)493(M++H);1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)1.93(m,2H),3.45(m,2H),4.51(s,3H),4.60(s,2H),4.72(m,2H),4.88(s,2H),7.22(t,1H),7.32-7.68(m,6H),8.05(s,1H),8.55(s,1H),8.66(d,1H),9.46(d,1H)。
實(shí)施例30R5=H,44%收率;1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)4.13(s,2H),4.64(s,2H),4.89(s,2H),7.28-7.42(m,3H),7.53(d,1H),7.64(d,1H),7.89(s,1H),8.49(s,1H),9.34(d,1H),11.83(s,1H)。
實(shí)施例31R5=Oet,83%收率;1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)1.18(t,3H),3.55(q,2H),4.62(s,2H),4.93(s,2H),7.34-7.46(m,3H),7.58(d,1H),7.68(d,1H),7.92(s,1H),8.54(s,1H),9.39(d,1H),11.91(s,1H)。
實(shí)施例32R5=OiPr,41%純化收率;1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)1.15(d,6H),3.68(m,1H),4.13(s,2H),4.59(s,2H),4.89(s,2H),7.28-7.42(m,3H),7.54(d,1H),7.64(d,1H),7.88(s,1H),8.49(s,1H),9.35(d,1H),11.87(s,1H)。制備化合物XI氮?dú)庀?,?,2-二氯乙烷/二氯甲烷(1∶1,8mL)中的氯化鋁(3eq)懸浮液中加入乙酰氯(3eq)。反應(yīng)混合物變成均相,并在冰浴中冷卻至0℃。滴加二氯甲烷(3mL)中的B(0.84mmol,leq)懸浮液,混合物變?yōu)楹稚3ケ?,將反?yīng)混合物加溫至室溫。混合物加熱回流2小時(shí),然后冷卻至室溫。HPLC顯示已沒(méi)有起始物料。混合物傾入冰水,并加入濃HCl(5mL)。過(guò)濾收集形成的沉淀并干燥。340mg(89%收率),MS(m/z)453(M++1);1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.02(s,3H),2.18(m,2H),2.74(s,3H),4.12(m,2H),4.56(s,2H),4.83(m,2H),5.05(s,2H),7.43(m,2H),7.68(d,1H),7.86(d,1H),8.17(d,1H),8.56(s,1H),8.72(1H),9.53(d,1H)。
采用三-三氟醋酸酯為中間體,按制備醚形成的通用方法制備以下化合物實(shí)施例10R5=Oet,68%收率;MS(m/z)441(M++1),395(M++-OCH2CH3);1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)1.08(t,3H),1.41(d,3H),1.93(m,2H),3.47(m,2H),4.52(s,2H),4.60(m,1H),4.73(m,2H),4.90(m,2H),7.33-7.39(m,2H),7.47(d,1H),7.63(d,1H),7.69(d,1H),7.86(s,1H),8.55(s,1H),9.47(d,1H)。
10經(jīng)反相HPLC分離,得到異構(gòu)體11和12。
實(shí)施例11(手性)R5=Oet,MS(m/z)441(M++1),395(M++-OCH2CH3)。
實(shí)施例12(手性)R5=Oet,MS(m/z)441(M++1),395(M++-OCH2CH3)。
實(shí)施例13(手性)R5=Ome,76%收率;MS(m/z)427(M++1);1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)1.45(d,3H),1.98(m,2H),3.14(s,3H),3.50(m,2H),4.58(m,3H),7.75(m,2H),4.93(s,2H),7.33(m,2H),7.48(d,1H),7.67(d,1H),7.72(d,1H),7.88(s,1H),8.58(s,1H),9.49(d,1H)。
