專利名稱：一種高核酸面包酵母及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供一種面包酵母及其制備方法，具體涉及一種高核酸面包酵母及其制備方法。
背景技術(shù)：
核酸在醫(yī)藥、食品、農(nóng)業(yè)、化妝品等方面的應(yīng)用越來(lái)越廣，從酵母菌細(xì)胞內(nèi)提取核酸已經(jīng)成為核酸的重要來(lái)源。現(xiàn)有的技術(shù)方案中主要是以假絲酵母為菌種，進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)， 收獲酵母菌體，提取核酸。假絲酵母在普通的面包酵母工廠不能應(yīng)用，限制性較大。面包酵母菌種是國(guó)際公認(rèn)的可以直接使用在飼料和食品中的安全菌株?，F(xiàn)有技術(shù)生產(chǎn)鮮酵母的工藝流程一般通過(guò)菌種保藏管、斜面試管、液體試管、三角瓶、卡式瓶、種子罐、流加培養(yǎng)，最后得到商品酵母。其中流加培養(yǎng)一般為二級(jí)或三級(jí)培養(yǎng)，典型二級(jí)培養(yǎng)流程為由種子罐培養(yǎng)得到一代酵母(種子酵母)，分離洗滌后經(jīng)二級(jí)發(fā)酵擴(kuò)大培養(yǎng)得到二代酵母，其中種子酵母擴(kuò)大培養(yǎng)的時(shí)間一般在10小時(shí)以上，但是常規(guī)方法制備的面包酵母中核酸含量不高。中國(guó)專利申請(qǐng)CN149^64A公開(kāi)了一種“富核糖核酸啤酒酵母菌體及其制造方法”，該方法制備的酵母菌體中含有相當(dāng)于菌體重量10%以上的核糖核酸，但是不超過(guò)12
重量％。中國(guó)專利申請(qǐng)CN101760437A公開(kāi)了一種“高核酸面包酵母及其制備方法”，該方法通過(guò)控制擴(kuò)大培養(yǎng)的培養(yǎng)時(shí)間等條件，制備得到了含有相當(dāng)于面包酵母菌體重量的20 重量％以上的核酸，其中RNA達(dá)到了 9. 5%以上。如果能夠進(jìn)一步提高RNA的含量，那么將更加能夠滿足市場(chǎng)的需求，節(jié)約原材料。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于，提供一種高核酸面包酵母及其制備方法。本發(fā)明的高核酸面包酵母中RNA的含量更高，能夠節(jié)約制備所需原料。該高核酸面包酵母的制備方法能夠制備得到RNA含量更高的高核酸面包酵母。另外，本發(fā)明還提供一種能夠連續(xù)制備得到所述高核酸面包酵母的制備方法。在本發(fā)明中，高核酸面包酵母所要滿足的條件是，含有相當(dāng)于面包酵母菌體重量的20重量％以上的核酸。為了解決上述的技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供以下的技術(shù)方案第一方面，本發(fā)明提供一種高核酸面包酵母，相對(duì)于面包酵母菌體的100重量％， 含有20重量％以上的核酸，其中的RNA大于12. 0重量％。優(yōu)選地，其中的RNA大于12. 1重量％。優(yōu)選地，其中的RNA大于12. 2重量％。第二方面，本發(fā)明提供一種高核酸面包酵母的制備方法，包括面包酵母菌體的種子罐培養(yǎng)和面包酵母菌體的擴(kuò)大培養(yǎng)，a)在擴(kuò)大培養(yǎng)過(guò)程中，在面包酵母菌體濕重達(dá)到100g/L 120g/L之后，加入相對(duì)于擴(kuò)大培養(yǎng)的發(fā)酵體系為1%。g/L以上的谷氨酰胺和1%。g/L以上的天冬氨酸；b)繼續(xù)擴(kuò)大培養(yǎng)，直至相對(duì)于面包酵母菌體的100重量％，RNA大于12.0重量％。