專利名稱：靈芝三萜提取物的自微乳化納米組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種靈芝三薛提取物的自微乳化納米組合物，該納米組合物 將水不溶性藥物靈芝總?cè)偬崛∥镏苽涑蔀樽晕⑷榛苿?，本發(fā)明還涉及這
種自微乳化納米組合物的制備方法。
背景技術(shù)：
靈芝為多孔菌科真菌，有幾千年的藥用歷史，收載于中國最早的本草學(xué)
專著《神農(nóng)本草經(jīng)》。兩千多年以來，人們一直用靈芝來預(yù)防、治療腫瘤； 現(xiàn)代科學(xué)研究也表明，靈芝有較強的抗腫瘤作用。
靈芝三萜類成分被公認為靈芝抗腫瘤的有效成分之一。但其水溶性很 差，影響其口服吸收及藥效發(fā)揮。
目前市場上靈芝的劑型以傳統(tǒng)制劑為主，比如片劑、膠嚢劑、顆粒劑、 咀嚼片、口服液等，甚至直接將靈芝打成細粉服用。如中國專利 2005102000612.6 7〉開了一種靈芝三辟類成分咀嚼片的制備方法，用環(huán)糊精 包合技術(shù)，將靈芝三萜類物質(zhì)等包合在環(huán)糊精分子內(nèi)，解決了靈芝三萜類成 分味苦的問題。
雖然這些傳統(tǒng)劑型具有一定的療效，但是靈芝中的主要活性組分靈芝總 三碎類組分是脂溶性成分，水溶性不好，生物利用度較低，這些傳統(tǒng)劑型并 不能使靈芝三萜類成分的抗腫瘤作用發(fā)揮到極致。自微乳給藥系統(tǒng)可以適合 靈芝三碎類成分更好的發(fā)揮藥效。自微乳給藥系統(tǒng)(self-microemulsifying dmg delivery system, SMEDDS ) 是一種新型給藥模式。它具有多方面的優(yōu)勢，是一種理想的給藥劑型。該藥 物劑型的出現(xiàn)，給中藥制劑的研究開辟了新的領(lǐng)域。SMEDDS基本特征是 在環(huán)境溫度(通常指在體溫37。C)條件下，遇到胃腸液后，可在胃腸道的蠕 動下自發(fā)形成0/W型微乳，進入體內(nèi)后， 一旦分散它們的體內(nèi)行為和微乳 一致。
與普通乳劑或微乳相比，SMEDDS的優(yōu)勢主要有能在胃腸道條件下 自發(fā)形成微乳；對難溶性或脂溶性藥物具有較高的增溶能力；能夠過濾滅菌， 可作為靜脈給藥制劑；有較高的物理穩(wěn)定性；可以被填充到硬膠嚢或^:膠嚢 中，制備工藝簡單，容易進行工業(yè)生產(chǎn)。此外，還可以在自微乳中加入適當 的賦形劑，制備相應(yīng)的固體自微乳制劑，這些固體自微乳制劑可以提高藥物 的溶出度，并有利于改善生物利用度。
SMEDDS和傳統(tǒng)的片劑和膠嚢劑相比，藥物可快速吸收。對于良好的 自微乳化系統(tǒng)來說，與胃液接觸時可形成包含有溶解藥物的小乳滴，因此， 微乳乳滴中的藥物具有較大的界面積，且藥物在腸中可維持溶解狀態(tài)，從而 更好的分散透過細胞膜。
在藥學(xué)領(lǐng)域眾多自微乳化制劑的研究中，除中藥單體有所涉及外，對中 藥有效組分的研究較少。由于中藥組分組成復(fù)雜，即使是同一類別組分也含 有多種化學(xué)成分，因此中藥有效組分自微乳研究較為困難。所以目前尚未有 靈芝三薛類組分自微乳制劑的研究報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種靈芝三萜提取物的自微乳化納米組合物(自微乳制劑)，該納米組合物從靈芝三碎提取物的特點和抗腫瘤作用出發(fā)，將 水不溶性藥物靈芝總?cè)μ崛∥镏苽涑蔀樽晕⑷榛苿?，可以提高藥物的?br> 出度，促進藥物吸收，并有利于改善生物利用度；同時藥物具有較大的界面
積，且藥物在腸中可維持溶解狀態(tài)，從而更好的分散透過細胞膜，進而提高 藥物的藥效。本發(fā)明制備的靈芝三薛自微乳給藥系統(tǒng)與現(xiàn)在常規(guī)混懸劑相 比，體內(nèi)抗腫瘤效果增強。
