一種蛋雞用益生菌發(fā)酵中草藥飼料添加劑的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明專利屬于飼料生產(chǎn)加工領(lǐng)域，具體涉及一種蛋雞用飼料添加劑的制備方 法，特別涉及一種蛋雞用益生菌發(fā)酵中草藥飼料添加劑的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 抗生素在畜禽生產(chǎn)過程中長期使用所帶來的負面效應備受關(guān)注，開發(fā)綠色、安全、 高效的新型飼料添加劑來替代抗生素勢在必行。中草藥作為植物性資源，既具有藥理作用， 又有營養(yǎng)功能，同時具有毒副作用小、無殘留、無耐藥性的優(yōu)點，一直以來受到了畜牧業(yè)工 作者的青睞。
[0003] 中草藥作為植物性資源，既具有藥理作用，又有營養(yǎng)功能，同時具有毒副作用小、 無殘留、無耐藥性的優(yōu)點，一直以來受到了畜牧業(yè)工作者的青睞。女貞子作為中草藥的一 種，具有保肝護肝、增強免疫、抗菌抗病毒、抗氧化、降血糖血脂等功效。在蛋雞的研究中表 明，添加女貞子粉有促進生產(chǎn)性能和提高免疫機能的作用。但是，目前來看要達到女貞子的 作用效果需要在日糧中添加不低于1.0%的量，這無形中增加了飼料成本和添加難度。因 此，通過一系列方式來提高女貞子中活性成分在飼料中的濃度是降低女貞子添加量的重要 措施。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種蛋雞用益生菌發(fā)酵中草藥飼料添加劑的制備方法，從而 提高女貞子中的活性成分在飼料添加劑中的有效濃度，進而在保證女貞子在促進蛋雞生產(chǎn) 性能和提高免疫機能作用的同時，能夠起到降低女貞子的添加量的作用，從而減少飼料的 成本與女貞子的添加難度。
[0005] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種蛋雞用益生菌發(fā)酵中草 藥飼料添加劑的制備方法，所用益生菌為乳酸菌和枯草芽孢桿菌，所用的中草藥為女貞子， 包括如下步驟： (1) 益生菌的種子培養(yǎng) 將乳酸菌培養(yǎng)于MRS液體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)至對數(shù)生長中后期，待檢測活菌數(shù)不低于 I X 10s cfu/mL時，停止培養(yǎng)，備用； 將枯草芽孢桿菌培養(yǎng)于牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)至穩(wěn)定生產(chǎn)期，待檢測活菌 數(shù)不低于IX IO9 cfu/mL時，停止培養(yǎng)，備用； (2) 發(fā)酵用益生菌種子液的制備 a. 培養(yǎng)液制備 收取啤酒生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的啤酒糖化液，按照IL啤酒糖化液中添加尿素2. 5g、葡萄糖 5. 0g、吐溫SOmL的比例，向所收取的啤酒糖化液中添加尿素、葡萄糖與吐溫，攪拌均勻即制 成培養(yǎng)液備用； b. 乳酸菌種子液制備 按照5%的接種比例將經(jīng)步驟（I)培養(yǎng)后的乳酸菌接種于所制備的培養(yǎng)液中，調(diào)整pH為 6. 3~6. 5后，進行培養(yǎng)18~24h，以獲取乳酸菌種子液； c.枯草芽孢桿菌種子液制備 按照5%的接種比例將經(jīng)步驟（1)培養(yǎng)后的枯草芽孢桿菌接種于所制備的培養(yǎng)液中，調(diào) 整pH至7. 2~7. 5后，進行培養(yǎng)18~24h，以獲取枯草芽孢桿菌種子液； (3) 制作發(fā)酵物料 將女貞子表面消毒后，制成女貞子粉，然后取80份女貞子粉、10份麩皮、5份玉米面、 4. 5份豆柏粉、0. 5份蔗糖混合均勻制成100份固體發(fā)酵物料，然后將所制得固體發(fā)酵物料 與滅菌蒸餾水混合，調(diào)整pH至7. 2,制得發(fā)酵物料； (4) 添加益生菌發(fā)酵 分兩步先后向步驟（3)所制得的發(fā)酵物料中加入步驟（2)所制備的益生菌種子液，具 體的加入方法為：首先將枯草芽孢桿菌種子液按照5%的比例加入發(fā)酵物料中，調(diào)整pH為 7. 2~7. 5,然后在發(fā)酵罐中進行密封發(fā)酵；當發(fā)酵至5~6h時，再將乳酸菌種子液按照10%的 比例加入發(fā)酵罐中的發(fā)酵物料中，攪拌均勻，并再次調(diào)整pH至6. 3~6. 5,繼續(xù)進行密封發(fā) 酵，整個發(fā)酵過程的時間為36~48h，發(fā)酵的溫度為37. 0~37. 5 °C ; (5) 發(fā)酵后物料的處理 將步驟（4)發(fā)酵完成后所得的物料于65°C ~70°C溫度下烘干，烘干后進行粉碎，過60 目篩，然后以500g為單位，用復合薄膜進行真空包裝，即得到用于蛋雞的發(fā)酵中草藥飼料 添加劑。
