專利名稱：一種從大豆粕中提取可溶性大豆多糖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從大豆粕中提取可溶性大豆多糖的方法。
背景技術(shù)：
天然植物抗氧化劑成為當今研究熱點，抗氧化活性的植物成分具有多種生物功能，如抗衰老、抗輻射、清除人體自由基、降低血糖血脂等。自由基的平衡對機體十分重要， 一定量的自由基有助于細胞的分化及生長，過多的自由基則會引起機體的一系列問題，如蛋白質(zhì)變性、酶失活、DNA鏈斷裂、生物膜結(jié)構(gòu)損傷等，甚至導致細胞解體乃至機體病變和死亡，自由基和活性氧是細胞癌變的原始引發(fā)機制。自由基清除能力是評價抗氧化活性的重要指標。隨著年齡的增長生物體內(nèi)產(chǎn)生抗氧化劑和抗氧化酶的能力逐漸下降，體內(nèi)自由基代謝紊亂，過多的自由基會通過各種作用使機體受損而導致疾病或加速衰老。多糖類化合物具有抗氧化、抗衰老、清除體內(nèi)自由基及增加機體免疫力的作用。在近年來的研究工作中，對多糖的抗氧化生物活性功能的研究越來越多，多種疾病及生理現(xiàn)象均是由氧化產(chǎn)生的，如腫瘤發(fā)生、人體衰老等過程都涉及到自由基和活性，即均涉及到抗氧化。豆粕是大豆經(jīng)提取油脂后的副產(chǎn)物(約占大豆質(zhì)量的40% )，一般都作為飼料或廢棄物處理，而只有少部分被加工利用，經(jīng)濟效益較低，資源浪費極大，同時也容易造成環(huán)境污染。纖維類經(jīng)降解可產(chǎn)生不同分子量范圍的大豆纖維降解多糖(以下簡稱大豆多糖)、 寡糖以及葡萄糖等單糖類物質(zhì)?？梢?，合理利用豆渣這一資源，提高大豆的加工利用率，獲得高附加值產(chǎn)品，可帶來更高的經(jīng)濟效益和環(huán)境效益。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明主要是解決現(xiàn)有技術(shù)所存在上述技術(shù)問題；提供了一種采用酶法降解豆粕中不溶性纖維，制備得到不同酶解時間段的可溶性大豆多糖。所得大豆多糖對ABTS自由基、· OH—自由基有一定的清除能力，對制止過氧有一定的抑制作用的一種從大豆粕中提取可溶性大豆多糖的方法。本發(fā)明的上述技術(shù)問題主要是通過下述技術(shù)方案得以解決的一種從大豆粕中提取可溶性大豆多糖的方法，其特征在于，包括以下步驟步驟1，將大豆粕用旋風磨進行粉粹然后過80目篩得到豆粕粉；步驟2，將完成步驟1的豆粕粉采用堿法去除蛋白后進行酶解；步驟3，將完成步驟2已經(jīng)酶解的豆粕粉進行加熱滅酶，然后對加熱滅酶后的豆粕粉進行抽濾，得到抽濾后的濾液；步驟4，將完成步驟3的濾液中加入無水乙醇，所述無水乙醇與濾液的質(zhì)量比為 4:1;步驟5，將完成上述步驟4的無水乙醇與濾液混合液進行沉淀，沉淀時間為 10h-12h ；步驟6，將完成步驟5所得進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得到蒸發(fā)后濃縮液。其中，上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的條件是保持旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)速為70rpm，溫度為50-60°C，真空度為0. 095mpa，蒸發(fā)時間為2h ；步驟7，將步驟6所得放入離心機內(nèi)進行離心，保持離心機轉(zhuǎn)速5000rpm，離心時間為10min-15min，得到離心后的大豆多糖；步驟8，將完成步驟7所得的大豆多糖放入真空凍干機中進行冷凍干燥，保持溫度在_40°C，干燥時間為8h-12h，最終得到冷凍干燥后的可溶性大豆多糖。