本發(fā)明屬于飼料
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及玉米蛋白粉功能性發(fā)酵飼料及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：隨著我國畜牧業(yè)的發(fā)展，蛋白質(zhì)飼料緊缺的矛盾日益突顯。解決這一矛盾的主要途徑是開發(fā)新的飼料資源和合理利用現(xiàn)有的飼料資源。利用微生物發(fā)酵法生產(chǎn)高蛋白飼料是解決目前飼料蛋白質(zhì)資源匱乏的有效途徑之一。玉米是當今世界三大糧食作物之一，2015年我國玉米種植面積為38116.6千公頃，單產(chǎn)量5891.9kg/公頃，略高于世界平均水平。玉米的主要成分為淀粉，高達75％，因此玉米在淀粉生產(chǎn)中占有重要地位。目前國內(nèi)提取玉米淀粉的主要方法是濕法提取，其主要副產(chǎn)物為玉米蛋白粉。隨著玉米產(chǎn)量的持續(xù)增長和玉米淀粉廠的增產(chǎn)，其副產(chǎn)物玉米蛋白粉也隨之增多。玉米蛋白粉含有60％左右的蛋白質(zhì)，主要以醇溶蛋白為主，可溶性差，且氨基酸組成不平衡，適口性不好，目前作為飼料使用蛋白質(zhì)消化利用率低。技術(shù)實現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明的第一目的在于提供玉米蛋白粉功能性發(fā)酵飼料，使所述飼料具有營養(yǎng)物質(zhì)豐富多樣，可溶性蛋白含量高的特點。同時所述玉米蛋白粉功能性發(fā)酵飼料在動物養(yǎng)殖的應(yīng)用時，能夠有效提高動物的免疫力，從而提高動物生長速度和抗病能力。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了玉米蛋白粉功能性發(fā)酵飼料，為含有玉米蛋白粉、麩皮的培養(yǎng)基在三種菌發(fā)酵作用下的發(fā)酵產(chǎn)物；所述三種菌株為枯草芽孢桿菌，以及凝結(jié)芽孢桿菌、嗜熱乳酸菌、納豆芽孢桿菌和啤酒酵母菌中的任意兩種。優(yōu)選的，三種菌種的接種菌落總數(shù)為(1～2.5)×108cfu/g。優(yōu)選的，所述三種菌種的接種活菌數(shù)比為0.5～2：0.5～2：0.5～2。優(yōu)選的，所述三種菌種的總接種量為1％～10％。優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基中玉米蛋白粉：麩皮的質(zhì)量比為3～7：3～6。優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基中還包括玉米胚芽粕；所述玉米胚芽粕：玉米蛋白粉：麩皮的質(zhì)量比為1～4：3～7：3～6。優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基中物料質(zhì)量與水分體積比為1g:(1.2～1.6)ml。優(yōu)選的，發(fā)酵的溫度為28℃～34℃。優(yōu)選的，發(fā)酵的時間48h～144h。本發(fā)明還提供了所述的玉米蛋白粉功能性發(fā)酵飼料在動物養(yǎng)殖中的應(yīng)用。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點：1)本發(fā)明的三種混合菌株發(fā)酵的方法可以生產(chǎn)出可溶性蛋白含量高的玉米蛋白粉發(fā)酵型微生物飼料，即枯草芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌和啤酒酵母三種菌株組合發(fā)酵，可以使玉米蛋白粉飼料中的可溶性蛋白含量從3.74％最大幅度提高270％，這種添加優(yōu)良共生的多菌種制成新型微生物發(fā)酵飼料，不僅能帶來更多的經(jīng)濟效益，還具有極大的社會價值。