專利名稱：一種短肽及含有其的免疫抑制劑和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及一種短肽及含有其的免疫抑制劑和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
抗體產(chǎn)生的自身免疫性疾病是ー類由于自身抗體產(chǎn)生而導(dǎo)致組織、細(xì)胞損傷的自身免疫性疾病。其包含多種疾病，如較為常見的有系統(tǒng)性紅斑狼瘡，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，多發(fā)性硬化，抗中性粒細(xì)胞抗體(Anti-Neutrophil Cytoplasmic Antibody, ANCA)相關(guān)性小血管炎。這些疾病都是ー類慢性進(jìn)展，預(yù)后較差的疾病。近年來，對(duì)于抗體產(chǎn)生的自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制還沒有完全清楚。但是ー些重要的受體及細(xì)胞通路在抗體產(chǎn)生的自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵作用。如Fe Y受體(Fe Y receptor,Fe Y R)是介導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫的橋梁，即其介導(dǎo)了自身抗體導(dǎo)致的免疫細(xì)胞活化和組織、細(xì)胞的免疫損傷，導(dǎo)致疾病的急性炎癥反應(yīng)及慢性進(jìn)展?？贵w產(chǎn)生的自身免疫性疾病的治療，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、ANCA相關(guān)性血管炎等，是近代醫(yī)學(xué)的治療難點(diǎn)，一旦診斷，往往預(yù)后較差。隨著近年來糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑在抗體產(chǎn)生的自身免疫性疾病治療中的廣泛及正規(guī)應(yīng)用，該類疾病的預(yù)后獲得了明顯改善，尤其是患者的5年生存率，獲得了顯著提高。但是隨著治療及研究的深入，糖皮質(zhì)激素+免疫抑制劑的治療方案的缺陷日益顯露。其副作用大，如糖皮質(zhì)激素可以導(dǎo)致物質(zhì)代謝和水鹽代謝紊亂，誘發(fā)和加重感染(這是導(dǎo)致患者死亡的重要原因)，引起各個(gè)系統(tǒng)的并發(fā)癥，誘發(fā)精神異常，導(dǎo)致白內(nèi)障青光眼等，而免疫抑制的副作用更不低于糖皮質(zhì)激素，尤其是在導(dǎo)致惡性腫瘤、造血系統(tǒng)功能異常、性腺抑制等。這些都大大的阻礙了糖皮質(zhì)激素+免疫抑制劑在治療抗體產(chǎn)生的自身免疫性疾病上的應(yīng)用。目前，如何降低糖皮質(zhì)激素和免疫抑制劑在治療抗體產(chǎn)生的自身免疫性疾病中產(chǎn)生的副作用，是臨床醫(yī)生最為關(guān)注的問題。通過大量的臨床試驗(yàn)，規(guī)范、合理應(yīng)用糖皮質(zhì)激素和免疫抑制劑在一定程度上降低了其副作用，但是不能根本解決這個(gè)問題。因此，越來越多的研究者開始關(guān)注特異性更強(qiáng)的生物型免疫抑制藥物，如利妥昔單抗，阿巴西普等生物型制藥，都是特異性非常強(qiáng)的免疫抑制劑。這些藥物逐步在自身免疫性疾病的治療中獲得應(yīng)用，而且表現(xiàn)出優(yōu)秀的低毒性反應(yīng)，高敏感性的特點(diǎn)。但是由于這些藥物的專利大多由國(guó)外掌握，且治療費(fèi)用昂貴，限制了這些藥物在我國(guó)的廣泛的應(yīng)用。因此，開發(fā)新的治療抗體產(chǎn)生的自身免疫性疾病的藥物成為ー個(gè)急需解決的問題。由抗體產(chǎn)生的自身免疫性疾病,如系統(tǒng)性紅斑狼瘡,過敏性紫癜,抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體相關(guān)性血管炎等自身免疫性疾病均存在大量自身抗體。其血清中抗體的滴度和疾病的嚴(yán)重性相關(guān)，在疾病好轉(zhuǎn)時(shí)抗體滴度下降，而復(fù)發(fā)時(shí)抗體滴度上升。Fe Y R是幾乎所有免疫細(xì)胞膜表面均表達(dá)的免疫球蛋白受體，參與一系列的生理和病理的免疫反應(yīng)，在免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)中也起著關(guān)鍵作用。TG19320 (—種能夠通過結(jié)合IgG Fe段而拮抗Fe YR和IgG之間的相互作用的多肽)能夠拮抗Fe Y R和IgG之間的相互作用，從而保護(hù)系統(tǒng)性紅斑狼瘡小鼠的組織損傷，降低其死亡率(Nat Biotechnol, 2000, 18(7) :735-739)。