專利名稱:鷹嘴豆短肽混合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種鷹嘴豆短肽制備方法及其產(chǎn)品，具體地涉及一種纖維素酶、蛋白酶以及風味酶組合水解鷹嘴豆粉制備鷹嘴豆短肽混合物的方法及其產(chǎn)品。
背景技術(shù)：
短肽是介于氨基酸和蛋白之間的由3-9個氨基酸殘基組成的短鏈肽，也叫低聚肽、寡肽或活性肽。近幾年的科學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，人體吸收蛋白質(zhì)的主要形式不是以氨基酸，而是以短肽的形式吸收的，這是人體吸收蛋白質(zhì)機制研究的重大突破。短肽在人體內(nèi)的作用具有以下特點:1、不需消化，直接吸收:通常，短肽是人體自身合成的，是人體將所攝入的營養(yǎng)進行酶促水解而得到的。如果在體外已經(jīng)合成好了，則進入人體后不需進行二次降解，能夠直接吸收；并且吸收迅速，口服劑也能夠如同針劑一般，快速進入人體循環(huán)，其速度如同火箭一樣，有的科學(xué)家把它稱為“生物導(dǎo)彈”，快速地穿過人體的口腔、胃，直接進入小腸，被小腸吸收，最終進入人體血液循環(huán)系統(tǒng)、器官及細胞組織，迅速發(fā)揮其生理作用和生物學(xué)功能；2、以完整的形式被人體吸收、利用:短肽自身有一層保護膜，人服用時，不會受到人體中的促酶、胰酶、淀粉酶、消化酶、胃蛋白酶及消化系統(tǒng)中的酸堿物質(zhì)的損害或發(fā)生二次水解；3、吸收效率高:短肽進入人體后可百分之百被人體吸收；并且吸收后，不會有任何殘渣，能夠全部被人體吸收和利用；4、優(yōu)先被人體吸收；短肽自身具有極強的活性和能量，它的主動吸收、被動吸收，就是自身的活性和能量在起作用，因此，它在被人體吸收時，不是人體要耗費自身的能量去吸收它，而是多肽以自身的能量讓人體吸收。因此，在人體平常所攝入的營養(yǎng)物質(zhì)中，短肽優(yōu)先吸收；5、保護氨基酸；短肽在被人體吸收時，對氨基酸有保護作用，可保護氨基酸不受破壞，因此，肽與氨基酸的混合物是人體吸收蛋白質(zhì)的最佳吸收機制；6、在人體中表現(xiàn)出載體的作用；短肽在人體中可將人平常所攝入的營養(yǎng)物質(zhì)，特別是鈣等對人體有益的微量元素，吸附、粘貼、裝載在短肽上，然后運載輸送到人體各個細胞；7、信使作用；短肽被人體吸收后，在人體中可作為神經(jīng)遞質(zhì)傳遞信息，讓人體各系統(tǒng)、器官、組織發(fā)揮各自和整體作用。
短肽可分為植物源短肽和動物源短肽兩大類，其中大豆類短肽是比較常見研究較多的植物源短肽。近年來的研究表明，由大豆類蛋白降解得到的短肽，其易消化、易吸收且避免了大豆蛋白對人體的過敏性反應(yīng)并且具有生物活性，可增強體能，消除疲勞，可用于降膽固醇、降血壓、糖尿病輔助治療及解酒和排毒，延緩衰老。目前大豆類短肽已經(jīng)被用于多種營養(yǎng)品或藥物當中。
鷹嘴豆屬于高營養(yǎng)豆類植物，富含多種植物蛋白和多種氨基酸、維生素、粗纖維及鈣、鎂、鐵等成份。此外籽粒中還含腺嘌呤、膽堿、肌醇、淀粉、蔗糖、葡萄糖等。其中純蛋白質(zhì)含量高達28%以上，脂肪5%，碳水化合物61%，纖維4鷹嘴豆短肽也是短肽中生物活性較為突出的一類短肽，除了其較高的營養(yǎng)價值之外，目前也已經(jīng)發(fā)現(xiàn)其在抗癌和增強免疫力等方面的功效，而其在抗氧化方面更是有著非常好的表現(xiàn)。
目前有關(guān)鷹嘴豆多肽類制備方法的研究多以提取蛋白然后對蛋白進行酶解為主，例如，專利公開號CN102028036A公開了 “一種以鷹嘴豆制備多肽飲料的方法”，主要是用木瓜蛋白酶酶解鷹嘴豆蛋白來生產(chǎn)鷹嘴豆多肽飲料的方法；專利公開號CN101962399A公開了“一種從鷹嘴豆豆瓣中提取天然抗腫瘤活性蛋白和多肽的方法”，主要是通過磷酸鹽緩沖液提取、硫酸銨沉淀、除鹽和離心等步驟來提取得到蛋白和多肽的方法，它們具有抑制結(jié)腸癌細胞的活性；專利公開號CN102391361A公開了“一種具有抗氧化作用的鷹嘴豆肽及分離純化方法及用途”，主要是用堿性蛋白酶和復(fù)合風味酶對脫脂鷹嘴豆粉進行酶解，得到的產(chǎn)物通過凝膠柱分離而得到具有抗氧化活性的短肽的方法。但是，這些原料利用率低，工藝復(fù)雜，難以應(yīng)用于大規(guī)模生產(chǎn)。
