專利名稱：α的制作方法
背景技術(shù)：
發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及小分子，它們是αLβ2介導(dǎo)細(xì)胞粘連的有效抑制劑，能夠用于治療炎性疾病。
相關(guān)技術(shù)的說明整連蛋白家族的蛋白質(zhì)是雜二聚的受體，它們在所有細(xì)胞類型上被表達(dá)，介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞的結(jié)合和細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的粘連。B2(CD18)整連蛋白亞族由3個(gè)成員組成，即αLβ2整連蛋白(LFA-1，CD11a/CD18)、αMβ2整連蛋白(Mac-1，CD11b/CD18)和gp 150β2整連蛋白(αxβ2整連蛋白，CD11c/CD18)，它們主要在白細(xì)胞上被表達(dá)(Sanchez-Madrid等，J.Exp.Med.(實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志)，158，1785-1803(1983))。αLβ2整連蛋白主要見于T和B淋巴細(xì)胞，而αMβ2整連蛋白存在于活化嗜中性白細(xì)胞、NK細(xì)胞和有些骨髓細(xì)胞。αLβ2整連蛋白與細(xì)胞內(nèi)粘連分子ICAM-1、2和3結(jié)合，這些分子見于多種細(xì)胞類型，例如血管內(nèi)皮細(xì)胞、樹狀細(xì)胞、上皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞(Dustin等，J.Immunology(免疫學(xué)雜志)，137，245-254(1986))。最近，已有證據(jù)表明αLβ2整連蛋白與ICAM-4和一種新穎的配體結(jié)合，該配體在端腦中被表達(dá)。已經(jīng)顯示α鏈的I結(jié)構(gòu)域是關(guān)于其配體的主要識(shí)別部位。
αLβ2整連蛋白與ICAM-1的粘連是T淋巴細(xì)胞對抗原的免疫應(yīng)答性、淋巴細(xì)胞返回與循環(huán)和細(xì)胞向炎癥部位遷移所必要的(Springer，Ann.Rev.Physiol.(生理學(xué)年評)，57，827(1995))。在若干不同的炎性疾病動(dòng)物模型中都顯示了αLβ2整連蛋白在介導(dǎo)炎性事件中的決定性作用，其中抗αLβ2整連蛋白或ICAM-1抗體顯著抑制治療終點(diǎn)的發(fā)展(Rothlein等，Kidney International(國際腎臟學(xué))，41，617(1992)；Iigo等，J.Immunology(免疫學(xué)雜志)，147，4167(1991)；Bennet等，J.Pharmacol.and Exp.Therapeutics(藥理學(xué)與實(shí)驗(yàn)治療學(xué)雜志)，280，988(1997))。
β2整連蛋白亞族還被認(rèn)為在若干類型炎性疾病過程中扮演關(guān)鍵角色，它們與ICAM發(fā)生相互作用。證明β2整連蛋白在介導(dǎo)炎性反應(yīng)中的重要性的證據(jù)是，抗β2整連蛋白或ICAM-1單克隆抗體顯著抑制體外跨內(nèi)皮移行(Smith，Can.J.Physiol.Pharmacol.(加拿大生理學(xué)與藥理學(xué)雜志)，71，76(1993))。此外，αLβ2整連蛋白的阻斷已經(jīng)顯示抑制嗜中性白細(xì)胞注入幾乎每個(gè)系統(tǒng)，包括皮膚、腹膜、滑膜、肺臟、腎臟和心臟。作為主要的β2整連蛋白配體之一，預(yù)期ICAM-1的阻斷也將抑制炎性反應(yīng)(Albelda等，The FASEB Journal(美國實(shí)驗(yàn)生物學(xué)會(huì)聯(lián)合會(huì)會(huì)志)，8，504(1994))。
而且，已經(jīng)顯示抗αLβ2整連蛋白抗體抑制移植術(shù)后排斥。WO94/04188公開了抗αLβ2整連蛋白單克隆抗體用于所有移植術(shù)的用途，包括移植物對宿主或宿主對移植物的疾病。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及式(I)化合物 或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R1選自1)氫原子，或2)可以可選地被羧基或C1-6烷氧羰基取代的C1-6烷基；R2a和R2b獨(dú)立地是氫原子、鹵原子、羥基、氰基、可以可選地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷基、可以可選地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷硫基、可以可選地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷基亞磺酰基、可以可選地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷基磺?；⒒蚩梢钥蛇x地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷氧基；R3是C1-6烷基；R4和R5獨(dú)立地是鹵原子。本發(fā)明的化合物對αLβ2介導(dǎo)細(xì)胞粘連具有有效的抑制活性，對由αLβ2介導(dǎo)細(xì)胞粘連導(dǎo)致的不利條件顯示優(yōu)異的體內(nèi)改善。
發(fā)明的詳細(xì)說明本發(fā)明的所需化合物可以存在基于其不對稱原子的旋光異構(gòu)體形式，本發(fā)明也包括這些旋光異構(gòu)體及其混合物。
在本發(fā)明的實(shí)施方式中，鍵的立體構(gòu)型不必是固定的。本發(fā)明化合物可以是具有唯一構(gòu)型的化合物或具有若干不同構(gòu)型的混合物。
在優(yōu)選的化合物(I)實(shí)施方式中，R1是氫原子或可以可選地被羧基或C1-6烷氧羰基取代的C1-6烷基，R2a和R2b獨(dú)立地是氫原子、鹵原子、羥基、氰基或可以可選地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷氧基，R3是C1-6烷基，R4和R5獨(dú)立地是鹵原子。