優(yōu)選地，在步驟b)中，擴(kuò)大培養(yǎng)直至相對(duì)于面包酵母菌體的100重量％，RNA大于 12. 1重量％。優(yōu)選地，在步驟b)中，擴(kuò)大培養(yǎng)直至相對(duì)于面包酵母菌體的100重量％，RNA大于 12. 2重量％。優(yōu)選地，在步驟a)中，加入相對(duì)于擴(kuò)大培養(yǎng)的發(fā)酵體系的為2%。g/L以上的谷氨酰胺和2%0 g/L以上的天冬氨酸。優(yōu)選地，在步驟a)中，加入的谷氨酰胺和天冬酰胺的重量比為0.95 1. 05 1. 05 0. 95ο第三方面，本發(fā)明提供一種高核酸面包酵母的制備方法，包括下列步驟Si)種子罐培養(yǎng)；S2)從種子罐中取出一部分的面包酵母菌體料液，進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)；S3)在擴(kuò)大培養(yǎng)過(guò)程中，在面包酵母菌體濕重達(dá)到100g/L 120g/L之后，加入谷氨酰胺和天冬酰胺，直至谷氨酰胺和天冬酰胺相對(duì)于擴(kuò)大培養(yǎng)的發(fā)酵體系為1%。g/L以上；S4)繼續(xù)擴(kuò)大培養(yǎng)，直至相對(duì)于面包酵母菌體的100重量％，RNA大于12.0重
量％ ；S5)取出擴(kuò)大培養(yǎng)的發(fā)酵體系9. 0 11. 0%的面包酵母菌體料液，進(jìn)行分離，得到高核酸面包酵母；并且在擴(kuò)大培養(yǎng)的發(fā)酵體系中加入與取出的面包酵母菌體料液大致相等的面包酵母菌體料液；重復(fù)進(jìn)行步驟S3) S5)。優(yōu)選地，在步驟S5)中，取出的面包酵母菌體料液相對(duì)于擴(kuò)大培養(yǎng)的發(fā)酵體系為 9. 9 10. 1%，優(yōu)選為 10. 0%。根據(jù)本發(fā)明的第一方面的高核酸面包酵母，由于其中的RNA的含量更高，所以能夠節(jié)約制備所需原料。根據(jù)本發(fā)明的第二方面的高核酸面包酵母的制備方法，能夠制備得到上述的RNA 含量更高的高核酸面包酵母。根據(jù)本發(fā)明的第三方面的高核酸面包酵母的制備方法，能夠?qū)崿F(xiàn)連續(xù)制備得到上述的RNA含量更高的高核酸面包酵母。
具體實(shí)施例方式為了本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠更加直觀和清楚地了解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面以實(shí)施例為例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做出進(jìn)一步地解釋和說(shuō)明。實(shí)施例1斜面面包酵母菌種接種于250mL搖瓶，30°C培養(yǎng)24h后，轉(zhuǎn)接與IOL的卡氏瓶， 30°C靜置培養(yǎng)48h后再轉(zhuǎn)接于IOm3的種子罐，在通風(fēng)為10m3/h、溫度30°C條件下，培養(yǎng)24h 后，再轉(zhuǎn)接于160m3的大發(fā)酵罐進(jìn)行補(bǔ)料發(fā)酵種子培養(yǎng)，發(fā)酵時(shí)間為20h，然后進(jìn)行分離洗滌，將分離洗滌的酵母乳接種于160m3的發(fā)酵罐，做商品發(fā)酵，商品發(fā)酵的意思是在發(fā)酵階段濕重長(zhǎng)到100g/L時(shí)，每小時(shí)放出IOm3的物料，同時(shí)補(bǔ)入糖蜜1.75m3、20%的尿素 1001^，25%磷酸二氫銨8(^、無(wú)菌熱水8. 17m3，PH為5.0，溫度為30°C，加入谷氨酰胺0. 天冬氨酸0.3%，進(jìn)行連續(xù)流加培養(yǎng)階段。取樣檢測(cè)，RNA為12.3%。其中，mL代表毫升，°C代表攝氏度，h代表小時(shí)，L代表升，g代表克，m3代表立方米。