實(shí)施例15R5=Obu,73%收率;1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)0.81(t,3H),1.27-1.43(m,7H),1.93(m,2H),3.48(m,2H),4.53(s,2H),4.58(m,1H),4.73(m,4H),4.92(m,2H),7.33-7.39(m,2H),7.46(d,1H),7.63(d,1H),7.69(d,1H),7.86(s,1H),8.55(s,1H),9.47(d,1H)。
實(shí)施例16R5=OiPr,63%收率;1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)1.01(d,3H),1.10(d,3H),1.38(d,3H),1.95(m,2H),3.47(m,2H),3.98(q,1H),4.26(m,1H),4.52(s,2H),4.74(m,3H),4.90(m,2H),7.33-7.39(m,2H),7.48(d,1H),7.62-7.69(m,2H),7.87(s,1H),8.54(s,1H),9.47(d,1H)。
實(shí)施例35R5=H,98%收率;MS(m/z)455(M++1),337(M+-H2O);1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)1.45(d,3H),4.25(m,3H),4.86(s,2H),5.16(d,1H),7.28-7.39(m,2H),7.43(d,1H),7.56(d,1H),7.66(d,1H),7.92(s,1H),8,49(s,1H),9.35(d,1H),11.78(s,1H)。
實(shí)施例36R5=Ome,50%收率;MS(m/z)369(M++1);1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)1.43(d,3H),3.16(s,3H),4.15(m,2H),4.49(m,1H),4.93(s,2H),7.32-7.40(m,3H),7.58(d,1H),7.67(d,1H),7.84(s,1H),8.50(s,1H),9.44(d,1H),11.87(s,1H)。
實(shí)施例34R5=H,(77%收率,2步);MS(m/z)427(M++1),409(M+-H2O);1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)0.848(t,3H),1.70(m,2H),1.93(m,2H),3.47(m,2H),4.52(s,2H),4.61(m,1H),4.72(m,3H),4.89(s,2H),5.14(s,1H),7.29-7.39(m,2H),7.44(d,1H),7.64(m,2H),7.87(s,1H),8.54(s,1H),9.46(d,1H)。用于實(shí)施例3酯形成通用方法向烘干的3-L、3頸圓底燒瓶(配有機(jī)械攪拌器、與氬氣球連接的三通旋閥和浸沒(méi)式溫度計(jì))中加入化合物3(148.6mmol),然后加入無(wú)水N,N-二甲基乙酰胺(654mL)。于35℃,向澄清的紅色溶液中先后加入4-(二甲氨基)吡啶(DMAP)(0.5eq)、氨基酸(2.5eq)和1-[3-(二甲氨基)丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(2.5eq)。反應(yīng)懸浮液加熱至42-45℃2小時(shí),先后加入追加量的DMAP(0.08eq)、氨基酸(0.5eq)和1-[3-(二甲氨基)丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.5eq)。1.5小時(shí)以后,反應(yīng)混合物冷卻至0-5℃,并用水淬滅。除去冷卻水浴,所得淺黃懸浮液于室溫下攪拌1小時(shí)。過(guò)濾懸浮液,用水洗滌至pH=8,用家用真空(housevacuum)干燥過(guò)夜。淺黃固體不完全干燥,將其溶于二氯甲烷中,并分離水層。有機(jī)相鹽水洗滌,經(jīng)MgSO4干燥,用硅藻土過(guò)濾,并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮成粗制固體。將粗品再溶于二氯甲烷中,并移至3-L、3頸圓底燒瓶(配有機(jī)械攪拌器)中。于室溫下,在連續(xù)攪拌下,將乙酸乙酯(1L)滴加到澄清的紅色溶液中,用時(shí)70min。加入乙酸乙酯(15mL)后,有沉淀形成。漿狀物攪拌2.5h,然后過(guò)濾收集固體。沉淀依次用乙酸乙酯、乙酸乙酯/甲基·叔丁基醚(3∶2)混合物和甲基·叔丁基醚洗滌,然后干燥得到米色固體。78%收率。