本發(fā)明的另一目的在于提供這種靈芝三萜提取物的自微乳化納米組合 物的制備方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案是， 一種靈芝三萜提取物的自微乳化納米組合物(自 微乳制劑)，以靈芝三薛提取物作為原料藥，采用表面活性劑、助表面活性
劑和油相組成的混合物作為藥物載體，其特征在于，各組分重量份如下 靈芝三碎提取物10份，表面活性劑50~400份，助表面活性劑100~800
份，油相15 600份。
各組分重量份的優(yōu)化比例是
靈芝三薛提取物10份，表面活性劑100-300份，助表面活性劑200~600 份，油相40 400份。
各組分重量份的更為優(yōu)化的比例是
靈芝三辟提取物10份，表面活性劑150-200份，助表面活性劑300~500 份，油相100~200份。
上述的靈芝總?cè)铺崛∥锸菍㈧`芝子實體通過超臨界C02萃取的方法萃
取得到。(參見宋師花，賈曉斌，陳彥，等。超臨界C02萃取靈芝子實體 中的總?cè)祁惤M分[J].中國中藥雜志，2008， 33(17):2104-2107.)上述的表面活性劑可選自下列之一或它們的組合脂肪酸山梨坦，聚山 梨酯，聚氧乙烯40脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚，聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚 物，卵磷脂，或OP乳化劑。
上述的脂肪酸山梨坦選自下列之一或它們的組合司盤20、司盤40、司 盤60、司盤65、司盤80，或司盤85。
上迷的聚山梨酯選自下列之一或它們的組合聚山梨酯20 (吐溫20)， 聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯65、聚山梨酯80,或聚山梨酯85。
上述的聚氧乙烯脂肪醇醚選自下列之一或它們的組合汴澤30、汴澤35、 西土馬哥(Cetomacrogol),平平加O (PerogolO)或Cremophore EL (聚氧 乙烯蓖麻油甘油醚)
上述的聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物選自下列之一或它們的組合 Poloxamer 124(泊洛沙姆124 ), Poloxamer 188(泊洛沙姆188 ), Poloxamer237 (泊洛沙姆237), Poloxamer338 (泊洛沙姆338),或Poloxamer407 (泊洛 沙姆407 )。
上述的助表面活性劑可選自下列之一或它們的組合物乙醇、異丙醇、1, 2-丙二醇、丙三醇、正丁醇、正辛醇、正庚醇、聚乙二醇300,或聚乙二醇 400。
上述的油相可選自下列之一或它們的組合物油酸、油酸乙酯、花生油、 豆油、蓖麻油、橄;f覽油、亞油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯、丙烯乙二醇單辛酸 酯、丙烯乙二醇雙辛酸酯，或甘油單辛酸酯。
本發(fā)明的靈芝三萜提取物的自微乳化納米組合物(靈芝三萜自微乳化制 劑)的制備方法，步驟如下(1) .按比例取靈芝三薛提取物放于容器中；
(2) .再加入表面活性劑、助表面活性劑，磁力攪拌混勻，使藥物溶解；
(3) .再加入油相，磁力攪拌混勻，即得靈芝三薛自微乳制劑。 本發(fā)明制備靈芝三萜微乳是用磁力攪拌器攪拌即可形成。
為了便于患者服用，可將本發(fā)明的自微乳化的靈芝三碎口服制劑組合物 采用本領(lǐng)域公知的方法灌裝于膠嚢中，獲得膠嚢劑。
或?qū)⒈景l(fā)明的自微乳化的靈芝三萜口服制劑組合物與醫(yī)藥學(xué)上可接受 的載體，采用本領(lǐng)域公知的方法制備成片劑、軟膠嚢劑、口服液、顆粒劑等。
