本發(fā)明屬于飼料生產(chǎn)領(lǐng)域，具體涉及適用于食用油生產(chǎn)廠環(huán)境中進(jìn)行發(fā)酵豆粕的生產(chǎn)工藝。
背景技術(shù)：
我國(guó)是世界上最大的養(yǎng)殖生產(chǎn)國(guó)之一，同時(shí)也是世界上飼料原料特別是蛋白質(zhì)原料的需求大國(guó)，我國(guó)飼料工業(yè)生產(chǎn)中蛋白質(zhì)飼料資源的嚴(yán)重不足，魚(yú)粉、肉骨粉以及血漿蛋白粉等高品質(zhì)動(dòng)物蛋白原料主要依賴國(guó)際進(jìn)口，而動(dòng)物性蛋白原料面臨資源匱乏和飼料產(chǎn)品的安全性問(wèn)題，豆粕作為一種質(zhì)量穩(wěn)定的植物蛋白原料，成為一種取代動(dòng)物蛋白的優(yōu)質(zhì)植物蛋白資源，我國(guó)有著豐富的豆粕資源，在中國(guó)豆粕年產(chǎn)約1000萬(wàn)噸，由于豆粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子如抗原蛋白、植酸、脲酶等的存在，尤其是胰蛋白酶抑制因子，它能阻礙豬體內(nèi)胰蛋白酶對(duì)豆類蛋白的消化吸收造成腹瀉，影響生長(zhǎng)，適口性差，難于消化，飼料利用率低等，嚴(yán)重限制了豆粕的應(yīng)用范圍和應(yīng)用價(jià)值，目前，應(yīng)用發(fā)酵技術(shù)處理豆粕，可有效降解豆粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子，提高其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。
眾多研究闡述了發(fā)酵豆粕的生產(chǎn)工藝：
cn103385360中講述了一種發(fā)酵豆粕的生產(chǎn)工藝：經(jīng)過(guò)粉碎過(guò)35目篩的豆粕與經(jīng)過(guò)粉碎過(guò)30目篩的甘草、野菊花、銀杏葉和青皮混合后，于發(fā)酵菌液按照一定的比例混合，混合后于發(fā)酵罐中密封發(fā)酵66-72h。
cn102763678a中闡述了一種發(fā)酵豆粕的生產(chǎn)工藝，通過(guò)添加外源蛋白酶和固態(tài)微生物種子，采用堆積固態(tài)發(fā)酵工藝。
cn102599341b中闡述了一種發(fā)酵豆粕的生產(chǎn)工藝，豆粕按照一定的比例和紅薯淀粉、食鹽、酵母等混合，在地下發(fā)酵池中無(wú)氧條件下15-35度發(fā)酵5-10天。
cn102948614b中公開(kāi)了一種菌酶協(xié)同發(fā)酵豆粕制備活性飼用肽的方法： 經(jīng)過(guò)活化的復(fù)合酶中性蛋白酶、酸性蛋白酶、堿性蛋白酶、非淀粉多糖酶，果膠酶等協(xié)同復(fù)合菌遲緩芽孢桿菌、發(fā)酵乳酸菌、產(chǎn)朊假絲酵母等作用豆粕分階段控溫，制備活性飼用肽。
livestockscience170(2014)91-99研究了一種固態(tài)發(fā)酵豆粕所得產(chǎn)品飼養(yǎng)小豬對(duì)小豬的影響，其中發(fā)酵豆粕的制作工藝為：中性蛋白酶和堿性蛋白酶混合的復(fù)合酶與經(jīng)過(guò)粉碎過(guò)1.0mm篩網(wǎng)的豆粕混合，加入嗜熱鏈球菌和釀酒酵母發(fā)酵液，混合厭氧發(fā)酵7天。
livestockscience163(2014)94-101中研究了菌酶協(xié)同作用發(fā)酵豆粕用于取代魚(yú)粉，其中發(fā)酵豆粕的生產(chǎn)工藝為：8種菌株和菠蘿蛋白酶菌酶協(xié)同作用進(jìn)行發(fā)酵豆粕的生產(chǎn)。
眾多研究均未提到：在生產(chǎn)食用油廠附近發(fā)酵豆粕的生產(chǎn)工藝，經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證普通生產(chǎn)工藝用于食用油廠附近發(fā)酵豆粕的生產(chǎn)所生產(chǎn)的發(fā)酵豆粕品質(zhì)不佳。本發(fā)明以豆粕為原料，通過(guò)特定工藝，可以在食用油廠附近環(huán)境中進(jìn)行油脂發(fā)酵豆粕的生產(chǎn)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明第一方面提供一種提高豆粕發(fā)酵中的酶解效果和/或提高發(fā)酵豆粕中酸溶蛋白含量的方法，所述方法包括在隔絕環(huán)境空氣的環(huán)境中發(fā)酵含酶、豆粕和水的混合物。
在某些實(shí)施方案中，發(fā)酵溫度為25～50℃。
在某些實(shí)施方案中，發(fā)酵時(shí)間為24～96h。
在某些實(shí)施方案中，在恒溫培養(yǎng)箱或恒溫水浴中實(shí)施所述發(fā)酵。
在某些實(shí)施方案中，通過(guò)將所述含酶、豆粕和水的混合物置于可密封的容器中來(lái)實(shí)現(xiàn)與環(huán)境空氣的隔絕。