因此，本領(lǐng)域中需要于能夠提高原料的利用率、簡化生產(chǎn)步驟，并適合大規(guī)模生產(chǎn)的鷹嘴豆短肽制備方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種新的、簡單高效的生產(chǎn)鷹嘴豆短肽混合物的方法。
在本發(fā)明的第一方面，提供了一種制備鷹嘴豆短肽混合物的方法，其特征在于，所述方法包括將鷹嘴豆粉依次用纖維素酶、堿性蛋白酶和風味酶或者堿性蛋白酶、纖維素酶和風味酶進行酶解，
其中，纖維素酶優(yōu)選是內(nèi)切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶以及β-葡聚糖苷酶的混合物。
堿性蛋白酶優(yōu)選是枯草桿菌蛋白酶。
風味酶優(yōu)選是復(fù)合風味蛋白酶。
本發(fā)明的制備鷹嘴豆短肽混合物的方法，所述方法可以包括:
(a)將鷹嘴豆制成豆粉，并與水混合制成懸浮液；
(b)向所述懸浮液中加入纖維素酶和堿性蛋白酶中的一種進行酶解，獲得酶解液；
(C)向步驟(b)中獲得的酶解液中加入纖維素酶和堿性蛋白酶中的另一種進行酶解；
(d)向步驟(C)中獲得的酶解液中加入風味酶進行酶解，獲得鷹嘴豆短肽溶液；和
(e)任選的，將步驟(d)獲得酶解液離心，獲得上清液，并將上清液冷凍干燥，獲得鷹嘴豆短肽固體；
其中，若以不同形式的鷹嘴豆，例如其豆粉溶液為原料時，步驟(a)也可省略。
本發(fā)明的制備鷹嘴豆短肽混合物的方法中，所述豆粉與水可按照1:6 12(w/v)、優(yōu)選1:8 10 (w/v)、更優(yōu)選1:9 (w/v)的比例混合。
本發(fā)明的制備鷹嘴豆短肽混合物的方法中，進行纖維素酶酶解時，所述纖維素酶與所述懸浮液可按照纖維素酶:懸浮液=2%_5% (v/w)、優(yōu)選3%-4% (v/w)、更優(yōu)選3% (v/w)的比例混合；酶解溫度可以為40-60°C、優(yōu)選為45-55°C、更優(yōu)選為50°C ;酶解pH可以為5 ；酶解時間可以為30-60分鐘、優(yōu)選為40-50分鐘、更優(yōu)選50分鐘。[0022]本發(fā)明的制備鷹嘴豆短肽混合物的方法中，進行堿性蛋白酶酶解時，所述堿性蛋白酶與所述向步驟(b)中獲得的酶解液可以按照堿性蛋白酶:酶解液=2%_5% (v/w)、優(yōu)選3%-4% (v/w)、更優(yōu)選3% (v/w)的比例混合；酶解溫度可以為；酶解pH可以為8.0 9.0、優(yōu)選為8.2-8.8、更優(yōu)選為8.4-8.6 ;酶解時間可以為I小時。
本發(fā)明的制備鷹嘴豆短肽混合物的方法中，進行風味酶酶解時，所述風味酶與所述向步驟(c)中獲得的酶解液可以按照風味酶:酶解液=2%-5% (v/w)、優(yōu)選3%-4% (v/w)、更優(yōu)選3%(v/w)的比例混合；酶解pH可以為8.0 9.0、優(yōu)選為8.2-8.8、更優(yōu)選為8.4-8.6 ；酶解時間可以為2小時。
在第二方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物、保健品、食品添加劑、化妝品或飼料的制備方法。其包括采用第一方面所述的方法制備鷹嘴豆短肽混合物的步驟。
在第三方面，本發(fā)明提供了根據(jù)第一方面所述的方法所生產(chǎn)的鷹嘴豆短肽混合物。
在第四方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物、保健品、食品添加劑、化妝品或飼料，其包含根據(jù)第三方面所述的鷹嘴豆短肽混合物，可以以片劑的形式，也可用膠囊，口服液，沖劑的形式，每人每天可服用20g本發(fā)明的鷹嘴豆短肽混合物。
在本發(fā)明中，風味酶是指一種用于水解蛋白質(zhì)的蛋白酶/肽酶復(fù)合體，通常由米曲霉發(fā)酵制備，可通過商業(yè)途經(jīng)購得。