與常規(guī)乳劑和亞乳劑(粒徑一般在0.1 10 pm)相比，自微乳、微乳粒 徑更小(lOOmn以下)，屬于熱力學(xué)穩(wěn)定體系；微乳處方中由于存在大量的 水(0/W)，難以制成固體(如軟膠嚢)制劑，臨床一般采用液體型給藥， 給包裝、運輸、儲藏、攜帶等帶來諸多不便；而自微乳則即可制成液體劑型， 又可以灌裝于軟膠嚢或可充入硬膠嚢中制成固體制劑應(yīng)用。而且，自^:乳制 劑易于制備，不需特殊設(shè)備即可大量生產(chǎn)、穩(wěn)定性好且易工業(yè)化，因此具有 良好的產(chǎn)業(yè)化前景。
體內(nèi)抗腫瘤動物實驗表明靈芝三萜微乳能夠增強藥物療效，提高抗肺 瘤效果。
本發(fā)明所制備的靈芝三萜自微乳化制劑及其制備方法的有益效果表現(xiàn)在 如下幾方面
1、 本發(fā)明制備的制劑制備方法簡單，無需特殊設(shè)備即可完成，容易實現(xiàn) 工業(yè)化大生產(chǎn)。
2、 本發(fā)明所選用的表面活性劑，具有安全、無毒 無刺激性等優(yōu)點，且乳化性能好，通過體外乳化實驗后發(fā)現(xiàn)其乳化粒徑較小，在10 100nm之間，
達到納米級，有利于吸收，抗腫瘤效果較好。


圖1為實施例1制備的靈芝三萜自微乳化形成的溶液的粒徑分布圖。
具體實施例方式
下面結(jié)合實例對本發(fā)明作進一步詳細說明，但應(yīng)注意本發(fā)明的范圍并不受這些實例的任何限制。實施例1
處方靈芝總?cè)铺崛∥?0mg,吐溫-20 1200 mg,異丙醇2400 mg,油酸1800 mg。
將靈芝總?cè)铺崛∥?、吐?20、異丙醇放入西林瓶中，通過磁力攪拌充分混合均勻，待藥物完全溶解后，加入油酸，再磁力攪拌10 min后，便可得到靈芝三萜提取物自微乳化組合物。
實施例2
處方靈芝總?cè)铺崛∥?00mg，司盤-20 1000mg,乙醇6000mg，油酸乙酯500 mg。
制備方法同實施例1。實施例3
處方靈芝總?cè)铺崛∥?0mg,磷脂-20 250 mg,乙醇500 mg,肉豆蔻酸異丙酯75mg。
制備方法同實施例1。實施例4處方靈芝總?cè)铺崛∥?0mg， CremophoreEL800mg,乙醇1600 mg，大豆油1200 mg。
制備方法同實施例1。實施例5
處方靈芝總?cè)铺崛∥?0mg， Poloxamer 188 2400 mg, 1， 2-丙二醇4000 mg,亞油酸乙酯3200mg。制備方法同實施例1。
實施例6.靈芝三碎提取物自微乳的體內(nèi)抗腫瘤實驗選擇"l矣種7d,生長良好的荷Heps肝癌小鼠，頸推脫臼處死，無菌抽取腹水，以無菌生理鹽水按l: 4比例稀釋成2xl(^個/mL的瘤細胞懸液，接種于健康小鼠右前肢皮下，每只0.2mL。接種次日，按體重隨機分為6組，分別為生理鹽水空白對照組；環(huán)磷酰胺陽性對照組；靈芝三薛提取物自微乳高低劑量組(5.0g生藥.kg-、cT1、 2.5g生藥.kg"'cT1)、靈芝三萜提取物混懸液高低劑量組(5.0 g生藥.kg十cT1、 2.5 g生藥.kg"《1 )。環(huán)磷酰胺陽性對照組為腹腔注射(20 mg.kg".cT1),其它組為灌胃給藥，均為每日l次，連續(xù)7d。期間，每日觀察小鼠的一般活動、皮毛、糞便等情況。與末次給藥后24 h后頸推脫臼處死小鼠剝?nèi)×鼋M織，同時剖取小鼠脾臟、胸腺，稱重，計算抑瘤率、脾指數(shù)、胸腺指數(shù)，結(jié)果見表l、表2。
抑瘤率(％) = (l-治療組平均瘤重/對照組平均瘤重)xioo%;脾指數(shù)=脾重(mg) /小鼠體重(g);胸腺指數(shù)=胸腺重(mg) /小鼠體重(g)。實驗結(jié)果顯示，靈芝三萜自微乳可抑制腫瘤的生長，其高低2個劑量組和環(huán)磷酰胺陽性對照組的腫瘤重量明顯低于生理鹽水對照組，靈芝自微乳