[0006] 所述MRS液體培養(yǎng)基的制作方法為：取牛肉蛋白粉10g、牛肉浸膏10g、酵母浸膏 5g、葡萄糖20g、醋酸鈉5g、檸檬酸二銨2g、吐溫80 0.1 mU硫酸鎂0. 58g、硫酸錳0. 28g、 蒸溜水1000 mL混合均勻，用高壓滅菌鍋在121°C滅菌20min-30min，然后調(diào)節(jié)pH至6. 3,即 可制得MRS液體培養(yǎng)基。
[0007] 所述的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的制作方法為：取牛肉膏5g、蛋白胨IOg與氯化 鈉5g加入1000 mL蒸餾水中，攪拌均勻，然后調(diào)整pH至7. 2~7. 5,即可制得牛肉膏蛋白胨液 體培養(yǎng)基。
[0008] 本發(fā)明具有以下有益效果： 第一，本發(fā)明所述的方法提高了女貞子中的活性成分在飼料添加劑中的有效濃度，進 而在保證女貞子在促進蛋雞生產(chǎn)性能和提高免疫機能作用的同時，能夠起到降低女貞子的 添加量的作用，從而減少飼料的成本與女貞子的添加難度； 第二，本發(fā)明所采用益生菌進行中草藥發(fā)酵，既提高了中草藥的有效成分，又增加了添 加劑中益生菌的菌體蛋白及其有益代謝產(chǎn)物，如酶類等； 第三，在添加益生菌進行發(fā)酵時，采用分步進行，先添加枯草芽孢桿菌，發(fā)酵一段時間 后，再添加乳酸菌發(fā)酵，這樣做的目的是在發(fā)酵前期物料中存在空氣，而枯草芽孢桿菌是好 氧菌，這樣有利于枯草芽孢桿菌的充分繁殖，隨后進入?yún)捬醐h(huán)境，乳酸菌為厭氧菌，更有利 于乳酸菌的生長繁殖。
【具體實施方式】
[0009] 下面通過具體實施例以及試驗例對本發(fā)明所述的方法作進一步的說明。
[0010] 實施例1 : 一種蛋雞用益生菌發(fā)酵中草藥飼料添加劑的制備方法，所用益生菌為乳酸菌和枯草芽 孢桿菌，所用的中草藥為女貞子，包括如下步驟： 1、 益生菌的種子培養(yǎng) 將乳酸菌培養(yǎng)于MRS液體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)至對數(shù)生長中后期，待檢測活菌數(shù)不低于 IXlO8 cfu/mL時，停止培養(yǎng)，備用；將枯草芽孢桿菌培養(yǎng)于牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中，培 養(yǎng)至穩(wěn)定生產(chǎn)期，待檢測活菌數(shù)不低于IX IO9 cfu/mL時，停止培養(yǎng)，備用； 其中，所述的MRS液體培養(yǎng)基的制作方法為：取牛肉蛋白粉10g、牛肉浸膏10g、酵母 浸膏5g、葡萄糖20g、醋酸鈉5g、梓檬酸二銨2g、吐溫80 0.1 mU硫酸鎂0. 58g、硫酸猛0. 28g、蒸溜水1000 mL混合均勾，用高壓滅菌鍋在121°C滅菌20min-30min，然后調(diào)節(jié)pH至6. 5 即可； 所述的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的制作方法為：取牛肉膏5g、蛋白胨IOg與氯化鈉5g 加入1000 mL蒸餾水中，攪拌均勻，然后調(diào)整pH至7. 2即可； 2、 發(fā)酵用益生菌種子液的制備 2. 1、培養(yǎng)液制備 收取啤酒生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的啤酒糖化液，按照IL啤酒糖化液中添加尿素2. 5g、葡萄糖 5. 0g、吐溫SOmL的比例，向所收取的啤酒糖化液中添加尿素、葡萄糖與吐溫，攪拌均勻即制 成培養(yǎng)液備用； 2. 2、乳酸菌種子液制備 按照5%的接種比例將經(jīng)步驟1培養(yǎng)后的乳酸菌接種于所制備的培養(yǎng)液中，調(diào)整pH為 6. 3后，進行培養(yǎng)18h，以獲取乳酸菌種子液； 2、 3、枯草芽孢桿菌種子液制備 按照5%的接種比例將經(jīng)步驟（1)培養(yǎng)后的枯草芽孢桿菌接種于所制備的培養(yǎng)液中，調(diào) 整pH至7. 2后，進行培養(yǎng)18h，以獲取枯草芽孢桿菌種子液； 3、 制作發(fā)酵物料 將女貞子表面消毒后，制成女貞子粉，然后取80份女貞子粉、10份麩皮、5份玉米面、 4. 5份豆柏粉、0. 5份蔗糖混合均勻制成100份固體發(fā)酵物料，然后將所制得固體發(fā)酵物料 與滅菌蒸餾水混合，調(diào)整pH至7. 2,制得發(fā)酵物料； 4、 添加益生菌發(fā)酵 分兩步先后向步驟3所制得的發(fā)酵物料中加入步驟2所制備的益生菌種子液，具體的 加入方法為：首先將枯草芽孢桿菌種子液按照5%的比例加入發(fā)酵物料中，調(diào)整pH為7. 2， 然后在發(fā)酵罐中進行密封發(fā)酵；當發(fā)酵至5~6h時，再將乳