實(shí)施例18MS(m/z)498(M++1)實(shí)施例19MS(m/z)566(M++1)實(shí)施例20MS(m/z)569(M++1)實(shí)施例21MS(m/z)512(M++1)實(shí)施例22MS(m/z)554(M++1)實(shí)施例23MS(m/z)526(M++1)實(shí)施例24MS(m/z)554(M++1)制備XIII將實(shí)施例31(0.33mmol)溶于DMF(10mL)中,經(jīng)蒸餾除去半數(shù)體積。將燒瓶冷卻至室溫,并加入氫化鈉(1eq),混合物攪拌1h。加入甲磺酰基縮水甘油(1.5eq),混合物加溫至50℃24h,然后冷卻至室溫。過(guò)濾混合物,并于真空下除去溶劑。反應(yīng)混合物經(jīng)硅膠柱色譜法純化,得到收率為73%的XIII。1.19(t,3H),2.78(t,1H),3.53(m,4H),4.53(s,2H),4.65(s,2H),4.78(dd,1H),4.96(s,2H),5.20(d,1H),7.35-7.47(m,2H),7.51(d,1H),7.68(d,1H),7.75(d,1H),7.95(s,1H),8.62(s,1H),9.55(d,1H)。實(shí)施例7將化合物XIII(100mg)溶于THF(10mL)中,并滴加三乙基硼氫化物(2mL)。反應(yīng)混合物加熱至70℃4h?;旌衔锢鋮s至室溫,并加入1NHCl。真空下除去溶劑,所得物質(zhì)置于甲醇/水混合物中。過(guò)濾收集所得沉淀,干燥。1.19(t,3H),1.25(d,3H),3.55(q,2H),4.13(m,2H),4.58(s,2H),4.61(s,2H),4.64(s,2H),4.93(s,2H),4.97(t,1H),7.34-7.45(m,2H),7.49(d,1H),7.69(t,2H),7.92(s,1H),8.57(s,1H),9.50(d,1H)。
用吡啶中的0.25M Triton B溶液(100μL,0.025mmol),處理吡啶中(4mL)中XVIII(68.1mg,0.10mmol)與低聚甲醛(63.1mg,2.1mmol)的混合物。攪拌2h后,加入另外的吡啶中的Triton B溶液(150μL,0.038mmol)。1h后,將混合物置于EtOAc中,并用CuSO4水溶液徹底洗滌。用水、NaHCO3水溶液和鹽水洗滌后,有機(jī)層經(jīng)MgSO4干燥,過(guò)濾并蒸發(fā),得到殘余物,該殘余物經(jīng)柱色譜法(硅膠,22%EtOAc/己烷)純化得到45.2mg IXX(64%),該產(chǎn)物具有以下譜特性1H NMR(DMSO-d6)δ9.42(d,1H,J=7.7),7.97(s,1H),7.75-7.72(m,2H),7.52(d,1H,J=8.5),7.44(dd,1H,J=7.7,7.5),7.36(dd,1H,J=7.7,7.5),5.13(m,1H),5.04(s,2H),4.77(m,1H),4.70(s,2H),4.10(m,1H),3.76(sep,1H,J=6.1),3.54(m,1H),3.44(m,1H),3.31(m,3H),1.79(m,2H),1.22(m,6H),1.07(s,9H),0.85(s,9H),0.52(s,6H),0.00(s,3H),-0.03(s,3H);MS m/z699(M++H)。