高、低劑量組抑瘤率分別為52.34%, 37.66%。靈芝三萜自微乳組與混懸液組比較，抑瘤率有顯著性提高(尸<0.05),實驗結(jié)果見表l 。
表1.靈芝三萜自微乳對Heps腫瘤小鼠的抑制作用 (x±s)
組別腫瘤重(g)》 橋 鍥 乾
生理鹽水組2.48±0.37
環(huán)磷酰胺組0.71土0.125^71.45
空白溶劑組2.42±0.352.62
靈芝三萜混懸液高劑量組1.48±0.27*40.16
靈芝三萜混懸液低劑量組1.86±0.33*25.04
靈芝三萜提取物自l(乳高劑量組1.18±0.34 52.34
靈芝三萜提取物自微乳低劑量組1.55±0.35 A*37.66
注與生理鹽水組比較*尸<0.05
與對應(yīng)的混懸藥物組比較AP<0.05
給藥后小鼠的脾指數(shù)、胸腺指數(shù)與模型生理鹽水對照組比較無顯著性差異，對免疫器官脾臟和胸腺無影響；混懸藥物組與微乳組比較，脾指數(shù)和胸腺指數(shù)也無顯著性差異，可見靈芝三萜纟敬乳對免疫器官脾臟和胸腺無影響。實驗結(jié)果見表2。
本實驗以靈芝三萜自微乳為研究對象，對其抗腫瘤作用進行了探索性研
究。實驗結(jié)果初步提示靈芝三萜自微乳對Heps腫瘤小鼠均具有較好的抑制作用。其抗腫瘤作用與混懸液比較，具有顯著性的增強作用(尸<0.05)。表2靈芝三萜自微乳對Heps腫瘤小鼠脾和胸腺的影響(x±S)
組別脾指數(shù)(mg-g-l)胸腺指數(shù)(mg*g-l)
生理鹽水組7.57±1.363.53±0.52
環(huán)磷酰胺組5.96±1.29*2.09±0.66*
空白溶劑組7.37±0.973.48±0.51
靈芝三:砲混懸液組高劑量組7.68±0.723.37±1.06
靈芝三:萜混懸液組低劑量組7.35±1.123.47±1.31
靈芝:三萜自微乳高劑量組7.61±1.823.52±0.89
靈芝:三萜自微乳低劑量組7.25±1.303.50±0.83
注與生理鹽水對照組比較*P<0.05
實施例7,與實施例l基本相同，但各組分重量份如下靈芝三碎提取
物10份，表面活性劑100，助表面活性劑200,油相40份。
所述的表面活性劑可以選自下列之一或它們的組合脂肪酸山梨坦，聚
山梨酯，聚氧乙烯40脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚，聚氧乙烯-聚氧丙烯共
聚物，卵磷脂，或OP乳化刺；
所述的助表面活性劑可以選自下列之一或它們的組合物乙醇、異丙醇、
1, 2-丙二醇、丙三醇、正丁醇、正辛醇、正庚醇、聚乙二醇300,或聚乙二
醇400;
所述的油相可以選自下列之一或它們的組合物油酸、油酸乙酯、花生油、豆油、蓖麻油、梯:欖油、亞油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯、丙烯乙二醇單辛酸酯、丙烯乙二醇雙辛酸酯，或甘油單辛酸酯。
實施例8,與實施例l基本相同，但各組分重量份如下靈芝三蹤提取物10份，表面活性劑300份，助表面活性劑600份，油相400份。
實施例9,與實施例l基本相同，但各組分重量份如下靈芝三辟提取物10份，表面活性劑150份，助表面活性劑300，油相100份。
表面活性劑中所述的聚山梨酯選自下列之一或它們的組合聚山梨酯20，聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯65、聚山梨酯80，或聚山梨酯85;
表面活性劑中所述的聚氧乙烯脂肪醇醚選自下列之一或它們的組合汴澤30、汴澤35、西土馬哥，平平加O或聚氧乙烯蓖麻油甘油醚；
