一種從靈芝中提取靈芝酸a的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種從靈芝中提取靈芝酸A的方法，即將靈芝粉用質(zhì)量百分比濃度為80%的乙醇水溶液浸提，所得浸提液減壓濃縮得到的靈芝酸浸膏，加入水混合均勻，得到的混合液加入為混合液質(zhì)量5%的NaHCO3攪拌均勻后過(guò)濾，所得濾液調(diào)pH值為2后用5倍體積的氯仿萃取，所得的氯仿層減壓濃縮，得到的濃縮液用硅膠柱進(jìn)行純化，收集到的靈芝酸A粗品在LH-20常壓凝膠柱上，用質(zhì)量百分比濃度為51%的甲醇水溶液對(duì)其進(jìn)行洗脫至靈芝酸A粗品全部洗脫下來(lái)，然后減壓濃縮至干，得到的純度為85%以上的靈芝酸A用甲醇重結(jié)晶即得純度可達(dá)97.5％以上的靈芝酸A，其相對(duì)于靈芝藥材中靈芝酸A的總得率為35%。
【專利說(shuō)明】一種從靈芝中提取靈芝酸A的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物的提取分離方法，特別涉及一種從靈芝中提取靈芝酸A的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]靈芝為靈芝科靈芝屬藥用真菌，始載于漢代《神農(nóng)本草經(jīng)》列為上品，靈芝屬共有80多種靈芝，中國(guó)藥典（2000年版）規(guī)定赤芝和紫芝為藥用正品，靈芝含有多種化學(xué)成分。靈芝的主要活性成分有多糖及肽多糖類、生物堿類和核苷酸類、氨基酸和蛋白質(zhì)類、三帖類、微量元素。靈芝中三萜類化合物具有保肝作用、抗腫瘤作用、抗HIVl及HIV2蛋白酶活性、抑制組胺釋放、抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE)、抑制膽固醇合成、鎮(zhèn)痛作用、對(duì)血小板聚集的影響、對(duì)蛋白金合歡酯轉(zhuǎn)移酶的抑制作用、抗氧化作用。
[0003]靈芝酸是靈芝三萜類化合物的重要活性成分，靈芝酸包括靈芝酸A，B，Cl，D等，其中靈芝酸A屬于 四環(huán)三萜類，是靈芝苦味的主要來(lái)源，由于靈芝酸A分離難度大，在靈芝中含量較低等原因。
[0004]目前靈芝酸A的提取方法常用氯仿作為提取溶劑經(jīng)硅膠反復(fù)純化得到靈芝酸A，存在環(huán)境污染大、得率低、純度低等技術(shù)問(wèn)題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的為了解決上述的靈芝酸A的提取過(guò)程中由于以氯仿作為提取溶劑而存在的環(huán)境污染大、得率低等技術(shù)問(wèn)題而提供一種從靈芝中提取靈芝酸A的方法，該提取方法環(huán)保，最終所得的靈芝酸A的得率和純度都較高。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案
一種從靈芝中提取靈芝酸A的方法，具體包括以下步驟：
(1)、將干燥的靈芝進(jìn)行粉碎，所得的靈芝粉用質(zhì)量百分比濃度為80%的乙醇水溶液浸提3次，合并3次所得的浸提液，每次浸提過(guò)程中控制溫度為60°C，每次時(shí)間為5h ；
上述浸提所用的靈芝粉和質(zhì)量百分比濃度為80%的乙醇水溶液的量，按靈芝粉：質(zhì)量百分比濃度為80%的乙醇水溶液為IKg ：5-10L的比例計(jì)算；
(2)、將步驟（I)所得的浸提液控制溫度為60°C、壓力為-O.IMPa的條件下減壓濃縮得到靈芝酸浸膏；
(3)、將步驟（2)所得的靈芝酸浸膏加入為其質(zhì)量5倍的水，混合均勻得到混合液，然后加入為混合液質(zhì)量的5%的NaHCO3,攪拌均勻后過(guò)濾，所得濾液用質(zhì)量百分比濃度為10%的鹽酸水溶液調(diào)PH值為2 ;