2)通過本發(fā)明后續(xù)實施例所證明，本發(fā)明的三種混合菌株發(fā)酵獲得的玉米蛋白粉發(fā)酵型微生物飼料，在乳豬飼料喂養(yǎng)中，可以促進乳豬對蛋白質(zhì)、脂肪和鈣的吸收、能明顯改善腸道菌群，增加了有益菌的數(shù)目，降低了有害菌的數(shù)目，使乳仔豬腸道菌群更加平衡；通過對血清生化指標、抗氧化指標和免疫指標的測定，說明對腎臟的功能起到了改善的作用，并顯著提高了血清的免疫水平。因此，本發(fā)明的玉米蛋白粉發(fā)酵型微生物飼料相對于普通飼料可以提高乳豬生存狀態(tài)，改善乳豬抗病能力。具體實施方式本發(fā)明提供了玉米蛋白粉功能性發(fā)酵飼料，為含有玉米蛋白粉、麩皮的培養(yǎng)基在三種菌發(fā)酵作用下的發(fā)酵產(chǎn)物；所述三種菌株為枯草芽孢桿菌，以及凝結(jié)芽孢桿菌、嗜熱乳酸菌、納豆芽孢桿菌和啤酒酵母菌中的任意兩種。本發(fā)明中，所述三種菌種的活菌數(shù)比優(yōu)選為0.5～2：0.5～2：0.5～2，更優(yōu)選為1:1:1。本發(fā)明中，所述三種菌株的組合形式優(yōu)選為枯草芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌和納豆芽孢桿菌；或者為枯草芽孢桿菌、嗜熱乳酸菌和納豆芽孢桿菌；或者為枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌和啤酒酵母菌；或者為枯草芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌和嗜熱乳酸菌；或者為枯草芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌和啤酒酵母菌；或者為枯草芽孢桿菌、嗜熱乳酸菌和啤酒酵母菌。所述枯草芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌和納豆芽孢桿菌的活菌數(shù)比優(yōu)選為1～2：0.5～1：0.5～1.5，更優(yōu)選為1：1：1。所述枯草芽孢桿菌、嗜熱乳酸菌和納豆芽孢桿菌的活菌數(shù)比優(yōu)選為1～2：0.5～1：0.5～1.5，更優(yōu)選為1：1：1。所述枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌和啤酒酵母菌的活菌數(shù)比優(yōu)選為1～2：0.5～1：0.5～1.5，更優(yōu)選為1：1：1。枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌和啤酒酵母菌的活菌數(shù)比優(yōu)選為1～2：0.5～1：0.5～1.5，更優(yōu)選為1：1：1。所述枯草芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌和嗜熱乳酸菌活菌數(shù)比優(yōu)選為1～2：0.5～1：0.5～1.5，更優(yōu)選為1：1：1。所述枯草芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌和啤酒酵母菌的活菌數(shù)比優(yōu)選為1～2：0.5～1：0.5～1.5，更優(yōu)選為1：1：1。所述枯草芽孢桿菌、嗜熱乳酸菌和啤酒酵母菌的活菌數(shù)比優(yōu)選為1～2：0.5～1：0.5～1.5，更優(yōu)選為1：1：1。本發(fā)明中，所述枯草芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌、嗜熱乳酸菌、納豆芽孢桿菌和啤酒酵母菌的來源沒有特殊限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的枯草芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌、嗜熱乳酸菌、納豆芽孢桿菌和啤酒酵母菌即可。本發(fā)明實施例中，所述枯草芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌、嗜熱乳酸菌、納豆芽孢桿菌和啤酒酵母菌的來源為購自齊齊哈爾天創(chuàng)生物科技有限公司。