表面活性劑中所述的聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物選自下列之一或它們的
組合泊洛沙姆124，泊洛沙姆188,泊洛沙姆237,泊洛沙姆338,或泊洛沙姆術(shù)。
實施例10,與實施例l基本相同，但各組分重量份如下靈芝三薛提取物10份，表面活性劑200份，助表面活性劑500份，油相200份。
權(quán)利要求
1、一種靈芝三萜提取物的自微乳化納米組合物，以靈芝三萜提取物作為原料藥，采用表面活性劑、助表面活性劑和油相組成的混合物作為藥物載體，其特征在于，各組分重量份如下靈芝三萜提取物10份，表面活性劑50～400份，助表面活性劑100～800份，油相15～600份。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的靈芝三碎提取物的自微乳化納米組合物，其特 征在于，所述各組分的重量份比例是靈芝三萜提取物10份，表面活性劑100 300份，助表面活性劑200-600 份，油相40-400份。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的靈芝三薛提取物的自微乳化納米組合物，其特 征在于，所述各組分的重量份比例是靈芝三碎提取物10份，表面活性劑150-200份，助表面活性劑300-500 份，油相畫 200份。
4、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的靈芝三辟提取物的自微乳化納米組合物，其特 征在于，所述的靈芝總?cè)樘崛∥锸侵笇㈧`芝子實體通過超臨界C02萃取 的方法萃取得到的靈芝總?cè)偬崛∥铩?br> 5、 根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或4所述的靈芝三辟提取物的自微乳化納米 組合物，其特征在于，所述的表面活性劑選自下列之一或它們的組合脂肪酸山梨坦，聚山梨酯，聚氧乙烯40脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚，聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物， 卯磷脂，或OP乳化劑；所述的助表面活性劑選自下列之一或它們的組合物乙醇、異丙醇、1， 2-丙二醇、丙三醇、正丁醇、正辛醇、正庚醇、聚乙二醇300，或聚乙二醇 400;所述的油相選自下列之一或它們的組合物油酸、油酸乙酯、花生油、 豆油、蓖麻油、橄欖油、亞油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯、丙烯乙二醇單辛酸 酯、丙烯乙二醇雙辛酸酯，或甘油單辛酸酯。
6、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的靈芝三碎提取物的自微乳化納米組合物，其特 征在于，表面活性劑中所述的脂肪酸山梨坦選自下列之一或它們的組合司盤 20、司盤40、司盤60、司盤65、司盤80，或司盤85;表面活性劑中所述的聚山梨酯選自下列之一或它們的組合聚山梨酯 20,聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯65、聚山梨酯80，或聚山梨酯85;表面活性劑中所述的聚氧乙烯脂肪醇醚選自下列之一或它們的組合汴 澤30、汴澤35、西土馬哥，平平加O或聚氧乙烯蓖麻油甘油醚；表面活性劑中所述的聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物選自下列之一或它們的 組合泊洛沙姆124,泊洛沙姆188，泊洛沙姆237,泊洛沙姆338，或泊洛 沙姆407。