在上述的一種從大豆粕中提取可溶性大豆多糖的方法，所述的步驟2中，進行酶解的具體方法是保持溫度50°C，酶底比1 124朋.8，然后進行水解，水解時間分別21!， 4h，6h，8h，10h, 12h，取水解時間分別為2h，4h，6h，8h，IOh, 12h得到的六種大豆多糖水解物，然后對6種大豆多糖水解物分別進行步驟3至步驟8的步驟，得到六種對應(yīng)的可溶性大豆多糖。因此，本發(fā)明具有如下優(yōu)點用酶法降解豆粕中不溶性纖維，制備得到不同酶解時間段的可溶性大豆多糖。所得大豆多糖對ABTS自由基、·0!Γ自由基有一定的清除能力，對制止過氧有一定的抑制作用。


附圖1是本發(fā)明的ABTS自由基清除率關(guān)系曲線；附圖2是本發(fā)明的0Η_自由基清除關(guān)系曲線；附圖3是本發(fā)明的抑制脂質(zhì)過氧化能力關(guān)系曲線。
具體實施例方式下面通過實施例，并結(jié)合附圖，對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步具體的說明。實施例一種從大豆粕中提取可溶性大豆多糖的方法，包括以下步驟步驟1，將大豆粕用旋風磨進行粉粹然后過80目篩得到豆粕粉；步驟2，將完成步驟1的豆粕粉采用堿法去除蛋白后進行酶解；進行酶解的具體方法是保持溫度50°C，酶底比1 12，ρΗ4· 8，然后進行水解，水解時間分別2h，4h，6h，8h， 10h，12h，取水解時間分別為2h，4h，6h，8h，IOh, 12h得到的六種大豆多糖水解物，然后對6 種大豆多糖水解物分別進行步驟3至步驟8的步驟，得到六種對應(yīng)的可溶性大豆多糖；步驟3，將完成步驟2已經(jīng)酶解的豆粕粉進行加熱滅酶，然后對加熱滅酶后的豆粕粉進行抽濾，得到抽濾后的濾液；步驟4，將完成步驟3的濾液中加入無水乙醇，所述無水乙醇與濾液的質(zhì)量比為 4:1;步驟5，將完成上述步驟4的無水乙醇與濾液混合液進行沉淀，沉淀時間為 10h-12h ；步驟6，將完成步驟5所得進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得到蒸發(fā)后濃縮液。其中，上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的條件是保持旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)速為70rpm，溫度為50-60°C，真空度為0. 095mpa，蒸發(fā)時間為2h ；步驟7，將步驟6所得放入離心機內(nèi)進行離心，保持離心機轉(zhuǎn)速5000rpm，離心時間為10min-15min，得到離心后的大豆多糖；步驟8，將完成步驟7所得的大豆多糖放入真空凍干機中進行冷凍干燥，保持溫度在_40°C，干燥時間為8h-12h，最終得到冷凍干燥后的可溶性大豆多糖。下面進行上述6種大豆多糖水解物的相關(guān)試驗1. ABTS自由基清除試驗以雙蒸水配制ABTS自由基儲備液，于4°C條件下保存，臨用時稀釋至一定濃度作為工作液。工作液吸光度值0. 700士0. 002。準確量取0. Iml不同濃度的大豆多糖溶液，加入IOml具塞試管中，分別加入1. 9ml ABTS自由基工作液，準確反應(yīng)6min后于734nm波長出測定溶液混合物的吸光度值A(chǔ)1 ；同法操作，用等體積雙蒸水代替大豆多糖，測定溶液吸光度值A(chǔ)tl ；不加ABTS溶液，用等體積雙蒸水代替，加入不同濃度大豆多糖溶液，同法操作測定 A2，用以扣除樣品本身對吸光度值測定的干擾。采用抗壞血酸作為本實驗的陽性對照品，用以評價受試物的抗氧化能力。通過下式計算大豆多糖及抗壞血酸(Vc)對ABTS自由基的清除活性，以樣品濃度為橫坐標，清除率為縱坐標，制作樣品濃度與ABTS自由基清除率關(guān)系曲線，如圖1所示。