本發(fā)明中，三種菌種的菌落總數(shù)優(yōu)選為(1～2.5)×108cfu/g，更優(yōu)選為(1.5～2.3)×108cfu/g，最優(yōu)選為2×108cfu/g。本發(fā)明中，所述三種菌種的總接種量優(yōu)選為1％～10％，更優(yōu)選為2％～8％，最優(yōu)選為5％。本發(fā)明中，所述培養(yǎng)基中玉米蛋白粉：麩皮的質(zhì)量比優(yōu)選為3～7：3～6，更優(yōu)選為4～7:3～6，最優(yōu)選為4：6。本發(fā)明中，所述玉米蛋白粉和麩皮的來源沒有特殊限制采用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的玉米蛋白粉和麩皮即可。本發(fā)明中，所述培養(yǎng)基中優(yōu)選還包括玉米胚芽粕；所述玉米胚芽粕：玉米蛋白粉：麩皮的質(zhì)量比優(yōu)選為1～4：3～7：3～6，更優(yōu)選為1～4：3～7：3～6。本發(fā)明中，所述玉米胚芽粉的來源沒有特殊限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的玉米胚芽粉即可。本發(fā)明中，培養(yǎng)基的原料的厚度優(yōu)選為5～25cm，更優(yōu)選為10～20cm，最優(yōu)選為15cm。本發(fā)明中，所述培養(yǎng)基中物料質(zhì)量與水分體積比優(yōu)選為1g:(1.2～1.6)ml，更優(yōu)選為1g:(1.2～1.4)ml，最優(yōu)選為1g:1.3ml。本發(fā)明中，發(fā)酵的溫度優(yōu)選為28℃～34℃，更優(yōu)選為30℃～32℃。本發(fā)明中，發(fā)酵的時間優(yōu)選為48h～144h，更優(yōu)選為55～120h，最優(yōu)選為72h。本發(fā)明還提供了所述玉米蛋白粉功能性發(fā)酵飼料在動物養(yǎng)殖中的應(yīng)用。本發(fā)明中，所述動物優(yōu)選包括豬、牛、羊等哺乳動物或雞、鴨等禽類動物。所述所述玉米蛋白粉功能性發(fā)酵飼料的使用方法優(yōu)選將所述玉米蛋白粉功能性發(fā)酵飼料加入到日糧飼料中喂養(yǎng)動物。所述玉米蛋白粉功能性發(fā)酵飼料的添加量占日糧飼料質(zhì)量百分比不低于5％，更優(yōu)選為10％～15％。下面將結(jié)合本發(fā)明中的實施例，對本發(fā)明中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述。顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。實施例1菌種的活化及種子液的制備培養(yǎng)1)菌種的活化活化培養(yǎng)基的制備納豆芽孢桿菌活化培養(yǎng)基為lb固體培養(yǎng)基，具體是胰蛋白胨1％、氯化鈉1％、酵母粉0.5％、瓊脂2％、ph值調(diào)至7.0～7.4。啤酒酵母菌活化培養(yǎng)基為麥汁固體培養(yǎng)基，具體是取1000ml的麥汁用阿貝折光儀調(diào)節(jié)糖度至8-10bx，瓊脂2％，ph處自然狀態(tài)。嗜熱乳酸桿菌的活化培養(yǎng)基為mrs乳酸細菌培養(yǎng)基，具體是將蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母膏5.0g、檸檬酸氫二銨2.0g、葡萄糖20.0g、吐溫801.0ml、乙酸鈉5.0g、磷酸氫二鉀2.0g、硫酸鎂0.58g、硫酸錳0.25g、瓊脂18.0g溶于1000ml蒸餾水中，調(diào)節(jié)ph至6.2～6.6?？莶菅挎邨U菌的活化培養(yǎng)基為na固體培養(yǎng)基，具體是蛋白胨10.0g、牛肉粉3.0g、氯化鈉5.0g、瓊脂15.0g、蒸餾水1000ml，調(diào)節(jié)ph值至7.3±0.1。凝結(jié)芽孢桿菌活化培養(yǎng)基為ypd固體培養(yǎng)基，具體是將酵母膏1％，蛋白胨2％，葡萄糖2％，瓊脂粉2％溶解于蒸餾水中，ph處自然狀態(tài)。