在某些實(shí)施方案中，通過(guò)向所述可密封的容器中通入非環(huán)境空氣的氣體，例如潔凈空氣、氮?dú)?、二氧化碳、氧氣?或氫氣，來(lái)排出所述容器中原先含有的環(huán)境空氣。
在某些實(shí)施方案中，將吸附劑加到所述可密封的容器中、并密封該容器來(lái) 實(shí)現(xiàn)所述環(huán)境空氣的隔絕。
在某些實(shí)施方案中，通過(guò)將所述可密封的容器抽真空，并密封該容器來(lái)實(shí)現(xiàn)所述環(huán)境空氣的隔絕。
在某些實(shí)施方案中，將所述混合物直接加到所述可密封的容器中。
在某些實(shí)施方案中，先將所述混合物加到自封袋或玻璃容器中，然后將自封袋或玻璃容器放到所述可密封的容器中。
在某些實(shí)施方案中，將含所述混合物的自封袋或玻璃容器置于水浴中來(lái)實(shí)現(xiàn)環(huán)境空氣的隔絕。
在某些實(shí)施方案中，可對(duì)所述自封袋或玻璃容器抽真空、通入非環(huán)境空氣的氣體、或通入非環(huán)境空氣的氣體后排出自封袋中所有氣體，和/或?qū)⑽絼┓湃胨鲎苑獯虿Ａ萜髦小?/p>
在某些實(shí)施方案中，發(fā)酵過(guò)程中一直向混合物所在的非封閉的發(fā)酵環(huán)境中通入非環(huán)境空氣的氣體來(lái)實(shí)現(xiàn)與環(huán)境空氣的隔絕。
在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括：將含酶、豆粕和水的可密封容器(如自封袋)置于盛有吸附劑的玻璃容器中，密封該玻璃容器后將該玻璃容器放置在25～50℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵24～96h。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括：將含酶、豆粕和水和吸附劑的可密封容器(如自封袋)密封，將其放置在25～50℃的恒溫水浴中發(fā)酵24～96h。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括：將含酶、豆粕和水的混合物直接加到盛有吸附劑的玻璃容器中，密封該玻璃容器后在25～50℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵24～96h。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括：將含酶、豆粕和水的密封容器(如自封袋)抽真空后，放置在25～50℃的恒溫水浴中發(fā)酵24～96h。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括：將含酶、豆粕和水的密封容器(如自封袋)抽真空后，然后將其放置到盛有吸附劑的玻璃容器中，密封該玻璃容器后將該玻璃容器放置在25～50℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵24～96h。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括：先在密封容器中混勻酶與豆粕；通入非環(huán)境空氣的氣體一段時(shí)間；在通入非環(huán)境空氣的氣體的情況下加水到該密封容器中，密封后混勻；除去密封容器中的氣體并密封該密封容器，從而提供 所述含有酶、豆粕和水的混合物的密封容器；所述方法還包括，將該密封容器放置在含有吸附劑的玻璃容器中，密封該玻璃容器后將該玻璃容器放置在25～50℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵24～96h。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括：向含酶、豆粕和水的密封容器中通入非環(huán)境空氣的氣體一段時(shí)間后，將該密封容器密封，然后將該密封容器放置在含有吸附劑的玻璃容器中，密封該玻璃容器后再將該玻璃容器放置在25～50℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵24～96h。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括：將含酶、豆粕和水的混合物的可密封容器封口后放于玻璃容器中，將非環(huán)境空氣的氣體通入所述玻璃容器中，排出環(huán)境空氣，隨后密封該玻璃容器，置于25～50℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵24～96h。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括：將含酶、豆粕和水的混合物直接加到玻璃容器中，將非環(huán)境空氣的氣體通入所述玻璃容器中，排出環(huán)境空氣，隨后密封該玻璃容器，置于25～50℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵24～96h。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括：將非環(huán)境空氣的氣體通入含酶、豆粕和水的混合物的自封袋或玻璃容器中，或通入恒溫培養(yǎng)箱中，并在通入所述氣體的情況下在25～50℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵24～96h。