清除率(％)= [I-(A1-A2)ZAJXIOO^ (1)如圖1，其中，EC50 Vc (0. 04mg/ml) > 12h (37. 40mg/ml) > IOh (49. 32mg/ml) > 8h (69. llmg/ml) > 6h (80. 95mg/ml) > 2h(123. 22mg/ml) > 4h(206. 98mg/ml)。2 · 0H_自由基清除試驗通過殘留的羥自由基與水楊酸鹽之間的相互作用來測定大豆多糖對羥基自由基的清除作用。實驗方法參照Wang Hua等采用的水楊酸鈉絡(luò)合法進行測定。通過FeSO4和 H2O2混合的反應(yīng)體系，羥自由基由Fenton反應(yīng)產(chǎn)生。反應(yīng)混合物體系由以下試劑組成濃度為 8mmol/L 的 FeSO4 溶液 0. 5ml，濃度為 6mmol/L 的 H2O2 溶液 0. 8ml, 0. 5ml 蒸餾水，1. Oml 不同濃度的大豆多糖溶液，濃度為20mmol/l水楊酸鈉溶液0. 2ml。反應(yīng)混合物共3. 0ml，將反應(yīng)物混合均勻后于37°C水浴中溫育lh，溫育后于562nm波長下測定混合物吸光度值A(chǔ)1 ；將上述體系中的1. Oml大豆多糖樣品用蒸餾水代替，其余同法操作，測定吸光度值A(chǔ)tl ；將上述體系中的0. 2ml水楊酸鈉溶液用相同體積的蒸餾水代替，其余同法操作，測定吸光度值A(chǔ)2。 以抗壞血酸為陽性對照，同等方法操作進行測定。記錄各項吸光度值，按照公式(1)計算大豆多糖及抗壞血酸對羥自由基的清除率(％ )，以樣品濃度為橫坐標，清除率為縱坐標，回歸得受試物樣品濃度與羥自由基清除率關(guān)系曲線，如圖2所示。如圖2，其中，EC50 Vc (0. 12mg/ml) > 6h(3. 91mg/ml) > 12h (5. 19mg/ml) > 8h(5. 18mg/ml) > IOh (7. 97mg/ml) > 4h(16. 65mg/ml) > 2h(29. 74mg/ml)，3抑制脂質(zhì)過氧化能力試驗取新鮮卵黃，稱重后置于小燒杯中，按照1 1比例(g/ml)加入PBS緩沖液 (0.01mol/l, pH7. 4)，磁力攪拌配制成50%的卵黃懸液，存放于4°C備用。臨用時加入適量 PBS緩沖液(0. Olmol/Ι,ρΗ 7. 4)稀釋為4%的卵黃懸液。分別吸取0. 2ml質(zhì)量分數(shù)為4% 的卵黃懸液加入IOml試管中，分別加入不同濃度的大豆多糖溶液，25mmol/L的FeS04溶液 0. 2ml，用0. 01mol/l的pH7. 4的PBS緩沖液補齊至2. 0ml，混合均勻后置于37°C恒溫振蕩器振蕩15min。振蕩結(jié)束后加入質(zhì)量分數(shù)為10%的三氯乙酸1. 0ml，充分混合后靜置lOmin，離心(3500rpm，lOmin)，吸取離心后的上清液2. Oml并加入0. 8%的硫代巴比妥酸溶液1. Oml, 用保鮮膜封緊試管口，并用注射器針頭刺一小孔。將反應(yīng)混合物置于沸水浴中保持15min， 流水冷卻至室溫后于532nm波長處測定吸光度值A(chǔ)1 ；以等體積蒸餾水代替不同濃度大豆多糖，其他反應(yīng)條件相同，測定吸光度值A(chǔ)tl，以PBS溶液作為空白調(diào)零；以相同體積蒸餾水代替卵黃液，其他反應(yīng)條件相同，測定溶液的吸光度值A(chǔ)2,用以扣除樣品本身的干擾。同等條件下以不同濃度抗壞血酸進行試驗，作為陽性對照品。大豆多糖對卵黃脂蛋白過氧化的抑制率按公式(1)計算，以大豆多糖品濃度為橫坐標，抑制率為縱坐標回歸得受試物濃度與其脂質(zhì)過氧化抑制率的關(guān)系曲線，如圖3所示。如圖3，其中，EC50 6h(5. 06mg/ml) > IOh(12. 76mg/ml) > 2h(34. 03mg/ml) > 8h(30. 97mg/ml)。本文中所描述的具體實施例僅僅是對本發(fā)明精神作舉例說明。本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員可以對所描述的具體實施例做各種各樣的修改或補充或采用類似的方式替代，但并不會偏離本發(fā)明的精神或者超越所附權(quán)利要求書所定義的范圍。