在高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)對已配制的培養(yǎng)基進行滅菌，分別將枯草芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌、嗜熱乳酸菌、納豆芽孢桿菌或啤酒酵母菌按照接種量為2％的接種量分別接入到其對應(yīng)的固體活化培養(yǎng)基上，放入培養(yǎng)箱內(nèi)30℃下培養(yǎng)48h備用。2)液體菌種活化取實驗所需的五種菌種，分別接入到含有適量玻璃珠的已滅菌的液體活化培養(yǎng)基中，置于恒溫搖床中30℃、180r/min培養(yǎng)約48h，利用血球計數(shù)法查出菌的大略數(shù)量。實施例2枯草芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌和納豆芽孢桿菌三種菌種組合固體發(fā)酵培養(yǎng)基配制要求：玉米蛋白粉：麩皮＝7:3；物料(即玉米蛋白粉與麩皮總重)：水分按照比例為1g:1.2ml的比例混合，得到發(fā)酵培養(yǎng)基。菌種接種量為10％，枯草芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌和納豆芽孢桿菌三種菌活菌體數(shù)量比為1:1:1進行接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中進行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)的溫度為30℃，發(fā)酵培養(yǎng)的時間為120h，得到發(fā)酵飼料。實施例3枯草芽孢桿菌、嗜熱乳酸菌和納豆芽孢桿菌三種菌種組合固體發(fā)酵培養(yǎng)基配制要求：玉米蛋白粉：麩皮為6：4；將物料(即玉米蛋白粉與麩皮總重)和水分按照為1g:1.4ml的比例混合，得到發(fā)酵培養(yǎng)基。菌種接種量為8％，枯草芽孢桿菌、嗜熱乳酸菌和納豆芽孢桿菌三種菌活菌體數(shù)量比為1:0.5:1.5進行接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中進行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)的溫度為32℃，發(fā)酵培養(yǎng)的時間為108h，得到發(fā)酵飼料。實施例4枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌和啤酒酵母菌三種菌種組合固體發(fā)酵培養(yǎng)基配制要求：玉米蛋白粉：麩皮為5：5；將物料(即玉米蛋白粉與麩皮總重)和水分按照為1g:1.2ml的比例混合，得到發(fā)酵培養(yǎng)基。菌種接種量為6％，枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌和啤酒酵母菌三種菌活菌體數(shù)量比為0.5:1:2進行接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中進行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)的溫度為34℃，發(fā)酵培養(yǎng)的時間為96h，得到發(fā)酵飼料。實施例5枯草芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌和嗜熱乳酸菌三種菌種組合固體發(fā)酵培養(yǎng)基配制要求：玉米蛋白粉：麩皮為4：6；將物料(即玉米蛋白粉與麩皮總重)和水分按照為1g:1.3ml的比例混合，得到發(fā)酵培養(yǎng)基。菌種接種量為5％，枯草芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌和嗜熱乳酸菌三種菌活菌體數(shù)量比為0.5:2:1.5進行接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中進行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)的溫度為28℃，發(fā)酵培養(yǎng)的時間為84h，得到發(fā)酵飼料。