在某些實(shí)施方式中，所述吸附劑選自活性炭、白土和大孔樹(shù)脂。
在某些實(shí)施方式中，所述非環(huán)境空氣的氣體選自：潔凈空氣、氮?dú)?、二氧化碳、氧氣和氫氣?/p>
在某些實(shí)施方案中，通入惰性氣體的時(shí)間不少于2分鐘，優(yōu)選不少于5分鐘，更優(yōu)選為5～20分鐘。
在某些實(shí)施方式中，所述酶選自：蛋白酶、果膠酶、木聚糖酶、α-半乳糖苷酶和纖維素酶中的一種或者多種的混合物。
在某些實(shí)施方式中，所述酶的添加量為每克豆粕不小于100單位的酶。
在某些實(shí)施方案中，所述含酶、豆粕和水的混合物中水的含量為25～60％。
在某些實(shí)施方案中，發(fā)酵溫度為30～50℃，發(fā)酵時(shí)間為48～90h。
在某些實(shí)施方案中，發(fā)酵溫度為35～50℃，發(fā)酵時(shí)間為60～80h。
在某些實(shí)施方案中，所述方法在食用油生產(chǎn)廠環(huán)境中實(shí)施。
本發(fā)明第二方面提供一種豆粕發(fā)酵方法，所述方法包括：在隔絕環(huán)境空氣的環(huán)境中發(fā)酵酶、豆粕和水的混合物。
在某些實(shí)施方案中，發(fā)酵溫度為25～50℃。
在某些實(shí)施方案中，發(fā)酵時(shí)間為24～96h。
在某些實(shí)施方案中，在恒溫培養(yǎng)箱或恒溫水浴中實(shí)施所述發(fā)酵。
在某些實(shí)施方案中，通過(guò)將所述含酶、豆粕和水的混合物置于可密封的容器中來(lái)實(shí)現(xiàn)與環(huán)境空氣的隔絕。
在某些實(shí)施方案中，通過(guò)向所述可密封的容器中通入非環(huán)境空氣的氣體，例如氮?dú)狻⒍趸?、氧氣?或氫氣，來(lái)排出所述容器中原先含有的環(huán)境空氣。
在某些實(shí)施方案中，將吸附劑加到所述可密封的容器中、并密封該容器來(lái)實(shí)現(xiàn)所述環(huán)境空氣的隔絕。
在某些實(shí)施方案中，通過(guò)將所述可密封的容器抽真空，并密封該容器來(lái)實(shí)現(xiàn)所述環(huán)境空氣的隔絕。
在某些實(shí)施方案中，將所述混合物直接加到所述可密封的容器中。
在某些實(shí)施方案中，先將所述混合物加到自封袋或玻璃容器中，然后將自封袋放到所述可密封的容器中。
在某些實(shí)施方案中，將含所述混合物的自封袋或玻璃容器置于水浴中來(lái)實(shí)現(xiàn)環(huán)境空氣的隔絕。
在某些實(shí)施方案中，可對(duì)所述自封袋或玻璃容器抽真空、通入非環(huán)境空氣的氣體、或通入非環(huán)境空氣的氣體后排出自封袋中所有氣體，和/或?qū)⑽絼┓湃胨鲎苑獯虿Ａ萜髦小?/p>
在某些實(shí)施方案中，發(fā)酵過(guò)程中一直向混合物所在的非封閉的發(fā)酵環(huán)境中通入非環(huán)境空氣的氣體來(lái)實(shí)現(xiàn)與環(huán)境空氣的隔絕。
在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括：將含酶、豆粕和水的可密封容器(如自封袋)置于盛有吸附劑的玻璃容器中，密封該玻璃容器后將該玻璃容器放置在25～50℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵24～96h。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括：將含酶、豆粕和水和吸附劑的可密封容器(如自封袋)密封，將其放置在25～50℃的恒溫水浴中發(fā)酵24～96h。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括：將含酶、豆粕和水的混合物直接加到盛有吸附劑的玻璃容器中，密封該玻璃容器后在25～50℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵24～96h。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括：將含酶、豆粕和水的密封容器(如自封袋)抽真空后，放置在25～50℃的恒溫水浴中發(fā)酵24～96h。