在更優(yōu)選的化合物(I)實(shí)施方式中，R1是氫原子或C1-6烷基，R2a和R2b之一是氫原子，另一個(gè)是鹵原子、氰基或可以可選地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷氧基，R3是C1-6烷基，R4和R5獨(dú)立地是鹵原子。
在進(jìn)一步優(yōu)選的化合物(I)實(shí)施方式中，R1是氫原子或甲基，R2a和R2b之一是氫原子，另一個(gè)是溴原子、氰基、C1-6烷氧基或三氟甲氧基，R3是甲基，R4和R5是氯原子。
在另一種更優(yōu)選的化合物(I)實(shí)施方式中，R1是氫原子或可以可選地被羧基或C1-6烷氧羰基取代的C1-6烷基，R2a和R2b之一是氫原子，另一個(gè)是氰基或可以可選地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷氧基。
在另一種進(jìn)一步優(yōu)選的化合物(I)實(shí)施方式中，R1是氫原子或甲基，R2a和R2b之一是氫原子，另一個(gè)是C1-6烷氧基或三氟甲氧基，R3是甲基，R4和R5是氯原子。
在另一種優(yōu)選的化合物(I)實(shí)施方式中，R1是被C1-6烷氧羰基或羧基取代的C1-6烷基，R2a和R2b之一是氫原子，另一個(gè)是鹵原子、氰基或可以可選地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷氧基，R3是C1-6烷基，R4和R5獨(dú)立地是鹵原子。
在更優(yōu)選的化合物(I)實(shí)施方式中，R3是甲基，R4和R5是氯原子。
最優(yōu)選的本發(fā)明化合物選自3-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-(4-溴芐基)-1，5-二甲基-2，4-咪唑烷二酮；3-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-(4-丙氧基芐基)-1，5-二甲基-2，4-咪唑烷二酮；3-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-(4-乙氧基芐基)-1，5-二甲基-2，4-咪唑烷二酮；3-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-[4-(1，1，1-三氟甲氧基芐基)]-5-甲基-2，4-咪唑烷二酮；3-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-[4-(1，1，1-三氟甲氧基芐基)]-1，5-二甲基-2，4-咪唑烷二酮；3-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-(4-氰基芐基)-5-甲基-2，4-咪唑烷二酮；3-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-(4-氰基芐基)-1，5-二甲基-2，4-咪唑烷二酮；和這些化合物的藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明化合物對αLβ2介導(dǎo)細(xì)胞粘連具有有效的抑制活性，在口服給藥后還顯示優(yōu)異的生物利用度，這反映血漿蛋白結(jié)合率和溶解度的全面提高。本發(fā)明化合物因此對由αLβ2介導(dǎo)細(xì)胞粘連導(dǎo)致的不利條件顯示優(yōu)異的體內(nèi)改善。
本發(fā)明化合物在臨床上可以使用其游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式。藥學(xué)上可接受的鹽包括無機(jī)酸或有機(jī)酸的酸加成鹽(例如鹽酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、氫溴酸鹽、甲磺酸鹽、對-甲苯磺酸鹽、乙酸鹽)，和無機(jī)堿、有機(jī)堿或氨基酸的鹽(例如三乙胺鹽、賴氨酸鹽、堿金屬鹽、堿土金屬鹽等)。藥學(xué)上可接受的鹽還包括其分子內(nèi)鹽、或其溶劑化物或水合物。
本發(fā)明化合物可以配制成藥物組合物，包含治療學(xué)上有效量的如上所定義的化合物和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑例如可以是粘合劑(例如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨糖醇、黃蓍膠、聚乙烯吡咯烷酮)、賦形劑(例如乳糖、蔗糖、玉米淀粉、磷酸鉀、山梨糖醇、甘氨酸)、潤滑劑(例如硬脂酸鎂、滑石、聚乙二醇、二氧化硅)、崩解劑(例如馬鈴薯淀粉)、濕潤劑(例如月桂基硫酸鈉)等。
本發(fā)明的所需化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可以通過口服或腸胃外方式給藥，可以用作適合的藥物制劑。當(dāng)口服給藥時(shí)，這些藥物制劑可以是固體制劑的劑型，例如片劑、顆粒劑、膠囊劑和粉劑，或液體制劑的劑型，例如溶液、懸液和乳液。當(dāng)腸胃外給藥時(shí)，藥物制劑可以是栓劑、使用注射用蒸餾水、生理鹽水溶液、葡萄糖水溶液等的注射劑或靜脈內(nèi)滴劑的劑型，和通過常規(guī)過程吸入給藥。
本發(fā)明的所需化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的劑量因給藥方法、患者的年齡、性別、體重和狀況而異，不過一般來說，每日劑量優(yōu)選為約0.1至100mg/kg/天，特別優(yōu)選為1至100mg/kg/天。
本發(fā)明化合物在抑制αLβ2介導(dǎo)細(xì)胞粘連中具有優(yōu)異的活性，能夠用于治療或預(yù)防αLβ2粘連介導(dǎo)的哺乳動(dòng)物、例如人的疾患。
