一種有抗菌及增效抗菌活性的藥物及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供一種藥物物質(zhì)，及其制備方法。本發(fā)明藥物物質(zhì)由連翹飲經(jīng)過(guò)乙醇提取、大孔吸附樹(shù)脂純化得到，富集了連翹飲中的環(huán)烯醚萜類(lèi)和酚類(lèi)類(lèi)成分，同時(shí)經(jīng)過(guò)體內(nèi)外抗菌試驗(yàn)證明，本發(fā)明藥物物質(zhì)體外聯(lián)合口服抗生素頭孢克洛膠囊有抗菌增效作用，體內(nèi)試驗(yàn)對(duì)金黃色葡萄球菌感染模型小鼠具有保護(hù)性作用，使細(xì)菌感染模型小鼠死亡率降低，延長(zhǎng)存活時(shí)間，顯示出良好的抗菌及抗菌增效活性。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種有抗菌及增效抗菌活性的藥物及其制備方法與應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物研究開(kāi)發(fā)領(lǐng)域，涉及一種藥物物質(zhì)，特別涉及一種具有抗菌及增 效抗菌活性的藥物物質(zhì)及其制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 隨著抗生素在臨床上的廣泛使用，耐藥性問(wèn)題也日益突出，尋找新的抗菌藥物或 逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥已成為國(guó)際上研究的熱點(diǎn)，現(xiàn)有不少研究顯示中藥具有抗菌活性或逆轉(zhuǎn)細(xì)菌 耐藥的作用，很多中藥復(fù)方制劑作用又優(yōu)于單味中藥，因此研究合理的中西藥聯(lián)用既能提 高療效，又可縮短療程，并能抑制臨床上耐藥菌株出現(xiàn)的頻繁性，具有重大的意義。
[0003] 連翹飲，來(lái)源于《類(lèi)證活人書(shū)》卷二十，異名連翹散（《斑論萃英》）、防風(fēng)散（《普 濟(jì)方》卷三六九）、上清連翹散（《丹溪心法附余》卷十）。由連翹、防風(fēng)、甘草（炙）、山桅 子等分組成。功用，疏風(fēng)清熱。主治，小兒風(fēng)熱感冒、諸瘡腫毒、咽喉疼痛。方中連翹、桅子 對(duì)多種病原微生物都有抑制作用，如抗細(xì)菌、抗真菌、抗病毒、殺鉤端螺旋體作用等。防風(fēng)、 甘草具有很好的清熱解毒、抗炎作用，同時(shí)也具有抗菌作用。目前臨床上，連翹飲及其加減 方多用于治療小兒發(fā)熱等疾病。
[0004] 本發(fā)明人以連翹飲為研究載體，以自然藥學(xué)觀為基本指導(dǎo)思想，運(yùn)用筆者所創(chuàng)立 的藥物成分藥代-藥效動(dòng)力學(xué)與相互作用性關(guān)聯(lián)研究方法學(xué)體系（PK-PD-DI)，以藥物體系 所體現(xiàn)的自然性、協(xié)同性、親和性為線索尋找連翹飲抗菌藥物體系，并以藥物體系為主導(dǎo)進(jìn) 行藥物制備工藝研究，目前，未見(jiàn)從連翹飲中制備抗菌藥物物質(zhì)的報(bào)道，本發(fā)明基于藥物體 系研究結(jié)果，將連翹飲中的有關(guān)萜類(lèi)成分和酚類(lèi)成分作為藥物物質(zhì)基本組成采用大孔吸附 樹(shù)脂進(jìn)行分離富集，得到連翹飲具有抗菌及增效抗菌作用的藥物物質(zhì)，有利于進(jìn)一步創(chuàng)新 藥物的研發(fā)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種具有抗菌及增效抗菌作用的中藥藥物物質(zhì)，其藥物體 系由環(huán)烯醚萜、酚類(lèi)等組成。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供其制備方法及工藝，本發(fā)明的第 三個(gè)目的在于提供其質(zhì)量檢測(cè)及其控制方法。本發(fā)明的第四個(gè)目的在于提供其體外抗菌及 增效抗菌活性，以及對(duì)金黃色葡菌感染小鼠的保護(hù)作用。本發(fā)明的第五個(gè)目的在于提供該 中藥藥物物質(zhì)組合物的制品及其在藥品、食品領(lǐng)域的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明的目的是通過(guò)如下途徑實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 本發(fā)明中藥藥物物質(zhì)組合可由如下4組藥用植物及其代用品種，包括其藥用部位 及非藥用部位，藥材及其飲片組合制成。
[0008] 組1:連翹、青翹、黃翹、秦連翹、金鐘花、卵形連翹、麗江連翹、奇異連翹等木犀科 植物.