然后用5倍體積的氯仿萃取上述所得的pH為2的濾液3次，合并3次萃取的氯仿層，然后控制溫度40°C，壓力-O. IMPa下濃縮至干，得到濃縮液；
(4)、正相硅膠純化
將上述所得的濃縮液用硅膠柱進(jìn)行純化，用氯仿作為裝柱溶劑，所用硅膠優(yōu)選為山東乳山市太陽(yáng)干燥劑有限公司生產(chǎn)的200-300目的硅膠，以氯仿作為裝柱溶劑，以氯仿：丙酮的體積比從10:1~3:1梯度沖洗，收集靈芝酸A粗品；
(5)、凝膠純化
在LH-20常壓凝膠柱上，用質(zhì)量百分比濃度為51%的甲醇水溶液對(duì)靈芝酸A粗品進(jìn)行洗脫至全部洗脫下來(lái)，然后在溫度40°C，壓力-O. IMPa下濃縮至干，即得純度為85%以上的靈芝酸A ；
(6)、重結(jié)晶
將上述所得的純度為85%以上的靈芝酸A先用氯仿溶解，然后加入甲醇于4°C條件下放置至有白色晶體析出，過(guò)濾，即得純度為97. 5%以上的靈芝酸A ;
上述甲醇的加入量，按體積比即氯仿：甲醇為4:6的比例。
[0007]本發(fā)明的有益效果
本發(fā)明的一種從靈芝中提取靈芝酸A的方法，由于采用了 80%乙醇水進(jìn)行提取，對(duì)比現(xiàn)用氯仿提取，具有提取成本低、污染小、毒性低、環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)。
[0008]進(jìn)一步，本發(fā)明的一種從靈芝中提取靈芝酸A的方法，由于采用凝膠純化，甲醇重結(jié)晶，得到了純度可達(dá)97. 5%以上，相對(duì)于靈芝藥材中靈芝酸A的總得率為35%，即本發(fā)明的從靈芝中提取靈芝酸A的方法最終所得的靈芝酸 A純度高，得率高。
[0009]進(jìn)一步，本發(fā)明的一種從靈芝中提取靈芝酸A的方法具有工藝簡(jiǎn)單，操作方便，適于工業(yè)化提取等特點(diǎn)。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0010]圖I、實(shí)施例1的步驟（I)所得的浸提液的色譜圖；
圖2、實(shí)施例1的步驟（4)所得的靈芝酸A粗品的色譜圖；
圖3、實(shí)施例1的步驟（5)所得的純度為85%以上的靈芝酸A的色譜圖 圖4、實(shí)施例1的步驟（6)最終所得的靈芝酸A的色譜圖。
具體實(shí)施例
[0011]下面通過(guò)具體實(shí)施例并結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，但實(shí)施例只是為了說(shuō)明本發(fā)明，而不是對(duì)本發(fā)明的限制。
[0012]實(shí)施例1
一種從靈芝中提取靈芝酸A的方法，具體包括以下步驟：
(1)、取IKg干燥的靈芝進(jìn)行粉碎，所得的靈芝粉用5L質(zhì)量百分比濃度為80%的乙醇水溶液浸提3次，合并3次所得的浸提液，每次浸提過(guò)程中控制溫度為60°C，時(shí)間為5h ；
取上述合并3次所得的浸提液，用Agilientl260DAD進(jìn)行檢測(cè)，色譜柱：UltimateLP-C18 (5 μ m, 4. 6mm x 250mm )流速:1.0mT,/mi n ,色譜柱溫:25°C ，檢測(cè)波長(zhǎng):256nm,進(jìn)樣量：20μ L，流動(dòng)相乙腈：0. 5%甲酸梯度洗脫，得到色譜圖如圖I所示，圖中的GA表示靈芝酸A在靈芝藥材中的吸收峰，從圖I中可看出靈芝藥材中化合物豐富，分離難度較大；
上述浸提所用的靈芝粉和質(zhì)量百分比濃度為80%的乙醇水溶液的量，按靈芝粉：質(zhì)量百分比濃度為80%的乙醇水溶液為IKg ：5L的比例計(jì)算；
(2)、將步驟（I)所得的浸提液控制溫度為60°C、壓力為-O.IMPa的條件下減壓濃縮得到靈芝酸浸膏；
