本發(fā)明涉及食品工程領(lǐng)域，特別地，涉及一種液體發(fā)酵高靈芝三萜靈芝酵素及其制備工藝。
背景技術(shù)：
：靈芝被我國(guó)歷代醫(yī)藥學(xué)家譽(yù)為扶正固本的“瑞草”，對(duì)靈芝的藥理作用已有大量研究，研究表明靈芝具有廣泛的藥理作用，如抗腫瘤作用、免疫調(diào)節(jié)作用、抗放射與抗化療作用、鎮(zhèn)靜安神作用、強(qiáng)心及抗心肌缺血作用、調(diào)節(jié)血脂作用、降血糖作用、平喘作用、保肝作用、抗缺氧和抗衰老作用等。隨著現(xiàn)代科學(xué)對(duì)靈芝研究的深入，至目前為止，總共分離到350余種化學(xué)成分，主要是多糖類、肽類、氨基酸類、萜類、生物堿類、甾醇類、維生素類等。酵素是一種由氨基酸組成的具有特殊生物活性的物質(zhì)，它存在于所有活的動(dòng)植物體內(nèi)，是維持機(jī)體正常功能，消化食物，修復(fù)組織等生命活動(dòng)的一種必需物質(zhì)。酵素對(duì)人體有極大的影響，是生命正常新陳代謝中氧化還原反應(yīng)不可或缺的催化劑。人體中的新陳代謝，或所有的生化作用全都需要靠酵素幫忙才能發(fā)揮作用，甚至產(chǎn)生治療疾病的效果，因此酵素近來(lái)成為養(yǎng)生的熱門健康食品。液體深層發(fā)酵生產(chǎn)靈芝技術(shù)，在我國(guó)已經(jīng)相當(dāng)成熟，但主要利用發(fā)酵產(chǎn)物中的靈芝菌絲體，而占總體發(fā)酵產(chǎn)量98%的靈芝發(fā)酵液由于處理時(shí)能耗較大，儲(chǔ)存困難，一直被許多生產(chǎn)企業(yè)直接排放，造成巨大的浪費(fèi)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明目的在于提供一種高靈芝三萜的液體發(fā)酵靈芝酵素及其制備工藝，以解決技術(shù)問(wèn)題。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種液體發(fā)酵高靈芝三萜靈芝酵素及其制備工藝。一種液體發(fā)酵高靈芝三萜靈芝酵素的制備工藝，包括以下步驟：1)、靈芝菌種培養(yǎng)：取靈芝菌種在25～26℃菌種培養(yǎng)基中培養(yǎng)20～30天；2)、搖床種：保持溫度在25～26℃，在3L三角瓶中裝入液體PDA培養(yǎng)基，然后置于振蕩器上，攪拌3～4天，控制攪拌速度為100～120轉(zhuǎn)/min；3)、一級(jí)放大：保持溫度在25～26℃，將搖床種培養(yǎng)料負(fù)壓吸入至300L種子罐中，培養(yǎng)2～3天；4)、二級(jí)放大：保持溫度在25～26℃，將一級(jí)種子罐培養(yǎng)料負(fù)壓吸入至1.5噸的種子罐中，培養(yǎng)2～3天；5)、發(fā)酵培養(yǎng)：保持溫度在25～26℃，將二級(jí)種子罐培養(yǎng)料負(fù)壓吸入至7噸的發(fā)酵罐中，發(fā)酵培養(yǎng)48小時(shí)左右；6)、板框壓濾：將所述步驟5)發(fā)酵后的發(fā)酵料放罐，用板框壓濾機(jī)5～6MPa的壓力壓濾，除去固體物，得到靈芝發(fā)酵原液；7)、將靈芝發(fā)酵原液加入至10噸發(fā)酵罐中，用溫度為121度，壓力為0.1MPa的蒸汽保持30分鐘；8)、選取新鮮水果或蔬菜，分別通過(guò)壓榨的方式制取果蔬原漿，待用；或?qū)⒐咴瓭{混合得到混合原漿，待用；9)、根據(jù)果蔬原漿或混合原漿與靈芝發(fā)酵原液按1：4～6比例加入10噸發(fā)酵罐中，并同時(shí)加入10～20%的果寡糖攪拌混合，密閉發(fā)酵，發(fā)酵溫度為26~28℃發(fā)酵時(shí)長(zhǎng)為45~60天；10)、將所述步驟9)發(fā)酵后的靈芝酵素注入至勻質(zhì)機(jī)中勻質(zhì)后，即得靈芝酵素液；通過(guò)灌裝消毒包裝即獲靈芝酵素產(chǎn)品。