[0009]組2:防風(fēng)、川防風(fēng)、云防風(fēng)、小防風(fēng)等傘形科植物。
[0010] 組3 :桅子、水桅子等茜草科及其同屬植物。
[0011] 組4:甘草、脹果甘草、光果甘草、粗毛甘草、云南甘草、圓果甘草等甘草屬及同科 植物及其炮制品。
[0012] 本發(fā)明中藥藥物物質(zhì)，可經(jīng)上述原料藥組合后以乙醇、或其他醇類(lèi)、稀醇、或其他 有機(jī)溶劑或水提取再通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂或其他色譜方法，如聚酰胺色譜法等，或溶劑萃取 法等純化得到。
[0013] 本發(fā)明中藥藥物物質(zhì)可由上述原料藥的提取物經(jīng)進(jìn)一步富集純化后或上述原料 藥的大孔樹(shù)脂制備物混合而成。
[0014] 本發(fā)明中藥藥物物質(zhì)可經(jīng)化學(xué)合成或結(jié)構(gòu)修飾，生物合成或生物轉(zhuǎn)等途徑獲得。
[0015] 本發(fā)明中藥藥物組合優(yōu)選由如下原料藥制成：
[0016] 連翹100-250重量份防風(fēng)100-250重量份
[0017] 振子 100-250重量份甘草 100-250重量份。
[0018] 本發(fā)明藥物物質(zhì)的制備方法包括如下步驟：
[0019] 步驟1 :選取上述原料藥；
[0020] 步驟2:乙醇提??；
[0021] 步驟3 :弱極性或非極性大孔吸附樹(shù)脂純化；
[0022] 該藥物物質(zhì)的制備部位1中總環(huán)烯醚萜含量為4-50%，總酚含量為5% -50%，桅 子苷含量2-30 %，優(yōu)選總環(huán)烯醚萜含量25-40 %，總酚含量25-40 %，桅子苷含量15-30 %。 制備部位2中總酚含量10-70 %，連翹酯苷A含量0. 12-2.0%，甘草酸含量0.4-5. 0%，升 麻素含量〇. 04-0. 65 %，連翹苷含量0. 03-0. 7 %，優(yōu)選總酚含量50-70 %，連翹酯苷A含量 1. 0-2. 0 %，甘草酸含量3. 5-5. 0 %，升麻素含量0. 40-0. 65 %，連翹苷含量0. 5-0. 7 %。
[0023] 上述步驟2中，將原料藥用8-12倍量，0-80 %乙醇回流提取1-4次，每次提取 0. 5-2小時(shí)，合并提取液減壓濃縮，至相對(duì)密度1. 15-1. 25g/ml的清膏，加水分散，使上樣液 濃度為 〇? 02-0. 2g/ml。
[0024] 上述步驟3中，將步驟2所得提取物加水分散溶解，使水溶液濃度為0. 02-0.2g/ mL，通過(guò)弱極性或非極性大孔吸附樹(shù)脂，生藥量與樹(shù)脂體積比為0. 2-0.7:1，樹(shù)脂柱徑高 比為1 : 4-10,上樣液濃度為0. 02-0.2g/mL，吸附流速為1. 0-4. OBV/h，水洗脫1-4倍樹(shù)脂 體積進(jìn)行除雜，除雜流速為1. 0-4. OBV/h，10-30 %乙醇洗脫10-15倍樹(shù)脂體積，洗脫流速為 1. 0-4. OBV/h，收集乙醇洗脫液，回收溶劑，減壓干燥，即得環(huán)烯醚萜部位，優(yōu)選15-20%乙醇 洗脫；50-90 %乙醇洗脫3-7倍樹(shù)脂體積，洗脫流速為1. 0-4. OBV/h，收集乙醇洗脫液，回收 溶劑，減壓干燥，即得總酚部位，優(yōu)選75-85 %乙醇洗脫；
[0025] 將以上所得藥物物質(zhì)，加入常規(guī)輔料，按常規(guī)的制劑工藝制成藥劑學(xué)可接受的任 意常規(guī)劑型，包括膠囊劑、片劑、顆粒劑、凝膠劑、緩釋劑、口服液等。