向iPrOH(10ml)中的XXI(22.5mg,0.032mmol)溶液中加入TMSCl(100μL),混合物攪拌2.5h。蒸發(fā)溶劑后,殘余物用醚(3×1ml)研磨并干燥,得到10.8mg實(shí)施例40(72%),其譜特性如下1H NMR(DMSO-d6)9.49(d,1H,J=7.7),8.59(s,1H),7.96(s,1H),7.80(d,1H,J=7.3),7.77(d,1H,J=8.5),7.55(d,1H,J=7.3),7.45(m,1H),7.37(m,1H),4.98(m,3H),4.78(m,2H),4.70(s,2H),4.20-4.16(m,2H),3.76(sep,1H,J=6.1),3.38(m,1H),3.36-3.25(m,2H),1.8(m,2H),1.23(d,6H,J=6.1);MS m/z 471(M+H)。抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體激酶活性采用如下所述的trkA激酶ELISA分析法,對(duì)稠合吡咯并咔唑化合物進(jìn)行了試驗(yàn),以研究它們對(duì)桿狀病毒表達(dá)的VEGF受體(人flk-1、KDR、VEGFR2)激酶域的激酶活性的抑制作用。將包含50mMHepes(pH7.4)、40μM ATP,10mM MnCl2、0.1%BSA、2%DMSO以及不同濃度抑制劑的激酶反應(yīng)混合物移至包被有PLC-γ/GST的平板上。加入VEGFR激酶,反應(yīng)在37℃下進(jìn)行15min。加入抗磷酸酪氨酸抗體(UBI),檢測(cè)磷酸化產(chǎn)物。加入次級(jí)酶結(jié)合抗體,捕獲抗體-磷酸化PLCγ/GST配合物。通過(guò)放大檢測(cè)系統(tǒng)(Gibco-BRL)測(cè)定結(jié)合酶的活性。在GraphPad棱柱中用S形的劑量-效應(yīng)(可變斜率)方程分析抑制數(shù)據(jù)。結(jié)果如表III所示。
表IIIVEGFR抑制
抑制混合譜系激酶-1(MLK1)的活性采用用于蛋白激酶C的Millipore Multiscreen TCA“板內(nèi)”格式,分析MLK1的激酶活性(Pitt & Lee,J.Biomol.Screening,147-51,1996)。每50μL分析混合物中包含20mM Hepes(7.2)、5mM EGTA、15mM MgCl2、25mMβ-磷酸甘油、60μM ATP、0.25μCi[γ-32P]ATP、0.1%BSA、500μg/ml髓鞘堿性蛋白(UBI#13-104)、2%DMSO、1μM待試化合物和1μg/ml的桿狀病毒GST-MLKlKD。樣品于37℃保溫15min。加入冰冷的50%TCA中止反應(yīng),蛋白質(zhì)于4℃沉淀30min。然后用冰冷的25%TCA洗滌平板。加入Supermix閃爍合劑,在用WallacMicroBeta 1450 PLUS閃爍計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)以前,先使平板平衡1-2小時(shí)。抑制混合譜系激酶-2(MLK2)的活件析采用用于MLK1的Millipore Multiscreen TCA平板格式。每50μL分析混合物中包含20mM Hepes(pH7.2)、5mM EGTA、15mMMgCl2、25mMβ-磷酸甘油、100μM ATP、0.25μCi[γ-32P]ATP、0.1%BSA、500μg/ml髓鞘堿性蛋白(UBI#13-104)、2%DMSO、各種濃度的待試化合物和3μg/ml的桿狀病毒GST-MLK2KDLZ。樣品于37℃保溫15min。加入冰冷的50%TCA中止反應(yīng),蛋白質(zhì)于4℃沉淀30min。然后用冰冷的25%TCA洗滌平板。加入Supermix閃爍合劑,在計(jì)數(shù)以前,先使平板平衡1-2小時(shí)。抑制混合譜系激酶-3(MLK3)的活性分析采用用于MLK1的Millipore Multiscreen TCA平板格式。每50μL分析混合物中包含20mM Hepes(pH7.2)、5mM EGTA、15mMMgCl2、25mMβ-磷酸甘油、100μM ATP、0.25μCi[γ-32P]ATP、0.1%BSA、500μg/ml髓鞘堿性蛋白(UBI#13-104)、2%DMSO、各種濃度的待試化合物和2μg/ml的桿狀病毒GST-MLK3KD。樣品于37℃保溫15min。加入冰冷的50%TCA中止反應(yīng),蛋白質(zhì)于4℃沉淀30min。然后用冰冷的25%TCA洗滌平板。加入Supermix閃爍合劑,在計(jì)數(shù)以前,先使平板平衡1-2小時(shí)。
表IVMLK抑制------IC50(nM) 或%抑制 @100nM-------.