優(yōu)選的，所述的步驟1)中，所述菌種培養(yǎng)基的配方組成為：馬鈴薯200～250g、葡萄糖20～25g、磷酸二氫鉀3～4g、七水硫酸鎂1.5～2g、維生素B110～20mg、瓊脂18～20g、水1000ml。優(yōu)選的，所述的步驟2)中，所述液體PDA培養(yǎng)基的配方組成為：馬鈴薯200～250g、葡萄糖20～25g、磷酸二氫鉀3～4g、七水硫酸鎂1.5～2g、維生素B110～20mg、水1000ml。優(yōu)選的，所述的步驟5)中，從步驟4)種子罐中移入的培養(yǎng)料與步驟5)中的培養(yǎng)基的質(zhì)量比為1:5。優(yōu)選的，所述的步驟5)中，按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方組成為：玉米粉1～3％、蔗糖2～4％、磷酸二氫鉀0.01～0.02％、硫酸銨0.2～0.3％、酵母粉0.2～0.4％、豆油0.05～0.1％、余量為水。優(yōu)選的，所述的步驟5)中，待同時(shí)達(dá)到以下標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，發(fā)酵結(jié)束：a)、待靈芝菌絲上無(wú)明顯芽頭和鎖狀聯(lián)合現(xiàn)象，且菌絲變細(xì)，菌絲原生質(zhì)凝集，菌絲有自溶現(xiàn)象發(fā)生時(shí)；b)、菌絲濕重達(dá)到15～20％；c)、培養(yǎng)基的pH值為3.0～3.5。優(yōu)選的，所述的步驟9)中，所述的水果或蔬菜為：檸檬、蘋(píng)果、葡萄、奇異果、火龍果、金桔、柳橙、木瓜、鳳梨、青梅、西紅柿、甜菜根中的一種或多種。所述的步驟5)中，再次加入培養(yǎng)基的作用是擴(kuò)大培養(yǎng)（從1.5噸種子罐移種到7噸發(fā)酵罐）靈芝增殖所需營(yíng)養(yǎng)的供給。所述的步驟5)中，限定發(fā)酵結(jié)束的條件目的是讓靈芝菌絲在生長(zhǎng)較茁壯、合成的功效成分含量較高、菌絲量較多較粗壯時(shí)終止發(fā)酵（終止培養(yǎng)），這樣得到的發(fā)酵培養(yǎng)料功效成分含量高、產(chǎn)量高。所述的步驟9)中，加入果寡糖的益處是：果寡糖又稱低聚果糖，是雙歧桿菌、乳酸菌等有益菌的增殖因子，是非常好的益生元，有利于果蔬菜自然發(fā)酵時(shí)有益菌的繁殖。另外，果寡糖也是人體腸道中雙歧桿菌、乳酸菌等有益菌的增殖因子，果蔬菜發(fā)酵后未完全利用的果寡糖能很好地改善人體腸道益生菌的生長(zhǎng)。本發(fā)明具有以下有益效果：本發(fā)明的液體發(fā)酵高靈芝三萜靈芝酵素的制備工藝，充分利用了液體深層發(fā)酵技術(shù)培養(yǎng)靈芝獲得靈芝發(fā)酵原液作為水果或復(fù)合果蔬酵素的生產(chǎn)的主要介質(zhì)，生產(chǎn)各類水果酵素或復(fù)合酵素，使所制酵素產(chǎn)品含有大量靈芝胞外多糖、活性酶等功效成份，大大提高酵素產(chǎn)品的功效，使產(chǎn)品具有更好的免疫調(diào)節(jié)、鎮(zhèn)靜安神、調(diào)節(jié)腸胃道等保健功能，并提高靈芝發(fā)酵生產(chǎn)的附加值，減少生產(chǎn)排放，達(dá)到循環(huán)生產(chǎn)的目標(biāo)。除了上面所描述的目的、特征和優(yōu)點(diǎn)之外，本發(fā)明還有其它的目的、特征和優(yōu)點(diǎn)。下面將對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明。附圖說(shuō)明圖1：本發(fā)明的工藝流程圖。圖2：菌絲濕重與最終靈芝酵素中靈芝三萜的含量關(guān)系圖，其中橫坐標(biāo)為菌絲濕重（%），縱坐標(biāo)為最終靈芝酵素中靈芝三萜的含量（mg/L）。具體實(shí)施方式以下對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，但是本發(fā)明可以根據(jù)權(quán)利要求限定和覆蓋的多種不同方式實(shí)施。