TG19320也能夠干預(yù)抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體對(duì)正常中性粒細(xì)胞的作用，降低抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞凋亡和活化(中華腎臟病雜志，2006，22(8) :483-487，中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2007, 11 (5) : 267-270)。但是Fe Y R也擔(dān)任著機(jī)體抵抗病原微生物入侵，保持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的作用，完全阻斷Fe YR的作用可能會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重后果。因而可以通過阻斷部分Fe YR與抗體的結(jié)合，如特異性的阻斷Fe Y RIIA與IgG的作用，來治療自身免疫性疾病。Fe Y RIIA(即Fe Y IIA 受體)是Fe YR中的ー個(gè)亞型，是介導(dǎo)抗體產(chǎn)生的自身免疫性疾病的重要受體，在疾病發(fā)生發(fā)展中起到重要作用。因此拮抗Fe Y RIIA和IgG之間的相互作用已成為治療抗體產(chǎn)生的自身免疫性疾病的重要靶點(diǎn)之一，拮抗Fe Y RIIA和IgG的結(jié)合能夠治療或預(yù)防自身免疫性疾病。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題就是針對(duì)現(xiàn)有的治療抗體產(chǎn)生的自身免疫性疾病的藥物中存在不易生產(chǎn)，生產(chǎn)成本高，價(jià)格昂貴的不足，提供ー種新的治療自身免疫性疾病的藥物，該藥物能夠特異性拮抗Fe Y RIIA和IgG相互作用，從而預(yù)防或治療抗體產(chǎn)生的自身免疫性疾病。本發(fā)明人經(jīng)過研究后發(fā)現(xiàn)，通過特異性拮抗免疫細(xì)胞膜的免疫球蛋白受體Fe
YRIIA而不影響其他受體的功能，是治療抗體相關(guān)的自身免疫性疾病的重要靶點(diǎn)。因此，本發(fā)明人以Fe Y RIIA蛋白的胞外段為靶標(biāo)，設(shè)計(jì)并合成的一種短肽，發(fā)現(xiàn)該短肽可以特異性拮抗IgG和Fe YRIIA的相互作用，從而完成了本發(fā)明。本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案之一是一種短肽，其是6肽，其氨基酸序列是選自Thr (蘇氨酸)，Pro (脯氨酸)，Ala (丙氨酸)，Ile (異亮氨酸)，Phe (苯丙氨酸)，His (組氨酸)，Trp (色氨酸)，Tyr (酪氨酸)或Glu (谷氨酸)中的任意6種氨基酸殘基的任意順序的組合。根據(jù)本發(fā)明，較佳的，所述的短肽的氨基酸序列為選自以下氨基酸序列中的一種J-Pro-Ala-Pro-I le-R，其中J代表Thr、His、Trp或Glu氨基酸殘基，R代表Phe或Tyr氨基酸殘基；較佳地，所述的氨基酸序列為選自以下氨基酸序列中的ー種Thr-Pro-Ala-Pro-IIe-Phe， His-Pro-Ala-Pro-IIe-Phe, Trp-Pro-Ala-Pro-IIe-Phe,Trp-Pro-Ala-Pro-Ile-Tyr 和 Glu-Pro-Ala-Pro-Ile-Phe。根據(jù)本發(fā)明，較佳的，所述的短肽的氨基酸序列較佳的為選自以下氨基酸序列中的一種=Pro-Ile-Phe-Ala-Pro-Thr, Phe-Ile-Pro-Pro-Thr-Ala,Pro-Phe-Ile-Ala-Thr-Pro 和 Pro-Pro-Phe-Thr-Ala-IIe。本發(fā)明短肽可采用現(xiàn)有技術(shù)中的公知方法獲得。既可以用多肽自動(dòng)合成儀進(jìn)行化學(xué)合成，又可以將短肽序列推導(dǎo)成核苷酸序列，然后克隆到表達(dá)載體中進(jìn)行生物合成。本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案之二是ー種免疫抑制劑，其活性成分包括所述的短肽。本發(fā)明的免疫抑制劑含有治療有效量的本發(fā)明短肽。需要的時(shí)候，也可以還含有其他的活性成分。上述免疫抑制劑中還可以含有一種或多種藥學(xué)上可以接受的載體。所述載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、潤(rùn)濕劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性剤、吸附載體和潤(rùn)滑劑等。本發(fā)明的免疫抑制劑可以制成片劑、粉劑、粒劑、膠囊、ロ服液及注射液等多種形式，各種劑型均可以按藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。本發(fā)明的短肽具有結(jié)合Fe Y RIIA的活性，體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)具有特異性拮抗Fe