在沒(méi)有特別說(shuō)明的情況下，百分比代表質(zhì)量體積百分比，單位是g/L。實(shí)施例2斜面面包酵母菌種接種于250mL搖瓶，30°C培養(yǎng)24h后，轉(zhuǎn)接與IOL的卡氏瓶， 30°C靜置培養(yǎng)48h后再轉(zhuǎn)接于IOm3的種子罐，在通風(fēng)為10m3/h、溫度30°C條件下，培養(yǎng)24h 后，再轉(zhuǎn)接于160m3的大發(fā)酵罐進(jìn)行補(bǔ)料發(fā)酵種子培養(yǎng)，發(fā)酵時(shí)間為20h，然后進(jìn)行分離洗滌，將分離洗滌的酵母乳接種于160立方發(fā)酵罐，做商品發(fā)酵，商品發(fā)酵的意思是在發(fā)酵階段濕重長(zhǎng)到120g/L時(shí)，每小時(shí)放出10立方米的物料，同時(shí)補(bǔ)入糖蜜1. 90m3、20%尿素 120L，25%磷酸二氫銨96L、無(wú)菌熱水7. 89m3，PH為5. 0，溫度為30°C，加入谷氨酰胺0. 3%、 天冬氨酸0. 2%，進(jìn)行連續(xù)流加培養(yǎng)階段。取樣檢測(cè)，RNA12. 5%。其中，mL代表毫升，°C代表攝氏度，h代表小時(shí)，L代表升，g代表克，m3代表立方米。在沒(méi)有特別說(shuō)明的情況下，百分比代表質(zhì)量體積百分比，單位是g/L。在本實(shí)施例中，RNA檢測(cè)方法如下(也可以采用其他的公認(rèn)的檢測(cè)方法來(lái)檢測(cè))(1)試劑0. 5N 的 HClO4 ；0. 25N 的 HClO4, N 代表摩爾。(2)設(shè)備1.毫克級(jí)天平2. 4000rpm 離心機(jī)，3.容積至少I(mǎi)Oml的離心管4.可在^Onm讀數(shù)的分光光度計(jì)5. 70°C熱水水浴鍋6. 4°C冷水水浴鍋7. IOml 禾Π Iml 吸液管8. IOOml 容量瓶(3)測(cè)試方法如果是酵母干粉，稱0. 06-0. 15mg酵母加入離心管；如果是18%濃度的酵母乳，則稱0. 4-0. Smg ；如果是3. 5%濃度的液體，則稱1. 5-3. Omgo mg代表毫克。百分比濃度如無(wú)特別說(shuō)明，是指質(zhì)量百分比濃度。1.加8ml的冷的0. 25N HC104到離心管中。2.將該離心管放入4°C冷水水浴鍋中，保溫15分鐘3. 4000rpm 離心 10 分鐘4.輕輕地倒出浮在表面的物質(zhì)5.如果是酵母小顆粒，加入5ml的0. 5N HC104.振蕩混勻。6.將該離心管放入70°C水浴鍋中，保溫15分鐘；每3_4分鐘振蕩一次。7. 4000rpm 離心 10 分鐘
8.酵母顆粒溶解后，吸取Iml上清液，加入IOOml的蒸餾水，混勻。9. 260nm測(cè)光吸收值，蒸餾水作為空白。10.用待測(cè)樣品沖洗比色皿，裝滿比色皿后放入分光光度計(jì)。擦凈表面。11.記錄吸光度，重復(fù)第11步。兩次測(cè)量的平均值。(4)計(jì)算，按照下式進(jìn)行計(jì)算
干酵母中的。/_八=嫩X稀釋度遺0·5χ100 丁附Τ樣品重量χ樣品固形物百分含量其中，樣品重量以毫克計(jì)。例如在干酵母中，假設(shè)吸光度是0. 7，干粉重量為145mg，樣品固形物百分含量是 96%，那么 ％ RNA 為 7. 8。
權(quán)利要求
1.一種高核酸面包酵母，其特征在于，相對(duì)于面包酵母菌體的100重量％，含有20重量％以上的核酸，其中的RNA大于12.0重量％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的面包酵母，其特征在于，其中的RNA大于12.1重量％。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的面包酵母，其特征在于，其中的RNA大于12.2重量％。