7、 一種權(quán)利要求1所述的靈芝三薛提取物的自微乳化納米組合物的制備 方法，其特征在于，步驟如下(1).按比例取靈芝三碎提取物放于容器中；U).再加入表面活性劑、助表面活性劑，磁力攪拌混勻，使藥物溶解； (3).再加入油相，磁力攪拌混勻，即得靈芝三碎自微乳制劑。
8、 根據(jù)權(quán)利要求7所述的靈芝三辟提取物的自微乳化納米組合物的制備 方法，其特征在于，所述各組分的重量份比例是靈芝三碎提取物10份，表面活性劑50 400份，助表面活性劑100~800 4分，油相15 60(H分；所述的表面活性劑選自下列之一或它們的組合脂肪酸山梨坦，聚山梨 酯，聚氧乙烯40脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚，聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物， 卵磷脂，或OP乳化劑；所述的助表面活性劑選自下列之一或它們的組合物乙醇、異丙醇、1， 2-丙二醇、丙三醇、正丁醇、正辛醇、正庚醇、聚乙二醇300，或聚乙二醇 400;所述的油相選自下列之一或它們的組合物油酸、油酸乙酯、花生油、 豆油、蓖麻油、橄欖油、亞油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯、丙烯乙二醇單辛酸 酯、丙烯乙二醇雙辛酸酯，或甘油單辛酸酯。
9、 根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的靈芝三碎提取物的自微乳化納米組合物的 制備方法，其特征在于，所述各組分的重量份比例是靈芝三碎提取物10份，表面活性劑100 300份，助表面活性劑200-600 份，油相40~400份；所述的脂肪酸山梨坦選自下列之一或它們的組合司盤20、司盤40、司 盤60、司盤65、司盤80,或司盤85;所述的聚山梨酯選自下列之一或它們的組合聚山梨酯20,聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯65、聚山梨酯80,或聚山梨酯85;所述的聚氧乙烯脂肪醇醚選自下列之一或它們的組合汴澤30、汴澤35、 西土馬哥，平平加O或聚氧乙烯蓖麻油甘油醚；所述的聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物選自下列之一或它們的組合泊洛沙姆 124,泊洛沙姆188,泊洛沙姆237，泊洛沙姆338,或泊洛沙姆407。
10、根據(jù)權(quán)利要求7或9所述的靈芝三萜提取物的自微乳化納米組合物 的制備方法，其特征在于，所述各組分的重量份比例是靈芝三萜提取物10份，表面活性劑150-200份，助表面活性劑300 500 份，油相100-200份。
全文摘要
靈芝三萜提取物的自微乳化納米組合物制備方法，自微乳化納米組合物是以靈芝三萜提取物作為原料藥，采用表面活性劑、助表面活性劑和油相組成的混合物作為藥物載體，其特征在于，各組分重量份如下靈芝三萜提取物10份，表面活性劑50～400份，助表面活性劑100～800份，油相15～600份。所述的靈芝總?cè)铺崛∥锸侵笇㈧`芝子實體通過超臨界CO₂萃取的方法萃取得到的靈芝總?cè)铺崛∥?。本發(fā)明將水不溶性藥物靈芝總?cè)铺崛∥镏苽涑蔀樽晕⑷榛苿商岣咚幬锏娜艹龆?，促進藥物吸收，有利于改善生物利用度；且藥物在腸中可維持溶解狀態(tài)，從而更好的分散透過細胞膜，進而提高藥物的藥效，體內(nèi)抗腫瘤效果增強。
文檔編號A61K9/107GK101601695SQ20091003199
公開日2009年12月16日 申請日期2009年6月26日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月26日
發(fā)明者宋師花, 賈曉斌, 彥 陳 申請人:江蘇省中醫(yī)藥研究院