[0026] 本發(fā)明藥物物質(zhì)由連翹飲經(jīng)過(guò)乙醇提取、大孔吸附樹(shù)脂純化得到，富集了連翹飲 中的環(huán)烯醚萜類(lèi)成分和酚類(lèi)成分，同時(shí)經(jīng)過(guò)體內(nèi)外抗菌試驗(yàn)證明，本發(fā)明藥物物質(zhì)體外聯(lián) 合口服抗生素頭孢克洛膠囊有抗菌增效作用，體內(nèi)試驗(yàn)對(duì)金黃色葡萄球菌感染模型小鼠具 有保護(hù)性作用，使細(xì)菌感染模型小鼠死亡率降低，延長(zhǎng)存活時(shí)間。
[0027] 實(shí)驗(yàn)例1本發(fā)明抗菌活性部位體外聯(lián)用抗生素具有抗菌增效的作用
[0028](一）實(shí)驗(yàn)材料
[0029] 1?菌種
[0030] 金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus) (CMCC26112)購(gòu)自北京北納創(chuàng)聯(lián)生物 技術(shù)研究院。
[0031] 2?藥品及試劑
[0032] 頭孢克洛膠囊（昆明貝克諾頓制藥有限公司批號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H53021942)
[0033] 3?儀器設(shè)備
[0034] HD-1360潔凈工作臺(tái)（北京東聯(lián)哈爾儀器制藥有限公司）、HZQ-X100震蕩培養(yǎng)箱 (中國(guó).哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司）、DHG-9053A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上 海-恒科技有限公司）、MLS-3780日本三洋高壓蒸汽滅菌器（北京得爾貝經(jīng)貿(mào)有限公司）、 MP6001電子天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司）、Sartorius BT25S型1/100000電子 分析天平（北京賽多利斯儀器有限公司）、KQ-500DE型數(shù)控超聲清洗器（昆山超聲儀器有 限公司）。
[0035] (二）實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果
[0036] L液體培養(yǎng)基及LB平板制備
[0037] LB液體培養(yǎng)基：精密稱(chēng)取胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化鈉10g，加IL去離子 水超聲溶解，用I. Omol/L NaOH溶液調(diào)pH約7. 2,置高壓蒸汽滅菌鍋滅菌30min，冷卻待用。
[0038] LB平板制備：精密稱(chēng)取胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化鈉10g，瓊脂10g，加IL 去離子水溶解，用I. 〇mol/L NaOH溶液調(diào)pH約7. 2,置高壓蒸汽滅菌鍋滅菌30min，趁熱倒 入已滅菌的玻璃培養(yǎng)皿中，冷卻凝固后形成厚度為4_的平板，取出一個(gè)LB平板置于37°C 恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)18h做無(wú)菌試驗(yàn)，其余用封口膜密封置4°C冰箱保存，7d內(nèi)用完。