實施例6枯草芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌和啤酒酵母菌三種菌種組合發(fā)酵固體發(fā)酵實驗培養(yǎng)基配制要求：黃粉：玉米胚芽粕：麩皮的質(zhì)量比為5:2:3；將物料(即玉米蛋白粉與麩皮總重)和水分按照為1g:1.2ml的比例混合，得到發(fā)酵培養(yǎng)基。菌種接種量為4％，枯草芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌和啤酒酵母菌三種菌活菌體數(shù)量比為1:1:1進行接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中進行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)的溫度為30℃，發(fā)酵培養(yǎng)的時間為96h，得到發(fā)酵飼料。實施例7枯草芽孢桿菌、嗜熱乳酸菌和啤酒酵母菌三種菌種組合發(fā)酵固體發(fā)酵實驗培養(yǎng)基配制要求，黃粉：玉米胚芽粕：麩皮的質(zhì)量比為5:4:3；將物料(即玉米蛋白粉與麩皮總重)和水分按照為1g:1.4ml的比例混合，得到發(fā)酵培養(yǎng)基。菌種接種量為10％，枯草芽孢桿菌、嗜熱乳酸菌和啤酒酵母菌三種菌活菌體數(shù)量比為1:1:1進行接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中進行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)的溫度為30℃，發(fā)酵培養(yǎng)的時間為96h，得到發(fā)酵飼料。實施例8將實施例2～7制備得到的發(fā)酵飼料檢測可溶性蛋白的含量，具體采用福林-酚法測定可溶性蛋白質(zhì)含量。具體測定方法如下：1.標準曲線的測定取13支潔凈干燥的試管，1支作為空白對照，將其余試管分成兩組，分別加入0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml濃度為250mg/ml的標準蛋白質(zhì)溶液。加蒸餾水至1.0ml使其稀釋成不同梯度，每支試管中加入5ml斐林試劑甲，迅速振蕩混勻，放于室溫環(huán)境中10min。另在每只試管中加入0.5mlfolin—酚試劑，迅速振蕩混勻。放于室溫環(huán)境中30min后，于650nm處測定各管中溶液的吸光度值。2.樣品測定取4只比色管，一只作空白，3支試管中加入1ml待測液，空白加入1ml蒸餾水，然后每支試管加入5ml斐林試劑甲，在旋渦混合器上迅速混合，于室溫放置10min。再逐管加入0.5mlfolin—酚試劑，立即混勻。然后在室溫下放置30min，空白作對照，于650nm處測定各管中溶液的吸光度值。3.計算樣品中可溶性蛋白的含量可溶性蛋白的含量(mg/g)＝(cvt)/(vsfw1000)式中：c—查標準曲線值，μg；vt—提取液總體積，ml；fw—樣品鮮重，g；vs—測定時加樣，ml。4、蛋白轉(zhuǎn)化率蛋白轉(zhuǎn)化率計算公式＝(w2-w1)/w×100％.式中：w—原料中醇溶性蛋白含量，％；w1—發(fā)酵前原料中可溶性蛋白含量，％；w2—發(fā)酵后底物中可溶性蛋白含量，％。實施例2～7制備的發(fā)酵飼料中可溶性蛋白和蛋白轉(zhuǎn)化率見表1。表1實施例2～7制備的發(fā)酵飼料中可溶性蛋白和蛋白轉(zhuǎn)化率結(jié)果一覽表實施例9實施例2～7制備的發(fā)酵飼料中菌落計數(shù)(1)樣品稀釋液的制備準確稱取待測樣品l0g，放入裝有90ml無菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置搖床上振蕩20min，使微生物細胞分散，靜置20-30s，即成10-1稀釋液；通過梯度稀釋，將菌懸液制成10-2、l0-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀釋菌液。(2)將梯度稀釋后的菌懸液選定一定梯度進行平板涂布，每組三個平行樣。在30度條件下培養(yǎng)48h。(3)觀察各平板上菌落生長情況，數(shù)出各平板中菌落的個數(shù)，以30-300個為宜，不在此區(qū)間的平板舍棄，然后計算平均值再乘以稀釋倍數(shù)即為樣品中菌落總數(shù)。實施例2～7制備的發(fā)酵飼料中菌落計數(shù)結(jié)果見表2。表2實施例2～7制備的發(fā)酵飼料中菌落計數(shù)結(jié)果一覽表項目實施例2實施例3實施例4實施例5實施例6實施例7菌落數(shù)(cfu/ml)2.89×10103.3×10102.76×10103.7×10104.7×10104.43×1010實施例10為了清楚發(fā)明制備的發(fā)酵飼料在發(fā)酵前后營養(yǎng)成分的變化，將實施例2制備的飼料進行了發(fā)酵飼料營養(yǎng)安全性評價。主要包括氨基酸分析、粗脂肪含量測定、粗纖維含量的測定、鈣含量的測定、磷含量的測定和水分含量的測定。a、測定過程中涉及的主要溶液如下：(1)中性洗滌劑的配制①18.62g已二胺四已酸二鈉+6.81g四硼酸鈉→250ml水溶解，②30gsps+10ml已二醇-乙醚→200ml熱水中，③4.5g磷酸氫二鈉→120ml熱水，①+②+③→定容至1000ml，ph在6.9-7.1之間。(2)釩鉬酸銨顯色劑稱取偏釩酸銨1.25g,加硝酸250ml；另取鉬酸銨25g,加蒸餾水400ml溶解,再冷卻條件下將兩溶液混合，加蒸餾水定容至1000ml,避光保存,如生成沉淀則不能使用。(3)磷標準溶液將磷酸二氫鉀在105℃干燥1h,在干燥器中冷卻后，稱0.2195g，溶于少量蒸餾水后定量轉(zhuǎn)入1000ml容量瓶中，加硝酸3ml，用蒸餾水定容至刻度，即為50㎎/ml的磷標準溶液。b、檢測方法1、氨基酸分析氨基酸測定儀檢測(gb/12143.2-1989)。2、粗脂肪含量測定索氏提取法(gb/t6433-1994)。3、粗纖維含量的測定中性洗滌劑法(gb/t64-1994)。4、鈣含量的測定返滴定法。5、磷含量的測定鉬黃比色法(gb/12763.4-1991)。6、水分含量的測定重量法(gb6435-1986)。通過化學(xué)實驗方法對發(fā)酵飼料發(fā)酵前后的營養(yǎng)組成以及氨基酸組成進行了分析結(jié)果如表3和表4所示。表3發(fā)酵飼料發(fā)酵前和發(fā)酵后營養(yǎng)組成含量變化表表4發(fā)酵前后底物的氨基酸組成名稱發(fā)酵前％發(fā)酵后％名稱發(fā)酵前％發(fā)酵后％賴氨酸0.811.51丙氨酸2.813.67組氨酸0.790.92蛋氨酸0.690.81精氨酸1.371.51異亮氨酸1.371.63天冬氨酸2.222.51亮氨酸5.276.79纈氨酸1.671.95蘇氨酸1.251.44脯氨酸2.943.57酪氨酸1.401.84甘氨酸1.201.31苯丙氨酸2.032.47絲氨酸1.762.11胱氨酸0.200.22谷氨酸8.269.73色氨酸0.20—通過表3可以看出玉米蛋白粉經(jīng)過發(fā)酵后可溶性蛋白含量大幅提升，較未發(fā)酵前提高了241％；粗纖維含量明顯降低，降低了50.3％，主要是由于混合菌種在發(fā)酵過程中也產(chǎn)生了纖維素酶，從而分解飼料中的纖維素；脂肪含量有所升高，升高了62％，主要是由于菌中的生長繁殖通過降解糖類合成具體所需要的脂類物質(zhì)。在氨基酸的組成分析結(jié)果中，如表4，從中可以看出經(jīng)過酸解后發(fā)酵前后的氨基酸組成有了明顯的差異，發(fā)酵后氨基酸的組成明顯提高。鹽酸相當于胃酸，說明發(fā)酵后，玉米蛋白粉中的蛋白更容易酸解，也就更容易被動物消化利用。實施例11玉米蛋白粉發(fā)酵型微生物飼料飼養(yǎng)乳豬中的應(yīng)用采用實施例3制備的發(fā)酵飼料飼養(yǎng)乳仔豬的實驗與結(jié)果如下：選取窩產(chǎn)次一致和品種一致的7日齡仔豬，自由采食，自由飲水。試驗前進行常規(guī)的驅(qū)蟲防疫。仔豬免疫和消毒程序等飼養(yǎng)管理按豬場常規(guī)進行。實驗采用隨機分組實驗設(shè)計，實驗分為2組(1個對照組，1個實驗組)，每個組5窩，實驗日糧按照乳仔豬的營養(yǎng)需要制定(nrc，1997)，日糧如表5所示。分別于7d、28d空腹12h稱乳仔豬體重。表5日糧成分及含量一覽表成分(ingredient)含量玉米corn620豆粕soybeanmeal160麥麩wheatbran67玉米蛋白粉cornglutenmeal100大豆油soybeanoil15磷酸氫鈣calciumhydrogenphosphate15石粉stonepowder10鹽salt3預(yù)混料premix10化學(xué)組成chemicalcomposition粗蛋白cp％19.3鈣ca％0.82磷p％0.63賴氨酸lys％0.85蛋氨酸met％0.40蘇氨酸t(yī)hr％0.69代謝能mekc3000表6乳仔豬的生長性能對照組實驗組semp豬重/窩(kg)4.134.540.3050.531料重比7.998.470.6820.751由表6可知，對照組的乳仔豬和實驗組的乳仔豬平均日增重無顯著差異(p>0.05)。與對照組相比，實驗組乳仔豬的料重比有增加的趨勢，但是統(tǒng)計上無顯著差異(p>0.05)。2)代謝實驗實驗結(jié)束時，連續(xù)3天采集糞樣并冷藏，3天的混合在一起，并采用hcl不溶灰分的內(nèi)源指示劑法測定各營養(yǎng)物質(zhì)的消化率(粗蛋白、粗脂肪、粗纖維和鈣磷)。肛門采糞，采用mrs和麥康凱培養(yǎng)基培養(yǎng)糞便微生物，平板菌落計數(shù)法測定大腸桿菌和乳酸菌的個數(shù)。營養(yǎng)物質(zhì)的消化率的結(jié)果與分析表7乳仔豬對營養(yǎng)物質(zhì)的消化率(％)通過表7可知，與對照組相比，實驗組的乳仔豬的粗蛋白、粗脂肪和鈣的消化率均顯著增加(p<0.05)，說明添加發(fā)酵飼料促進了蛋白質(zhì)、脂肪和鈣的吸收。而對于磷和纖維均有增加的趨勢，但是無顯著差異(p>0.05)。3)糞便中菌落個數(shù)的測定結(jié)果與分析表8乳仔豬的糞便中菌的個數(shù)對照組實驗組乳酸菌(50.67±18.58)×104(7.00±2.65)×108大腸桿菌(2.33±4.04)×106(0.67±1.37)×103由表8可知，實驗組的乳仔豬糞便中的乳酸菌數(shù)目顯著高于對照組(p<0.05)，而乳仔豬的糞便中的大腸桿菌的數(shù)目顯著低于對照組(p<0.05)，這說明日糧中添加發(fā)酵飼料能明顯改善腸道菌群，增加了有益菌的數(shù)目，降低了有害菌的數(shù)目，使乳仔豬腸道菌群更加平衡。4)血清生化指標、抗氧化指標和免疫指標的測定每窩取2個結(jié)束時采血清5ml，靜置2h，3000r離心10min(現(xiàn)場冰盒凍存或直接置于冰箱-20保存)，測定血清生化指標和免疫指標(谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶、葡萄糖、尿素、尿酸、肌酐、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、膽固醇、血清尿素氮、總蛋白、白蛋白、總抗氧化能力、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、丙二醛、免疫球蛋白iga、igm、igg)。血清生化指標的測定結(jié)果表9乳仔豬的血清生化指標由表9可知，與對照組相比，實驗組的血清總蛋白含量、球蛋白含量、堿性磷酸酶含量均顯著增加(p<0.05)，尿素氮含量顯著降低(p<0.05)。由于血清總蛋白含量與蛋白質(zhì)沉積呈正相關(guān)，血清尿素氮含量與蛋白質(zhì)沉積呈負相關(guān)，因此實驗結(jié)果說明，飼喂實驗組日糧的乳仔豬能顯著增加(p<0.05)蛋白質(zhì)的沉積，從而提高了日糧蛋白質(zhì)的利用率。堿性磷酸酶的含量與生長速度密切相關(guān)，從實驗組的堿性磷酸酶的含量顯著高于對照組(p<0.05)來看，實驗組的乳仔豬的增長速度比對照組的增長速度理論上快。實驗組乳仔豬的血清球蛋白含量顯著高于對照組(p<0.05)，說明添加發(fā)酵飼料的實驗組乳仔豬的免疫性能增加。與對照組相比，實驗組的乳仔豬血清與脂肪利用相關(guān)的指標及與肝臟功能相關(guān)的指標均無顯著差異(p>0.05)，說明添加發(fā)酵飼料的實驗組乳仔豬的代謝功能未受影響。另外實驗組乳仔豬的尿酸的含量顯著降低(p<0.05)，說明對腎臟的功能起到了改善的作用。5)血清抗氧化指標的測定表10乳仔豬的血清抗氧化指標(u/ml)由表10可以看出，乳仔豬的血清總抗氧化能力和超氧化物歧化酶活性顯著增加(p<0.05)。而血清丙二醛是脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，具有細胞毒性，實驗組的血清丙二醛的含量顯著降低(p<0.05)。綜上，通過血清抗氧化指標的評價，表明該發(fā)酵飼料的添加能顯著增加了血清的抗氧化能力(p<0.05)。表11乳仔豬的血清免疫指標(g/l)對照組實驗組semp免疫球蛋白iga0.210.190.0320.702免疫球蛋白igg1.24b2.23a0.2470.048免疫球蛋白igm0.99b1.91a0.2510.044由表11可以看出，與對照組相比，實驗組的血清igg和igm的含量顯著增加(p<0.05)，而血清iga也有升高的趨勢，但是無顯著差異，說明該發(fā)酵飼料的添加顯著提高了血清的免疫水平。實施例12發(fā)酵飼料飼喂豬的實驗方法及結(jié)果分析選取產(chǎn)后初期的健康豬共39頭，其中美系長白27頭，杜洛克12頭。將39頭豬隨機分成3欄(標注為1號欄、2號欄和3號欄)，每欄含有長白9頭，杜洛克4頭，其中1號欄為對照組(日糧組成及配方如表1所示)，2號欄和3號欄為實驗組(分別采用30％和60％的發(fā)酵玉米蛋白粉替代豆粕，分別為日糧1和日糧2，組成及配方如表12所示)。實驗預(yù)飼期3d，實驗期30d。正試期開始給每一頭豬標號并稱重，記錄數(shù)據(jù)，并按照表1所示的日糧配方飼料(對照、日糧1和日糧2)分別飼喂1號欄豬、2號欄豬和3號欄豬，且每天投料前稱量所投喂飼料的重量，第二天回收料槽內(nèi)剩余飼料并稱重，記錄日耗料重，實驗結(jié)束后稱每頭豬重，計算日增重和料重比。表12實驗組和對照組日糧組成及配方(500kg)注：預(yù)混料組成為鈣12-19％，總磷＞3％，nacl5-12％，賴氨酸6.3％，fe4800-18000mg，cu2500-5000mg，zn2500-3750mg，錳1050-3750mg，維生素a乙酸酯18-40萬iu，維生素d5.4-12.5iu，生育酚395mg，亞硫酸氫鈉甲苯醌29mg，核黃素145mg，泛酸240mg煙酰胺775mg。飼喂5％和10％發(fā)酵玉米蛋白飼料的長白豬的日增重顯著高于對照組(p＜0.05)，且飼喂10％發(fā)酵玉米蛋白飼料的長白豬日增重最高，但是與飼喂5％發(fā)酵飼料的長白豬的日增重無顯著差異(p＞0.05)。飼喂5％和10％的發(fā)酵玉米蛋白飼料的杜洛克豬的日增重均高于對照組，但是與對照組無顯著差異(p＞0.05)。該實驗說明日糧不同比例添加發(fā)酵飼料提高了長白豬的生長性能，且發(fā)酵玉米蛋白飼料對長白豬的日增重的影響比對杜洛克豬的影響大。飼喂5％和10％發(fā)酵玉米蛋白飼料的長白豬的料重比顯著低于對照組(p＜0.05)，且飼喂10％發(fā)酵玉米蛋白飼料的長白豬的料重比最低，但是與飼喂5％發(fā)酵飼料的長白豬的料重比無顯著差異(p＜0.05)，這說明在長白豬日糧中添加不同比例發(fā)酵玉米蛋白飼料均能顯著增加飼料報酬，提高飼料的轉(zhuǎn)化率，從而降低成本。另外，飼喂5％和10％的發(fā)酵玉米蛋白飼料的杜洛克豬的料重比均低于對照組，但是與對照組的料重比無顯著差異(p＞0.05)，這說明飼喂發(fā)酵玉米蛋白飼料對杜洛克豬的飼料報酬影響較小。綜上，說明日糧添加發(fā)酵飼料顯著提高了長白豬的飼料轉(zhuǎn)化率，從而降低成本。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當指出，對于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。當前第1頁12