4.一種高核酸面包酵母的制備方法，包括面包酵母菌體的種子罐培養(yǎng)和面包酵母菌體的擴(kuò)大培養(yǎng)，其特征在于，a)在擴(kuò)大培養(yǎng)過(guò)程中，在面包酵母菌體濕重達(dá)到100g/L 120g/L之后，加入相對(duì)于擴(kuò)大培養(yǎng)的發(fā)酵體系為1%。g/L以上的谷氨酰胺和1%。g/L以上的天冬氨酸；b)繼續(xù)擴(kuò)大培養(yǎng)，直至相對(duì)于面包酵母菌體的100重量％，RNA大于12.0重量％。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的高核酸面包酵母的制備方法，其特征在于，在步驟b)中，擴(kuò)大培養(yǎng)直至相對(duì)于面包酵母菌體的100重量％，RNA大于12. 1重量％。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的高核酸面包酵母的制備方法，其特征在于，在步驟b)中，擴(kuò)大培養(yǎng)直至相對(duì)于面包酵母菌體的100重量％，RNA大于12. 2重量％。
7.根據(jù)權(quán)利要求4 6中任意一項(xiàng)所述的高核酸面包酵母的制備方法，其特征在于，在步驟a)中，加入相對(duì)于擴(kuò)大培養(yǎng)的發(fā)酵體系為2%0 g/L以上的谷氨酰胺和2%。g/L以上的天冬氨酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求4 7中任意一項(xiàng)所述的高核酸面包酵母的制備方法，其特征在于，在步驟a)中，加入的谷氨酰胺和天冬氨酸的重量比為0.95 1.05 1.05 0.95。
9.一種高核酸面包酵母的制備方法，包括下列步驟51)種子罐培養(yǎng)；52)從種子罐中取出一部分的面包酵母菌體料液，進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)；53)在擴(kuò)大培養(yǎng)過(guò)程中，在面包酵母菌體濕重達(dá)到100g/L 120g/L之后，加入谷氨酰胺和天冬氨酸，直至谷氨酰胺和天冬氨酸相對(duì)于擴(kuò)大培養(yǎng)的發(fā)酵體系為1%。g/L以上；54)繼續(xù)擴(kuò)大培養(yǎng)，直至相對(duì)于面包酵母菌體的100重量％，RNA大于12.0重量％ ；55)取出擴(kuò)大培養(yǎng)的發(fā)酵體系9.0 11.0%的面包酵母菌體料液，進(jìn)行分離，得到高核酸面包酵母；并且在擴(kuò)大培養(yǎng)的發(fā)酵體系中加入與取出的面包酵母菌體料液大致相等的面包酵母菌體料液；重復(fù)進(jìn)行步驟S3) S5)。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的高核酸面包酵母的制備方法，其特征在于，在步驟％)中，取出的面包酵母菌體料液相對(duì)于擴(kuò)大培養(yǎng)的發(fā)酵體系為9. 9 10. 1%，優(yōu)選為10. 0%。
全文摘要
本發(fā)明提供一種高核酸面包酵母及其制備方法。該高核酸面包酵母，相對(duì)于面包酵母菌體的100重量％，含有20重量％以上的核酸，其中的RNA大于12.0重量％。本發(fā)明的高核酸面包酵母具有更高的RNA含量，能夠提高高核酸面包酵母的利用率。
文檔編號(hào)C12N1/18GK102559522SQ20101061346
公開(kāi)日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2010年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月30日
發(fā)明者余明華, 俞學(xué)鋒, 匡金寶, 姚鵑, 朱昌雄, 李知洪, 楊海珍 申請(qǐng)人:安琪酵母股份有限公司