實(shí)施例1：一種液體發(fā)酵高靈芝三萜靈芝酵素的制備工藝，包括如下步驟：1)、靈芝菌種培養(yǎng)：取靈芝菌種在25～26℃菌種培養(yǎng)基中培養(yǎng)20～30天，所述菌種培養(yǎng)基的配方組成為：馬鈴薯200g、葡萄糖20g、磷酸二氫鉀3g、七水硫酸鎂1.5g、維生素B110mg、瓊脂18g、水1000ml；2)、搖床種：保持溫度在25～26℃，在3L三角瓶中裝入液體PDA培養(yǎng)基（所述步驟1)菌種培養(yǎng)基去除瓊脂），然后置于振蕩器上，培養(yǎng)3～4天，控制攪拌速度為100～120轉(zhuǎn)/min。3)、一級(jí)放大：保持溫度在25～26℃，通過(guò)接種壺把搖床種負(fù)壓吸入一300L種子罐中，培養(yǎng)2～3天。4)、二級(jí)放大：保持溫度在25～26℃，將一級(jí)種子罐中的培養(yǎng)料負(fù)壓吸入到1.5噸的種子罐中，培養(yǎng)2～3天。5)、發(fā)酵培養(yǎng)：保持溫度在25～26℃，將二級(jí)種子罐中的培養(yǎng)料負(fù)壓吸入至7噸的發(fā)酵罐中，發(fā)酵培養(yǎng)48小時(shí)左右。按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)，發(fā)酵培養(yǎng)基的配方組成為：玉米粉2％、蔗糖3％、磷酸二氫鉀0.015％、硫酸銨0.25％、酵母粉0.3％、豆油0.08％、余量為水。待同時(shí)達(dá)到以下標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，發(fā)酵結(jié)束：a)、待靈芝菌絲上無(wú)明顯芽頭和鎖狀聯(lián)合現(xiàn)象，且菌絲變細(xì)，菌絲原生質(zhì)凝集，菌絲有自溶現(xiàn)象發(fā)生時(shí)；b)、菌絲濕重達(dá)到17％；c)、培養(yǎng)基的pH值為3.0～3.5。6)、板框壓濾：發(fā)酵終止時(shí)將所述步驟5)發(fā)酵后的液體培養(yǎng)料放罐，通過(guò)板框壓濾液固分離，用5～6MPa的壓力壓濾，壓干除去固體物，得到靈芝發(fā)酵原液；7)、將靈芝發(fā)酵原液加入至10噸發(fā)酵罐中，用0.1MPa、121℃蒸汽消毒30分鐘。8)、選取蘋(píng)果通過(guò)壓榨的方式獲蘋(píng)果原漿1000L；9)、將蘋(píng)果原漿注入10噸發(fā)酵罐中，并同時(shí)加入700KG的低聚果糖攪拌混合，密閉發(fā)酵，發(fā)酵溫度為28℃發(fā)酵時(shí)長(zhǎng)為60天；10)、將所述步驟9)發(fā)酵后的靈芝酵素注入至勻質(zhì)機(jī)中勻質(zhì)后，即得6500L靈芝酵素液。實(shí)施例2：一種液體發(fā)酵高靈芝三萜靈芝酵素的制備工藝，包括如下步驟：1)、靈芝菌種培養(yǎng)：培養(yǎng)溫度為25～26℃，取靈芝菌種在菌種培養(yǎng)基中培養(yǎng)20～30天，所述菌種培養(yǎng)基的配方組成為：馬鈴薯250g、葡萄糖25g、磷酸二氫鉀4g、七水硫酸鎂2g、維生素B120mg、瓊脂20g、水1000ml；步驟2)～步驟4)如同實(shí)施例1；5)、發(fā)酵培養(yǎng)：保持溫度在25～26℃，將所述步驟4)中培養(yǎng)后的培養(yǎng)料負(fù)壓吸入至7噸的發(fā)酵罐中，發(fā)酵培養(yǎng)2-3天。