抑制trkA酪氨酸激酶的活性采用前述的ELISA基分析方法,對(duì)選定的異構(gòu)的稠合吡咯并咔唑和異吲哚酮進(jìn)行了分析,以研究它們對(duì)桿狀病毒表達(dá)的人trkA細(xì)胞質(zhì)域的激酶活性的抑制能力(Angeles等,Anal.Biochem.23649-55,1996)。簡(jiǎn)單地說(shuō),將96孔微量滴定板涂敷酶底物(重組人磷脂酶C-γl/谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶融合蛋白(Rotin等,EMBO J.11559-567,1992)。在100μL分析混合物中進(jìn)行抑制試驗(yàn),所述混合物中包含50mM Hepes(pH7.4)、40μM ATP、10mM MnCl2、0.1%BSA、2%DMSO和不同濃度的抑制劑。加入trkA激酶引發(fā)反應(yīng),并在37℃進(jìn)行15分鐘。然后加入磷酸酪氨酸抗體(UBI),接著加入次級(jí)酶結(jié)合抗體、堿性磷酸酶標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG(Bio-Rad)。通過(guò)放大的檢測(cè)系統(tǒng)(Gibco-BRL)測(cè)定結(jié)合酶的活性。在GraphPad棱柱中,用S形的劑量-效應(yīng)(可變斜率)方程分析抑制數(shù)據(jù)。使激酶活性抑制50%的濃度稱(chēng)為“IC50”。抑制全細(xì)胞制劑中NGF-刺激的trk磷酸化作用采用以前描述方法(參見(jiàn)US5,516,771)的下述改良方法,研究了本發(fā)明化合物對(duì)trk的NGF-刺激的磷酸化作用的抑制作用。在100mm平皿中培養(yǎng)trkA轉(zhuǎn)染的NIH3T3細(xì)胞。于37℃,用包含化合物(100nM和1μM)或DMSO(作為對(duì)照)的0.05%BSA-DMEM(不含血清)代替培養(yǎng)基,對(duì)分會(huì)合細(xì)胞進(jìn)行缺血清培養(yǎng)lhr。然后向細(xì)胞中加入濃度為10ng/ml的NGF(Harlan/Bioproducts for Science),用時(shí)5分鐘。在包含去垢劑和蛋白酶抑制劑的緩沖液中溶解細(xì)胞。用BCA方法將澄清的細(xì)胞溶解物標(biāo)準(zhǔn)化為蛋白質(zhì),并用抗trk抗體進(jìn)行免疫沉淀。多克隆的抗trk抗體對(duì)抗相應(yīng)于trk羧基端基上的14個(gè)氨基酸的肽(Martin-Zanca等,Mol.Cell.Biol.924-33,1989)。
在蛋白A Sepharose珠(Sigma Chem.公司,St.Lois,MO)上收集免疫復(fù)合物。用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分離,并移至聚偏氟乙烯(PVDF)膜上。用抗磷酸酪氨酸抗體(UBI)進(jìn)行膜的免疫印跡,接著與辣根過(guò)氧化酶結(jié)合的山羊抗小鼠IgG(Bio-Rad Laboratories,Hercules,CA)一起保溫。用ECL(Amersham Life Science公司,ArlingtonHeights,IL)目測(cè)磷酸化蛋白質(zhì)。測(cè)定trk蛋白質(zhì)帶的面積,并與NGF-刺激的對(duì)照物比較。基于trk蛋白質(zhì)帶減少的百分率,記錄抑制結(jié)果,評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下0=?jīng)]有降低;1=1-25%;2=26-49%;3=50-75%;4=76-100%。