一種膠孢炭疽菌的快速產(chǎn)孢方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種炭疽病菌的快速產(chǎn)孢方法，它包括膠孢炭疽菌菌株的活化、菌絲體培養(yǎng)、刮菌絲、無菌水沖洗、晾干、恒溫光照培養(yǎng)等步驟，在24～48小時內(nèi)迅速誘導炭疽菌菌絲體大量產(chǎn)孢，單位面積的產(chǎn)孢量達7.8×107~6.5×109個/cm2。通過該方法可以快速誘導膠孢炭疽菌菌絲體迅速產(chǎn)孢，為后續(xù)的孢子形態(tài)、附著胞等形態(tài)及致病性測定實驗奠定良好基礎，大大縮短了實驗周期，節(jié)約了科研工作者大量的寶貴時間。
【專利說明】一種膠孢炭疽菌的快速產(chǎn)孢方法

【技術(shù)領域】
[0001]本發(fā)明屬于生命科學【技術(shù)領域】，具體涉及一種膠孢炭疽菌的快速產(chǎn)孢方法，適用于干燥保存、活化的等狀態(tài)下的膠孢炭疽菌的菌絲體的快速產(chǎn)孢，通常在24?48 h內(nèi)即可迅速產(chǎn)孢，每平方厘米的孢子量可達7.8 X 17 ~ 6.5 X 19個。

【背景技術(shù)】
[0002]膠孢炭疽菌寄主范圍十分廣泛，可侵染桃、油桃、蘋果、葡萄、芒果和梨等多種寄主引起炭疽病。膠孢炭疽菌菌株間從形態(tài)特征、致病性、分子遺傳水平、營養(yǎng)體親和群等方面都具有較大的變異，菌落可為灰白色至深灰色，氣生菌絲平坦，氈狀或者絮狀，分生孢子梗一般為無色，分生孢子為單胞，淡黃褐色，圓筒形或棍棒形，兩端鈍圓形，大小通常為12?26 MmX3.5?5 Mm。關(guān)于膠孢炭疽菌孢子的研宄極為普遍，它對炭疽菌的分類、致病性等的研宄極為重要，而誘導產(chǎn)孢則成為研宄中的一個關(guān)鍵環(huán)節(jié)，如何快速獲得大量孢子在很大程度上決定著研宄的進展及成敗。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是利用簡易可行的方法快速誘導膠孢炭疽菌菌絲體產(chǎn)孢，從而為加快后續(xù)的孢子、附著胞及致病性的相關(guān)研宄奠定良好基礎，并為廣大科研工作節(jié)約了大量的寶貴時間。
[0004]為了實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
以PDA固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的膠孢炭疽菌的菌絲體為產(chǎn)孢的基礎，通過刮菌絲、無菌水沖洗、干燥及光照培養(yǎng)措施誘導菌絲體在光照24?48 h條件下迅速萌發(fā)大量孢子。
[0005]具體包括以下步驟:
(1)將分離或已活化的膠孢炭疽菌重新轉(zhuǎn)接到PDA平板上，置于28°C恒溫培養(yǎng)箱中光照培養(yǎng)24?48 h ；
(2)待菌落長至直徑為3?4.5cm時，在超凈工作臺中用無菌棉簽將中央的直徑為2-3.5cm氣生菌絲除去，并用無菌水將表面沖洗干凈，倒扣自然晾干；
(3)將晾干后的平板蓋上蓋子后平鋪于28°0的恒溫培養(yǎng)箱中繼續(xù)光照培養(yǎng)24~48 h;
(4)光照24~48h后即在平板表面看見橙紅色的分生孢子器，用無菌水將分生孢子器洗下并將其擠破，分生孢子則自動釋放到水中；定容至20 mL，取20 μ L至血球計數(shù)板上觀察并計算單位面積的產(chǎn)孢量。
[0006]PDA固體培養(yǎng)基配方:馬鈴薯200g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，定容至I L。
[0007]一般光照24h后即可在平板表面看見少量橙紅色的分生孢子器，用無菌水將分生孢子器洗下并將其擠破，分生孢子則自動釋放到水中；光照48h后分生孢子器明顯增多，用適量無菌水將所有分生孢子器洗下后定容至20mL，取20 μ L至血球計數(shù)板上觀察并計算單位面積的產(chǎn)孢量。
[0008]所述的膠孢炭疽產(chǎn)孢量達7.8X 17 ~ 6.5X 19個/cm2。
[0009]本發(fā)明的有益效果是:通過光照刺激使膠孢炭疽菌菌絲體在24?48h內(nèi)即可快速產(chǎn)生大量分生孢大器和分生孢子，大大縮短了整個實驗周期，有效節(jié)約了人力物力及科研工作者的大量寶貴時間。