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括：將含酶、豆粕和水的密封容器(如自封袋)抽真空后，然后將其放置到盛有吸附劑的玻璃容器中，密封該玻璃容器后將該玻璃容器放置在25～50℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵24～96h。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括：先在密封容器中混勻酶與豆粕；通入非環(huán)境空氣的氣體一段時(shí)間；在通入非環(huán)境空氣的氣體的情況下加水到該密封容器中，密封后混勻；除去密封容器中的氣體并密封該密封容器，從而提供所述含有酶、豆粕和水的混合物的密封容器；所述方法還包括，將該密封容器放置在含有吸附劑的玻璃容器中，密封該玻璃容器后將該玻璃容器放置在25～50℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵24～96h。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括：向含酶、豆粕和水的密封容器中通入非環(huán)境空氣的氣體一段時(shí)間后，將該密封容器密封，然后將該密封容器放置在含有吸附劑的玻璃容器中，密封該玻璃容器后再將該玻璃容器放置在25～50℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵24～96h。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括：將含酶、豆粕和水的混合物的可密封容器封口后放于玻璃容器中，將非環(huán)境空氣的氣體通入所述玻璃容器中，排出環(huán)境空氣，隨后密封該玻璃容器，置于25～50℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵24～96h。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括：將含酶、豆粕和水的混合物直接加到玻璃容器中，將非環(huán)境空氣的氣體通入所述玻璃容器中，排出環(huán)境空氣，隨后密封該玻璃容器，置于25～50℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵24～96h。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括：將非環(huán)境空氣的氣體通入含酶、豆粕和水的混合物的自封袋或玻璃容器中，或通入恒溫培養(yǎng)箱中，并在通入所述氣體的情況下在25～50℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵24～96h。
在某些實(shí)施方式中，所述吸附劑選自活性炭、白土和大孔樹(shù)脂。
在某些實(shí)施方式中，所述非環(huán)境空氣的氣體選自：潔凈空氣、氮?dú)?、二氧化碳、氧氣和氫氣?/p>
在某些實(shí)施方案中，通入惰性氣體的時(shí)間為5～20分鐘。
在某些實(shí)施方式中，所述酶選自：蛋白酶、果膠酶、木聚糖酶、α-半乳糖苷酶和纖維素酶中的一種或者多種的混合物。
在某些實(shí)施方式中，所述酶的添加量為每克豆粕不小于100單位的酶。
在某些實(shí)施方案中，所述含酶、豆粕和水的混合物中水的含量為30～60％。
在某些實(shí)施方案中，發(fā)酵溫度為30～50℃，發(fā)酵時(shí)間為48～90h。
在某些實(shí)施方案中，發(fā)酵溫度為35～50℃，發(fā)酵時(shí)間為60～80h。
具體實(shí)施方式
發(fā)酵豆粕品質(zhì)的優(yōu)劣、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的高低，除粗蛋白指標(biāo)外，小肽含量也是業(yè)內(nèi)人士普遍關(guān)注的重要指標(biāo)，肽含量與酸溶蛋白質(zhì)含量是正相關(guān)，所以在發(fā)酵豆粕中可使用酸溶蛋白質(zhì)含量評(píng)價(jià)發(fā)酵豆粕品質(zhì)，既可以反映豆粕中抗原蛋白和其它抗?fàn)I養(yǎng)因子蛋白被水解的程度，同時(shí)又可一定程度上反映肽含量。當(dāng)發(fā)酵豆粕中酸溶蛋白含量≥16％時(shí)，抗原蛋白降解效果顯著，故當(dāng)酸溶蛋白含量＜16％時(shí)，發(fā)酵豆粕品質(zhì)較差。
本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，生產(chǎn)食用油的工廠及該油廠附近，通過(guò)普通工藝所生產(chǎn)的發(fā)酵豆粕酶解效果差，產(chǎn)品中小肽含量低。本發(fā)明可有效解決此問(wèn)題，使在油廠及油廠附近的環(huán)境中，發(fā)酵豆粕蛋白酶效果顯著，小肽含量提升，抗原蛋白降解效果顯著。