本發(fā)明化合物可以用于治療或預(yù)防大量炎性疾病，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、變態(tài)反應(yīng)、成人呼吸窘迫綜合征、AIDS、心血管疾病、血栓形成、有害的血小板凝聚、血栓溶解后再閉塞、再灌注損傷、皮膚炎性疾病(例如牛皮癬、濕疹、接觸性皮炎、特應(yīng)性皮炎)、骨質(zhì)疏松、骨關(guān)節(jié)炎、動(dòng)脈硬化(包括動(dòng)脈粥樣硬化)、瘤性疾病(包括瘤轉(zhuǎn)移或癌生長)、外傷、視網(wǎng)膜脫落、I型糖尿病、多發(fā)性硬化、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、眼科炎性疾患、炎性腸疾病(克羅恩氏病和潰瘍性結(jié)腸炎)、局限性腸炎、斯耶格倫氏綜合征和其他自體免疫疾病。
本發(fā)明化合物還可以用于移植術(shù)后排斥(即慢性排斥和急性排斥)，包括同種移植物排斥(宿主對移植物的疾病)和移植物對宿主的疾病。
本發(fā)明化合物可以優(yōu)選地用于治療或預(yù)防牛皮癬、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸疾病(克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、特應(yīng)性皮炎、斯耶格倫氏綜合征、移植術(shù)后排斥(同種移植物排斥和移植物對宿主的疾病)。
按照本發(fā)明，所需化合物(I)可以通過下列方法制備方法A所需的化合物(I)中，式(I-a)化合物 其中各符號(hào)定義同上，或其藥學(xué)上可接受的鹽可以這樣制備(1)環(huán)化式(II)化合物 其中OR6是羥基或被保護(hù)的羥基，其他符號(hào)定義同上，和(2)如果需要的話，通過常規(guī)方法轉(zhuǎn)化所得環(huán)化化合物為其藥學(xué)上可接受的鹽。
當(dāng)OR6是被保護(hù)的羥基時(shí)，保護(hù)基團(tuán)可以選自常規(guī)的羥基保護(hù)基團(tuán)(即C1-6烷基、芐基)。
環(huán)化作用可以通過常規(guī)縮合方法進(jìn)行。例如，化合物(II)的環(huán)化作用可以在酸或堿的存在下、在適合的溶劑中進(jìn)行。
酸可以選自有機(jī)酸(即對-甲苯磺酸和三氟乙酸)和無機(jī)酸(即鹽酸、硫酸和硝酸)。
堿可以選自常規(guī)的堿，例如堿金屬醇化物(例如NaOEt、NaOMe)。
溶劑可以選自任意一種不干擾環(huán)化反應(yīng)者，例如CH2Cl2、THF、DMF、醇(甲醇、乙醇等)或其混合物。反應(yīng)在0℃至溶劑沸點(diǎn)的溫度下進(jìn)行，優(yōu)選為50℃至100℃。
化合物(II)的環(huán)化作用還可以在縮合劑的存在下進(jìn)行，有或沒有堿均可，有或沒有適合的溶劑均可?？s合劑可以選自SOCl2和能夠用于肽合成的常規(guī)縮合劑，例如BOP-Cl、BOP試劑、DCC、EDC或CDI。
堿可以選自有機(jī)堿(例如DIEA、DMAP、DBU、Et3N)、堿金屬氫化物(例如NaH、LiH)、堿金屬碳酸鹽(例如Na2CO3、K2CO3)、堿金屬碳酸氫鹽(例如NaHCO3、KHCO3)、堿金屬氨基化物(例如NaNH2)、堿金屬醇化物(例如NaOMe、KOMe)、C1-6烷基堿金屬鹽(例如n-BuLi、t-BuLi)、堿金屬氫氧化物(例如NaOH、KOH)、堿土金屬氫氧化物(例如Ba(OH)2)等。
溶劑可以選自任意一種不干擾環(huán)化反應(yīng)者，例如CH2Cl2、THF、DMF或其混合物。反應(yīng)在0℃至室溫的溫度下進(jìn)行，優(yōu)選為室溫。
方法B在所需的化合物(I)中，式(I-b)化合物 其中R11是可以可選地被羧基或C1-6烷氧羰基取代的C1-6烷基，其他符號(hào)定義同上，或其藥學(xué)上可接受的鹽可以這樣制備(1)烷基化化合物(I-a)，(2)如果必要的話，水解所得化合物，和(3)如果進(jìn)一步需要的話，通過常規(guī)方法轉(zhuǎn)化所得化合物為藥學(xué)上可接受的鹽。
(1)烷基化反應(yīng)烷基化反應(yīng)可以這樣進(jìn)行，使化合物(I-a)與式(III)化合物反應(yīng)R11-X (III)其中X是離去基團(tuán)，R11定義同上。
離去基團(tuán)X可以選自常規(guī)的離去基團(tuán)，例如鹵原子(例如氯、溴、碘)和烷基磺酰氧基或芳基磺酰氧基(例如甲磺酰氧基、對-甲苯磺酰氧基)。
烷基化反應(yīng)可以在堿的存在下、在適合的溶劑中進(jìn)行。
堿可以選自常規(guī)的堿，例如堿金屬氫化物(即NaH、KH)、堿金屬醇化物(即NaOMe、NaOEt)和堿金屬氨基化物(即NaNH2、LDA、KHMDS)。
溶劑可以選自任意一種不干擾縮合反應(yīng)者，例如DME、THF、DMF、HMPA或其混合物。反應(yīng)在-78℃至室溫的溫度下進(jìn)行。
(2)水解反應(yīng)其中R11是被羧基取代的C1-6烷基的化合物(I-b)可以這樣制備，水解其中R11是被C1-6烷氧羰基取代的C1-6烷基的化合物(I-b)。水解作用可以通過常用方法進(jìn)行，例如在適合的溶劑中用堿處理化合物。堿可以選自常規(guī)的無機(jī)堿，例如LiOH、NaOH和KOH。溶劑可以選自任意一種不干擾水解反應(yīng)者，例如THF、MeOH、EtOH、H2O或其混合物。反應(yīng)可以在-78℃至50℃、優(yōu)選0℃至室溫的溫度下進(jìn)行。
方法C在所需的化合物(I)中，式(I-c)化合物 其中R21是C1-6烷氧基，其他符號(hào)定義同上，或其藥學(xué)上可接受的鹽可以這樣制備，烷基化式(I-d)化合物 其中各符號(hào)定義同上，如果需要的話，轉(zhuǎn)化為藥學(xué)上可接受的鹽。
烷基化反應(yīng)的方式可以與方法B(1)所述相似，使用適合的鹵代C1-6烷烴(例如甲基碘、芐基溴)，在堿的存在下(例如Et3N、DIEA、NaHCO3、KHCO3、Na2CO3、K2CO3、CsCO3)，在0℃至50℃的溫度下，在有機(jī)溶劑(例如CH2Cl2、THF、DMF、CH3CN、甲苯)中進(jìn)行。
其中R2a和/或R2b是羥基的化合物(I)可以通過其中R2a和/或R2b是甲氧基的化合物(I)的去甲基化作用加以制備。去甲基化反應(yīng)可以通過常規(guī)方法進(jìn)行，例如在-78℃至50℃的溫度下，在適合的溶劑中(例如AcOH、水)，用BBr3或HBr處理。