[0039] 2?菌液制備
[0040] 金黃色葡萄球菌一代菌液以菌液體積：培養(yǎng)液體積=1 : 10,接種于液體培養(yǎng)基 內(nèi)，置37°C培養(yǎng)箱內(nèi)振蕩培養(yǎng)（200r/min) 18h，作為原菌液。以生理鹽水稀釋菌液至1/2麥 氏比濁度，按1 : 1000稀釋菌液至含菌量約1〇~6個(gè)/ml，作為待用菌液。
[0041] 3.供試品及載藥紙片制備
[0042] 3. 1供試品溶液制備：去本發(fā)明藥物物質(zhì)適量，以去離子水溶解并定容，制成每個(gè) 供試品濃度相當(dāng)于I. 25g全方生藥量/ml，記作A1。將Al樣品進(jìn)行2倍稀釋?zhuān)ㄈ?，得A2 溶液。
[0043] 3. 2抗生素溶液制備：精密稱(chēng)取頭孢克洛膠囊內(nèi)容物I. 93mg，置IOml容量瓶中，去 離子水溶解定容，得Bl溶液；精密移取Bl溶液5ml，置IOml容量瓶中，去離子水溶解定容， 得B2溶液；再精密移取B2溶液5ml，置IOml容量瓶中，去離子水溶解定容，得B3溶液；再 精密移取B3溶液5ml，置IOml容量瓶中，去離子水溶解定容，得B4溶液，過(guò)0. 22 ii m無(wú)菌濾 膜除菌待用。
[0044] 3. 3載藥紙片的制備：用打孔器將濾紙達(dá)成直徑6_的濾紙片，高壓蒸汽滅菌后至 烘箱內(nèi)烘干，得空白紙片。分別按照表1分組進(jìn)行載藥紙片的制備，每片紙片載藥5iU，吹 干待用。
[0045] 表1載藥紙片制備方法表
[0046]

【權(quán)利要求】
1. 一種具有抗菌及增效抗菌作用的藥物物質(zhì)，其特征在于該藥物物質(zhì)的制備方法包括 如下步驟： 步驟1 :選取如下原料： 連翹100-250重量份防風(fēng)100-250重量份 桅子10CK250重量份炎甘草100-250重量份 步驟2 :乙醇提取； 步驟3 :弱極性或非極性大孔吸附樹(shù)脂純化； 該藥物物質(zhì)的制備部位1中總環(huán)烯醚萜含量為10-40%，總酚含量為5% -40%，桅子 苷含量5-30 %，優(yōu)選總環(huán)烯醚萜含量25-40 %，總酚含量25-40 %，桅子苷含量15-30 %。 制備部位2中總酚含量10-70%，連翹酯苷A含量0. 12-2.0%，甘草酸含量0.4-5. 0%，升 麻素含量〇. 04-0. 65 %，連翹苷含量0. 03-0. 7 %，優(yōu)選總酚含量50-70 %，連翹酯苷A含量 1. 0-2. 0 %，甘草酸含量3. 5-5. 0 %，升麻素含量0. 40-0. 65 %，連翹苷含量0. 5-0. 7 %。
2. 如權(quán)利要求1所述的藥物物質(zhì)，其特征在于步驟1中原料藥的組成為： 連翹100-250重量份防風(fēng)100-250重量份 桅子10CK250重量份炎甘草100-250重量份。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的藥物物質(zhì)，其特征在于步驟2中，將原料藥用8-12倍量， 0-80%乙醇回流提取2-4次，每次提取0. 5-2小時(shí)。
4. 如權(quán)利要求1或2所述的藥物物質(zhì)，其特征在于步驟3中，將步驟2所得提取液合并 減壓濃縮，至相對(duì)密度I. 15-1. 25g/ml的清膏，加水分散，是上樣液濃度為0. 02-0. 2g/ml。