本發(fā)明以豆粕為原料，通過(guò)特定工藝進(jìn)行發(fā)酵豆粕的生產(chǎn)，可在食用油生產(chǎn)廠環(huán)境中進(jìn)行優(yōu)質(zhì)發(fā)酵豆粕的生產(chǎn)，可將抗原蛋白有效降解為小分子肽，有利于幼小動(dòng)物的消化吸收。
因此，本發(fā)明提供提高豆粕發(fā)酵中的酶解效果的方法，提高發(fā)酵豆粕中酸溶蛋白含量的方法，以及豆粕發(fā)酵方法。雖然本發(fā)明的方法可在任何地方實(shí)施，但優(yōu)選的是，從經(jīng)濟(jì)的角度考慮，本發(fā)明的方法在生產(chǎn)食用油的工廠及該油廠附近，如此可極大地降低運(yùn)輸豆粕產(chǎn)生的成本。
本發(fā)明的方法包括在隔絕環(huán)境空氣的情況下使含有酶、豆粕和水的混合物發(fā)酵。
通常，發(fā)酵溫度為25～50℃，優(yōu)選為30～50℃，更優(yōu)選為35～50℃。可通過(guò)恒溫培養(yǎng)箱或恒溫水浴來(lái)提供所述發(fā)酵溫度。
發(fā)酵時(shí)間可以是24～96h，例如48～90h或60～80h。
可通過(guò)將所述含酶、豆粕和水的混合物置于可密封的容器中來(lái)實(shí)現(xiàn)與環(huán)境空氣的夠絕。此時(shí)，可通過(guò)向可密封的容器中排入非環(huán)境空氣的氣體，例如潔凈空氣、氮?dú)?、二氧化碳、氧氣?或氫氣，來(lái)排出密封容器中原先含有的環(huán)境空氣，然后密封蓋容器?！皾崈艨諝狻笨蓮臐崈舻沫h(huán)境中獲得，此環(huán)境包括但不限于食用油環(huán)境中的高空處和非食用油環(huán)境?；蛘撸蓪⑽絼┘拥剿鋈萜髦?，經(jīng)由吸附劑吸附該容器中的環(huán)境空氣，如此也能實(shí)現(xiàn)本文所述的隔絕環(huán)境空氣。適用于本發(fā)明的吸附劑包括但不限于活性炭、白土和大孔樹(shù)脂。
或者，發(fā)酵過(guò)程中一直向混合物所在的非封閉的發(fā)酵環(huán)境中通入非環(huán)境空氣的氣體也可實(shí)現(xiàn)與環(huán)境空氣的隔絕。
水浴由于水蒸氣的存在而使水浴范圍內(nèi)的環(huán)境與環(huán)境空氣隔絕，因此也能構(gòu)建本發(fā)明的隔絕環(huán)境空氣的環(huán)境。因此，本發(fā)明也可將盛放有所述含酶、豆粕和水的混合物置于水浴中進(jìn)行發(fā)酵。
通常，可將所述混合物盛放于一可密封容器中。然后再將該容器置于隔絕環(huán)境空氣的環(huán)境中進(jìn)行發(fā)酵。適用于盛放所述混合物的可密封容器可以是自封袋(通常是塑料制成)或玻璃容器，優(yōu)選自封袋。更優(yōu)選地，在使用自封袋時(shí)，在自封袋中也放入吸附劑。在使用玻璃容器盛放所述混合物的情況下，除非該玻璃容器本身就用作隔絕環(huán)境空氣的容器，否則也不應(yīng)將其封口，這樣會(huì)阻止玻璃容器中原本所含的環(huán)境空氣逸出?；蛘?，可將所述混合物直接置于玻璃容器，同時(shí)在玻璃容器中放入吸附劑(吸附劑可獨(dú)立包裝)，密封后也可構(gòu)建本文所述的與環(huán)境空氣隔絕的環(huán)境。
本發(fā)明中，可密閉的容器可以是包括自封袋和玻璃容器。通常，自封袋用于盛放酶、豆粕與水的混合物，而玻璃容器用來(lái)隔絕環(huán)境空氣。當(dāng)然，如本申請(qǐng)某些實(shí)施方案中所述的，玻璃容器也可用來(lái)直接盛放所述混合物。
本方案中所用吸附劑用量一般為豆粕質(zhì)量的0.05％～1％。
因此，本發(fā)明的方法可包括：
(1)在恒溫水浴中進(jìn)行發(fā)酵。此時(shí)可將混合物放入含有吸附劑的自封袋或玻璃容器中。然后將該自封袋或玻璃容器置于水浴中進(jìn)行發(fā)酵。此時(shí)，自封袋和玻璃容器可封口，也可不封口?；蛘撸谀承?shí)施方案中，可將盛放所述混合物的自封袋或玻璃容器抽真空，同時(shí)放入或不放入吸附劑，然后置于水浴中進(jìn)行發(fā)酵。
(2)在恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行發(fā)酵。此時(shí)由于恒溫培養(yǎng)箱無(wú)法構(gòu)建一個(gè)隔絕環(huán)境空氣的環(huán)境，因此需額外提供一個(gè)隔絕環(huán)境空氣的環(huán)境。例如，通過(guò)將所述混合物直接加到含吸附劑的可密封的玻璃容器中，然后密封該玻璃容器，由此可提供一個(gè)隔絕環(huán)境空氣的環(huán)境。或者，可向含所述混合物的可密封的玻璃容器中通入非環(huán)境空氣的氣體，排出該容器所含的環(huán)境空氣；或?qū)υ摬Ａ萜鞒檎婵眨换蛲瑫r(shí)或單獨(dú)在該玻璃容器中放入吸附劑，之后密封該玻璃容器，以此來(lái)提供隔絕環(huán)境空氣的環(huán)境。此時(shí)，混合物可預(yù)先盛放在自封袋中，而自封袋自身也可被抽真空后密封，或通入非環(huán)境空氣后密封，或通入非環(huán)境空氣后將所有氣體排出后密封，或同時(shí)或單獨(dú)地，自封袋也可裝有吸附劑?；蛘撸稍诎l(fā)酵的過(guò)程中一直向裝有混合物的自封袋或玻璃容器中通入非環(huán)境空氣，或一直向放置該自封袋或玻璃容器的恒溫培養(yǎng)箱中通入非環(huán)境空氣，以此來(lái)提供隔絕環(huán)境空氣的環(huán)境。