(3)、將步驟（2)所得的靈芝酸浸膏加入為其質(zhì)量5倍的水，混合均勻得到混合液，然后加入為混合液質(zhì)量5%的NaHCO3,攪拌均與后過(guò)濾，所得濾液用質(zhì)量百分比濃度為10%的鹽酸水溶液調(diào)PH值為2 ;
然后用5倍體積的氯仿對(duì)上述所得的pH為2的濾液進(jìn)行萃取3次，合并3次萃取的氯仿層，溫度40°C，壓力-O. IMPa下濃縮至干，得到30. 2g濃縮液；
(4)、正相硅膠純化
將上述所得的濃縮液用硅膠柱進(jìn)行純化，用氯仿作為裝柱溶劑，所用的硅膠為山東乳山市太陽(yáng)干燥劑有限公司生產(chǎn)的200-300目的硅膠，開(kāi)始用三氯甲烷：丙酮=10:1沖洗8L，然后換三氯甲烷：丙酮=8:1沖洗7L，再用三氯甲烷：丙酮=6:1沖洗7L，最后用三氯甲烷：丙酮=3:1沖洗1L，每次沖洗分別收集HPLC檢測(cè)含靈芝酸A部分產(chǎn)物即為靈芝酸A粗品，合并每次沖洗后所得的靈芝酸A粗品，共計(jì)3. 95g ；
取上述所得的靈芝酸A粗品，用Agilientl260DAD進(jìn)行檢測(cè)，色譜柱：UltimateLP-C18 (5 μ m, 4. 6mm x 250mm )流速:1.0mT,/mi n ,色譜柱溫:25°C ，檢測(cè)波長(zhǎng):256nm,進(jìn)樣量：20μ L，流動(dòng)相乙腈：0. 5%甲酸梯度洗脫，得到色譜圖如圖2所示，圖中的GA表示過(guò)硅膠后靈芝酸A的吸收峰，從圖2中可看出過(guò)完硅膠后靈芝酸A純度大幅提高；
(5)、凝膠純化
在LH-20常壓凝膠柱上 ，用質(zhì)量百分比濃度為51%的甲醇水溶液對(duì)靈芝酸A粗品進(jìn)行洗脫至靈芝酸A全部洗完，然后在溫度40°C，壓力-O. IMPa下濃縮至干，即得O. 15g純度為85%以上的靈芝酸A ;
取上述所得的純度為85%以上的靈芝酸A，用Agilientl260DAD進(jìn)行檢測(cè)，色譜柱：Ultimate LP-C18 (5 μ m, 4. 6mm x 250mm )流速：1.0mT,/mi n ,色譜柱溫：25 °C ,檢測(cè)波長(zhǎng)：256nm，進(jìn)樣量：20 μ L，流動(dòng)相乙腈：0. 5%甲酸梯度洗脫，得到色譜圖如圖3所示，圖中的GA表示過(guò)凝膠后靈芝酸A的吸收峰，從圖3中可看出過(guò)凝膠后，其純度達(dá)到85% ；
(6)、重結(jié)晶
將上述所得的純度為85%以上的靈芝酸A先用氯仿溶解，然后加入甲醇于4°C條件下放置至晶體析出，過(guò)濾即得90mg純度為97. 5%的靈芝酸A，其相對(duì)于靈芝藥材中靈芝酸A的總得率為35% ；
取上述所得的純度為97. 5%的靈芝酸A，用Agilientl260DAD進(jìn)行檢測(cè)，色譜柱：Ultimate LP-C18 (5 μ m, 4. 6mm x 250mm )流速：1.0mT,/mi n ,色譜柱溫：25 °C ,檢測(cè)波長(zhǎng)：256nm，進(jìn)樣量：20μ L，流動(dòng)相乙腈：0. 5%甲酸梯度洗脫，得到色譜圖如圖4所示，圖中的GA表示重結(jié)晶后靈芝酸A的吸收峰，從圖4中可以看出，本發(fā)明的一種從靈芝中提取靈芝酸A的方法，最終可得純度為97. 5%的靈芝酸A ；
上述甲醇的加入量，按體積比即氯仿：甲醇為4:6的比例計(jì)算。
[0013] 實(shí)施例2
一種從靈芝中提取靈芝酸A的方法，具體包括以下步驟：
(I)、取IOkg干燥的靈芝進(jìn)行粉碎，所得的靈芝粉用50L質(zhì)量百分比濃度為80%的乙醇水溶液浸提3次，合并3次所得的浸提液，每次浸提過(guò)程中控制溫度為60°C，時(shí)間為5h ；
上述浸提所用的靈芝粉和質(zhì)量百分比濃度為80%的乙醇水溶液的量，按靈芝粉：質(zhì)量百分比濃度為80%的乙醇水溶液為IKg ：5L的比例計(jì)算；
(2)、將步驟（I)所得的浸提液控制溫度為60°C、壓力為-O.IMPa減壓濃縮得到靈芝酸
浸膏；
(3)、將步驟（2)所得的靈芝酸浸膏中加入為靈芝酸浸膏質(zhì)量5倍的水，混合均勻得到混合液，然后加入為混合液質(zhì)量5%的NaHCO3,攪拌均與后過(guò)濾，所得濾液用質(zhì)量百分比濃度為10%的鹽酸水溶液調(diào)pH值為2 ;
然后用5倍體積的氯仿萃取上述所得的pH為2的濾液3次，合并3次萃取的氯仿層，控制溫度40°C，壓力-O. IMPa下濃縮至干，得到濃縮液；
(4)、正相硅膠純化
將上述所得的濃縮液用硅膠柱進(jìn)行純化，用氯仿作為裝柱溶劑，所用的硅膠為山東乳山市太陽(yáng)干燥劑有限公司生產(chǎn)的200-300目的硅膠，開(kāi)始用三氯甲烷：丙酮=10:1沖洗25L，然后換三氯甲烷：丙酮=8:1沖洗20L，再用三氯甲烷：丙酮=6:1沖洗20L，最后用三氯甲烷：丙酮=3:1沖洗5L，每次沖洗分別收集HPLC檢測(cè)下靈芝酸A部分產(chǎn)物即為靈芝酸A粗品，合并每次沖洗后所得的靈芝酸A粗品，共計(jì)57g ；
(5)、凝膠純化
在LH-20常壓凝膠柱上，用質(zhì)量百分比濃度為51%的甲醇水溶液對(duì)靈芝酸A粗品進(jìn)行洗至靈芝酸A出完，然后在溫度40°C，壓力-O. IMPa下濃縮至干，即得I. 9g純度為85%以上的靈芝酸A ；
(6)、重結(jié)晶
將上述所得的純度為85%以上的靈芝酸A先用氯仿溶解，然后加入甲醇于4°C條件下至晶體析出，過(guò)濾即得I. Ig純度為97. 5%的靈芝酸A，其相對(duì)于靈芝藥材中靈芝酸A的總得率為 35% ；
上述甲醇的加入量，按體積比即氯仿：甲醇為4:6的比例計(jì)算。
[0014] 實(shí)施例3
一種從靈芝中提取靈芝酸A的方法，具體包括以下步驟：
(1)、取IOOkg干燥的靈芝進(jìn)行粉碎，所得的靈芝粉分5次，每次20kg靈芝粉用200L質(zhì)量百分比濃度為80%的乙醇水溶液浸提3次，合并3次所得的浸提液，每次浸提過(guò)程中控制溫度為60°C，時(shí)間為每次5h;
上述浸提所用的靈芝粉和質(zhì)量百分比濃度為80%的乙醇水溶液的量，按靈芝粉：質(zhì)量百分比濃度為80%的乙醇水溶液為IKg ：10L的比例計(jì)算；
(2)、將步驟（I)所得的浸提液控制溫度為60V、壓力為-O.IMPa減壓濃縮得到靈芝酸浸膏；
(3)、將步驟（2)所得的靈芝酸浸膏加入為其質(zhì)量5倍的水，混合均勻得到混合液，然后加入為混合液質(zhì)量5%的NaHCO3,攪拌均與后過(guò)濾，所得濾液用質(zhì)量百分比濃度為10%的鹽酸水溶液調(diào)PH值為2 ;
然后用5倍體積的氯仿萃取上述所得的pH為2的濾液3次，合并3次萃取的氯仿層，控制溫度40°C，壓力-O. IMPa下濃縮至干，得到濃縮液；
(4)、正相硅膠純化
將上述所得的濃縮液用硅膠柱進(jìn)行純化，用氯仿作為裝柱溶劑，所用硅膠為山東乳山市太陽(yáng)干燥劑有限公司生產(chǎn)的200-300目的硅膠，純化過(guò)程中，開(kāi)始用三氯甲烷：丙酮=10:1沖洗75L，然后換三氯甲烷：丙酮=8:1沖洗55L，再用三氯甲烷：丙酮=6:1沖洗55L，最后用三氯甲烷：丙酮=3:1沖洗10L，每次沖洗分別收集HPLC檢測(cè)下靈芝酸A部分產(chǎn)物即為靈芝酸A粗品,合并每次沖洗后所得的靈芝酸A粗品,共計(jì)650g ；
(5)、凝膠純化
在LH-20常壓凝膠柱上，用質(zhì)量百分比濃度為51%的甲醇水溶液對(duì)上述所得的靈芝酸A粗品進(jìn)行洗脫至靈芝酸A出完，然后控制溫度40°C，壓力-O. IMPa下濃縮至干，即得21g純度為85%以上的靈芝酸A ;
(6)、重結(jié)晶
將上述所得的純度為85%以上的靈芝酸A先用氯仿溶解，然后加入甲醇于4°C條件下放置至晶體析出，過(guò)濾，即得10. 3g純度為98. 5%的靈芝酸A，其相對(duì)于靈芝藥材中靈芝酸A的總得率為35% ；
上述甲醇的加入量，按體積比即氯仿：甲醇為4:6的比例計(jì)算。
[0015]綜上所述，本發(fā)明的一種從靈芝中提取靈芝酸A的方法，利用乙醇水進(jìn)行提取，利用硅膠、凝膠進(jìn)行純化并用甲醇進(jìn)行重結(jié)晶，得到的最終靈芝酸A的純度高，可達(dá)97. 5%以上。
[0016]以上所述僅是本發(fā)明的實(shí)施方式的舉例，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明技術(shù)原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和變型，這些改進(jìn)和變型也應(yīng)視為本發(fā)明的保 護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種從靈芝中提取靈芝酸A的方法，其特征在于具體包括以下步驟: (1)、將干燥的靈芝進(jìn)行粉碎，所得的靈芝粉用質(zhì)量百分比濃度為80%的乙醇水溶液浸提3次，合并3次所得的浸提液，每次浸提過(guò)程中控制溫度為60°C，每次時(shí)間為5h ； 上述浸提所用的靈芝粉和質(zhì)量百分比濃度為80%的乙醇水溶液的量，按靈芝粉:質(zhì)量百分比濃度為80%的乙醇水溶液為IKg:5-10L的比例計(jì)算； (2)、將步驟(1)所得的浸提液控制溫度為60°C、壓力為-0.1MPa的條件下減壓濃縮得到靈芝酸浸膏； (3)、將步驟(2)所得的靈芝酸浸膏加入為其質(zhì)量5倍的水，混合均勻得到混合液，然后加入為混合液質(zhì)量5%的NaHCO3,攪拌均勻后過(guò)濾，所得濾液用質(zhì)量百分比濃度為10%的鹽酸水溶液調(diào)PH值為2 ; 然后用5倍體積的氯仿萃取上述所得的pH為2的濾液3次，合并3次萃取的氯仿層，然后控制溫度40°C，壓力-0.1MPa下濃縮至干，得到濃縮液； (4)、正相硅膠純化 將上述所得的濃 縮液用硅膠柱進(jìn)行純化，用氯仿作為裝柱溶劑，以氯仿:丙酮的體積比從10:1~3:1梯度沖洗，收集靈芝酸A粗品； (5)、凝膠純化 在LH-20常壓凝膠柱上，用質(zhì)量百分比濃度為51%的甲醇水溶液對(duì)靈芝酸A粗品進(jìn)行洗脫至全部洗脫下來(lái)，然后在溫度40°C，壓力-0.1MPa下濃縮至干，即得純度為85%以上的靈芝酸A ； (6)、重結(jié)晶 將上述所得的純度為85%以上的靈芝酸A先用氯仿溶解，然后加入甲醇于4°C條件下放置至有白色晶體析出，過(guò)濾，即得靈芝酸A ； 上述甲醇的加入量，按體積比即氯仿:甲醇為4:6的比例。
2.如權(quán)利要求1所述的從靈芝中提取靈芝酸A的方法，其特征在于步驟(4)的硅膠柱中所用硅膠為山東乳山市太陽(yáng)干燥劑有限公司生產(chǎn)的200-300目的硅膠。
3.如權(quán)利要求1或2中所述的從靈芝中提取靈芝酸A的方法，其特征在于步驟(4)中的以氯仿:丙酮的體積比從10:1~3:1梯度沖洗，即先以氯仿:丙酮的體積比為10:1沖洗，然后換三氯甲烷:丙酮為8:1沖洗，再用三氯甲烷:丙酮為6:1沖洗，最后用三氯甲烷:丙酮為3:1進(jìn)行沖洗。
【文檔編號(hào)】C07J9/00GK104031107SQ201410223365
【公開(kāi)日】2014年9月10日 申請(qǐng)日期:2014年5月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月26日
【發(fā)明者】李成飛, 張婉萍, 馮寶軍 申請(qǐng)人:上海應(yīng)用技術(shù)學(xué)院