本發(fā)明的有益效果:
目前還沒有用纖維素酶、堿性蛋白酶和風味酶先后作用于鷹嘴豆粉來制備鷹嘴豆短肽的相關(guān)報道。本發(fā)明利用纖維素酶先將豆粉細胞外的纖維素解，加入堿性蛋白酶和風味酶，水解得到短肽。這種方法比之前文獻報道的用鷹嘴豆蛋白粉來進行酶解，在生產(chǎn)上簡化了一大步，所加入的纖維素酶也大大提高了產(chǎn)品的產(chǎn)率。生產(chǎn)方法簡便易行，重現(xiàn)性好，樣品回收率高。


圖1是用凝膠色譜柱分離實施例1、2、3鷹嘴豆酶解混合物的結(jié)果。
具體實施方式
本發(fā)明的實施例是為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠更好地理解本發(fā)明，并不能對本發(fā)明作任何限制。
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明。
實施例1
將鷹嘴豆浸泡后脫皮，50°C烘干，用粉碎機打成豆粉。將豆粉和水按1:10 (w/v)比例攪拌均勻，用0.5mol/LNa0H調(diào)至pH8.0，按堿性蛋白酶Alcalase與鷹嘴豆溶液的比例為3% (v/w)，將Alcalase酶加入鷹嘴豆水溶液中，期間用堿液維持為pH8.0,反應(yīng)Ih后，再用0.05mol/L的檸檬酸鹽緩沖液調(diào)至pH5.0，反應(yīng)溫度為50°C的條件下，按纖維素酶與鷹嘴豆溶液的比例3% (v/w)加入纖維素酶，水解40min ;再用0.5mol/L的HCl調(diào)pH7.0，按風味酶與鷹嘴豆溶液的比例3% (v/w)加入風味酶，50°C反應(yīng)2h后，3000r/min離心15min，上清液冷凍干燥后，得到鷹嘴豆短肽混合物。產(chǎn)率為47%。[0035]實施例2
將鷹嘴豆浸泡后脫皮，50°C烘干，用粉碎機打成豆粉。將豆粉和水按l:10(w/v)比例攪拌均勻，用0.05mol/L的檸檬酸鹽緩沖液調(diào)至pH5.0，反應(yīng)溫度為40°C的條件下，按纖維素酶與鷹嘴豆溶液的比例為2% (v/w)加入纖維素酶，水解30min ;再用0.5mol/LNa0H調(diào)pH至8.0,按堿性蛋白酶Alcalase與鷹嘴豆溶液的比例為2% (v/w),將Alcalase酶加入鷹嘴豆水溶液中，期間用堿液維持為PH8.0，反應(yīng)Ih后，再用0.5mol/L的HCl調(diào)pH7.0,按風味酶與鷹嘴豆溶液的比例為2% (v/w)加入風味酶，50°C反應(yīng)2h后，3000r/min離心15min，上清液冷凍干燥后，得到鷹嘴豆短肽混合物。產(chǎn)率為50%。
實施例3
將鷹嘴豆浸泡后脫皮，50°C烘干，用粉碎機打成豆粉。將豆粉和水按1:10 (w/v)比例攪拌均勻，用0.05mol/L的檸檬酸鹽緩沖液調(diào)至pH5.0，反應(yīng)溫度為60°C的條件下，按纖維素酶與鷹嘴豆溶液的比例為5% (v/w)加入纖維素酶，水解50min ;再用0.5mol/LNa0H調(diào)pH至8.0,按堿性蛋白酶Alcalase與鷹嘴豆溶液的比4% (v/w),將Alcalase酶加入鷹嘴豆水溶液中，期間用堿液維持為PH8.0,反應(yīng)Ih后，再用0.5mol/L的HCl調(diào)pH7.0,按風味酶與鷹嘴豆溶液的比例5% (v/w)加入風味酶，50°C反應(yīng)2h后，3000r/min離心15min，上清液冷凍干燥后，得到鷹嘴豆短肽混合物。產(chǎn)率為52%。