5. 如權(quán)利要求1或2所述的藥物物質(zhì)，其特征在于步驟3中，上樣液通過(guò)弱極性或非極 性大孔吸附樹(shù)脂，生藥量與樹(shù)脂體積比為0.2-0. 7 : 1，樹(shù)脂柱徑高比為1 : 4-10,上樣液 濃度為〇. 02-0. 2g/mL，吸附流速為I. 0-4. OBV/h，水洗脫1-4倍樹(shù)脂體積進(jìn)行除雜，除雜流 速為I. 0-4. OBV/h，10-30%乙醇洗脫10-15倍樹(shù)脂體積，洗脫流速為I. 0-4. OBV/h，收集乙 醇洗脫液，回收溶劑，減壓干燥，即得環(huán)烯醚萜部位，優(yōu)選15-20%乙醇洗脫；50-90%乙醇 洗脫3-7倍樹(shù)脂體積，洗脫流速為I. 0-4. OBV/h，收集乙醇洗脫液，回收溶劑，減壓干燥，即 得總酚部位。
6. 如權(quán)利1-5所述中藥藥物物質(zhì)組合其特征在于可由如下4組藥用植物及其代用品 種，包括其藥用部位及非藥用部位，藥材及其飲片組合制成. 組1 :連翹、青翹、黃翹、秦連翹、金鐘花、卵形連翹、麗江連翹、奇異連翹等木犀科植物 及其炮制品. 組2 :防風(fēng)、川防風(fēng)、云防風(fēng)、小防風(fēng)等傘形科植物及其炮制品。 組3 :桅子、水桅子等茜草科及其同屬植物及其炮制品。 組4:甘草、脹果甘草、光果甘草、粗毛甘草、云南甘草、圓果甘草等甘草屬及同科植物 及其炮制品。
7. 如權(quán)利1-5所述中藥藥物物質(zhì)組合其特征在于可經(jīng)上述原料藥組合后以乙醇、或其 他醇類(lèi)、稀醇、或其他有機(jī)溶劑或水提取再通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂或其他色譜方法，如聚酰胺色 譜法等，或溶劑萃取法等純化得到。
8. 如權(quán)利1-5所述中藥藥物物質(zhì)組合其特征在于可由權(quán)利6中所述原料藥的提取物經(jīng) 進(jìn)一步富集純化后或上述原料藥的大孔樹(shù)脂制備物混合而成。
9. 如權(quán)利1-5所述中藥藥物物質(zhì)組合其特征在于可經(jīng)化學(xué)合成或結(jié)構(gòu)修飾，生物合成 或生物轉(zhuǎn)等途徑獲得。
10. 如權(quán)利要求1-9所述中藥藥物物質(zhì)組合，其特征在于可加入本領(lǐng)域公知的各種藥 用輔料，按常規(guī)的制劑工藝制成藥劑學(xué)可接受的任意常規(guī)劑型，也可制成長(zhǎng)效和緩釋制劑、 控釋制劑、靶向制劑等其他傳輸系統(tǒng)給藥制劑。所制得藥劑可作為人藥、獸藥、植物用藥使 用或施用。
11. 如權(quán)利要求1-9所述中藥藥物物質(zhì)組合，其特征在于可加入公知的食品添加劑如 防腐劑、抗氧化劑劑、著色劑、增稠劑和穩(wěn)定劑、膨松劑、甜味劑、酸度劑、增白劑、香料等制 成具有預(yù)防保健功能的保健食品或飲品。
12. 如權(quán)利要求1-9任一所述的中藥藥物物質(zhì)組合在制備具有抗菌及增效抗菌、抗炎、 解熱、鎮(zhèn)痛、止咳、化痰藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P29/00GK104306492SQ201410229646
【公開(kāi)日】2015年1月28日 申請(qǐng)日期:2014年5月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月27日
【發(fā)明者】石任兵, 王永炎, 梅瑩瑩, 彭平, 姜艷艷, 許舒婭, 遲蕾, 盧廣英, 王春梅 申請(qǐng)人:石任兵, 王永炎