YRIIA和IgG相互作用的能力，是Fe YRIIA拮抗劑。因此本發(fā)明的短肽可用于制備拮抗Fe YlIA受體(Fe Y RIIA)和免疫球蛋白G (IgG)相互作用的藥物，特別是用于制備Fe
YRIIA拮抗劑。該藥物通過對(duì)Fe Y RIIA的拮抗作用而抑制抗體介導(dǎo)的自身免疫性疾病的組織、細(xì)胞損傷及急性炎癥狀態(tài)，從而阻斷抗體介導(dǎo)的自身免疫性疾病的進(jìn)展，進(jìn)而預(yù)防或治療抗體介導(dǎo)的自身免疫性疾病。因此本發(fā)明的短肽可用于制備預(yù)防或治療自身免疫性疾病的藥物。所述的自身免疫性疾病較佳的為系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化和ANCA相關(guān)性血管炎等。 本發(fā)明所用的原料或試劑除特別說明之外，均市售可得。相比于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果如下本發(fā)明的短肽具有特異性強(qiáng)，結(jié)構(gòu)短小，免疫原性低，合成簡(jiǎn)單，且具有較強(qiáng)的抑制IgG単體和Fe Y RIIA結(jié)合的能力。可用于制備拮抗Fe YRIIA和IgG相互作用的藥物和制備自身免疫性疾病的藥物。以本發(fā)明的短肽為活性成分的藥物，可以特異性拮抗Fe Y RIIA和IgG之間的相互作用，而不拮抗Fe y RI和IgG之間的作用。因此其副作用低。在制造新型免疫抑制劑中將會(huì)得到廣泛應(yīng)用，并且將會(huì)帶來巨大的社會(huì)及經(jīng)濟(jì)效益。


以下結(jié)合

本發(fā)明的特征和有益效果。圖I為不同濃度的本發(fā)明的I號(hào)短肽對(duì)Fe Y RIIA和IgG相互作用的影響。圖2為玫瑰花環(huán)形成實(shí)驗(yàn)顯微鏡下照片。圖A為陽(yáng)性對(duì)照組，圖B為IgG組，圖C為I號(hào)短肽，圖D為2號(hào)短肽，圖E為3號(hào)短肽，圖F為4號(hào)短肽，圖G為5號(hào)短肽，圖H為6號(hào)短肽。
圖3為玫瑰花環(huán)形成實(shí)驗(yàn)中各組中玫瑰花環(huán)形成及未形成的K562細(xì)胞數(shù)。f 6為Γ6號(hào)短肽。
具體實(shí)施例方式下面用實(shí)施例來進(jìn)ー步說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受其限制。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。實(shí)施例中所述的“室溫”是指進(jìn)行試驗(yàn)的操作間的溫度，一般為1(T25°C。實(shí)施例I短肽序列的設(shè)計(jì)和合成經(jīng)過序列設(shè)計(jì)、優(yōu)化和篩選后獲得9個(gè)短肽，見表I。送交上海吉爾生化合成，純度均>95%，用于以下實(shí)施例的試驗(yàn)。
表I.經(jīng)過設(shè)計(jì)、優(yōu)化獲得的短肽

權(quán)利要求
1.一種短肽,其特征在于,其氨基酸序列是Trp-Pro-Ala-Pro-Ile-Tyr。
2.ー種免疫抑制劑，其特征在于，其活性成分包括權(quán)利要求I所述的短肽。
3.如權(quán)利要求I或2所述的短肽在制備FeYlIA受體拮抗劑中的應(yīng)用。
4.權(quán)利要求I或2所述的短肽在制備拮抗FeYlIA受體和免疫球蛋白G相互作用的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種短肽及其免疫抑制劑和應(yīng)用。該短肽是6肽，其氨基酸序列是Trp-Pro-Ala-Pro-Ile-Tyr。該短肽可用于制備拮抗Fc γIIA受體(FcγRIIA)和免疫球蛋白G(IgG)相互作用的藥物和制備治療或預(yù)防自身免疫性疾病的藥物。具有特異性強(qiáng)，結(jié)構(gòu)短小，免疫原性低，合成簡(jiǎn)單的特點(diǎn)。以本發(fā)明的短肽為活性成分的藥物，可以特異性拮抗Fc γRIIA和IgG之間的相互作用，而不拮抗Fc γRI和IgG之間的作用，因此其副作用低。在制造新型免疫抑制劑中將會(huì)得到廣泛應(yīng)用，并且將會(huì)帶來巨大的社會(huì)及經(jīng)濟(jì)效益。
文檔編號(hào)A61K38/08GK102718838SQ20121014100
公開日2012年10月10日 申請(qǐng)日期2009年4月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月24日
發(fā)明者俞海瑾, 張?bào)K, 朱維良, 王偉銘, 陳楠, 陳永熙 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院, 中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所