抑制血小板衍生生長(zhǎng)因子受體激酶活性采用上述trkA激酶ELISA法,對(duì)異構(gòu)的稠合吡咯并咔唑和異吲哚酮化合物進(jìn)行了測(cè)試,以研究它們對(duì)桿狀病毒表達(dá)的PDGFβ受體激酶域的激酶活性的抑制作用。分析在涂有酶底物(PLC-γ/GST)的96孔微量滴定板中進(jìn)行。每100μL反應(yīng)混合物中包含50mM Hepes(pH7.4)、20μM ATP、10mM MnCl2、0.1%BSA、2%DMSO和不同濃度的抑制劑。加入預(yù)磷酸化的重組人酶(10ng/ml PDGFRβ)引發(fā)反應(yīng),并于37℃進(jìn)行15分鐘。在使用之前,將激酶置于包含20μM ATP和10mMMnCl2的緩沖液中4℃保溫1小時(shí),配制預(yù)磷酸化的酶。加入辣根過(guò)氧化酶(HRP)結(jié)合的抗磷酸酪氨酸抗體(UBI),檢測(cè)磷酸化產(chǎn)物。HRP底物溶液包含3,3′-5,5′-四甲基聯(lián)苯胺,接著加入過(guò)氧化氫,并將平板置于室溫下保溫10分鐘。用酸淬滅反應(yīng),用Microplate Bio-kineticsReader(Bio-Tek Instrument EL 312e),于450nm處測(cè)定吸收度。在GraphPad棱柱中,用S形的劑量-效應(yīng)(可變斜率)方程分析抑制數(shù)據(jù)。
盡管上面對(duì)本發(fā)明作了非常詳細(xì)的描述,但是對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見(jiàn)的是,可對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案和優(yōu)選實(shí)施方案加以變化和改進(jìn),所有此類(lèi)變化和改進(jìn)均在本發(fā)明的范疇和精神中。因此,所附權(quán)利要求書(shū)涵蓋落入本發(fā)明范圍內(nèi)的所有等價(jià)變化。
權(quán)利要求
1.式I化合物 式I其中R1和R2相同或者不同,并獨(dú)立地選自H,或者被-OH或者-OR4取代的1-8個(gè)(包含)碳原子的烷基,其中R4為1-4個(gè)(包含)碳原子的烷基,芳基或者除去羧基上的羥基后的氨基酸殘基;和R3為-CH2OH;-CH2OR7;-(CH2)nSR5;-(CH2)nS(O)yR5;-CH2SR5;或者被-OH、-OR5、-OR8、-CH2OR7、-S(O)yR6或-SR6取代的1-8個(gè)(包括)碳原子的烷基;和其中R5為1-4個(gè)(包含)碳原子的烷基或者芳基;R6為H、1-4個(gè)(包含)碳原子的烷基或者6-10個(gè)碳原子的芳基;R7為H或者1-4個(gè)(包含)碳原子的烷基;R8為除去羧基上的羥基后的氨基酸殘基;n是1-4(包含)的整數(shù);和y是1或者2。
2.式II化合物 式II其中R1和R2相同或者不同,并獨(dú)立地選自H,或者被-OH或者-OR4取代的1-8個(gè)(包含)碳原子的烷基,其中R4為1-4個(gè)(包含)碳原子的烷基,芳基或者除去羧基上的羥基后的氨基酸殘基;和R3為-CH2OH;-CH2OR7;-(CH2)nSR5;-(CH2)nS(O)yR5;-CH2SR5;或者被-OH、-OR5、-OR8、-CH2OR7、-S(O)yR6或-SR6取代的1-8個(gè)(包括)碳原子的烷基;和其中R5為1-4個(gè)(包含)碳原子的烷基或者芳基;R6為H、1-4個(gè)(包含)碳原子的烷基或者6-10個(gè)碳原子的芳基;R7為H或者1-4個(gè)(包含)碳原子的烷基;R8為除去羧基上的羥基后的氨基酸殘基;n是1-4(包含)的整數(shù);和y是1或者2。