申請人:聲明，本發(fā)明通過上述實施例來說明本發(fā)明的詳細特征以及方法，但本發(fā)明并不局限于上述詳細特征以及方法，即不意味著本發(fā)明必須依賴上述詳細特征以及方法才能實施。所屬技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員應(yīng)該明了，對本發(fā)明的任何改進，對本發(fā)明所選用材料和步驟的等效替換以及輔助材料和步驟的增加、具體方式的選擇等，均落在本發(fā)明的保護范圍和公開范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種制備鷹嘴豆短肽混合物的方法，其特征在于，所述方法包括將鷹嘴豆粉依次用纖維素酶、堿性蛋白酶和風味酶或者堿性蛋白酶、纖維素酶和風味酶進行酶解； 其中，纖維素酶優(yōu)選是內(nèi)切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶以及β-葡聚糖苷酶的混合物； 堿性蛋白酶優(yōu)選是枯草桿菌蛋白酶； 風味酶優(yōu)選是復(fù)合風味蛋白酶。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的方法，其特征在于，所述方法包括: Ca)將鷹嘴豆制成豆粉，并與水混合制成懸浮液； (b)向所述懸浮液中加入纖維素酶和堿性蛋白酶中的一種進行酶解，獲得酶解液； (c)向步驟(b)中獲得的酶解液中加入纖維素酶和堿性蛋白酶中的另一種進行酶解； Cd)向步驟(c)中獲得的酶解液中加入風味酶進行酶解，獲得鷹嘴豆短肽溶液；和 (e)任選的，將步驟(d)獲得酶解液離心，獲得上清液，并將上清液冷凍干燥，獲得鷹嘴豆短肽固體。
3.如權(quán)利要求
1或2所述的方法，其特征在于，所述豆粉與水按照1:6 12(w/v)，優(yōu)選1:8 10 (w/v),更優(yōu)選1:9 (w/v)的比例混合。
4.如權(quán)利要求
1至3中任一項所述的方法，其特征在于，進行纖維素酶酶解時，所述纖維素酶與所述懸浮液按照纖維素酶:懸浮液=2%-5% (v/w)，優(yōu)選3%-4% (v/w)、更優(yōu)選3%(v/w)的比例混合；酶解溫度為40-60°C、優(yōu)選為45-55°C、更優(yōu)選為50°C ;酶解pH為4_7 ；酶解時間為30-60分鐘，優(yōu)選為40-50分鐘，更優(yōu)選50分鐘。
5.如權(quán)利要求
1至4中任一項所述的方法，其特征在于，進行堿性蛋白酶酶解時，所述堿性蛋白酶與所述向步驟(b)中獲得的酶解液按照堿性蛋白酶:酶解液=2%-5% (v/w)、優(yōu)選3%-4% (v/w)、更優(yōu)選3% (v/w)的比例混合；酶解溫度為40-60°C、優(yōu)選為45_55°C、更優(yōu)選為50°C ;酶解pH為8.0 9.0、優(yōu)選為8.2-8.8、更優(yōu)選為8.4-8.6 ;酶解時間1_2小時、優(yōu)選1.5小時。
6.如權(quán)利要求
1至5中任一項所述的方法，其特征在于，進行風味酶酶解時，所述風味酶與所述向步驟(c)中獲得的酶解液按照風味酶:酶解液=2%-5% (v/w)、優(yōu)選3%-4% (v/w),更優(yōu)選3% (v/w)的比例混合；酶解溫度為50°C;酶解pH為7.0-7.5、優(yōu)選7.1-7.4、更優(yōu)選7.2-7.3 ;酶解時間2小時。
7.根據(jù)權(quán)利要求
1至6中任一項所述的方法所生產(chǎn)的鷹嘴豆短肽混合物。
8.—種藥物組合物、保健品、食品添加劑、化妝品或飼料，其特征在于包含根據(jù)權(quán)利要求
7所述的鷹嘴豆短肽混合物。
9.一種藥物組合物、保健品、食品添加劑、化妝品或飼料的制備方法，其包括利用權(quán)利要求
I至6中任一項所述的方法制備鷹嘴豆短肽混合物的步驟。
專利摘要
本發(fā)明公開了一種鷹嘴豆短肽混合物的生產(chǎn)方法，所述方法利用纖維素酶將豆粉細胞外的纖維素酶解，加入堿性蛋白酶和風味酶，水解得到短肽。這種方法大大提高了產(chǎn)品的產(chǎn)率，生產(chǎn)方法簡便易行，重現(xiàn)性好，樣品回收率高，適合大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)。
文檔編號A23J1/14GKCN103168913SQ201310125422
公開日2013年6月26日 申請日期2013年4月11日
發(fā)明者楊良嶸, 王麗, 邢慧芳, 劉會洲 申請人:中國科學(xué)院過程工程研究所導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan