本發(fā)明屬于飼料
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種富含益生菌和活性肽的飼料及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：隨著環(huán)保節(jié)能、綠色生產(chǎn)的趨勢越來越突出，利用工農(nóng)業(yè)副產(chǎn)物進行微生物發(fā)酵生產(chǎn)蛋白飼料更符合現(xiàn)代人們的要求。目前制備的飼料原料有很多，例如啤酒和白酒酒糟、生產(chǎn)醬油剩余的渣料、淀粉渣、蘋果渣、甜菜渣以及油類加工產(chǎn)生的棉籽餅粕、桐餅、芝麻餅等；或者還可利用屠宰廠廢棄下腳料及畜禽糞便以及海產(chǎn)品深加工過程中產(chǎn)生的廢料?，F(xiàn)有技術(shù)中，酶法和微生物發(fā)酵都可以有效原料，但是酶法水解得到的多肽味苦，適口性不好，而微生物發(fā)酵可以改善原料的初始風(fēng)味。目前，微生物發(fā)酵生產(chǎn)飼料應(yīng)用較為廣泛，例如陳慶森等通過多菌種混合發(fā)酵玉米秸稈，使玉米秸稈的纖維素利用率達70％，粗蛋白的得率達到23％以上，從而提高了玉米秸稈的利用率和營養(yǎng)價值。馮東勛在血粉中添加羽毛粉等輔料進行發(fā)酵生產(chǎn)蛋白飼料，檢測結(jié)果顯示，添加羽毛粉的血粉發(fā)酵后氨基酸含量組成與魚粉相似，王曉杰等研究了玉米酒糟通過好食脈孢霉的固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)蛋白飼料，通過對浸提液的檢測，結(jié)果顯示，發(fā)酵后蛋白溶出率達36.30％，比原料提高28.96％，且粗纖維含量降低了30.32％，玉米酒糟通過發(fā)酵溶解性得到了加大改善?？梢钥闯?，微生物固態(tài)發(fā)酵可以明顯改變動植物蛋白原料的理化性狀，降低原料中的抗營養(yǎng)因子和原料的毒性，改善原料的適口性，提高飼料中蛋白含量，平衡氨基酸含量為畜禽生長提供生長因子和肽類物質(zhì)等，使得飼料的營養(yǎng)組成更合理，利用率更高。但是為了使養(yǎng)殖的禽畜動物健康生長，提高養(yǎng)殖禽畜的抗病性，會向固態(tài)發(fā)酵的飼料中添加一定的抗生素，抗生素大大增強了動物的機體免疫，但是長期食用添加有抗生素的飼料不僅使養(yǎng)殖的禽畜產(chǎn)生耐藥性，還會使抗生素在體內(nèi)積累，通過食物鏈最后人類食用，導(dǎo)致最終積累在人體內(nèi)，危害人類的健康。技術(shù)實現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種富含益生菌和活性肽的飼料及其應(yīng)用，使所述飼料既滿足營養(yǎng)要求又具有免疫活性，為發(fā)酵飼料替代抗生素提供了新的思路。為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：本發(fā)明提供了一種富含益生菌和活性肽的飼料，為玉米蛋白粉、麩皮和水組成的料液在地衣芽孢桿菌和乳桿菌的發(fā)酵作用下的發(fā)酵產(chǎn)物；飼料中活性肽的質(zhì)量濃度為94～110mg/g；飼料中益生菌菌體濃度為(0.5～2.0)×109cfu/g；所述發(fā)酵前地衣芽孢桿菌先接種至料液中單獨發(fā)酵，再將乳桿菌接種至料液中與地衣芽孢桿菌進行共同發(fā)酵。優(yōu)選的，所述玉米蛋白粉和麩皮的質(zhì)量比為3～4：2～1。優(yōu)選的，所述玉米蛋白粉和麩皮的質(zhì)量比為7：3。優(yōu)選的，所述料液中水的質(zhì)量分數(shù)為40％～60％。優(yōu)選的，所述地衣芽孢桿菌接種乳桿菌接種的間隔時間為36～64h。優(yōu)選的，發(fā)酵的時間為48～64h。優(yōu)選的，發(fā)酵的溫度為30～37℃。優(yōu)選的，地衣芽孢桿菌的接種量為(1×108～1×109)cfu/g料液。優(yōu)選的，乳桿菌的接種量為(1×109～1×1010)cfu/g料液。本發(fā)明提供了所述富含益生菌和活性肽的飼料在增強養(yǎng)殖動物體質(zhì)方面的應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種富含益生菌和活性肽的飼料，為玉米蛋白粉、麩皮組成的混料與水的混合液在地衣芽孢桿菌和乳桿菌的共同發(fā)酵作用下的發(fā)酵產(chǎn)物；飼料中活性肽的質(zhì)量濃度為94～110mg/g；飼料中益生菌菌體濃度為(0.5～2.5×109)cfu/g；所述發(fā)酵前地衣芽孢桿菌先接種至料液中單獨發(fā)酵，再將乳桿菌接種至料液中地衣芽孢桿菌進行共同發(fā)酵。本發(fā)明采用微生物發(fā)酵玉米蛋白粉和麥麩制備新型活菌富肽飼料，既滿足營養(yǎng)要求又具有益生素的特點，利用發(fā)酵過程中兩種菌產(chǎn)生的多種蛋白酶將玉米蛋白粉中的不溶性蛋白轉(zhuǎn)變成可溶性肽，使可溶性肽(小肽)含量由20.24mg/g提高到92～112mg/g，且可溶性肽(小肽)的抗氧化活性達到為117.67u/ml，益生菌的數(shù)目達到1×109cfu/g。由于可溶性肽(小肽)具有很多功能性(抗氧化性)，活的益生菌具有免疫活性，因而本發(fā)明為發(fā)酵蛋白飼料替代抗生素提供了新的思路和研究基礎(chǔ)。通過動物飼喂試驗表明，該發(fā)酵飼料可以顯著提高飼料的適口性，增加了動物的采食量，從而提高了動物的生產(chǎn)性能。通過動物免疫相關(guān)指標的測定，證實該發(fā)酵飼料能提高了動物的免疫性能。同時，本發(fā)明發(fā)酵菌株是經(jīng)過嚴格篩選得到的高產(chǎn)蛋白酶的地衣芽孢菌種和乳桿菌，操作簡單，產(chǎn)酶周期短，便于規(guī)模化生產(chǎn)。本發(fā)明采用的是來源廣泛的玉米蛋白粉為主要培養(yǎng)基，為玉米蛋白的開發(fā)利用提供了新的途徑，玉米蛋白資源的開發(fā)不僅可以有效改善蛋白資源短缺的現(xiàn)狀，而且可以為玉米蛋白工業(yè)精深加工與轉(zhuǎn)化奠定堅實的基礎(chǔ)。菌種保藏地衣芽孢桿菌，分類命名bacilluslicheniformis，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址為中國.北京.北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物所，保藏機構(gòu)簡稱cgmcc，保藏日期為2016年10月13日，保藏編號cgmccno.13109，菌株編號yy-2。乳桿菌，分類命名lactobacillussp.，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址為中國.北京.北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物所，保藏機構(gòu)簡稱cgmcc，保藏日期為2016年10月13日，保藏編號cgmccno.13110，菌株編號yy-1。附圖說明圖1為實施例2中乳桿菌菌體濃度與吸光度之間的標準曲線；圖2為實施例2中地衣芽芽孢菌體濃度與吸光度之間的標準曲線；圖3為實施例6中的發(fā)酵前后蛋白質(zhì)的分子量分布；圖4為實施例10中未添加發(fā)酵飼料三黃雞的十二指腸形態(tài)；圖5為實施例10中未添加發(fā)酵飼料三黃雞的空腸形態(tài)；圖6為實施例10中未添加發(fā)酵飼料三黃雞的回腸形態(tài)；圖7為實施例10中添加發(fā)酵飼料三黃雞的十二指腸形態(tài)；圖8為實施例10中添加發(fā)酵飼料三黃雞的空腸形態(tài)；圖9為實施例10中添加發(fā)酵飼料三黃雞的回腸形態(tài)。