【具體實施方式】
[0010]實施例1
(1)將分離的膠孢炭疽菌重新轉(zhuǎn)接到PDA平板上，置于28°0恒溫培養(yǎng)箱中光照培養(yǎng)24
h ；
(2)待菌落長至直徑約為3cm時，在超凈工作臺中用無菌棉簽將中央的直徑為2 cm氣生菌絲除去，并用無菌水將表面沖洗3次，倒扣自然晾干；
(3)將晾干后的平板蓋上蓋子后平鋪于28°0的恒溫培養(yǎng)箱中繼續(xù)光照培養(yǎng)24 h左右；
(4)光照24h后即在平板表面看見少量橙紅色的分生孢子器，用無菌水將分生孢子器洗下并將其搗破，分生孢子則自動釋放到水中，定容至20 mL，取20 UL至血球計數(shù)板上觀察并計算單位面積的產(chǎn)孢量。
[0011 ] 所述的膠孢炭疽產(chǎn)孢量達7.8 X 17個/cm2。
[0012]實施例2
(1)將已活化的膠孢炭疽菌重新轉(zhuǎn)接到PDA平板上，置于28°0恒溫培養(yǎng)箱中光照培養(yǎng)48 h ；
(2)待菌落長至直徑為4.5 cm時，在超凈工作臺中用無菌棉簽將中央的直徑為3.5 cm氣生菌絲除去，并用無菌水將表面沖洗干凈，倒扣自然晾干；
(3)將晾干后的平板蓋上蓋子后平鋪于28°0的恒溫培養(yǎng)箱中繼續(xù)光照培養(yǎng)48 h;
(4)光照48h后即在平板表面看見橙紅色的分生孢子器，用無菌水將分生孢子器洗下并將其搗破，分生孢子則自動釋放到水中，定容至20 mL，取20 UL至血球計數(shù)板上觀察并計算單位面積的產(chǎn)孢量。
[0013]所述的膠孢炭疽產(chǎn)孢量達6.5X 19個/cm2。
[0014]實施例3
(1)將已活化的膠孢炭疽菌重新轉(zhuǎn)接到PDA平板上，置于28°0恒溫培養(yǎng)箱中光照培養(yǎng)36 h ；
(2)待菌落長至直徑為4cm時，在超凈工作臺中用無菌棉簽將中央的直徑為2.5 cm氣生菌絲除去，并用無菌水將表面沖洗2~3次，倒扣自然晾干；
(3)將晾干后的平板蓋上蓋子后平鋪于28°0的恒溫培養(yǎng)箱中繼續(xù)光照培養(yǎng)36 h;
(4)光照36h后即在平板表面看見橙紅色的分生孢子器，用無菌水將分生孢子器洗下并將其擠破，分生孢子則自動釋放到水中，定容至20 mL，取20 UL至血球計數(shù)板上觀察并計算單位面積的產(chǎn)孢量。
[0015]所述的膠孢炭疽產(chǎn)孢量達3.6X 18個/cm2。
[0016]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，凡依本發(fā)明申請專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應屬本發(fā)明的涵蓋范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種膠孢炭疽的快速產(chǎn)孢方法，其特征在于:以PDA固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的膠孢炭疽菌的菌絲體為產(chǎn)孢的基礎，通過刮除菌絲、無菌水沖洗、干燥及光照培養(yǎng)措施誘導菌絲體在光照24?48 h條件下迅速萌發(fā)大量孢子。
2.根據(jù)權(quán)利I要求所述的膠孢炭疽菌的快速產(chǎn)孢方法，其特征在于:主要包括以下步驟: (1)將分離或活化好的膠孢炭疽菌重新轉(zhuǎn)接到PDA培養(yǎng)基平板上，置于28°0恒溫培養(yǎng)箱中光照培養(yǎng)24-48h ； (2)待菌落長至直徑為3?4.5cm時，在超凈工作臺中用無菌棉簽將中央直徑為2-3.5cm的氣生菌絲除去，表面用無菌水將表面沖洗2~3次，將平板倒扣自然晾干； (3)將晾干后的平板重新蓋上蓋子后平鋪于28°0的恒溫培養(yǎng)箱中繼續(xù)光照培養(yǎng)24~48h ； (4)一般光照24~48 h后即在平板表面看見橙紅色的分生孢子器，用無菌水將分生孢子器洗下并將其搗破，分生孢子則自動釋放到水中，定容至20 mL，取20 UL至血球計數(shù)板上觀察并計算單位面積的產(chǎn)孢量。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的膠孢炭疽菌的快速產(chǎn)孢方法，其特征在于:所述的膠孢炭疽產(chǎn)孢量為7.8 X 10-6.5 X 19個/cm 2。
【文檔編號】C12R1/645GK104480060SQ201410712920
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年12月2日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月2日
【發(fā)明者】林雄杰, 范國成, 王賢達, 胡菡青, 雷龑 申請人:福建省農(nóng)業(yè)科學院果樹研究所