因此，在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括：將含酶、豆粕和水的可密封容器(如自封袋)置于盛有吸附劑的玻璃容器中，密封該玻璃容器后將該玻璃容器放置在25～50℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵24～96h。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括：將含酶、豆粕和水和吸附劑的可密封容器(如自封袋)密封，將其放置在25～50℃的恒溫水浴中發(fā)酵24～96h。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括：將酶、豆粕和水的混合物直接加到盛有吸附劑的玻璃容器中，密封該玻璃容器后在25～50℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵24～96h。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括：將含酶、豆粕和水的密封容器(如自封袋)抽真空后，放置在25～50℃的恒溫水浴中發(fā)酵24～96h。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括：將含酶、豆粕和水的密封容器(如 自封袋)抽真空后，然后將其放置到盛有吸附劑的玻璃容器中，密封該玻璃容器后將該玻璃容器放置在25～50℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵24～96h。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括：先在密封容器中混勻酶與豆粕；通入非環(huán)境空氣的氣體一段時(shí)間；在通入非環(huán)境空氣的氣體的情況下加水到該密封容器中，密封后混勻；除去密封容器中的氣體并密封該密封容器，從而提供所述含有酶、豆粕和水的混合物的密封容器；所述方法還包括，將該密封容器放置在含有吸附劑的玻璃容器中，密封該玻璃容器后將該玻璃容器放置在25～50℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵24～96h。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括：向含酶、豆粕和水的密封容器中通入非環(huán)境空氣的氣體一段時(shí)間后，將該密封容器密封，然后將該密封容器放置在含有吸附劑的玻璃容器中，密封該玻璃容器后再將該玻璃容器放置在25～50℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵24～96h。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括：將含酶、豆粕和水的混合物的可密封容器封口后放于玻璃容器中，將非環(huán)境空氣的氣體通入所述玻璃容器中，排出環(huán)境空氣，隨后密封該玻璃容器，置于25～50℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵24～96h。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括：將酶、豆粕和水的混合物直接加到玻璃容器中，將非環(huán)境空氣的氣體通入所述玻璃容器中，排出環(huán)境空氣，隨后密封該玻璃容器，置于25～50℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵24～96h。
通常，通入非環(huán)境空氣的氣體的時(shí)間為5～20分鐘，例如10～15分鐘。
適用于本發(fā)明的酶是本領(lǐng)域周知的用于發(fā)酵豆粕的各種酶，包括但不限于蛋白酶、果膠酶、木聚糖酶、α-半乳糖苷酶和纖維素酶中的一種或者多種的混合物。按本領(lǐng)域常規(guī)的量添加所述酶，通常為每克豆粕不小于100單位的酶。
通常，所述含酶、豆粕和水的混合物中水的含量為30～60％。
以下將以具體實(shí)施例的方式闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅僅是闡述性的，并非限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例中用到的方法和試劑，除非另有說(shuō)明，否則為本領(lǐng)域常規(guī)的方法和試劑。
實(shí)施例1：利用常規(guī)工藝進(jìn)行發(fā)酵豆粕的生產(chǎn)
此實(shí)驗(yàn)分別在7個(gè)地方實(shí)施，七個(gè)地方包括：
豐益(上海)生物技術(shù)研發(fā)中心有限公司；
大海糧油工業(yè)(防城港)有限公司；
益海(泰州)糧油工業(yè)有限公司；
益海(連云港)糧油工業(yè)有限公司；
秦皇島金海糧油工業(yè)有限公司；
青島；
江南大學(xué)；
其中前5個(gè)均為益海嘉里食用油生產(chǎn)廠，而青島和江南大學(xué)附近無(wú)食用油生產(chǎn)廠。
具體試驗(yàn)方法和實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
取50g商品豆粕放于自封袋中，按照500u/g豆粕添加蛋白酶，混合均勻，加水23g，再次混合均勻，將混合好的樣品放于40℃恒溫培養(yǎng)中培養(yǎng)72h后于65℃烘箱中烘6h后，粉碎過(guò)60目篩，進(jìn)行粗蛋白和酸溶蛋白的檢測(cè)。其中粗蛋白質(zhì)含量測(cè)定采用微量凱氏定氮法(gb/t5511-2008)；酸溶蛋白含量檢測(cè)采用三氯乙酸(tca)法(gb/t22492-2008)。結(jié)果如下表一所示。
表一：實(shí)施例1試驗(yàn)結(jié)果
結(jié)論：在生產(chǎn)食用油工廠所做發(fā)酵豆粕，小肽含量均偏低，小于16％，而在青島和江南大學(xué)所做樣品，小肽含量明顯高于其他五處。所以在食用油生產(chǎn)廠附近利用常規(guī)工藝進(jìn)行發(fā)酵豆粕的生產(chǎn)所得發(fā)酵豆粕小肽含量偏低，不利于工業(yè)化的實(shí)施。
從實(shí)施例2開(kāi)始以下實(shí)施例均是在食用油生產(chǎn)廠環(huán)境中進(jìn)行。
實(shí)施例2：活性炭吸附對(duì)發(fā)酵豆粕品質(zhì)的影響
取50g商品豆粕放于自封袋中，按照400u/g豆粕添加蛋白酶，混合均勻，加水23g，再次混合均勻，封口，將含所述豆粕、蛋白酶和水的自封袋放于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(稱為樣品1)；
或?qū)⒃撟苑獯庞谑⒂谢钚蕴康拿芊獠Ａ萜髦?，而后放于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(稱為樣品2)；
或混合好的樣品放于含有活性炭的自封袋中，封口后放于恒溫水浴中(稱為樣品3)；
或混合好的樣品放于含有活性炭的自封袋中，封口后放于恒溫培養(yǎng)箱中(稱為樣品4)；
或?qū)?0g商品豆粕與400u/g豆粕添加蛋白酶及23g水在燒杯中混合，待混合均勻后將燒杯中樣品直接傾注到放于盛有活性炭的玻璃瓶中(活性炭紗布包扎)，玻璃瓶封口后放于恒溫培養(yǎng)箱中(稱為樣品5)。
各個(gè)樣品的培養(yǎng)溫度均為40℃，培養(yǎng)時(shí)間為72h，培養(yǎng)72h后于將樣品放于65℃烘箱中烘6h，粉碎過(guò)60目篩，進(jìn)行粗蛋白和酸溶蛋白的檢測(cè)。其中粗蛋白質(zhì)含量測(cè)定采用微量凱氏定氮法(gb/t5511-2008)；酸溶蛋白含量檢測(cè)采用三氯乙酸(tca)法(gb/t22492-2008)。結(jié)果如下表二所示。
表二：實(shí)施例2試驗(yàn)結(jié)果
結(jié)論：在生產(chǎn)食用油廠環(huán)境中進(jìn)行發(fā)酵豆粕的生產(chǎn)，發(fā)酵工藝中用活性炭進(jìn)行處理，放于水浴和密封玻璃容器中可有效提高小肽含量。
實(shí)施例3：抽真空技術(shù)進(jìn)行發(fā)酵豆粕的生產(chǎn)
取50g商品豆粕放于自封袋中，按照400u/g豆粕添加蛋白酶，混合均勻，加水23g，再次混合均勻，封口，將含所述豆粕、蛋白酶和水的自封袋放于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(稱為樣品1)；
或?qū)⒃撟苑獯M(jìn)行抽真空處理，封口后放于恒溫水浴中(稱為樣品2)；
或抽真空處理過(guò)的自封袋封口后放于恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)(稱為樣品3)；
或抽真空處理過(guò)的自封袋封口后放于密封的玻璃容器中后放于恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)(稱為樣品4)；
或?qū)⒄婵仗幚磉^(guò)的自封袋放于盛有活性炭的密封玻璃容器中后放于恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)(稱為樣品5)。