按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方組成為：玉米粉3％、蔗糖4％、磷酸二氫鉀0.02％、硫酸銨0.3％、酵母粉0.4％、豆油0.1％、余量為水；待同時(shí)達(dá)到以下標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，發(fā)酵結(jié)束：a)、待靈芝菌絲上無(wú)明顯芽頭和鎖狀聯(lián)合現(xiàn)象，且菌絲變細(xì)，菌絲原生質(zhì)凝集，菌絲有自溶現(xiàn)象發(fā)生時(shí)；b)、菌絲濕重達(dá)到20％；c)、培養(yǎng)基的pH值為3.0～3.5；6)、板框壓濾：將所述步驟5)發(fā)酵后的液體培養(yǎng)基取出，用6MPa的壓力壓濾，壓干，除去固體物，得到靈芝發(fā)酵原液5200L；7)、將靈芝發(fā)酵原液全部加入至10噸發(fā)酵罐中，注入溫度為121度，壓力為0.1MPa的蒸汽保持60分鐘；8)、選取奇異果、火龍果、金桔、柳橙、木瓜通過(guò)壓榨的方式獲混合水果原漿1500L；9)、將混合水果原漿注入10噸發(fā)酵罐中，并同時(shí)加入1000KG的低聚果糖攪拌混合，密閉發(fā)酵，發(fā)酵溫度為28℃發(fā)酵時(shí)長(zhǎng)為60天；10)、將所述步驟9)發(fā)酵后的靈芝酵素注入至勻質(zhì)機(jī)中勻質(zhì)后，即得7500L靈芝酵素液。實(shí)施例3：一種液體發(fā)酵高靈芝三萜靈芝酵素的制備工藝，包括如下步驟：1)、靈芝菌種培養(yǎng)：培養(yǎng)溫度為25～26℃，取靈芝菌種在菌種培養(yǎng)基中培養(yǎng)20～30天，所述菌種培養(yǎng)基的配方組成為：馬鈴薯225g、葡萄糖22.5g、磷酸二氫鉀3.5g、七水硫酸鎂1.7g、維生素B115mg、瓊脂19g、水1000ml；步驟2)～步驟4)如同實(shí)施例1；5)、發(fā)酵培養(yǎng)：保持溫度在25～26℃，將所述步驟4)中培養(yǎng)后的培養(yǎng)料負(fù)壓吸入至7噸的發(fā)酵罐中，發(fā)酵培養(yǎng)2-3天。按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方組成為：玉米粉2％、蔗糖3％、磷酸二氫鉀0.015％、硫酸銨0.25％、酵母粉0.3％、豆油0.07％、余量為水；待同時(shí)達(dá)到以下標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，發(fā)酵結(jié)束：a)、待靈芝菌絲上無(wú)明顯芽頭和鎖狀聯(lián)合現(xiàn)象，且菌絲變細(xì)，菌絲原生質(zhì)凝集，菌絲有自溶現(xiàn)象發(fā)生時(shí)；b)、菌絲濕重達(dá)到15％；c)、培養(yǎng)基的pH值為3.0～3.5；6)、板框壓濾：將所述步驟5)發(fā)酵后的液體培養(yǎng)基取出，用60kg的壓力壓濾，壓干，除去固體物，得到靈芝發(fā)酵原液5200L；7)、將靈芝發(fā)酵原液全部加入至10噸發(fā)酵罐中，用溫度為121度，壓力為0.1MPa的蒸汽保持30分鐘；8)、選取蘋(píng)果、奇異果、火龍果、鳳梨、青梅、西紅柿、甜菜根通過(guò)壓榨的方式獲混合果蔬原漿1500L；9)、將混合果蔬原漿注入10噸發(fā)酵罐中，并同時(shí)加入600KG的低聚果糖攪拌混合，密閉發(fā)酵，發(fā)酵溫度為28℃發(fā)酵時(shí)長(zhǎng)為60天；10)、將所述步驟9)發(fā)酵后的靈芝酵素注入至勻質(zhì)機(jī)中勻質(zhì)后，即得7000L靈芝酵素液。對(duì)比實(shí)施例1以實(shí)施例1的液體發(fā)酵高靈芝三萜靈芝酵素的制備工藝為標(biāo)準(zhǔn)工藝，調(diào)整步驟5）中菌絲濕重，研究菌絲濕重與最終靈芝酵素中靈芝三萜的含量。表1：菌絲濕重與最終靈芝酵素中靈芝三萜的含量關(guān)系表菌絲濕重%9121517202225靈芝三萜含量mg/L212225265278268235220經(jīng)研究可以知道，本發(fā)明中菌絲濕重與最終靈芝酵素中靈芝三萜的含量成正態(tài)分布關(guān)系（圖2），當(dāng)菌絲濕重為15-20％時(shí)，最終靈芝酵素中靈芝三萜的含量最高。以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3