式(II)起始化合物可以通過下列流程制備流程1 (流程1中，各符號(hào)定義同上。)步驟1使化合物(VIII)與新戊醛反應(yīng)可以制備化合物(VII)。反應(yīng)可以在有或沒有酸或酸性鹽的存在下進(jìn)行，有或沒有適合的溶劑均可。酸可以選自常規(guī)的無機(jī)酸，例如HCl、H2SO4。酸性鹽可以選自無機(jī)強(qiáng)酸與無機(jī)弱堿的鹽，例如MgSO4。溶劑可以選自任意一種不干擾反應(yīng)者，例如甲苯、DME、DMF、THF、CH2Cl2或其混合物。反應(yīng)例如可以在0℃至室溫的溫度下進(jìn)行。
步驟2化合物(IV)可以這樣制備，1)使化合物(VII)與化合物(VI)反應(yīng)，和2)水解所得化合物。
化合物(VII)與化合物(VI)的反應(yīng)可以在堿的存在下進(jìn)行，有或沒有適合的溶劑均可。堿可以選自常規(guī)的堿，例如堿金屬醇化物(例如t-BuOK、MeONa、EtONa)和堿金屬氨基化物(例如LDA、NaNH2)。溶劑可以選自任意一種不干擾偶聯(lián)反應(yīng)者，例如甲苯、DME、DMF、THF、CH2Cl2或其混合物。反應(yīng)例如可以在-78℃至50℃、優(yōu)選-10℃至0℃的溫度下進(jìn)行。
水解作用可以在酸的存在下進(jìn)行，有或沒有適合的溶劑均可。酸可以選自常規(guī)的無機(jī)酸，例如HNO3、HCl和H2SO4。溶劑可以選自任意一種不干擾反應(yīng)者，例如甲苯、DME、DMF、THF、CH2Cl2或其混合物。反應(yīng)例如可以在0℃至室溫的溫度下進(jìn)行。
步驟3使化合物(IV)與化合物(V)反應(yīng)可以制備化合物(II)。
反應(yīng)可以在有或沒有堿的存在下進(jìn)行，有或沒有適合的溶劑均可。堿可以選自常規(guī)的無機(jī)堿，例如K2CO3、Na2CO3和NaHCO3，和常規(guī)的有機(jī)堿，例如吡啶、Et3N、iPr2EtN、苯胺和N，N-二甲基苯胺。溶劑可以選自任意一種不干擾偶聯(lián)反應(yīng)者，例如甲苯、DME、DMF、THF、CH2Cl2或其混合物。偶聯(lián)反應(yīng)例如可以在-78℃至50℃、優(yōu)選0℃至室溫的溫度下進(jìn)行。
在本說明書和權(quán)利要求書中，C1-6烷基表示具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基等，優(yōu)選具有1至4個(gè)碳原子者。C1-6烷氧基表示具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基等，優(yōu)選具有1至4個(gè)碳原子者。
縮寫AcOEt 乙酸乙酯(＝EtOAc)BSA 牛血清白蛋白DMF 甲基甲酰胺DCM 氯甲烷DIEA異丙基乙胺DMSO二甲基亞砜Et 乙基EtOH乙醇HBSSHank氏平衡鹽溶液HMPA六甲基磷酰胺HSA 人血清白蛋白KHMDS 六甲基二硅氮化鉀(＝雙(三甲代甲硅烷基)氨基化鉀)LDA 二異丙氨基化鋰Me 甲基MeOH甲醇n-Bu 正丁基Ph 苯基t-Bu 叔丁基THF 四氫呋喃Tf 三氟甲磺酰基TFA 三氟乙酸下列實(shí)施例例證但不限制本發(fā)明化合物。
實(shí)施例實(shí)施例13-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-(4-氰基芐基)-5-甲基-2，4-咪唑烷二酮 步驟-1將L-丙氨酸乙酯鹽酸鹽(15g)溶于H2O(60ml)。向攪拌著的溶液加入Et3N(10.9g)。將溶液在室溫下攪拌30分鐘，用乙酸乙酯萃取。合并有機(jī)層，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾，蒸發(fā)，得到9.5g L-丙氨酸乙酯。產(chǎn)物直接用于下一步。MS118(MH+)步驟-2將步驟-1的L-丙氨酸乙酯(9g)溶于150ml無水CH2Cl2。將溶液冷卻至0℃。向溶液加入MgSO4(10.17g)，然后加入新戊醛(6.95g)。使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?，攪拌過夜。過濾反應(yīng)混合物，蒸發(fā)濾液，得到11.2g N-亞新戊基-L-丙氨酸乙酯。產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可用于下一步。MS186(MH+)
步驟-3向步驟2所得化合物(4g)的無水甲苯(40ml)溶液加入4-氰基芐基溴(4.6g)。將所得混合物冷卻至-10℃。分批加入t-BuOK(2.9g)，保持溫度在0℃。將反應(yīng)混合物在該溫度下攪拌4小時(shí)。使混合物在EtOAc/H2O之間分配。合并有機(jī)層，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾，濃縮。向殘余物加入1MHCl(40ml)，將所得混合物攪拌過夜。加入EtOAc，將反應(yīng)混合物攪拌30分鐘。分離有機(jī)相，含水層用另外的EtOAc萃取。合并有機(jī)層，用H2O洗滌。合并含水溶液，用固體NaHCO3調(diào)節(jié)pH大約為8，混合物用EtOAc萃取。合并有機(jī)層，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾，濃縮，得到2-氨基-2-(4-氰基芐基)丙酸乙酯，直接用于下一步。MS233(MH+)步驟-4向保持在0℃的步驟-3所得化合物(1.35g)的無水CH2Cl2(10ml)溶液加入2，6-二氯-4-吡啶基異氰酸酯(1g)。使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?，攪拌過夜。使混合物在EtOAc與H2O之間分配。合并有機(jī)層，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾，濃縮，得到2-(4-氰基芐基)-5-(2，6-二氯-4-吡啶基)-2-甲基脲乙酸乙酯。產(chǎn)物直接用于下一步。MS421(MH+)步驟-5在0℃下，向步驟-4化合物(1g)的無水EtOH(10ml)溶液加入NaOEt(0.16g)。然后使黃色溶液溫?zé)嶂潦覝?，攪?小時(shí)。蒸發(fā)EtOH，使殘余物在EtOAc/H2O之間分配。合并有機(jī)層，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾，濃縮。產(chǎn)物經(jīng)過硅膠快速色譜純化，得到標(biāo)題化合物(850mg)。MS375(MH+)實(shí)施例23-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-(4-氰基芐基)-1，5-二甲基-2，4-咪唑烷二酮
向反應(yīng)燒瓶內(nèi)加入實(shí)施例1所得化合物(400mg)和t-BuOK(180mg)，然后用N2沖洗。將混合物冷卻至0℃，加入THF(10ml)。將反應(yīng)混合物在0℃下攪拌20分鐘，然后加入MeI(454mg)。將反應(yīng)混合物在0℃下攪拌3小時(shí)，最后在室溫下攪拌1小時(shí)?；旌衔镉肊tOAc/H2O萃取。合并有機(jī)層，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾，并蒸發(fā)。產(chǎn)物經(jīng)過制備型TLC純化，得到標(biāo)題化合物(310mg)。MS389(MH+)實(shí)施例33-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-(4-氰基芐基)-5-甲基-1-(5-乙氧羰基戊基)-2，4-咪唑烷二酮 將實(shí)施例1所得化合物(154mg)溶于2ml無水DMF。將溶液冷卻至0℃，加入NaH(25mg，60％油懸液)。將所得混合物在0℃下攪拌20分鐘。滴加6-溴己酸乙酯(140mg)，將所得混合物在室溫下攪拌過夜。反應(yīng)混合物用EtOAc/H2O萃取。合并有機(jī)層，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾，并蒸發(fā)。產(chǎn)物經(jīng)過制備型TLC純化，得到標(biāo)題化合物(180mg)。MS517(MH+)實(shí)施例4(R)-3-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-(4-氰基芐基)-5-甲基-2，4-咪唑烷二酮
步驟-1按照WO98/39303所述方法制備α-甲基-4-氰基苯基丙氨酸乙酯1。
步驟-2向上述所得化合物(770mmg)的DCM(5ml)溶液加入HCl(1MEt2O溶液，7ml)，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。然后在真空中濃縮反應(yīng)混合物，得到α-甲基-4-氰基苯基丙氨酸乙酯的HCl鹽(880mg)。
步驟-3向上述所得化合物的H2O溶液(30ml)加入KH2PO4(1.4g)的H2O(30ml)溶液。向其中加入脂肪酶L(Candida Lipolytica，Sigma Aldrich，1.4g)，用1N KOH調(diào)節(jié)懸液的pH至6.40。用HPLC監(jiān)測酯水解為酸的進(jìn)程(A＝0.1％TFA的H2O溶液，B＝0.1％TFA的MeCN溶液；15％B至55％B歷經(jīng)20分鐘)，酸先洗脫出來(t＝5.8分鐘)，然后是酯(t＝10分鐘)。進(jìn)一步加入1N KOH保持pH在6.40，直至HPLC指示酯∶酸之比等于1∶1。
31小時(shí)后，加入固體NaHCO3使pH為7.4，搖動(dòng)懸液與甲苯(100ml)，通過C鹽過濾。分離含水層，用DCM洗滌(2×200ml)，合并有機(jī)層，經(jīng)MgSO4干燥。過濾，濃縮濾液，得到(R)-α-甲基-4-氰基苯基丙氨酸乙酯(340mg)。
步驟3在N2和0℃下，向上述所得化合物(340mg)的DCM(10ml)溶液加入純的2，6-二氯-4-吡啶基異氰酸酯(305mg)。然后使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?，攪?小時(shí)，然后在真空中濃縮，得到(R)-2-(4-氰基芐基)-5-(2，6-二氯-4-吡啶基)-2-甲基脲乙酸乙酯(680mg)。
步驟-4用N2沖洗后，將上述所得化合物溶于無水EtOH(10ml)，加入NaOEt(60mg)。攪拌3小時(shí)后，加入水(10ml)和EtOAc(10ml)，搖動(dòng)混合物。然后分離含水相，用EtOAc洗滌(3×10ml)，合并有機(jī)相，經(jīng)MgSO4干燥，過濾，在真空中濃縮。經(jīng)過液相色譜純化(EtOAc/己烷1/1)，得到標(biāo)題化合物(410mg)。MS(m/z)＝375(M)實(shí)施例53-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-(4-氰基芐基)-5-甲基-1-(5-羧基戊基)-2，4-味唑烷二酮 將實(shí)施例4所得化合物(100mg)溶于THF/MeOH混合物(3ml/1ml)。加入LiOH的溶液(25mg的1ml H2O溶液)，將所得混合物在室溫下攪拌5小時(shí)。用1MHCl調(diào)節(jié)混合物的pH至3-4，混合物用EtOAc萃取。合并有機(jī)層，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾，并濃縮。產(chǎn)物經(jīng)過制備型TLC純化，得到標(biāo)題化合物(80mg)。MS489(MH+)實(shí)施例6(R)-3-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-(4-氰基芐基)-1，5-二甲基-2，4-咪唑烷二酮 將實(shí)施例4所得化合物(340mg)和KOtBu(132mg)稱入干燥燒瓶內(nèi)，用N2沖洗。將燒瓶置于冰浴中，加入無水THF(9ml)。攪拌15分鐘后，加入MeI(0.17ml)，使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?。攪?小時(shí)后，加入水(10ml)和EtOAc(10ml)，搖動(dòng)混合物。然后分離含水相，用EtOAc洗滌(3×10ml)，合并有機(jī)相，經(jīng)MgSO4干燥，過濾，在真空中濃縮，得到白色固體。經(jīng)過液相色譜純化(EtOAc/己烷1/1)，得到標(biāo)題化合物(260mg)。MS(m/z)＝389(M)通過手性HPLC(0.5mg/ml的MeOH溶液，3μl，Chiracel OD#ODOOCE-11030，250×4.6mm，等度梯度，己烷/IPA)測定對映異構(gòu)體過量(e.e.)為＞99％。
實(shí)施例7(R)-3-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-(4-溴芐基)-5-甲基-2，4-咪唑烷二酮使用按照WO98/39303所述方法制備的α-甲基-4-溴苯基丙氨酸乙酯，以類似于實(shí)施例4所述的方式制備標(biāo)題化合物。MS(m/z)430(MH)實(shí)施例8(R)-3-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-(4-溴芐基)-1，5-二甲基-2，4-咪唑烷二酮以類似于實(shí)施例6所述的方式制備標(biāo)題化合物。MS(m/z)443(MH)通過手性HPLC(0.5mg/ml的MeOH溶液，3μl，Chiracel OD#ODOOCE-11030，250×4.6mm，等度梯度，己烷/IPA)測定對映異構(gòu)體過量(e.e.)為＞99％。
實(shí)施例93-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-(4-羥基芐基)-5-甲基 步驟-1向化合物1(3g)的H2O(20ml)溶液加入Et3N(2.47g)，將所得混合物攪拌2小時(shí)。溶液用EtOAc萃取若干次。合并有機(jī)層，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾，蒸發(fā)至干。所得白色固體(化合物2)無需純化直接使用。
步驟-2在0℃下，向步驟-1所得化合物(1g)的含有DMF(5ml)的無水CH2Cl2(15ml)溶液加入3，5-二氯-4-吡啶基異氰酸酯(0.9g)的CH2Cl2(5ml)溶液。使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?，攪拌過夜。使混合物在EtOAc/H2O之間分配。合并有機(jī)層，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾，并濃縮，得到2-(4-羥基芐基)-5-(2，6-二氯-4-吡啶基)-2-甲基脲乙酸甲酯(化合物3)。產(chǎn)物直接用于下一步。MS398(MH+)步驟-3在0℃下，向步驟-2所得化合物(2.26g)的無水EtOH(15ml)溶液加入NaOEt(0.39g)。然后將黃色溶液在0℃下攪拌5小時(shí)，溫?zé)嶂潦覝?，攪?小時(shí)。蒸發(fā)EtOH，使殘余物在EtOAc/H2O之間分配。合并有機(jī)層，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾，并濃縮。產(chǎn)物經(jīng)過硅膠快速色譜純化(EtOAc/己烷1/1)，得到標(biāo)題化合物(1.4g)。MS366(MH+)實(shí)施例103-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-(4-甲氧基芐基)-1，5-二甲基-2，4-咪唑烷二酮 按照類似于實(shí)施例2的方法，經(jīng)由實(shí)施例9化合物的甲基化作用得到標(biāo)題化合物。MS394(MH+)實(shí)施例113-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-(4-羥基芐基)-1，5-二甲基-2，4-咪唑烷二酮 在0℃下，向?qū)嵤├?0化合物(0.15g)的CH2Cl2溶液滴加BBr3(1.14ml，1M的CH2Cl2溶液)。將所得混合物在0℃下攪拌30分鐘，然后在室溫下攪拌另外30分鐘。用水使反應(yīng)驟停，在EtOAc與水之間分配。含水溶液用EtOAc萃取，合并有機(jī)層，用水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾，并蒸發(fā)。殘余物經(jīng)由制備型TLC純化(EtOAc/己烷1/1)，得到0.125g標(biāo)題化合物。MS380(MH+)實(shí)施例12∶3-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-(4-異丙氧基芐基)-1，5-二甲基-2，4-咪唑烷二酮 向?qū)嵤├?1化合物(0.06g)的THF(3ml)溶液加入tBuOK(0.022g)，將溶液攪拌5分鐘。加入2-碘丙烷(0.054g)，使反應(yīng)混合物回流1.5小時(shí)。使混合物在EtOAc/水之間分配，將EtOAc層干燥(Na2SO4)，過濾，并蒸發(fā)。殘余物經(jīng)由制備型TLC純化(EtOAc/己烷1/1)，得到標(biāo)題化合物。MS422(MH+)以類似于實(shí)施例12的方式制備下列化合物。表1
實(shí)施例153-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-(4-乙氧基-3-氟芐基)-1，5-二甲基-2，4-咪唑烷二酮
向?qū)嵤├?4化合物(0.24g)的CH3CN(15ml)溶液加入3，5-二氯-1-氟吡啶鎓三氟甲磺酸鹽(0.38g)，使混合物回流30小時(shí)。濃縮混合物，經(jīng)過HPLC純化，得到所需化合物。MS m/z426(MH+)實(shí)施例163-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-[4-(1，1，1-三氟甲氧基芐基)]-5-甲基-2，4-咪唑烷二酮以類似于實(shí)施例1的方式制備標(biāo)題化合物。MS434(MH+)；mp.151.2℃實(shí)施例173-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-[4-(1，1，1-三氟甲氧基芐基)]-1，5-二甲基-2，4-咪唑烷二酮按照類似于實(shí)施例2的方法，經(jīng)由實(shí)施例16化合物的甲基化作用得到標(biāo)題化合物。MS448(MH+)；mp.113.7℃實(shí)施例183-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-(4-氟芐基)]-5-甲基-2，4-咪唑烷二酮以類似于實(shí)施例1的方式制備標(biāo)題化合物。MS368(MH+)；mp.221.1℃實(shí)施例193-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-(4-溴芐基)]-5-甲基-2，4-咪唑烷二酮以類似于實(shí)施例1的方式制備標(biāo)題化合物。MS429(MH+)實(shí)施例203-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-(4-溴芐基)]-1，5-二甲基-2，4-咪唑烷二酮按照類似于實(shí)施例2的方法，經(jīng)由實(shí)施例19化合物的甲基化作用得到標(biāo)題化合物。MS443(MH+)細(xì)胞粘連方案細(xì)胞粘連融合人ICAM-1的5個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域與人IgG的恒定區(qū)，構(gòu)建重組蛋白ICAM-1·Fc。ICAM-1Fc經(jīng)過A蛋白親和色譜純化，以等分試樣貯存在-20℃下。將蛋白質(zhì)用pH7.5的PBS稀釋，按100μl/孔轉(zhuǎn)移至Falcon Probind III平板，在4℃下培育過夜，制備固定化的ICAM-1·Fc。涂有BSA的小孔充當(dāng)非特異性背景粘連的量度。在37℃下，將洗滌后的平板用0.25％卵白蛋白的PBS溶液封阻1小時(shí)。將經(jīng)過HBSS洗滌的Jurkat細(xì)胞懸浮在TBSg粘連緩沖液(24mM Tris pH7.4，0.14M NaCl，2.7mM KCl，2mM葡萄糖，0.1％HSA)中，最終濃度為2.5×106/ml。將100μl細(xì)胞加入到封阻和洗滌后的涂有ICAM-1·Fc的平板，平板含有100μl平板緩沖液(TBSg，10mM MgCl2，2％DMSO)。在37℃下粘連1小時(shí)。利用EL404平板洗滌器(BioTekInstruments；Highland Park，VT)除去未粘連的細(xì)胞。使用酶底物對-硝基苯酚-N-乙?；?b-D-氨基葡糖苷、即pNAG測量內(nèi)源性N-乙?；?氨基己糖苷酶的酶活性，量化粘連細(xì)胞的數(shù)量。利用垂直路徑分光光度計(jì)(VMAX Kinetic Microplate Reader，Molecular Devices，Menlo Park，CA)量化細(xì)胞的附著，讀取405nm下的光密度，測量所釋放的對-硝基苯酚的量。關(guān)于競爭研究，將化合物的100％DMSO儲(chǔ)備溶液按2倍于所需測試濃度稀釋在平板緩沖液中，然后轉(zhuǎn)移至涂有ICAM-1·Fc的平板，進(jìn)行系列稀釋。
權(quán)利要求
1.式(I)化合物 或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R1選自1)氫原子，或2)可以可選地被羧基或C1-6烷氧羰基取代的C1-6烷基；R2a和R2b獨(dú)立地是氫原子、鹵原子、羥基、氰基、可以可選地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷基、可以可選地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷硫基、可以可選地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷基亞磺?；?、可以可選地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷基磺酰基、或可以可選地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷氧基；R3是C1-6烷基；R4和R5獨(dú)立地是鹵原子。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1是氫原子或可以可選地被羧基或C1-6烷氧羰基取代的C1-6烷基，R2a和R2b獨(dú)立地是氫原子、鹵原子、羥基、氰基或可以可選地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷氧基，R3是C1-6烷基，R4和R5獨(dú)立地是鹵原子。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其中R1是氫原子或C1-6烷基，R2a和R2b之一是氫原子，另一個(gè)是鹵原子、氰基或可以可選地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷氧基，R3是C1-6烷基，R4和R5獨(dú)立地是鹵原子。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的化合物，其中R1是氫原子或甲基，R2a和R2b之一是氫原子，另一個(gè)是溴原子、氰基、C1-6烷氧基或三氟甲氧基，R3是甲基，R4和R5是氯原子。
5.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其中R1是被C1-6烷氧羰基或羧基取代的C1-6烷基，R2a和R2b之一是氫原子，另一個(gè)是鹵原子、氰基或可以可選地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷氧基，R3是C1-6烷基，R4和R5獨(dú)立地是鹵原子。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的化合物，其中R3是甲基，R4和R5是氯原子。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中該化合物選自3-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-(4-溴芐基)-1，5-二甲基-2，4-咪唑烷二酮；3-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-(4-丙氧基芐基)-1，5-二甲基-2，4-咪唑烷二酮；3-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-(4-乙氧基芐基)-1，5-二甲基-2，4-咪唑烷二酮；3-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-[4-(1，1，1-三氟甲氧基芐基)]-5-甲基-2，4-咪唑烷二酮；3-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-[4-(1，1，1-三氟甲氧基芐基)]-1，5-二甲基-2，4-咪唑烷二酮；3-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-(4-氰基芐基)-5-甲基-2，4-咪唑烷二酮；3-(2，6-二氯-4-吡啶基)-5-(4-氰基芐基)-1，5-二甲基-2，4-咪唑烷二酮；和這些化合物的藥學(xué)上可接受的鹽。
7.用于制備式(I-a)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的方法 其中R2a和R2b獨(dú)立地是氫原子、鹵原子、羥基、氰基、可以可選地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷基、可以可選地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷硫基、可以可選地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷基亞磺?；?、可以可選地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷基磺?；?、或可以可選地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷氧基；R3是C1-6烷基；R4和R5獨(dú)立地是鹵原子；該方法包含環(huán)化式(II)化合物 其中OR6是羥基或被保護(hù)的羥基，其他符號(hào)定義同上，和如果需要的話，轉(zhuǎn)化為藥學(xué)上可接受的鹽。
8.用于制備式(I-b)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的方法 其中R11是可以可選地被羧基或C1-6烷氧羰基取代的C1-6烷基；R2a和R2b獨(dú)立地是氫原子、鹵原子、羥基、氰基、可以可選地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷基、可以可選地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷硫基、可以可選地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷基亞磺?；?、可以可選地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷基磺?；⒒蚩梢钥蛇x地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷氧基；R3是C1-6烷基；R4和R5獨(dú)立地是鹵原子；該方法包含(1)烷基化式(I-a)化合物 其中各符號(hào)定義同上，(2)如果必要的話，水解所得化合物，和(3)如果進(jìn)一步需要的話，轉(zhuǎn)化為藥學(xué)上可接受的鹽。
8.用于制備式(I-b)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的方法 其中R11是可以可選地被羧基或C1-6烷氧羰基取代的C1-6烷基；R21是可以可選地被1至3個(gè)鹵原子取代的C1-6烷氧基；R3是C1-6烷基；R4和R5獨(dú)立地是鹵原子；該方法包含烷基化式(I-d)化合物 其中R1是氫原子或可以可選地被羧基或C1-6烷氧羰基取代的C1-6烷基，其他符號(hào)定義同上，和如果必要的話，轉(zhuǎn)化為藥學(xué)上可接受的鹽。
9.藥物組合物，包含治療有效量的如權(quán)利要求1-6任意一項(xiàng)所述的化合物以及治療學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
10.用于治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物αLβ2粘連介導(dǎo)疾患的方法，包含給以治療有效量的如權(quán)利要求1-6任意一項(xiàng)所述的化合物。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，所述疾患選自類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、變態(tài)反應(yīng)、成人呼吸窘迫綜合征、AIDS、心血管疾病、血栓形成、有害的血小板凝聚、血栓溶解后再閉塞、再灌注損傷、皮膚炎性疾病、骨質(zhì)疏松、骨關(guān)節(jié)炎、動(dòng)脈硬化、瘤性疾病、外傷、視網(wǎng)膜脫落、I型糖尿病、多發(fā)性硬化、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、眼科炎性疾患、炎性腸疾病、局限性腸炎、斯耶格倫氏綜合征和移植術(shù)后排斥。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中所述疾病選自牛皮癬、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸疾病(克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、特應(yīng)性皮炎、斯耶格倫氏綜合征、移植術(shù)后排斥(同種移植物排斥和移植物對宿主的疾病)。
全文摘要
本發(fā)明涉及根據(jù)式(I)的小分子，它們是α
文檔編號(hào)A61P1/00GK1432007SQ01810463
公開日2003年7月23日 申請日期2001年4月17日 優(yōu)先權(quán)日2000年5月31日
發(fā)明者I·西卡, 謝云峰, N·史密斯, P·S·福斯 申請人:田邊制藥株式會(huì)社