各個(gè)樣品培養(yǎng)溫度均為40℃，培養(yǎng)時(shí)間為72h，培養(yǎng)72h后于65℃烘箱中烘6h后，粉碎過(guò)60目篩，進(jìn)行粗蛋白和酸溶蛋白的檢測(cè)。其中粗蛋白質(zhì)含量測(cè)定采用微量凱氏定氮法(gb/t5511-2008)；酸溶蛋白含量檢測(cè)采用三氯乙酸(tca)法(gb/t22492-2008)。結(jié)果如下表三所示。
表三：實(shí)施例3試驗(yàn)結(jié)果
結(jié)論：在生產(chǎn)食用油廠環(huán)境中進(jìn)行發(fā)酵豆粕的生產(chǎn)，發(fā)酵豆粕樣品在發(fā)酵前進(jìn)行抽真空處理后，放于水浴或含有活性炭的密封玻璃容器中，可有效提高發(fā)酵豆粕小肽含量。
實(shí)施例4：通n2對(duì)發(fā)酵豆粕品質(zhì)的影響
取50g商品豆粕放于自封袋中，按照400u/g豆粕添加蛋白酶，混合均勻，加水23g，再次混合均勻，封口，將含所述豆粕、蛋白酶和水的自封袋放于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(樣品1)。
或者，在自封袋中將酶與豆粕混合均勻后，將氮?dú)夤苌钊胱苑獯撞浚M(jìn)行通n2，通n215min后在通n2條件下加水23g密封，在密封的狀態(tài)下混合均勻，混合均勻后快速趕盡自封袋中的氣體，密封，將密封好的自封袋放于密封玻璃容器中，稱為樣品2；或?qū)②s盡氣體、密封好的自封袋放于含有活性炭的密封玻璃容器中，稱為樣品3；
或者，在自封袋中將豆粕與酶混合均勻后，加水23g，再次混合均勻，混合均勻后，將氮?dú)夤苌钊胱苑獯撞?，進(jìn)行通n2，通n215min后密封自封袋，將密封好的自封袋放于密封玻璃容器中稱為樣品4；或?qū)⑼ǖ竺芊夂玫淖苑獯庞诤谢钚蕴康拿芊獠Ａ萜髦校Q為樣品5。
將所有制備好的樣品放于40℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，培養(yǎng)72h后于65℃烘箱中烘6h后，粉碎過(guò)60目篩，進(jìn)行粗蛋白和酸溶蛋白的檢測(cè)。其中粗蛋白質(zhì)含量測(cè)定采用微量凱氏定氮法(gb/t5511-2008)；酸溶蛋白含量檢測(cè)采用三氯乙酸(tca)法(gb/t22492-2008)。結(jié)果如下表四所示。
表四：實(shí)施例4試驗(yàn)結(jié)果
結(jié)論：在生產(chǎn)食用油廠環(huán)境中進(jìn)行發(fā)酵豆粕的生產(chǎn)，發(fā)酵工藝中進(jìn)行通n2后放于盛有活性炭的密封玻璃容器中可有效提高發(fā)酵豆粕中小肽含量。
實(shí)施例5：發(fā)酵環(huán)境中通n2處理對(duì)發(fā)酵豆粕品質(zhì)的影響
取50g商品豆粕放于自封袋中，按照400u/g豆粕添加蛋白酶，混合均勻，加水23g，再次混合均勻，封口，將樣品放于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(樣品1)；
或?qū)⒎饪诤蟮臉悠贩庞诿芊獾牟Ａ萜髦校庞诤銣嘏囵B(yǎng)箱中培養(yǎng)(樣品2)；
或?qū)⒎饪诤蟮臉悠贩庞诓Ａ萜髦?，然后將氮?dú)夤苌钊氩Ａ萜鞯撞?，進(jìn)行通n2，通n215min后將玻璃容器加蓋密封，放于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(樣品3)；
或?qū)⒍蛊?、酶和水三者在燒杯中混合，混合好用直接傾注于玻璃容器中，然后將氮?dú)夤苌钊氩Ａ萜鞯撞?，進(jìn)行通n2，通n215min后將玻璃容器加蓋密封，放于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(樣品4)；
或在自封袋中將豆粕與酶混合均勻后，加水23g，再次混合均勻，混合均勻后，將潔凈空氣管深入自封袋底部，并將盛有發(fā)酵樣品的自封袋放于40℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行邊通氣邊發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)間為72h(樣品5)。
所有制備好的樣品培養(yǎng)溫度為40℃，培養(yǎng)72h后于65℃烘箱中烘6h后，粉碎過(guò)60目篩，進(jìn)行粗蛋白和酸溶蛋白的檢測(cè)。其中粗蛋白質(zhì)含量測(cè)定采用微量凱氏定氮法(gb/t5511-2008)；酸溶蛋白含量檢測(cè)采用三氯乙酸(tca)法(gb/t22492-2008)。結(jié)果如下表五所示。
表五：實(shí)施例5試驗(yàn)結(jié)果
上述試驗(yàn)證明，在食用油生產(chǎn)廠環(huán)境中進(jìn)行普通工藝的發(fā)酵豆粕的發(fā)酵，酶解效果差，發(fā)酵豆粕產(chǎn)品品質(zhì)較低。本發(fā)明提供可以在食用油廠環(huán)境中進(jìn)行發(fā)酵豆粕生產(chǎn)的生產(chǎn)工藝，且豆粕中抗原蛋白等抗?fàn)I養(yǎng)因子得到有效降解，發(fā)酵豆粕中小肽含量得到顯著提升。