權(quán)利要求
1.一種從大豆粕中提取可溶性大豆多糖的方法，其特征在于，包括以下步驟 步驟1，將大豆粕用旋風磨進行粉粹然后過80目篩得到豆粕粉；步驟2，將完成步驟1的豆粕粉采用堿法去除蛋白后進行酶解； 步驟3，將完成步驟2已經(jīng)酶解的豆粕粉進行加熱滅酶，然后對加熱滅酶后的豆粕粉進行抽濾，得到抽濾后的濾液；步驟4，將完成步驟3的濾液中加入無水乙醇，所述無水乙醇與濾液的質(zhì)量比為4 1 ； 步驟5，將完成上述步驟4的無水乙醇與濾液混合液進行沉淀，沉淀時間為10h-12h ； 步驟6，將完成步驟5所得進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得到蒸發(fā)后濃縮液。其中，上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的條件是保持旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)速為70rpm，溫度為50-60°C，真空度為0. 095mpa，蒸發(fā)時間為2h ； 步驟7，將步驟6所得放入離心機內(nèi)進行離心，保持離心機轉(zhuǎn)速5000rpm，離心時間為 10min-15min，得到離心后的大豆多糖；步驟8，將完成步驟7所得的大豆多糖放入真空凍干機中進行冷凍干燥，保持溫度在_40°C，干燥時間為8h-12h，最終得到冷凍干燥后的可溶性大豆多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從大豆粕中提取可溶性大豆多糖的方法，其特征在于， 所述的步驟2中，進行酶解的具體方法是保持溫度50°C，酶底比1 12，pH4.8，然后進行水解，水解時間分別:2h, 4h，6h，8h，IOh, 12h，取水解時間分別為2h，4h，6h，8h，IOh, 12h得到的六種大豆多糖水解物，然后對6種大豆多糖水解物分別進行步驟3至步驟8的步驟，得到六種對應(yīng)的可溶性大豆多糖。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從大豆粕中提取可溶性大豆多糖的方法。本發(fā)明采用酶法降解豆粕中不溶性纖維，制備得到不同酶解時間段的可溶性大豆多糖。即原料豆粕粉→去除蛋白→酶解→加熱滅酶(100℃，10min)→抽濾→濾液加四倍無水乙醇，沉淀過夜→離心(5000rpm，15min)→沉淀水溶→離心(8000rpm，20min)→上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)→冷凍干燥。因此，本發(fā)明具有如下優(yōu)點用酶法降解豆粕中不溶性纖維，制備得到不同酶解時間段的可溶性大豆多糖。所得大豆多糖對ABTS自由基、·OH-自由基有一定的清除能力，對制止過氧有一定的抑制作用。
文檔編號A23L1/20GK102232500SQ201110213490
公開日2011年11月9日 申請日期2011年7月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月28日
發(fā)明者姚磊, 張華 , 王振宇, 程翠林, 趙海田 申請人:哈爾濱工業(yè)大學