3.如權(quán)利要求1或2的化合物,其中R1為被-OH或者-OR4取代的1-4個(gè)(包含)碳原子的烷基,其中R4為除去羧基上的羥基后的氨基酸殘基;R2為H;和R3為被-OH、-OR5、-OR8、-CH2OR7、-S(O)yR6或-SR6取代的1-4個(gè)(包括)碳原子的烷基;和其中R5為1-4個(gè)(包含)碳原子的烷基或者芳基;R6為H、1-4個(gè)(包含)碳原子的烷基或者6-10個(gè)碳原子的芳基;R7為H或者1-4個(gè)(包含)碳原子的烷基;和R8為除去羧基上的羥基后的氨基酸殘基。
4.如權(quán)利要求1或2的化合物,其中R1為-CH2CH2CH2OH或者-CH2CH2CH2OCOCH2N(CH3)2;R2為H;和R3為-CH2OR7,其中R7為1-4個(gè)(包含)碳原子的烷基。
5.權(quán)利要求1或2的化合物,如表I所示表I
6.包括權(quán)利要求1所述化合物的藥物組合物。
7.治療或者預(yù)防前列腺病癥方法,包括將治療有效量的權(quán)利要求1所述化合物給予需要這種治療或預(yù)防的宿主。
8.如權(quán)利要求7的方法,其中前列腺病癥是前列腺癌或者良性前列腺增生。
9.治療或者預(yù)防血管生成病癥的方法,包括將治療有效量的權(quán)利要求1所述化合物給予需要這種治療或預(yù)防的宿主。
10.如權(quán)利要求9的方法,其中血管生成病癥是實(shí)體瘤癌、眼疾、黃斑變性、子宮內(nèi)膜異位、糖尿病性視網(wǎng)膜病、牛皮癬或者成血管細(xì)胞瘤。
11.治療或者預(yù)防病理病癥的方法,包括將治療有效量的權(quán)利要求1所述化合物給予需要這種治療或預(yù)防的宿主。
12.如權(quán)利要求11的方法,其中病理學(xué)病癥是瘤形成、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性關(guān)節(jié)炎、肺纖維化、骨髓纖維化、傷口愈合異常、動(dòng)脈粥樣硬化或者再狹窄。
13.用于治療或者預(yù)防神經(jīng)變性疾病和病癥、阿爾茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化、帕金森病、中風(fēng)、局部缺血、亨廷頓舞蹈病、AIDS癡呆、癲癇癥、多發(fā)性硬化、周?chē)窠?jīng)病、化學(xué)療法導(dǎo)致的周?chē)窠?jīng)病、AID相關(guān)的周?chē)窠?jīng)病或者腦或脊索損傷的方法,包括將治療有效量的權(quán)利要求1所述化合物給予需要這種治療或者預(yù)防的宿主。
14.治療或者預(yù)防多發(fā)性骨髓瘤和白血病的方法,包括將治療有效量的權(quán)利要求1所述化合物給予需要這種治療或預(yù)防的宿主。
15.如權(quán)利要求14的方法,其中白血病是急性粒細(xì)胞白血病、慢性粒細(xì)胞白血病、急性淋巴細(xì)胞性白血病或者慢性淋巴細(xì)胞性白血病。
全文摘要
本發(fā)明一般涉及選定稠合吡咯并咔唑、包含該化合物的藥物組合物和治療相關(guān)疾病的方法。本發(fā)明還涉及制備這些稠合吡咯并咔唑的中間體和方法。
文檔編號(hào)A61P15/00GK1449287SQ01814633
公開(kāi)日2003年10月15日 申請(qǐng)日期2001年8月23日 優(yōu)先權(quán)日2000年8月25日
發(fā)明者迪亞娜·E·金里奇, 羅伯特·L·胡德金斯 申請(qǐng)人:賽福倫公司
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