具體實施方式本發(fā)明提供了一種富含益生菌和活性肽的飼料，為玉米蛋白粉、麩皮和水組成的料液在地衣芽孢桿菌和乳桿菌的發(fā)酵作用下的發(fā)酵產(chǎn)物；飼料中活性肽的質(zhì)量濃度為94～110mg/g；飼料中益生菌菌體濃度為(0.5～2.5)×109cfu/g；所述發(fā)酵前優(yōu)選將地衣芽孢桿菌先接種至料液中單獨發(fā)酵，再將乳桿菌接種至料液中與地衣芽孢桿菌進行共同發(fā)酵。本發(fā)明提供的一種富含益生菌和活性肽的飼料，既滿足營養(yǎng)要求又具有益生素的特點，為發(fā)酵蛋白飼料替代抗生素提供了新的思路和研究基礎(chǔ)。本發(fā)明中，所述玉米蛋白粉和麩皮的質(zhì)量比優(yōu)選為3～4：2～1，更優(yōu)選為7：3。本發(fā)明中，所述玉米蛋白粉的來源沒有特殊限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的玉米蛋白粉即可。本發(fā)明實施例中，所述玉米蛋白粉購自黑龍江龍鳳玉米開發(fā)有限公司。本發(fā)明中，所述麩皮的粒徑?jīng)]有特殊限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的麩皮粒徑即可。所述麩皮的來源徑?jīng)]有特殊限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的麩皮即可。本發(fā)明中，所述料液中水的質(zhì)量分數(shù)優(yōu)選為40％～60％，更優(yōu)選50％。所述水優(yōu)選為蒸餾水、礦泉水或雙蒸水等。本發(fā)明中，地衣芽孢桿菌的接種量為(1×108～1×109)cfu/g料液，更優(yōu)選為0.5×109cfu/g料液。所述地衣芽孢桿菌的菌株優(yōu)選保藏號cgmccno.13109的菌株。保藏號cgmccno.13109的地衣芽孢桿菌菌株具有高產(chǎn)蛋白酶的特點，具體通過酪蛋白培養(yǎng)基透明圈法篩選的，如果透明圈大，菌落小說明產(chǎn)蛋白酶活性高。所述地衣芽孢桿菌制備方法沒有特殊限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的地衣芽孢桿菌的制備方法即可。本發(fā)明中，乳桿菌的接種量為(1×109～1×1010)cfu/g料液，0.5×1010cfu/g料液。所述乳桿菌菌株優(yōu)選為保藏號cgmccno.13110的乳桿菌菌株。保藏號cgmccno.13110的乳桿菌菌株能產(chǎn)乳酸等發(fā)酵產(chǎn)物，具有酸香味的特點。所述乳桿菌制備方法沒有特殊限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的乳桿菌的制備方法即可。本發(fā)明中，所述地衣芽孢桿菌接種乳桿菌接種的間隔時間優(yōu)選為36～64h。接種乳桿菌后，共同發(fā)酵。所述共同發(fā)酵的時間優(yōu)選為48～64h，更優(yōu)選為52～60h，更優(yōu)選為55h。本發(fā)明中，將地衣芽孢桿菌接種和乳桿菌接種的間隔時間控制在36～64h，使兩種菌的發(fā)酵優(yōu)勢得到全美發(fā)揮，具體是地衣芽胞桿菌桿菌發(fā)酵需要兼性厭氧環(huán)境，將發(fā)酵物料轉(zhuǎn)化為利于被動物吸收利用的小分子物質(zhì)，同時間隔一段時間再接入乳桿菌，不僅保證地衣芽孢桿菌正常發(fā)酵代謝，還能產(chǎn)酸能夠改變發(fā)酵產(chǎn)物的適口性。本發(fā)明中，發(fā)酵的溫度優(yōu)選為30～37℃，更優(yōu)選為32～36℃，最優(yōu)選為35℃。所述發(fā)酵過程中ph值保持自然狀態(tài)即可。本發(fā)明提供了所述富含益生菌和活性肽的飼料在增強養(yǎng)殖動物體質(zhì)方面的應(yīng)用。本發(fā)明中，所述增強養(yǎng)殖動物體質(zhì)包括增加了動物的采食量和提高動物的免疫性能。所述增加了動物的采食量有利于提高了動物的生產(chǎn)性能。所述提高動物的免疫性能有利于提高動物的抗病性。本發(fā)明中，所述富含益生菌和活性肽的飼料的用法優(yōu)選將所述富含益生菌和活性肽的飼料與其他食用飼料混合，形成每餐飼料。所述富含益生菌和活性肽的飼料的質(zhì)量優(yōu)選不低于養(yǎng)殖動物的每餐飼料總質(zhì)量的5％，更優(yōu)選為8～15％，最優(yōu)選為10％。下面結(jié)合實施例對本發(fā)明提供的一種富含益生菌和活性肽的飼料及其應(yīng)用進行詳細的說明，但是不能把它們理解為對本發(fā)明保護范圍的限定。實施例1將保藏號cgmccno.13109地衣芽孢桿菌菌株和保藏號cgmccno.13110乳桿菌菌株接種到斜面培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)箱中37℃條件下培養(yǎng)24h?；罨瘍纱?。其中地衣芽孢桿菌斜面培養(yǎng)基配方如下：1％蛋白胨1％氯化鈉，0.5％酵母膏和2.5％的瓊脂，ph值為7.0。乳桿菌培養(yǎng)基配方如下：1％酪蛋白胨、1％牛肉膏、0.5％酵母提取物、0.25％葡萄糖、0.5％乙酸鈉、0.2％檸檬酸二銨、0.1％吐溫80、0.2％磷酸氫二鉀、0.2％無水硫酸鎂、0.005％硫酸錳、2％碳酸鈣、2.5％的瓊脂，ph值為6.4。將活化后的地衣芽孢桿菌和乳桿菌按照5％的接種量接種至液體種子培養(yǎng)基中，在37℃條件下，轉(zhuǎn)速為180r/min的搖床上培養(yǎng)5d，得到地衣芽孢桿菌和乳桿菌的種子液。其中地衣芽孢桿菌液體培養(yǎng)基的配方為2％葡萄糖，0.1％k2hpo4，0.05％mgso4，5％(v/v)的土豆汁(20％比例配制)，ph值為7。乳桿菌液體培養(yǎng)基的配方為1％酪蛋白胨、1％牛肉膏、0.5％酵母提取物、0.25％葡萄糖、0.5％乙酸鈉、0.2％檸檬酸二銨、0.1％吐溫80、0.2％磷酸氫二鉀、0.2％無水硫酸鎂、0.005％硫酸錳、2％碳酸鈣，ph值為6.4。種子液中菌體濃度檢測方法，步驟如下：a確定最大吸收峰值取一個培養(yǎng)種子的錐形瓶，將錐形瓶中的培養(yǎng)液放入比色皿中，在400-700nm的波長范圍內(nèi)測定最大吸收波長，實驗得出的結(jié)論是600nm處有最大光吸收。b重量法測定菌體濃度將離心管烘干至恒重冷卻后稱量(w1)，再將20ml種子培養(yǎng)液倒入離心管中，分別置于5500r/min離心機中離心15min，離心兩次，傾去上清液，80℃條件下干燥后稱量(w2)。菌體濃度(mg/ml)＝(w2-w1)/20c測定種子培養(yǎng)基的吸光度取與上面重量法相同的錐形瓶，按照2、5、10、20倍稀釋。在600nm的波長下，用無菌水做對照，以1cm比色皿分別測定其吸光值。d繪制乳酸菌菌體濃度標準曲線以菌體濃度為橫坐標，吸光度(od值)為縱坐標，繪制乳酸菌菌體濃度與吸光度之間的標準曲線；繪制的乳酸菌菌體濃度與吸光度之間的標準曲線如圖1所示，測定得到的菌體濃度為12.5mg/ml。按照上述方法繪制地衣芽孢桿菌與吸光度之間的標準曲線。繪制的地衣芽孢桿菌菌體濃度與吸光度之間的標準曲線如圖2所示，測定得到的菌體濃度為6.25mg/ml。f將上述兩種菌將兩種菌分別進行稀釋涂布法得出單位體積內(nèi)含有的菌落數(shù)，再將菌落數(shù)與od值做標準曲線，再根據(jù)接種體積得到菌種在固態(tài)發(fā)酵飼料中的添加菌落數(shù)。實施例2將玉米蛋白粉和麩皮的質(zhì)量比為7：3混合形成混料，所述混料和水的質(zhì)量體積比為1g：1.3ml，接入實施例1中制備得到的地衣芽孢桿菌和乳桿菌種子液，地衣芽孢桿菌的接種量為5×108cfu/g料液，乳桿菌的接種量為1×109cfu/g料液，ph自然，溫度37℃，先加入地衣芽孢桿菌發(fā)酵，間隔48h后加入乳桿菌，共同發(fā)酵48h，得到發(fā)酵產(chǎn)物。(1)采用folin-酚法檢測發(fā)酵產(chǎn)物中的可溶性肽的含量。(2)抗氧化性采用鄰苯三酚自氧化法。鄰苯三酚在酸性環(huán)境中穩(wěn)定，但在弱堿性環(huán)境中會發(fā)生自氧化反應(yīng)，鄰苯三酚在自氧化時只接受一個電子生成超氧陰離子自由基(o2+o2-)，并在其自氧化過程中以一定的速率產(chǎn)生有色中間產(chǎn)物，sod可以將o2-歧化分解成h2o2和o2，從而抑制鄰苯三酚自氧化速率。2o2-+2h+—h2o2+o2由此可以依據(jù)sod分解o2-的能力而間接推算sod活性(每分鐘反應(yīng)液中sod抑制50％時的反應(yīng)速率)即為sod活力單位。采用4.5ml體系對各組分進行鄰苯三酚自氧化的測定。tris-hcl(ph8.2，0.05mol/l)4.5ml，25℃水浴保溫20min，對照管中加0.01mol/lhcl10μl和4.5mltris-hcl，空白管中加入25℃預(yù)熱的45mmol/l的鄰苯三酚10μl和4.5mltris-hcl混勻，開始計時，反應(yīng)30s后，于325nm處作時間掃描，反應(yīng)4min，空白最佳的自氧化速率控制為0.070±0.002a/min，取玉米蛋白水解液10μl加入到tris-hcl緩沖液4.5ml中，同25℃預(yù)熱的45mmol/l的鄰苯三酚10μl混勻，30s后，于325nm處掃描，最后計算抗氧化活力。計算公式：酶活力(u/ml)＝(oda-odb)/oda×100％/50％×v1×n/v2其中：v1-反應(yīng)液總體積，mlv2-測定樣品的體積，mln-樣品稀釋倍數(shù)oda-鄰苯三酚自氧化法速率自氧化速率的測定：鄰苯三酚的加入量為10.5微升，做時間掃描，記錄初始的吸光值和4丙氨酸與亮氨酸的含量≥1500mg/l，氨基酸總量平均≥6000mg/l分鐘結(jié)束時的吸光值，結(jié)束時的吸光值-初始的吸光值/4。(3)發(fā)酵產(chǎn)物中有益菌的測定采用的是平板菌落計數(shù)法，首先進行稀釋涂布，然后進行發(fā)酵，觀察平板菌落個數(shù)。檢測結(jié)果：(1)采用folin-酚法檢測發(fā)酵產(chǎn)物中的可溶性肽的含量。檢測結(jié)果為可溶性肽含量為110mg/g。(2)發(fā)酵產(chǎn)物的抗氧化性為117.67u/ml。(3)菌體濃度達到1×109cfu/g。實施例3將玉米蛋白粉和麩皮的質(zhì)量比為3：2混合形成混料，所述混料和水的質(zhì)量體積比為1g：1.5ml，接入實施例1中制備得到的地衣芽孢桿菌和乳桿菌種子液，地衣芽孢桿菌的接種量為1×109cfu/g料液、乳酸菌的接種量為1×1010cfu/g料液，ph自然，溫度35℃，先加入地衣芽孢桿菌，間隔36h后加入乳桿菌，共同發(fā)酵64h，得到發(fā)酵產(chǎn)物。(1)采用folin-酚法檢測發(fā)酵產(chǎn)物中的可溶性肽的含量。檢測結(jié)果為可溶性肽含量為94.02mg/g。(2)按照實施例2所述方法檢測發(fā)酵產(chǎn)物抗氧化性。檢測結(jié)果發(fā)酵產(chǎn)物的抗氧化性為95u/ml。(3)按照實施例2所述方法檢測發(fā)酵產(chǎn)物中菌體濃度。檢測結(jié)果為菌體濃度達到5×108cfu/ml。實施例4將玉米蛋白粉和麩皮的質(zhì)量比為4：1混合形成混料，所述混料質(zhì)量和水的體積比為1g：1ml，接入實施例1中制備得到的地衣芽孢桿菌和乳桿菌種子液，地衣芽孢桿菌的接種量為0.5×109cfu/g料液、乳酸菌的接種量為0.5×1010cfu/g料液，ph自然，溫度32℃，先加入地衣芽孢桿菌，間隔40h后加入乳桿菌，共同發(fā)酵55h，得到發(fā)酵產(chǎn)物。(1)采用folin-酚法檢測發(fā)酵產(chǎn)物中的可溶性肽的含量。檢測結(jié)果為可溶性肽含量為96.14mg/g。(2)按照實施例2所述方法檢測發(fā)酵產(chǎn)物抗氧化性。檢測結(jié)果發(fā)酵產(chǎn)物的抗氧化性為101u/ml。(3)按照實施例2所述方法檢測發(fā)酵產(chǎn)物中菌體濃度。檢測結(jié)果為菌體濃度達到1×108cfu/g。對比例1玉米蛋白粉和麩皮比為7：3，料水比1g:1.3ml，ph自然，溫度33℃，凝結(jié)芽孢桿菌的接種量為5×108個/g料液，乳桿菌的接種量為1×109個/g料液，先加入凝結(jié)芽孢桿菌，間隔48h后加入乳酸菌，共同發(fā)酵48h，檢測可溶性肽和有益菌含量。經(jīng)檢測，可溶性肽含量為59.34mg/g，有益菌數(shù)量是107cfu/ml，抗氧化活性為60u/ml。對比例2玉米蛋白粉和麩皮比為7：3，料水比1g:1.3ml，ph自然，溫度37℃，乳桿菌的接種量為1×109個/g料液，地衣芽孢桿菌的接種量為5×108個/g干基，先加入乳酸菌，間隔48h后加入地衣芽孢桿菌，共同發(fā)酵48h，檢測小肽和有益菌含量。經(jīng)檢測，小肽含量為77.37mg/g，有益菌數(shù)量是108cfu/g，抗氧化活性為85.32u/ml。實施例6實施例2制備的飼料發(fā)酵前后蛋白質(zhì)的分子量分布(見圖2)表1發(fā)酵前后蛋白質(zhì)的分子量分布(kda)通過表1可以看出，發(fā)酵后大分子量蛋白顯著降低，而≤10kda的蛋白質(zhì)顯著增加，說明發(fā)酵后提高了可溶性肽的含量。實施例7將實施例2和對比例1制備得到的飼料按5％的添加量飼喂三黃肉雞，以正常日糧為空白對照組，每組分三個重復(fù)，每個重復(fù)10只雞，飼養(yǎng)三黃雞21d，每周對三黃雞進行稱重，計算平均體增重和的料重比(每公斤體重需要吃的飼料重)。日糧參照肉雞nrc(1994)的標準能量和蛋白進行配制，對玉米蛋白粉發(fā)酵飼料(發(fā)酵飼料)替代日糧中的玉米蛋白粉不同比例進行了營養(yǎng)安全性評價。日糧飼料中各營養(yǎng)成分組成和實驗組營養(yǎng)成分如表2所示。表2實驗組和對照組中日糧組成注：每千克預(yù)混料中各種維生素的添加量：維生素a，15,000iu；維生素d3，3,000iu；維生素e，25iu；維生素k3，5mg；維生素b1，2mg；維生素b2，7mg；維生素b6，4mg；維生素b12，25μg。其它所需物質(zhì)的添加量：泛酸：11.04mg；煙酸：35mg；葉酸：1mg；生物素15μg；氯化膽堿，250mg；cu，1.6mg；mn，60mg；zn，45mg；fe，80mg；i，0.4mg；se，0.15mg。預(yù)飼期7d，正飼期21d，自由飲水，室溫23℃。21d，28d，35d和42d，稱量體增重和采食量，計算飼料轉(zhuǎn)化率(見表3)。表3發(fā)酵玉米蛋白粉對三黃雞生長性能的影響由表3可知，第28d，飼喂含5％所述實施例2的發(fā)酵飼料顯著高于添加5％所述對比例的發(fā)酵飼料的三黃雞體增重，且兩者均顯著高于對照組(p＜0.05)，表明飼喂發(fā)酵飼料顯著增加了肉雞的生長性能，且實施例2的發(fā)酵飼料增加更為顯著。在35d和42d，飼喂實施例2的三黃雞的體增重和飼料轉(zhuǎn)化率顯著高于對照組(p＜0.05)，而飼喂對比例1的三黃雞的體增重和飼料轉(zhuǎn)化率與對照組無顯著差別(p＞0.05)，表明自主篩選的地衣芽孢桿菌和乳酸菌比其他菌的優(yōu)勢更為明顯。實施例8將實施例5處理得到的3組三黃雞作為對象測定脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)。具體委托哈爾濱電力醫(yī)院測定。表4三黃雞為對象測定得到的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)item對照對比例1實施例2標準誤脾臟指數(shù)2.35c3.84b5.06a0.42胸腺指數(shù)1.10c1.30b1.53a0.07由表4可知，添加實施例2的發(fā)酵飼料和添加對比例1的發(fā)酵飼料均顯著增加了脾臟指數(shù)(p<0.05)。不同比例添加該飼料都顯著增加了三黃雞的胸腺指數(shù)(p<0.05)和胸腺指數(shù)，說明該飼料的添加增加了機體的免疫力，且添加實施例2的發(fā)酵飼料的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)顯著高于添加對比例1的發(fā)酵飼料(p<0.05)，表明實施例的發(fā)酵飼料比其他菌發(fā)酵的優(yōu)勢更明顯。實施例9將實施例5處理得到的6組三黃雞為對象，測定總蛋白(tp)、白蛋白(alb)、球蛋白(glb)、轉(zhuǎn)谷酰胺酶(glt)和血清尿素氮(bun)，具體委托哈爾濱電力醫(yī)院測定。測定結(jié)果見表5。表5發(fā)酵玉米蛋白粉對三黃雞中血清球蛋白含量的影響由表5可知，添加實施例2的發(fā)酵飼料與添加對比例1的發(fā)酵飼料顯著增加了三黃雞的白蛋白和球蛋白的含量p<0.05，且添加實施例2的發(fā)酵飼料顯著高于添加對比例1的發(fā)酵飼料，由于球蛋白的含量能一定程度上反映機體的免疫力，白蛋白代表氮沉積的能力，說明添加實施例2的發(fā)酵飼料在生長速度和免疫力方面優(yōu)于添加對比例1的發(fā)酵飼料。從bun的含量看，添加實施例2的發(fā)酵飼料與添加對比例1的發(fā)酵飼料顯著降低了三黃雞的血清尿素氮的含量p<0.05，且添加實施例2的發(fā)酵飼料顯著低于添加對比例1的發(fā)酵飼料(p<0.05)，說明蛋白質(zhì)沉積的較多，生長速度較快。實施例10將實施例5得到的三黃雞屠宰以后，對黃羽雞的十二指腸、空腸、回腸進行處理，通過橫向切片觀察各部分絨毛狀態(tài)，測量各部分絨毛長度(切片委托齊齊哈爾大學(xué)醫(yī)學(xué)院制作)，對其進行分析，結(jié)果如表6所示。表6發(fā)酵玉米蛋白粉對三黃雞小腸絨毛形態(tài)的影響通過表6可知，日糧添加對比例1的發(fā)酵飼料和添加實施例2的發(fā)酵飼料的三黃雞的十二指腸絨毛長度顯著高于對照組日糧(p＜0.05)，且日糧添加實施例2的發(fā)酵飼料的十二指腸絨毛長度顯著高于添加對比例1發(fā)酵飼料，對比例1，同時根據(jù)圖4～9可以看出，可以判斷發(fā)酵玉米蛋白粉生產(chǎn)的蛋白飼料可以增加十二指腸的絨毛長度，使得三黃雞的消化吸收能力更強，從而縮短養(yǎng)殖周期，增加了養(yǎng)殖的利潤。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。當(dāng)前第1頁12